一種奧沙利鉑脂質(zhì)體凍干粉針劑的制備和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及靶向藥物和脂質(zhì)體領(lǐng)域，尤其涉及奧沙利鉑脂質(zhì) 體制劑的制備和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 奧沙利鉑（oxaliplatin)是繼順鉑和卡鉑之后的第三代鉑類(lèi)抗癌藥，也是迄今為 止唯一對(duì)結(jié)直腸癌具有顯著活性的絡(luò)鉑類(lèi)藥物。與前兩代鉑類(lèi)藥物相比，奧沙利鉑在體內(nèi) 及體外的抗腫瘤作用效果好，且用藥安全。它對(duì)結(jié)直腸癌、非小細(xì)胞肺癌、卵巢癌等實(shí)體瘤 有明顯的抑制作用。然而奧沙利鉑具有特異的心臟和神經(jīng)系統(tǒng)毒性，且注射入體內(nèi)后在腫 瘤組織蓄積較少，難以達(dá)到治療濃度。
[0003] 脂質(zhì)體（liposome)作為一具有類(lèi)生物膜雙分子層結(jié)構(gòu)的藥物載體，能夠通過(guò)外 層類(lèi)似細(xì)胞的雙層磷脂膜與人體細(xì)胞發(fā)生吸附、融合、脂交換和內(nèi)吞等相互作用，將脂質(zhì)體 內(nèi)包封的藥物導(dǎo)入細(xì)胞中發(fā)揮作用。脂質(zhì)體的粒子大小處于納米級(jí)的介觀范圍，有許多獨(dú) 特的物理、化學(xué)性質(zhì)，且具有制備工藝簡(jiǎn)單，在人體內(nèi)無(wú)毒、無(wú)免疫原性、可降解、緩釋等特 點(diǎn)，所載藥物廣泛，并能夠減少所需藥量，增強(qiáng)藥物體內(nèi)穩(wěn)定性和藥理作用，降低毒副作用， 使藥物具有被動(dòng)靶向性特征，還可制成免疫脂質(zhì)體實(shí)現(xiàn)主動(dòng)靶向性。
[0004] 奧沙利鉑作為一種新型抗腫瘤藥物，已在臨床應(yīng)用中顯現(xiàn)出其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)。將脂 質(zhì)體技術(shù)應(yīng)用于奧沙利鉑新制劑中，進(jìn)一步降低其不良反應(yīng)，增強(qiáng)藥物的靶向性，提高生物 利用度，是近年來(lái)研究的熱點(diǎn)。上海醫(yī)藥工業(yè)研究院申報(bào)的專(zhuān)利CN101897668A，一種奧沙利 鉑脂質(zhì)體及其制備方法和用途；陳祥峰、蔡課霞申報(bào)的專(zhuān)利CN101103972A，一種奧沙利鉑 脂質(zhì)體葡萄糖制劑及其制備方法、應(yīng)用，均提出了奧沙利鉑脂質(zhì)體的制備方法。然而由于脂 質(zhì)體劑型穩(wěn)定性較差，易發(fā)生聚集和滲漏，同時(shí)奧沙利鉑也極易降解，因此制備性質(zhì)穩(wěn)定、 不易滲漏的奧沙利鉑脂質(zhì)體制劑是將奧沙利鉑脂質(zhì)體應(yīng)用于臨床的關(guān)鍵。多數(shù)脂質(zhì)體制劑 通常制成凍干粉針劑以延長(zhǎng)制劑的保存時(shí)間，然而包載包括奧沙利鉑在內(nèi)的多數(shù)水溶性藥 物的脂質(zhì)體在凍干復(fù)溶后往往產(chǎn)生嚴(yán)重的滲漏。對(duì)于如何解決奧沙利鉑脂質(zhì)體的凍干滲漏 問(wèn)題尚未有專(zhuān)利報(bào)道，本專(zhuān)利在凍干復(fù)溶的過(guò)程中采用了專(zhuān)屬的凍干保護(hù)劑和專(zhuān)屬的復(fù)溶 制劑，顯著改善了奧沙利鉑脂質(zhì)體的凍干滲漏。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于制備得到的奧沙利鉑脂質(zhì)體凍干粉針劑復(fù)溶后滲漏率較低，月旨 質(zhì)體對(duì)奧沙利銷(xiāo)的保留率達(dá)到65 %以上，$父佳的，保留率達(dá)到70 %以上，在血衆(zhòng)中具有良 好的穩(wěn)定性，能夠被癌細(xì)胞攝取從而發(fā)揮被動(dòng)靶向的抗癌作用。
[0006] 本發(fā)明提供了一種奧沙利鉑脂質(zhì)體的制備方法：稱(chēng)取處方比例的卵磷脂、膽固醇、 DSPE-mPEG2000,混合后加入有機(jī)溶劑溶解，向其中滴加奧沙利鉑溶液，采用探頭超聲或高 速剪切機(jī)制備反相膠束，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上去除有機(jī)溶劑后最終形成脂質(zhì)體。透析去除游離 奧沙利鉑，經(jīng)0. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾除菌后得到。
[0007] 本發(fā)明提供了一種奧沙利鉑脂質(zhì)體凍干、復(fù)溶的方法：取制備得到的奧沙利鉑脂 質(zhì)體，稀釋后加入葡萄糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇中的一種或幾種作為凍干加入保護(hù)劑并凍 干，并采用含有葡萄糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇中的一種或幾種的水溶液復(fù)溶得到。
[0008] 本發(fā)明詳細(xì)考察了奧沙利鉑脂質(zhì)體的凍干、復(fù)溶全過(guò)程，提供了一套能夠保證產(chǎn) 品具有良好重復(fù)性的凍干、復(fù)溶參數(shù)。所述的冷凍干燥過(guò)程包括預(yù)凍和凍干兩個(gè)步驟。預(yù)凍 過(guò)程中先將奧沙利鉑脂質(zhì)體置于4°C環(huán)境中足夠長(zhǎng)時(shí)間，再緩慢降溫至_18°C，控制降溫時(shí) 間為3~4h。奧沙利鉑脂質(zhì)體在-18°C保持lh后將溫度降低至-40°C~_45°C，保持3~5h 后凍干。凍干約24h，期間保持真空度為35~40Pa，溫度由-45°C逐步升高至20°C~25°C。
[0009] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于，復(fù)溶速度快，包封率高且復(fù)溶后滲漏率低，在凍干復(fù)溶的過(guò)程 中采用了本發(fā)明選擇的復(fù)合凍干保護(hù)劑，復(fù)溶使用復(fù)合的復(fù)溶溶液。
【具體實(shí)施方式】
[0010] 通過(guò)以下具體的實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的說(shuō)明，但不作為限制。
[0011] 實(shí)施例1 :
[0012] 奧沙利鉑 15mg
[0013] 大豆卵磷脂（上海太偉藥業(yè)有限公司，純度84% ) 120mg
[0014] 膽固醇 30mg
[0015] 配制5ml 3mg/ml奧沙利鉑9%蔗糖水溶液。稱(chēng)取卵磷脂、膽固醇，混合后加入 lml異丙醚、5ml三氯甲烷和6ml乙醚的混合溶液溶解，向其中滴加奧沙利鉑溶液，使用超 聲細(xì)胞破碎儀在300W功率條件下分散3min后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，35°C，0. 5~0. 6MPa條件 下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)5h后最終形成脂質(zhì)體，采用3500Da的透析袋透析12h去除游離奧沙利鉑，經(jīng) 0. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾除菌。取該脂質(zhì)體溶液，稀釋至25ml，取其中2ml分裝至西林瓶中， 加入5%甘露醇和5%蔗糖混勻后凍干24h，并采用含有0. 5g/ml蔗糖和0. 2g/ml海藻糖的 混合溶液復(fù)溶得到。
[0016] 實(shí)施例2:
[0017] 奧沙利鉑 I5mg 大豆卵憐脂（上海太偉藥業(yè)有限公司，純度84%) 120mg 膽固醇 30mg DSPE-mPEG2000 44mg
[0018] 配制5ml 3mg/ml奧沙利鉑9%蔗糖水溶液。稱(chēng)取卵磷脂、膽固醇、DSPE-mPEG2000， 混合后加入lml異丙醚、5ml三氯甲烷和6ml乙醚的混合溶液溶解，向其中滴加奧沙利鉑溶 液，使用超聲細(xì)胞破碎儀在300W功率條件下分散3min后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，35°C，0. 5~ 0. 6MPa條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)5h后最終形成脂質(zhì)體，采用3500Da的透析袋透析12h去除游離奧 沙利鉑，經(jīng)0. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾除菌。取該脂質(zhì)體溶液，稀釋至25ml，取其中2ml分裝至 西林瓶中，加入5%甘露醇和5%蔗糖混勻后凍干2411，并采用含有0.58/1111蔗糖、0.28/ 1111 海藻糖的混合溶液復(fù)溶得到。
[0019] 實(shí)施例3 :
[0020] 奧沙利鉑 25：mg： 大豆卵磷脂（德國(guó)嘉吉公司，純度91%) 120mg 膽固醇 30mg DSPE-mPEG2000： 44mg
[0021] 配制5ml 5mg/ml奧沙利鉑5%甘露醇溶液。稱(chēng)取卵磷脂、膽固醇、DSPE-mPEG2000， 混合后加入8ml三氯甲烷和4ml乙醚的混合溶液溶解，向其中滴加奧沙利鉑溶液，使用超聲 細(xì)胞破碎儀在300W功率條件下分散lmin，并使用高速剪切機(jī)8000r/min剪切3min后，置旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，35°C，0. 5~0. 6MPa條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)5h后最終形成脂質(zhì)體，采用3500Da的透 析袋透析12h去除游離奧沙利鉑，經(jīng)0. 22 μ m微孔濾膜過(guò)濾除菌。取該脂質(zhì)體溶液，稀釋至 25ml，取其中2ml分裝至西林瓶中，加入5%蔗糖和5%海藻糖混勻后凍干24h，并采用含有 0. 5g/ml蔗糖、0. 2g/ml海藻糖的混合溶液復(fù)溶得到。
[0022] 制備得到的奧沙利鉑脂質(zhì)粒徑為195. 4± 1. 2nm，體保留率為68%。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種奧沙利鉑脂質(zhì)體凍干粉針劑的制備方法，所述奧沙利鉑脂質(zhì)體包封率高且復(fù)溶 后滲漏率低，所述脂質(zhì)體是長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體，非長(zhǎng)循環(huán)脂質(zhì)體，其特征在于，所述脂質(zhì)體通過(guò) 逆相蒸發(fā)法制備得到，再經(jīng)過(guò)透析去除游離奧沙利鉑后加入凍干保護(hù)劑凍干；其中制備脂 質(zhì)體的原料包括奧沙利鉑、大豆卵磷脂、膽固醇、DSPE-mPEG2000,水相為2 %~20 %的蔗糖 水溶液或甘露醇水溶液，使用時(shí)采用含有葡萄糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇中的一種或幾種的 水溶液復(fù)溶，凍干保護(hù)劑選自：葡萄糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇的其中一種或其混合物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，其中大豆卵磷脂、膽固醇、 DSPE-mPEG2000 的摩爾比為 2 ~6 :1 :0? 05 ~0? 15。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，所述逆相蒸發(fā)法制備得到的奧沙利 鉑脂質(zhì)體包封率為15~25%，透析去除游離奧沙利鉑后脂質(zhì)體中奧沙利鉑與脂質(zhì)的質(zhì)量 比為1 :20~200。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，奧沙利鉑脂質(zhì)體制備過(guò)程中采用的 有機(jī)溶劑選自：三氯甲烷、乙醚、異丙醚或其混合物。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，奧沙利鉑脂質(zhì)體制備過(guò)程中水相與 有機(jī)相的比例為1 :2~1 :3。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟如下：稱(chēng)取卵磷脂、膽固醇、 DSPE-mPEG2000,混合后加入有機(jī)溶劑溶解，向其中滴加奧沙利鉑溶液，采用探頭超聲或高 速剪切機(jī)制備反相膠束，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上去除有機(jī)溶劑后最終形成脂質(zhì)體，透析去除游離 奧沙利鉑，經(jīng)0. 22 y m微孔濾膜過(guò)濾除菌后得到脂質(zhì)體，取制備得到的奧沙利鉑脂質(zhì)體，稀 釋后加入凍干保護(hù)劑并凍干，使用時(shí)采用含有葡萄糖、蔗糖、海藻糖、甘露醇中的一種或幾 種的水溶液復(fù)溶。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，步驟如下：配制5ml 3mg/ml奧沙利 鉑9%蔗糖水溶液，稱(chēng)取卵磷脂、膽固醇、DSPE-mPEG2000,混合后加入1ml異丙醚、5ml三氯 甲烷和6ml乙醚的混合溶液溶解，向其中滴加奧沙利鉑溶液，使用超聲細(xì)胞破碎儀在300W 功率條件下分散3min后，置旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上，35°C，0. 5~0. 6MPa條件下旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)5h后最終 形成脂質(zhì)體，采用3500Da的透析袋透析12h去除游離奧沙利鉑，經(jīng)0. 22 y m微孔濾膜過(guò)濾 除菌，取該脂質(zhì)體溶液，稀釋至25ml，取其中2ml分裝至西林瓶中，加入5%甘露醇和5%蔗 糖混勻后凍干24h，使用時(shí)采用含有0. 5g/ml蔗糖、0. 2g/ml海藻糖的混合溶液復(fù)溶。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，復(fù)溶后的奧沙利鉑凍干粉針劑中奧 沙利鉬的濃度為0? 05mg/mL~0? 5mg/mL。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，復(fù)溶后的奧沙利鉑凍干粉針劑粒徑 為 150nm ~200nm。10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于，復(fù)溶后的奧沙利鉑凍干粉針劑滲漏 率低，奧沙利鉑的保留率達(dá)到60%以上。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種奧沙利鉑脂質(zhì)體凍干粉針劑的制備和應(yīng)用，即通過(guò)逆相蒸發(fā)法制備奧沙利鉑脂質(zhì)體后，透析去除游離奧沙利鉑并凍干，本發(fā)明同時(shí)涉及奧沙利鉑脂質(zhì)體凍干粉針劑的專(zhuān)屬凍干保護(hù)劑和復(fù)溶溶劑，以保證復(fù)溶后的奧沙利鉑脂質(zhì)體不易發(fā)生滲漏，該制劑在包括結(jié)腸癌在內(nèi)的多種癌癥治療中具有重要意義。
【IPC分類(lèi)】A61K9/19, A61K47/10, A61K47/26, A61K31/282, A61K47/36, A61P35/00, A61K9/127
【公開(kāi)號(hào)】CN105232460
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510617425
【發(fā)明人】吳建梅, 涂家生
【申請(qǐng)人】南京泛太化工醫(yī)藥研究所
【公開(kāi)日】2016年1月13日
【申請(qǐng)日】2015年9月24日