br>[0055] 圖5C顯示用于與熒光圖像比較的兔右肢的解剖繪圖；
[0056] 圖是以可見白光的，隱神經(jīng)分離的區(qū)段的圖像；
[0057] 圖5E是顯示具有ICG/HSV-2ARR復合物熒光的隱神經(jīng)分離的區(qū)段的熒光圖像；
[0058] 圖5F和5H是分別顯示前2個框（圖5F)和原位神經(jīng)（圖5H)的隱神經(jīng)切斷的區(qū) 段的熒光圖像；
[0059] 圖5G和51是顯示圖5F的隱神經(jīng)切斷的區(qū)段的熒光圖像，但就UV滅活的ICG/PBS/ HSV-2ARR病毒的LacZ基因染色；
[0060] 圖5J是用于與熒光圖像比較的兔左肢的解剖繪圖；和
[0061] 圖5K是實施例5兔左腿背方位的熒光圖像。
【具體實施方式】
[0062] 一個實施方案提供了用于神經(jīng)成像的組合物。
[0063] 在一個實施方案中，組合物包括用于醫(yī)學成像的染料例如熒光染料。然而，許多染 料不適合于使身體的特定部分例如神經(jīng)成像，因為染料一般不能穿透神經(jīng)細胞。本文公開 的是下述發(fā)現(xiàn)：向神經(jīng)病毒組分，即能夠穿透神經(jīng)細胞的病毒組分，可以用于使染料軸突運 輸穿過神經(jīng)網(wǎng)絡的部分或全部。這可以通過形成與病毒組分結合的染料復合物來實現(xiàn)。
[0064] 染赳
[0065] 如本文使用的，術語"熒光染料"或"染料"意指小分子或蛋白質或其他聚合物或 大分子，在經(jīng)由合適波長的輻射光能激發(fā)后，其通過發(fā)射在可見或近紅外波長范圍中的光 而發(fā)熒光。
[0066] 合適的熒光染料包括當暴露于輻射能例如光時發(fā)熒光的任何無毒染料。在特定實 施方案中，染料是發(fā)射在近紅外光譜中的光的熒光染料。在一些實施方案中，染料可能不 是脂溶性的，而在其他實施方案中，它可以是脂溶性的。在特定實施方案中，染料是三碳菁 (tricarbocyanine)染料，例如由Akorn，Inc.(BuffaloGrove，IL)銷售的靛青綠（ICG)。 ICG染料是FDA批準用于人使用的。在其他實施方案中，染料是infracyaninegreen。在其 他實施方案中，染料選自異硫氰酸熒光素、羅丹明、藻紅蛋白、藻藍蛋白、別藻藍蛋白、鄰苯 二醛、熒光胺、玫瑰紅（RoseBengal)、錐蟲藍、熒光金（flu〇r〇-g〇ld)、3-靛青綠-酰基-1， 3-四氫噻唑-硫酮、綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白、黃色熒光蛋白、藍色熒光蛋白和其他熒 光蛋白質。染料可以進行混合或組合。在一些實施方案中，可以使用染料類似物。"染料類 似物"是已進行化學修飾但仍保留其在暴露于合適波長的輻射能時發(fā)熒光的能力的染料。 [0067] 在一個實施方案中，染料是通過用相同但與綠色熒光蛋白基因融合的病毒蛋白質 基因置換病毒蛋白質基因構建的、與病毒衣殼中的蛋白質共價結合的熒光蛋白質，例如綠 色熒光蛋白。在一個實施方案中，綠色熒光蛋白與穿透神經(jīng)細胞的向神經(jīng)病毒蛋白質共價 結合。
[0068]病毒組分
[0069] 在一個實施方案中，病毒組分選自病毒、病毒蛋白質和衣殼。在一個實施方案中， 病毒蛋白質是衣殼或衣殼蛋白質。在一個實施方案中，病毒蛋白質是病毒蛋白質類似物。在 一個實施方案中，病毒蛋白質和類似物獨自能夠穿透神經(jīng)細胞，而不是病毒衣殼或完整病 毒的部分。在另一個實施方案中，病毒蛋白質和類似物可以是自身穿透神經(jīng)細胞的病毒衣 殼或完整病毒的部分。類似物具有導致保守氨基酸改變的不同核酸結構，所述保守氨基酸 改變盡管改變蛋白質或肽的一級序列，但它們通常不改變其功能。保守氨基酸取代一般包 括在下述組內(nèi)的取代：
[0070] 甘氨酸、丙氨酸；
[0071] 纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸；
[0072] 天冬氨酸、谷氨酸；
[0073] 天冬酰胺、谷氨酰胺；
[0074]絲氨酸、蘇氨酸；
[0075]賴氨酸、精氨酸；
[0076] 苯丙氨酸、酪氨酸。
[0077] 在一個實施方案中，病毒蛋白質及其類似物可以在染料與之結合前進行分離。
[0078] 因為它在醫(yī)學應用中使用，所以這種組分是無毒力或"復制缺陷型的"。如本文使 用的，術語"復制缺陷型的"意指在靶細胞（神經(jīng)細胞）中未能形成病毒顆粒（病毒后代）。 在一個實施方案中，"復制缺陷型的"指不能復制。"復制缺陷型"病毒也可以指減毒病毒。 在一個實施方案中，減毒病毒是具有低毒力的活病毒。在一個實施方案中，減毒病毒不復 制。在另一個實施方案中，它們可以在受感染細胞中表達病毒抗原而不復制。在另一個實 施方案中，減毒病毒緩慢復制且產(chǎn)生減毒病毒后代。
[0079] 在一個實施方案中，病毒組分不是神經(jīng)毒性的。
[0080] 在一個實施方案中，病毒經(jīng)由突變或通過熱、光（例如，紫外線）或化學處理滅活 而變成復制缺陷型的。殺死特定病毒所需的紫外（"UV"）線的劑量和波長是眾所周知的。 例如，http：//www.americanairandwater.com/uv-facts/uv-dosage.htm^ll出了在下表I 中再現(xiàn)的，將抑制特定病毒的集落形成的紫外線劑量：
[0081]表1
[0082]
【主權項】
1. 一種組合物，其包括： 熒光染料；和 包含皰瘆病毒的向神經(jīng)的復制缺陷型病毒； 其中所述熒光染料與所述病毒結合，以形成能夠穿透神經(jīng)細胞的染料/病毒組分復合 物。
2. 權利要求1的組合物，其中所述染料選自靛青綠、infracyaninegreen、綠色焚光染 料、異硫氰酸熒光素、羅丹明、藻紅蛋白、藻藍蛋白、別藻藍蛋白、鄰苯二醛、熒光胺、玫瑰紅、 錐蟲藍、熒光金、3-靛青綠-?；?1，3-四氫噻唑-硫酮、綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白、黃 色熒光蛋白、藍色熒光蛋白和其他熒光蛋白質。
3. 權利要求2的組合物，其中所述染料是靛青綠。
4. 權利要求1的組合物，其中所述病毒包括HSV-2ICPlOARR。
5. -種用于減少在外科手術程序過程中對受試者的醫(yī)源性損傷的危險的方法，其包 括： (a) 給所述受試者施用組合物，所述組合物包括： 熒光染料；和 包含皰瘆病毒的向神經(jīng)的復制缺陷型病毒， 其中所述熒光染料與所述病毒結合，以形成染料/病毒組分復合物； (b) 允許所述染料/病毒組分復合物穿透神經(jīng)細胞； (c) 給所述受試者應用足夠量的輻射能，從而使得所述染料發(fā)熒光； (d) 手術中獲得所述受試者的熒光圖像；和 (e) 觀察所述熒光圖像以觀看所述受試者中的一條或多條神經(jīng)。
6. 權利要求5的方法，其中所述焚光染料選自靛青綠、infracyaninegreen、綠色焚光 染料、異硫氰酸熒光素、羅丹明、藻紅蛋白、藻藍蛋白、別藻藍蛋白、鄰苯二醛、熒光胺、玫瑰 紅、錐蟲藍、熒光金、3-靛青綠-?；?1，3-四氫噻唑-硫酮、綠色熒光蛋白、紅色熒光蛋白、 黃色熒光蛋白、藍色熒光蛋白和其他熒光蛋白質。
7. 權利要求6的方法，其中所述熒光染料是靛青綠。
8. 權利要求5的方法，其中所述復制缺陷型病毒包括HSV-2ICP10ARR。
【專利摘要】本發(fā)明涉及用于神經(jīng)成像的包括與病毒組分結合的熒光染料的成像法和組合物。本文公開的是用于使神經(jīng)細胞成像的組合物和方法。該組合物包括熒光染料；和選自向神經(jīng)的復制缺陷型病毒、向神經(jīng)病毒的病毒蛋白質和向神經(jīng)病毒的衣殼的病毒組分。盡管熒光染料自身無法穿透神經(jīng)細胞，但熒光染料與病毒組分結合，以形成能夠穿透神經(jīng)細胞的染料/病毒組分復合物。
【IPC分類】A61K49-00
【公開號】CN104800863
【申請?zhí)枴緾N201510214021
【發(fā)明人】R.W.弗勞爾
【申請人】諾瓦達克技術公司
【公開日】2015年7月29日
【申請日】2009年5月14日
【公告號】CN102026668A, EP2285417A1, US8361775, US20090285762, US20120078093, WO2009140510A1