[0022] 圖3顯示為異常膽液質(zhì)載體UC病證組、UC結(jié)腸和正常組大鼠結(jié)腸組織超微結(jié)構(gòu) 圖。圖中,A為異常膽液質(zhì)載體UC病證組大鼠結(jié)腸組織超微結(jié)構(gòu)圖;B為UC組大鼠結(jié)腸組 織超微結(jié)構(gòu)圖;C為正常組大鼠結(jié)腸組織超微結(jié)構(gòu)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 下面,舉實(shí)施例說(shuō)明本發(fā)明,但是,本發(fā)明并不限于下述的實(shí)施例。
[0024] 本發(fā)明所使用的主要實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:選擇健康清潔級(jí)雄性wistar品系大鼠, 體重為180±30g,由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物質(zhì)量合格證書(shū)號(hào): SYXX[新]2011-0004。
[0025] 本發(fā)明所使用的主要實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼料:標(biāo)準(zhǔn)大鼠飼料,由新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中 心提供;紅花、黑胡椒、干姜,由新疆維吾爾自治區(qū)維吾爾醫(yī)院提供。
[0026] 本發(fā)明所使用的實(shí)驗(yàn)試劑和儀器:試劑:2,4_二硝基氯苯(DNCB)、口服葡萄糖、 丙酮、乙酸、生理鹽水、無(wú)水乙醇、液體石蠟、冰乙酸、甘油、甲醛、酒精、署紅伊紅等,儀器: RQH350型人工氣候箱、人體靜脈血樣采集容器(分離膠/促凝膠)、BA200系列生物顯微鏡 等。
[0027] 本發(fā)明中選用的所有試劑和儀器都為本領(lǐng)域熟知選用的,但不限制本發(fā)明的實(shí) 施,其他本領(lǐng)域熟知的一些試劑和設(shè)備都可適用于本發(fā)明以下實(shí)施方式的實(shí)施。
[0028] 實(shí)施例一:異常異常膽液質(zhì)載體UC病證動(dòng)物模型的構(gòu)建 本發(fā)明采用維醫(yī)體液論結(jié)合2, 4-二硝基氯苯復(fù)合乙酸法構(gòu)建異常膽液質(zhì)載體UC病證 動(dòng)物模型,具體制備方法如下: (1)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:選取健康清潔級(jí),體重為180±30g的雄性wistar品系大鼠。
[0029] (2)實(shí)驗(yàn)大鼠1-13天的飼養(yǎng):實(shí)驗(yàn)大鼠按照每籠5只,滿足正常飼養(yǎng)密度,實(shí)驗(yàn)大 鼠給予每日每籠實(shí)驗(yàn)大鼠300g普通飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后給予每日每籠實(shí)驗(yàn)大鼠300g普 通飼料,400ml干熱屬性飲水,并連續(xù)給予產(chǎn)生膽液質(zhì)飼料灌胃、干熱環(huán)境和慢性刺激連續(xù) 刺激。
[0030] 所述干熱屬性飲水:將體內(nèi)產(chǎn)生膽液質(zhì)的紅花每Ig溶于400ml的雙蒸水中,侵泡 約6h后再給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲用。
[0031] 所述干熱屬性灌胃飼料:分別將體內(nèi)產(chǎn)生膽液質(zhì)的黑胡椒和干姜打成粉末;將每 30g黑胡椒粉末、30g干姜粉末和0. 3g紅花溶于400ml的雙蒸水制備為產(chǎn)生膽液質(zhì)的灌胃 飼料,每天每只大鼠灌胃ml/100g,灌胃前一天配置,在4度的冰箱中保存;第二天灌胃前 室溫放置2h。
[0032] 所述干熱環(huán)境:采用人工氣候箱進(jìn)行飼養(yǎng),其中喂養(yǎng)環(huán)境溫度為26±2°C,相對(duì)濕 度為36~40%,打開(kāi)光照,每天10小時(shí)。
[0033] 所述慢性刺激連續(xù)刺激:慢性刺激包括4種刺激:一是采用電刺激,采用間斷足底 電擊作為應(yīng)激源,在輸出電壓20~40 V,不定時(shí)改變電壓,間隔2~5 min,每天1次,1 次30 min條件下產(chǎn)生慢性應(yīng)激;二是采用夾尾刺激,用小型書(shū)夾夾住實(shí)驗(yàn)大鼠的尾巴,讓 其實(shí)驗(yàn)大鼠相互撕咬、打斗,若停止打斗,則用力拍鼠籠子予以刺激,讓其重新打斗或奔跑, 每日處理1次,每次5min ;三是采用噪音刺激,每天用IOOdB的快節(jié)奏音樂(lè)持續(xù)播放2h ;四 是采用化學(xué)刺激,實(shí)驗(yàn)大鼠背部剃毛,用ImL注射器滴2% (2g/100 mL)的2, 4-二硝基氯苯 (DNCB)丙酮液0. 25mL,滴在剃毛處,每天1次,連續(xù)14天。
[0034] (3)實(shí)驗(yàn)大鼠14-23天的飼養(yǎng):將上述步驟(2)處理后的大鼠從第14天禁食,以 準(zhǔn)備灌腸 DNCB,于第15天用直徑3_的導(dǎo)管經(jīng)肛門(mén)插入大鼠結(jié)腸內(nèi)8cm左右灌入0. 1%的 2, 4-二硝基氯苯(DNCB)乙醇溶液0. 25ml,第16天相同方法以體積分?jǐn)?shù)為6%的乙酸溶液 2ml灌腸,15s后立即注入5ml生理鹽水沖洗,以消除乙酸的刺激作用,灌腸前24h禁食,自 由飲水,觀察7天,觀察期前3天禁食,大鼠自由飲用7. 5%葡萄糖水,以降低大鼠死亡率,葡 萄糖水按照每30g葡葡糖粉與每400ml滅菌水配置。
[0035] (4)通過(guò)上述各技術(shù)步驟即可建立了異常膽液質(zhì)載體UC病證大鼠模型。、 本發(fā)明提供上述技術(shù)步驟(3)中出現(xiàn)了兩次禁食,第一次為從"第14天禁食",第二次 為"觀察7天,觀察期前3天禁食",即從第14天到灌酸后3天一直禁食,這3天給予葡萄糖 水提供能量,大鼠自由飲7. 5%的葡萄糖水,按照每30g葡萄糖加400ml滅菌水配置葡萄糖 水,每天給予一次。
[0036] 通過(guò)上述方法構(gòu)建的動(dòng)物模型具有與人類(lèi)相似的特征表現(xiàn)。維吾爾醫(yī)藥中對(duì)異 常膽液質(zhì)型UC病證人群的描述包括舌苔黃,干,小便赤黃,體型消瘦等特征;上述方法構(gòu)建 的大鼠動(dòng)物模型表現(xiàn)出舌苔呈現(xiàn)黃色,干燥,隨著建證時(shí)間的推移,大鼠的舌苔顏色變化加 重,尿色加深,呈深黃色及黃褐色,大鼠的體重降低等癥狀。上述構(gòu)建異常膽液質(zhì)載體UC病 證大鼠模型中的各技術(shù)步驟都是完整一體的,本發(fā)明在提供構(gòu)建異常膽液質(zhì)載體UC病證 大鼠模型方法中,如何選動(dòng)物、如何干熱屬性飼料灌胃、如何慢性刺激連續(xù)刺激、如何灌入 2, 4-二硝基氯苯(DNCB)乙醇溶液和乙酸溶液等技術(shù)從而構(gòu)建動(dòng)物模型,各技術(shù)過(guò)程中相 互聯(lián)系、相互制約,各技術(shù)參數(shù)協(xié)同通過(guò)提供的方法從而成功構(gòu)建異常膽液質(zhì)載體UC病證 動(dòng)物模型。
[0037] 實(shí)施例二:異常膽液質(zhì)載體UC病證動(dòng)物模型的構(gòu)建 UC是原因不明的大腸粘膜的慢性炎癥和潰瘍性病變,與結(jié)腸癌的發(fā)病存在一定關(guān)系, 已被世界衛(wèi)生組織列為現(xiàn)代難治疾病之一。目前的傳統(tǒng)西醫(yī)學(xué)對(duì)UC主要采用藥物治療和 手術(shù)治療,藥物治療雖然起效快,但長(zhǎng)期服用副作用增多,停藥后反復(fù)發(fā);而手術(shù)治療仍取 決于外科醫(yī)生治療炎性腸病的經(jīng)驗(yàn)。因此對(duì)UC的機(jī)制研宄及治療成為研宄重點(diǎn)。
[0038] 維吾爾醫(yī)藥認(rèn)為人體是由干熱屬性的膽液質(zhì)體液,濕熱屬性的血液質(zhì)體液,濕寒 屬性的粘液質(zhì)體液,干寒屬性的黑膽質(zhì)體液四種不同的體液構(gòu)成,它們之間即相互依賴(lài)又 相互制約。其中膽液質(zhì)體液形成于肝臟,濃縮于膽囊,通過(guò)膽道滴至腸道中分解脂肪,以助 消化,刺激腸道蠕動(dòng)。膽液質(zhì)體液的功能屬性與"火"相似,因此被視為火在人體中的表現(xiàn)。 機(jī)體攝入的營(yíng)養(yǎng)物中的干熱成分,會(huì)形成一種淡黃色、味極苦的膽液質(zhì)體液。但當(dāng)膽液質(zhì)的 數(shù)量和質(zhì)量上發(fā)生改變,當(dāng)膽液質(zhì)占機(jī)體的主導(dǎo)成為對(duì)人體有損的體液時(shí),稱(chēng)作異常膽液 質(zhì)體液。異常膽液質(zhì)型體液是一種特殊狀態(tài)下體液,對(duì)于其致病機(jī)制尚不清楚,維醫(yī)認(rèn)為異 常膽液質(zhì)易發(fā)神經(jīng)系統(tǒng)疾病、肝病和消化系統(tǒng)疾病。因此研宄異常膽液質(zhì)與UC的關(guān)系極為 重要。
[0039] 異常膽液質(zhì)載體UC病證動(dòng)物模型構(gòu)建: (一)實(shí)驗(yàn)方法 1、 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的分組 取健康清潔級(jí),體重為180±30g的雄性wistar品系大鼠34只,適應(yīng)性喂養(yǎng)7天后,按 體重完全隨機(jī)法分為3組,即正常對(duì)照組10只,UC模型組(簡(jiǎn)稱(chēng)UC組)12只、異常膽液質(zhì) 載體UC病證模型組(簡(jiǎn)稱(chēng)UC病證組)12只。
[0040] 2、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型構(gòu)建 2. 1正常組:實(shí)驗(yàn)大鼠在溫度為25±3°C,相對(duì)濕度為60-80%的條件下飼養(yǎng),每籠5只, 每日每籠用普通飼料300g,400ml雙蒸水,隨機(jī)飲食水,未受任何刺激。
[0041] 2. 2異常膽液質(zhì)載體UC病證組 2. 2. 1異常膽液質(zhì)載體UC病證組大鼠1-13天的飼養(yǎng): 大鼠給予普通飼料:實(shí)驗(yàn)大鼠每籠5只,并滿足正常飼養(yǎng)密度,每日每籠實(shí)驗(yàn)大鼠給予 300g普通飼料,400ml干熱屬性飲水,并連續(xù)給予干熱屬性飼料灌胃、干熱環(huán)境和慢性刺激 連續(xù)刺激。
[0042] 所述干熱屬性飲水:將體內(nèi)產(chǎn)生膽液質(zhì)的每Ig紅花溶于400ml的雙蒸水中,侵泡 約6h后再給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲用。
[0043] 所述干熱屬性灌胃藥:分別將體內(nèi)產(chǎn)生膽液質(zhì)的黑胡椒和干姜打成粉末。將每 30g黑胡椒粉末、30g干姜粉末和0. 3g紅花溶于400ml的雙蒸水制備為產(chǎn)生膽液質(zhì)灌胃飼 料。每天每只大鼠灌胃飼料2ml/100g。灌胃前一天配置,并在4度冰箱保存,第二天灌胃前 室溫放置2h。
[0044] 所述干熱環(huán)境:采用人工氣候箱進(jìn)行飼養(yǎng),其中喂養(yǎng)環(huán)境溫度為26±2°C,相對(duì)濕 度為36~40%,打開(kāi)光照,每天10小時(shí)。
[0045] 所述慢性刺激連續(xù)刺激:慢性刺激包括4種刺激。一是采用電刺激:采用間斷足底 電擊作為應(yīng)激源,產(chǎn)生慢性應(yīng)激,其中輸出電壓為20-40 V,不定時(shí)改變電壓,間隔2-5 min, 每天1次,1次30 min。二是采用夾尾刺激:用小型書(shū)夾夾住實(shí)驗(yàn)大鼠的尾巴,讓其相互 撕咬、打斗,若停止打斗,則用力拍鼠籠子對(duì)其予以刺激,讓其重新打斗或奔跑,每日處理1 次,每次5min。三是采用噪音刺激:每天用IOOdB的快節(jié)奏音樂(lè)持續(xù)播放2h。四是采用化 學(xué)刺激,實(shí)驗(yàn)大鼠背部剃毛,用ImL注射器滴2% (2g/100