一種抑制新城疫病毒的藥物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于海洋生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抑制新城疫病毒的藥物。
【背景技術(shù)】
[0002] 殼聚糖是僅次于纖維素且唯一帶正電荷的天然多糖化合物，由于其特殊的化學(xué)結(jié) 構(gòu)及電荷分布，而被賦予了極好的生物活性、化學(xué)活性。殼聚糖根據(jù)構(gòu)型不同可分為α-殼 聚糖、β-殼聚糖和γ-殼聚糖。目前，自然界儲存量最高的α-殼聚糖已有很多研宄，不同 分子量的α-殼聚糖已有一些產(chǎn)品上市，如創(chuàng)口貼、農(nóng)肥、農(nóng)藥和保健品等。由于空間結(jié)構(gòu) 上的差異，同樣分子量的殼聚糖較α-殼聚糖表現(xiàn)出更好的溶解性、更高的反應(yīng)活性和 對反應(yīng)試劑更高的親和性，具有更好的生物活性、生物安全性和化學(xué)可修飾性。此外β -殼 聚糖還具有優(yōu)異的抗氧化、抗菌及抗病毒的活性。但由于β-殼聚糖量少，且在一定的條件 下很容易轉(zhuǎn)變構(gòu)型為α-殼聚糖，對β-殼聚糖的研宄與產(chǎn)品開發(fā)目前還很少。
[0003] 新城疫是由新城疫病毒（NDV)引起禽類的一種以呼吸道、消化道黏膜出血為典型 癥狀的高度接觸性、急性敗血性傳染病。具有分布范圍廣、易感禽類多、經(jīng)濟損失大、影響國 際貿(mào)易等特點。目前新城疫的防治主要以預(yù)防為主，雖然有多種疫苗和免疫方法，但是該病 的發(fā)病率卻仍是居高不下。其主要原因有母源抗體的干擾、病毒引起的免疫抑制等。由于 新城疫防治困難，給我國已造成了巨大的經(jīng)濟損失，引起了人們的極大關(guān)注。同時作為免疫 損傷性疾病，對于新城疫的研宄是系統(tǒng)性研宄免疫損傷性疾病的重要基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種抑制新城疫病毒的藥物。
[0005] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：
[0006] -種抑制新城疫病毒的藥物，抑制新城疫病毒的藥物為低分子量的β-殼聚糖。
[0007] 所述抑制新城疫病毒的藥物為l〇-3KDa的β -殼聚糖。
[0008] 所述抑制新城疫病毒的藥物為6_3KDa的β -殼聚糖。
[0009] 所述抑制新城疫病毒的藥物為經(jīng)生理鹽水溶解的低分子量的殼聚糖溶液。 [0010] 所述抑制新城疫病毒的藥物是濃度為l-l〇g/L經(jīng)生理鹽水溶解的低分子量的 β-殼聚糖溶液。
[0011] 上述藥物與新城疫病毒混合直接作用于家禽作為直接抑制病毒組；上述藥物直接 作用于家禽作為預(yù)防作用組；上述藥物直接作用于攜帶病毒的家禽作為治療作用組；直接 抑制病毒組相比于預(yù)防作用組和治療作用組，最大程度的降低了新城疫病毒的血凝效價， 其次為預(yù)防作用組。
[0012] 直接抑制病毒組的β-殼聚糖最佳分子量段為3-6KDa，濃度為2-8g/L時即可將雞 胚尿囊液中血凝效價由11降低到〇 ;預(yù)防作用組的β -殼聚糖最佳分子量段為4-6KDa，濃 度為lg/L時效果更好；治療作用組的β -殼聚糖最佳分子量段為4-6KDa，作用較弱。
[0013] -種抑制新城疫病毒的藥物的應(yīng)用，所述藥物作為制備新城疫病毒的抑制藥物。
[0014] 所述藥物作為制備家禽免疫因子調(diào)節(jié)劑。
[0015] 本發(fā)明的優(yōu)點
[0016] 1.本發(fā)明采用不同分子量、不同濃度的低分子量殼聚糖作為實驗原料，系統(tǒng) 化的研宄了分子量對殼聚糖抗新城疫病毒效果的影響。為制備具有防治新城疫病毒的 β-殼聚糖藥物的分子量提供了理論參考。
[0017] 2.本發(fā)明采用不同濃度，不同的給藥方式對殼聚糖抑制新城疫病毒的效果進 行優(yōu)化，并確定了最低的抑制濃度，發(fā)現(xiàn)同時注射新城疫Lasota病毒和β -殼聚糖的直接 抑制作用組具有好的抑制病毒效果，且在一定范圍內(nèi)隨著濃度的升高，抑制病毒效果得到 加強。
[0018] 3.本發(fā)明采用分子量為3KDa_6KDa的β -殼聚糖可將新城疫病毒血凝效價降至 〇,同時促進IL-2、IFN-β、TNF-α等免疫因子RNA表達量顯著增加，極大提高免疫系統(tǒng)性 能。
[0019] 4.本發(fā)明所述β-殼聚糖是一種天然存在的帶正電荷的天然多糖，目前發(fā)現(xiàn)其本 身具有提高免疫力、良好的生物親和和良好的生物安全性等特點，作為藥物使用，能有效降 低毒副作用及相關(guān)生物污染。
[0020] 5.本發(fā)明所采用的不同分子量的β-殼聚糖是通過微波輔助方法制得，簡單可 行，原料制備方便且不引入化學(xué)有毒物質(zhì)，具有很好的廣泛應(yīng)用前景。
【附圖說明】
[0021] 圖1為本發(fā)明實施例提供的低分子量的β -殼聚糖高效液相色譜圖，A分子量為 5743Da，B 分子量為 3375Da。
[0022] 圖2為本發(fā)明實施例提供的低分子量的β -殼聚糖紅外譜圖，A分子量為5743Da， B分子量為3375Da。 具體實施例
[0023] 下面結(jié)合說明書附圖對本發(fā)明作進一步說明，并且本發(fā)明的保護范圍不僅局限于 以下實施例。
[0024] 實施例1
[0025] EID5tl的測定：取 SPF 雞胚 30 枚，分成 6 組，分別注射 10 _4、10_5、10_6、10' 10_8、KT9雞新城疫Lasota病毒原液，37°C孵育72h后收取尿囊液，測定EID5tl= 10 _8_45/(). 2ml，取 150EID5(I為病毒注射量。
[0026] 藥物安全限度測定：將分子量為 10491、8588、7099、5933、5743、4371、3624、 3375Da的β-殼聚糖分別用生理鹽水配置成20g/l、10g/l、5g/l和lg/Ι四個梯度的溶液分 別注射于SPF雞胚尿囊腔中，觀察96小時內(nèi)，完全成活，繼續(xù)培養(yǎng)至出殼，雞胚外觀健康完 整，無殘疾。
[0027] 直接抑制作用組：將分子量為 10491、8588、7099、5933、5743、4371、3624、3375Da 的β -殼聚糖分別用生理鹽水配置成lg/L、10g/L兩種不同濃度的溶液，將不同分子量的 β -殼聚糖經(jīng)生理鹽水配置的不同濃度的溶液抽濾除菌后，備用。將Iasota雞新城疫病毒 用生理鹽水稀釋為KT6后（原始病毒效價為2 n，96h內(nèi)導(dǎo)致死亡），將病毒稀釋液與上述各 物質(zhì)的不同濃度的溶解液以l:l(v/v)的比例混勻，編號為1-16組，備用。
[0028] 取9-11日齡SPF雞胚，用照蛋器觀察雞胚存活情況并畫出氣室，確定打孔位置。 采用碘伏對雞胚氣室外殼進行消毒后，再用75%酒精消毒，打孔器打孔后注射1-16組溶液 0. 2mL/只。同時將空白組注射生理鹽水，陽性對照1、2分別為lg/L、10g/L利巴韋林與病毒 I: I (v/v)混合液。陽性對照3、4為lg/L、10g/L黃苗多糖與病毒I: I (v/v)混合液，陰性對 照為1〇_6雞新城疫病毒與生理鹽水1:1 (v/v)混合液。蠟封，避免感染，放置于37°C孵育箱 孵育72h。每隔8小時觀察雞胚存活情況，將24h內(nèi)死亡雞胚剔除，并將死亡雞胚的尿囊液 及時抽取進行血凝試驗。72h后將所有活胚置于-20°C，冷凍I. 5h致死抽取尿囊液進行血 凝試驗。結(jié)果如下表1。
[0029] 表 1
[0030]
【主權(quán)項】
1. 一種抑制新城疫病毒的藥物，其特征在于：抑制新城疫病毒的藥物為低分子量的 e-殼聚糖。
2. 按權(quán)利要求1所述的抑制新城疫病毒的藥物，其特征在于：所述抑制新城疫病毒的 藥物為l〇_3KDa的0 -殼聚糖。
3. 按權(quán)利要求2所述的抑制新城疫病毒的藥物，其特征在于：所述抑制新城疫病毒的 藥物為6-3KDa的0-殼聚糖。
4. 按權(quán)利要求1、2或3所述的抑制新城疫病毒的藥物，其特征在于：所述抑制新城疫 病毒的藥物為經(jīng)生理鹽水溶解的低分子量的0-殼聚糖溶液。
5. 按權(quán)利要求4所述的抑制新城疫病毒的藥物，其特征在于：所述抑制新城疫病毒的 藥物是濃度為l-l〇g/L經(jīng)生理鹽水溶解的低分子量的0 -殼聚糖溶液。
6. -種權(quán)利要求1所述的抑制新城疫病毒的藥物的應(yīng)用，其特征在于：所述藥物作為 制備新城疫病毒的抑制藥物。
7. -種權(quán)利要求1所述的抑制新城疫病毒的藥物的應(yīng)用，其特征在于：所述藥物作為 制備家禽免疫因子調(diào)節(jié)劑。
【專利摘要】本發(fā)明屬于海洋生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抑制新城疫病毒的藥物。抑制新城疫病毒的藥物為低分子量的β-殼聚糖。β-殼聚糖能夠顯著提高IL-2、TLR-7、IFN-β、TNF-α等免疫因子的表達，從而激發(fā)免疫系統(tǒng)的抗病毒反應(yīng)，提高家禽免疫力，從而有效抑制新城疫病毒的發(fā)病及擴散。對于β-殼聚糖抗雞新城疫病毒的效果研究也為其他病毒類疾病的預(yù)防和治療提供了有效依據(jù)和可能的藥物研發(fā)方向。
【IPC分類】A61P31-12, A61K31-722, A61P37-02
【公開號】CN104857013
【申請?zhí)枴緾N201510149518
【發(fā)明人】邢榮娥, 何曉飛, 秦玉坤, 李克成, 劉松, 于華華, 李鵬程
【申請人】中國科學(xué)院海洋研究所
【公開日】2015年8月26日
【申請日】2015年3月31日