MA)在轉(zhuǎn)錄后添加修飾核苷酸。在添加 :V -修 飾核苷酸之后，兩個多核苷酸、初級構(gòu)建體或_1?^物種可在存在或不存在銅的情況下組 合在水溶液中，以便經(jīng)由如文獻中所描述的點擊化學(xué)機制形成新的共價鍵聯(lián)。
[0106] 在另一個實例中，可使用官能化的接頭分子將多于兩個多核苷酸連接在一起。例 如，官能化的糖分子可被化學(xué)修飾成包含多個化學(xué)反應(yīng)性基團6!1-、順2-、隊等）以便與 3'-官能化的mRNA分子上的同源部分（即3'-馬來酰亞胺酯、3' -NHS-醋、炔基）反 應(yīng)。所修飾的糖上的反應(yīng)性基團的數(shù)目可以化學(xué)計量方式進行控制，以便直接控制綴合的 多核苷酸、初級構(gòu)建體或_RNA的化學(xué)計量比例。
[0107] mmRNA綴合物和組合
[0108] 為了進一步增強蛋白質(zhì)產(chǎn)生，本發(fā)明的初級構(gòu)建體或_RNA可被設(shè)計成與以下 各項綴合：其它多核苷酸、染料、嵌入劑（intercalating agent)(例如吖啶）、交聯(lián)劑（例 如補骨脂素（psoralene)、絲裂霉素 C)、卟啉類（TPPC4、德克薩卟啉（texaphyrin)、噻啉 (Sapphyrin))、多環(huán)芳香烴（例如吩嗪、二氫吩嗪）、人工內(nèi)切核酸酶（例如EDTA)、烷化劑、 磷酸酯、氨基、巰基、PEG (例如PEG-40K)、MPEG、[MPEG] 2、聚氨基、烷基、取代的烷基、放射性 標記的標志物、酶、半抗原（例如生物素）、轉(zhuǎn)運/吸收促進劑（例如阿司匹林、維生素 E、葉 酸）、合成核糖核酸酶、蛋白質(zhì)（例如糖蛋白）或肽（例如具有針對共配體的特異性親和力 的分子）或抗體（例如結(jié)合指定細胞類型如癌細胞、內(nèi)皮細胞或骨細胞的抗體）、激素和激 素受體，非肽物種如脂質(zhì)、凝集素、碳水化合物、維生素、輔助因子或藥物。
[0109] 綴合可產(chǎn)生增加的穩(wěn)定性和/或半衰期并且可特別適用于使多核苷酸、初級構(gòu)建 體或_RNA靶向細胞、組織或器官中的特定位點。
[0110] 根據(jù)本發(fā)明，_RNA或初級構(gòu)建體可與以下中的一種或多種一起施用或進一步編 碼以下中的一種或多個：RNAi劑、siRNA、shRNA、miRNA、miRNA結(jié)合位點、反義RNA、核酶、催 化性DNA、tRNA、誘導(dǎo)三螺旋形成的RNA、適體或載體等。
[0111] 雙功能 mmRNA
[0112] 在本發(fā)明的一個實施方案中，是雙功能多核苷酸（例如，雙功能初級構(gòu)建體或雙 功能mmRNA)。顧名思義，雙功能多核苷酸是具有或能夠有至少兩種功能的那些多核苷酸。 這些分子還可根據(jù)慣例被稱為多功能的。
[0113] 雙功能多核苷酸的多重功能性可由RNA編碼（所述功能可能直到編碼的產(chǎn)物被翻 譯才顯現(xiàn)）或可以是多核苷酸本身的特性。它可以是結(jié)構(gòu)的或化學(xué)的。雙功能修飾多核苷 酸可包含與多核苷酸共價或靜電締合的功能。此外，兩種功能可在_RNA與另一種分子的 復(fù)合物的背景下提供。
[0114] 雙功能多核苷酸可編碼抗增殖性的肽。這些肽可以是線性的、環(huán)狀的、約束的或無 規(guī)卷曲的。它們可充當(dāng)適體、信號傳導(dǎo)分子、配體或其模擬物或擬態(tài)物。抗增殖肽在翻譯時 長度可以是3至50個氨基酸。它們可以是5至40、10至30或大約15個氨基酸長。它們 可以是單鏈、多鏈或支鏈的并且一旦被翻譯可形成復(fù)合物、聚集體或任何多單位結(jié)構(gòu)。
[0115] 非編碼多核苷酸和初級構(gòu)建體
[0116] 如本文所描述，提供具有為部分可翻譯或大體上不可翻譯的序列，例如具有非編 碼區(qū)的多核苷酸和初級構(gòu)建體。這種非編碼區(qū)可以是初級構(gòu)建體的"第一區(qū)"?；蛘撸?編碼區(qū)可以是不同于所述第一區(qū)的區(qū)。這類分子通常不被翻譯，但能夠通過結(jié)合和螯合 一種或多種翻譯機器組分（如核糖體蛋白或轉(zhuǎn)移RNA(tRNA))中的一種或多種對蛋白質(zhì) 產(chǎn)生發(fā)揮作用，從而有效地減少細胞中的蛋白質(zhì)表達或調(diào)節(jié)細胞中的一種或多種途徑或 級聯(lián)，這進而改變蛋白質(zhì)水平。多核苷酸或初級構(gòu)建體可包含或編碼一種或多種長的非 編碼RNAdncRNA或IincRNA)或其部分、小核仁RNA(sno-RNA)、微小RNA(miRNA)、小干擾 RNA(siRNA)或 Piwi-相互作用 RNA(piRNA)。
[0117] 目標多肽
[0118] 根據(jù)本發(fā)明，初級構(gòu)建體被設(shè)計成編碼一種或多種目標多肽或其片段。目標多肽 可包括但不限于全多肽、多種多肽或多肽的片段，其獨立地可由一種或多種核酸、多種核 酸、核酸的片段或任何上述的變體編碼。如本文所用，術(shù)語"目標多肽"是指被選擇來在本發(fā) 明的初級構(gòu)建體中編碼的任何多肽。如本文所用，"多肽"意指最經(jīng)常通過肽鍵連接在一起 的氨基酸殘基（天然或不天然的）的聚合物。如本文所用，所述術(shù)語是指具有任何大小、結(jié) 構(gòu)或功能的蛋白質(zhì)、多肽和肽。在一些情況下，編碼的多肽小于約50個氨基酸并且所述多 肽然后被稱為肽。如果多肽是肽，那么它將是至少約2、3、4、或至少5個氨基酸殘基長。因 此，多肽包括基因產(chǎn)物、天然存在的多肽、合成多肽、同源物、直向同源物、橫向同源物、前述 的片段和其它等效物、變體和類似物。多肽可以是單個分子或可以是多分子復(fù)合物如二聚 物、三聚物或四聚物。它們還可包含單鏈或多鏈多肽如抗體或胰島素并且可以是締合的或 連接的。最常見地，在多鏈多肽中發(fā)現(xiàn)二硫鍵。術(shù)語多肽還可應(yīng)用于氨基酸聚合物，其中一 個或多個氨基酸殘基是對應(yīng)的天然存在氨基酸的人工化學(xué)類似物。
[0119] 術(shù)語"多肽變體"是指在其氨基酸序列方面與天然或參考序列不同的分子。與天 然或參考序列相比，氨基酸序列變體可具有在氨基酸序列內(nèi)的某些位置處的取代、缺失和/ 或插入。通常，變體將與天然或參考序列具有至少約50%同一性（同源性），并且優(yōu)選地它 們將與天然或參考序列至少約80%、更優(yōu)選至少約90%相同（同源）。
[0120] 在一些實施方案中，提供"變體模擬物"。如本文所用，術(shù)語"變體模擬物"是包含 將模擬所激活的序列的一個或多個氨基酸的一種變體模擬物。例如，谷氨酸可用作磷-蘇 氨酸和/或磷-絲氨酸的模擬物?；蛘?，變體模擬物可引起去活或含有模擬物的滅活產(chǎn)物， 例如，苯丙氨酸可充當(dāng)酪氨酸的滅活取代；或丙氨酸可充當(dāng)絲氨酸的滅活取代。
[0121] "同源性"在其應(yīng)用于氨基酸序列時被定義為在比對序列并在必要時引入空位以 實現(xiàn)最大百分比同源性之后，候選氨基酸序列中與第二序列的氨基酸序列中的殘基相同的 殘基百分比。用于比對的方法和計算機程序是本領(lǐng)域熟知的。應(yīng)理解同源性取決于百分比 同一性的計算，但由于引入計算中的空位和罰分可能得到不同的值。
[0122] "同源物"在其應(yīng)用于多肽序列時意指與第二物種的第二序列具有實質(zhì)同一性的 其它物種的對應(yīng)序列。
[0123] "類似物"意欲包括因一個或多個氨基酸改變（例如，氨基酸殘基的取代、添加或缺 失）而不同但仍維持親本或起始多肽的一種或多種特性的多肽變體。
[0124] 本發(fā)明考慮為基于多肽的幾種類型的組合物，包括變體和衍生物。這些包括取代、 插入、缺失和共價變體和衍生物。術(shù)語"衍生物"與術(shù)語"變體"同義地使用，但通常是指已 經(jīng)相對于參考分子或起始分子以任何方式修飾和/或改變的分子。
[0125] 如此，編碼相對于參考序列，具體地說本文所公開的多肽序列含有取代、插入和/ 或添加、缺失和共價修飾的多肽的mmRNA包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。例如，序列標簽或氨基酸 (如一個或多個賴氨酸）可添加至本發(fā)明的肽序列（例如，在N末端或C末端處）。序列標 簽可用于肽純化或定位。賴氨酸可用于增加肽溶解度或允許生物素化?；蛘?，位于肽或蛋 白質(zhì)的氨基酸序列的羧基和氨基末端區(qū)處的氨基酸殘基可任選地被缺失，從而提供截短序 列。某些氨基酸（例如，C末端或N末端殘基）可替代地被缺失，這取決于序列的使用，例 如作為可溶或連接至固相支持物的較大序列的一部分的序列的表達。
[0126] 當(dāng)提及多肽時"取代變體"是天然或起始序列中的至少一個氨基酸殘基被去除并 且在其同一位置處的位置中插入不同的氨基酸的多肽。取代可以是單一的，其中分子中的 僅一個氨基酸已被取代；或取代可以是多重的，其中同一分子中的兩個或更多個氨基酸已 被取代。
[0127] 如本文所用，術(shù)語"保守氨基酸取代"是指通常存在于序列中的氨基酸被具有類似 大小、電荷或極性的不同氨基酸取代。保守取代的實例包括非極性（疏水性）殘基如異亮 氨酸、纈氨酸和亮氨酸取代另一種非極性殘基。同樣，保守取代的實例包括一種極性（親水 性）殘基取代另一種，如精氨酸與賴氨酸之間、谷氨酰胺與天冬酰胺之間和甘氨酸與絲氨 酸之間。另外，堿性殘基如賴氨酸、精氨酸或組氨酸取代另一種堿性殘基、或一種酸性殘基 如天冬氨酸或谷氨酸取代另一種酸性殘基是保守取代的另外實例。非保守取代的實例包括 非極性（疏水性）氨基酸殘基如異亮氨酸、纈氨酸、亮氨酸、丙氨酸、蛋氨酸取代極性（親水 性）殘基如半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸或賴氨酸，和/或極性殘基取代非極性殘基。
[0128] 當(dāng)提及多肽時"插入變體"是具有緊鄰天然或起始序列中的特定位置處的氨基酸 插入的一個或多個氨基酸的那些變體。"緊鄰"氨基酸意指連接至所述氨基酸的α-羧基或 α -氨基官能團。
[0129] 當(dāng)提及多肽時"缺失變體"是天然或起始氨基酸序列中的一個或多個氨基酸被去 除的那些變體。通常，缺失變體將使一個或多個氨基酸在分子的特定區(qū)中缺失。
[0130] 當(dāng)提及多肽時"共價衍生物"包括用有機蛋白質(zhì)或非蛋白質(zhì)衍生化試劑修飾天然 或起始蛋白質(zhì)，和/或翻譯后修飾。傳統(tǒng)上通過使蛋白質(zhì)的靶標氨基酸殘基與能夠與選定 側(cè)鏈或末端殘基反應(yīng)的有機衍生化試劑反應(yīng)，或通過利用在選定重組宿主細胞中起作用的 翻譯后修飾的機制來引入共價修飾。所得共價衍生物適用于旨在鑒別對于生物活性、對于 免疫測定或?qū)τ谥苽溆糜谥亟M糖蛋白的免疫親和純化的抗蛋白質(zhì)抗體來說重要的殘基的 程序中。這類修飾在本領(lǐng)域普通技術(shù)的范圍內(nèi)并且在無過度實驗的情況下進行。
[0131] 某些翻譯后修飾是重組宿主細胞對所表達多肽的作用的結(jié)果。谷氨酰胺酰基和天 冬酰胺?；鶜埢?jīng)常在翻譯后脫去酰氨基成對應(yīng)的谷氨?；吞於滨；鶜埢??；蛘?，這 些殘基在溫和酸性條件下脫去酰氨基。這些殘基的任一形式可存在于根據(jù)本發(fā)明產(chǎn)生的多 肽中。
[0132] 其它翻譯后修飾包括脯氨酸和賴氨酸的羥基化，絲氨?；蛱K氨?；鶜埢牧u基 的磷酸化，賴氨酸、精氨酸和組氨酸側(cè)鏈的α -氨基的甲基化（T. E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, ff. H. Freeman&Co. , San Francisco,第 79-86 頁 (1983))〇
[0133] 當(dāng)提及多肽時"特征"被定義為分子的基于氨基酸序列的不同組分。由本發(fā)明的 mmRNA編碼的多肽的特征包括表面表觀、局部構(gòu)象形狀、折疊、環(huán)、半環(huán)、結(jié)構(gòu)域、半結(jié)構(gòu)域、 位點、末端或其任何組合。
[0134] 如本文所用當(dāng)提及多肽時，術(shù)語"表面表觀"是指蛋白質(zhì)的出現(xiàn)在最外表面上的基 于多肽的組分。
[0135] 如本文所用，當(dāng)提及多肽時術(shù)語"局部構(gòu)象形狀"是指蛋白質(zhì)的位于其可限定空間 內(nèi)的基于多肽的結(jié)構(gòu)表觀。
[0136] 如本文所用當(dāng)提及多肽時，術(shù)語"折疊"是指在能量最低化時氨基酸序列的所得構(gòu) 象。折疊可在折疊過程的二級或三級水平下發(fā)生。二級水平折疊的實例包括β折疊和α 螺旋。三級折疊的實例包括由于高能力的聚集或分離形成的結(jié)構(gòu)域和區(qū)。以這種方式形成 的區(qū)包括疏水袋和親水袋等。
[0137] 如本文所用，術(shù)語"轉(zhuǎn)角"在其涉及蛋白質(zhì)構(gòu)象時意指使肽或多肽的主鏈方向改變 的彎曲并且可涉及一個、兩個、三個或更多個氨基酸殘基。
[0138] 如本文所用，當(dāng)提及多肽時，術(shù)語"環(huán)"是指可用于使肽或多肽的主鏈方向反向的 多肽的結(jié)構(gòu)特征。當(dāng)環(huán)在多肽中存在并且僅改變主鏈的方向時，它可包含四個或更多個 氨基酸殘基。Oliva等人已經(jīng)鑒別了至少5類蛋白質(zhì)環(huán)（J.Mol Biol 266(4):814-830; 1997)。環(huán)可以是開放的或閉合的。閉合的環(huán)或"環(huán)狀"環(huán)可在橋接部分之間包含2、3、4、5、 6、7、8、9、10或更多個氨基酸。這類橋接部分可包含在具有二硫橋的多肽中典型的半胱氨 酸-半胱氨酸橋（Cys-Cys)，或可替代地橋接部分可以是基于非蛋白質(zhì)的，如本文所使用的 dibromozylyl 試劑。
[0139] 如本文所用，當(dāng)提及多肽時術(shù)語"半環(huán)"是指所鑒別的環(huán)的一部分，所述部分具有 其所衍生自的環(huán)的至少一半數(shù)目的氨基酸殘基。應(yīng)理解，環(huán)可能不總是包含偶數(shù)數(shù)目的氨 基酸殘基。因此，在環(huán)包含或被鑒別為包含奇數(shù)數(shù)目的氨基酸的那些情況下，奇數(shù)數(shù)目的環(huán) 的半環(huán)將包含所述環(huán)的整數(shù)部分或下一個整數(shù)部分（所述環(huán)的氨基酸的數(shù)目/2+/-0. 5個 氨基酸）。例如，被鑒別為7個氨基酸環(huán)的環(huán)可產(chǎn)生3個氨基酸或4個氨基酸的半環(huán)（7/2 =3· 5+/-0. 5 為 3 或 4)。
[0140] 如本文所用，當(dāng)提及多肽時術(shù)語"結(jié)構(gòu)域"是指具有一種或多種可鑒別的結(jié)構(gòu)或功 能特征或特性（例如，結(jié)合能力，用作蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的位點）的多肽的基序。
[0141] 如本文所用，當(dāng)提及多肽時術(shù)語"半結(jié)構(gòu)域"意指鑒別的結(jié)構(gòu)域的一部分，所述部 分具有其所衍生自的結(jié)構(gòu)域的至少一半數(shù)目的氨基酸殘基。應(yīng)理解結(jié)構(gòu)域可能不總是包含 偶數(shù)數(shù)目的氨基酸殘基。因此，在結(jié)構(gòu)域包含或被鑒別為包含奇數(shù)數(shù)目的氨基酸的那些情 況下，奇數(shù)數(shù)目的結(jié)構(gòu)域的半結(jié)構(gòu)域?qū)鼋Y(jié)構(gòu)域的整數(shù)部分或下一個整數(shù)部分（所 述結(jié)構(gòu)域的氨基酸的數(shù)目/2+/-0. 5個氨基酸）。例如，被鑒別為7個氨基酸結(jié)構(gòu)域的結(jié)構(gòu) 域可產(chǎn)生3個氨基酸或4個氨基酸的半結(jié)構(gòu)域（7/2 = 3. 5+/-0. 5為3或4)。還應(yīng)理解，可 在結(jié)構(gòu)域或半結(jié)構(gòu)域內(nèi)鑒別亞結(jié)構(gòu)域，這些亞結(jié)構(gòu)域擁有少于其所衍生自的結(jié)構(gòu)域或半結(jié) 構(gòu)域中鑒別出的所有結(jié)構(gòu)或功能特性。還應(yīng)理解，包含本文的任何結(jié)構(gòu)域類型的氨基酸不 必是沿多肽的主鏈連續(xù)的（即，不相鄰的氨基酸可在結(jié)構(gòu)上折疊以產(chǎn)生結(jié)構(gòu)域、半結(jié)構(gòu)域 或亞結(jié)構(gòu)域）。
[0142] 如本文所用，當(dāng)提及多肽時術(shù)語"位點"在其涉及基于氨基酸的實施方案時與"氨 基酸殘基"和"氨基酸側(cè)鏈"同義地使用。位點表示肽或多肽內(nèi)的可在本發(fā)明的基于多肽的 分子內(nèi)修飾、操縱、改變、衍生化或變化的位置。
[0143] 如本文所用，術(shù)語"末端（termini) "或"末端（terminus) "當(dāng)提及多肽時是指肽 或多肽的末尾。這種末尾不僅僅限于肽或多肽的第一或最后位點，而且可包括末端區(qū)中的 另外氨基酸。本發(fā)明的基于多肽的分子可被表征為具有N末端（由具有自由氨基（NH2)的 氨基酸封端）和C末端（由具有自由羧基（COOH)的氨基酸封端）兩者。本發(fā)明的蛋白質(zhì) 在一些情況下由通過二硫鍵或通過非共價力（多聚體、低聚物）集合在一起的多個多肽鏈 組成。這些種類的蛋白質(zhì)將具有多個N末端和C末端。或者，多肽的末端可進行修飾以使 得它們根據(jù)情況以基于非多肽的部分（如有機綴合物）開始或結(jié)束。
[0144] -旦任何特征已被鑒別或定義為待由本發(fā)明的初級構(gòu)建體或mmRNA編碼的多肽 的所需組分，便可通過移動、交換、反轉(zhuǎn)、缺失、隨機化或復(fù)制來進行這些特征的若干操縱和 /或修飾中的任何一種。此外，應(yīng)理解特征的操縱可產(chǎn)生與對本發(fā)明分子的修飾相同的結(jié) 果。例如，涉及使結(jié)構(gòu)域缺失的操縱將產(chǎn)生正如修飾核酸以編碼小于全長分子將產(chǎn)生的那 樣的分子長度的改變。
[0145] 修飾和操縱可通過本領(lǐng)域已知的方法來實現(xiàn)，例如但不限于定點誘變。然后可使 用體外或體內(nèi)測定（如本文所描述的那些）或本領(lǐng)域已知的任何其它合適的篩選測定來測 試所得到的修飾分子的活性。
[0146] 根據(jù)本發(fā)明，多肽可包含通過多輪實驗發(fā)現(xiàn)的共有序列。如本文所用，"共有"序列 是表示允許一個或多個位點處的變異性的序列集合群體的單個序列。
[0147] 如本領(lǐng)域技術(shù)人員所認識到，蛋白質(zhì)片段、功能性蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域和同源蛋白質(zhì)也 被認為在本發(fā)明的目標多肽的范圍內(nèi)。例如，本文提供長度為10、20、30、40、50、60、70、80、 90、100或大于100個氨基酸的參考蛋白質(zhì)的任何蛋白質(zhì)片段（意指比參考多肽序列短至少 一個氨基酸殘基但在其它方面相同的多肽序列）。在另一個實例中，可根據(jù)本發(fā)明使用包含 與本文所描述的任何序列為約40%、約50%、約60%、約70%、約80%、約90%、約95%或 約100%相同的具有約20、約30、約40、約50或約100個氨基酸的段的任何蛋白質(zhì)。在某 些實施方案中，待根據(jù)本發(fā)明使用的多肽包含2、3、4、5、6、7、8、9、10或更多個突變，如本文 所提供或提及的任何序列中所示。
[0148] 編碼的多肽
[0149] 本發(fā)明的初級構(gòu)建體或mmRNA可被設(shè)計成編碼選自若干靶標類別中的任何一種 的目標多肽，所述靶標類別包括但不限于生物制劑、抗體、疫苗、治療性蛋白質(zhì)或肽、細胞穿 透肽、分泌性蛋白、質(zhì)膜蛋白、細胞質(zhì)或細胞骨架蛋白、細胞內(nèi)膜結(jié)合蛋白、核蛋白、與人類 疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)、靶向部分或由人基因組編碼的那些蛋白質(zhì)，針對所述蛋白質(zhì)還未鑒別 出治療適應(yīng)癥但所述蛋白質(zhì)仍然在研宄和發(fā)現(xiàn)領(lǐng)域中具有效用。
[0150] 在一個實施方案中，初級構(gòu)建體或mmRNA可編碼與參考多肽序列具有一定同一性 的變體多肽。如本文所用，"參考多肽序列"是指起始多肽序列。參考序列可以是野生型 序列或在設(shè)計另一序列中所參考的任何序列。"參考多肽序列"可以是例如任一蛋白質(zhì)序 列，所述任一蛋白質(zhì)序列列于共同待決的以下各案的表6中：2012年4月2日提交的名稱 為Modified Polynucleotides for the Production of Biologies 的美國臨時專利申 請?zhí)?61/618, 862、2012 年 8 月 10 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Biologies的美國臨時專利申請?zhí)?1/681，645、2012年12月14日提交 的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Biologies 美國臨時專利 申請?zhí)?61/737, 130、2012 年 4 月 2 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Antibodies的美國臨時專利申請?zhí)?1/618,866、2012年8月10日提交的 名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Antibodies 的美國臨時專 利申請?zhí)?61/681，647、2012 年 12 月 14 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Antibodies的美國臨時專利申請?zhí)?1/737, 134、2012年4月2日提 交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Vaccines 的美國臨時 專利申請?zhí)?61/618,868、2012 年8 月 10 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Vaccines的美國臨時專利申請?zhí)?1/681，648、2012年12月14日提 交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Vaccines 的美國臨時 專利申請?zhí)?61/737, 135、2012 年 4 月 2 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Secreted Proteins 的美國臨時專利申請?zhí)?61/618,873、2012 年 8 月 10 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Secreted Proteins的美國臨時專利申請?zhí)?1/681，650、2012年12月14日提交的名稱為Modified Polynucleotides for the Production of Secreted Proteins 的美國臨時專利申請 號 61/737, 147、2012 年 4 月 2 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Plasma Membrane Proteins 的美國臨時專利申請?zhí)?61/618, 878、2012 年 8 月 10 日提交的名稱為Modified Polynucleotides for the Production of Plasma Membrane Proteins的美國臨時專利申請?zhí)?1/681，654、2012年12月14日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Plasma Membrane Proteins 的美國 臨時專利申請?zhí)?1/737, 152、2012年4月2日提交的名稱為Modified Polynucleotides for the Production of Cytoplasmic and Cytoskeletal Proteins 的美國臨時專 利申請?zhí)?61/618, 885、2012 年 8 月 10 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Cytoplasmic and Cytoskeletal Proteins 的美國臨時專 利申請?zhí)?61/681，658、2012 年 12 月 14 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Cytoplasmic and Cytoskeletal Proteins 的美國臨時專利 申請?zhí)?61/737, 155、2012 年 4 月 2 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Intracellular Membrane Bound Proteins 的美國臨時專利申 請?zhí)?61/618, 896、2012 年 7 月 5 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Intracellular Membrane Bound Proteins 的美國臨時專利申 請?zhí)?61/668, 157、2012 年 8 月 10 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Intracellular Membrane Bound Proteins 的美國臨時專利申 請?zhí)?61/681，661、2012 年 12 月 14 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Intracellular Membrane Bound Proteins 的美國臨時專利申請 號 61/737, 160、2012 年 4 月 2 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Nuclear Proteins 的美國臨時專利申請?zhí)?61/618, 911、2012 年 8 月 10 日提交的，名稱為Modified Polynucleotides for the Production of Nuclear Proteins的美國臨時專利申請?zhí)?1/681，667、2012年12月14日提交的名稱為Modified Polynucleotides for the Production of Nuclear Proteins 的美國臨時專利申請 號 61/737, 168、2012 年 4 月 2 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Proteins的美國臨時專利申請?zhí)?1/618,922、2012年8月10日提交的， 名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Proteins 的美國臨時專利 申請?zhí)?61/681，675、2012 年 12 月 14 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Proteins的美國臨時專利申請?zhí)?1/737, 174、2012年4月2日提交 的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Proteins Associated with Human Disease的美國臨時專利申請