號(hào)61/618, 935、2012年8月10日提交的 名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Proteins Associated with Human Disease的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/681，687、2012年12月14日提交的 名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Proteins Associated with Human Disease的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/737, 184、2012年4月2日提交的名 稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Proteins Associated with Human Disease的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/618, 945、2012年8月10日提交的 名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Proteins Associated with Human Disease的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/681，696、2012年12月14日提交的 名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Proteins Associated with Human Disease的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/737, 191、2012年4月2日提交的名稱 為 Modified Polynucleotides for the Production of Proteins Associated with Human Disease的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/618, 953、2012年8月10日提交的名稱 為 Modified Polynucleotides for the Production of Proteins Associated with Human Disease美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/681，704、2012年12月14日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Proteins Associated with Human Disease的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/737,203、2013年3月9日提交的名稱為Modified Polynucleotides for the Production of Biologies and Proteins Associated with Human Disease 的國(guó)際申請(qǐng)?zhí)?PCT/US2013/030062、名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Secreted Proteins 的國(guó)際申請(qǐng)?zhí)?PCT/US2013/030064、2013 年 3 月 9 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Membrane Proteins的國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US2013/030059、2013年3月9日提交的名稱為Modified Polynucleotides for the Production of Cytoplasmic and Cytoskeletal Proteins 的 國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US2013/030066、2013年3月 9 日提交的名稱為Modified Polynucleotides for the Production of Nuclear Proteins 的國(guó)際申請(qǐng)?zhí)?PCT/US2013/030067、2013 年 3 月 9 日提交的名稱為Modified Polynucleotides for the Production of Proteins 的國(guó) 際申請(qǐng)?zhí)?PCT/US2013/030060、2013 年 3 月 9 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Proteins Associated with Human Disease 的國(guó)際申請(qǐng)?zhí)?PCT/US2013/030061 ;共同待決的以下各案的表6和7中：2012年8月10日提交的，名 稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Cosmetic Proteins and P印tides的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/681，720、2012年12月14日提交的名稱為Modified Polynucleotides for the Production of Cosmetic Proteins and Peptides 的美國(guó)臨 時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/737,213、2012年8月10日提交的名稱為Modified Polynucleotides for the Production of Oncology-Related Proteins and Peptides 的美國(guó)臨時(shí)專利 申請(qǐng)?zhí)?61/681，742、2013 年 3 月 9 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Oncology-Related Proteins and Peptides 的國(guó)際申請(qǐng)?zhí)?PCT/ US2013/030070 ;共同待決的以下案的表6、178和179中：2013年3月9日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Cosmetic Proteins and Peptides 的國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US2013/030068 ;共同待決的以下案的表6、28和29中：2012年4月 2 日提交的名稱為 Modified Polynucleotides for the Production of Therapeutic Proteins and P印tides的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?1/618, 870 ;共同待決的以下案的表6、56 和57 中：2012年8月 10 日提交的名稱為Modified Polynucleotides for the Production of Therapeutic Proteins and Peptides 的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?61/681，649;共同待決 的以下案的表6、186和187中：2012年12月14日提交的Modified Polynucleotides for the Production of Therapeutic Proteins and Peptides 的美國(guó)臨時(shí)專利申請(qǐng)?zhí)?61/737, 139 ;以及共同待決的以下案的表6、185和186中：2013年3月9日提交的名稱為 Modified Polynucleotides的國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US2013/030063 ;所述申請(qǐng)各自的內(nèi)容以引 用的方式整體并入本文。
[0151] 如本領(lǐng)域已知的術(shù)語(yǔ)"同一性"是指如通過比較序列確定的兩個(gè)或更多個(gè)肽的序 列之間的關(guān)系。在本領(lǐng)域中，同一性還意指如通過具有兩個(gè)或更多個(gè)氨基酸殘基的串之間 的匹配數(shù)目確定的肽之間的序列相關(guān)性程度。同一性測(cè)度通過特定數(shù)學(xué)模型或計(jì)算機(jī)程序 (即"算法"）解決的具有空位比對(duì)（如果存在）的兩個(gè)或更多個(gè)序列之間較小者的相同匹 配的百分比。相關(guān)肽的同一性可通過已知方法容易地計(jì)算。這類方法包括但不限于以下 中描述的那些〖Computational Molecular Biology, Lesk, Α·Μ·編輯，Oxford University Press,New York, 1988 ；Biocomputing:Informatics and Genome Projects,Smith, D. ff.編輯，Academic Press, New York, 1993 ；Computer Analysis of Sequence Data,第 I 部分，Griffin, A. M.和 Griffin, H.G.編輯，Humana Press，New Jersey，1994;Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G.，Academic Press, 1987 ；Sequence Analysis Primer, Gribskov, M.和 Devereux, J.編輯，M. Stockton Press, New York, 1991 ; 和 Carillo 等人，SIAM J. Applied Math. 48, 1073 (1988)。
[0152] 在一些實(shí)施方案中，多肽變體可具有與參考多肽相同或類似的活性。或者，變體可 相對(duì)于參考多肽具有改變的活性（例如，增加的或減少的）。通常，本發(fā)明的特定多核苷酸 或多肽的變體將與所述特定參考多核苷酸或多肽具有至少約40%、45%、50%、55%、60%、 65%、70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99% 但 小于100 %的序列同一性，如通過本文所描述的和本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的序列比對(duì)程序和 參數(shù)確定的。用于比對(duì)的這類工具包括BLAST套件的那些（St印hen F. Altschul，Thomas L. Madden, Alejandro A. SchSifer, Jinghui Zhang, Zheng Zhang, Webb Miller,和 David J. Lipman (1997)，''Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs", Nucleic Acids Res. 25:3389-3402·)。其它工具在本文、具體地在"同 一性"的定義中進(jìn)行描述。
[0153] BLAST算法中的缺省參數(shù)包括例如，預(yù)期閾值10、字長(zhǎng)28、匹配/錯(cuò)配得分1、-2， 空位損失線性?？蓱?yīng)用任何濾波器以及選擇物種特異性重復(fù)序列，例如智人。
[0154] 生物制劑
[0155] 本文所公開的多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或mmRNA可編碼一種或多種生物制劑。如本 文所用，"生物制劑"是通過本文所提供的方法產(chǎn)生的并且可用于治療、治愈、減輕、預(yù)防或 診斷嚴(yán)重的或威脅生命的疾病或醫(yī)學(xué)病狀的基因多肽的分子。根據(jù)本發(fā)明生物制劑包括但 不限于，過敏原提取物（例如用于過敏疫苗注射（allergy shot)和測(cè)試）、血液組分、基因 療法產(chǎn)物、移植中使用的人組織或細(xì)胞產(chǎn)物、疫苗、單克隆抗體、細(xì)胞因子、生長(zhǎng)因子、酶、溶 血栓劑和免疫調(diào)節(jié)劑等。
[0156] 根據(jù)本發(fā)明，當(dāng)前市售或處于研發(fā)中的一種或多種生物制劑可由本發(fā)明的多核苷 酸、初級(jí)構(gòu)建體或mmRNA編碼。雖然不希望受理論束縛，但據(jù)信將已知生物制劑的編碼多肽 并入到本發(fā)明的初級(jí)構(gòu)建體或_RNA中將產(chǎn)生改善的治療功效，這種改善的治療功效至少 部分地歸因于構(gòu)建體設(shè)計(jì)的特異性、純度和/或選擇性。
[0157] 抗體
[0158] 本文所公開的初級(jí)構(gòu)建體或_RNA可編碼一種或多種抗體或其片段。術(shù)語(yǔ)"抗體" 包括單克隆抗體（包括具有免疫球蛋白Fc區(qū)的全長(zhǎng)抗體）、具有多表位特異性的抗體組合 物、多特異性抗體（例如，雙特異性抗體、雙抗體和單鏈分子）以及抗體片段。術(shù)語(yǔ)"免疫球 蛋白"（Ig)在本文可與"抗體"互換使用。如本文所用，術(shù)語(yǔ)"單克隆抗體"是指從大體上同 質(zhì)抗體的群體獲得的抗體，即構(gòu)成所述群體的單獨(dú)抗體是相同的，除了可能以微量存在的 可能的天然存在的突變和/或翻譯后修飾（例如，異構(gòu)化，酰胺化）。單克隆抗體是高度特 異性的，從而針對(duì)單一抗原位點(diǎn)。
[0159] 本文的單克隆抗體具體地包括"嵌合"抗體（免疫球蛋白），其中重鏈和/或輕鏈 的一部分與源自特定物種或?qū)儆谔囟贵w類別或亞類的抗體中的對(duì)應(yīng)序列相同或同源，而 所述鏈的剩余部分與源自另一物種或?qū)儆诹硪豢贵w類別或亞類的抗體以及這類抗體的片 段中的對(duì)應(yīng)序列相同或同源，只要它們表現(xiàn)出所需的生物活性。本文的目標(biāo)嵌合抗體包括 但不限于包含源自非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物（例如，舊世界猴、猿等）的可變結(jié)構(gòu)域抗原結(jié)合序列和 人恒定區(qū)序列的"靈長(zhǎng)類化"抗體。
[0160] "抗體片段"包含完整抗體的一部分，優(yōu)選地所述完整抗體的抗原結(jié)合區(qū)和/或可 變區(qū)?？贵w片段的實(shí)例包括Fab、Fab'、F (ab'）2和Fv片段；雙抗體；線性抗體；納米抗體 (nanobodies);從抗體片段形成的單鏈抗體分子和多特異性抗體。
[0161] 五類免疫球蛋白IgA、IgD、IgE、IgG和IgM中的任何一種可由本發(fā)明的mmRNA編 碼，包括分別指定為α、δ、ε、λ和μ的重鏈。還包括編碼亞類γ和μ的多核苷酸序列。 因此抗體亞類中的任何一種可被部分或整體地編碼并且包括以下亞類：IgGl、IgG2、IgG3、 IgG4、IgAl 和 IgA2。
[0162] 根據(jù)本發(fā)明，當(dāng)前市售或處于研發(fā)中的一種或多種抗體或片段可由本發(fā)明的多核 苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_1?^編碼。雖然不希望受理論束縛，但據(jù)信并入到本發(fā)明的初級(jí)構(gòu) 建體中將產(chǎn)生改善的治療功效，這種改善的治療功效至少部分地歸因于_RNA設(shè)計(jì)的特異 性、純度和選擇性。
[0163] 在本發(fā)明的多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_1?仏中編碼的抗體可用于治療許多治療領(lǐng) 域中的病狀或疾病，所述治療領(lǐng)域例如但不限于血液、心血管、CNS、中毒（包括抗蛇毒素）、 皮膚病學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)、胃腸、醫(yī)學(xué)成像、肌肉骨骼、腫瘤學(xué)、免疫學(xué)、呼吸系統(tǒng)、感覺系統(tǒng)以及 抗感染的治療領(lǐng)域。
[0164] 在一個(gè)實(shí)施方案中，本文所公開的初級(jí)構(gòu)建體或_1?^可編碼單克隆抗體和/或 其變體?？贵w的變體還可包括但不限于，取代變體、保守氨基酸取代、插入變體、缺失變體和 /或共價(jià)變體。在一個(gè)實(shí)施方案中，本文所公開的初級(jí)構(gòu)建體和/或mmRNA可編碼免疫球 蛋白Fc區(qū)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，初級(jí)構(gòu)建體和/或mmRNA可編碼變體免疫球蛋白Fc區(qū)。 作為非限制性實(shí)例，初級(jí)構(gòu)建體和/或_1?^可編碼具有變體免疫球蛋白Fc區(qū)的抗體，如 描述于以引用的方式整體并入本文的美國(guó)專利號(hào)8, 217, 147中。
[0165] 疫苗
[0166] 本文所公開的初級(jí)構(gòu)建體或_RNA可編碼一種或多種疫苗。如本文所用，"疫苗" 是改善對(duì)特定疾病或傳染原的免疫性的生物制劑。根據(jù)本發(fā)明，當(dāng)前市售或處于研發(fā)中的 一種或多種疫苗可由本發(fā)明的多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_1?^編碼。雖然不希望受理論束 縛，但據(jù)信并入到本發(fā)明的初級(jí)構(gòu)建體或mmRNA中將產(chǎn)生改善的治療功效，這種改善的治 療功效至少部分地歸因于構(gòu)建體設(shè)計(jì)的特異性、純度和選擇性。
[0167] 在本發(fā)明的多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_1?仏中編碼的疫苗可用于治療許多治療領(lǐng) 域中的病狀或疾病，所述治療領(lǐng)域例如但不限于心血管、CNS、皮膚病學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)、腫瘤學(xué)、 免疫學(xué)、呼吸系統(tǒng)以及抗感染的治療領(lǐng)域。
[0168] 治療性蛋白質(zhì)或肽
[0169] 本文所公開的初級(jí)構(gòu)建體或mmRNA可編碼一種或多種經(jīng)驗(yàn)證的或"處于測(cè)試中 的"治療性蛋白質(zhì)或肽。
[0170] 根據(jù)本發(fā)明，當(dāng)前市售或處于研發(fā)中的一種或多種治療性蛋白質(zhì)或肽可由本發(fā)明 的多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_1?^編碼。雖然不希望受理論束縛，但據(jù)信并入到本發(fā)明的初 級(jí)構(gòu)建體或_RNA中將產(chǎn)生改善的治療功效，這種改善的治療功效至少部分地歸因于構(gòu)建 體設(shè)計(jì)的特異性、純度和選擇性。
[0171] 在本發(fā)明的多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_1?^中編碼的治療性蛋白質(zhì)和肽可用于治 療許多治療領(lǐng)域中的病狀或疾病，所述治療領(lǐng)域例如但不限于血液、心血管、CNS、中毒（包 括抗蛇毒素）、皮膚病學(xué)、內(nèi)分泌學(xué)、遺傳學(xué)、泌尿生殖、胃腸、肌肉骨骼、腫瘤學(xué)和免疫學(xué)、呼 吸系統(tǒng)、感覺系統(tǒng)以及抗感染的治療領(lǐng)域。
[0172] 細(xì)胞穿透多肽
[0173] 本文所公開的初級(jí)構(gòu)建體或_RNA可編碼一種或多種細(xì)胞穿透多肽。如本文所 用，"細(xì)胞穿透多肽"或CPP是指可有助于分子的細(xì)胞攝取的多肽。本發(fā)明的細(xì)胞穿透多肽 可包含一種或多種可檢測(cè)標(biāo)記。所述多肽可被部分地標(biāo)記或全部完全地標(biāo)記。所述多核苷 酸、初級(jí)構(gòu)建體或_1?^可完全、部分編碼或完全不編碼可檢測(cè)標(biāo)記。細(xì)胞穿透肽還可包括 信號(hào)序列。如本文所用，"信號(hào)序列"是指在蛋白質(zhì)翻譯過程中結(jié)合在新生蛋白質(zhì)的氨基末 端處的氨基酸殘基的序列。信號(hào)序列可用于信號(hào)傳導(dǎo)細(xì)胞穿透肽的分泌。
[0174] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_1?^還可編碼融合蛋白。融合 蛋白可通過將帶電荷的蛋白質(zhì)可操作地連接至治療性蛋白質(zhì)來形成。如本文所用，"可操作 地連接"是指當(dāng)引入至細(xì)胞中時(shí)治療性蛋白質(zhì)和帶電荷的蛋白質(zhì)以允許表達(dá)復(fù)合物的這樣 一種方式連接。如本文所用，"帶電荷的蛋白質(zhì)"是指攜帶正、負(fù)或總體中性的電荷的蛋白 質(zhì)。優(yōu)選地，在融合蛋白的形成中治療性蛋白質(zhì)可共價(jià)地連接至帶電荷的蛋白質(zhì)。表面電 荷與總或表面氨基酸的比可以是大約0. l、〇. 2、0. 3、0. 4、0. 5、0. 6、0. 7、0. 8或0. 9。
[0175] 由多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_1?^編碼的細(xì)胞穿透多肽可在被翻譯之后形成復(fù)合 物。所述復(fù)合物可包含連接（例如共價(jià)連接）至細(xì)胞穿透多肽的帶電荷的蛋白質(zhì)。"治療 性蛋白質(zhì)"是指當(dāng)施用至細(xì)胞時(shí)具有治療、診斷和/或預(yù)防性作用和/或引出所需的生物和 /或藥理學(xué)作用的蛋白質(zhì)。
[0176] 在一個(gè)實(shí)施方案中，細(xì)胞穿透多肽可包含第一結(jié)構(gòu)域和第二結(jié)構(gòu)域。第一結(jié)構(gòu)域 可包含超電荷的多肽。第二結(jié)構(gòu)域可包含蛋白質(zhì)結(jié)合配偶體。如本文所用，"蛋白質(zhì)結(jié)合配 偶體"包括但不限于抗體及其功能性片段、支架蛋白或肽。細(xì)胞穿透多肽可進(jìn)一步包含蛋白 質(zhì)結(jié)合配偶體的細(xì)胞內(nèi)結(jié)合配偶體。細(xì)胞穿透多肽可能夠從可引入多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體 或_1?^的細(xì)胞分泌。細(xì)胞穿透多肽還可能夠穿透第一細(xì)胞。
[0177] 在另一實(shí)施方案中，細(xì)胞穿透多肽能夠穿透第二細(xì)胞。第二細(xì)胞可來自與第一細(xì) 胞相同的區(qū)域，或它可來自不同的區(qū)域。所述區(qū)域可包括但不限于組織和器官。第二細(xì)胞 還可位于第一細(xì)胞的近端或遠(yuǎn)端。
[0178] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_1?^可編碼可包含蛋白質(zhì)結(jié) 合配偶體的細(xì)胞穿透多肽。蛋白質(zhì)結(jié)合配偶體可包括但不限于抗體、超電荷的抗體或功能 性片段。所述多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_1?^可引入至被引入了包含蛋白質(zhì)結(jié)合配偶體的 細(xì)胞穿透多肽的細(xì)胞中。
[0179] 分泌性蛋白
[0180] 人和其它真核細(xì)胞被膜再分成許多功能不同的隔室。每個(gè)膜界定的隔室或細(xì)胞器 包含對(duì)于細(xì)胞器的功能來說必要的不同蛋白質(zhì)。細(xì)胞使用"分選信號(hào)"（所述分選信號(hào)是位 于蛋白質(zhì)內(nèi)的氨基酸基序）來使蛋白質(zhì)靶向特定細(xì)胞器。
[0181] 被稱為信號(hào)序列、信號(hào)肽或前導(dǎo)序列的一種類型的分選信號(hào)將一類蛋白質(zhì)引導(dǎo)至 被稱為內(nèi)質(zhì)網(wǎng)（ER)的細(xì)胞器。
[0182] 通過信號(hào)序列靶向ER的蛋白質(zhì)可作為分泌性蛋白被釋放至細(xì)胞外空間中。類似 地，停留在細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)也可通過將蛋白質(zhì)固持至膜的"接頭"的蛋白水解裂解而分泌 至細(xì)胞外空間中。雖然不希望受理論束縛，但本發(fā)明的分子可用于采用以上所描述的細(xì)胞 運(yùn)輸。如此，在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_RNA被提供來表達(dá)分 泌性蛋白。分泌性蛋白可從本文所描述的那些或美國(guó)專利公布20100255574中的那些分 泌，所述專利公布的內(nèi)容以引用的方式整體并入本文。
[0183] 在一個(gè)實(shí)施方案中，這些可用于制造大量有價(jià)值的人基因產(chǎn)物。
[0184] 質(zhì)膜蛋白
[0185] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_RNA被提供來表達(dá)質(zhì)膜 的蛋白質(zhì)。
[0186] 細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞骨架蛋白
[0187] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_RNA被提供來表達(dá)細(xì)胞 質(zhì)或細(xì)胞骨架蛋白。
[0188] 細(xì)胞內(nèi)膜結(jié)合蛋白
[0189] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_RNA被提供來表達(dá)細(xì)胞 內(nèi)膜結(jié)合蛋白。
[0190] 核蛋白
[0191] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_RNA被提供來表達(dá)核蛋 白。
[0192] 與人類疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)
[0193] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_RNA被提供來表達(dá)與人 類疾病相關(guān)的蛋白質(zhì)。
[0194] 其它蛋白質(zhì)
[0195] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_RNA被提供來表達(dá)具有 目前未知的治療功能的蛋白質(zhì)。
[0196] 靶向部分
[0197] 在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_RNA被提供來表達(dá)靶向 部分。這些包括蛋白質(zhì)結(jié)合配偶體或細(xì)胞表面上的受體，其用于使細(xì)胞在體內(nèi)或體外靶向 特定組織空間或與特定部分相互作用。合適的蛋白質(zhì)結(jié)合配偶體包括但不限于抗體及其功 能性片段、支架蛋白或肽。另外，多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_1?^可用于指導(dǎo)脂質(zhì)、碳水化合 物或其它生物部分或生物分子的合成和細(xì)胞外定位。
[0198] 多肽文庫(kù)
[0199] 在一個(gè)實(shí)施方案中，所述多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_1?^可用于產(chǎn)生多肽文庫(kù)。這 些文庫(kù)可由多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_1?^的群體的產(chǎn)生而產(chǎn)生，各自含有不同的結(jié)構(gòu)或 化學(xué)修飾設(shè)計(jì)。在這個(gè)實(shí)施方案中，多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體或_1?^的群體可包含多種編碼 的多肽，包括但不限于抗體或抗體片段、蛋白質(zhì)結(jié)合配偶體、支架蛋白以及本文所教導(dǎo)或本 領(lǐng)域已知的其它多肽。在優(yōu)選實(shí)施方案中，多核苷酸是本發(fā)明的初級(jí)構(gòu)建體，包括可適用于 直接引入至靶細(xì)胞或培養(yǎng)物中的_RNA，所述靶細(xì)胞或培養(yǎng)物進(jìn)而可合成編碼的多肽。
[0200] 在某些實(shí)施方案中，可產(chǎn)生各自具有不同的氨基酸修飾的蛋白質(zhì)的多種變體，并 且對(duì)其進(jìn)行測(cè)試以便確定就藥物代謝動(dòng)力學(xué)、穩(wěn)定性、生物相容性和/或生物活性或生物 物理學(xué)特性如表達(dá)水平而言最佳的變體。這種文庫(kù)可包含10、102、103、104、10 5、106、107、108、 IO9或超過10 9個(gè)可能的變體（包括但不限于，一個(gè)或多個(gè)殘基的取代、缺失和一個(gè)或多個(gè) 殘基的插入）。
[0201] 抗微生物多肽和抗病毒多肽
[0202] 本發(fā)明的多核苷酸、初級(jí)構(gòu)建體和mmRNA可設(shè)計(jì)成編碼一種或多種抗微生物肽 (AMP)或抗病毒肽（AVP)。已經(jīng)從廣泛范圍的動(dòng)物例如但不限于微生物、無脊椎動(dòng)物、植 物、兩棲動(dòng)物、鳥、魚以及哺乳動(dòng)物分離并且描述了 AMP和AVP(Wang等人，Nucleic Acids Res. 2009 ;37(Database issue) :D933_7)。例如，抗微生物多肽描述于以下各項(xiàng)中：抗微生 物肽數(shù)據(jù)庫(kù)（http://aps. unmc. edu/AP/main. php ;Wang 等人，Nucleic Acids Res. 2009 ; 37 (Database issue):D933-7) >CAMP Collection of Anti-Microbial Peptides(http://www.bicnirrh.res.in/antimicrobial/) ；Thomas 等人,Nucleic Acids Res.2010 ； 38(Database issue) :D774-80)、US 5221732、US 5447914、US 5519115、US 5607914、US 5714577、US 5734015、US 5798336、US 5821224、US 5849490、US 5856127、US 5905187、US 5994308、US 5998374、US 6107460、US 6191254、US 6211148、US 6300489、US 6329504、US 6399370、US 6476189、US 6478825、US 6492328、US 6514701、US 6573361、US 6573361、US 6576755、US 6605698、US 6624140、US 6638531、US 6642203、US 6653280、US 6696238、US 6727066、US 6730659、US 6743598、US 6743769、US 6747007、US 6790833、US 6794490、US 6818407、US 6835536、US 6835713、US 6838435、US 6872705、US 6875907、US 6884776、US 6887847、US 6906035、US 6911524、US 6936432、US 7001924、US 7071293、US 7078380、US 7091185、US 709475