耳蝸興奮性毒性引起的耳鳴的治療方法
【專利說明】耳蝸興奮性毒性引起的耳鳴的治療方法
[0001] 本申請是2005年3月29日申請的中國專利申請No. 200580009886. 5的分案申請。技術(shù)領(lǐng)域
[0002] 本發(fā)明涉及一種將藥物混合物輸送到內(nèi)耳以治療由耳蝸興奮性毒性（cochlear excitotoxicity)引起的耳鳴的方法，更具體地說，涉及將N-甲基-D-天門冬氨酸鹽 (NMDA)受體拮抗劑局部施加到內(nèi)耳以抑制出現(xiàn)急性、反復(fù)性或長期性或慢性耳蝸興奮性毒 性后的以NMDA受體為媒介的聽覺神經(jīng)的異?；钚裕龆伵d奮性由聽覺損傷、老年性耳 聾、心肌缺血、缺氧、使用一種或多種特定的耳毒性藥物治療，以及突發(fā)性耳聾等所引發(fā)。
【背景技術(shù)】
[0003] 耳鳴，即沒有外部聲音刺激下卻感覺到聲音，是很常見的內(nèi)耳紊亂。據(jù)估計，有 860萬的美國人患有慢性耳鳴，占美國人口的3%(CentersforDiseaseControland Prevention，VitalandHealthStatistics，Series10, #200,Oct1999)。根據(jù)美國言語 聽力協(xié)會（AmericanSpeech-Language-HearingAssociation，ASHA)，有一百萬甚至更多 的人認(rèn)為耳鳴妨礙了他們的正常生活（占美國人口的0.3%)。歐洲的人口研宄估計7% 至14%的人曾經(jīng)與他們的醫(yī)生談?wù)撨^耳鳴，而可能引致殘疾的耳鳴則出現(xiàn)在1%至2. 4% 的人群中（VesterargerV.，BritishMedicalJournal314(7082) :728-731(1997)) 〇
[0004] 盡管耳鳴的高發(fā)病率以及其對患者的健康和生活質(zhì)量帶來嚴(yán)重的影響，目前還沒 有真正有效的治療方法。目前的治療方法包括避免耳毒性藥物、減少對酒精、咖啡因和煙堿 的食用、緩解壓力、使用背景噪聲，或者佩戴耳鳴罩（一些耳鳴罩同時結(jié)合了助聽器）、行為 治療例如催眠、認(rèn)知療法以及生物反饋、耳鳴再訓(xùn)練療法（tinnitusretrainingtherapy， TRT)、藥理的以及其他輔助療法。
[0005] 耳鳴不是一種疾病，而是一種與各種聽覺障礙有關(guān)的普通癥狀，就像疼痛與多 種不同的疾病共存一樣。耳鳴常常與噪聲導(dǎo)致的聽覺損失、老年性耳聾以及梅尼埃病 (Menieredisease，MD)有關(guān)（Nicolas-Pueletal.，InternationalTinnitusJournal 8(1) :37-44(2002))。另外，不常見的原因包括受耳毒性藥物影響（氨基糖苷抗生素、大 劑量的袢利尿劑、非類固醇類消炎藥（NSAID)以及某些化學(xué)療法藥）、供血下降（心肌缺 血）、自體免疫處理、傳染病、傳導(dǎo)性聽覺損失、耳硬化癥、頭部損傷等。超過90%的病例中， 耳鳴與已知原因的聽覺損失有關(guān)，超過70%的耳鳴發(fā)生在內(nèi)耳中（Nicolas-Pueletal.， InternationalTinnitusJournal8(1) :37-44(2002))〇
[0006] 在過去的十年中，內(nèi)耳病理生理學(xué)研宄的主要進(jìn)展導(dǎo)致確定了內(nèi)毛細(xì)胞突觸復(fù)合 體在耳蝸興奮性毒性引起的耳鳴的發(fā)展過程中所起的主要作用，耳蝸興奮性毒性是引起 耳鳴的最常見原因。所謂興奮性毒性，最初的描述見oineyetal.，J.Neuropathol.Exp. Neuol. 31(3) :464-488(1972)，通常以谷氨酸的過量突觸釋放為特征，谷氨酸是中央神經(jīng)系 統(tǒng)以及聽覺系統(tǒng)中最重要的神經(jīng)傳遞素。興奮性毒性刺激突觸后的谷氨酸受體（離子型 和代謝型），這引發(fā)了去極化（depolarization)和神經(jīng)元興奮。但是，如果受體活性由于 谷氨酸的過多釋放而變得過興奮，如興奮性毒性的情況，目標(biāo)神經(jīng)元會被損壞，最終會死亡(PuelJ.L，ProgNeurobiol. 47 (6) :449-76(1995))〇
[0007] 耳蝸興奮性毒性要么是由暴露在過大的噪聲中，如被劇烈的或重復(fù)的噪聲損傷 (這會導(dǎo)致噪聲引起的聽力損失或耳聾）、突發(fā)耳聾或缺氧癥（心肌缺血）所引起（Pujol andPuel，Ann.NYAcad.Sci. 884 :149-254 (1999))，要么是由于使用一種或多種耳毒性藥 物治療而引起。谷氨酸的過多釋放，要么是由于進(jìn)入耳蝸的過大的聲音壓強而引起的聽覺 損傷，要么是由于流入谷氨酸調(diào)節(jié)系統(tǒng)的血液減少而引起的缺氧/心肌缺血的突發(fā)耳聾。 在所有的病例中，興奮性毒性都是以兩步機制為特征：首先，由離子型谷氨酸受體作為媒介 的I型傳導(dǎo)樹突出現(xiàn)劇烈膨脹，導(dǎo)致突觸后結(jié)構(gòu)的破壞和功能的損失。在接下來的5年中， 能觀察到突觸修復(fù)（新近突觸發(fā)生，neo-synaptogenesis)以及完全恢復(fù)的或部分恢復(fù)的 耳蝸電勢（Pueletal.，ActaOtolaryngol. 117(2) :214-218(1997))。在興奮性毒性的第 二階段，在強烈的或反復(fù)的損傷之后，興奮性毒性加強，Ca2+的進(jìn)入導(dǎo)致的一連串代謝活動， 導(dǎo)致了螺旋節(jié)神經(jīng)元（ganglionneurous)的神經(jīng)元死亡。
[0008] 耳蝸興奮性毒性可包括突出后結(jié)構(gòu)的破裂過程中的耳鳴，還包括在該破裂 不是晚期的情況下，接下來在內(nèi)毛細(xì)胞突觸復(fù)合體的新近突觸發(fā)生（Pueletal.， Audiol.Neurootol. 7 (I) :49-54 (2002))。興奮性毒性之后的功能恢復(fù)的主要任務(wù)由 NMDA受體承擔(dān)，NMDA受體與生理條件下的聽覺神經(jīng)纖維的活性無關(guān)（Pueletal.， Audiol.Neuroootol. 7 (I) :49-54 (2002))，但其在新近突觸發(fā)生的過程中被增量調(diào)節(jié) (up-regulated)(Pueletal.，C.R.Acad.Sci.III. 318(1) :67_75 (1995))，這主要是 因為它們的高 1? (Ca2+)滲透性（SattlerandTymianski，Mol.Neurobiol. 24(1-3): 107-129(2001))。正如在動物模型的耳蝸突觸間隙修復(fù)機制中所表明的，通過局部 使用NMDA受體拮抗劑D-AP5 (D-2-氨基-5-磷酸基戊酸）來阻卻NMDA受體，延遲了 聽覺樹突（dendrite)的功能性恢復(fù)和再生（661^3丨8〇'41(1;[116七31.，1111:.]\〇6￥. Neurosci. 15(4-5) :619-629(1997))。因此可以概括出，谷氨酸以其作為快速興奮的神經(jīng)傳 遞素的功能，通過NMDA受體的活化作用承擔(dān)親神經(jīng)的角色。
[0009] 據(jù)推測，耳蝸興奮性毒性引起的NMDA受體nRNA的增量調(diào)節(jié)與聽覺神經(jīng)纖維的異 常的自發(fā)"沖動"（firing)有關(guān)，這種"沖動"可理解為耳鳴（?1^1^.的&1.，411乜〇1. Neurootol. 7(1) :49-54(2002))。在新近突觸產(chǎn)生（neo-synaptogenesis)的過程中，傳入 樹突（afferentdendrites)處于臨界狀態(tài)，從而容易被NMDA受體的活化而導(dǎo)致興奮。要避 免這種傳入樹突興奮，以及因為不完整的新近突觸產(chǎn)生而無限地持續(xù)下去所產(chǎn)生的耳鳴， 應(yīng)當(dāng)尋找一種特別拮抗NMDA受體的治療方法。如上所述，將NMDA受體拮抗劑局部施用到 耳蝸，能防止聽覺損傷或心肌缺血引起的興奮性毒性（Duanetal.，Proc.Nati.Acad.Sci. USA97(13) :7595-7602(2000) ；Puel,Prog.Neuobiol. 47 (6) :449-476(1995)；Puelet al.，J.Comp.Neurol. 341 (2) :241-256(1994))。盡管也可以采用 2-氨基-3-(3-羥基-5-甲 基-4-異唑丙酸）丙酸酯（AMPA)或者克他命受體拮抗劑來阻卻興奮性毒性，因為傳入樹突 的急性膨脹主要通過它們（這兩種受體）來進(jìn)行的（Pueletal.，J.Comp.Neurol. 341(2): 241-256(1994))，但是這種方法對聽覺功能有潛在的重大負(fù)面影響。因為內(nèi)毛細(xì)胞和聽 覺神經(jīng)纖維之間的興奮性神經(jīng)傳導(dǎo)的主要媒介是AMPA偏好受體（preferringreceptor) (Rueletal.，J.Physiol.London518:667-680(1999))，這種阻卻不僅抑制不想得到的聽 覺神經(jīng)的過刺激，也抑制了想得到的正常興奮，從而導(dǎo)致聽力損失。
[0010] 目前，耳鳴發(fā)生過程中NMDA受體的這種推論僅僅被使用水楊酸而致耳鳴的 行為模型在體內(nèi)進(jìn)行了測試和演示（Guittonetal.，J.ofNeuroscience23(9): 3944-3952 (2003))。這種行為模式用于測量耳鳴，因為耳鳴是不能直接觀察的。這種行為模 式基于主動回避模式（activeavoidanceparadigm):動物聽到特定的聲音時，會條件性地 跳到支桿上。即使不存在外部聲音的情況下，施用水楊酸也導(dǎo)致跳躍次數(shù)的顯著增加，這表 明（動物）感覺到了耳鳴。通過圓窗膜將NMDA拮抗劑MK-801、7-CK(7-氯化犬尿氨酸胸） 和Gacyclidine(-種N-甲基D-天門冬氨酸受體拮抗劑）施用到動物的耳蝸后，假陽性反 應(yīng)的次數(shù)顯著下降，這表明耳鳴得到了抑制。
[0011] 雖然這些結(jié)果第一次證實了NMDA受體在發(fā)生耳鳴時的推測性牽連，但是這些結(jié) 果不能確定地推廣到所有類型的內(nèi)耳紊亂，因為水楊酸致耳鳴是非常特殊的耳鳴形式。 一個世紀(jì)前，就已經(jīng)知道，大量服用阿司匹林（aspilin)的活性組分水楊酸會導(dǎo)致耳鳴 (CazalsY.，Prog.Neurobiol. 62:583-631(2000))。水楊酸可能會引起耳鳴的感覺，與耳 蝸興奮性毒性或者其他不同病因一樣，這種耳鳴通常是可逆的，和基于特定的分子機制。除 了水楊酸外，米用甲滅酸（Mefenamate)，一種非常有名的環(huán)氧化酶（cyclooxygenase，C0X) 抑制劑，也會增加假陽性反應(yīng)的次數(shù)，這表明水楊酸致耳鳴與抑制環(huán)氧化酶的途徑有關(guān)。雖 然耳蝸興奮性毒性引起的耳鳴是谷氨酸層疊的結(jié)果，以導(dǎo)致NMDA受體的nRNA的增量調(diào)節(jié) 過程為媒介；但是水楊酸致耳鳴以花生四稀酸（arachidonicacid)代謝的變化為媒介（例 如，見CazalsY.，Prog.Neurobiol. 62 :583-631 (2000))。已經(jīng)表明，水楊酸抑制環(huán)氧化酶的 活性（例如，見VaneandBotting，Am.J.Med.l04:2S_8S(1998))。有證據(jù)表明花生四稀酸 加強了NMDA受體的電流（Milleretal.,Nature355:722-725(1992);Horimotoetal.， NeuroReport7:2463-2467(1996)；CasadoandAscher,J.Physiol. 513 :317-330(1998)) 〇 電生理學(xué)研宄已經(jīng)表明花生四烯酸在多種系統(tǒng)中增加了NMDA受體開放通道的概率，包 括小腦顆粒細(xì)胞、解離的椎體細(xì)胞/皮層神經(jīng)元以及腦片（hippocampalslice)(例 如，見Milleretal. ，Nature355 :722-725(1992);Horimotoetal. ，NeuroReport: 2463-2467(1996);YamakuraandShimoji，Prog.Neurobiol. 59:279-298(1998))。與興奮 性毒性引起的耳鳴不同，水楊酸致耳鳴中，內(nèi)毛細(xì)胞突觸復(fù)合體尤其是突觸末端沒有形態(tài) 上的毀壞。
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