松花粉總皂苷的提取工藝及測(cè)定方法
【專利說明】
[0001]技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及松花粉提取技術(shù)領(lǐng)域，具體地講是松花粉總皂苷的提取工藝及測(cè)定方法。
[0002]【背景技術(shù)】:
松花粉又稱松黃、松花，松花粉營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)豐富，并且含有多種功能性物質(zhì)，現(xiàn)代的一些藥理試驗(yàn)已經(jīng)證明松花粉具有抗疲勞、提高免疫力、抗衰老、抗腫瘤、抗氧化等活性，具有很高的保健價(jià)值。在國(guó)內(nèi)外已被廣泛地應(yīng)用于保健品、藥品、化妝品和飼料添加劑等領(lǐng)域。
[0003]松花粉自古就是食療中的珍品，因?yàn)樗硕喾N營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、生物活性物質(zhì)。松花粉對(duì)人體具有很好的調(diào)解、修復(fù)的作用，對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)、循環(huán)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)具有非常好的調(diào)整功能，有很高的保健價(jià)值，。
[0004]目前對(duì)于松花粉的生理功能的研宄主要有以下幾個(gè)方面:抗疲勞、提高免疫力、抗衰老、降血糖、護(hù)肝、通便、抗氧化等作用。
[0005]松花粉營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、活性物質(zhì)含量豐富，目前有關(guān)松花粉化學(xué)成分的研宄，主要集中在多肽、多糖、黃酮等，而關(guān)于松花粉皂苷的研宄，尤其是作為保健食品原料的松花粉中皂苷的含量以及主要皂苷成分及其結(jié)構(gòu)的研宄尚未開展。研宄表明，皂苷作為重要的生物活性物質(zhì)，具有廣泛的藥理作用和生理生化作用，如抗癌活性，抗氧化活性，改善心腦血管供血不足，增加機(jī)體免疫力，抗菌消炎、抗病毒的作用，調(diào)節(jié)機(jī)體的代謝作用等。皂苷生理功能，具有抗癌活性、抗氧化活性、抗血脂、抗糖尿病及對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有“神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子樣”的作用。因此皂苷是非常重要的功能性因子在保健品中起著極其重要的作用。研宄松花粉皂苷對(duì)于進(jìn)一步深化和了解松花粉的生理生化和保健功能具有重要的意義。
[0006]目前皂苷的分離方法，主要有水提法、有機(jī)溶劑(非極性)提取法、乙醇提取法、微波提取法、超臨界萃取法。水提法具有成本低、簡(jiǎn)單安全的特點(diǎn)，但提取效率比較低；有機(jī)溶劑提取法雖然其提取效果有一定優(yōu)勢(shì)，但提取物質(zhì)太雜，難于獲得純?cè)碥?；利用乙醇與水特殊互溶性，采用加熱法進(jìn)行提取，雖因需要加熱相對(duì)于水提取和有機(jī)溶劑提取對(duì)設(shè)備要求高一些，但時(shí)間相對(duì)縮短，提取率及效果較好，后處理相對(duì)容易，其設(shè)備的工業(yè)化應(yīng)用程度較高，可操作性強(qiáng)，應(yīng)用前景看好；微波提取法和超臨界萃取法優(yōu)點(diǎn)是萃取能力強(qiáng)，提取率高，生產(chǎn)周期短，有效成分不被破壞，沒有溶劑殘留，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定等，但是實(shí)際應(yīng)用中，特別是工業(yè)化生產(chǎn)中由于設(shè)備制造技術(shù)和成本的局限性，工業(yè)化受到很大局限性，提取效果達(dá)不到預(yù)期，至今沒有在工業(yè)生產(chǎn)中得到規(guī)?；膽?yīng)用。
[0007]
【發(fā)明內(nèi)容】
:
本發(fā)明的目的是克服上述已有技術(shù)的不足，而提供一種松花粉總皂苷的提取工藝。
[0008]本發(fā)明的另一目的提供提取松花粉總皂苷的測(cè)定方法，
本發(fā)明主要解決現(xiàn)有的松花粉皂苷未展開研宄的問題。
[0009]本發(fā)明的技術(shù)方案是:松花粉總皂苷的提取工藝，其特殊之處在于，包括如下工藝步驟:
a脫脂，取經(jīng)破壁的干燥松花粉，按松花粉質(zhì)量和石油醚體積1:10的固液比脫脂2次，每次2-3h，脫脂后的松花粉烘干得脫脂松花粉； 提取，脫脂松花粉用60%乙醇提取，脫脂松花粉質(zhì)量和乙醇體積的料液比為1:20-25，溫度70°C，提取120-150min，重復(fù)提取兩次；
b提取液分別抽濾后，合并濾液，減壓濃縮，回收乙醇，至無醇味；
c濃縮物用蒸餾水溶解后，將溶解液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用正丁醇反復(fù)萃取至無色，溶解液與正丁醇的體積比為1:10-30，合并正丁醇，減壓濃縮，回收正丁醇，冷凍干燥，得松花粉總皂苷產(chǎn)品。
[0010]本發(fā)明的松花粉總皂苷的測(cè)定方法，其特殊之處在于，包括如下工藝步驟:
1)精確稱取脫脂松花粉1.0OOg，采用權(quán)利要求1的總皂苷提取工藝獲得凍干后的松花粉總皂苷產(chǎn)品，將得到的松花粉總皂苷產(chǎn)品用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移到25 mL容量瓶中，甲醇定容得樣品溶液；
2)對(duì)照品溶液的制備:準(zhǔn)確稱取干燥的人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品6mg,以甲醇為溶劑，準(zhǔn)確定容到5 mL，搖勻得到人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品的儲(chǔ)備液；再精確移取儲(chǔ)備液2 mL定容至10 mL,甲醇定容搖勻，得到濃度為0.24 mg/mL的人參皂苷Re對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液；
3)檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇:人參皂苷Re對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液在400nm-600 nm范圍內(nèi)進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，人參皂苷Re對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液和樣品溶液顯色后的吸收光譜基本一致，在560nm處有最大吸收，選取人身皂苷Re為對(duì)照品，選用560nm為最大吸收波長(zhǎng)；
4)標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備:分別精確量取人參皂苷Re對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液0.1 mL、0.2 mL、0.3mL、0.4 mL、0.5 mL、0.6 mL、0.7 mL、0.8 mL，水浴蒸干，分別加入5%香草醛醋酸溶液0.2 mL和高氯酸0.8 mL，60°C水浴加熱15 min，冰水冷卻10 min，加冰醋酸5 mL，搖勾，隨行試劑做空白項(xiàng)，然后用分光光度計(jì)在560nm波長(zhǎng)處測(cè)吸光度值，以體積為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線；得回歸線方程y = 0.8878x-0.0102，R2 = 0.9998 ；
5)穩(wěn)定性試驗(yàn):精確量取樣品溶液0.3 mL，每隔10 min中測(cè)量一次吸光度值，計(jì)算RSD值為0.73% ；
6)重復(fù)性試驗(yàn):精確稱取脫脂松花粉6份，每份1.000 g，用權(quán)利要求1的總皂苷提取工藝獲得凍干后的松花粉總皂苷產(chǎn)品，將得到的松花粉總皂苷產(chǎn)品用甲醇溶解，轉(zhuǎn)移到25mL容量瓶中，甲醇定容得樣品溶液；然后進(jìn)行吸光度的測(cè)定，計(jì)算RSD值為0.89% ；
7)精密度試驗(yàn):精確量取0.3 mL人參皂苷Re對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下的方法測(cè)量吸光度；計(jì)算RSD值為0.58% ；
8)加樣回收率試驗(yàn):分別稱取樣品溶液，加入人參皂苷Re對(duì)照品標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備下的方法進(jìn)行測(cè)量吸光度和濃度，計(jì)算加樣回收率為95%，RSD值為1.6% ；
9)樣品的測(cè)定:吸取0.3 mL樣品溶液，加入試管中，蒸干溶劑，用標(biāo)準(zhǔn)曲線制備的方法進(jìn)行測(cè)量；測(cè)量吸光度，依據(jù)人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，計(jì)算松花粉中總皂苷含量，計(jì)算提取率。
[0011]本發(fā)明所述的一種松花粉總皂苷的提取工藝及測(cè)定方法與已有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著進(jìn)步，1、采用乙醇提取的方法提取松花粉總皂苷，總皂苷的提取率高，原料利用率高，后處理簡(jiǎn)便，且含有乙醇的提取液不容易發(fā)生霉變，提取液乙醇易于回收，重復(fù)使用，從而降低成本，減少排放，松花粉總皂苷提取率高達(dá)原料重量的0.93% ;2、采用正丁醇萃取松花粉皂苷，萃取效果理想，即不僅將總皂苷全部萃取，且很好的除去了雜質(zhì)。有利于后續(xù)進(jìn)一步分離純化；3、測(cè)定松花粉總皂苷含量的測(cè)定方法簡(jiǎn)單易操作，精確度高，數(shù)據(jù)可靠、重復(fù)性好。
[0012]【具體實(shí)施方式】:
為了更好地理解與實(shí)施，下面結(jié)合實(shí)施例詳細(xì)說明本發(fā)明；所舉實(shí)施例僅用于解釋本發(fā)明，并非用于限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0013]采用煙臺(tái)新時(shí)代健康產(chǎn)業(yè)有限公司提供的破壁松花粉，上海融禾醫(yī)藥科技有限公司提供的人參皂苷Re標(biāo)準(zhǔn)品(131204)。
[0014]實(shí)施例1，松花粉總皂苷提取工藝如下:準(zhǔn)確稱量50.0Og破壁的干燥松花粉，按松花粉質(zhì)量和石油醚體積I: 10的固液比脫脂2次，每次2.5h,脫脂后的松花粉烘干得脫脂松花粉；脫脂松花粉，用60%乙醇、料液比(固液比)按1:22.5、溫度70°C加熱提取135min，反復(fù)提取兩次；分別抽濾后，合并濾液，減壓濃縮到無醇味(回收乙醇)，用蒸餾水溶解，將溶解液轉(zhuǎn)移到分液漏斗中，用正丁醇反復(fù)萃取至無色，溶解液與正丁醇體的積比為1:25，合并正丁醇，減壓濃縮至干(回收正丁醇)，冷凍干燥，得松花粉總皂苷產(chǎn)品。
[0015]實(shí)施例2，松花粉總皂苷提取工藝如下:準(zhǔn)確稱量50