一種人參籽提取物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體的說(shuō)是涉及一種人參籽提取物及其制備方法和應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] 皮膚老化是由自然因素或非自然因素造成的皮膚衰老現(xiàn)象。人出生后皮膚組織日 益發(fā)達(dá)，功能逐漸活躍，當(dāng)?shù)竭_(dá)某種年齡就會(huì)開(kāi)始退化，這種退化往往在人們不知不覺(jué)中慢 慢進(jìn)行。引起皮膚老化的原因有很多，如光老化和外界因素造成的膠原蛋白和彈力蛋白的 減少、細(xì)胞過(guò)早消耗完分裂次數(shù)，提前進(jìn)入程序衰老等。
[0003] 細(xì)胞增殖是生物體生長(zhǎng)、發(fā)育、繁殖和遺傳的基礎(chǔ)，細(xì)胞以分裂的方式進(jìn)行增殖。 Hayf lick研究發(fā)現(xiàn)，正常細(xì)胞有一定的壽命，它們的增殖能力也不是無(wú)限的，而是有一定的 界限，這就是有名的Hayflick界限理論。細(xì)胞增殖越快，細(xì)胞生命就越短。減緩了細(xì)胞增 殖就是延長(zhǎng)了細(xì)胞的生命，延緩了老化的進(jìn)程，達(dá)到抗老化作用。減緩細(xì)胞的增殖，讓皮膚 細(xì)胞暫時(shí)處于休眠狀態(tài)，避免過(guò)早讓皮膚細(xì)胞消耗完增殖能力，保留肌膚年輕的資本，是減 緩肌膚老化的合理方法之一。
[0004] 人參籽，又稱(chēng)為人參子，為五加科人參屬植物人參Panax ginseng C. A. Mey.的果 實(shí)，其是內(nèi)含一粒種子的果核，常用于體虛乏力，頭昏失眠，胸悶氣短。人參籽中的總皂苷含 量約為1-2%，人參籽中還含有高達(dá)40%的不飽和脂肪酸，30%的蛋白質(zhì)。此外，人參籽中 還含有11種微量元素，人參多糖，氨基酸，多肽等成分，對(duì)生物體內(nèi)的代謝過(guò)程起著很大作 用。到目前為止，還未發(fā)現(xiàn)對(duì)人參籽對(duì)于皮膚細(xì)胞增殖的抑制作用的研究報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種人參籽提取物及其制備方法，使所述人參 籽提取物具有顯著的細(xì)胞增殖抑制活性，能夠應(yīng)用于細(xì)胞增殖抑制中以及制備細(xì)胞增殖抑 制劑，具有成為抗皮膚老化產(chǎn)品的潛在優(yōu)勢(shì)。
[0006] 在中藥領(lǐng)域，人參籽常用于體虛乏力，頭昏失眠，胸悶氣短等癥，而本發(fā)明經(jīng)過(guò)創(chuàng) 造性研究發(fā)現(xiàn)，人參籽經(jīng)過(guò)特定方法提取的提取物具有較好地細(xì)胞增殖抑制活性，能夠用 于細(xì)胞增殖抑制劑的制備中。
[0007] 本發(fā)明所述人參籽提取物的制備方法，包括：
[0008] 步驟1、人參軒加水提取，獲得人參軒提取液；
[0009] 步驟2、人參籽提取液濃縮，上樣至大孔吸附樹(shù)脂，依次用去離子水、由低到高的梯 度濃度乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，分別收集其中的去離子水、30v/v % -95v/v %濃度乙醇洗脫 的洗脫液，減壓脫除乙醇和水，獲得人參籽提取物。
[0010] 本發(fā)明所述人參籽提取物可以是來(lái)自30v/v% -95v/v%濃度中各單一濃度乙醇 洗脫的洗脫液，也可以是它們的混合物。
[0011] 作為優(yōu)選，所述制備方法包括：
[0012] 步驟1、人參籽加水提取，獲得人參籽提取液；
[0013] 步驟2、人參籽提取液濃縮，上樣至大孔吸附樹(shù)脂，依次用去離子水、由低到高的梯 度濃度乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，分別收集其中的去離子水、30v/v% (也可稱(chēng)為30v/v%乙 醇洗脫部位，以下類(lèi)同）、7〇ν/ν%、95ν/ν%濃度乙醇洗脫的洗脫液，減壓脫除乙醇和水，獲 得人參籽提取物。
[0014] 作為優(yōu)選，步驟1為：
[0015] 人參籽粉碎，按lg: 10mL比例加入去離子水，于水浴鍋中80-90°C微沸，提取兩次， 每次1小時(shí)，離心，上清液過(guò)濾，收集所有濾液，獲得人參籽提取液。
[0016] 作為優(yōu)選，所述步驟2由低到高的梯度濃度乙醇溶液為30v/v% -95v/v%濃度的 梯度濃度乙醇溶液。在本發(fā)明的一些【具體實(shí)施方式】中，所述步驟2由低到高的梯度濃度乙 醇溶液為由30v/v%乙醇溶液、70v/v%乙醇溶液和95v/v%乙醇溶液組成的梯度濃度乙醇 溶液。
[0017] 作為優(yōu)選，所述大孔吸附樹(shù)脂為HP-20型大孔吸附樹(shù)脂。
[0018] 同時(shí)，本發(fā)明還提供由本發(fā)明所述制備方法提取的人參籽提取物，優(yōu)選地，所述人 參籽提取物總黃酮含量為〇. 14-1. 91 %。
[0019] 將本發(fā)明制備方法獲得人參籽提取物進(jìn)行細(xì)胞增殖抑制活性的檢測(cè)，結(jié)果顯示所 述人參籽提取物能夠顯著抑制皮膚成纖維細(xì)胞增殖。據(jù)此，本發(fā)明提供了人參籽提取物在 抑制皮膚細(xì)胞增殖以及在制備皮膚細(xì)胞增殖抑制劑中的應(yīng)用。作為優(yōu)選，所述皮膚細(xì)胞為 皮膚成纖維細(xì)胞。
[0020] 由以上技術(shù)方案可知，本發(fā)明以人參籽為原材料，經(jīng)過(guò)特殊方法提取獲得一種人 參籽提取物，所提取的人參籽提取物具有顯著的皮膚細(xì)胞增殖抑制活性，能夠用于皮膚細(xì) 胞增殖抑制劑的制備中，具有成為抗皮膚老化產(chǎn)品的潛在優(yōu)勢(shì)。
【附圖說(shuō)明】
[0021] 圖1所示為人參籽提取物對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞增殖的抑制活性柱形圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 本發(fā)明實(shí)施例公開(kāi)了一種人參籽提取物及其制備方法和應(yīng)用。本領(lǐng)域技術(shù)人員可 以借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類(lèi)似的替換和改動(dòng)對(duì)本 領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的應(yīng)用已經(jīng)通過(guò)較 佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述的 產(chǎn)品及方法進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0023] 為了進(jìn)一步理解本發(fā)明，下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明提供的一種人參籽提取物及其 制備方法和應(yīng)用進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。
[0024] 實(shí)施例1 :本發(fā)明所述人參籽提取物的制備
[0025] 將50g市售的人參籽粉碎，按1:10 (g/ml)加入去離子水，于水浴鍋中80-90°C微 沸，提取兩次，每次1小時(shí)，離心，上清液過(guò)濾，收集所有濾液，減壓濃縮，用HP-20大孔樹(shù)脂 層析吸附，依次用去離子水、30%乙醇洗脫、70%乙醇洗脫和95%乙醇洗脫，分別收集去離 子水、30 %、70 %和95 %乙醇洗脫液減壓蒸除溶劑依次得到人參籽提取物A、人參籽提取物 B、人參籽提取物C和人參籽提取物D。
[0026] 實(shí)施例2 :人參籽提取物中總黃酮含量測(cè)定
[0027] 以實(shí)施例1人參籽提取物為檢測(cè)對(duì)象，同時(shí)加入人參籽水提物、以及實(shí)施例1中 水洗脫部位的人參籽提取物，按照中華人民共和國(guó)藥典（2010版）方法，以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品， 測(cè)定提取物中總黃酮含量。測(cè)定步驟為：1)標(biāo)準(zhǔn)曲線制作：精密量取對(duì)照品溶液lml、2ml、 3ml、4ml、5ml、6ml，分別置25ml量瓶中，各加30%乙醇至6. 0ml，加5%亞硝酸鈉溶液lml。 混勻，放置6分鐘，再加10 %硝酸鋁溶液lml，搖勻，放置6分鐘。加氫氧化鈉試液10ml，再 加30%乙醇至刻度，搖勻，放置15分鐘，以相應(yīng)試劑為空白，用紫外-可見(jiàn)分光光度法，在 510nm的波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。2)取一定 量樣品置于25ml容量瓶中，其它按照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備步驟，自"加亞硝酸鈉溶液lml"起，依法 測(cè)定吸光度，同時(shí)取供試品溶液3ml，除不加氫氧化鈉試液外，其余同上操作，作為空白，計(jì) 算提取物中總黃酮含量（以蘆丁計(jì)）。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0028] 表1人參籽提取物中總黃酮含量
[0030] 實(shí)施例3 :細(xì)胞增殖抑制活性的檢測(cè)
[0031] 按照實(shí)施例1制備的人參籽提取物，完全溶于去離子水，分別配制成0. 8 μ g/ml~ 100 μ g/ml待測(cè)溶液，用于測(cè)定對(duì)細(xì)胞增殖的抑制活性。測(cè)定步驟為：首先將人成纖維細(xì)胞 種入96孔板中（2000細(xì)胞/孔，200 μ L);培養(yǎng)72小時(shí)后移除培養(yǎng)基，加入待測(cè)溶液10 μ L， 培養(yǎng)24小時(shí)后，采用ΜΤΤ法通過(guò)測(cè)定細(xì)胞相對(duì)數(shù)量從而計(jì)算出細(xì)胞的增殖率。ΜΤΤ法的檢 測(cè)原理為活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性ΜΤΤ還原為水不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶 甲瓚并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。二甲基亞砜能溶解細(xì)胞中的甲瓚，用微孔分光光 度計(jì)測(cè)定550nm波長(zhǎng)吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定細(xì)胞數(shù)范圍內(nèi)，ΜΤΤ結(jié)晶形成 的量與活細(xì)胞數(shù)成正比，結(jié)果見(jiàn)圖1。
[0032] 由圖1可知，本發(fā)明人參籽提取物A-D均具有對(duì)皮膚成纖維細(xì)胞增殖的抑制作用， 其中人參籽提取物B和人參籽提取物C在0. 8 μ g/ml~100 μ g/ml的濃度范圍內(nèi)，隨著濃 度的增大，增殖抑制作用增強(qiáng)。
[0033] 以上實(shí)施例的說(shuō)明只是用于幫助理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì) 于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行 若干改進(jìn)和修飾，這些改進(jìn)和修飾也落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種人參籽提取物的制備方法，其特征在于，包括： 步驟1、人參籽加水提取，獲得人參籽提取液； 步驟2、人參籽提取液濃縮，上樣至大孔吸附樹(shù)脂，依次用去離子水、由低到高的梯度濃 度乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，分別收集其中的去離子水、30v/v % -95v/v %濃度乙醇洗脫的洗 脫液，減壓脫除乙醇和水，獲得人參籽提取物。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，包括： 步驟1、人參籽加水提取，獲得人參籽提取液； 步驟2、人參籽提取液濃縮，上樣至大孔吸附樹(shù)脂，依次用去離子水、由低到高的梯度濃 度乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，分別收集其中的去離子水、30v/v %、70v/v %、95v/v %濃度乙醇 洗脫的洗脫液，減壓脫除乙醇和水，獲得人參籽提取物。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，步驟1為： 人參籽粉碎，按lg: IOmL比例加入去離子水，于水浴鍋中80-90°C微沸，提取兩次，每次 1小時(shí)，離心，上清液過(guò)濾，收集所有濾液，獲得人參籽提取液。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，所述步驟2由低到高的梯度濃度乙醇溶 液為30v/v% -95v/v%濃度的梯度濃度乙醇溶液。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述制備方法，其特征在于，所述步驟2由低到高的梯度濃度乙醇 溶液為由30v/v %乙醇溶液、70v/v %乙醇溶液和95v/v %乙醇溶液組成的梯度濃度乙醇溶 液。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述制備方法，其特征在于，所述大孔吸附樹(shù)脂為HP-20型大孔吸附 樹(shù)脂。7. 權(quán)利要求1-6任意一項(xiàng)所述制備方法制備的人參籽提取物。8. 根據(jù)權(quán)利要求7所述人參籽提取物，其特征在于，總黃酮含量為0. 14-1. 91 %。9. 權(quán)利要求7所述人參籽提取物在抑制皮膚細(xì)胞增殖以及在制備皮膚細(xì)胞增殖抑制 劑中的應(yīng)用。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述應(yīng)用，其特征在于，所述皮膚細(xì)胞為皮膚成纖維細(xì)胞。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及中藥技術(shù)領(lǐng)域，公開(kāi)了一種人參籽提取物及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明所述人參籽提取物的制備方法將人參籽加水提取，所得人參籽提取液濃縮，上樣至大孔吸附樹(shù)脂，依次用去離子水、由低到高的梯度濃度乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，分別收集其中的去離子水、30v/v％-95v/v％濃度乙醇洗脫的洗脫液，減壓脫除乙醇和水，獲得人參籽提取物。本發(fā)明以人參籽為原材料，經(jīng)過(guò)特殊方法提取獲得一種人參籽提取物，所提取的人參籽提取物具有顯著的皮膚細(xì)胞增殖抑制活性，能夠用于皮膚細(xì)胞增殖抑制劑的制備中，具有成為抗皮膚老化產(chǎn)品的潛在優(yōu)勢(shì)。
【IPC分類(lèi)】A61P17/00, A61P17/18, A61K36/258
【公開(kāi)號(hào)】CN105232600
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510690663
【發(fā)明人】方兆華, 宋肖潔, 沈忠海, 陸政政
【申請(qǐng)人】伽藍(lán)（集團(tuán)）股份有限公司
【公開(kāi)日】2016年1月13日
【申請(qǐng)日】2015年10月22日