一種從人參花中提取分離人參皂苷混合物的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及從人參花中提取分離各種不同人參皂苷混合物的方法，屬于天然藥物化學(xué)研究領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002]人參花是人參(Panax ginseng C.A.Mey.)含荀待放的花，6_7月采收，烘干，干燥的人參花通常為灰綠色；具有補(bǔ)氣強(qiáng)身，延緩衰老等功能；用于頭昏乏力，胸悶氣短。
[0003]到目前為止，人們從人參花中分離得到多種人參皂苷，其中主要包括人參皂苷Rbn Rb2, Rb3, Re、Rd、Re、Rf、Rgn Ro, Rhn Rg2等。此外，近年來還發(fā)現(xiàn)多個(gè)微量新皂苷類化合物，如人參花皂苷 A、B、C、D、E、F[3]、G、H、1、J、K，Ka、Kb、Kc、La、Lb, M、N、0、P 等。
[0004]不同的人參皂苷單體具有不同的生物活性，比如人參皂苷Rg1能使中樞神經(jīng)亢進(jìn)，對(duì)精力不足、易感疲勞的人有效果，具有滋養(yǎng)強(qiáng)壯、消除疲勞、活化細(xì)胞、使中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮的作用。而人參皂苷Rb1對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有抑制作用，能使興奮的神經(jīng)系統(tǒng)鎮(zhèn)靜下來，安定精神、消除焦慮、緩解精神壓力，有改善失眠和神經(jīng)衰弱，使中樞神經(jīng)系統(tǒng)安定的作用。不同的人參皂苷組成的人參皂苷混合物也具有不同的生物活性，常見的由人參皂苷Rbp Rb2,Rc、Rd、Rg3等組成的二醇組皂苷具有中樞抑制作用和神經(jīng)保護(hù)作用，由人參皂苷Re、Rgl、Rg2等組成的三醇組皂苷具有中樞興奮作用。因此，設(shè)法從人參花中獲得多種具有不同生物活性的有效組分組合物，有利于開發(fā)出具有不同生物活性或更強(qiáng)生物活性的有效部位，促進(jìn)人參皂苷類藥物創(chuàng)新。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供一種從人參花中提取分離各種不同人參皂苷混合物的新方法，即從人參花中提取分離主要由人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Re組成的人參皂苷混合物；主要由人參皂苷Rh1、人參皂苷F3、人參皂苷F5組成的人參皂苷混合物；主要由人參皂-F1、人參皂苷Rd組成的人參皂苷混合物。具體是將人參花用甲醇溶液提取，提取液回收濃縮后依次用環(huán)己烷、乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯萃取液即得人參花總皂苷。將人參花總皂苷上MCI GEL柱，先用水洗脫，后改用含20?30%有機(jī)溶劑的水溶液洗脫，獲得主要由人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Re組成的人參皂苷混合物；將人參花總皂苷上MCI GEL柱，先用水洗脫，接著用含20?30%有機(jī)溶劑的水溶液將人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2、人參皂苷Re洗脫完全后，改用含40?50 %有機(jī)溶劑的水溶液洗脫，獲得主要由人參皂苷Rh1、人參皂苷F3、人參皂苷？5組成的人參皂苷混合物；將人參花總皂苷上MCI GEL柱，先用水洗脫，接著用含40?50%有機(jī)溶劑的水溶液將人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷他2、人參皂苷Re、人參皂苷Rh1、人參皂苷F3、人參皂苷F5洗脫完全后，改用含60?70 %有機(jī)溶劑的水溶液洗脫，獲得主要由人參皂苷F1、人參皂苷Rd組成的人參皂苷混合物。
[0006]獲得的人參皂苷混合物可用于制備藥物組合物、保健品及人參皂苷單體。具體如下。
[0007]本發(fā)明獲得人參花總皂苷的方法為:將人參花粉碎后加甲醇溶液進(jìn)行加熱回流提取，提取液濃縮回收溶劑后，依次用環(huán)己烷、乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯萃取液，回收濃縮后即得人參花總皂苷。將獲得的人參花總皂苷再通過如下創(chuàng)新的柱層析方法，最終獲得三種新的人參皂苷混合物，具體如下。
[0008]將上述制備獲得的人參花總皂苷上MCI GEL柱，先用水沖洗，這時(shí)洗脫下來的主要為糖、無機(jī)鹽等非皂苷類雜質(zhì)，待水洗脫完全后，改用含20?30%甲醇或乙醇或丙酮的水溶液洗脫，這時(shí)洗脫下來的是人參皂苷Rg1、人參皂苷Re、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2和人參皂苷Re，回收溶劑，獲得主要由人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2和人參皂苷Re組成的人參皂苷混合物；然后用含40?50%甲醇或乙醇或丙酮的水溶液洗脫，這時(shí)洗脫下來的是人參皂苷Rh1、人參皂苷F3和人參皂苷F 5，回收溶劑，獲得主要由人參皂苷Rh1、人參皂苷F3和人參皂苷Fgl成的人參皂苷混合物；最后用含60?70%甲醇或乙醇或丙酮的水溶液洗脫，這時(shí)洗脫下來的是人參皂苷Rd和人參皂苷F1，回收溶劑，獲得主要由人參皂苷F1和人參皂苷Rd組成的人參皂苷混合物。
[0009]上述所用的提取溶劑甲醇的濃度應(yīng)在98% -100% ；MCI GEL柱層析中用到的甲醇或乙醇或丙酮水溶液洗脫液的濃度應(yīng)分別在20% -30%,40% -50%,60% -70%之間為宜；MCI GEL柱層析填料最好為F型，粒度在75-150U為宜。
[0010]發(fā)明有益效果
[0011]1、本發(fā)明所選用的原料人參花甲醇提取物來源于純天然植物人參的花，從中分離出三種新的不同的人參皂苷混合物，尤其是含有人參皂苷匕、人參皂苷F5、人參皂苷F1的人參皂苷混合物，有利于人參花的深入開發(fā)研究及創(chuàng)新藥物開發(fā)。
[0012]2、本發(fā)明的工藝方法易于操作，步驟簡單，可適用于工業(yè)化生產(chǎn)，用于開發(fā)人參皂苷藥物組合物或人參皂苷單體。
【具體實(shí)施方式】
[0013]下述非限制性實(shí)施例可以使本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明，但不以任何方式限制本發(fā)明。下述實(shí)施例中所用試劑，如無特殊說明，均為商業(yè)途徑獲得；下述實(shí)施例中所用試驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的常規(guī)實(shí)驗(yàn)方法。
[0014]實(shí)施例1
[0015]人參花4公斤，用甲醇溶液加熱回流提取3次，每次甲醇用量為人參花重量的4倍，提取時(shí)間均為2小時(shí)，合并提取液，回收濃縮溶劑，將得到的稠膏依次用環(huán)己烷、乙酸乙酯萃取。合并乙酸乙酯萃取液，回收濃縮溶劑，即得到人參花總皂苷355克。
[0016]取人參花總皂苷10克用水溶解作為待純化樣品，再稱取MCI GEL填料(F型，粒度75-150u)30克用水溶解作為分離膠并均勻裝至玻璃柱內(nèi)，將樣品加至玻璃柱中分離膠的上層進(jìn)行MCI GEL柱層析。先用水洗脫，將糖、無機(jī)鹽等洗脫完全，改用含20%甲醇的水溶液洗脫，回收溶劑，得主要含人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb#人參皂苷Re組成的人參皂苷混合物5.8克。經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中含人參皂苷Re 38.2%、人參皂苷Rg1 13.6%、人參皂苷Rbi 10.2%、人參皂苷Rb28.5%和人參皂苷Re 7.2%;接著改用含40%甲醇的水溶液洗脫，回收溶劑，得主要含人參皂苷F3、人參皂苷F5和人參皂苷Rh i的人參皂苷混合物1.1克。經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中含人參皂苷F3 19.6%、人參皂-F5 18.9%、人參皂苷Rhi 15.4% ;最后用含60%甲醇的水溶液洗脫，回收溶劑，濃縮，得主要含人參皂苷F1和人參皂苷Rd的人參皂苷混合物2.3克。經(jīng)HPLC檢測(cè)，其中含人參皂苷F1 42.3%、人參皂苷 Rd 26.6%o
[0017]HPLC測(cè)定人參皂苷含量的條件如下:
[0018]A、測(cè)定人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、人參皂苷Rb1、人參皂苷Rb2和人參皂苷Re的條件:
[0019]色譜柱:ZorbaxEclipse XDB(5 μm ;4