細(xì)胞培養(yǎng)方法
【專利說(shuō)明】細(xì)胞培養(yǎng)方法 相關(guān)申請(qǐng)的奪叉引用 本申請(qǐng)要求2013年3月14日提交的美國(guó)申請(qǐng)?zhí)?3/829,292的權(quán)益，該申請(qǐng)的內(nèi)容特 此以其全部?jī)?nèi)容結(jié)合在此。 發(fā)明領(lǐng)域 本發(fā)明總體上涉及細(xì)胞培養(yǎng)方法。 背景 治療性多肽是一類重要的治療性生物技術(shù)產(chǎn)品，并且治療性抗體（包括鼠抗體、嵌合 抗體、人源化抗體和人抗體以及它們的片段）占據(jù)了治療性生物產(chǎn)品的大多數(shù)。 概沭 在一個(gè)方面中，本發(fā)明的特征是一種產(chǎn)生具有目標(biāo)值的高甘露糖聚糖和巖藻糖基化聚 糖中的一種或多種的重組蛋白制劑的方法，該方法包括：(a)提供基因工程化來(lái)表達(dá)一種 重組蛋白的一種細(xì)胞；(b)在包含（例如，補(bǔ)充有）DMSO的一種培養(yǎng)基中，在該細(xì)胞表達(dá)該 重組蛋白的條件下培養(yǎng)該細(xì)胞；并且（c)收獲（例如，純化或分離該細(xì)胞和/或培養(yǎng)基）由 該細(xì)胞產(chǎn)生的該重組蛋白的一種制劑，其中該制劑具有該目標(biāo)值的高甘露糖聚糖和巖藻糖 基化聚糖中的一種或多種。在一些實(shí)施例中，該培養(yǎng)基包含DMSO, DMSO存在的時(shí)間和數(shù)量 能有效修改（例如，增加或減少）該重組蛋白中的高甘露糖聚糖和巖藻糖基化聚糖中的一 種或多種。 在一些實(shí)施例中，該培養(yǎng)基包含至少約0. 1 %、〇. 2%、0. 3%、0. 4%、0. 5%、0. 6%、 0.7%,0.8%,0.9%A%A.1%A.2%A.3%A.4：%A.5%A.6%A.7%A.8%A.9%,2 %、2. 1 %、2. 2 %、2. 3 %、2. 4 %、2. 5 %、2. 6 %、2. 7 %、2. 8 %、2. 9 %、3 %、3. 1 %、3. 2 %、 3. 3%、3. 4%、3. 5%、3. 6%、3. 7%、3. 8%、3. 9%、4%、4. 1%、4. 2%、4. 3%、4. 4%、4. 5%、 4. 6%、4. 7%、4. 8%、4. 9%或5%的DMSO。在一些實(shí)施例中，該培養(yǎng)基包含約0. 1 %至5% 的DMSO、約0. 1 %至約2 %的DMSO、約0. 1 %至約1 %的DMSO、約0. 5 %至約1 %的DMSO、約 1 %至約1. 5%的DMSO、約0? 5%至約1. 5%的DMSO、約0? 6%至約1. 4%的DMSO、約0? 7%至 約1. 3%的DMSO、約0. 8%至約1. 2%的DMSO、約0. 9%至約1. 1%的DMSO、約1%至約2% 的DMSO、約2 %至約3 %的DMSO、約3 %至約4%的DMSO、約4%至約5 %的DMSO、約0. 1 %至 約2. 5%的DMSO、約2. 5%至約5%的DMSO、約0. 1 %至約2%的DMSO、約0. 1 %至約3%的 DMSO、約0. 1 %至約4%的DMSO、約1 %至約5 %的DMSO、約2 %至約5 %的DMSO或約3 %至 約5%的DMSO。 在一些實(shí)施例中，該目標(biāo)值是一種參考治療性產(chǎn)品中的高甘露糖聚糖和巖藻糖基化 聚糖中的一種或多種的一個(gè)水平。在一些實(shí)施例中，該目標(biāo)值是一種參考治療性抗體產(chǎn)品 中的高甘露糖聚糖和巖藻糖基化聚糖中的一種或多種的一個(gè)水平。在一些實(shí)施例中，該 目標(biāo)值是一個(gè)預(yù)先確定的藥物產(chǎn)品規(guī)格或一種藥物制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，例如分析證書 (CofA)、檢測(cè)證書（CofT)或主生產(chǎn)批記錄（Master Batch Record)。在一些實(shí)施例中，該產(chǎn) 品規(guī)格是FDA標(biāo)簽、醫(yī)囑（Physician' s Insert)、USP專論或EP專論中的一個(gè)產(chǎn)品描述。 在一些實(shí)施例中，該參考治療性產(chǎn)品選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：阿巴西普、阿昔 單抗、阿達(dá)木單抗、阿柏西普、阿法賽特、阿侖單抗、巴利昔單抗、貝伐單抗、貝拉西普、賽妥 珠單抗、西妥昔單抗、達(dá)利珠單抗、依庫(kù)珠單抗、依法珠單抗、依那西普、吉姆單抗、替依莫單 抗、英利昔單抗、莫羅單抗-CD3、那他珠單抗、奧馬佐單抗、帕利珠單抗；帕木單抗、雷珠單 抗、利洛西普、利妥昔單抗、托西莫單抗、以及群司珠單抗。 在一些實(shí)施例中，該目標(biāo)值是以下各項(xiàng)中的一個(gè)或多個(gè)：(a)至少約0. 1 %至約20%高 甘露糖聚糖，例如，至少約〇. 1 %、約〇. 5%、約1 %、約2%、約3%、約4%、約5%、約6%、約 7%、約 8%、約 9%、約 10%、約 11%、約 12%、約 13%、約 14%、約 15%、約 16%、約 17%、 約18%、約19%、約20%或更多的高甘露糖聚糖；以及（b)至少約70%至100%的巖藻糖 基化聚糖，例如，至少約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約100%的巖藻 糖基化聚糖。高甘露糖聚糖可以是例如HM3、HM4、HM5、HM6、HM7、HM8、HM9或它們的組合。 在一些實(shí)施例中，高甘露糖聚糖和巖藻糖基化聚糖中的一種或多種的目標(biāo)值高于通過(guò) 在不包含DMSO的培養(yǎng)基中培養(yǎng)該細(xì)胞產(chǎn)生的一種制劑中的相應(yīng)水平。在一些實(shí)施例中，該 目標(biāo)值比相應(yīng)水平高該相應(yīng)水平的至少約10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、70 %、80 %、 90%、100%、150%、200%、250%、300%、350%、400%、450%、500% 或更多。 在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括評(píng)價(jià)該重組蛋白制劑中的高甘露糖聚糖和巖藻糖 基化聚糖中的一種或多種的水平。在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括在印刷品或計(jì)算機(jī) 可讀介質(zhì)中，例如，在測(cè)試報(bào)告、材料安全數(shù)據(jù)表格（MSDS)、批記錄、檢測(cè)證書（CofT)或分 析證書（CofA)中記錄該水平。 在另一個(gè)方面中，本發(fā)明的特征是一種產(chǎn)生重組蛋白制劑的方法，該方法包括：(a)提 供一個(gè)目標(biāo)值的高甘露糖聚糖和巖藻糖基化聚糖中的一種或多種；(b)提供基因工程化來(lái) 表達(dá)一種重組蛋白的一種細(xì)胞；（c)在包含（例如，補(bǔ)充有）DMS0的一種培養(yǎng)基中，在該細(xì) 胞表達(dá)該重組蛋白的條件下培養(yǎng)該細(xì)胞；（d)收獲由該細(xì)胞產(chǎn)生的該重組蛋白的一種制 劑；并且（e)如果該制劑滿足高甘露糖聚糖和巖藻糖基化聚糖中的一種或多種的目標(biāo)值， 將該制劑處理（例如，配制、填充到一個(gè)容器中、貼標(biāo)簽、包裝中的一種或多種）成一種藥物 產(chǎn)品。在一些實(shí)施例中，該培養(yǎng)基包含DMSO, DMS0存在的時(shí)間和數(shù)量能有效修改（例如，增 加或減少）該重組蛋白中的高甘露糖聚糖和巖藻糖基化聚糖中的一種或多種。 在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括評(píng)價(jià)該重組蛋白制劑中的高甘露糖聚糖和巖藻糖 基化聚糖中的一種或多種的水平。在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括在印刷品或計(jì)算機(jī) 可讀介質(zhì)中，例如，在測(cè)試報(bào)告、材料安全數(shù)據(jù)表格（MSDS)、批記錄、或檢測(cè)證書（CofT)或 分析證書（CofA)中記錄該水平。 在一些實(shí)施例中，該培養(yǎng)基包含至少約0. 1 %、〇. 2%、0. 3%、0. 4%、0. 5%、0. 6%、 0.7%,0.8%,0.9%A%A.1%A.2%A.3%A.4：%A.5%A.6%A.7%A.8%A.9%,2 %、2. 1 %、2. 2 %、2. 3 %、2. 4 %、2. 5 %、2. 6 %、2. 7 %、2. 8 %、2. 9 %、3 %、3. 1 %、3. 2 %、 3. 3%、3. 4%、3. 5%、3. 6%、3. 7%、3. 8%、3. 9%、4%、4. 1%、4. 2%、4. 3%、4. 4%、4. 5%、 4. 6%、4. 7%、4. 8%、4. 9%或5%的DMSO。在一些實(shí)施例中，該培養(yǎng)基包含約0. 1 %至5%的DMS0、約0. 1 %至約2 %的DMS0、約0. 1 %至約1 %的DMS0、約0. 5 %至約1 %的DMS0、約 1%至約1. 5%的DMS0、約0? 5%至約1. 5%的DMS0、約0? 6%至約1. 4%的DMS0、約0? 7%至 約1. 3%的DMS0、約0. 8%至約1. 2%的DMS0、約0. 9%至約1. 1%的DMS0、約1%至約2% 的DMSO、約2 %至約3 %的DMSO、約3 %至約4%的DMSO、約4%至約5 %的DMSO、約0. 1 %至 約2. 5%的DMS0、約2. 5%至約5%的DMS0、約0. 1%至約2%的DMS0、約0. 1%至約3%的 DMS0、約0. 1 %至約4%的DMS0、約1 %至約5 %的DMS0、約2 %至約5 %的DMS0或約3 %至 約 5%的 DMS0。 在一些實(shí)施例中，該目標(biāo)值是一種參考治療性產(chǎn)品中的高甘露糖聚糖和巖藻糖基化 聚糖中的一種或多種的一個(gè)水平。在一些實(shí)施例中，該目標(biāo)值是一種參考治療性抗體產(chǎn)品 中的高甘露糖聚糖和巖藻糖基化聚糖中的一種或多種的一個(gè)水平。在一些實(shí)施例中，該 目標(biāo)值是一個(gè)預(yù)先確定的藥物產(chǎn)品規(guī)格或一種藥物制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，例如分析證書 (CofA)、檢測(cè)證書（CofT)或主生產(chǎn)批記錄。在一些實(shí)施例中，該產(chǎn)品規(guī)格是FDA標(biāo)簽、醫(yī)囑、 USP專論或EP專論中的一個(gè)產(chǎn)品描述。 在一些實(shí)施例中，該參考治療性產(chǎn)品選自下組，該組由以下各項(xiàng)組成：阿巴西普、阿昔 單抗、阿達(dá)木單抗、阿柏西普、阿法賽特、阿侖單抗、巴利昔單抗、貝伐單抗、貝拉西普、賽妥 珠單抗、西妥昔單抗、達(dá)利珠單抗、依庫(kù)珠單抗、依法珠單抗、依那西普、吉姆單抗、替依莫單 抗、英利昔單抗、莫羅單抗-CD3、那他珠單抗、奧馬佐單抗、帕利珠單抗；帕木單抗、雷珠單 抗、利洛西普、利妥昔單抗、托西莫單抗、以及群司珠單抗。 在一些實(shí)施例中，該目標(biāo)值是以下各項(xiàng)中的一個(gè)或多個(gè)：(a)至少約0. 1 %至約20%高 甘露糖聚糖，例如，至少約〇. 1 %、約〇. 5%、約1 %、約2%、約3%、約4%、約5%、約6%、約 7%、約 8%、約 9%、約 10%、約 11%、約 12%、約 13%、約 14%、約 15%、約 16%、約 17%、 約18%、約19%、約20%或更多的高甘露糖聚糖；以及（b)至少約70%至100%的巖藻糖 基化聚糖，例如，至少約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約100%的巖藻 糖基化聚糖。高甘露糖聚糖可以是例如HM3、HM4、HM5、HM6、HM7、HM8、HM9或它們的組合。 在一些實(shí)施例中，高甘露糖聚糖和巖藻糖基化聚糖中的一種或多種的目標(biāo)值高于通過(guò) 在不包含DMS0的培養(yǎng)基中培養(yǎng)該細(xì)胞產(chǎn)生的一種制劑中的相應(yīng)水平。在一些實(shí)施例中，該 目標(biāo)值比相應(yīng)水平高該相應(yīng)水平的至少約10 %、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、 90%、100%、150%、200%、250%、300%、350%、400%、450%、500% 或更多。 在另一個(gè)方面中，本發(fā)明的特征是一種提高重組蛋白制劑中的高甘露糖聚糖、唾液酸 化聚糖以及3, 3, 1，0, 0聚糖中的一種或多種的水平的方法，該方法包括：(a)提供基因工程 化來(lái)表達(dá)一種重組蛋白的一種細(xì)胞；(b)在包含（例如，補(bǔ)充有）DMS0的一種培養(yǎng)基中，在 該細(xì)胞表達(dá)該重組蛋白的條件下培養(yǎng)該細(xì)胞；并且（c)收獲由該細(xì)胞產(chǎn)生的該重組蛋白的 一種制劑，其中該制劑具有相對(duì)于通過(guò)在不包含DMS0的培養(yǎng)基中培養(yǎng)該細(xì)胞產(chǎn)生的該重 組蛋白的一種制劑中的一個(gè)相應(yīng)水平而言提高的水平的高甘露糖聚糖、唾液酸化聚糖以及 3,3, 1，0,0聚糖中的一種或多種。在一些實(shí)施例中，該培養(yǎng)基包含DMSO, DMS0存在的時(shí)間 和數(shù)量能有效增加該重組蛋白中的高甘露糖聚糖、唾液酸化聚糖以及3, 3, 1，0, 0聚糖中的 一種或多種。在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括：如果該制劑滿足高甘露糖聚糖、唾液酸 化聚糖以及3, 3, 1，0, 0聚糖中的一個(gè)或多種的一個(gè)目標(biāo)值，將該制劑處理（例如，配制、填 充到一個(gè)容器中、貼標(biāo)簽、包裝中的一種或多種）成一種藥物產(chǎn)品。 在一些實(shí)施例中，該培養(yǎng)基包含至少約0. 1 %、〇. 2%、0. 3%、0. 4%、0. 5%、0. 6%、0.7%,0.8%,0.9%A%A.1%A.2%A.3%A.4：%A.5%A.6%A.7%A.8%A.9%, 2 %、2. 1 %、2. 2 %、2. 3 %、2. 4 %、2. 5 %、2. 6 %、2. 7 %、2. 8 %、2. 9 %、3 %、3. 1 %、3. 2 %、 3. 3%、3. 4%、3. 5%、3. 6%、3. 7%、3. 8%、3. 9%、4%、4. 1%、4. 2%、4. 3%、4. 4%、4. 5%、 4.6%、4.7%、4.8%、4.9%或5%的01^0。在一些實(shí)施例中，該培養(yǎng)基包含約0.1%至5% 的DMSO、約0. 1 %至約2 %的DMSO、約0. 1 %至約1 %的DMSO、約0. 5 %至約1 %的DMSO、約 1%至約 1. 5% 的 DMS0、約 0? 5%至約 1. 5% 的 DMS0、約 0? 6%至約 1. 4% 的 DMS0、約 0? 7%至 約1. 3%的DMS0、約0. 8%至約1. 2%的DMS0、約0. 9%至約1. 1%的DMS0、約1%至約2% 的DMS0、約2 %至約3 %的DMS0、約3 %至約4%的DMS0、約4%至約5 %的DMS0、約0. 1 %至 約2. 5%的DMS0、約2. 5%至約5%的DMS0、約0. 1%至約2%的DMS0、約0. 1%至約3%的 DMS0、約0. 1 %至約4%的DMS0、約1 %至約5 %的DMS0、約2 %至約5 %的DMS0或約3 %至 約 5%的 DMS0。 在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括測(cè)量該重組蛋白制劑中的高甘露糖聚糖、唾液酸 化聚糖以及3, 3, 1，0, 0聚糖中的一種或多種的一個(gè)水平。在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步 包括在印刷品或計(jì)算機(jī)可讀介質(zhì)中，例如，在測(cè)試報(bào)告、材料安全數(shù)據(jù)表格（MSDS)、批記錄、 檢測(cè)證書（CofT)或分析證書（CofA)中記錄該水平。 在一些實(shí)施例中，高甘露糖聚糖、唾液酸化聚糖以及3, 3, 1，0, 0聚糖中的一種或多種 的該提高的水平比相應(yīng)水平高該相應(yīng)水平的至少約10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、 70%、80%、90%、100%、150%、200%、250%、300%、350%、400%、450%、500% 或更多。在 一些實(shí)施例中，該提高的水平是以下各項(xiàng)中的一個(gè)或多個(gè)：(a)至少約0. 1 %至約20%高甘 露糖聚糖，例如，至少約〇. 1 %、約〇. 5%、約1%、約2%、約3%、約4%、約5%、約6%、約 7%、約 8%、約 9%、約 10%、約 11%、約 12%、約 13%、約 14%、約 15%、約 16%、約 17%、 約18 %、約19 %、約20%或更多的高甘露糖聚糖；(b)至少約70 %至100 %的巖藻糖基化 聚糖，例如，至少約70%、約75%、約80%、約85%、約90%、約95%或約100%的巖藻糖基 化聚糖；以及（c)至少約0. 1%至約90%的唾液酸化聚糖，例如，至少約20%、30%、40%、 50%、60%、70%、80%或90%的唾液酸化聚糖。高甘露糖聚糖可以是例如冊(cè)3、圓4、冊(cè)5、 HM6、HM7、HM8、HM9或它們的組合。 在另一個(gè)方面中，本發(fā)明的特征是一種降低重組蛋白制劑中的高甘露糖聚糖、唾液酸 化聚糖以及3, 3, 1，0, 0聚糖中的一種或多種的水平的方法，該方法包括：(a)提供基因工程 化來(lái)表達(dá)一種重組蛋白的一種細(xì)胞；(b)在包含一個(gè)降低水平的DMS0的一種培養(yǎng)基中，在 該細(xì)胞表達(dá)該重組蛋白的條件下培養(yǎng)該細(xì)胞；并且（c)收獲由該細(xì)胞產(chǎn)生的該重組蛋白的 一種制劑，其中該制劑具有相對(duì)于通過(guò)在不包含該降低水平的DMS0的培養(yǎng)基中培養(yǎng)該細(xì) 胞產(chǎn)生的該重組蛋白的一種制劑中的一個(gè)相應(yīng)水平而言降低的水平的高甘露糖聚糖、唾液 酸化聚糖以及3, 3, 1，0, 0聚糖中的一種或多種。在一些實(shí)施例中，該培養(yǎng)基包含該降低水 平的DMSO, DMS0存在的時(shí)間和數(shù)量能有效降低該重組蛋白中的高甘露糖聚糖、唾液酸化聚 糖以及3, 3, 1，0, 0聚糖中的一種或多種的一個(gè)水平。在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括： 如果該制劑滿足高甘露糖聚糖、唾液酸化聚糖以及3, 3, 1，0, 0聚糖中的一個(gè)或多種的一個(gè) 目標(biāo)值，將該制劑處理（例如，配制、填充到一個(gè)容器中、貼標(biāo)簽、包裝中的一種或多種）成 一種藥物產(chǎn)品。 在一些實(shí)施例中，該培養(yǎng)基包含小于約5%、4. 9%、4. 8%、4. 7%、4. 6%、4. 5%、4. 4%、 4. 3%、4. 2%、4. 1%、4%、3. 9%、3. 8%、3. 7%、3. 6%、3. 5%、3. 4%、3. 3%、3. 2%、3. 1%、 3%、2.9%、2.8%、2.7%、2.6%、2.5%、2.4%、2.3%、2.2%、2.1%、2%、1.9%、1.8%、 1. 7%、1. 6%、1. 5%、1. 4%、1. 3%、1. 2%、1. 1%、1%、0. 9%、0. 8%、0. 7%、0. 6%、0. 5%、 0? 4%、0. 3%、0. 2%、或 0? 1%、或 0%的 DMSO。 在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括測(cè)量該重組蛋白制劑中的高甘露糖聚糖、唾液酸 化聚糖以及3, 3, 1，0, 0聚糖中的一種或多種的一個(gè)水平。在一些實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步 包括在印刷品或計(jì)算機(jī)可讀介質(zhì)中，例如，在測(cè)試報(bào)告、材料安全數(shù)據(jù)表格（MSDS)、批記錄、 檢測(cè)證書（CofT)或分析證書（CofA)中記錄該水平。 在一些實(shí)施例中，高甘露糖聚糖、唾液酸化聚糖以及3, 3, 1，0, 0聚糖中的一種或多種 的該降低的水平比相應(yīng)水平低該相應(yīng)水平的至少約10 %、20 %、30 %、40 %、50 %、60 %、 70%、80%、90%、95%或100%。在一些實(shí)施例中，該降低的水平是以下各項(xiàng)中的一個(gè)或多 個(gè)：（a)小于約20 %的高甘露糖聚糖；(b)小于約90 %的巖藻糖基化聚糖；以及（c)小于約 90%的唾液酸化聚糖。高甘露糖聚糖可以是例如冊(cè)3、圓4、冊(cè)5、圓6、冊(cè)7、圓8、圓9或它們 的組合。 在另一個(gè)方面中，本發(fā)明的特征是一種降低重組蛋白制劑中的一種或多種巖藻糖基 化聚糖的水平的方法，該方法包括：(a)提供基因工程化來(lái)表達(dá)一種重組蛋白的一種細(xì)胞； (b)在包含（例如，補(bǔ)充有）DMS0的一種培養(yǎng)基中，在該細(xì)胞表達(dá)該重組蛋白的條件下培養(yǎng) 該細(xì)胞；并且（c)收獲由該細(xì)胞產(chǎn)生的該重組蛋白的一種制劑，其中該制劑具有相對(duì)于通 過(guò)在不包含DMS0的培養(yǎng)基中培養(yǎng)該細(xì)胞產(chǎn)生的該重組蛋白的一種制劑中的一個(gè)相應(yīng)水平 而言降低的水平的一種或多種巖藻糖基化聚糖。在一些實(shí)施例中，該培養(yǎng)基包含DMS0，DMS0 存在的時(shí)間和數(shù)量能有效降低該重組蛋白中的一種或多種巖藻糖基化聚糖的水平。在一些 實(shí)施例中，該方法進(jìn)一步包括：如果該制劑滿足一個(gè)或多種巖藻糖基化聚糖的一個(gè)目標(biāo)值， 將該制劑處理（例如，配制、填充到一個(gè)容器中、貼標(biāo)簽、包裝中的一種或多種）成一種藥物 產(chǎn)品。 在一些實(shí)施例中，該培養(yǎng)基包含至少約0. 1 %、〇. 2%、0. 3%、0. 4%、0. 5%、0. 6%、0.7%,0.8%,0.9%A%A.1%A.2%A.3%A.4：%A.5%A.6%A.7%A.8%A.9%, 2 %、2. 1 %、2. 2 %、2. 3 %、2. 4 %、2. 5 %、2. 6 %、2. 7 %、2. 8 %、2. 9 %、3 %、3. 1 %、3. 2 %、 3. 3%、3. 4%、3. 5%、3. 6%、3. 7%、3. 8%、3. 9%、4%、4. 1%、4. 2%、4. 3%、4. 4%、4. 5%、 4.6%、4.7%、4.8%、4.9%或5%的01^0。在一些實(shí)施例中，該培養(yǎng)基包含約0.1%至5% 的DMSO、約0. 1 %至約2 %的DMSO、約0. 1 %至約1 %的DMSO、約0. 5 %至約1 %的DMSO、約 1%至約 1. 5% 的 DMS0、約 0? 5%至約 1. 5% 的 DMS0、約 0? 6%至約 1. 4% 的 DMS0、約 0? 7%至 約1. 3%的DMS0、約0. 8%至約1. 2%的DMS0、約0. 9%至約1. 1%