殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物在制備抗腫瘤組合物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物及其在制備 抑制和治療腫瘤的組合物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 惡性腫瘤嚴(yán)重危害著人類健康，位于重大疾病的首位，死亡率極高。我國作為一個 發(fā)展中國家，隨著人口老齡化進(jìn)程的加快，以及環(huán)境污染問題的存在，惡性腫瘤發(fā)病率持續(xù) 上升，腫瘤的防治形勢非常嚴(yán)峻。
[0003] 去甲斑蝥素（norcantharidin，NCTD)為斑蝥活性成分斑蝥素的衍生物，是我國開 發(fā)的治療癌癥的藥物。與斑蝥素比較，去甲斑蝥素的腎臟毒性和對泌尿系統(tǒng)的刺激作用有 所減小，同時具有升高白細(xì)胞作用，并有較強(qiáng)的抗腫瘤作用，臨床上用于肝癌、胃癌、結(jié)腸癌 等的治療。盡管去甲斑蝥素的毒性已經(jīng)有所減小，但仍然存在對泌尿系統(tǒng)的毒性，同時其在 體內(nèi)的分布廣泛、吸收消除時間短，降低了其對腫瘤的治療效果，也增加了對其它臟器組織 的毒性。因此，研究去甲斑蝥素的新型衍生物，降低用藥量，延長其體內(nèi)存留時間，具有十分 重要的意義。
[0004] 殼聚糖及其衍生物具有多種生物活性，如提高機(jī)體免疫力、抗腫瘤、調(diào)節(jié)血糖、調(diào) 節(jié)血脂等，同時可生物降解吸收，分子結(jié)構(gòu)中的氨基、羥基等活性基團(tuán)，易于進(jìn)行化學(xué)修飾。 這些性質(zhì)使其作為抗腫瘤藥物載體具有獨(dú)特的優(yōu)勢。申請?zhí)枮?00810229077. 0的中國發(fā) 明專利公開了一種水溶性斑蝥素和/或去甲斑蝥素殼聚糖衍生物及其制備方法，由殼聚糖 和斑蝥素或者去甲斑蝥素反應(yīng)得到，該衍生物水溶性好，毒副作用小，并具有抗腫瘤活性。 關(guān)于殼聚糖的生物相容性研究的文獻(xiàn)報(bào)道較多，由于殼聚糖不溶于水，其在體內(nèi)的生物降 解可產(chǎn)生局部的炎癥反應(yīng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物及其在制備抗腫瘤組合物 中的應(yīng)用，以彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的上述不足。
[0006] 羧甲基殼聚糖、羥乙基殼聚糖、羥丙基殼聚糖均為水溶性殼聚糖，與不溶于水的殼 聚糖不同，羧甲基殼聚糖、羥乙基殼聚糖、羥丙基殼聚糖在體內(nèi)易被人體吸收，經(jīng)腹腔給藥 后，由腹腔吸收，血液運(yùn)轉(zhuǎn)，經(jīng)肝臟降解，腎臟代謝，經(jīng)尿液排出，其吸收降解無毒副作用。羧 甲基殼聚糖、羥乙基殼聚糖、羥丙基殼聚糖在體內(nèi)可降解生物材料研究中應(yīng)用已有廣泛的 研究報(bào)道，在生物體的組織相容性好，而不溶于水的殼聚糖則會在體內(nèi)引起局部炎癥。
[0007] 為實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用以下具體的技術(shù)方案： 一種殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物在制備抑制和治療腫瘤的組合物中的應(yīng)用。
[0008] 上述組合物是藥物、醫(yī)療器械、保健食品或生物制劑。
[0009] 上述殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物是羧甲基殼聚糖去甲斑蝥素衍生物、羥乙基殼聚 糖去甲斑蝥素衍生物或羥丙基殼聚糖去甲斑蝥素衍生物。
[0010] 上述殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物具體是由羧甲基殼聚糖、羥乙基殼聚糖或羥丙基 殼聚糖與去甲斑蝥素反應(yīng)生成。
[0011] 所述的殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物，具有以下分子結(jié)構(gòu)特征：
所述的殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物的分子結(jié)構(gòu)中，&為去甲斑蝥素和/或H、C0CH 3、 CH2C00Na、CH2C00K、CH2CH20H、CH 2CH0HCH3,私為 H、CH 2C00Na、CH2C00K、CH2CH20H 或 CH2CH0HCH3， R#H、CH2C00Na、CH 2C00K、CH2CH20H或CH2CH0HCH 3;其中R#去甲斑蝥素的摩爾百分?jǐn)?shù)不 小于10%，即去甲斑蝥素的取代度不小于10%，札為乙酰基（C0CH 3)的摩爾百分?jǐn)?shù)小于50% ; 分子中的羧甲基（CH2C00Na或CH2C00K)、羥乙基（CH2CH 20H)或羥丙基（CH2CH0HCH3)的摩爾 百分?jǐn)?shù)大于50%。本發(fā)明的殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物，其特征是：羧甲基（CH 2C00Na或 CH2C00K)、羥乙基（CH2CH20H)或羥丙基（CH 2CH0HCH3)的取代位主要是C6-0位，也可以有少量 的取代位是C3-0位或C2-N位，取代度大于50% (摩爾百分?jǐn)?shù))，C2-N位的乙酰基（C0CH3)小 于50% (摩爾百分?jǐn)?shù))，去甲斑蝥素的取代位是在C2-N位，去甲斑蝥素的取代度不小于10% (摩爾百分?jǐn)?shù))。
[0012] 殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物的制備方法，包括以下步驟： (1) 取殼聚糖衍生物，蒸餾水溶解，攪拌溶解，調(diào)pH，得殼聚糖衍生物溶液；所述殼聚糖 衍生物選自羧甲基殼聚糖、羥乙基殼聚糖或羥丙基殼聚糖； (2) 取去甲斑蝥素，溶解，得去甲斑蝥素溶液； (3) 攪拌下將去甲斑蝥素溶液滴加到殼聚糖衍生物溶液中，避光反應(yīng)； (4) 反應(yīng)物裝入透析袋中，用蒸餾水透析，透析物經(jīng)冷凍干燥，得殼聚糖基去甲斑蝥素 衍生物。
[0013] 本發(fā)明的殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物具有顯著的抑制腫瘤組織生長的作用，其效 果優(yōu)于去甲斑蝥素，在體內(nèi)的存留時間長，從而降低了去甲斑蝥素的用藥量，減少了毒副作 用，具有減毒增效作用，在制備抑制和治療抗腫瘤的藥物、醫(yī)療器械、保健食品及生物制劑 中應(yīng)用，具有廣闊前景。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 下面通過具體實(shí)施例來進(jìn)一步詳細(xì)說明本發(fā)明。
[0015] 實(shí)施例1:殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物的制備 以水溶性的羧甲基殼聚糖、羥乙基殼聚糖、羥丙基殼聚糖為底物與去甲斑蝥素反應(yīng)，制 備了殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物，具體制備過程如下： (1)殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物1的制備：稱取1. 〇g羧甲基殼聚糖(羧甲基取代度 95. 5%，脫乙酰度83. 2%，分子量96. 5kD，糖單元摩爾數(shù)0. 0033摩爾），置于50ml的三口瓶 中，加入25ml蒸餾水，攪拌溶解，加三乙胺調(diào)pH9,得羧甲基殼聚糖溶液。稱取2. 2g去甲斑 蝥素（0. 012摩爾)，溶解于10ml丙酮，得去甲斑蝥素丙酮溶液。攪拌下將去甲斑蝥素丙酮溶 液滴加到羧甲基殼聚糖溶液中，室溫、避光反應(yīng)24h，反應(yīng)物裝入透析袋中，用蒸餾水透析， 透析物經(jīng)冷凍干燥，得1. 15g殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物1 (羧甲基殼聚糖去甲斑蝥素衍生 物A)〇
[0016] (2)羧甲基殼聚糖去甲斑蝥素衍生物B的制備：取l.Og羧甲基殼聚糖(羧甲基取 代度82. 4%，脫乙酰度88. 6%，分子量1. 4kD，糖單元摩爾數(shù)0. 0044摩爾），置于50ml的三口 瓶中，加入l〇ml蒸餾水，攪拌溶解，加三乙胺調(diào)pH8. 0,得羧甲基殼聚糖溶液。稱取0. 75g去 甲斑蝥素（0.0044摩爾)，溶解于5ml丙酮，得去甲斑蝥素丙酮溶液。攪拌下將去甲斑蝥素 丙酮溶液滴加到羧甲基殼聚糖溶液中，45°C、避光反應(yīng)12h，反應(yīng)物裝入透析袋中，用蒸餾水 透析，透析物經(jīng)冷凍干燥，得〇. 91g殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物2 (羧甲基殼聚糖去甲斑蝥 素衍生物B)。
[0017] (3)殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物3的制備：稱取2. 0g羥乙基殼聚糖(羥乙基取代 度78. 2%，脫乙酰度88. 5%，分子量126. 6kD，糖單元摩爾數(shù)0. 01摩爾），置于50ml的三口瓶 中，加入10ml蒸餾水，10ml甘油，攪拌溶解，加三乙胺調(diào)pH9. 0,得羥乙基殼聚糖溶液。稱取 7g去甲斑蝥素（0. 04摩爾)，溶解于15ml丙酮，得去甲斑蝥素丙酮溶液。攪拌下將去甲斑蝥 素丙酮溶液滴加到羥乙基殼聚糖溶液中，室溫、避光反應(yīng)24h，反應(yīng)物裝入透析袋中，用蒸餾 水透析，透析物經(jīng)冷凍干燥，得3. 12g殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物3 (羥乙基殼聚糖去甲斑 蝥素衍生物A)。
[0018] (4)殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物4的制備：稱取2. 0g羥乙基殼聚糖(輕乙基取代 度78. 2%，脫乙酰度88. 5%，分子量126. 6kD，糖單元摩爾數(shù)0. 01摩爾），置于50ml的三口瓶 中，加入10ml蒸餾水，10ml甘油，攪拌溶解，加三乙胺調(diào)pH9. 0,得羥乙基殼聚糖溶液。稱取 7g去甲斑蝥素（0.04摩爾)，溶解于10ml丙酮，5ml甘油，5ml聚乙二醇2000,得去甲斑蝥素 丙酮溶液。攪拌下將去甲斑蝥素丙酮溶液滴加到羥乙基殼聚糖溶液中，室溫、避光反應(yīng)12h， 反應(yīng)物裝入透析袋中，用蒸餾水透析，透析物經(jīng)冷凍干燥，得3. 12g殼聚糖基去甲斑蝥素衍 生物4 (羥乙基殼聚糖去甲斑蝥素衍生物B)。
[0019] (5)殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物5的制備：稱取2.lg羥丙基殼聚糖(羥