丙基取代 度73. 1%，脫乙酰度85. 2%，分子量105kD，糖單元摩爾數(shù)0. 01摩爾），置于50ml的三口瓶 中，加入20ml蒸餾水，攪拌溶解，加三乙胺調(diào)pH7. 5,得羥丙基殼聚糖溶液。稱取5g去甲斑 蝥素（0. 03摩爾)，溶解于10ml丙酮，10ml甘油，得去甲斑蝥素丙酮溶液。攪拌下將去甲斑 蝥素丙酮溶液滴加到羥丙基殼聚糖溶液中，室溫、避光反應(yīng)24h，反應(yīng)物裝入透析袋中，用蒸 餾水透析，透析物經(jīng)冷凍干燥，得2. 5g殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物5 (羥丙基殼聚糖去甲斑 蝥素衍生物A)。
[0020] (6)殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物6的制備：稱取2.lg羥丙基殼聚糖(羥丙基取代 度73. 1%，脫乙酰度85. 2%，分子量105kD，糖單元摩爾數(shù)0. 01摩爾），置于50ml的三口瓶 中，加入20ml蒸餾水，攪拌溶解，加三乙胺調(diào)pH7. 5,得羥丙基殼聚糖溶液。稱取5g去甲斑 蝥素（0. 03摩爾)，溶解于10ml丙酮，5ml甘油，5ml聚乙二醇2000,得去甲斑蝥素丙酮溶液。 攪拌下將去甲斑蝥素丙酮溶液滴加到羥丙基殼聚糖溶液中，室溫、避光反應(yīng)12h，反應(yīng)物裝 入透析袋中，用蒸餾水透析，透析物經(jīng)冷凍干燥，得2. 5g殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物6 (羥 丙基殼聚糖去甲斑蝥素衍生物B)。
[0021] 由于去甲斑蝥素在210nm波長處有特征性紫外吸收峰，因此配制去甲斑蝥素標(biāo)準(zhǔn) 溶液為對照，用紫外分光光度法測定實施例3制備的6種殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物的去 甲斑蝥素的摩爾百分?jǐn)?shù)，即去甲斑蝥素的取代度。測定結(jié)果顯示： 殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物1的去甲斑蝥素取代度為54. 2% ; 殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物2的去甲斑蝥素取代度為12. 8% ; 殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物3的去甲斑蝥素取代度為73. 6% ; 殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物4的去甲斑蝥素取代度為74. 8% ; 殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物5的去甲斑蝥素取代度為28. 1% ; 殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物6的去甲斑蝥素取代度為36. 9%。
[0022] 在實施例1中，以羧甲基殼聚糖、羥乙基殼聚糖或羥丙基殼聚糖為底物，與去甲斑 蝥素反應(yīng)制備殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物，該反應(yīng)對羧甲基殼聚糖、羥乙基殼聚糖或羥丙 基殼聚糖的分子量沒有限制，不同分子量的羧甲基殼聚糖、羥乙基殼聚糖或羥丙基殼聚糖 與去甲斑蝥素反應(yīng)均能達(dá)到同樣的效果。
[0023] 實施例2:殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物對腫瘤組織生長的抑制作用 實驗動物為昆明種小鼠，雌雄各半，體重18~20g。復(fù)蘇小鼠肝癌細(xì)胞H22,細(xì)胞常規(guī) 培養(yǎng)后，用生理鹽水調(diào)節(jié)細(xì)胞密度1.0X107 /ml，接種于初代小鼠腹腔，0.5ml/只。接種 5~7天后，進(jìn)行腹腔傳代，連續(xù)傳3代。取腹腔傳代生長良好的H22荷瘤小鼠，以頸椎脫臼 法處死。無菌條件下抽取腹水瘤液，離心，用生理鹽水調(diào)節(jié)細(xì)胞密度為2.0X107 /ml，接種 于正常小鼠左前肢腋窩皮下，每只0. 2ml，制作小鼠H22荷瘤模型。
[0024] 造模24h后將荷瘤小鼠隨機(jī)分組，每組10只： 模型對照組：給予生理鹽水； 實驗1組：給予殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物1的生理鹽水溶液； 實驗2組：給予殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物2的生理鹽水溶液； 實驗3組：給予殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物3的生理鹽水溶液； 實驗4組：給予殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物4的生理鹽水溶液； 實驗5組：給予殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物5的生理鹽水溶液； 實驗6組：給予殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物6的生理鹽水溶液； 去甲斑蝥素對照組：給予去甲斑蝥素生理鹽水溶液。
[0025] 模型對照組腹腔注射給予生理鹽水；6個實驗組分別腹腔注射給予對應(yīng)的殼聚糖 基去甲斑蝥素生理鹽水溶液，劑量為10mg/kg? 2d;去甲斑蝥素對照組腹腔注射給予去甲 斑蝥素生理鹽水溶液，劑量為2mg/kg*d。模型對照組、實驗組均隔日給藥一次，共給藥6 次，每次給予體積0. 5ml，去甲斑蝥素對照組每日給藥一次，共給藥12次。實驗共進(jìn)行12d。 小鼠于末次給藥后24h，脫頸椎處死，剖離瘤塊，稱瘤重，計算抑瘤率。實驗結(jié)果如表1。
[0026] 表1殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物對腫瘤組織生長的影響
可以看出，本發(fā)明的殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物具有顯著的抗腫瘤作用。由此可見，殼 聚糖基去甲斑蝥素衍生物具有顯著的抑制腫瘤組織生長的作用，其效果優(yōu)于去甲斑蝥素， 具有增效作用，同時用藥次數(shù)少。
[0027] 實施例3:殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物的排泄 以大鼠為實驗動物，隨機(jī)分為7個組，每組3只： 生理鹽水對照組：給予生理鹽水； 實驗1組：給予殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物1的生理鹽水溶液； 實驗2組：給予殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物2的生理鹽水溶液； 實驗3組：給予殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物3的生理鹽水溶液； 實驗4組：給予殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物4的生理鹽水溶液； 實驗5組：給予殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物5的生理鹽水溶液； 實驗6組：給予殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物6的生理鹽水溶液； 去甲斑蝥素對照組：給予去甲斑蝥素生理鹽水溶液。
[0028] 各組的給予體積均為0. 5ml，其中殼聚糖基去甲斑蝥素溶液的濃度為10mg/ml(w/ v)，去甲斑蝥素溶液的濃度為4mg/ml(w/v)，給藥后不同時間測定尿液中的去甲斑蝥素累 積排泄率。結(jié)果如表2。
[0029] 表2.殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物的累積排泄率
實驗結(jié)果表明，去甲斑蝥素體內(nèi)排泄快，給藥后24小時大部分去甲斑蝥素排出體外， 因此去甲斑蝥素治療的用藥次數(shù)多，藥量大，副作用大。
[0030] 本發(fā)明的殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物是以羧甲基殼聚糖、羥乙基殼聚糖或羥丙基 殼聚糖為載體，與去甲斑蝥素反應(yīng)生成，顯著延長了其在體內(nèi)的存留時間，因此殼聚糖基去 甲斑蝥素衍生物在體內(nèi)的排泄時間延長，從而降低了去甲斑蝥素的用藥量，減少了毒副作 用，并且得到顯著療效。
[0031] 本發(fā)明的殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物具有顯著的抑制腫瘤組織生長的作用，其效 果優(yōu)于去甲斑蝥素，具有減毒增效作用，在制備抑制和治療腫瘤的藥物、醫(yī)療器械、保健食 品及生物制劑中應(yīng)用，具有廣闊前景。
【主權(quán)項】
1. 一種殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物在制備抑制和治療腫瘤的組合物中的應(yīng)用。2. 如權(quán)利要求1所述的殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物，其特征是：所述的組合物是藥物、 醫(yī)療器械、保健食品或生物制劑。3. 如權(quán)利要求1所述的殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物，其特征是：所述的殼聚糖基去甲 斑蝥素衍生物是羧甲基殼聚糖去甲斑蝥素衍生物、羥乙基殼聚糖去甲斑蝥素衍生物或羥丙 基去甲斑蝥素衍生物，所述的殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物分子中的羧甲基、羥乙基或羥丙 基的摩爾百分?jǐn)?shù)大于50%，去甲斑蝥素衍生物的摩爾百分?jǐn)?shù)不小于10%。4. 如權(quán)利要求1-3所述的殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物的制備方法，其特征是包括以下 步驟： (1) 取殼聚糖衍生物，蒸餾水溶解，攪拌溶解，調(diào)pH，得殼聚糖衍生物溶液；所述殼聚糖 衍生物選自羧甲基殼聚糖、羥乙基殼聚糖或羥丙基殼聚糖； (2) 取去甲斑蝥素，溶解，得去甲斑蝥素溶液； (3) 攪拌下將去甲斑蝥素溶液滴加到殼聚糖衍生物溶液中，避光反應(yīng)； (4) 反應(yīng)物裝入透析袋中，用蒸餾水透析，透析物經(jīng)冷凍干燥，得殼聚糖基去甲斑蝥素 衍生物。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物在制備抗腫瘤組合物中的應(yīng)用，所述的殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物是羧甲基殼聚糖去甲斑蝥素衍生物、羥乙基殼聚糖去甲斑蝥素衍生物或羥丙基去甲斑蝥素衍生物，所述的殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物分子中的羧甲基、羥乙基或羥丙基的摩爾百分?jǐn)?shù)大于50%，去甲斑蝥素衍生物的摩爾百分?jǐn)?shù)不小于10%。本發(fā)明的殼聚糖基去甲斑蝥素衍生物具有顯著的抑制腫瘤組織生長的作用，其效果優(yōu)于去甲斑蝥素，在體內(nèi)的存留時間長，從而降低了去甲斑蝥素的用藥量，減少了毒副作用，具有減毒增效作用，在制備抑制和治療抗腫瘤的藥物、醫(yī)療器械、保健食品及生物制劑中應(yīng)用，具有廣闊的前景。
【IPC分類】A61K31/722, C07H13/10, A61P35/00, A61K31/7048, C08B37/08
【公開號】CN105106231
【申請?zhí)枴緾N201510533950
【發(fā)明人】韓寶芹, 蔣志雯, 彭燕飛, 劉萬順
【申請人】中國海洋大學(xué)
【公開日】2015年12月2日
【申請日】2015年8月27日