55的Lac-GLN和對(duì)照制劑處理C57BL/6小鼠。靜脈內(nèi)施用后4虹，收 集肝組織，提取RNA。每一個(gè)值代表3個(gè)測(cè)量的平均值+SD。圖37A顯示通過實(shí)時(shí)RT-PCR 分析miR-155的表達(dá)。圖37B和37C顯示通過實(shí)時(shí)RT-PCR分析mir-155下游祀C/EBPP 和F0XP3的表達(dá)。每一個(gè)值代表3個(gè)測(cè)量的平均值+SD。
[0066] 發(fā)明詳述
[0067] 在本文中在脂質(zhì)納米顆粒的背景下描述了不同實(shí)施方案。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理 解，下列實(shí)施方案的詳細(xì)描述僅僅是舉例說明性的，并且無意W任何方式限定。其它實(shí)施方 案本身將很容易地被具有本公開內(nèi)容的益處的運(yùn)樣的技術(shù)人員理解。本文中提及的"實(shí)施 方案"、"方面"或"實(shí)施例"表示所描述的本發(fā)明的實(shí)施方案可包括特定性質(zhì)、結(jié)構(gòu)或特征， 但并非每個(gè)實(shí)施方案必需包括特定性質(zhì)、結(jié)構(gòu)或特征。此外，短語"在一個(gè)實(shí)施方案中"的 重復(fù)使用不一定是指相同的實(shí)施方案，盡管其可指相同實(shí)施方案。
[0068] 并非所有本文中描述的實(shí)施方式或方法的常規(guī)特性都得到顯示和說明。當(dāng)然，應(yīng) 理解在任何運(yùn)樣的實(shí)際實(shí)施方式的開發(fā)中，將作出許多實(shí)施方式特異性決定W實(shí)現(xiàn)開發(fā)明 的特殊目的，例如與應(yīng)用和商業(yè)相關(guān)的限制的相容性，W及運(yùn)些特殊目的將隨實(shí)施方式和 開發(fā)者的不同而變化。此外，應(yīng)理解運(yùn)樣的研制工作可能是復(fù)雜且耗時(shí)的，但雖然如此對(duì)于 具有本公開內(nèi)容的益處的本領(lǐng)域技術(shù)人員來說仍然是常規(guī)工作。 W例一般說明
[0070]基于核酸（NA)的療法可被開發(fā)來促進(jìn)或抑制基因表達(dá)。由于基因的突變和miRNA特征譜的變化被認(rèn)為是癌癥和其它疾病的基礎(chǔ)病因，因而基于NA的試劑可直接作用于基 礎(chǔ)病因，從而使治療潛能最大化?；贜A的療法的非限定性實(shí)例包括：質(zhì)粒DNA(pDNA)、 小干擾RNA(siRNA)、小發(fā)夾RNA(shRNA)、microRNAOniR)、模擬物（mimetic)、anti-miR/ antagomiR/miR抑制劑和反義寡核巧酸（ASO)。在本文中描述的納米顆粒組合物開發(fā)之前， 由于將NA轉(zhuǎn)運(yùn)至它們的細(xì)胞內(nèi)祀具有特別的挑戰(zhàn)性W及由于NA相對(duì)不穩(wěn)定并易于受血清 和細(xì)胞核酸酶降解，因此基于NA的療法的臨床轉(zhuǎn)換在它們的實(shí)現(xiàn)中面臨幾個(gè)障礙。此外， NA的高負(fù)電荷使得其不可能轉(zhuǎn)運(yùn)穿過細(xì)胞膜，從而進(jìn)一步限制效用。
[0071] 本文中描述的LN為常規(guī)治療性化合物和基于NA的療法的遞送提供了有用平 臺(tái)。使用LN配制的藥物在體內(nèi)提供了期望的藥代動(dòng)力學(xué)牌）性質(zhì)，例如，因高滲透和滯留 (EPR)效應(yīng)而引起的增加的血液循環(huán)時(shí)間和增加的在實(shí)體瘤部位的積累。此外，在某些實(shí)施 方案中，LN可W用聚乙二醇包被表面W減少血清蛋白對(duì)LN的調(diào)理作用和導(dǎo)致的RES介導(dǎo) 的吸收，和/或用細(xì)胞特異性配體包被來提供祀向藥物遞送。 陽(yáng)07引對(duì)于全身性遞送，期望LN的C電位不是過度正的或負(fù)的。具有高正電荷的LN傾 向于與非祀細(xì)胞、組織和循環(huán)血漿蛋白非特異性相互作用，并且可引起細(xì)胞毒性?；蛘撸?有高負(fù)電荷的LN不能有效地包含NA(其本身帶負(fù)電荷），并且可觸發(fā)快速的RES介導(dǎo)的清 除，從而降低治療效果。具有中性至中度電荷的LN最適合用于體內(nèi)藥物和基因遞送。
[0073]本文中提供了具有增強(qiáng)的轉(zhuǎn)染活性的脂質(zhì)納米顆粒（LN)。脂質(zhì)納米顆?？蓪⑹杷?性分子分配在脂膜內(nèi)或?qū)⑺苄灶w?；蚍肿臃庋b在含水核屯、中。在某些實(shí)施方案中，LN制 劑包含脂質(zhì)的混合物，通常包括帶電荷的脂質(zhì)和中性脂質(zhì)，和任選地還包括PEG化脂質(zhì)和/ 或膽固醇。本公開內(nèi)容的LN制劑可包含季胺和叔胺的組合、膚例如短桿菌膚（A、B、C、D或 巧或RNA酶或DNA酶降解試劑例如蛋白酶K。在某些實(shí)施方案中，脂質(zhì)納米顆粒通過將具 有季胺頭基的陽(yáng)離子脂質(zhì)與具有叔胺頭基的陽(yáng)離子脂質(zhì)組合來產(chǎn)生。在某些實(shí)施方案中， 脂質(zhì)納米顆粒是小膚脂質(zhì)納米顆粒（SPLN)，并包含膚例如短桿菌膚或JTS1。在某些實(shí)施方 案中，脂質(zhì)納米顆粒包被有蛋白酶K，運(yùn)在血清存在的情況下增強(qiáng)轉(zhuǎn)染。為了便于參照，包含 短桿菌膚的SPLN在本文中稱為SPLN-G，包含JTS-1膚的SPLN在本文中稱為SPLN-J，包含 蛋白酶K的脂質(zhì)納米顆粒在本文中稱為PrKsome。還提供了運(yùn)些不同實(shí)施方案的組合。LN 具有小于300皿，或在特定實(shí)施方案中約50與約200皿之間的直徑。運(yùn)些LN顯示增強(qiáng)的轉(zhuǎn) 染和降低的細(xì)胞毒性，特別在見于全身性施用過程中的高血清條件下。LN適用于廣泛的目 前的治療劑和系統(tǒng)、血清穩(wěn)定性和祀向遞送，具有高轉(zhuǎn)染率。
[0074] 如本文中所用，術(shù)語"脂質(zhì)納米顆粒"是指由一種或多種脂質(zhì)組分形成的任何小囊 泡。本文中描述的LN制劑可包含陽(yáng)離子脂質(zhì)。陽(yáng)離子脂質(zhì)為在任何生理抑下具有凈正電 荷的脂質(zhì)。正電荷用于與帶負(fù)電荷的治療劑例如AS0通過靜電相互作用締合。
[0075] 適當(dāng)?shù)年?yáng)離子脂質(zhì)包括但不限于36-陽(yáng)-腫，N'-二甲氨基乙燒）-氨基甲 酷基]膽固醇鹽酸鹽值C-化〇1) ;1，2-二油酷基-3-S甲錠-丙烷值0TAP) ;1，2-二油 酷基-3-二甲錠-丙烷值0DAP);二甲基雙十八烷基漠化錠鹽值DAB) ;1，2-二月桂酷 基-sn-甘油-3-氯化乙基憐酸膽堿鹽值L-EPC) ;N-[l-(2,3-二油氧基）丙基]-N-N-N-S 甲基氯化錠值0TMA) ;N- [1- (2, 3-二油氧基）丙基]-N-N-N-二甲基氯化錠值0DMA); N，N-雙十八燒-N，N-二甲基氯化錠值0DAC) ;N-(l-(2,3-二油氧基）丙基）-N-2-(精 胺甲酯胺）乙基）-N，N-二甲基S氣乙酸錠值0SPA) ;1，2-二肉豆違基氧丙基-3-二 甲基徑乙基漠化錠值MRIE);雙十八烷基氨基甘氨酷精胺值0G巧；綴合于陽(yáng)離子修飾 基團(tuán)的中性脂質(zhì)；及其組合。此外，可使用許多可獲得的制劑中的陽(yáng)離子脂質(zhì)，例如 LIPOFECTIN⑧（來自GIBC0/B化），LIPOFECTAMINE? (來自GIBC0/ MRL)，siPORTNEOFX敏（來自AppliedBiosystems)，TRANSFECTAM廢（來自 Promega)和TRANSFECTIN?.(來自Bio-RadL油oratories,Inc.)。本領(lǐng)域技術(shù)人 員將承認(rèn)，更多的陽(yáng)離子脂質(zhì)適合用于包含在LN制劑中。本公開內(nèi)容的陽(yáng)離子脂質(zhì)可WW制劑中脂質(zhì)的約0至約80. 0摩爾百分率的濃度存在，或W制劑的約5. 0至約50. 0摩爾百 分率的濃度存在。
[0076] 在某些實(shí)施方案中，目前公開的LN制劑還包含陰離子脂質(zhì)。陰離子脂質(zhì)是在生理 抑下具有凈負(fù)電荷的脂質(zhì)。運(yùn)些陰離子脂質(zhì)，當(dāng)與陽(yáng)離子脂質(zhì)組合時(shí)，可用于減少LN的總 表面電荷，并引入LN雙層結(jié)構(gòu)的抑依賴性破裂，從而通過在酸性抑誘導(dǎo)非層狀相來促進(jìn) 核巧酸釋放，或誘導(dǎo)與細(xì)胞膜的融合。 陽(yáng)077] 適當(dāng)?shù)年庪x子脂質(zhì)的實(shí)例包括但不限于：脂肪酸例如油酸、亞油酸和亞麻酸；膽 醬醇半班巧酸醋；1，2-二-0-十四烷基-sn-甘油-3-憐酸-(1' -rac-甘油）（二酸PG); 1，2-二肉豆違基-sn-甘油-3-憐酸-(1' -rac-甘油）（鋼鹽）；1，2-二肉豆違基-sn-甘 油-3-憐酸-k絲氨酸（鋼鹽）；1-十六酷，2- (9Z，12Z)-十八碳二締酷-sn-甘油-3-憐酸 鹽；1，2-二油酷基-sn-甘油-3-[憐酸-rac-(l-甘油）]值0PG);二油酷基憐脂酸值0PA); 和1，2-二油酷基-sn-甘油-3-憐酸-k絲氨酸值0P巧；綴合于中性脂質(zhì)的陰離子修飾基 團(tuán)；及其組合。本公開內(nèi)容的陰離子脂質(zhì)W制劑的高至約60.0摩爾百分率，或制劑的約5.0 至約25. 0百分率的濃度存在。
[0078] 在某些實(shí)施方案中，帶電荷的LN對(duì)于轉(zhuǎn)染是有利的，但脫祀效應(yīng)例如細(xì)胞毒性和 RES-介導(dǎo)的吸收可發(fā)生。親水性分子例如聚乙二醇（PEG)可綴合于脂質(zhì)錯(cuò)并包含在本文中 描述的LN中W阻礙LN聚集或與膜相互作用?？蓪⒂H水性聚合物共價(jià)地鍵合于脂質(zhì)組分或 使用交聯(lián)劑將其綴合于官能團(tuán)例如胺。
[0079] 親水性聚合物的適當(dāng)綴合物包括但不限于聚乙締醇（PVA);聚山梨醋80 ;1，2-二 硬脂酷-sn-甘油-3-憐酸氨基乙醇-N-PEG2000值SPE-PEG2000) ;D-a-生育酪聚乙二醇 1000班巧酸鹽燈口6巧；二肉豆違酷基憐脂酷基乙醇胺斗662000〇^口6斗662000);和二棟桐 酷憐脂酷乙醇胺-PEG2000值PPE-PEG2000)。親水性聚合物可WW制劑的約0至約15. 0摩 爾百分率，或制劑的約5. 0至約10. 0摩爾百分率的濃度存在。使用的PEG的分子量為約 100 至約 10,OOODa，或約 100 至約 2,OOODa。
[0080] 本文中描述的LN還可包含中性和/或兩親性脂質(zhì)作為輔助脂質(zhì)。運(yùn)些脂質(zhì)用于 穩(wěn)定制劑，減少體內(nèi)清除，或增強(qiáng)轉(zhuǎn)染率?？稍谔抢绲幌抻谄咸烟恰⑸嚼娲?、薦糖、麥芽 糖、海藻糖、乳糖、纖維二糖、棉子糖、麥芽S糖、葡聚糖或其組合的溶液中配制LN化促進(jìn)溶 解穩(wěn)定性（lyost油ility)和/或低溫穩(wěn)定性。
[0081] 中性脂質(zhì)在生理抑具有0凈電荷?？蓪追N中性脂質(zhì)之一或其組合包含在本文 中公開的任何LN制劑中。
[0082]適當(dāng)?shù)闹行灾|(zhì)包括但不限于：憐脂酷膽堿（PC)、憐脂酷乙醇胺、神經(jīng)酷胺、腦巧 月旨、銷憐脂、腦憐脂、膽固醇、二酷甘油、糖基化二酷甘油、異戊締醇（prenol)、溶酶體PLA2 底物、N-酷基甘氨酸及其組合。
[0083]其它適當(dāng)?shù)闹|(zhì)包括但不限于憐脂酷膽堿、憐脂酸、憐脂酷乙醇胺、憐脂酷甘油、 憐脂酷膽堿和溶血憐脂酷乙醇胺；醬醇類例如膽固醇、脫氨膽固醇、谷固醇、霉菌固醇、馨葫 皂巧配基、羊毛醬締醇、豆固醇、7-締膽燒醇和去氨表雄酬；和銷脂類例如銷氨醇、神經(jīng)酷 胺類、銷憐脂、神經(jīng)節(jié)巧脂類、糖巧神經(jīng)銷脂類、銷憐脂、植物銷氨醇；及其組合。
[0084] 本文中描述的LN制劑還可包含致融性脂質(zhì)或致融性包衣W促進(jìn)膜融合。適當(dāng)?shù)?致融性脂質(zhì)的實(shí)例包括但不限于單油酸甘油醋、油酸、棟桐油酸、憐脂酸、憐酸肌醇4, 5-二 憐酸（PIP2)及其組合。
[00化]本文中描述的LN制劑還可包含陽(yáng)離子脂質(zhì)。運(yùn)樣的脂質(zhì)的頭基在性質(zhì)上可W是 伯胺、仲胺、叔胺或季胺。在某些實(shí)施方案中，LN包含叔胺與季胺的混合物。
[0086] 適當(dāng)?shù)氖灏坊|(zhì)包括但不限于：D0DAP;D0DMA;N，N-二甲基十六烷基胺值MHDA) 和DC-CH0L。適當(dāng)?shù)募景坊|(zhì)包括但不限于：D0TAP、D0TM和DDAB。多種氨基脂質(zhì)，特別 地叔和季陽(yáng)離子脂質(zhì)的組合對(duì)于治療劑的LN遞送是有益的。陽(yáng)離子脂質(zhì)可組合的高 達(dá)約60摩爾百分率的濃度存在。
[0087] 此處描述的LN制劑還可包含陽(yáng)離子聚合物或陽(yáng)離子聚合物的綴合物。陽(yáng)離子聚 合物或其綴合物可單獨(dú)使用或與脂質(zhì)納米載體組合使用。
[0088] 適當(dāng)?shù)年?yáng)離子聚合物包括但不限于：聚乙締亞胺（PEI);五乙締六胺牌HA);精 胺；精脈；聚a-賴氨酸）；聚（酷胺基胺）（PAMAM)樹狀聚合物；聚丙締亞胺樹狀聚合物； 聚（2-二甲氨基乙基）-甲基丙締酸醋（pDMAEMA);殼聚糖；S(2-氨乙基）胺及其甲基化 衍生物；及其組合。鏈長(zhǎng)度和分枝是多聚體遞送系統(tǒng)的實(shí)現(xiàn)的重要考慮因素。高分子量聚 合物例如PEI(MW25,000)可用作轉(zhuǎn)染劑，但受困于細(xì)胞毒性。低分子量PEI(MW600)不引 發(fā)細(xì)胞毒性，但因其不能促進(jìn)與核酸的穩(wěn)定凝聚而受限制。
[0089] 還可將陰離子聚合物滲入本文中公開的LN制劑。適當(dāng)?shù)年庪x子聚合物包括但不 限于：聚（丙基丙締酸）（PPAA);聚（谷氨酸）（PGA);藻酸鹽；葡聚糖；黃原膠；衍生聚合物； 及其組合。
[0090] 在某些實(shí)施方案中，LN制劑包括聚合物的綴合物?？蓪⒕Y合物與祀向試劑、親脂 性部分、膚、蛋白質(zhì)或增加總體治療功效的其它分子交聯(lián)。
[00川適當(dāng)?shù)慕宦?lián)劑包括但不限于：N-班伯酷亞胺3-巧-化晚基二硫代]-丙酸鹽 (SPD巧；3, 3'-二硫雙丙酷亞氨酸二甲醋值TB巧；二環(huán)己基碳二亞胺值CC);二異丙基碳二 亞胺值1C) ;1-乙基-3-[3-二甲基氨基丙基]碳二亞胺巧DC) ;N-徑基硫代班巧酷亞胺（橫 基-N服）；N' -N'-幾二咪挫（CDI) ;N-乙基-5-苯基異惡挫-3'橫酸鹽（伍德沃德氏試劑 K);及其組合。
[0092]LN制劑還可包含膚和/或蛋白質(zhì)。膚和蛋白質(zhì)，特別地來源于細(xì)菌和病毒或用作 抗生素劑的膚和/或蛋白質(zhì)，可幫助膜滲透?？蓪⒛w或蛋白質(zhì)與脂質(zhì)直接混合、共價(jià)連接或 用交聯(lián)劑綴合于脂質(zhì)部分。 W93] 適當(dāng)?shù)哪w和蛋白質(zhì)包括但不限于：短桿菌膚A、B、C、D和S;HA2 ;JTS-1 ;蛋白 酶K(PrK) ;trichorovin-Xlla燈V-Xlla);狂犬病病毒糖蛋白（RVG);白細(xì)胞介素-IP; HIV-化t;單純瘤疹病毒化SV)VP22蛋白；及其組合。在某些實(shí)施方案中，W約0至約40摩 爾百分率使用JTS-1和/或短桿菌膚。在某些實(shí)施方案中，通過與寡核巧酸直接混合或至 十六烷基異硫氯酸醋綴合將約0至約30摩爾百分率的濃度的P巧用于P巧的LN表面包被。
[0094] 祀向試劑至LN的添加提供了相較于被動(dòng)祀向法增加的效率。祀向包括特異性祀 向部分例如但不限于針對(duì)細(xì)胞表面受體的配體或抗體、膚、脂蛋白、糖蛋白、激素、維生素、 抗體、抗體片段、前藥W及運(yùn)些部分的綴合物或組合的滲入。
[0095] 在某些實(shí)施方案中，祀向效率的最大化包括利用適當(dāng)?shù)撵胂虿糠謱?duì)LN進(jìn)行表面 包被而非封裝祀向試劑。該方法最優(yōu)化與細(xì)胞表面受體的相互作用。
[0096] 應(yīng)理解可在合成過程中將祀向試劑直接滲入LN，或在隨后步驟中添加。祀向部分 上的官能團(tuán)W及治療性應(yīng)用的具體要求（例如，可降解的連接）決定至LN中的滲入的適當(dāng) 方法。不具有親脂性區(qū)域的祀向部分不能直接插入LN的脂雙層，并且需要在插入之前至脂 質(zhì)的預(yù)先綴合，或必須與LN形成靜電復(fù)合物。
[0097] 同樣地，在某些情況下，祀向配體不能直接連接于親脂性錯(cuò)。在運(yùn)些情況下，可將 交聯(lián)劑形式的分子橋用于促進(jìn)相互作用。在某些實(shí)施方案中，如果錯(cuò)定的祀向部分的空間 限制阻止與期望的生理祀的充分相互作用，則使用交聯(lián)劑是有利的。此外，如果祀向部分僅 在一定方向上具有功能（例如，單克隆抗體），則通過交聯(lián)劑至脂質(zhì)錯(cuò)的連接是有益的?？?將生物綴合的常規(guī)方法用于將祀向劑連接于LN。可將可還原的或可水解的連接用于阻止制 劑在體內(nèi)積累和隨后的細(xì)胞毒性。
[0098]LN制備的各種方法適合于合成本公開內(nèi)容的LN。例如，可使用乙醇稀釋、冷凍-解 凍、薄膜水合、超聲處理、擠壓、高壓均化、去垢劑透析、微流化、切向流滲濾、無菌過濾和/ 或冷凍干燥。此外，數(shù)種方法可用于減小LN的尺寸。例如，可在適合用于脂質(zhì)均化的任何 裝置例如AvestinEmulsiflexCS⑧裝置上進(jìn)行均化。可使用具有適當(dāng)?shù)目讖交?5至 0. 2ym)的聚碳酸醋膜在LipexBiomembrane擠壓機(jī)上進(jìn)行擠壓?？蛇M(jìn)行多個(gè)粒度減小 循環(huán)來使樣品內(nèi)的尺寸變化最小化。隨后可將所得的LN通過尺寸排阻柱例如Se地arose 化4B或通過切向流滲濾加工W純化LN。
[0099] 本文中描述的LN的任何實(shí)施方案還可在制備過程中包括乙醇。在LN制劑中滲入 約30-50%的乙醇使脂雙層去穩(wěn)定，并促進(jìn)帶電荷部分之間例如陽(yáng)離子脂質(zhì)與陰離子AS0 和siRNA之間的靜電相互作用。在施用之前稀釋于高濃度乙醇溶液中制備的LN?；蛘撸?通過透析或滲濾除去乙醇，運(yùn)也除去未被封裝的NA。 陽(yáng)100] 在某些實(shí)施方案中，期望對(duì)LN進(jìn)行滅菌。運(yùn)可在進(jìn)行或未進(jìn)行粗濾的情況下通過 將LN通過0. 2或0. 22ym無菌過濾器來實(shí)現(xiàn)。 陽(yáng)10U 可通過許多方法進(jìn)行LN的物理表征?？蓪?dòng)態(tài)光散射值L巧或原子力顯微鏡檢 查（AFM)用于測(cè)定平均直徑及其標(biāo)準(zhǔn)差。在某些實(shí)施方案中，特別期望LN具有約200nm的 直徑。通過C電位差計(jì)進(jìn)行的C電位測(cè)量在測(cè)定顆粒的相對(duì)穩(wěn)定性中是有用的。可利用 于去離子水或適當(dāng)?shù)木彌_液中稀釋的樣品進(jìn)行動(dòng)態(tài)光散射分析和C電位分析。低溫透射 電子顯微鏡（化yo-TEM)和掃描電子顯微鏡（SEM)可用于測(cè)定LN的詳細(xì)的形態(tài)學(xué)。 陽(yáng)102] 本文中描述的LN在冷凍下可穩(wěn)定數(shù)月。可使用標(biāo)準(zhǔn)方法冷凍干燥在合成與施用 之間需要長(zhǎng)期保存的LN。可在冷凍之前將冷凍保護(hù)劑例如10%薦糖添加至LN懸浮液W維 持制劑的完整性。為了長(zhǎng)期穩(wěn)定性，推薦冷凍干燥經(jīng)加載的LN制劑。 陽(yáng)103] 季胺和叔胺-陽(yáng)離子脂質(zhì)（QTS0ME)
[0104] 雖然LN的物理特性增強(qiáng)有孔腫瘤血管中的高滲透和滯留巧PR)，但內(nèi)涵體逃逸仍 然是常規(guī)LN制劑的挑戰(zhàn)。為此目的，已開發(fā)了包含用于核酸的復(fù)合的帶正電荷的基于季 胺或叔胺的陽(yáng)離子脂質(zhì)的脂質(zhì)納米顆粒?；诩景返年?yáng)離子脂質(zhì)具有永久性正電荷并且 能夠與核酸形成穩(wěn)定的靜電復(fù)合物。然而，叔胺-陽(yáng)離子脂質(zhì)是條件性電離的，并且它們 的正電荷在很大程度上受抑調(diào)節(jié)。本文中提供了包含季胺和叔胺-陽(yáng)離子脂質(zhì)的組合的 LN(QTsomes)，其提供了治療劑可籍W在內(nèi)涵體內(nèi)從LN釋放的機(jī)制。QTsome是條件性電離 的，并在內(nèi)涵體的酸性條件下促進(jìn)脂雙層破裂和寡核巧酸內(nèi)涵體釋放。季胺基-陽(yáng)離子脂 質(zhì)是永久性帶電荷的，從而確保脂質(zhì)與寡核巧酸之間的強(qiáng)相互作用，從而確保穩(wěn)定性。叔胺 和季胺陽(yáng)離子脂質(zhì)的組合提供了最適的抑反應(yīng)特征譜，而運(yùn)對(duì)于單獨(dú)的每一類脂質(zhì)是不 可能的。QTsome在轉(zhuǎn)染細(xì)胞方面比常規(guī)陽(yáng)離子脂質(zhì)體更具活性。 陽(yáng)1化]QTsome顯示出比標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)離子脂質(zhì)制劑更高的轉(zhuǎn)染活性。細(xì)調(diào)季胺與叔胺-陽(yáng)離 子脂質(zhì)之間的平衡允許精確地控制核酸至胞質(zhì)溶膠中的釋放。在具體實(shí)施方案中，特定釋 放參數(shù)的使用提供了可籍W使基于核酸的治療劑的活性最大化的技術(shù)。例如，應(yīng)指出，叔 胺-陽(yáng)離子脂質(zhì)當(dāng)單獨(dú)使用時(shí)，具有抑依賴性電離特征譜。由于單一脂質(zhì)種類可能不提供 LN電荷特征的期望水平的控制，因此可使用叔胺和季胺-陽(yáng)離子脂質(zhì)的組合，從而導(dǎo)致運(yùn) 樣的組合在siRNA遞送上的顯著提高的活性。
[0106] 圖1描述了叔胺和季胺陽(yáng)離子脂質(zhì)的組合的相對(duì)蛋光素