。
[00引]實(shí)施例3:
[003引將lOmg的疏水性藥物阿霉素（DO訝加入到200mgP-11的立氣乙醇溶液中，磁力 攬拌下于室溫加入20mL雙蒸水，繼續(xù)攬拌，蒸發(fā)除去S氣乙醇后得到負(fù)載D0X的PECT納米 粒分散液（簡(jiǎn)稱為PECT/D0X納米粒）。所得N-11納米粒的粒徑分布如圖2所示。將所得 到的納米粒水溶液凍干，得到載藥納米粒凍干粉。
[003引實(shí)施例4 :
[0034] 裝置與操作同實(shí)施例3,將疏水藥物改變?yōu)樽仙即迹≒T訝、多西他賽燈XT)、喜樹堿 (CPT)、徑基喜樹堿（HCPT)、長(zhǎng)春花堿（VLB)、地塞米松值XM)、姜黃素（CUR)、博來霉素度LM) 中的一種或多種的組合，使用表1中制備的含環(huán)酸側(cè)基的PECT共聚物，制備出表2中的載 藥納米粒：
[0035] 表2.PECT共聚物載藥納米粒
[0036]

[003引實(shí)施例5 :
[0039] 首先，將0.24g透明質(zhì)酸（HA)(數(shù)均分子量7邸a)溶解在5血無水二甲基亞諷 值MS0)中，隨后加入0. 12g1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽巧DC)和0. 14g N-徑基班巧酷亞胺（N服)，在室溫下反應(yīng)化后，加入0.077g氨丙基咪挫（API)。在室溫下 繼續(xù)反應(yīng)24h后，在蒸饋水透析72h，之后將產(chǎn)品冷凍干燥2地，得到氨丙基咪挫修飾的透明 質(zhì)酸（API-HA)。核磁譜圖示例如圖3A，可W明顯看到咪挫環(huán)氨質(zhì)子的特征核磁共振峰。
[0040] 其次，采用氯胺T方法對(duì)API-HA進(jìn)行放射性艦標(biāo)記。將50mgAPI-HA溶解于2血 憐酸緩沖溶液中（抑=8. 5, 5mmol)，隨后加入10yL放射性艦-131 ("4)溶液和2mg/mL的 氯胺T溶液25yL。在室溫下反應(yīng)5min后，加入lOmg/mL的焦亞硫酸鋼50yL澤滅反應(yīng)，反 應(yīng)溶液用甲醇沉淀，得到"II標(biāo)記的透明質(zhì)酸（H-W。利用丫-計(jì)數(shù)儀檢測(cè)放射性艦-131 標(biāo)記的透明質(zhì)酸的標(biāo)記與純化。如圖3B和3C，經(jīng)計(jì)算H-5的艦標(biāo)記率為98. 5%，分離后純 度為98%。
[00川實(shí)施例6:
[0042] 裝置與操作同實(shí)施例5,改變透明質(zhì)酸的分子量和相應(yīng)的馨合劑，制備出表3中放 射性標(biāo)記的透明質(zhì)酸：
[0043] 表3.放射性標(biāo)記透明質(zhì)酸
[0044]
[0045]
[0046] 實(shí)施例7 :
[0047] 在體積為2mL的小瓶中配制N-11納米粒分散液，然后加入放射性同位素標(biāo)記的 透明質(zhì)酸H-5,形成具有流動(dòng)性的溶膠，其中N-11納米粒占溶膠的質(zhì)量百分含量為10%~ 35%，H-5占溶膠的質(zhì)量百分含量為5% ;將小瓶置于恒溫水浴中緩慢升溫，升溫步長(zhǎng)rC， 每一溫度點(diǎn)恒溫2min，翻轉(zhuǎn)小瓶，觀察小瓶中膠體的流動(dòng)性；小瓶中膠體由流動(dòng)狀態(tài)轉(zhuǎn)變 為凝膠狀態(tài)的溫度為該樣品的Sol-Gel相轉(zhuǎn)變溫度；繼續(xù)升溫，小瓶中的膠體由凝膠狀態(tài) 轉(zhuǎn)變?yōu)榱鲃?dòng)狀態(tài)的溫度為該樣品的Ge^Sol相轉(zhuǎn)變溫度，連接不同濃度納米粒分散液的相 轉(zhuǎn)變溫度，得到G-8的Ge^Sol轉(zhuǎn)變相圖，如圖4所示，凝膠的相轉(zhuǎn)變溫度范圍為25°C~ 45 〇C。
[004引 實(shí)施例8
[0049] 裝置與操作同實(shí)施例7,采用表2中的PECT載藥納米粒與表3中放射性標(biāo)記的 透明質(zhì)酸，改變PECT載藥納米粒和透明質(zhì)酸占凝膠的質(zhì)量百分含量，得到表4中的復(fù)合凝 膠：
[0050] 表4.溫敏原位復(fù)合凝膠
[0051]
[005引實(shí)施例9 :
[005引利用克隆存活分析方法，評(píng)價(jià)阿霉素的放射增敏作用。W含10%胎牛血清（FBS;Bioc虹omAg，Germany)的DEME(Sigma-Al化ich，USA)為基礎(chǔ)培養(yǎng)液，將肝癌細(xì)胞0fepG2細(xì) 胞，中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所）W500-4000個(gè)/mL細(xì)胞濃度接種于6孔板中，置于 37°C、5 %C02、飽和濕度條件下培養(yǎng)；當(dāng)細(xì)胞貼壁后，用阿霉素、N-11陽CT/D0X納米粒與H-5 放射性標(biāo)記的透明質(zhì)酸處理4化后，用新鮮的培養(yǎng)液置換含有治療劑的培養(yǎng)液。繼續(xù)培養(yǎng) 10天后，用4%的福爾馬林溶液固定15min后，用結(jié)晶紫染色30min。多于50個(gè)細(xì)胞的克隆 區(qū)域在顯微鏡下計(jì)數(shù)，集落形成率和存活系數(shù)通過W下公式計(jì)算：
[0054]
[00 巧]
[0056] 結(jié)果如圖5所示，在放射劑量高于2. 0yCi時(shí)，N-11陽CT/D0X納米粒與H-5聯(lián)合 處理組的存活系數(shù)顯著低于單純H-5處理組，因此N-11陽CT/D0X納米粒表現(xiàn)出顯著的放射 增敏作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于同步放化療的溫敏原位復(fù)合凝膠，其特征在于，凝膠由負(fù)載疏水性化療藥 物的含環(huán)醚側(cè)基聚酯-聚乙二醇-含環(huán)醚側(cè)基聚酯兩親性三嵌段共聚物（PECT)納米粒、 放射性同位素標(biāo)記的透明質(zhì)酸與水組成，其中負(fù)載疏水性化療藥物的PECT納米粒占凝膠 的質(zhì)量百分含量為10%~50%，放射性同位素標(biāo)記的透明質(zhì)酸占凝膠的質(zhì)量百分含量為 0? 5% ~10%〇2. 如權(quán)利要求1所述的溫敏原位復(fù)合凝膠，其特征在于，所述的負(fù)載疏水性化療藥物 的PECT納米粒的載藥量為0? 5%~10%，平均粒徑為20nm~200nm。3. 如權(quán)利要求1所述的溫敏原位復(fù)合凝膠，其特征在于，所述的放射性同位素選 自于粒子發(fā)射體，包括镥-177 (mLu)、釔-90 〇〇、錸-188 (188Re)、銅-64 (64Cu)或 碘-131 (131I)，在透明質(zhì)酸上進(jìn)行放射性標(biāo)記，放射性核素的標(biāo)記率為71. 6%~98. 5%。4. 如權(quán)利要求1所述的溫敏原位復(fù)合凝膠，其特征在于，所述的含環(huán)醚側(cè)基聚酯嵌 段為1，4, 8-三氧雜螺[4. 6]-9-^烷酮（TOSUO)與己內(nèi)酯或丙交酯或乙交酯或它們的 混合物的共聚物，平均相對(duì)分子質(zhì)量為400至45000,聚酯嵌段占PECT的質(zhì)量百分含量為 30%~80%，而TOSUO占聚酯嵌段的質(zhì)量百分含量為1%至100% ;所述的聚乙二醇嵌段的 平均相對(duì)分子質(zhì)量為200至30000,占PECT的質(zhì)量百分含量為20%至70%。5. 如權(quán)利要求1所述的溫敏原位復(fù)合凝膠，其特征在于，所述的透明質(zhì)酸的分子量為 5000 ~1000000。6. 如權(quán)利要求1所述的溫敏原位復(fù)合凝膠，其特征在于，所述的化療藥物選自于疏 水性藥物包括阿霉素（DOX)、紫杉醇（PTX)、多西他賽（TXT)、喜樹堿（CPT)、羥基喜樹堿 (HCPT)、長(zhǎng)春花堿（VLB)、地塞米松（DXM)、姜黃素（CUR)、博來霉素（BLM)中的一種或多種的 組合。7. 如權(quán)利要求1所述的溫敏原位復(fù)合凝膠的制備方法，其特征在于，將負(fù)載疏水性化 療藥物的PECT納米粒分散在水中形成納米粒分散液，加入放射性同位素標(biāo)記的透明質(zhì)酸， 形成具有流動(dòng)性的溶膠，溶膠-凝膠的相轉(zhuǎn)變溫度范圍為20°C~45°C。8. 如權(quán)利要求1所述的溫敏原位復(fù)合凝膠的應(yīng)用，其特征在于，負(fù)載疏水性化療藥物 的PECT納米粒和放射性同位素標(biāo)記的透明質(zhì)酸與水形成的具有流動(dòng)性的溶膠，通過溫度 變化于20°C~45°C形成凝膠，用于同步控制化療藥物的釋放和放射性同位素的輻射。9. 如權(quán)利要求1所述的溫敏原位復(fù)合凝膠的應(yīng)用，其特征在于，在凝膠的溶膠態(tài)時(shí)加 載各種性質(zhì)的物質(zhì)，如親水性或疏水性化療藥物、蛋白質(zhì)、多肽、多糖、酶、細(xì)胞等，形成液體 狀態(tài)組合物，通過溫度變化于20°C~45°C形成凝膠，用于同步控制多種治療劑的釋放，或 細(xì)胞、酶的固定和培養(yǎng)。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種用于同步放化療的溫敏原位復(fù)合凝膠及其制備方法與應(yīng)用，具體是凝膠由負(fù)載疏水性化療藥物的含環(huán)醚側(cè)基聚酯-聚乙二醇-含環(huán)醚側(cè)基聚酯兩親性三嵌段共聚物(PECT)納米粒、放射性同位素標(biāo)記的透明質(zhì)酸與水組成，其中負(fù)載疏水性化療藥物的PECT納米粒占凝膠的質(zhì)量百分含量為10％～50％，放射性同位素標(biāo)記的透明質(zhì)酸占凝膠的質(zhì)量百分含量為0.5％～10％；在溫度變化過程中，于20℃～45℃能夠發(fā)生溶膠-凝膠可逆相轉(zhuǎn)變，從而為化療藥物和放療劑以及其它多種治療劑的同步遞送提供適宜的方法，或?yàn)榧?xì)胞和酶的固定和培養(yǎng)提供適宜的材料和技術(shù)。
【IPC分類】A61K31/704, A61K47/36, A61P35/00, A61K47/34, A61K103/32, A61K51/06, A61K101/00, A61K9/06, A61K51/12
【公開號(hào)】CN105213297
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510658002
【發(fā)明人】鄧聯(lián)東, 黃平升, 董岸杰
【申請(qǐng)人】天津大學(xué)
【公開日】2016年1月6日
【申請(qǐng)日】2015年10月13日