益智葉提取物在制備預(yù)防、治療肝損傷保健品或藥物上的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】[0001] 本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種益智葉提取物在制備預(yù)防、治療肝損傷保健 品或藥物上的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 肝臟疾病是影響人類健康的最為常見的疾病之一，從各種途徑進(jìn)入人體的外源性 化學(xué)物質(zhì)和人體代謝產(chǎn)生的有毒有害物質(zhì)最終都在肝內(nèi)轉(zhuǎn)化或貯留，這些均可引起急性、 慢性肝損傷，從而導(dǎo)致肝細(xì)胞不同程度凋亡、炎癥、纖維化、甚至壞死等病理改變。肝損傷是 多種因素如毒物（cci4、ap、1C)的中間產(chǎn)物與大分子物質(zhì)共價(jià)結(jié)合、缺氧、脂質(zhì)過氧化、細(xì)胞 內(nèi)鈣穩(wěn)態(tài)失調(diào)和內(nèi)毒素相互作用的結(jié)果，而非單一的作用。
[0003] 對(duì)于肝臟疾病的治療應(yīng)包括：去除致病因素、保護(hù)肝臟正常結(jié)構(gòu)和功能、糾正各種 病理生理的狀態(tài)，以及改善和緩解臨床癥狀等。目前，對(duì)肝臟疾病的防治已為全世界所關(guān) 注，如何進(jìn)行有效地預(yù)防，不斷地開發(fā)和尋找療效肯定、價(jià)格低廉的保肝護(hù)肝藥成為許多醫(yī) 藥工作者的普遍共識(shí)。從天然植物中篩選出具有保肝護(hù)肝的藥物現(xiàn)已成為研究熱點(diǎn)。
[0004]四氯化碳（CC14)肝損傷模型是化學(xué)性肝損傷的經(jīng)典模型，能準(zhǔn)確反映肝細(xì)胞的功 能、代謝及形態(tài)學(xué)變化，具有重復(fù)性好等特點(diǎn)，是研究化學(xué)性急性肝損傷動(dòng)物模型中的常用 模型。公認(rèn)的其誘導(dǎo)肝損傷的機(jī)制為：四氯化碳（CC14)在肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上細(xì)胞色素P450 的作用下轉(zhuǎn)化為自由基，該自由基可以與細(xì)胞內(nèi)的生物大分子如核酸、蛋白、脂質(zhì)發(fā) 生共價(jià)結(jié)合，影響細(xì)胞重要的生理過程(如影響脂質(zhì)代謝，與DNA的結(jié)合等)。在有氧環(huán)境 下，?CC13與氧結(jié)合生成活性更強(qiáng)的CC1 302 ?，后者可引發(fā)脂質(zhì)的過氧化鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，破壞多 不飽和脂肪酸，尤其在含豐富磷脂的細(xì)胞膜和膜樣結(jié)構(gòu)如線粒體和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上，導(dǎo)致膜通透 性的改變，引起細(xì)胞內(nèi)鈣環(huán)境穩(wěn)態(tài)的紊亂，從而加重細(xì)胞損傷。
[0005] 肝細(xì)胞損傷后，主要分布在肝細(xì)胞內(nèi)的谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT)和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT)就 會(huì)流入血液，出現(xiàn)血清中的GOT和GPT活性升高的現(xiàn)象，且只要有1%肝細(xì)胞壞死，就可使血 清中GPT活性升高1倍。因此，血清GOT和GPT常作為急性或活動(dòng)性肝病中最敏感的檢測指 標(biāo)，兩者含量可用于肝病的篩查，也可用于判斷、評(píng)價(jià)肝病的臨床療效。MDA是脂質(zhì)過氧化終 產(chǎn)物，可嚴(yán)重破壞細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)，導(dǎo)致細(xì)胞腫脹、凋亡、甚至壞死，其含量高低可反應(yīng)氧化的損 傷程度。S0D是細(xì)胞內(nèi)主要清除自由基的抗氧化酶，其可抑制自由基啟動(dòng)脂質(zhì)過氧化反應(yīng)， 從而保護(hù)細(xì)胞膜。因此，MDA含量與S0D活性可作為衡量脂質(zhì)過氧化程度的指標(biāo)，間接反映 機(jī)體組織、細(xì)胞損傷的程度。通過檢測小鼠肝組織勻漿中的S0D活性及MDA含量可反映出 藥物對(duì)肝細(xì)胞的保護(hù)作用。因此，以血清GPT、G0T、肝組織S0D活性及MDA含量作為指標(biāo)來 探討藥物對(duì)肝臟的保護(hù)作用是非常有意義的。
[0006]益智（WjOiWaMiq.)，系姜科（Zingiberaceae)山姜屬（WjOiWa Roxb.)植物，主要分布于我國海南、廣東、廣西等地。其干燥成熟果實(shí)益智（Fructus AlpiniaeOxyphyllae)，被譽(yù)為四大南藥之一，具有十分重要的藥用價(jià)值，且屬于藥食同源 品種，因此具有十分廣闊的開發(fā)前景。益智果實(shí)作為一門傳統(tǒng)中藥，被歷版《中國人民共和 國藥典》收載，其味辛、性溫，歸脾、腎經(jīng)。有溫脾止瀉，攝唾涎，暖腎，固精縮尿的功能。主治 脾寒泄瀉，腹中冷痛，口多唾涎，腎虛遺尿，小便頻數(shù)，遺精白濁。
[0007]近年來，對(duì)益智（J力Miq.)的研究報(bào)道較多，也更系統(tǒng)，其中主要 是對(duì)益智果實(shí)的研究。益智果實(shí)的傳統(tǒng)功效被我國歷代中醫(yī)藥學(xué)家熟練地運(yùn)用于臨床，而 近年來對(duì)其又有了新的進(jìn)展。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，益智果實(shí)還具有舒張血管、強(qiáng)心、抗癌、 抗過敏、抗氧化、抗衰老、抗?jié)?、?zhèn)靜、鎮(zhèn)痛、提高免疫力以及神經(jīng)保護(hù)等多方面藥理活性。 益智果實(shí)中主要成分為倍半萜類、其次為黃酮類、二芳基庚烷類、留醇及其苷類化合物。
[0008] 查閱大量文獻(xiàn)可發(fā)現(xiàn)，對(duì)益智的葉子研究報(bào)道較少。易美華等研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)提取揮 發(fā)油后的益智果實(shí)及其莖、葉的提取物對(duì)豬油脂質(zhì)均有較強(qiáng)的抗氧化作用；且均對(duì)超氧陰 離子自由基有清除作用，清除能力依次為：益智的葉、益智的莖、提取揮發(fā)油后的益智果實(shí)。 但目前關(guān)于益智葉提取物用于治療肝損傷方面的研究并未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 本發(fā)明目的在于提供一種益智葉提取物在制備預(yù)防、治療肝損傷保健品或藥物上 的應(yīng)用。
[0010] 基于以上目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案： 益智葉提取物在制備預(yù)防、治療肝損傷保健品或藥物上的應(yīng)用。
[0011] 具體的，所述益智葉提取物為益智葉的乙酸乙酯部位萃取物和/或正丁醇部位萃 取物。
[0012] 具體的，所述益智葉提取物是由如下方法制得：取干燥益智葉，剪碎，然后加入到 乙醇中（使益智葉完全浸沒于乙醇中），加熱提取，提取液經(jīng)濃縮干燥得乙醇總浸膏；將乙醇 總浸膏分散于水中，依次用乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液揮干溶劑，分別得到乙酸乙酯部 位萃取物、正丁醇部位萃取物。
[0013] 上述制備乙醇總浸膏時(shí)，加入的乙醇濃度為75V%，加熱溫度不超過55°C(以55°C 為宜)，加熱提取3次，每次3h。
[0014] 為證實(shí)上述益智葉萃取物的保肝作用，本發(fā)明采用了四氯化碳誘導(dǎo)小鼠急性肝損 傷模型，考查其對(duì)肝損傷的預(yù)防和/或治療作用。試驗(yàn)結(jié)果表明：益智葉乙酸乙酯部位萃取 物及正丁醇部位萃取物均具有一定保肝活性。
【附圖說明】
[0015] 圖1為益智葉不同部位萃取物不同劑量對(duì)小鼠血清GPT與GOT活力的影響； 圖2為益智葉不同部位萃取物不同劑量對(duì)小鼠肝組織中MDA含量的影響； 圖3為益智葉不同部位萃取物不同劑量對(duì)小鼠肝組織中S0D活力的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步地詳細(xì)介紹，但本發(fā)明的保護(hù)范圍 并不局限于此。
[0017] 實(shí)施例1 益智葉的乙酸乙酯部位萃取物是由以下方法獲得：取3400 g干燥益智葉，剪碎后，加 入75V%乙醇(每次加入的乙醇體積均以完全浸沒益智葉為準(zhǔn))，55°C提取3次，每次3 h，過 濾，合并濾液，濃縮干燥即得益智葉乙醇總浸膏，得率見表1。將乙醇總浸膏分散于少量水 中，用等體積的乙酸乙酯溶劑進(jìn)行萃取，收集萃取液，揮干溶劑乙酸乙酯，即得乙酸乙酯部 位萃取物，得率見表1。
[0018] 實(shí)施例2 益智葉的正丁醇部位萃取物由以下方法獲得：取實(shí)施例1中乙酸乙酯萃取過后的剩余 溶液，再用正丁醇進(jìn)行萃取，收集萃取液，揮干溶劑正丁醇，即得正丁醇部位萃取物，得率見 表1。
[0019] 表1益智葉不同部位萃取物的得率情況
效果實(shí)驗(yàn)：益智葉提取物的保肝護(hù)肝試驗(yàn) 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：成年昆明小鼠，雌雄各半，體重20 ± 2g。
[0020] 1. 2主要試劑：谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT，批號(hào)20150709)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT，批號(hào) 20150709)、超氧化物歧化酶（S0D，批號(hào)20150717)、丙二醛（MDA，批號(hào)20150718);以上試 劑均為南京建成生物工程