脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]目前，臨床上對于鼓膜修復(fù)主要采用自體顳肌筋膜進(jìn)行修復(fù)，也有采用動(dòng)物源性生物材料進(jìn)行修復(fù)，由于存在二次損傷和異位組織瘢痕化的問題，修復(fù)效果難以滿意。筋膜組織和鼓膜組織結(jié)構(gòu)差異較大，因此在修復(fù)結(jié)果上僅僅完成了外耳與中耳的阻隔作用，且修復(fù)為瘢痕修復(fù)，對鼓膜原有的聲音空氣傳導(dǎo)功能影響很大。
[0003]由此可見，現(xiàn)有技術(shù)中的鼓膜修復(fù)材料修復(fù)效果較差，僅能起到阻隔的作用，對鼓膜原有的聲音空氣傳導(dǎo)功能影響很大，亟待研發(fā)一種新的鼓膜修復(fù)材料制備方法，以克服目前制造鼓膜修復(fù)材料的方法的缺陷。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問題為提供一種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的制備方法，該制備方法拓寬了脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的原料來源，降低了脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的成本，制備的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料具有良好的相容性，可以完成組織完整修復(fù)以及鼓膜功能的修復(fù)。
[0005]為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的制備方法，其包括以下步驟:
步驟A:選取哺乳動(dòng)物體或人體的真皮組織；
步驟B:通過對比所述真皮組織和鼓膜組織的結(jié)構(gòu)，確定所述真皮組織結(jié)構(gòu)中與所述鼓膜組織的結(jié)構(gòu)相近且相鄰3層的真皮組織α層結(jié)構(gòu)；
步驟C:去除所述真皮組織中除真皮組織α層結(jié)構(gòu)以外的其他層，獲得真皮組織α層初級原料；
步驟D:對所述真皮組織α層初級原料進(jìn)行脫細(xì)胞處理，獲得脫細(xì)胞真皮組織α層初級原料；
步驟Ε:將經(jīng)步驟D處理的脫細(xì)胞真皮組織α層初級原料在無菌、恒溫條件下，于平衡原液中混搖一定時(shí)間，復(fù)原所述脫細(xì)胞真皮組織α層初級原料中膠原蛋白、活性因子的生物性能；
步驟F:將經(jīng)步驟Ε中處理后的脫細(xì)胞真皮組織的α層初級原料，在平衡液中處理，通過改變蛋白質(zhì)膜的通透性和補(bǔ)充平衡離子的方式，封閉真皮組織α層初級原料的蛋白質(zhì)的電位點(diǎn)，得到脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料。
[0006]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述步驟F中，通過組合離子或者單一離子來調(diào)平所述脫細(xì)胞后的真皮組織α層初級原料的電位差，達(dá)到封閉所述脫細(xì)胞后的真皮組織α層初級原料的蛋白質(zhì)的電位點(diǎn)的目的。
[0007]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述步驟D中，在脫細(xì)胞處理的過程中，將1、V、VI型膠原蛋白、堿性成纖維細(xì)胞生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子-β、纖維連接蛋白固定。
[0008]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述步驟C中，利用固定液對真皮組織α層初級原料進(jìn)行固定。
[0009]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述步驟D中，去除真皮組織α層初級原料免疫性，保留天然組織立體框架的膠原蛋白和彈力纖維物質(zhì)，并維持其天然的材料的框架結(jié)構(gòu)。
[0010]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述步驟Ε中，所述恒溫條件中，溫度選擇范圍為16~37攝氏度。
[0011]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所述步驟Ε中，于平衡液中混搖的時(shí)間為4~24小時(shí)。
[0012]本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例中，所制備的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料直接用于人或動(dòng)物的移植。
[0013]本發(fā)明脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的制備方法的有益效果為:
本發(fā)明脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的制備方法，根據(jù)真皮特點(diǎn)及鼓膜組織結(jié)構(gòu)的特殊性進(jìn)行改進(jìn)，制備出與人體鼓膜結(jié)構(gòu)、組織特點(diǎn)極為相近的鼓膜修復(fù)材料，在完成組織完整性修復(fù)的基礎(chǔ)上，鼓膜功能得到了基本的修復(fù)，使臨床效果得到大大提高，拓寬了制備脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的原料來源，降低了制備該修復(fù)材料的成本。
【附圖說明】
[0014]上述僅是本發(fā)明技術(shù)方案的概述，為了能夠更清楚了解本發(fā)明，以下結(jié)合附圖與【具體實(shí)施方式】對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
[0015]圖1為本發(fā)明的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜貼補(bǔ)重建鼓膜后2周的照片圖；
圖2和圖3為本發(fā)明的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜貼補(bǔ)法重建鼓膜術(shù)后6周的照片圖；
圖4為鼓膜穿孔后，利用本發(fā)明制備的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料采取內(nèi)植法進(jìn)行鼓膜重建的照片圖；
圖5為本發(fā)明制備的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜內(nèi)植法重建鼓膜后2周的照片圖；
圖6為本發(fā)明制備的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜內(nèi)植法重建鼓膜后6周的窄屏照片圖；
圖7為本發(fā)明制備的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜內(nèi)植法重建鼓膜術(shù)后6周的照片圖；
圖8為本發(fā)明制備的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)移植前的照片圖；
圖9為本發(fā)明制備的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)植入豚鼠耳重建鼓膜術(shù)后2周的照片圖；
圖10為本發(fā)明制備的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)處理后植入豚鼠耳重建鼓膜術(shù)后6周照片圖； 圖11為本發(fā)明的制備的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)處理后植入豚鼠耳重建鼓膜術(shù)后8周的照片圖；
圖12為本發(fā)明制備的外耳組織修復(fù)材料移植前的照片圖；
圖13為本發(fā)明制備的外耳組織修復(fù)材料移植前局部表面的照片圖；
圖14為正常鼓膜外耳道面的照片圖；
圖15為本發(fā)明制備的外耳組織修復(fù)材料移植后8周外耳道面的照片圖；
圖16為正常鼓膜鼓室面的照片圖；
圖17為本發(fā)明制備的外耳組織修復(fù)材料移植后8周鼓室面的照片圖；
圖18為本發(fā)明制備的外耳組織修復(fù)材料移植后8周鼓室面照片圖。
【具體實(shí)施方式】
[0016]下面通過附圖和實(shí)施例，對本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步的詳細(xì)描述。
[0017]本發(fā)明的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的制備方法，其包括以下步驟:
步驟A:選取哺乳動(dòng)物體或人體的真皮。
[0018]哺乳動(dòng)物體為豬、牛、羊等，較佳的，選取人體上的真皮，哺乳動(dòng)物不同部位的真皮的結(jié)構(gòu)組成以及功能存在差異，且不同部位真皮所含基質(zhì)蛋白及各種因子的類型、數(shù)量不同。根據(jù)不同部位真皮的組成結(jié)構(gòu)，功能以及各種因子含量的不同，有針對性的選擇相應(yīng)部位的真皮。
[0019]步驟B:通過對比所述真皮組織和鼓膜組織的結(jié)構(gòu)，確定所述真皮組織結(jié)構(gòu)中與所述鼓膜組織的結(jié)構(gòu)相近且相鄰3層的真皮組織α層結(jié)構(gòu)；
具體的講，鼓膜組織結(jié)構(gòu)基本可以分為3層，分別是:上皮細(xì)胞層、致密纖維層、內(nèi)皮粘膜細(xì)胞層。其中，鼓膜外層是皮膚上皮細(xì)胞，主要成分為膠原蛋白和皮膚細(xì)胞，1、V型膠原蛋白分層有序地排列，其中，直徑統(tǒng)一與規(guī)則排列的I型膠原蛋白是維持鼓膜上皮細(xì)胞生長排列的重要因素；中間層為致密的1、V型膠原蛋白，其間按一定規(guī)律排列彈力纖維和糖蛋白；VI型膠原蛋白以網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)構(gòu)成鼓膜內(nèi)粘膜層的基質(zhì)層，對鼓膜基質(zhì)的有序排列、粘膜細(xì)胞生長起著重要作用。
[0020]本發(fā)明通過電子顯微鏡對鼓膜組織結(jié)構(gòu)與大量的真皮層組織結(jié)構(gòu)比對、膠原蛋白類型定性比對、膠原蛋白排列方向順序比對，在250層真皮組織結(jié)構(gòu)中確定了與鼓膜組織結(jié)構(gòu)