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      脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的制備方法_3

      文檔序號:9479906閱讀:來源:國知局
      胞附著,標(biāo)尺:50μπι,工作電壓(HV):15.0kv,束斑大小控制參數(shù)(Spot):
      5.0,放大倍數(shù)(Mag):755倍,工作距離(WD): 11.3mm,工作壓強(qiáng)(Pressure):515.7Pa,工作溫度(Tem):0°C,ADM第1天。請配合參閱圖9所示,本發(fā)明的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)處理后植入豚鼠耳重建鼓膜術(shù)后2周,可見表面有少量成纖維細(xì)胞附著(一),標(biāo)尺:20 μ m,工作電壓(HV):15.0kv,束斑大小控制參數(shù)(Spot):5.0,放大倍數(shù)(Mag):1906倍,工作距離(WD):12.5mm,工作壓強(qiáng)(Pressure):475.1Pa,工作溫度(Tem):0°C,ADM第2周。請配合參閱圖10所示,本發(fā)明的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)處理后植入豚鼠耳重建鼓膜術(shù)后6周,可見表面有大量細(xì)胞附著,形成單層(一),標(biāo)尺:50 μ m,工作電壓(HV): 15.0kv,束斑大小控制參數(shù)(Spot):5.0,放大倍數(shù)(Mag):973 倍,工作距離(WD):12.7mm,工作壓強(qiáng)(Pressure):515.7Pa,工作溫度(Tem):0°C,ADM第6周。請配合參閱圖11所示,本發(fā)明的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)處理后植入豚鼠耳重建鼓膜術(shù)后8周,可見表面附著有大量細(xì)胞,形成多層(一),標(biāo)尺:20 μπι,工作電壓:15.0kv,束斑大小控制參數(shù):5.0,放大倍數(shù):2200倍,工作距離:11.5mm,工作壓強(qiáng):556.1Pa,工作溫度0°C,ADM第8周。掃描電鏡觀察可見表面光滑,局部有乳頭樣突起,存在大量交織排列的膠原纖維,未見細(xì)胞樣結(jié)構(gòu)。正常豚鼠鼓膜掃描電鏡觀察可將外耳道面的鱗狀上皮細(xì)胞、中間的纖維層和鼓室面的扁平上皮細(xì)胞。豚鼠鼓膜穿孔后植入脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜修復(fù)材料進(jìn)行鼓膜重建術(shù)后8周,可見膠原纖維,外耳道面有大量的鱗狀上皮細(xì)胞,鼓室面有大量扁平上皮細(xì)胞存在,脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜修復(fù)材料中部可見大量未成熟的扁平上皮細(xì)胞。
      [0037]實施例2
      請配合參閱圖12所示,本發(fā)明的外耳組織修復(fù)材料移植前表面光滑,可見大量交織排列的膠原纖維(一),無任何細(xì)胞附著,標(biāo)尺:30μπι。請配合參閱圖13所示,本發(fā)明的外耳組織修復(fù)材料移植前局部表面有少量乳頭樣結(jié)構(gòu)(一),可見大量交織排列的膠原纖維,無任何細(xì)胞附著,標(biāo)尺:30μπι。請配合參閱圖14所示,正常鼓膜外耳道面,可見鱗狀上皮脫肩(一)和脫髓鞘的鱗狀上皮細(xì)胞(▲),標(biāo)尺:30μπι。請配合參閱圖15所示,本發(fā)明的外耳組織修復(fù)材料移植后8周外耳道面,可見膠原纖維,表面有大量鱗狀上皮細(xì)胞(一),標(biāo)尺:30 μ m0請配合參閱圖16所示,正常鼓膜鼓室面,可見放射狀纖維,表面有大量扁平上皮細(xì)胞(一),標(biāo)尺:30μπι。請配合參閱圖17所示,本發(fā)明制備的外耳組織修復(fù)材料移植后8周鼓室面,可見膠原纖維,表面有成熟的扁平上皮細(xì)胞(一),標(biāo)尺:30μπι。請配合參閱圖18所示,本發(fā)明的外耳組織修復(fù)材料移植后8周鼓室面,可見膠原纖維,表面有大量未成熟的扁平上皮細(xì)胞(一),標(biāo)尺:30 μ mD
      [0038]利用本發(fā)明的制備方法獲得的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料,通過臨床試驗證明完全可以完成組織完整性修復(fù),并且鼓膜的功能性可以得到基本的恢復(fù),臨床效果有了極大的提高,解決了臨床上耳鼓膜修復(fù)材料的匱乏的問題,拓寬了耳鼓膜以及外耳組織修復(fù)材料的來源。
      [0039]以上所述,為本發(fā)明的較佳實施例,并非對本發(fā)明作任何限制,本領(lǐng)域技術(shù)人員利用上述揭示的內(nèi)容做出些許簡單修改、等同變化或修飾,均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
      【主權(quán)項】
      1.一種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的制備方法,其特征在于包括以下步驟: 步驟A:選取哺乳動物體或人體的真皮組織; 步驟B:通過對比所述真皮組織和鼓膜組織的結(jié)構(gòu),確定所述真皮組織結(jié)構(gòu)中與所述鼓膜組織的結(jié)構(gòu)相近且相鄰3層的真皮組織α層結(jié)構(gòu); 步驟C:去除所述真皮組織中除真皮組織α層結(jié)構(gòu)以外的其他層,獲得真皮組織α層初級原料; 步驟D:對所述真皮組織α層初級原料進(jìn)行脫細(xì)胞處理,獲得脫細(xì)胞真皮組織α層初級原料; 步驟Ε:將經(jīng)步驟D處理的脫細(xì)胞真皮組織α層初級原料在無菌、恒溫條件下,于平衡原液中混搖一定時間,復(fù)原所述脫細(xì)胞真皮組織α層初級原料中膠原蛋白、活性因子的生物性能; 步驟F:將經(jīng)步驟Ε中處理后的脫細(xì)胞真皮組織的α層初級原料,在平衡液中處理,通過改變蛋白質(zhì)膜的通透性和補(bǔ)充平衡離子的方式,封閉真皮組織α層初級原料的蛋白質(zhì)的電位點(diǎn),得到脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的制備方法,其特征在于, 所述步驟F中,通過組合離子或者單一離子來調(diào)平所述脫細(xì)胞后的真皮組織α層初級原料的電位差,達(dá)到封閉所述脫細(xì)胞后的真皮組織α層初級原料的蛋白質(zhì)的電位點(diǎn)的目的。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的制備方法,其特征在于, 所述步驟D中,在脫細(xì)胞處理的過程中,將1、V、VI型膠原蛋白、堿性成纖維細(xì)胞生長因子、轉(zhuǎn)化生長因子-β、纖維連接蛋白固定。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的制備方法,其特征在于, 所述步驟C中,利用固定液對真皮組織α層初級原料進(jìn)行固定。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的制備方法,其特征在于, 所述步驟D中,去除真皮組織α層初級原料免疫性,保留天然組織立體框架的膠原蛋白和彈力纖維物質(zhì),并維持其天然的材料的框架結(jié)構(gòu)。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的制備方法,其特征在于, 所述步驟Ε中,所述恒溫條件中,溫度選擇范圍為16~37攝氏度。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的制備方法,其特征在于, 所述步驟Ε中,于平衡液中混搖的時間為4~24小時。8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一項所述的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的制備方法,其特征在于,所制備的脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料直接用于人或動物的移植。
      【專利摘要】本發(fā)明公開了一種脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的制備方法,其包括以下步驟:步驟A:選取動哺乳物體或人體的真皮組織;步驟B:通過對比所述真皮組織和鼓膜組織的結(jié)構(gòu),確定所述真皮組織結(jié)構(gòu)中與所述鼓膜組織的結(jié)構(gòu)相近且相鄰3層的真皮組織α層結(jié)構(gòu);步驟C:去除所述真皮組織中除真皮組織α層結(jié)構(gòu)以外的其他層,獲得真皮組織α層初級原料。本發(fā)明根據(jù)真皮特點(diǎn)及鼓膜組織結(jié)構(gòu)的特殊性,進(jìn)行研制改進(jìn),制備出了與人體鼓膜結(jié)構(gòu)、組織特點(diǎn)極為相近的鼓膜修復(fù)材料,在完成組織完整性修復(fù)的基礎(chǔ)上,鼓膜功能得到了基本的修復(fù),使臨床效果得到大大的提高;拓寬了制備脫細(xì)胞真皮基質(zhì)鼓膜及外耳組織修復(fù)材料的原料來源,降低了制備該修復(fù)材料的成本。
      【IPC分類】A61L27/50, A61L27/36
      【公開號】CN105233343
      【申請?zhí)枴緾N201510825102
      【發(fā)明人】張小明, 李燕青
      【申請人】北京清源偉業(yè)生物組織工程科技有限公司
      【公開日】2016年1月13日
      【申請日】2015年11月24日
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