冬凌草甲素在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于生物和醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及冬凌草甲素的新用途。本發(fā)明提供了冬凌 草甲素在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，具體的說(shuō)，本發(fā)明公開了冬凌草甲素抑制腫瘤細(xì)胞 遷移的新用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 冬凌草，小灌木，系唇形科香茶菜屬植物碎米椏變種，因其植株凝結(jié)薄如蟬翼、形 態(tài)各異的蝶狀冰凌片而得名。
[0003] 冬凌草是一種具有綜合開發(fā)利用價(jià)值的植物。冬凌草適應(yīng)性強(qiáng)，對(duì)土壤要求不嚴(yán)， 選擇在干燥、不易積水的沙性或輕粘質(zhì)土種植。種植時(shí)間在春秋為宜，畝種4000株左右。冬 凌草主要管理是中耕除草，防積水。自然分布于太行山南部。
[0004] 冬凌草的藥用部位是全株，因此，它的產(chǎn)量較高，一般畝產(chǎn)干草500公斤以上。作 藥用，在開花前采收，因?yàn)榇藭r(shí)的冬凌草藥理作用最強(qiáng)；作冬凌草保健茶，在整個(gè)生長(zhǎng)期均 可，鮮葉直接泡茶或與菊花、金銀花等配合飲用，也可曬干或烘干備用。
[0005] 冬凌草性味苦、甘、微寒。冬凌草有良好清熱毒、活血止痛、抑菌、抗腫瘤作用，主治 咽喉腫痛、扁桃體炎、感冒頭痛、氣管炎、慢性肝炎、關(guān)節(jié)風(fēng)濕痛、蛇蟲咬傷。全株對(duì)食管癌、 乳腺癌、直腸癌等有緩解作用。冬凌草的煎劑和醇劑可有效地抑制甲型、乙型溶血性鏈球 菌、金黃色葡萄球直等，從而提高肌體抵抗力，迅速降低因炎癥引起的白血球增高。冬凌草 可與化療、其它抗癌藥物配合治療癌癥有明顯地增效作用，
[0006] 冬凌草甲素是冬凌草中的重要活性成分，生物利用度高、性質(zhì)穩(wěn)定，具有臨床使 用價(jià)值。隨著人們對(duì)此類化合物的化學(xué)和生物學(xué)研究的深入，其分子作用機(jī)制將逐步明 確，這將進(jìn)一步推動(dòng)此類化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)修飾和構(gòu)效關(guān)系研究，并有助于提高此類化合 物的藥用價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供冬凌草甲素在制備抗腫瘤藥物中的新的藥用用途。
[0008] 本發(fā)明提供了冬凌草甲素在制備抗腫瘤藥物中的用途，所述的冬凌草甲素抑制或 者延緩腫瘤細(xì)胞遷移。
[0009] 所述的抗腫瘤藥物可以制成針劑或者片劑。
[0010] 本發(fā)明所述的冬凌草甲素，又名Oridonin，結(jié)構(gòu)式如下：
[0012] 其相關(guān)性質(zhì)如下：
[0013] 【別名】冬凌草素、延命草寧
[0014] 【英文名】Oridonin
[0015] 【分子式】C2〇H28〇6
[0016] 【分子量】364. 44
[0017] 【CAS 號(hào)】28957_04_2
[0018] 【檢測(cè)方式】高效液相色譜法HPLC彡98%
[0019]【性狀】本品為淡黃色針狀結(jié)晶
[0020] 【提取來(lái)源】為唇形科香茶菜屬植物碎米亞椏 （Rabdosia rubescens)的全草。
[0021] 【藥理性質(zhì)】熔點(diǎn)248°C _250°C，微溶于水，溶于甲醇、乙酸乙酯、丙酮等。
[0022] 本發(fā)明的冬凌草甲素購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司，貨號(hào)：90063(http:// www. biomart· cn/infosupply/4768868. htm)〇
[0023] 本發(fā)明所述的腫瘤類型包括肝癌、肺癌、腎癌、胃癌、胰腺癌、宮頸癌或者腸癌。優(yōu) 選治療或者輔助治療肝癌的藥物。
[0024] 所述的腫瘤類源于 smmc-7721、A549、HCG、PANC-I、HELA、SW620、MCF-7 或者 FOCUS 細(xì)胞。
[0025] 所述的抗腫瘤藥物可以是冬凌草甲素和其他治療肝癌藥物的組合物。
[0026] 所述的其他治療肝癌藥物可以是目前臨床上常用的抗腫瘤藥物，例如，是索拉菲 尼。
[0027] 另一方面，本發(fā)明還提供了一種在體外抑制腫瘤細(xì)胞遷移的方法，即將冬凌草甲 素加入體外培養(yǎng)的腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液中，抑制該腫瘤細(xì)胞的遷移和生長(zhǎng)。
[0028] 其中，冬凌草甲素的藥物濃度大于0且小于50 μ mol/L。冬凌草甲素的藥物濃 iS ^ 1 μ mol/L, 2 μ mol/L, 5 μ mol/L, 7 μ mol/L, 10 μ mol/L, 15 μ mol/L, 20 μ mol/L, 30ymol/L。通常，整體效果較好時(shí)，冬凌草甲素的藥物濃度小于ΙΟμ mol/L。
[0029] 本發(fā)明及其抑制劑、拮抗劑等，在治療上進(jìn)行施用（給藥）時(shí)，可提供不同的效果。 通常，可將這些物質(zhì)配制于無(wú)毒的、惰性的和藥學(xué)上可接受的水性載體介質(zhì)中，其中pH通 常約為5-8,較佳地pH約為6-8, pH值可隨被配制物質(zhì)的性質(zhì)以及待治療的病癥而有所變 化。配制好的藥物組合物可以通過(guò)常規(guī)途徑進(jìn)行給藥，其中包括（但并不限于）：肌內(nèi)、腹 膜內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、或局部給藥。
[0030] 以本發(fā)明的冬凌草甲素為例，可以將其與合適的藥學(xué)上可接受的載體聯(lián)用。這類 藥物組合物含有治療有效量的化合物和藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑。這類載體包括（但 并不限于）：鹽水、緩沖液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其組合。藥物制劑應(yīng)與給藥方式相匹 配。本發(fā)明的冬凌草甲素可以被制成針劑形式，例如用生理鹽水或含有葡萄糖和其他輔劑 的水溶液通過(guò)常規(guī)方法進(jìn)行制備。諸如片劑和膠囊之類的藥物組合物，可通過(guò)常規(guī)方法進(jìn) 行制備。藥物組合物如針劑、溶液、片劑和膠囊宜在無(wú)菌條件下制造。活性成分的給藥量是 治療有效量，例如每天約1微克/千克體重-約5毫克/千克體重。此外，本發(fā)明的冬凌草 甲素還可與其他治療劑一起使用。
[0031] 當(dāng)本發(fā)明的冬凌草甲素被用作藥物時(shí)，可將治療有效劑量的冬凌草甲素施用于哺 乳動(dòng)物，其中該治療有效劑量通常至少約10微克/千克體重，而且在大多數(shù)情況下不超過(guò) 約8毫克/千克體重，較佳地該劑量是約10微克/千克體重-約1毫克/千克體重。當(dāng)然， 具體劑量還應(yīng)考慮給藥途徑、病人健康狀況等因素，這些都是熟練醫(yī)師技能范圍之內(nèi)的。
[0032] 本發(fā)明提供了冬凌草甲素在制備治療腫瘤藥物中的應(yīng)用，具體的說(shuō)，本發(fā)明公開 了冬凌草甲素抑制腫瘤細(xì)胞遷移的新用途。在腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)液中加入冬凌草甲素，能夠 明顯減緩腫瘤細(xì)胞的劃痕愈合，明顯減緩腫瘤細(xì)胞的遷移速度。冬凌草甲素是天然產(chǎn)物，分 子量較小，結(jié)果比較簡(jiǎn)單，藥效明顯。本發(fā)明為抑制和減緩腫瘤生長(zhǎng)提供了一種新的候選化 合物。
【具體實(shí)施方式】
[0033] 實(shí)驗(yàn)材料：
[0034] 肝癌細(xì)胞株FOCUS:
[0035] 物種： 人類
[0036] 提供者： Harvard Medical School MGH
[0037] 組織來(lái)源： 肝癌組織
[0038] 肝癌細(xì)胞株H印3B:
[0039] 物種： 人類
[0040] 提供者： ATCC
[0041] 組織來(lái)源： 肝癌組織
[0042] 肝癌細(xì)胞株SK-Hep-I :
[0043] 物種： 人類
[0044] 提供者： ATCC
[0045] 組織來(lái)源： 肝癌組織
[0046] 肝癌細(xì)胞株SMMC7721 :
[0047] 物種： 人類
[0048] 提供者： 中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)
[0049] 組織來(lái)源： 肝癌組織
[0050] 結(jié)腸癌細(xì)胞株SW620:
[0051] 物種： 人類
[0052] 提供者： ATCC
[0053] 組織來(lái)源： 結(jié)腸癌組織
[0054] 乳腺癌細(xì)胞株MCF-7:
[0055] 物種： 人類
[0056] 提供者： ATCC
[0057] 組織來(lái)源： 乳腺癌組織
[0058] 宮頸癌細(xì)胞株Hela:
[0059] 物種： 人類
[0060] 提供者： ATCC
[0061] 組織來(lái)源： 宮頸癌組織
[0062] 胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-I :
[0063] 物種： 人類
[0064] 提供者： ATCC
[0065] 組織來(lái)源： 胰腺癌組織
[0066] 胃癌細(xì)胞株HGC :
[0067] 物種： 人類
[0068] 提供者： ATCC
[0069] 組織來(lái)源： 胃癌組織
[0070] 藥物來(lái)源：
[0071 ] 冬凌草甲素購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司，每份藥物準(zhǔn)確稱量后溶于DMSO (二 甲基亞砜，Sigma),配制成IOOmM或50mM的母液備用。
[0072] 細(xì)胞培養(yǎng)常用試劑：
[0073] (I)IXPBS
[0074] Na2HPO4* 121i20 3. 63g KCl 0,2：g NaCl 8. Og
[0075] KH2P04 0. 24g
[0076] 0· INNaOH 調(diào)節(jié) pH 至 7. 4
[0077] 力卩ddH20定容至IL
[0078] 120°C高壓蒸汽滅菌20min。
[0079] ⑵ EDTA 試