提浸膏；
[0037] 似取步驟（1)得到的水提浸膏，溶于水中，加入乙醇使乙醇體積濃度為85%，靜 置，沉淀，過濾得上清濾液和沉淀，沉淀即為粗多糖； 陽03引 做取步驟似制得的粗多糖，加水制成質(zhì)量濃度為20%多糖水溶液，然后加入多 糖水溶液等體積的5氯乙酸，混勻，靜置，離屯、取上清，重復(fù)3次，合并上清液，加乙醇使 乙醇體積濃度為85 %，靜置，沉淀，過濾得精制多糖。
[0039] 實(shí)施例3
[0040] 取實(shí)施例1制備得到的菊莖葉精制多糖提取物，加入適量糊精、阿斯己甜，制粒， 干燥，整粒，分裝，即得整粒劑。 W41] 實(shí)施例4
[0042] 取實(shí)施例2制備得到的菊莖葉精制多糖提取物，加入淀粉適量，制粒，干燥，過篩， 加入適量助流劑，壓片，即得片劑。 陽0創(chuàng)實(shí)施例5
[0044] 取實(shí)施例2制備得到的菊莖葉精制多糖提取物，加入適量淀粉，制粒，干燥，裝膠 囊，即得膠囊劑。
[0045] 實(shí)施例6對結(jié)腸炎治療作用研究
[0046] 1、材料與方法
[0047] 1. 1實(shí)驗(yàn)用藥物及試劑
[0048] 葡聚糖硫酸鋼鹽值extransulfatesodiumsalt，DSS)，分子量為：36000 ~50000。 比-17,TNF-α，IFN- 丫化ISA試劑盒，南京建成生物試劑有限公司。
[0049] 受試藥物：實(shí)施例1制備得到的菊莖葉精制多糖提取物。
[0050] 1. 2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及飼養(yǎng)
[0051] SPF級雄性C57/BL6小鼠40只，體重（20 ±。g，由昭衍（蘇州）新藥研究中屯、有 限公司提供，合格證號：SCXK(蘇）2013-003。
[0052] 1. 3實(shí)驗(yàn)儀器
[0053] 酶標(biāo)儀，恒溫培養(yǎng)箱，離屯、機(jī)，精密移液器等。
[0054] 2、實(shí)驗(yàn)方法 陽化5] 急性腸炎模型的建立和給藥處理
[0056] 動(dòng)物分組：正常組，模型組和給藥組度-高劑量組，B-中劑量組，B-低劑量組， Z-高劑量組，Z-中劑量組，Z-低劑量組）（B:保護(hù)作用；Z:治療作用）；
[0057] 造模及給藥方法：正常組組正常飲水，模型組和給藥組自由飲用3%DSS水溶液， 3~4天后，模型組即出現(xiàn)腹瀉、便潛血陽性或顯性便血；其中，B組造模同時(shí)給予本發(fā)明實(shí) 施例1制備得到高、中、低劑量（300mg/kg，150mg/kg，75mg/kg)的菊莖葉精制多糖溶液，Z 組是造模后給予本發(fā)明實(shí)施例1制備得到高、中、低劑量（300mg/kg，150mg/kg，75mg/kg)的 多糖溶液，分別連續(xù)給藥7天，期間每天觀察動(dòng)物的一般行為及動(dòng)物體重，W及記錄出現(xiàn)腹 瀉、便潛血陽性或顯性便血的情況；給藥結(jié)束后，乙酸麻醉處死小鼠，取小鼠肝臟、腎臟和結(jié) 腸組織，W及糞便和結(jié)腸內(nèi)容物。
[00郎]3.樣品檢測，數(shù)據(jù)分析
[0059] 3. 1疾病活動(dòng)指數(shù)檢測及方法
[0060] 參照MuranoΜ等建立評估標(biāo)準(zhǔn)，每日觀察小鼠的體重、大便性狀和隱血情況。DAI =(體重下降+大便性狀+出血情況）/3。 W61] 表1DAI值評分標(biāo)準(zhǔn)
[0062]
[0063] 注：正常大便：成形大便；松散大便：不粘附于肛口的糊狀、半成形大便；稀便：可 粘附于肛口的稀水樣便。
[0064] 3. 2采用肥染色法，肝臟、腎臟和結(jié)腸組織切片進(jìn)行染色和觀察 陽0化]3. 3采用ELISA試劑盒對結(jié)腸組織中比-17、TNF-α和IFN-丫含量進(jìn)行檢測
[0066] 二，實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0067] 1.對DSS誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎小鼠的癥狀及體重變化 W側(cè)飲用3%DSS的模型組第3天開始體重明顯下降，部分小鼠出現(xiàn)體毛凌亂現(xiàn)象，懶 動(dòng)，第4天起部分小鼠出現(xiàn)稀便，肉眼血便。多糖保護(hù)作用組中，第4天開始體重回升，并于 第5天開始體重趨于模型組和正常組之間，并且中低劑量組效果優(yōu)于高劑量組；在多糖治 療作用組中，給藥后第2天開始，小鼠體重開始回升，給藥第4天開始，小鼠活動(dòng)能力增強(qiáng)， 體毛順滑。同樣可W看出，中低劑量組的治療效果優(yōu)于高劑量組。說明多糖對DSS誘導(dǎo)的 急性結(jié)腸炎有一定的保護(hù)和治療作用。DAI評分分別見表2,表3。
[0069] 表2急性結(jié)腸炎保護(hù)作用組DAI評分
[0070]
[0073] 2.對DSS誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎小鼠的結(jié)腸形態(tài)及病理學(xué)評分
[0074] 正常組結(jié)腸組織結(jié)構(gòu)清晰，上皮完整，腺管規(guī)則，杯狀細(xì)胞豐富，固有層少量淋己 單核細(xì)胞浸潤，模型組結(jié)腸可見明顯水腫，有較大潰瘍，長度相對正常組較短，部分有充血 現(xiàn)象，周圍粘膜組織有損，黏膜炎細(xì)胞浸潤較正常組明顯增加（P< 0.01)。多糖給藥組，結(jié) 腸長度顯著增長（P< 0. 01)，黏膜損傷較模型組有較大改善，炎性細(xì)胞浸潤度較模型組明 顯減少（P< 0.01)。說明多糖對DSS誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎有一定的保護(hù)和治療作用。病理組 織學(xué)評分和結(jié)腸長度見表4。
[00巧]表4病理組織學(xué)評分和結(jié)腸長度[0076]
W77] *沖< 0. 01 (模型組VS正常組；多糖組VS模型組） 陽07引 3.對DSS誘導(dǎo)的急性結(jié)腸炎小鼠結(jié)腸組織中IL-17,INF- 丫和TNF-α變化情況
[0079] 通過ELISA實(shí)驗(yàn)，檢測小鼠結(jié)腸組織中比-17,INF- 丫和TNF-α含量變化，結(jié)果 顯示，與正常組相比，模型組小鼠結(jié)腸組織中IL-17,INF-丫和TNF-a含量顯著增加（Ρ < 0. 01)，在給藥組的B保護(hù)組中，中低劑量組均能抑制IL-17,INF- 丫和TNF-α的產(chǎn)生， 而高劑量多糖反而增加了IL-17,INF-丫水平，其原因可能與菊多糖對免疫系統(tǒng)具有雙向 調(diào)節(jié)作用有關(guān)，即當(dāng)機(jī)體處于免疫抑制狀態(tài)時(shí)菊多糖可W增強(qiáng)免疫力，而當(dāng)機(jī)體處于免疫 素亂時(shí)，如化1/化2不平衡時(shí)，菊多糖可W抑制過度反應(yīng)的炎癥狀態(tài)，使化1/化2恢復(fù)平衡。 具體機(jī)理有待進(jìn)一步深入研究）。在治療作用組中，高中低劑量的多糖都能抑制IL-17， INF-丫和TNF-a的產(chǎn)生，且中低劑量組效果顯著。比-17,INF-丫和TNF-a含量變化如圖 1、圖2和圖3。
[0080] W上實(shí)施方式只為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點(diǎn)，其目的在于讓熟悉此項(xiàng)技術(shù)的 人了解本
【發(fā)明內(nèi)容】
并加W實(shí)施，并不能W此限制本發(fā)明的保護(hù)范圍，凡根據(jù)本發(fā)明精神實(shí) 質(zhì)所做的等效變化或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有治療急性結(jié)腸炎功效的菊莖葉精制多糖提取物，其特征在于，它是通過以 下方法制備到： (1) 取菊的莖葉，去雜質(zhì)，干燥，加入干藥材重量8~12倍體積量的乙醇，回流提取，取 乙醇回流提取后的藥渣，加入干藥材重量8~15倍體積量的水，回流提取1~3次，合并水 提液，濃縮，過濾，減壓濃縮至含生藥量10~20g/mL的水提浸膏； (2) 取步驟（1)得到的水提浸膏，溶于水中，加入乙醇使其體積濃度為80~85%，靜 置，沉淀，過濾得上清濾液和沉淀，沉淀即為粗多糖； (3) 取步驟（2)制得的粗多糖，加水制成質(zhì)量濃度為10~20%多糖水溶液，然后加入 多糖水溶液等體積的5%三氯乙酸，混勻，靜置，離心取上清，重復(fù)1~3次，合并上清液，加 乙醇使乙醇體積濃度為80~85%，靜置，沉淀，過濾得精制多糖。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有治療急性結(jié)腸炎功效的菊莖葉精制多糖提取物，其特征 在于，它是通過以下方法制備到： (1)取菊的莖葉，去雜質(zhì)，干燥，加入干藥材重量8倍體積量的乙醇，回流提取，取乙醇 回流提取后的藥渣，加入干藥材重量8倍體積量的水，回流提取1~3次，每次3小時(shí)，合并 水提液，濃縮，過濾，減壓濃縮至含生藥量10_20g/mL的水提浸膏； ⑵取步驟（1)得到的水提浸膏，溶于水中，加入乙醇使其乙醇體積濃度為80%，靜置， 沉淀，過濾得上清濾液和沉淀，沉淀即為粗多糖； (3)取步驟⑵制得的粗多糖，加水制成質(zhì)量濃度為10%多糖水溶液，然后加入多糖水 溶液等體積的5%三氯乙酸，混勻，靜置，離心取上清，重復(fù)3次，合并上清液，加乙醇使乙醇 體積濃度為80%，靜置，沉淀，過濾得精制多糖。3. 權(quán)利要求1或2所述的具有治療急性結(jié)腸炎功效的姻莖葉精制多糖提取物在制備防 治急性結(jié)腸炎藥物中的應(yīng)用。4. 一種具有治療急性結(jié)腸炎功效的中藥制劑，其特征在于，它由權(quán)利要求1或2所述的 菊莖葉精制多糖提取物和藥學(xué)上可接受的載體制備成顆粒劑、片劑、膠囊劑、丸劑或口服液 等制劑。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種具有治療急性結(jié)腸炎功效的菊莖葉精制多糖提取物，本發(fā)明以菊的莖葉為原料，先用乙醇提取，取乙醇提取后的藥渣，加水提取，得水提物，然后加入乙醇沉淀得到粗多糖；再用5％三氯乙酸，混勻，靜置，離心取上清，再加乙醇沉淀除蛋白，過濾得精制多糖。本發(fā)明以廢棄物菊的莖葉為原料，通過優(yōu)選方法，制備得到具有很好防治結(jié)腸炎功效的精制多糖提取物，本發(fā)明能夠變廢為寶，充分利用中藥資源，可實(shí)現(xiàn)菊資源的綜合利用，具有很好的經(jīng)濟(jì)效益和綠色環(huán)保價(jià)值。
【IPC分類】A61P1/00, A61K36/287
【公開號】CN105412195
【申請?zhí)枴緾N201610009551
【發(fā)明人】段金廒, 陶金華, 郭建明, 江曙, 錢大瑋, 郭盛
【申請人】南京中醫(yī)藥大學(xué)
【公開日】2016年3月23日
【申請日】2016年1月7日