7(Chest 131:1050;參見其中表2)評估的人對照組 中，左心室EDVi是84± 15mL/m2，左心室ESVi是34 ± I lmL/m2，右心室EDVi是91 ± 15mL/m2并且 右心室ESVi是42±llmL/m2。將人的正常EF視為>50% (診斷和治療急性和慢性心力衰竭的 ESC方針，2012，Eur Heart J 33:1787)，如由Jdrgensen等，2007(參見上文）所證實，表明 左心室EF為60±8%并且右心室EF為54±7%。在如本文所用的ApoE-/-小鼠中，正?；€ EDV為約25-35yL，并且正?；€ESV為約12-17yL。因為這些容積取決于體重，所以針對體表 面積(BSA)進行指數(shù)化是適用的。對于小鼠，下式可用于計算BSA(BW是以克計的體重）：BSA (m2) = (9 X BW~ (2/3) )/10000。在平均基線BW= 17.4± 1.8g下，指數(shù)化基線EDV和基線ESV值 是EDVi = 6.4 ± 1.5 (mL/m2)并且ESVi = 2.8 ± 0.8 (mL/m2)。對于小鼠，正常射血分數(shù)是55-65%〇
[0025] 在豬模型中用PlGF-I的先前研究是令人泄氣的，因為在第8周沒有觀測到左心室 (LV)收縮末期容量(ESV)和LV射血分數(shù)(EF)有改善(Liu等，2013Am J Physiol Heart Circ Physiol 304，H885)。在產(chǎn)生本發(fā)明（實施例1)的工作中，當在與先前PlGF-I所用相同的條 件下施用P1GF-2時，在第8周觀測到LVESV與LVEF都有明顯改善。鑒于在PlGF-I和P1GF-2之 間高的序列相似性，這個觀測結果是極驚人和意外的，并且增加了心力衰竭作為可通過施 用P1GF-2治療的新的適應癥。本文所用的HF動脈粥樣硬化小鼠模型（實施例2)證實P1GF-2 對心室功能的有利作用（如在豬模型中）。另外，觀測到P1GF-2對心室重構的有利作用。 P1GF-2此外證明是安全的，因為其不會誘導心臟損傷或心肌炎癥并且不會提高由新血管形 成或炎性細胞浸潤所造成的斑塊不穩(wěn)定性。這些觀測結果是驚人和意外的，因為已知PlGF 具有促炎性，并且因為PlGF損失會延遲動脈粥樣硬化病變的發(fā)展（Roncal等，2010， Cardiovasc Res 86:29)〇
[0026] -方面，本發(fā)明因此涉及用于治療或預防如本文所述的哺乳動物的心力衰竭表型 或更具體地一種或多種特定心力衰竭表型（的方法)的胎盤生長因子2蛋白（P1GF-2)。本發(fā) 明提供一種組合物，其包含用于治療或預防哺乳動物心力衰竭表型（的方法)的胎盤生長因 子2蛋白（P1GF-2)。心力衰竭表型可以定義為以下任一個或者其組合:心室功能障礙、收縮 末期容量增大、射血分數(shù)減小、心室重構或者舒張末期容量增大。具體來說，心室功能障礙 可以由收縮末期容量增大和/或射血分數(shù)減小來定義?；蛘撸氖夜δ苷系K可以由舒張受 損、心室填充壓力增大和射血分數(shù)保持來定義。具體來說，心室重構可以由舒張末期容量增 大來定義。
[0027] 替代性地規(guī)劃，本發(fā)明的這個方面涉及治療或預防哺乳動物心力衰竭的方法，所 述方法包括向診斷有心力衰竭的哺乳動物施用治療有效量的胎盤生長因子2(P1GF_2)的步 驟，其中所述施用使所述心力衰竭得到治療或預防。替代性地，本發(fā)明涉及(用于)治療或預 防心力衰竭的P1GF-2。所述心力衰竭可能伴有心室功能障礙?？赡芴娲氖夜δ苷系K或除 心室功能障礙以外還伴有心室射血分數(shù)減小或心室射血分數(shù)保持。
[0028] 另一方面，本發(fā)明涉及改善哺乳動物心臟的心室射血分數(shù)的方法，所述方法包括 向診斷有心室射血分數(shù)減小的哺乳動物施用治療有效量的胎盤生長因子2的步驟，其中所 述施用使所述心室射血分數(shù)得到改善。替代性地，本發(fā)明涉及（用于)改善哺乳動物心臟的 心室射血分數(shù)的P1GF-2。所述心室射血分數(shù)減小可能伴有心力衰竭。
[0029] 另一方面，本發(fā)明涉及治療、預防或改善哺乳動物心臟的心室功能障礙的方法，所 述方法包括向診斷有心室功能障礙的哺乳動物施用治療有效量的胎盤生長因子2的步驟， 其中所述施用使所述心室功能障礙得到治療、預防或改善。替代性地，本發(fā)明涉及(用于)治 療、預防或改善心室功能障礙的P1GF-2。所述心室功能障礙可能伴有心力衰竭。
[0030] 本發(fā)明的另一方面包括治療或預防哺乳動物心臟的心室重構更具體來說肥大心 室重構的方法，所述方法包括向診斷有(肥大)心室重構的哺乳動物施用治療有效量的胎盤 生長因子2的步驟，其中所述施用使所述(肥大）心室重構得到治療或預防。替代性地，本發(fā) 明涉及(用于)治療或預防哺乳動物心臟的(肥大)心室重構的P1GF-2。所述肥大心室重構可 能伴有心力衰竭。
[0031] 在心力衰竭中，左心室和/或右心室可能受到影響。因此，在任一上述情況下，待治 療或預防的心力衰竭或心力衰竭表型都可能表現(xiàn)或呈現(xiàn)在左心室和/或右心室。在一個具 體實施方案中，其表現(xiàn)或呈現(xiàn)于左心室中。
[0032] 可引起心肌梗塞的適應癥之一是動脈粥樣硬化，其特征在于血流限制性斑塊沉積 在血管中。如本文所示(參見實施例2)，如上文所述的組合物可安全有效地用于治療或預防 罹患動脈粥樣硬化的哺乳動物(有動脈粥樣硬化的哺乳動物)的心力衰竭表型（的方法）中。 [0033]如上文所述的組合物中的P1GF-2蛋白可為重組型P1GF-2蛋白，如獲自哺乳動物細 胞培養(yǎng)物。這種哺乳動物細胞培養(yǎng)物的實例是中國倉鼠卵巢(CHO)培養(yǎng)物或等效的細胞培 養(yǎng)物。這種細胞培養(yǎng)物可以能夠以短暫或組成方式表達P1GF-2蛋白。如上文所述的組合物 中的P1GF-2蛋白在一個實施方案中是如由SEQ ID N0:1所定義的人P1GF-2蛋白，或其多態(tài) 變體(多形體）。
[0034]在具體實施方案中，P1GF-2蛋白組合物是基本上由P1GF-2蛋白組成的組合物，因 為P1GF-2蛋白是唯一的活性成分。在另外的具體實施方案中，P1GF-2蛋白是組合物中唯一 的血管生成因子。
[0035]構成如上文所述的組合物的P1GF-2蛋白中的任一種具體來說都通過全身性施用 來使用。這種全身性施用可為血管內(nèi)（例如靜脈內(nèi)）或皮下施用。
[0036] "心力衰竭(HF)"可定義為引起心臟不能以與代謝組織的要求相稱的速率遞送氧 的心臟結構和/或功能異常（診斷和治療急性和慢性心力衰竭的ESC方針，2012，Eur Heart J 33:1787)。其顯示為由心臟功能異常引起的臨床征兆(例如頸靜脈壓提高、肺部爆聲和心 尖搏動位移)和癥狀(例如呼吸急促、踝關節(jié)腫脹和疲勞）以及有限臨床后果（即HF所致的總 體和心腦血管死亡、住院治療)和生活質(zhì)量的復合體。由心室功能障礙造成的心力衰竭涵蓋 射血分數(shù)減小的患者以及射血分數(shù)保持的患者。缺血性事件(包括心肌梗塞)可為心力衰竭 的下伏病因，而其它病因包括高血壓、心臟瓣膜病、心肌病、香煙煙熏、肥胖癥、糖尿病等。鑒 于本文報道的觀測結果，特別包括具有非缺血性病因的心力衰竭作為心力衰竭生理狀態(tài)的 子組，其中心輸出量不足以滿足身體和/或肺的需要。許多HF表型（參見上文)可被定量并且 充當可測量參數(shù)，如在本文所用的豬和小鼠模型中測定(參見實施例1和2)。
[0037] 在患有肥大心室重構的有或無重要合并癥(包括糖尿病、高血壓、慢性阻塞性肺疾 病、腎功能不全、肥胖癥）的患者中觀測到的EF保持的HF具有與EF減小的HF類似慘淡的后 果。在灌注與肥大之間的不匹配造成HF表型和心室功能障礙。基于這個類似性，本發(fā)明的范 圍包括診斷有EF保持的HF的患者。目前沒有特定療法來改善EF保持的HF的臨床后果。
[0038]另一 HF表型涉及以由舒張受損、心室填充壓力增大和EF保持所定義的心室功能障 礙。在這個HF表型中，在心臟舒張期間，EF因此會保持，而心室不會適當舒張。如果心室舒張 這樣受損，那么隨著來自下一心跳的血液試圖進入，內(nèi)部壓力將增大(填充壓力增大）。
[0039] 人胎盤生長因子hPIGF由Maglione等，1991(Proc Natl Acad Sci USA88,9267)首 次公開，并且是指以基因庫寄存號P49763可得的221個胺基酸的多肽的3種同種型變體。本 發(fā)明的受試者是PlGF的同種型2,即P1GF_2(也稱為P1GF2)，其為包含肝素結合位點的同種 型。下文包括hPlGF-2(即缺乏18個氨基酸的信號序列的成熟蛋白質(zhì)）的全長參考序列：
[0040] LPAVPPQQWALSAGNGSSEVEVVPFQEVWGRSYCRALERLVDVVSEYPSEVEHMFSPSCVSLLRCTGCCGDENLHCV PVETANVTMQLLKIRSGDRPSYVELTFSQHVRCECRPLREKMKPERRRPKGRGKRRREKQRPTDCHLCGDAVPRR (SEQ ID NO:1)〇
[0041] 其它物種，具體來說哺乳動物物種的P1GF-2蛋白的序列可通過在例如基因庫中例 如通過用SEQ ID NO: 1運行BLAST程序進行搜索來找到。術語"P1GF-2"一般是指含有hPlGF2 樣肝素結合域(HBD)的任何來源的PlGF分子。這種hPlGF2樣HBD可以與hPlGF2的HBD高度同 源（例如具有95 %同一性或更大），或者其可以與hPlGF2的HBD不太同源（例如具有50%、 60%、70%、80%、90%或小于95%的同一性）。hPlGF2的HBD在上述SEQIDN0:l中加下劃 線，并且更具體來說是指相對于hPIGFl插入21個氨基酸的序列RRPKGRGKRRREKQRPTDCHL (SEQ ID N0:2)?？山柚诟嗡亟Y合分析，例如通過肝素結合生物分子的酶聯(lián)競爭性結合 (例如在96孔肝素結合板(BD Biosciences)中）容易地測定蛋白質(zhì)或化合物對肝素的結合。 術語"P1GF-2"進一步包括給定屬類的參考P1GF2序列的多態(tài)變體，其可存在于所述屬類中。 [0042]還預期P1GF-2蛋白的衍生物用于任一本發(fā)明的上述方面中，并且所述術語是指含 有至少P1GF-2蛋白部分和不同于野生型P1GF-2中存在的部分的另一部分的雜合分子。 P1GF-2衍生物的實例包括例如包含P1GF-2與非PLGF相關蛋白質(zhì)（例如白蛋白或不同于 P1GF-2的蛋白質(zhì)的另一肝素結合域)的融合蛋白以及包含P1GF-2與P1GF-2的一個或多個肝 素結合域的融合蛋白。P1GF-2的衍生物進一步包括例如向P1GF-2添加非蛋白質(zhì)化合物，例 如將P1GF-2聚乙二醇化。術語P1GF-2衍生物進一步包括活性P1GF-2突變蛋白質(zhì)。這些突變 蛋白質(zhì)可以包括例如C端半胱氨酸突變?yōu)榱硪话坊?，如WO 03/097688中所述。無論衍生的 性質(zhì)如何，所得P1GF-2蛋白衍生物都應保持其生物活性;然而，設想活性P1GF-2衍生物的劑 量可以等于，或者可能需要高于或低于野生型P1GF-2的劑量以獲得相同的治療效果。盡管 PlGF-I僅結合于受體FLT-I (和其可溶性變體sFLT-Ι)，但是P1GF-2另外與神經(jīng)纖毛蛋白-1 和神經(jīng)纖毛蛋白-2結合。不同信號傳導級聯(lián)由PlGF-I和P1GF-2觸發(fā)(Kendall等，1993， ProcNatlAcadSci USA 90:10705;Migdal等，1998,J Biol Chem 273:22272;Persico等， 1999,Curr Top Microbiol Tmmunol 237: 31)。鑒于不同的結構、受體結合模式和信號傳 導，在本文中不將PlGF-I視作P1GF-2的衍生物。