白術(shù)內(nèi)酯在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001 ]本發(fā)明涉及白術(shù)內(nèi)酯的應(yīng)用，具體涉及白術(shù)內(nèi)酯在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】：
[0002]抑郁癥(Depression)是以持續(xù)情緒低落和認(rèn)知功能障礙為主要臨床特征，包括焦 躁情趣、快感缺之、睡眠障礙、負(fù)罪感和反復(fù)自殺念頭等，具有尚患病率、尚復(fù)發(fā)率、尚致殘 率和高致死率等特點(diǎn)。世界衛(wèi)生組織報(bào)道稱全球范圍內(nèi)，共有超過3.5億人患有抑郁癥，到 2020年抑郁癥可能成為僅次于心臟病的第二大疾病。隨著社會(huì)經(jīng)濟(jì)的快速發(fā)展，生活節(jié)奏 加快，人們的壓力增加，各種情感沖擊加大，造成抑郁癥的發(fā)病率逐年增高。抑郁癥被稱為 "二十一世紀(jì)的流行病"，其危害已越來(lái)越引起醫(yī)藥衛(wèi)生界的重視。
[0003]目前，治療抑郁癥的主流藥物主要包括:選擇性五羥色胺再攝取抑制劑（SSRIs)， 去甲腎上腺素與特定五羥色胺再攝取抑制劑(NaSSA)，三環(huán)類抗抑郁藥(TCAs)，單胺氧化酶 抑制劑(MAOIs)和五羥色胺與去甲腎上腺素再攝取抑制劑(SNARI)。這些抗抑郁藥物存在抗 抑郁譜窄，起效時(shí)間慢，毒副作用大，價(jià)格昂貴等缺點(diǎn)，嚴(yán)重影響其臨床使用。近年來(lái)，中醫(yī) 中藥對(duì)于抑郁癥的治療越來(lái)越受到人們的廣泛關(guān)注，從中草藥中挖掘具有良好抗抑郁作用 的天然化合物的研究也日益增多，已成為國(guó)際制藥業(yè)開發(fā)抗抑郁藥物的趨勢(shì)。
[0004]白術(shù)為菊科植物白術(shù)的干燥根莖，具有健脾益氣，燥濕利水，止汗，安胎等功效，主 要用于脾虛食少，腹脹泄瀉，痰飲眩悸，水腫，自汗，胎動(dòng)不安等?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，白術(shù) 有利尿、抗腫瘤、抗炎、抗糖尿病、抗衰老等多種作用。
[0005] 白術(shù)內(nèi)酯類成分是白術(shù)的有效活性成分，為一類倍半萜化合物。近年來(lái)，白術(shù)內(nèi)酯 類成分的研究主要集中在白術(shù)內(nèi)酯Ι、Π 、ΙΙΙ上，其藥理作用主要涉及對(duì)胃腸運(yùn)動(dòng)、離體子 宮、炎癥、腫瘤的影響等。然而，有關(guān)白術(shù)內(nèi)酯類成分在制備預(yù)防或和治療抑郁癥藥物中的 應(yīng)用還未見報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0006] 本發(fā)明的目的在于提供白術(shù)內(nèi)酯在制備抗抑郁藥物中的新用途。
[0007] 本發(fā)明提供白術(shù)內(nèi)酯在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明通過體內(nèi)外試驗(yàn)對(duì)該類 成分的抗抑郁活性進(jìn)行了研究，結(jié)果表明該白術(shù)內(nèi)酯類成分白術(shù)內(nèi)酯I或III藥理作用清 楚，抗抑郁功效強(qiáng)，可以在制備預(yù)防和治療抑郁癥的藥物中應(yīng)用。
[0008] -種抗抑郁藥物，由白術(shù)內(nèi)酯類成分白術(shù)內(nèi)酯I或III和藥學(xué)上可接受的載體組 成。
[0009] 所述的載體是聚乙二醇、植物油、淀粉、糊精、環(huán)糊精、各種化學(xué)修飾的環(huán)糊精、蔗 糖等常規(guī)藥物輔料中的一種或多種。
[0010] 所述藥物的劑型是口服制劑、注射劑或局部給藥制劑。所述的口服制劑是片劑、泡 騰片、膠囊、脂質(zhì)體、納米微膠囊、硬膠囊、納米口服液或微丸。所述的注射劑是注射液劑型 或注射用凍干粉針劑型。所述的局部給藥制劑是軟膏劑、噴霧劑或貼劑。
[0011] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0012] 1.本發(fā)明對(duì)白術(shù)內(nèi)酯類成分發(fā)掘出了新的藥用價(jià)值，將其用于抗抑郁癥，并可制 備成預(yù)防、調(diào)理或治療抑郁癥的藥物，從而為白術(shù)等藥材的應(yīng)用開拓了一個(gè)新的領(lǐng)域。
[0013] 2.本發(fā)明分別使用體內(nèi)外試驗(yàn)，采用細(xì)胞模型及動(dòng)物模型對(duì)白術(shù)內(nèi)酯類成分抗抑 郁活性進(jìn)行研究，試驗(yàn)結(jié)果表明：（1)白術(shù)內(nèi)酯Ι、ΠΙ對(duì)皮質(zhì)酮損傷的PC12細(xì)胞具有較好的 保護(hù)活性，其機(jī)制可能與抑制神經(jīng)元細(xì)胞凋亡有關(guān)；（2)白術(shù)內(nèi)酯Ι、ΙΙΙ能明顯縮短小鼠強(qiáng) 迫游泳和懸尾試驗(yàn)的不動(dòng)時(shí)間，表明白術(shù)內(nèi)酯Ι、ΙΙΙ具有較強(qiáng)的抗抑郁作用。
[0014] 3.本發(fā)明所述的白術(shù)內(nèi)酯類成分來(lái)源廣泛，能夠從天然物質(zhì)中直接提取分離而 得，提取分離的操作簡(jiǎn)便，由其生產(chǎn)的抗抑郁藥物具有低成本的特點(diǎn)。
【附圖說(shuō)明】：
[0015] 圖1.白術(shù)內(nèi)酯I、πI對(duì)皮質(zhì)酮損傷的PC12細(xì)胞存活率的影響
[0016] 圖2.白術(shù)內(nèi)酯Ι、ΙΙΙ對(duì)皮質(zhì)酮損傷的PC12細(xì)胞LDH釋放率的影響
[0017] 圖3 .白術(shù)內(nèi)酯I、III對(duì)皮質(zhì)酮損傷的PC12細(xì)胞凋亡的影響（流式圖其中：a:正常 組;b :400ymol/L皮質(zhì)酮組;c: 20ymol/L白術(shù)內(nèi)酯I+400ymol/L皮質(zhì)酮組;d: 20ymol/L白術(shù)內(nèi) 酯III+400ymol/L皮質(zhì)酮組）
[0018] 圖4.白術(shù)內(nèi)酯I、III對(duì)皮質(zhì)酮損傷的PC12細(xì)胞凋亡的影響(柱狀圖）
【具體實(shí)施方式】：
[0019] 以下通過實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步描述本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本 發(fā)明，而不是限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0020] 實(shí)施例1白術(shù)內(nèi)酯類成分對(duì)皮質(zhì)酮損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)作用研究
[0021] 1.1細(xì)胞培養(yǎng)
[0022] PC12細(xì)胞購(gòu)自中科院上海細(xì)胞庫(kù)，培養(yǎng)體系用含5 %胎牛血清和10 %馬血清的 RPMI-1640培養(yǎng)基，于37°C，5%⑶2細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。培養(yǎng)前用多聚L-賴氨酸(0.01mg/ml) 包被培養(yǎng)瓶和培養(yǎng)皿，每隔3天換液。
[0023] 1.2實(shí)驗(yàn)方法
[0024] 1.2.1MTT法檢測(cè)白術(shù)內(nèi)酯類I、III對(duì)皮質(zhì)酮損傷PC12細(xì)胞存活率的影響
[0025] 本發(fā)明采用MTT法，評(píng)價(jià)了白術(shù)內(nèi)酯類I、III對(duì)皮質(zhì)酮損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)活性。 PC12細(xì)胞經(jīng)胰酶消化后用完全培養(yǎng)基制成每毫升含細(xì)胞個(gè)數(shù)為2X104的懸液，接種于96孔 培養(yǎng)板，每孔1〇〇μL，放入37 °C 5 %⑶2孵箱培養(yǎng)。24h后棄去細(xì)胞液，空白組加入無(wú)血清培養(yǎng) 基，模型組加入含400μΜ · Γ1皮質(zhì)酮的無(wú)血清培養(yǎng)基，給藥組加入含400μΜ · I/1皮質(zhì)酮及濃 度分別為1，1 〇，20μΜ · I/1白術(shù)內(nèi)酯I(或白術(shù)內(nèi)酯III)的無(wú)血清培養(yǎng)基，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)副 孔。孵育48h后每孔加入10yL ΜΤΤ溶液(5mg/mL，roS溶液配置），繼續(xù)培養(yǎng)4h后，用移液槍吸 取上清液;然后沒孔中分別加入l〇〇yL DMS0，于微量振蕩器上振蕩至結(jié)晶完全溶解，570nm 下用酶標(biāo)儀測(cè)定各孔的吸光值(0D值），計(jì)算各組的細(xì)胞存活率。
[0026] 1.2.2白術(shù)內(nèi)酯I、III對(duì)皮質(zhì)酮損傷的PC12細(xì)胞LDH釋放率的影響
[0027]細(xì)胞以每孔IX 105個(gè)接種于24孔板中，培養(yǎng)24h后棄去細(xì)胞液，空白組加入無(wú)血清 培養(yǎng)基，模型組加入含400μΜ · Γ1皮質(zhì)酮的無(wú)血清培養(yǎng)基，給藥組加入含400μΜ · I/1皮質(zhì)酮 及濃度分別為1，10，20μΜ · Γ1白術(shù)內(nèi)酯I(或白術(shù)內(nèi)酯III)的無(wú)血清培養(yǎng)基。作用48h后收集 細(xì)胞上清液，按照說(shuō)明書的方法測(cè)定LDH活性。
[0028] 1.2.3流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)白術(shù)內(nèi)酯I、III對(duì)皮質(zhì)酮損傷的PC12細(xì)胞凋亡的影響
[0029]細(xì)胞以每孔4 X105個(gè)接種于6孔板中，培養(yǎng)24h后棄去細(xì)胞液，空白組加入無(wú)血清 培養(yǎng)基，模型組加入含400μΜ · Γ1皮質(zhì)酮的無(wú)血清培養(yǎng)基，給藥組加入含400μΜ · I/1皮質(zhì)酮 及濃度為20μΜ · I/1白術(shù)內(nèi)酯1(或白術(shù)內(nèi)酯III)的無(wú)血清培養(yǎng)基。作用24h后棄上清，收集細(xì) 胞，用PBS重懸細(xì)胞。分別加入5yLAnnexin V-FITC及5yL碘化丙啶，輕輕混勻。室溫避光孵育 20分鐘后，經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
[0030] 1.3實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0031] 1.3.1白術(shù)內(nèi)酯I、III對(duì)皮質(zhì)酮損傷的PC12細(xì)胞存活率的影響
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