一種抗疲勞的中藥組合提取物及其制備方法和應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種中藥組合及其提取物，具體地說，一種抗疲勞尤其是特殊環(huán)境疲 勞損傷的中藥組合提取物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 疲勞是受多因素影響引起的機(jī)體內(nèi)許多生理生化變化的綜合反應(yīng)。分為軀體性 疲勞和心理性疲勞，軀體性疲勞主要表現(xiàn)為運(yùn)動(dòng)能力的下降，心理性疲勞主要表現(xiàn)為行為 與意志的消極改變。疲勞在一定的范圍內(nèi)是一種正常的生理現(xiàn)象，隨著社會(huì)工作與生活節(jié) 奏也越來(lái)越快，來(lái)自工作、家庭、住房、醫(yī)療、人際關(guān)系等的壓力使人長(zhǎng)期處于緊張狀態(tài)，易 于引發(fā)軀體性疲勞和心理性疲勞，若長(zhǎng)期得不到緩解就會(huì)轉(zhuǎn)變?yōu)椴±硇缘钠冢：θ说?身心健康，使生活質(zhì)量嚴(yán)重下降，因而尋找有效并且安全的抗疲勞藥物已成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的 一個(gè)研究重點(diǎn)。在軍事領(lǐng)域，軍事作業(yè)常需在特殊環(huán)境下進(jìn)行，如高原低氧地區(qū)、寒冷地區(qū) 和炎熱地區(qū)等自然環(huán)境和密閉艙室、地下掩蔽工程等特殊環(huán)境，大多數(shù)環(huán)境惡劣，受高溫、 高濕、噪音、振動(dòng)、電離輻射、有害氣體等多種復(fù)合因素影響，官兵的體力消耗和精神負(fù)擔(dān)加 重，長(zhǎng)期處于該環(huán)境中將對(duì)作業(yè)人員的身體和心理健康產(chǎn)生危害，可能出現(xiàn)精神不集中、焦 慮、疲勞、機(jī)體內(nèi)分泌紊亂、免疫力下降等疲勞癥狀，該狀態(tài)會(huì)嚴(yán)重影響軍事人員的作業(yè)效 率和戰(zhàn)斗力。因此，抗特殊環(huán)境下疲勞損傷藥物的研究對(duì)軍事醫(yī)學(xué)也具有重要的意義。 [0003]目前市面上的抗疲勞藥物多是一些化學(xué)藥物，這些藥物在發(fā)揮治療效果的同時(shí) 也帶來(lái)了不同程度的副作用。中藥具有活性成分多、作用緩和、副作用小等特點(diǎn)，作為 抗疲勞藥物的研究和開發(fā)具有廣闊的前景。刺五加為五加科植物刺五加 Acanthopanax senticosus(Rupr. et Maxim. )Harms的干燥根和根莖或莖[1]，其主要藥效成分為三砲 皂苷類、木脂素類和紫錐菊多酚（丁香苷和刺五加苷E)，藥理實(shí)驗(yàn)證實(shí)刺五加具有抗?jié)?瘍、抗腫瘤、抗炎、抗福射和保護(hù)肝臟等作用。黃苗藥材為豆科植物蒙古黃苗Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao 或膜英黃苗 Astragalus membranaceus(Fisch. )Bge.的干燥根[2]，藥理研究表明黃苗具有增強(qiáng)機(jī)體免疫力、耐缺 氧、抗應(yīng)激、調(diào)節(jié)血壓、降血糖、抗衰老、抗癌、強(qiáng)心、保護(hù)肝臟和腎臟的作用。明黨參藥材為 傘形科植物明黨參Changium smyrnioides Wolff的干燥根[3]，其含有揮發(fā)油、不飽和脂肪 油、多糖、氨基酸、磷脂、膽堿、微量元素等成分。
[0004] 發(fā)明人研制的含刺五加、黃芪和明黨參的復(fù)方刺五加制劑曾作為院內(nèi)制劑用于緩 解疲勞。中醫(yī)理論認(rèn)為疲勞的病位主要在肝、脾、腎三臟，其病機(jī)主要為脾腎虧虛，肝實(shí)致氣 滯血瘀，臟腑功能失調(diào)，機(jī)體氣血陰陽(yáng)正氣不足等。刺五加味辛、微苦，溫，歸脾、腎、心經(jīng)， 具有益氣健脾，補(bǔ)腎安神的功效；黃芪味甘、微溫，歸脾肺經(jīng)，既能補(bǔ)益脾氣，又能升提中氣； 明黨參味甘、微苦，微寒，歸肺、脾、肝經(jīng)，能夠養(yǎng)陰和胃，平肝解毒。發(fā)明人據(jù)此將上述三味 藥組方溫涼共濟(jì)，調(diào)補(bǔ)肝腎，兼顧脾胃，達(dá)到抗疲勞作用。
[0005] 發(fā)明人通過前期研究，并通過小鼠負(fù)重游泳建立持續(xù)運(yùn)動(dòng)所致疲勞模型，對(duì)由刺 五加、黃芪和明黨參配伍組成的復(fù)方進(jìn)行組方優(yōu)化并驗(yàn)證，在此基礎(chǔ)上對(duì)大孔樹脂分離得 到的不同濃度乙醇洗脫部位進(jìn)行抗疲勞篩選，并探討其作用機(jī)制。采用UHPLC-Q-TOF-MS聯(lián) 用技術(shù)對(duì)有效部位中的化學(xué)成分進(jìn)行分析，明確其主要成分。并通過模擬密閉艙室動(dòng)物模 型證實(shí)其對(duì)抗特殊環(huán)境下產(chǎn)生的疲勞具有顯著作用。
[0006] 參考文獻(xiàn)：
[0007] [1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典.一部.2010版.北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社， 2010 ：192
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【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有抗疲勞藥物的不足，缺少安全有效的特殊環(huán)境疲勞損傷 的防治藥物，研制一種抗疲勞尤其是特殊環(huán)境下疲勞損傷的中藥組合及其濃縮液或提取 物。
[0011] 本發(fā)明的再一的目的是，提供上述中藥組合提取物的制備方法。
[0012] 本發(fā)明的另一的目的是，提供上述中藥組合提取物的應(yīng)用。
[0013] 為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：一種抗疲勞的中藥組合提取物，所述 中藥組合由下列重量份的原料藥制成：刺五加、黃芪和明黨參的比例為5 : 5 : 1。
[0014] 以下制備方法制備的中藥組合提取物。
[0015] 為實(shí)現(xiàn)上述第二個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：一種抗疲勞的中藥組合提取 物的制備方法，所述的制備方法包括以下步驟：按刺五加、黃芪和明黨參的重量份比例為 5 : 5 : 1稱取各原料藥，將所述原料藥加水進(jìn)行煎煮、濃縮，加入乙醇進(jìn)行醇沉，醇沉后取 上清液濃縮得濃縮液。
[0016] 所述的制備方法包括以下步驟：按刺五加、黃芪和明黨參的重量份比例為 5 : 5 : 1稱取各原料藥，將所述原料藥加水進(jìn)行煎煮、濃縮，加入乙醇行醇沉，醇沉后取上 清液濃縮過大孔樹脂柱，收集30-75%乙醇洗脫部位，減壓濃縮干燥得提取物。
[0017] 所述的制備方法包括以下步驟：按刺五加、黃芪和明黨參的重量份比例為 5 : 5 : 1稱取各原料藥，將所述原料藥粉碎，以30-95%乙醇回流，濾液濃縮，過大孔樹脂 柱，收集30-75%乙醇洗脫部位，洗脫液減壓濃縮干燥得提取物。
[0018] 所述的制備方法包括以下步驟：按刺五加、黃芪和明黨參的重量份比例為 5 : 5 : 1稱取各原料藥，將所述原料藥洗凈、粉碎，以提取溶劑30-95%乙醇，以2-3ml/min 的速度滲漉，收集15-20倍量乙醇體積的滲漉液，濃縮，用蒸餾水調(diào)節(jié)比重至1. 02~1. 05g/ ml，pH 5-6,濾液通過大孔樹脂柱，并棄去流出液，用水洗脫大孔樹脂柱，棄去洗脫液，繼續(xù) 用30-75%乙醇洗脫大孔樹脂柱，收集30-75%部位洗脫液，洗脫液減壓濃縮干燥得到提取 物。
[0019] 所述的大孔樹脂選自D-101、AB-8、ZTC-1或SP905。
[0020] 為實(shí)現(xiàn)上述第三個(gè)目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：所述的中藥組合提取物在制 備治療或預(yù)防抗疲勞及特殊環(huán)境下疲勞損傷的藥物或食物中的應(yīng)用。
[0021] 所述的疲勞為特殊環(huán)境下的疲勞損傷，所述的特殊環(huán)境為包括有害氣體、噪音、高 溫、高濕或核輻射的密閉環(huán)境。
[0022] 所述的藥物的劑型是口服液、片劑、膠囊、顆粒劑、滴丸劑、丸劑、口嚼片、含片、口 香糖、膏劑、合劑、貼劑或凝膠劑。
[0023] 本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)在于：
[0024] 本發(fā)明以刺五加、黃芪和明黨參三味藥組方，達(dá)到溫涼共濟(jì)，五臟共補(bǔ)，調(diào)補(bǔ)肝腎， 兼顧脾胃，達(dá)到對(duì)單一藥物或其他藥物難以達(dá)效的復(fù)合疲勞的防治作用，本發(fā)明以刺五加、 黃芪和明黨參為主要原料制備的提取物，藥理實(shí)驗(yàn)證明其對(duì)疲勞及特殊環(huán)境下疲勞損傷具 有顯著的預(yù)防作用，無(wú)毒副作用，能夠用于制備抗疲勞的藥物或食品。
【附圖說明】
[0025] 附圖1是大孔樹脂不同濃度乙醇洗脫物對(duì)小鼠血清TG的影響（η = 10)，其中，*P < 0. 05vs control〇
[0026] 附圖2是大孔樹脂不同濃度乙醇洗脫部位對(duì)小鼠血清LDH的影響（η = 10)，其中， < 0. 05,林P < 0.0 lvs control。
[0027] 附圖3是大孔樹脂不同濃度乙醇洗脫部位對(duì)小鼠血清CK的影響（η = 10)，其中， < 0. 05,林P < 0.0 lvs control。
[0028] 附圖4是復(fù)方刺五加對(duì)小鼠體重的影響（η = 10)。
[0029] 附圖5是復(fù)方刺五加對(duì)小鼠海馬神經(jīng)元細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響，其中，A :Model B : Control C :C2HD D :C2MD E :C3HD F :C3MD ;上列 A-F為細(xì)胞結(jié)構(gòu)（X5000,標(biāo)尺=2 μπι)，下 列A-F為突觸泡結(jié)構(gòu)（Χ6000,標(biāo)尺=1· 67 μπι)。
[0030] 附圖6是復(fù)方刺五加對(duì)小鼠胸腺內(nèi)淋巴細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響，其中，A :Model Β : Control C :C2HD D :C2MD E :C3HD F :C3MD ; (X4000,標(biāo)尺=2. 5 μπι) 〇
[0031] 附圖7是復(fù)方刺五加對(duì)小鼠睪丸內(nèi)精細(xì)胞和精子超微結(jié)構(gòu)的影響，其中，A :Model B Control C :C2HD D :C2MD E :C3HD F :C3MD ;上列A-F為細(xì)胞結(jié)構(gòu)（X5000,標(biāo)尺=2 μπι)， 下列A-F為精子形態(tài)（X 6000,標(biāo)尺=1.67 μ m)。
[0032] 附圖8是復(fù)方刺五加對(duì)小鼠小腸絨毛和上皮細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的影響，其中，A :Model B:Control C:C2HD D:C2MD E:C3HD F:C3MD;上列 A-F 為小腸絨毛結(jié)構(gòu)（X8000,標(biāo)尺= 1. 25 μ m)，下列A-F為小腸上皮細(xì)胞結(jié)構(gòu)（X 10000,標(biāo)尺=1 μ m)。
【具體實(shí)施方式】
[0033] 下面結(jié)合附圖對(duì)本發(fā)明提供的【具體實(shí)施方式】作詳細(xì)說明。
[0034] 實(shí)施例1中藥提取物的制備（一）
[0035] 取刺五加、黃芪和明黨參的比例為5 : 5 : 1洗凈，置入提取容器內(nèi)，加8-10倍蒸 餾水，煎煮2次，每次煎煮的時(shí)間為1. 5小時(shí)。將數(shù)次提取的藥液合并，濃縮，加入乙醇進(jìn)行 醇沉，醇沉后的上清液減壓濃縮干燥得提取物C1。
[0036] 實(shí)施例2中藥提取物的制備（二）
[0037] 取刺五加、黃芪和明黨參的比例為5 : 5 : 1洗凈，置提取容器內(nèi)加8-10倍蒸餾 水煎煮2次，每次煎煮的時(shí)間為1. 5小時(shí)。將數(shù)次提取的藥液合并，濃縮至比重為1. 01~ 1. 05,加入乙醇至含醇70-80%進(jìn)行醇沉，醇沉后的上清液濃縮至比重1. 01~1. 04,將提取 液過AB-8大孔樹脂柱。流速1. 5-1. 8BV/h，收集30-75%乙醇洗脫部位，減壓濃縮干燥得提 取物。
[0038] 實(shí)施例3中藥提取物的制備（三）
[0039] 取刺五加、黃芪和明黨參的比例為5 : 5 : 1洗凈，置提取容器內(nèi)加8-10倍蒸餾 水煎煮2次，每次煎煮的時(shí)間為1. 5小時(shí)。將數(shù)次提取的藥液合并，濃縮至比重為1. 01~ 1. 05,加入乙醇至含醇70-80%進(jìn)行醇沉，醇沉后的上清液濃縮至比重1. 01~1. 04,將提取 液過ZTC-1大孔樹脂柱。流速1. 5-1. 8BV/h，收集30-75%乙醇洗脫部位，洗脫液減壓濃縮 干燥得提取物。
[0040] 其中收集30%乙醇洗脫部位減壓濃縮干燥得提取物C2,收集50% -70%乙醇洗脫 部位減壓濃縮干燥得提取物C3。
[0041] 實(shí)施例4中藥提取物的制備（四）
[0042] 按刺五加、黃芪和明黨參的比例為5 : 5 : 1粉碎，以8-10倍量的70-95%乙醇回 流3次，每次2小時(shí)，提取液濃縮，減壓濃縮干燥得提取物。
[0043] 實(shí)施例5中藥提取物的制備（五）
[0044] 按刺五加、黃芪和明黨參的比例為5 : 5 : 1粉碎，以8-10倍量的95%乙醇回流 3次，每次2小時(shí)，濾液濃縮，過D-101大孔樹脂柱，收集30-75%乙醇洗脫部位，減壓濃縮干 燥得提取物。
[0045] 實(shí)施例6中藥提取物的制備（六）
[0046] 按比例取刺五加、黃芪和明黨參的比例為5 : 5 : 1粉碎，加入提取溶劑70-95% 乙醇浸泡24小時(shí)后，進(jìn)行滲漉，收集15-20倍體積的滲漉液，得提取液；將上述提取液濃縮， 蒸餾水調(diào)節(jié)比重至1. 03-1. 05g/ml，上D-101大孔樹脂柱，收集30-75%乙醇洗脫部位，洗脫 液減壓濃縮干燥得到提取物。
[0047] 實(shí)施例7中藥提取物的制備（七）
[0048] 按刺五加、黃芪和明黨參的比例為5