一種含有人參皂苷Rg3和三七皂苷f(shuō)t1的組合物的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種含有人參皂苷Rg3和三七皂苷f(shuō)t1的組合物，按重量百分含量包括人參皂苷Rg3 30％～70％和三七皂苷f(shuō)t130％～70％。同時(shí)還提供了組合物在預(yù)防和治療癌癥及抗癌輔助藥物及提高機(jī)體免疫力的藥品或保健品中的應(yīng)用。本發(fā)明組合物可有效抑制腫瘤細(xì)胞，刺激淋巴細(xì)胞增殖，具有優(yōu)異的藥理藥效作用，在節(jié)省資源、具有更好的藥效作用的基礎(chǔ)上，有效成分組合物具有更好的安全性。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種含有人參皂苷Rg3和三七皂苷f(shuō)t1的組合物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種含有人參皂苷Rg3和三七皂苷f(shuō)tl的組合 物。
【背景技術(shù)】
[0002] 我國(guó)每年新患癌癥約160萬(wàn)人、死于癌癥者約130萬(wàn)人。全世界和我國(guó)的癌癥發(fā)病 率在逐年明顯增加。而我國(guó)癌癥病人就診時(shí)晚期病人仍占多數(shù)，具有已失去了手術(shù)等根治 機(jī)會(huì)、治療效果較差的特點(diǎn)。按現(xiàn)在我國(guó)癌癥死亡的水平，全國(guó)每1分鐘就有2個(gè)人死于癌 癥，每天將有2800多人被癌癥奪走生命，1年將相當(dāng)于一個(gè)有百萬(wàn)人口的城市被毀滅?？梢?jiàn)， 癌癥是常見(jiàn)病、多發(fā)病，對(duì)人們生命和健康有著嚴(yán)重威脅，對(duì)國(guó)民經(jīng)濟(jì)建設(shè)的影響也是巨大 的。在美國(guó)，每年癌癥治療費(fèi)用830億美元，占全國(guó)醫(yī)療費(fèi)用的14%。幾乎每個(gè)人都感受到癌 癥的威脅。因?yàn)槿澜缑磕暌虬┌Y死亡的人數(shù)高達(dá)630萬(wàn)人，而我國(guó)每年因癌癥死亡的人數(shù) 已達(dá)130萬(wàn)人，并且癌癥病人每年以3%的速度遞增，相當(dāng)于每200個(gè)家庭中就有1個(gè)家庭受 到癌癥的威脅。
[0003] 目前，人人"談癌色變"，如何預(yù)防和治療癌癥是一個(gè)世界性的難題。臨床上雖然有 很大抗癌藥物，但沒(méi)有一種藥物能完全預(yù)防和治愈癌癥。人參皂苷Rg3最早從紅參中獲得， 其含量?jī)H為〇. 003 %，因其含量太低，生產(chǎn)工藝復(fù)雜，導(dǎo)致生產(chǎn)成本較高。人參皂苷Rg3具有 顯著的抗腫瘤和提高肌體免疫功能的活性，適合早、中、晚期腫瘤患者及免疫低下預(yù)防腫瘤 發(fā)生人群服用。其作用機(jī)理為抑制腫瘤內(nèi)新生血管形成;阻止脫落癌細(xì)胞在血管壁的著床； 抑制腫瘤細(xì)胞對(duì)血管壁基底膜的浸潤(rùn)，有顯著抗浸潤(rùn)、抗轉(zhuǎn)移作用。臨床實(shí)驗(yàn)證實(shí)其具有較 好的抑制肺癌、肝癌、胃癌、腸癌、乳腺癌等癌細(xì)胞生長(zhǎng)，明顯改善臨床癥狀、提高生存質(zhì)量、 預(yù)防和治療癌癥、改善心臟血管功能、抗血小板凝集、保護(hù)腦神經(jīng)細(xì)胞、提高機(jī)體免疫力。直 接服用具有預(yù)防癌癥以及治療癌癥的功效，適用于急、重、晚期癌癥患者，體質(zhì)較虛弱，服用 可提高自身免疫功能，增強(qiáng)抗瘤能力，減輕化療后毒副作用。人參皂苷rg3與其它抗癌藥物 聯(lián)合應(yīng)用，其抗癌和提高肌體免疫功能方面具有更好的功效。臨床上使用的參一膠囊有效 成分即為人參皂苷rg3,主要用于治療癌癥和癌癥的輔助治療。三七皂苷f(shuō)tl的藥理活性報(bào) 道較少。
[0004] 通過(guò)藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)，其人參皂苷Rg3和三七皂苷f(shuō)tl的組合物抗癌活性和增強(qiáng)機(jī)體免 疫功能活性均比人參皂苷Rg3,即組合物藥理活性比抗癌藥物參一膠囊強(qiáng)，說(shuō)明二者組合具 有協(xié)同的藥理作用，這一發(fā)現(xiàn)對(duì)預(yù)防和治療癌癥的藥物及保健品開(kāi)發(fā)方面具有積極意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種新的藥物組合物，該組合物包括人參皂苷Rg3和三七皂 苷f(shuō)tl，通過(guò)廣泛而深入的研究，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)二者在一定重量比進(jìn)行組方具有協(xié)同的藥理作 用，即二者具有優(yōu)異的藥理藥效作用，在節(jié)省資源、具有更好的藥效作用的基礎(chǔ)上，有效成 分組合物具有更好的安全性。
[0006] 本發(fā)明具體通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：
[0007] 一種含有人參皂苷Rg3和三七皂苷f(shuō)t 1的組合物，按重量百分含量包括人參皂苷 Rg3 30%~70%和三七皂苷f(shuō)tl 30%~70%。
[0008] 優(yōu)選的，本發(fā)明有人參皂苷Rg3和三七皂苷f(shuō)tl的組合物，按重量百分含量包括人 參皂苷Rg3 40%~60%和三七皂苷f(shuō)tl 40%~60%。
[0009] 最優(yōu)選的，本發(fā)明有人參皂苷Rg3和三七皂苷f(shuō)tl的組合物，按重量百分含量包括 人參皂苷Rg3 50%和三七皂苷f(shuō)tl 50%。
[0010] 本發(fā)明組合物可以按需要加工成任何口服和注射上可接受的劑型，本發(fā)明組合物 口服劑可制成片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、湯劑、口服液、口含劑、顆 粒劑、沖劑、丸劑、散劑、丹劑;注射用制劑可制成凍干粉針、靜脈乳劑、注射劑、輸液?？诜?劑優(yōu)選為片劑、膠囊劑、顆粒劑;注射用制劑優(yōu)選為凍干粉針、靜脈乳劑、注射劑。
[0011] 本發(fā)明組合物其配制可由通常的本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的加工方法制備，即將活 性組分與液體溶劑或固體載體混合后，再加入填充劑、粘合劑、潤(rùn)濕劑、崩解劑、吸收促進(jìn) 劑、溶劑、表面活性劑、香味劑、防腐劑、潤(rùn)滑劑、甜味劑或色素中的一種或幾種。
[0012] 本發(fā)明還提供了所述組合物在預(yù)防和治療癌癥及抗癌輔助藥物及提高機(jī)體免疫 力的藥品或保健品中的應(yīng)用。
[0013] 本發(fā)明的有益效果為：本發(fā)明組合物經(jīng)試驗(yàn)證明可有效抑制腫瘤細(xì)胞B16和 HepG2，半數(shù)抑制濃度IC50均在40μg/ml以下，同時(shí)可刺激淋巴細(xì)胞增殖，增強(qiáng)機(jī)體免疫應(yīng)答 功能，有實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)可知小劑量組合物均沒(méi)有刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2和IFN- γ的能力，大劑 量組合物有明顯刺激刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2和IFN- γ。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明，以下所述，僅是對(duì)本發(fā)明的較佳實(shí)施 例而已，并非對(duì)本發(fā)明做其他形式的限制，任何熟悉本專(zhuān)業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示 的技術(shù)內(nèi)容加以變更為同等變化的等效實(shí)施例。凡是未脫離本發(fā)明方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明 的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以下實(shí)施例所做的任何簡(jiǎn)單修改或等同變化，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0015] 實(shí)施例1人參皂苷Rg3和三七皂苷f(shuō)tl注射液的制備
[0016]稱(chēng)取精氨酸58g、等質(zhì)量的水，攪拌均勻，加入人參皂苷Rg3 125g、三七皂苷f(shuō)tl 150g，加熱至50°C，攪拌溶解，用含9%鹽酸的水溶液調(diào)pH值至4.6，加水至全量，攪拌均勻； 再加入配液量0.1 % (g/ml)的活性炭，攪拌25分鐘，粗濾脫炭;過(guò)0.22μπι濾膜，得精濾液;灌 封，每瓶裝量2mL; 118 °C熱壓滅菌18分鐘，檢驗(yàn)，包裝，入庫(kù)。
[0017] 實(shí)施例2人參皂苷Rg3和三七皂苷f(shuō)tl片劑的制備
[0018] 1)將人參皂苷Rg3 20g、三七皂苷f(shuō)tl 10g混合后攪拌均勻，得粉末狀固體；
[0019] 2)將步驟（1)所得的粉末與乳糖55g、羧甲基淀粉鈉2.6g和微粉硅膠4.3g混合均 勻，加入精氨酸63g制成適宜軟材，20目篩制粒；
[0020] 3)羧甲基淀粉鈉5.2g和微粉硅膠1.5g與步驟（2)所得的干顆?；靹颍瑝浩?，得片 劑。
[0021] 實(shí)施例3人參皂苷Rg3和三七皂苷f(shuō)tl膠囊劑的制備
[0022] 稱(chēng)取人參皂苷Rg3 20g、三七皂苷f(shuō)tl 20g，加入淀粉274g，混勻，過(guò)篩，用乙醇水溶 液作為粘合劑，制成適宜軟材，18目篩制粒，60°C烘箱干燥5小時(shí)，16目篩整粒，加入2g硬脂 酸鎂，混勻，制得膠囊劑。
[0023] 下面結(jié)合具體的實(shí)驗(yàn)說(shuō)明本發(fā)明組合物的在抗腫瘤方面的應(yīng)用。
[0024] 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物:昆明小鼠購(gòu)買(mǎi)自昆明醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。
[0025] 細(xì)胞:B16黑色素瘤細(xì)胞(B16melan〇ma cell)和人肝癌細(xì)胞(HepG2)細(xì)胞從美國(guó)典 型細(xì)胞庫(kù)(ATCC，Hanassas，VA，USA)購(gòu)買(mǎi)獲取。
[0026] 培養(yǎng)基:細(xì)胞培養(yǎng)用DMEM液培養(yǎng)(FBS;HyClone，Logan，UT，USA)，培養(yǎng)液添加10% 胎牛血清（FBS;HyClone，Logan，UT，USA)，0 · 03%L-谷氨酰胺，1001VL青酶素，100mg/L鏈霉 素，5%恥(：02調(diào)口!1至6.8-7.0。
[0027] 樣品：實(shí)驗(yàn)組1:人參皂苷Rg3 30%和三七皂苷f(shuō)tl 70% ;實(shí)驗(yàn)組2:人參皂苷Rg3 50%和三七皂苷f(shuō)tl 50%;實(shí)驗(yàn)組3:人參皂苷Rg3 70%和三七皂苷f(shuō)tl 30%。組合物用20μ 1二甲基亞砜(DMS0)溶解，用于配置不同濃度的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)基。紫杉醇(TAX: Pac 1 i taxe 1) 和順鉬(PH):Cisplatin)購(gòu)自 Sigma Chemical公司（St ·Louis，MO) 〇
[0028] 設(shè)備：儀器：酶標(biāo)儀Bio-RAD 680(USA);C02培養(yǎng)箱Thermo Forma 3310(美國(guó)）；倒 置生物顯微鏡XD-101型(南京)等。
[0029] 實(shí)施例3對(duì)腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制評(píng)價(jià)
[0030] 原代培養(yǎng)的正常昆明鼠腎細(xì)胞，B16細(xì)胞以及HepG2細(xì)胞以細(xì)胞密度為lX104/ml 接種于96孔板中培養(yǎng)24小時(shí)后，把普通DMEM培養(yǎng)基換為含有終濃度為Oyg，25yg，50yg，75μ g，l〇〇yg不同組化合的DMEM培養(yǎng)基，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)孔，并在24小時(shí)之后用ΜΤΤ法檢測(cè)細(xì)胞的 活性，細(xì)胞抑制活性用抑制濃度IC50(median inhibitory concentration)表示。抑制濃度 (IC50)為細(xì)胞活性抑制率為50 %時(shí)的藥物濃度，計(jì)算方法為IC5Q = (A細(xì)》組一 / A娜獅且一Ass且）X 100% 〇
[0031 ] MTT法：根據(jù)Mosmann建立的MTT法檢測(cè)藥物的細(xì)胞毒性（Y.Nakajima，Υ· Saton， M.Katsumata,K.Tsujiyama,Y.Ida,and J.Shoji,Phytochemistry 1994,36,119-127)〇具 體方法是：向吸去上清的細(xì)胞孔中加入0.4mg/mL MTT，0. lmL/孔，37°C5%⑶2培養(yǎng)4h，去上 清，每孔加入O.lmL二甲基亞砜(DMS0)，孵育10min，在酶標(biāo)儀上測(cè)定溶液在570nm下的吸光 度值。
[0032]表1對(duì)腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC5Q(yg/mL)
[0033]
[0034] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表1所示，陽(yáng)性對(duì)照組(ΤΑΧ，ΡΗ))以及三個(gè)實(shí)驗(yàn)組均對(duì)B16和HepG2細(xì)胞 有抑制作用。對(duì)兩腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度IC 5Q均在40μg/ml以下。并且，所有實(shí)用組對(duì)正常 小鼠腎細(xì)胞均沒(méi)有毒性。
[0035]實(shí)施例4免疫調(diào)節(jié)活性檢測(cè)
[0036] 將125只18~20g昆明小鼠按照每組5只隨機(jī)分為:生理鹽水組，12組lmg/kg和12組 4mg/kg的試驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組為:實(shí)驗(yàn)組1:人參皂苷Rg3 30%和三七皂苷f(shuō)tl 70%;實(shí)驗(yàn)組2:人 參皂苷1^3 50%和三七皂苷忖150%;實(shí)驗(yàn)組3:人參皂苷1^3 70%和三七皂苷忖130%。 每天分別腹腔注射生理鹽水或者4mg/kg的化合物組。7天后處死，并脫臼取脾預(yù)備下面實(shí) 驗(yàn)。
[0037] 1)MTT法測(cè)定淋巴細(xì)胞增殖能力
[0038] 無(wú)菌制備脾細(xì)胞懸液，調(diào)細(xì)胞濃度為lX107/mL。每孔100yL。設(shè)細(xì)胞對(duì)照孔（加 DMEM培養(yǎng)液)和伴刀豆球蛋白（ConA)刺激孔(ConA的濃度為5mg/L)。于37 °C⑶2培養(yǎng)48h，加 入5mg/mL的MTT溶液，37°C5 %⑶2培養(yǎng)4h，去上清，每孔加入100Λ二甲基亞砜(DMS0)，孵育 10min，在酶標(biāo)儀上測(cè)定溶液在570nm下的吸光度值Α。計(jì)算刺激指數(shù)(SI) =刺激孔Α平均 值/對(duì)照孔A平均值。
[0039]實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2,陽(yáng)性對(duì)照組(TAX，PPD)均沒(méi)有刺激淋巴細(xì)胞增殖的作用，三個(gè)實(shí) 驗(yàn)組均能刺激淋巴細(xì)胞增殖。
[0040] 2)NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷毒性測(cè)定
[0041] 將100yL小鼠脾細(xì)胞（lX107/mL)與100yL YAC-1細(xì)胞按細(xì)胞濃度50:1的比例加入 96孔板。設(shè)靶細(xì)胞(YAC-1細(xì)胞)對(duì)照、效應(yīng)細(xì)胞(各化合物組小鼠脾細(xì)胞)對(duì)照，各3復(fù)孔。于 37 °C、5 % C02孵箱培養(yǎng)18h，加入MTT溶液，測(cè)定A570值。計(jì)算NK細(xì)胞毒百分率:NK細(xì)胞毒百分 率=[1-(效靶孔A值-效應(yīng)對(duì)照孔A值)/靶對(duì)照孔A值]X 100%。
[0042] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2,陽(yáng)性對(duì)照組（TAX，PPD)均沒(méi)有加強(qiáng)NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷的作 用。NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷毒性實(shí)驗(yàn)表明，小劑量實(shí)驗(yàn)組均能增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷性，均有較 強(qiáng)活性。
[0043]表2淋巴細(xì)胞增殖能力（SI)及NK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞殺傷毒性的影響（％)(n = 5， $ ±SD，*表示和刺激組比較P〈〇 · 05)
[0044]
[0045] 3)測(cè)定脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中IL-2和IFN- γ分泌測(cè)定
[0046] IL-2活性測(cè)定采用小鼠 Τ淋巴母細(xì)胞增殖法，ΜΤΤ法所測(cè)Α570值與IL-2活性呈正相 關(guān)，IFN- γ活性測(cè)定采用L929細(xì)胞病變抑制法，結(jié)晶紫染色所測(cè)Α540值大小反映 IFN- γ活 性的高低。將脾細(xì)胞培養(yǎng)上清加入到小鼠 Τ淋巴母細(xì)胞或L929細(xì)胞中，兩種細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況 反映相應(yīng)的細(xì)胞因子含量。
[0047] 表3實(shí)驗(yàn)組對(duì)IL-2和IFN- γ分泌的影響(η = 5, ? ±SD產(chǎn)表示和刺激組比較Ρ〈0·05)
[0050] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3,陽(yáng)性對(duì)照組(TAX，PPD)均沒(méi)有刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2和IFN- γ的 能力。三個(gè)實(shí)驗(yàn)組小劑量組均沒(méi)有刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2和IFN- γ的能力，大劑量組有明 顯刺激刺激淋巴細(xì)胞分泌IL-2和IFN- γ。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種含有人參皂苷Rg3和三七皂苷f(shuō)t 1的組合物，其特征在于：按重量百分含量包括 人參皂苷Rg3 30%~70%和三七皂苷f(shuō)tl 30%~70%。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種含有人參皂苷Rg3和三七皂苷f(shuō)tl的組合物，其特征在于： 按重量百分含量包括人參皂苷Rg3 40%~60%和三七皂苷f(shuō)tl 40%~60%。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種含有人參皂苷Rg3和三七皂苷f(shuō)tl的組合物，其特征在于： 按重量百分含量包括人參皂苷Rg3 50%和三七皂苷f(shuō)tl 50%。4. 權(quán)利要求1~3中任一項(xiàng)所述的組合物在制備抗癌輔助藥物中的應(yīng)用。5. 權(quán)利要求1~3中任一項(xiàng)所述的組合物在制備提高機(jī)體免疫力的藥品或保健品中的 應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P37/04GK105832753SQ201610153862
【公開(kāi)日】2016年8月10日
【申請(qǐng)日】2016年3月17日
【發(fā)明人】沈勇, 羅杰, 鄧毅
【申請(qǐng)人】云南普優(yōu)生物科技有限公司