一種通過乳酸菌生物拮抗抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖的方法【專利摘要】本發(fā)明公開了一種通過乳酸菌生物拮抗抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖的方法，包括：將乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.LactisCICC6242進行培養(yǎng)，制成密度為109～1010cfu/mL的高密度菌懸液；將高密度菌懸液加入到養(yǎng)殖貽貝的水體中，抑制貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖。本發(fā)明中，通過乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.LactisCICC6242產(chǎn)生一種對人體無害而對細(xì)菌具有強殺滅作用的細(xì)菌素Nisin，能夠抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖，通過生物拮抗抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖而保障貽貝食用安全?！緦＠f明】一種通過乳酸菌生物拮抗抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
[0001]本發(fā)明涉及食品安全領(lǐng)域，具體涉及一種通過乳酸菌生物拮抗抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖的方法?！?br>背景技術(shù)：
】[0002]中國貽貝年養(yǎng)殖量近100萬噸，浙江省是貽貝主要產(chǎn)區(qū)，占全國總產(chǎn)量15%以上。近30年來，中國近海污染加劇，再加上全球氣候變暖等因素，海水中副溶血弧菌（Vibrioparahaem〇lytiCuS，Vp)含量有上升趨勢。VP的致病影響因素較多，如侵襲力、溶血毒素，其中又以耐熱直接溶血毒素(ThermalstableDirectheamolysin，TDH)最為重要。VP污染的食物會引起急性腸胃炎，患者癥狀主要表現(xiàn)為腹瀉、嘔吐、頭痛、惡心、腹部絞痛和低燒等，病程一般為2~4d，持續(xù)時間較短，且能自愈。重癥亦可引發(fā)傷口感染和敗血癥，身體其它組織也會產(chǎn)生病變，如皮膚大皰性損害、反應(yīng)性關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等。[0003]而貽貝是濾食性生物，可以從環(huán)境中大量富集Vp，使貽貝成為Vp腹瀉的重要食源。根據(jù)我國國家食源性疾病監(jiān)測網(wǎng)的監(jiān)測數(shù)據(jù)顯示，由Vp引起的食物中毒在細(xì)菌性食物中毒中已經(jīng)占據(jù)重要位置。[0004]貽貝在捕撈上岸后，為保持其新鮮度，在銷售環(huán)節(jié)往往繼續(xù)在常溫下養(yǎng)殖而不是進行冷藏或冷凍。Vp在常溫下會繼續(xù)繁殖。因此，為保障貽貝食用安全，需要開發(fā)在常溫下抑制貽貝體內(nèi)Vp繁殖而又不影響貽貝肉質(zhì)的技術(shù)?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0005]本發(fā)明提供了一種通過乳酸菌生物拮抗抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌(Vp)繁殖而保障貽貝食用安全的方法，通過將產(chǎn)Nisin的乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.lactis(CICC6242)加入養(yǎng)殖貽貝的水體中，發(fā)揮對貽貝體內(nèi)Vp的抑制作用，從而保障貽貝食用安全。[0006]-種通過乳酸菌生物拮抗抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖的方法，包括以下步驟：[0007]1)將乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.LactisCICC6242進行培養(yǎng)，制成密度為1〇9~101Qcfu/mL的高密度菌懸液；[0008]2)將步驟1)中109~101()Cfu/mL的高密度菌懸液加入到養(yǎng)殖貽貝的水體中，抑制貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖。[0009]本發(fā)明中，通過乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp?Lactis(CICC6242)產(chǎn)生一種對人體無害而對細(xì)菌具有強殺滅作用的細(xì)菌素Nisin，能夠抑制賭貝體內(nèi)副溶血弧菌(Vp)繁殖，乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.lactis(CICC6242)通過生物詰抗抑制貽貝體內(nèi)Vp繁殖而保障貽貝食用安全。[0010]步驟1)中，乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.lactis(CICC6242)米用現(xiàn)有技術(shù)，采用市售產(chǎn)品，來自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(CICC)，地址:北京市朝陽區(qū)酒仙橋中路24號院6號樓;保藏日期為2010年，菌種保持編號為6242。[0011]作為優(yōu)選，將乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.LactisCICC6242進行培養(yǎng)，包括:乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.LactisCICC6242的出發(fā)密度為106~107個/mL，接種至液體培養(yǎng)基中接種量為1%~5%，33°C~39°C振蕩培養(yǎng)20~28h，至菌液密度為1〇9~101Qcfu/mL的高密度菌懸液。[0012]進一步優(yōu)選，將乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.LactisCICC6242進行培養(yǎng)，包括:乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.LactisCICC6242的出發(fā)密度為106~107個/mL，接種至液體培養(yǎng)基中接種量為2%~3%，36°C~37°C振蕩培養(yǎng)22~26h，至菌液密度為1〇9~101Qcfu/mL的高密度菌懸液。[0013]所述的液體培養(yǎng)基，以1L計，包括以下組分：蛋白胨8.0~12.0g;牛肉膏8.0~12.0g;酵母膏4.0~6.0g;檸檬酸氫二銨L0~3.0g;[0014]葡萄糖16.0~24_0g;乙酸鈉4.0~6.0g;磷酸氫二鉀L0~3.0g;硫酸鎂0.48~OJOg;硫酸錳0.20~0.30g;吐溫800.8~1.2mL;[0015]水余量;[0016]該液體培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)至6.0~6.6。[0017]進一步優(yōu)選，所述的液體培養(yǎng)基，以1L計，包括以下組分：蛋白胨lO.Og;牛肉膏l(xiāng)〇.〇g;酵母膏5.0g;檸檬酸氫二銨2.0g:葡萄糖2(X0g;[0018]乙酸鈉5.0g;磷酸氫二鉀2.0g;硫酸鎂〇.58g;硫酸錳0.25g;吐溫80l.OmL；水余重；[0019]該液體培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)至6.3，液體培養(yǎng)基在121°C滅菌20min。[0020]步驟2)中，作為優(yōu)選，高密度菌懸液加入室溫養(yǎng)殖貽貝的水體中，按照相比水體為1~3%的比例加入。即高密度菌懸液與養(yǎng)殖貽貝的水體的體積比為1~3:100，進一步優(yōu)選，高密度菌懸液加入室溫養(yǎng)殖貽貝的水體中，按照相比水體為2%的比例加入。即高密度菌懸液與養(yǎng)殖貽貝的水體的體積比為2:100.[0021]將高密度菌懸液加入室溫養(yǎng)殖貽貝的水體中之后，乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.lactis(CICC6242)繼續(xù)自然繁殖以發(fā)揮對貽貝體內(nèi)副溶血弧菌的抑制作用。[0022]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下優(yōu)點：[0023]本發(fā)明中，通過乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp?Lactis(CICC6242)產(chǎn)生一種對人體無害而對細(xì)菌具有強殺滅作用的細(xì)菌素Nisin，能夠抑制賭貝體內(nèi)副溶血弧菌(Vp)繁殖，乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.lactis(CICC6242)通過生物詰抗抑制貽貝體內(nèi)Vp繁殖而保障貽貝食用安全，有利于市場化推廣利用，具備廣闊的應(yīng)用前景?！揪唧w實施方式】[0024]實施例1[0025]1)產(chǎn)Nisin的乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp?lactis(CICC6242)高密度培養(yǎng)，CICC6242的出發(fā)密度為1.10X106個/mL，接種至液體培養(yǎng)基（以1L計，蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，檸檬酸氫二銨2.0g，葡萄糖20.0g，乙酸鈉5.0g，磷酸氫二鉀2?0g，硫酸鎂0?58g，硫酸錳0?25g，吐溫801?OmL，水余量;pH=6?3，121°C滅菌20min)中，接種量為1%，37°C振蕩培養(yǎng)24h，菌液密度為2.25X109cfu/mL，得到高密度菌懸液。[0026]2)將乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp?lactis(CICC6242)密度為2?25X109cfu/mL的高密度菌懸液按照相比水體為1%的比例加入到室溫25°C養(yǎng)殖貽貝的水體中，在室溫25°C水體中，乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.lactis(CICC6242)通過生物拮抗抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖而保障貽貝食用安全。[0027]3)經(jīng)過步驟1)和步驟2)的處理后（24hr之后），貽貝中Vp密度受到明顯抑制，具體詳見表1。[0028]乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp?lactis(CICC6242)來自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(CICC)，菌種保持編號為6242。[0029]貽貝中Vp測定:按照標(biāo)準(zhǔn)SN0173-2010《出口食品副溶血性弧菌檢驗方法》的最可能數(shù)(mostprobablenumer，MPN)9管法。[0030]表1[0032]實施例2[0033]1)產(chǎn)Nisin的乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp?lactis(CICC6242)高密度培養(yǎng)，CICC6242的出發(fā)密度為1.23X106個/mL，接種至液體培養(yǎng)基（以1L計，蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母膏5.0g，檸檬酸氫二銨2.0g，葡萄糖20.0g，乙酸鈉5.0g，磷酸氫二鉀2?0g，硫酸鎂0?58g，硫酸錳0?25g，吐溫801?OmL，水余量;pH=6?3，121°C滅菌20min)中，接種量為5%，37°C振蕩培養(yǎng)24h，菌液密度為2.63X109cfu/mL，得到高密度菌懸液。[0034]2)將乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp?lactis(CICC6242)密度為2?63X109cfu/mL的高密度菌懸液按照相比水體為3%的比例加入到室溫25°C養(yǎng)殖貽貝的水體中，在室溫25°C水體中，乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.lactis(CICC6242)通過生物拮抗抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖而保障貽貝食用安全。[0035]3)經(jīng)過步驟1)和步驟2)的處理后（24hr之后），貽貝中Vp密度受到明顯抑制，具體詳見表2。[0036]乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp?lactis(CICC6242)來自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(CICC)，菌種保持編號為6242。[0037]貽貝中Vp測定:按照標(biāo)準(zhǔn)SN0173-2010《出口食品副溶血性弧菌檢驗方法》的最可能數(shù)(mostprobablenumer，MPN)9管法。[0038]表2[0040]實施例3[0041]1)產(chǎn)Nisin的乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.lactis(CICC6242)高密度培養(yǎng)，CICC6242的出發(fā)密度為1.34X106個/mL，接種至液體培養(yǎng)基（蛋白胨10.0g，牛肉膏10.〇g，酵母膏5.0g，檸檬酸氫二銨2.0g，葡萄糖20.0g，乙酸鈉5.0g，磷酸氫二鉀2.0g，硫酸鎂0.58g，硫酸錳0.25g，吐溫801.OmL，水余量;pH=6.3，121°C滅菌20min)中，接種量為2%，37°C振蕩培養(yǎng)24h，菌液密度為2.52X109cfu/mL，得到高密度菌懸液。[0042]2)將乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp?lactis(CICC6242)密度為2?52X109cfu/mL的高密度菌懸液按照相比水體為2%的比例加入到室溫25°C養(yǎng)殖貽貝的水體中，在室溫25°C水體中，乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.lactis(CICC6242)通過生物拮抗抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖而保障貽貝食用安全。[0043]3)經(jīng)過步驟1)和步驟2)的處理后（24hr之后），貽貝中Vp密度受到明顯抑制，具體詳見表3。[0044]乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp?lactis(CICC6242)來自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(CICC)，菌種保持編號為6242。[0045]貽貝中Vp測定:按照標(biāo)準(zhǔn)SN0173-2010《出口食品副溶血性弧菌檢驗方法》的最可能數(shù)(mostprobablenumer，MPN)9管法。[0046]表3[0048]實施例4[0049]1)產(chǎn)Nisin的乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp?lactis(CICC6242)高密度培養(yǎng)，CICC6242的出發(fā)密度為1.07X106個/mL，接種至液體培養(yǎng)基（蛋白胨10.0g，牛肉膏10.〇g，酵母膏5.0g，檸檬酸氫二銨2.0g，葡萄糖20.0g，乙酸鈉5.0g，磷酸氫二鉀2.0g，硫酸鎂0.58g，硫酸錳0.25g，吐溫801.OmL，水余量;pH=6.3，121°C滅菌20min)中，接種量為3%，37°C振蕩培養(yǎng)24h，菌液密度為2.55X109cfu/mL，得到高密度菌懸液。[0050]2)將乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp?lactis(CICC6242)密度為2?55X109cfu/mL的高密度菌懸液按照相比水體為2%的比例加入到室溫25°C養(yǎng)殖貽貝的水體中，在室溫25°C水體中，乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.lactis(CICC6242)通過生物拮抗抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖而保障貽貝食用安全。[0051]3)經(jīng)過步驟1)和步驟2)的處理后（24hr之后），貽貝中Vp密度受到明顯抑制，具體詳見表4。[0052]乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp?lactis(CICC6242)來自中國工業(yè)微生物菌種保藏管理中心(CICC)，菌種保持編號為6242。[0053]貽貝中Vp測定:按照標(biāo)準(zhǔn)SN0173-2010《出口食品副溶血性弧菌檢驗方法》的最可能數(shù)（mostprobablenumer，MPN)9管法。[0054]表4【主權(quán)項】1.一種通過乳酸菌生物拮抗抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖的方法，其特征在于，包括以下步驟：1)將乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.LactisCICC6242進行培養(yǎng)，制成密度為109~101()Cfu/mL的高密度菌懸液；2)將步驟1)中109~101()cfu/mL的高密度菌懸液加入到養(yǎng)殖貽貝的水體中，抑制貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過乳酸菌生物拮抗抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖的方法，其特征在于，步驟1)中，將乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.LactisCICC6242進行培養(yǎng)，包括:乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.LactisCICC6242的出發(fā)密度為106~107個/mL，接種至液體培養(yǎng)基中接種量為1%~5%，33°C~39°C振蕩培養(yǎng)20~28h，至菌液密度為1〇9~101Qcfu/mL的高密度菌懸液。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的通過乳酸菌生物拮抗抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖的方法，其特征在于，將乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.LactisCICC6242進行培養(yǎng)，包括:乳酸乳球菌Lactococcuslactissubsp.LactisCICC6242的出發(fā)密度為106~107個/mL，接種至液體培養(yǎng)基中接種量為2%~3%，36°C~37°C振蕩培養(yǎng)22~26h，至菌液密度為109~101Qcfu/mL的高密度菌懸液。4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的通過乳酸菌生物拮抗抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖的方法，其特征在于，所述的液體培養(yǎng)基，以1L計，包括以下組分：蛋白胨8.0~12.0g;牛肉膏8.0~12.0g;酵母膏4.0~6.0g;檸檬酸氫二銨1.0~3.0g;葡萄糖16.0~24.0g;乙酸鈉4.0~6.0g;磷酸氫二铘L0~3.0g;硫酸鎂0.48~0,70g;硫酸錳0.20~0.30g;吐溫800.8~1.2mL;水余量;該液體培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)至6.0~6.6。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的通過乳酸菌生物拮抗抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖的方法，所述的液體培養(yǎng)基，以1L計，包括以下組分：蛋白胨lO.Og;牛肉膏l(xiāng)O.Og;酵母膏5.0g;檸檬酸氫二銨2.0g;葡萄糖20.0g;乙酸鈉5.0g;磷酸氫二鉀2.0g;硫酸鎂0.58g;硫酸錳0.25g;吐溫80l.OmL；水余量;該液體培養(yǎng)基的pH值調(diào)節(jié)至6.3，該液體培養(yǎng)基在121°C滅菌20min。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的通過乳酸菌生物拮抗抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖的方法，步驟2)中，所述的高密度菌懸液與養(yǎng)殖貽貝的水體的體積比為1~3:100。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的通過乳酸菌生物拮抗抑制貽貝體內(nèi)副溶血弧菌繁殖的方法，步驟2)中，所述的高密度菌懸液與養(yǎng)殖貽貝的水體的體積比為2:100。【文檔編號】C12R1/46GK105853465SQ201610182359【公開日】2016年8月17日【申請日】2016年3月25日【發(fā)明人】阮暉,胡慧雯,金迅【申請人】浙江大學(xué)