一種果膠-多臂聚乙二醇自組裝制備納米藥物的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種果膠?多臂聚乙二醇自組裝制備納米藥物的方法，它是由果膠（PET）羥基與載藥的八臂聚乙二醇的羧基的酯化作用自組裝形成的納米粒子。八臂聚乙二醇負(fù)載藥物，制備載藥的納米粒子，并在自組裝過(guò)程中包裹10?羥基喜樹堿（HCPT）。本發(fā)明的果膠?多臂聚乙二醇自組裝制備納米藥物的載藥量可調(diào)，八臂聚乙二醇可負(fù)載多種水溶性的或疏水型藥物，靶向性，穩(wěn)定性好，生物降解性好，毒性低，具有緩釋功能的納米藥物。本發(fā)明屬于生物制藥和納米技術(shù)領(lǐng)域，制備技術(shù)工藝簡(jiǎn)單，周期短。
【專利說(shuō)明】
-種果膠-多臂聚乙二醇自組裝制備納米藥物的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物制藥和納米技術(shù)領(lǐng)域，設(shè)及藥物遞送系統(tǒng)，具體設(shè)及一種果膠-多 臂聚乙二醇自組裝制備納米藥物的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 果膠(Pectin)是存在于植物細(xì)胞壁中的多糖類大分子物質(zhì)，它與聚乙二醇同為食 品級(jí)高分子營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，疏水藥物用高分子八臂聚乙二醇和果膠納米載體共同包載，遞送到 祀細(xì)胞，可W達(dá)到緩慢釋放藥物的目的，自組裝過(guò)程包裹另一種藥物，達(dá)到互相促進(jìn)的作 用，可W實(shí)現(xiàn)兩種藥物的協(xié)同作用，從而增加療效。
[0003] 熊果酸(Ursolic acid,簡(jiǎn)稱UA)又名烏索酸、烏蘇酸，是一種五環(huán)Ξ祗類化合物， 廣泛存在于熊果、女貞、白花蛇舌草等天然藥用植物和果實(shí)中，具有抑制腫瘤細(xì)胞增殖、誘 導(dǎo)細(xì)胞調(diào)亡、抗突變、保肝、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫等多種生物活性，然而UA難溶于水，口服給藥體內(nèi) 吸收差，體外釋放度小，難于透皮吸收，生物利用度較差，運(yùn)些都限制了 UA在藥學(xué)領(lǐng)域的廣 泛應(yīng)用，因此，解決其水溶性的問(wèn)題、增加藥物穩(wěn)定性、提高對(duì)癌細(xì)胞的緩釋殺傷能力是UA 臨床應(yīng)用的關(guān)鍵。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種果膠-多臂聚乙二醇自組裝制 備納米藥物的方法，果膠與載藥多臂聚乙二醇在水介質(zhì)中可自組裝形成納米粒子，解決UA 的水溶相差，生物利用度低等問(wèn)題，使用果膠和八臂聚乙二醇為藥物載體，祀向性好，載藥 量高，避免藥物的不完全釋放和突釋情況對(duì)患者帶來(lái)的毒副作用。
[0005] -種果膠-多臂聚乙二醇自組裝制備納米藥物的方法的技術(shù)方案如下： 所述一種果膠-多臂聚乙二醇自組裝制備納米藥物的方法，載有熊果酸(UA)的八臂聚 乙二醇與果膠通過(guò)醋鍵相連，所述的自組裝果膠-多臂聚乙二醇納米藥物具有如式I所示的 結(jié)構(gòu)：
式中，所述果膠醋化度50~75%，八臂聚乙二醇分子量20000。
[0006] 所述的一種果膠-多臂聚乙二醇自組裝制備納米藥物的方法，其納米粒子中UA的 載藥量為1%-40%，納米粒子半徑10-200nm。
[0007]本發(fā)明所述的一種果膠-多臂聚乙二醇自組裝制備納米藥物的方法，包括W下步 驟： (1) 用10ml四氨巧喃溶解0.5g的八臂聚乙二醇，加入0.5g激活劑1-(3-二甲氨基丙 基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，0.06g催化劑4-二甲氨基化晚(DMAP)，攬拌，再加入0.1 ~lOmol熊果酸反應(yīng)36~4她，反應(yīng)物混合物旋蒸，透析過(guò)夜，透析液冷凍干燥，得到粉末A; (2) 取0.2g步驟(1)中的粉末A溶于DMS0，加入0.2g EDC和0.02g DMAP，反應(yīng)30min，然后 加入一定量的果膠，反應(yīng)30~50h，得到反應(yīng)混合液； (3) 將步驟(2)中得到的反應(yīng)混合液加入乙酸，得到絮狀沉淀，離屯、洗涂多次，真空干 燥，得到果膠-載藥八臂聚乙二醇粉末B; (4) 取20mg步驟(3)中粉末B和5mg 10-徑基喜樹堿溶于5ml二甲基亞諷，溶解5min，然后 逐滴滴入去離子水中，所得溶液透析過(guò)夜，冷凍干燥，得到所述果膠-多臂聚乙二醇納米粒 子。
[000引優(yōu)選地，步驟(1)步驟(2)所述的八臂聚乙二醇與熊果酸的摩爾比為1:0.5~1:10; 優(yōu)選地，步驟(2)所述的果膠與載藥八臂聚乙二醇的摩爾比為0.1:0.01~0.1:1; 優(yōu)選地，步驟(2)所述的果膠-多臂聚乙二醇自組裝納米粒子粒徑10-200nm; 優(yōu)選地，步驟(2)所述的果膠-多臂聚乙二醇自組裝納米粒子的質(zhì)量百分比0.01%-90%; 優(yōu)選地，（1)-(4)所述的一種果膠-多臂聚乙二醇自組裝制備納米藥物的方法，具有緩 釋功能、癌祀向性及穩(wěn)定的粒徑大小。
[0009] 本發(fā)明W果膠與八臂聚乙二醇為藥物載體，UA與親水線性聚合物八臂聚乙二醇鍵 接，所得的果膠-載藥八臂聚乙二醇的聚合物自組裝制備納米粒子，結(jié)構(gòu)比較穩(wěn)定，制作工 藝簡(jiǎn)單，實(shí)現(xiàn)藥物的水溶性和緩釋功能，W及對(duì)癌細(xì)胞的祀向性，并具有較高載藥量，納米 藥物的粒徑為10-200nm。
[0010] 相對(duì)現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明具有W下有益效果： 本發(fā)明的一種果膠-多臂聚乙二醇自組裝制備納米藥物具有癌祀向性，生物相容性好， 毒副作用低，具有緩釋功能，果膠-載藥八臂聚乙二醇的聚合物在自組裝的同時(shí)還包裹 HCPT，增大了載藥量，聯(lián)合UA和HCPT祀向作用于腫瘤部位，W達(dá)到誘導(dǎo)腫瘤調(diào)亡的目的。本 發(fā)明的藥物合成及自組裝成納米藥物過(guò)程操作簡(jiǎn)單，只需在水介質(zhì)中形成納米粒子，納米 粒子穩(wěn)定。
【附圖說(shuō)明】
[0011] 圖1為合成高分子化合物陽(yáng)T-8ARM-PEG-UA的核磁圖 圖2為納米粒子的透射電鏡形貌圖。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】，對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
[0013] 實(shí)施例1、一種果膠-多臂聚乙二醇自組裝制備納米藥物的方法： (l)PET的乙酷化 取一定量的PET(醋化度50%~75%)，緩慢加入冰醋酸、乙酸酢和硫酸，冰浴下反應(yīng)一段 時(shí)間，然后升溫至50°C，攬拌至溶液澄清，混合物旋蒸，乙醇洗至中性，冷凍干燥，得到乙酷 化果膠粉末A。
[0014] (2)8ARM-PEG-UA 的合成 用10ml四氨巧喃溶解0.5g的八臂聚乙二醇，加入0.5g激活劑1-(3-二甲氨基丙基)-3- 乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，0.06g催化劑4-二甲氨基化晚(DMAP)，攬拌，再加入Imol熊果酸 反應(yīng)36~4她，反應(yīng)物混合物旋蒸，透析過(guò)夜，透析液冷凍干燥，得到粉末B; (3) 陽(yáng) T-8ARM-PEG-UA 的合成 取0.2g步驟(2)中的粉末B溶于DMS0，加入0.2g EDC和0.02g DMAP，反應(yīng)30min，然后加 入0.1 g果膠，反應(yīng)30~50h，得到反應(yīng)混合液； (4) 陽(yáng)T-8ARM-PEG-UA的純化 將步驟(3)中得到的反應(yīng)混合液加入乙酸，得到絮狀沉淀，離心洗涂多次，真空干燥，得 到果膠-載藥八臂聚乙二醇粉末C; (5) 陽(yáng)T-8ARM-PEG-UA和肥PT的自組裝 取30mg步驟(4)中粉末B和8mg 10-徑基喜樹堿溶于5ml二甲基亞諷，攬拌溶解5min，然 后逐滴滴入去離子水中，納米粒子溶液在PBS溶液中透析12h，每化換一次透析液，所得溶液 透析過(guò)夜，冷凍干燥，得到所述果膠-八臂聚乙二醇納米粒子，粒徑大小為20~80nm。
[0〇1引實(shí)施例2、一種果膠-多臂聚乙二醇自組裝制備納米藥物的方法： 在本實(shí)例中，通過(guò)與實(shí)施例1相同的合成方法及步驟，八臂聚乙二醇與熊果酸的摩爾比 為1:4,所述的果膠與載藥八臂聚乙二醇的摩爾比為1:4測(cè)得粒徑大小為20~lOOnm。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種果膠-多臂聚乙二醇自組裝制備納米藥物的方法，其特征在于，載有熊果酸(UA) 的八臂聚乙二醇(8ARM-PEG-C00H)與果膠(PET)通過(guò)酯鍵相連，所述的自組裝果膠-多臂聚 乙二醇納米藥物具有如式I所示的結(jié)構(gòu)：式中，所述果膠酯化度50~75%，八臂聚乙二醇分子量20000。2. 如權(quán)利要求1所述的一種果膠-多臂聚乙二醇自組裝制備納米藥物的方法，其特征在 于，步驟如下： (1) 用四氫呋喃溶解一定量的八臂聚乙二醇，加入激活劑1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙 基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，催化劑4-二甲氨基吡啶(DMAP)，攪拌，再加入一定摩爾質(zhì)量的熊 果酸反應(yīng)36~48h，反應(yīng)物混合物旋蒸，透析過(guò)夜，透析液冷凍干燥，得到粉末A; (2) 取一定量的步驟（1)中的粉末A溶于DMSO，加入EDC和DMAP，反應(yīng)30min，然后加入一 定量的果膠，反應(yīng)30~50h，得到反應(yīng)混合液； (3) 將步驟(2)中得到的反應(yīng)混合液乙醚沉淀，離心洗滌多次，真空干燥，得到粉末B; (4) 將步驟(3)中粉末B和10-羥基喜樹堿溶于二甲基亞砜，并滴入去離子水中，所得溶 液透析，每4h換一次透析液，冷凍干燥，得到所述果膠-多臂聚乙二醇納米粒子。3. 如權(quán)利要求1、2所述的一種果膠-多臂聚乙二醇自組裝制備納米藥物的方法，其特征 在于，所述的八臂聚乙二醇與熊果酸的摩爾比為1:0.5~1:10,果膠與載藥八臂聚乙二醇的 摩爾比為0.1:0.01~0.1:1。4. 如權(quán)利要求1、2、3所述的一種果膠-多臂聚乙二醇自組裝制備納米藥物的方法，其特 征在于，其納米粒子中UA的載藥量為1%-40%，納米粒子的質(zhì)量百分比0.01%-90%，納米粒徑 10-200nm〇5. 如權(quán)利要求1、2、3、4所述的一種果膠-多臂聚乙二醇自組裝制備納米藥物的方法，具 有癌靶向性及緩釋功能。
【文檔編號(hào)】A61K31/56GK105879052SQ201610389233
【公開日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2016年6月6日
【發(fā)明人】雷建都, 劉彥雪, 陳琳琳, 王璐瑩, 劉靜, 何靜
【申請(qǐng)人】北京林業(yè)大學(xué)