治療急性t淋巴細胞白血病的復方藥物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種治療急性T淋巴細胞白血病的復方藥物，其由以下重量份的原料制成：當歸多糖10?30份，黃芪總苷10?25份，川芎嗪5?10份，西洋參總皂苷5?15份。本發(fā)明為中藥提取物復方藥物，其不良反應和副作用相比于西藥明顯降低，且作用全面，治療效果更佳；相比于化學治療方法，顯著提高了患者用藥的依從性，提高患者的生活質量；可明顯提高對白血病的抑制效果，且對白血病細胞具有選擇性；能有效抑制T?ALL類癌細胞，對治療白血病具有良好的應用價值。
【專利說明】
治療急性T淋巴細胞白血病的復方藥物
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領域，特別是一種治療急性Τ淋巴細胞白血病的復方藥物。
【背景技術】
[0002] 白血病是一種造血系統(tǒng)的惡性腫瘤，白血病發(fā)病迅猛、病情險惡、病因復雜，對人 類的生命安全造成巨大威脅。多年來全球科研工作者不斷探索白血病的致病機理，逐漸獲 得了一些共識:人體對造血的調控方式極為精細，主要包括造血干細胞上各基因的相互作 用，正常造血微環(huán)境的影響，正、負造血調控因子的誘導等。造血干細胞上各基因協(xié)調的相 互作用使造血祖細胞適度的自我更新、分化成熟或發(fā)生凋亡，以保證體內正常血細胞數(shù)量 維持在一定范圍。造血干細胞中的某些基因突變造成未成熟的造血細胞不受控制地無限增 殖，大量這類未成熟不分化的細胞增生累積引發(fā)了白血病。
[0003] 白血病較為常見，約占癌癥總發(fā)病率的5%左右，尤其以兒童和青年居多。在我國 各年齡組惡性腫瘤的死亡率中白血病占第6位(男性)和第8位(女性），在兒童及35歲以下的 人群中則占第一位。同時白血病的分布是世界性的。
[0004] 急性Τ淋巴細胞白血病（T-cell acute lymphoblastic leukemia,T-ALL)就是這 一類以基因突變所致的原始T淋巴細胞分化出現(xiàn)障礙、凋亡受阻、異常增殖為特點的血液系 統(tǒng)惡性克隆性疾病。加上目前環(huán)境污染的原因，Τ-ALL的發(fā)病率逐年上升，主要表現(xiàn)為骨髓 和外周血中的原始Τ淋巴細胞還未完全分化，但猶豫基因突變出現(xiàn)無限惡性增殖，阻礙了正 常的紅細胞、淋巴細胞和粒細胞的分化和功能，不僅如此，還會牽涉到轉移至中樞神經(jīng)系 統(tǒng)，死亡率很高而且容易復發(fā)。
[0005] 目前白血病的治療可從三個方面入手:誘導細胞凋亡、誘導細胞分化、及干細胞移 植重建造血功能。迄今為止白血病的治療仍然主要采用傳統(tǒng)的聯(lián)合化療，但此療法副作用 很大，復發(fā)率較高，尤其對機體免疫與造血系統(tǒng)有較大損害。
[0006] 現(xiàn)有技術中化學治療過程對白血病患者的副作用較大，并且對于白血病細胞的殺 滅不能令人滿意。

【發(fā)明內容】

[0007] 本發(fā)明所要解決的技術問題是:為了克服上述技術的不足，提供一種能夠治療白 血病的復方藥物。
[0008] 本發(fā)明解決其技術問題采用以下的技術方案：
[0009] 本發(fā)明提供的治療急性Τ淋巴細胞白血病的復方藥物，其由以下重量份的原料制 成:當歸多糖10-30份，黃芪總苷10-25份，川芎嗪5-10份，西洋參總皂苷5-15份。
[0010] 該復方藥物可以由以下替換的重量份的原料制成：當歸多糖30份，黃芪總苷25份， 川芎嗪10份，西洋參總皂苷15份。
[0011] 該復方藥物可以由以下替換的重量份的原料制成：當歸多糖20份，黃芪總苷20份， 川芎嗪10份，西洋參總皂苷15份。
[0012] 該復方藥物可以由以下替換的重量份的原料制成：當歸多糖20份，黃芪總苷15份， 川芎嗪5份，西洋參總皂苷10份。
[0013] 該復方藥物可以由以下替換的重量份的原料制成：當歸多糖10份，黃芪總苷10份， 川芎嗪5份，西洋參總皂苷5份。
[0014] 該復方藥物的劑型可以為片劑、膠囊劑或滴丸。
[0015]該復方藥物用于治療白血病。
[0016]該復方藥物用于治療急性T淋巴細胞白血病。
[0017] 根據(jù)中醫(yī)理論，本發(fā)明復方藥物組方分析如下：。
[0018] 所述當歸性甘、辛，溫。歸肝、心、脾經(jīng)。補血活血，調經(jīng)止痛，潤腸通便。用于血虛萎 黃、眩暈心悸、月經(jīng)不調、經(jīng)閉痛經(jīng)、虛寒腹痛、腸燥便秘、風濕痹痛、跌撲損傷、癰疽瘡瘍。采 用當歸的根部，作為本復方藥物的提取物。
[0019] 所述黃芪性甘溫，善入脾胃經(jīng)，為補中益氣要藥。脾氣虛弱，倦怠乏力，食少便溏 者，可單用熬膏服，或與黨參、白術等補氣健脾藥配伍。因其能升陽舉陷，故長于治療脾虛中 氣下陷之久瀉脫肛，內臟下垂。常與人參、升麻、柴胡等品同用。采用黃芪的根部，作為本復 方藥物的提取物。
[0020] 所述川芎味辛；性溫。歸肝經(jīng)、膽經(jīng)、心包經(jīng)。能行氣開郁，祛風燥濕，活血止痛，治 頭痛旋暈、肋痛腹疼、經(jīng)閉、難產、癰疽瘡瘍等癥。采用川芎的根莖，作為本復方藥物的提取 物。
[0021] 所述西洋參性味甘、微苦，涼。歸心、肺、腎經(jīng)。補氣養(yǎng)陰，清熱生津。用于氣虛陰虧， 內熱，咳喘痰血，虛熱煩倦，消渴，口燥咽干。采用西洋參的根部，作為本復方藥物的提取物。
[0022] 上述四種藥物中，當歸與川芎配伍，具有補血活血藥對，具有養(yǎng)血補血、活血化瘀 的功效，當歸偏養(yǎng)血和血，川芎偏行血散血，二藥每相使配對同用，可增強活血祛瘀、養(yǎng)血和 血之功。黃芪與當歸配伍，具有益氣生血的功效，可用于治療勞倦內傷、氣血兩虛、陽浮于外 的熱證等癥狀。川芎與黃芪配伍，臨床中常用其治療中風;黃芪為補氣要藥，為"氣中血藥"， 川芎辛散溫通，既能活血，又能行氣，為"血中氣藥"，重用可引藥上達巔頂，旁通四肢；二者 配伍，使補而不滯，從而消散血瘀。作為常用的兩種補氣藥物，西洋參和黃芪配伍可顯著提 高小鼠足跖腫脹度值、脾淋巴細胞增殖能力、碳廓清能力及脾臟抗體生成數(shù)，從而提高免疫 功能。
[0023]本發(fā)明通過上述四種藥物的有效部位提取物組成一個以中醫(yī)指導理論為基礎的 中藥有效成分復方藥物，目的是為了治療白血病。經(jīng)實驗檢測，有良好的效果。
[0024]本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比具有以下主要的優(yōu)勢：
[0025] 1.作用全面，治療效果更佳，相比于化學治療，顯著提高了患者用藥的依從性，提 高患者的生活質量。
[0026] 2.為中藥提取物復方藥物，經(jīng)實驗證明，其不良反應和副作用相比于西藥明顯降 低，且作用全面，治療效果更佳。
[0027] 3.含有多種成分，各成分之間協(xié)同作用，作用靶點更多，相較于單一成分治療效果 明顯提升。
[0028] 4.可明顯提尚對白血病的抑制效果，且對白血病細胞具有選擇性，能有效抑制τ'- all 類癌細胞， 對治療 白血病具有良 好的應 用價值 。經(jīng)實驗證明 該復方藥物可有效抑制急性 T淋巴細胞白血病Jurkat細胞，延長白血病小鼠模型的生存時間，且無明顯不良反應。
[0029] 5.可采用制劑學常規(guī)方法制備成片劑、膠囊劑、滴丸等劑型，以方便進行生產加 工。
【具體實施方式】
[0030] 下面結合實施例對本發(fā)明作進一步說明，但并不局限于下面所述內容。
[0031 ]實施例1:治療急性T淋巴細胞白血病的復方藥物
[0032]該復方藥物由以下重量份的原料制成：
[0033]當歸多糖30份，黃芪總苷25份，川芎嗪10份，西洋參總皂苷15份。
[0034]實施例2:治療急性T淋巴細胞白血病的復方藥物
[0035]該復方藥物由以下重量份的原料制成：
[0036]當歸多糖20份，黃芪總苷20份，川芎嗪10份，西洋參總皂苷15份。
[0037]實施例3:治療急性T淋巴細胞白血病的復方藥物 [0038]該復方藥物由以下重量份的原料制成：
[0039]當歸多糖20份，黃芪總苷15份，川芎嗪5份，西洋參總皂苷10份。
[0040]實施例4:治療急性T淋巴細胞白血病的復方藥物 [0041]該復方藥物由以下重量份的原料制成：
[0042 ]當歸多糖10份，黃芪總苷10份，川芎嗪5份，西洋參總皂苷5份。
[0043] 上述實施例1-實施例4中，所述當歸多糖、黃芪總苷、川芎嗪和西洋參總皂苷提取 方法如下：
[0044] 使用的當歸多糖由當歸提取得到，其方法為:取干燥當歸粉末，加入10倍量純化水 在熱水浴中浸提，其間不斷攪拌，靜置冷卻后離心，收集上清液，減壓濃縮，在冷卻后的上清 液中加入4倍體積無水乙醇，4°C靜置過夜，離心，收集沉淀，Sevag法除蛋白，冷凍干燥，得當 歸粗多糖。
[0045] 使用的黃芪總苷由黃芪提取得到，其方法為:取黃芪干燥粉末用8倍量體積濃度為 70%乙醇浸泡過夜，用超聲波提取法提取2次，每次30min，提取液減壓濃縮，過D101型大孔 樹脂分離柱，利用體積濃度為47.5%的乙醇溶液洗脫得總苷，得到的總苷醇溶液利用旋轉 蒸發(fā)器回收至無醇味，即得黃芪總苷。
[0046] 使用的川芎嗪由川芎提取得到，其方法為:取川芎干燥粉末用10倍量的體積濃度 為75 %乙醇水溶液超聲提取3小時，提取3次，提取液減壓濃縮，得到的濃縮液利用AB-8型大 孔吸附樹脂分離柱進行分離，利用體積濃度為30%的乙醇溶液洗脫，洗脫液濃縮即得川芎 嗪。
[0047] 使用的西洋參總皂苷由西洋參提取得到，其方法為:取西洋參干燥切片用8倍量的 體積濃度為70 %乙醇水溶液常溫下浸潤提取2次，每次3小時，提取液減壓濃縮，得到的濃縮 液利用D101型大孔吸附樹脂分離柱進行分離，利用體積濃度為40%的乙醇溶液洗脫，洗脫 液濃縮即得西洋參總皂苷。
[0048]實施例5:片劑的制備
[0049]取上述實施例1-4藥物組合共100g，加入淀粉50g，將藥物與淀粉混勻，加入旋轉式 制粒機制粒，將所得的顆粒經(jīng)流化床式干燥機干燥，加微晶纖維素 15g，硬脂酸鎂2g，與干燥 顆?；靹?，用旋轉式自動壓片機壓片制得共1000片，即得本發(fā)明藥物片劑。
[0050]該藥物片劑適合于白血病患者，其服用方法是:每次一片，每日三次。注意事項:有 嚴重心腦血管疾病者應遵循醫(yī)囑用藥。
[0051 ]實施例6:膠囊劑的制備
[0052]取上述實施例1-4藥物組合共150g，加入淀粉60g，將藥物與淀粉混勻，加入旋轉式 制粒機制粒，將所得的顆粒經(jīng)流化床式干燥機干燥，加入2g硬脂酸鎂，與干燥顆?；靹?，通 過半自動膠囊填充機制得膠囊1 〇〇〇粒，即得本發(fā)明藥物膠囊。
[0053]該藥物膠囊適合于白血病患者，其服用方法是:每次一粒，每日兩次。注意事項:有 嚴重心腦血管疾病者應遵循醫(yī)囑用藥。
[0054]實施例7:滴丸的制備
[0055]稱取聚乙二醇6000 200g水浴(80°C)，加熱將其煮熔，加入上述實施例1-4藥物組 合共50g，充分攪拌均勻，以液體石蠟為冷卻劑，置玻璃管(4*80cm)中，冷卻溫度為10°C，滴 口內外徑為7 · 0/2 · 0 (mm/mm)，滴口距離液面為2cm，滴速以每分鐘50滴為最佳條件，用棉布 吸干滴丸表面的冷凝級，即得本發(fā)明藥物滴丸。
[0056]該藥物滴丸適合于白血病患者，其服用方法是:每次兩粒，每日三次。注意事項:有 嚴重心腦血管疾病者應遵循醫(yī)囑用藥。
[0057]下面通過實驗來證實本發(fā)明中復方藥物對急性T淋巴細胞白血病所具有的作用。 [0058]實驗例1:本發(fā)明中復方藥物對急性T淋巴細胞白血病細胞的抑制作用 [0059]通過MTT藥效學實驗（比色法檢測藥效)測定本發(fā)明中復方藥物對急性T淋巴細胞 白血病Jurkat細胞的抑制作用。
[0060] 1.實驗材料:胎牛血清RPMHMDM培養(yǎng)基(美國Gibico生命技術公司），C〇2細胞培養(yǎng) 基（美國PAA公司），細胞培養(yǎng)基（美國PAA公司），四氮唑藍（美國Sigma公司），DMS0(美國 Sigma公司）。
[0061] 2.細胞培養(yǎng)方法：人急性T淋巴細胞白血病Jurkat細胞用10 %胎牛血清的 RPMHMDM培養(yǎng)基置于37 °C，5 % C02細胞培養(yǎng)箱中進行培養(yǎng)，隔天傳代、換液。
[0062] 3 .MTT藥效學實驗(比色法檢測藥效)方法：
[0063] 將培養(yǎng)的Jurkat細胞離心后，用培養(yǎng)基配成8.0*104細胞/ml細胞懸液，按每孔100 μL加到96孔板中。培養(yǎng)24小時后，每孔加入100μΙ不同濃度的復方藥物，每個濃度4個平行 孔。培養(yǎng)72小時后，每孔加入20μ1的50mg/ml的ΜΤΤ無血清培養(yǎng)基。培養(yǎng)4小時后，棄培養(yǎng)基， 每孔加入200μ1 DMS0,輕微震蕩10分鐘，甲臢充分溶解后，用酶標儀在570nm波長下測定細 胞光吸收值（0D值）。設定中復方藥物的終濃度為200.00ug/L，100.00ug/L，50.00ug/L， 25 · 00ug/L，12 · 50ug/L，6 · 00ug/L，3 · 00ug/L，1 · 50ug/L，0 · 75ug/L，計算各個暴露濃度中的 Jurkat細胞生長抑制率，得出Jurkat細胞的半效抑制濃度IC50。
[0064] 4.實驗結果：
[0065]由 MTT 實驗結果顯示，Jurkat 細胞在 200.00ug/L，100.00ug/L，50.00ug/L， 25 · 00ug/L，12 · 50ug/L，6 · 00ug/L，3 · 00ug/L，1 · 50ug/L，0 · 75ug/L 的本發(fā)明復方藥物中暴露 72小時，細胞生長抑制率分別為85·17%、84·12%、84·59%、77·21%、54·24%、31·72%、 31.19%、12.11%、4.74%，這表明，本發(fā)明對急性Τ淋巴細胞白血病細胞Jurkat細胞具有很 強的抑制作用，所述的復方藥物非常適宜開發(fā)為一種治療白血病，尤其是急性T淋巴細胞型 白血病的治療藥物。
[0066]實驗例2:本發(fā)明中復方藥物治療白血病的藥效學與毒性研究
[0067]通過對急性T淋巴細胞白血病模型的小鼠進行動物實驗，通過觀察小鼠的存活時 間以及不良反映來判斷復方藥物的藥效與毒性。
[0068] 1、實驗材料:裸鼠（湖北省實驗動物中心）、實施例1、實施例2、實施例4得到的復方 藥物、環(huán)磷酰胺(江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司）、人類Jurkat T淋巴細胞白血病細胞株（中國 科學院上海生命科學院細胞資源中心）、胎牛血清RPMHMDM培養(yǎng)基(美國Gibico生命技術公 司）與細胞培養(yǎng)基(美國PAA公司）。
[0069] 2、急性T淋巴細胞白血病小鼠模型的建立：
[0070] 取裸鼠在新飼養(yǎng)條件下適應2d后于無菌條件下進行脾切除術，第7天拆線，并開始 給予環(huán)磷酰胺腹腔注射，連續(xù)3d，第4天接受直線加速器全身亞致死劑量照射。然后將腫瘤 細胞通過皮下注射的方式從小鼠右肋部注射〇.2ml，使腫瘤細胞接種至裸鼠體內。研究表 明，1 X 104~1 X 107個白血病細胞都能使N0D/SCID小鼠發(fā)生白血病。
[0071] 3、試驗方法：
[0072] 將50只小鼠隨機分為五組，組1為對照組，組2為西藥組，在小鼠接種白血病細胞3 天后開始按照200mg/kg的藥量注射環(huán)磷酰胺，每日一次。組3-組5分別為實施例1、實施例2、 實施例4的實驗組。這三組小鼠分別在接種白血病細胞3天后給予藥物(分別為實施例1、2、 4)灌胃，80mg每次，上下午各一次。組6-組9分別為單獨應用等量當歸多糖，黃芪總苷，川芎 嗪，西洋參總皂苷的實驗組。實驗方案同組3-組5。
[0073] 觀察內容包括飲食及精神狀態(tài)，有無精神委糜、食欲缺乏、消瘦、弓背、腹瀉、脫毛、 皮膚潰瘍、偏癱、失明等表現(xiàn)及腫塊生長情況，定期監(jiān)測受體鼠體質量，記錄小鼠存活時間 觀察至移植后60天，存活40天定為長期存活。
[0074] 4、實驗結果：
[0075] 對照組小鼠于第4天開始出現(xiàn)精神萎靡的癥狀，幾乎停止進食，于第6日開始出現(xiàn) 死亡。西藥組小鼠存活時間比對照組更長，出現(xiàn)癥狀的時間也更靠后、但是藥效并不明顯， 且出現(xiàn)皮膚潰瘍和腹瀉等不良反應。復方藥物組別小鼠能長時間保持相對健康的狀態(tài)，較 組1、組2都更加有精神食欲旺盛體重無減輕情況，總體健康狀況良好，存活時間明顯延長。 三組服用復方藥物的小鼠存活時間無明顯區(qū)別，復方藥物組相比于組6-組9的單一組分實 驗組小鼠生存時間明顯延長。組6-組9實驗組小鼠存活時間接近于西藥組但遠低于復方藥 物組。組6-組9實驗組小鼠雖無明顯不良反應，但是其生存時間遠不及復方藥物組，這也證 明復方藥物的協(xié)同作用和多靶點效果良好，相較與單一組分，更適合作為一種治療白血病 的藥物進行研究與開發(fā)。如表1所示。
[0076] 結論:本發(fā)明設計的一種治療急性T淋巴細胞白血病的復方藥物在動物實驗中沒 有明顯的毒副作用，并且藥效顯著，對病情的控制情況良好，小鼠生存時間相較于對照組、 西藥組和單一組分實驗組均有明顯延長。通過細胞實驗證明本發(fā)明復方藥物確實能針對急 性T淋巴細胞白血病Jurkat細胞進行有效的抑制。證明本發(fā)明用藥安全且療效顯著，適合開 發(fā)成為一種治療白血病尤其是急性T淋巴細胞白血病的藥物。
[0077] 表 1
【主權項】
1. 一種治療急性T淋巴細胞白血病的復方藥物，其特征在于該復方藥物由以下重量份 的原料制成:當歸多糖10-30份，黃芪總苷10-25份，川芎嗪5-10份，西洋參總皂苷5-15份。2. 根據(jù)權利要求1所述的復方藥物，其特征在于該復方藥物由以下替換的重量份的原 料制成：當歸多糖30份，黃芪總苷25份，川芎嗪10份，西洋參總皂苷15份。3. 根據(jù)權利要求1所述的復方藥物，其特征在于該復方藥物由以下替換的重量份的原 料制成：當歸多糖20份，黃芪總苷20份，川芎嗪10份，西洋參總皂苷15份。4. 根據(jù)權利要求1所述的復方藥物，其特征在于該復方藥物由以下替換的重量份的原 料制成:當歸多糖20份，黃芪總苷15份，川芎嗪5份，西洋參總皂苷10份。5. 根據(jù)權利要求1所述的復方藥物，其特征在于該復方藥物由以下替換的重量份的原 料制成:當歸多糖I 〇份，黃芪總苷I 〇份，川芎嗪5份，西洋參總皂苷5份。6. 根據(jù)權利要求1至5中任一所述的復方藥物，其特征在于該復方藥物劑型為片劑、膠 囊劑或滴丸。7. 根據(jù)權利要求6所述的復方藥物，其特征在于該復方藥物用于治療白血病。8. 根據(jù)權利要求6所述的復方藥物，其特征在于該復方藥物用于治療急性T淋巴細胞白 血病。
【文檔編號】A61P35/02GK105902604SQ201610341216
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年5月20日
【發(fā)明人】樓層, 樓一層, 王子望, 劉萌萌, 朱影, 張 浩, 龍?zhí)? 劉娟, 陳相東
【申請人】武漢理工大學