一種拉洛他賽水溶性粉針劑的制備及應用
【專利摘要】本發(fā)明涉及新一代紫杉烷類藥物拉洛他賽，裝載于載體輔料中，形成納米級微粒，進而凍干形成的粉針劑。該載體輔料為兩親性嵌段共聚物，包括親水性鏈段以及疏水性鏈段，所述親水性鏈段是聚乙二醇單甲醚，所述疏水性鏈段包括聚乳酸、聚己內酯、聚谷氨酸、聚三亞甲基碳酸酯以及聚甲基丙烯酸甲酯等。制備完成的載藥膠束，具有較高的載藥量，包封率，穩(wěn)定性，大大提高了藥物的水溶性；所得膠束粒徑在10-100nm之間，并且聚乙二醇化能夠避免內皮吞噬系統(tǒng)的識別清除，延長體內循環(huán)，被動靶向于腫瘤組織，進而提高療效，減小毒副作用。
【專利說明】一種拉洛他賽水溶性粉針劑的制備及應用 發(fā)明領域
[0001] 本發(fā)明涉及拉洛他賽水溶性粉針劑的制備及其應用，屬于藥物技術領域，具體涉 及生物可降解載體材料包載拉洛他賽形成水溶性制劑的制備方法及其應用。
【背景技術】
[0002] 癌癥是人類健康的嚴重威脅，是僅次于心腦血管疾病的第二殺手，根據(jù)美國癌癥 協(xié)會估計在未來幾年時間內癌癥將會成為人類第一致死病因。世界衛(wèi)生組織(WHO)報告中 顯示，中國作為人口大國，隨著環(huán)境污染以及食品安全的惡化，癌癥發(fā)病形勢極為嚴峻。
[0003] 目前，臨床最常用的抗腫瘤藥物為紫杉烷類化合物，廣泛用于乳腺癌，宮頸癌，非 小細胞肺癌，前列腺癌等癌癥的治療。然而由于長期使用，出現(xiàn)了獲得性耐藥現(xiàn)象，拉洛他 賽(Larotaxel，LTX)作為新一代紫杉烷類藥物，能夠克服耐藥現(xiàn)象，其分子式為:C 45H53NO14， 分子量為:831.90g/mol，結構式如下：
[000
[0005] 拉洛他賽的抗癌作用機制和特點與其他紫杉醇類化合物相似，屬于抗微管蛋白類 藥物。拉洛他賽通過與微管蛋白結合，促進其組裝成微管，同時可阻止這些已組裝的微管解 體，使微管穩(wěn)定，進而抑制細胞的有絲分裂和間期細胞功能的發(fā)揮。與其它已上市的紫杉醇 類藥物相比，該藥與P糖蛋白介導的排藥栗有較低的親和力，發(fā)生藥物耐受性的機率更低， 可用于治療多藥耐藥性腫瘤。體外研究顯示，拉洛他賽在對阿霉素、長春堿、紫杉醇和多西 他賽耐藥的細胞株中表現(xiàn)出活性。然而，拉洛他賽同其他紫杉烷類藥物一樣，幾乎不溶于 水，口服吸收差，目前只能采用注射給藥方式。目前，由山西振東制藥研發(fā)的拉洛他賽脂質 微球注射液獲已經(jīng)獲批臨床試驗，而在美國和法國等國家已完成乳腺癌單獨用藥的III期 臨床評價，并在全世界進行多中心多瘤譜單獨用藥和聯(lián)合用藥的Π 期或III期臨床評價。本 專利采用聚合物膠束包載拉洛他賽，具有更高載藥量、包封率以及穩(wěn)定性，解決了拉洛他賽 的疏水性問題，同時能夠改善體內藥物分布，提高生物利用度，降低毒副作用。
[0006] 經(jīng)專利和文獻檢索，未見報道涉及拉洛他賽納米聚合物膠束相關制劑的研究。

【發(fā)明內容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種拉洛他賽水溶性粉針劑，能夠克服藥物的疏水性，是一 種不含任何增溶劑或者有機溶媒的水性制劑，因此不會帶來上述溶劑引起的相關毒副作 用。而本發(fā)明的又一目的是提供一種納米緩釋靶向制劑，具有較高的穩(wěn)定性、生物利用度、 較長的體內循環(huán)時間、提高了藥效、減少了毒副作用等特點。只要得悉了本文描述的公開內 容，本領域普通技術人員將會理解本發(fā)明的其它目的。
[0008] 本發(fā)明提供了一種載藥系統(tǒng)，其特征在于該載藥系統(tǒng)為聚合物膠束，載體材料為 兩親性嵌段共聚物，具有生物相容性以及生物可降解性。所述的嵌段共聚物親水端為聚乙 二醇單甲醚，均分子量為2000,所述的疏水端為聚乳酸、聚己內酯、聚谷氨酸、聚三亞甲基碳 酸酯以及聚甲基丙烯酸甲酯中的一種，均分子量為1000~10000,優(yōu)選2000~5000。
[0009] 本發(fā)明提供了一種拉洛他賽水性粉針劑的制備方法，其特征在于，所述制備方法 包括下述步驟，采用薄膜分散法：
[0010] 1)聚合物載體材料 mPEG-PDLLA，mPEG-PCL，mPEG-PGA，mPEG-PTMC，mPEG-PMMA中的 一種以及拉洛他賽藥物充分溶解于有機溶劑中，使材料和拉洛他賽形成均勻溶液I;
[0011] 2)將溶液I中的有機溶劑通過減壓蒸餾、冷凍干燥或噴霧干燥中的一種方式徹底 除掉，優(yōu)選減壓蒸餾，得到均勻的材料-藥物透明薄膜基質；
[0012] 3)向上述基質中加入預熱的注射用水，通過晃動、攪拌、超聲、渦旋等方式，載體材 料水化自組裝成膠束，將拉洛他賽包裹于疏水性內核中，形成拉洛他賽膠束溶液Π ;
[0013] 4)向拉洛他賽膠束溶液Π 中加入凍干保護劑，然后分別過0.45μπι粗濾，再過0.22μ m精濾除菌；
[0014] 5)將濾液置于-50°c冰箱中，預凍2~6h，優(yōu)選2-3h，再逐步升華除掉水分，凍干即 得拉洛他賽水溶性粉針劑。
[0015] 本發(fā)明中所述載體材料與拉洛他賽質量比為(3:1)~（100:1);
[0016] 本發(fā)明中所用的有機溶劑為乙腈、甲醇、乙醇、異丙醇、四氫呋喃、二氧六環(huán)、二氯 甲烷、氯仿的任意一種；
[0017] 本發(fā)明中，將載體材料以及拉洛他賽充分溶解于有機溶劑中采用的是攪拌、超聲 或者加熱等方式來助溶。
[0018] 本發(fā)明中，所述步驟（2)中減壓蒸餾過程中壓力為-0.1~OMPa，優(yōu)選-0.1~-0.08MPa;冷凍干燥過程中凍干溶劑可以是乙醇：水（I: 10~1:100)，叔丁醇：水（I: 10~1: 100)。
[0019] 所述步驟(3)中所述預熱注射用水的溫度為40~60°C;
[0020] 所述步驟(4)中凍干保護劑為乳糖、甘露醇、蔗糖、海藻糖、葡萄糖、麥芽糖、氨基 酸、聚乙二醇果糖、海藻酸鈉或者明膠中的任一種，或者它們的混合物。
【附圖說明】
[0021] 附圖1拉洛他賽膠束凍干粉以及復溶后溶液外觀，從左至右依次是水、凍干粉以及 膠束復溶溶液。
[0022] 附圖2拉洛他賽膠束粒徑分布圖
[0023] 附圖3拉洛他賽膠束粒子透射電鏡圖 [0024]附圖4拉洛他賽膠束粒子原子力顯微鏡圖
[0025]附圖5拉洛他賽膠束體外釋藥曲線圖
[0026] 附圖6拉洛他賽膠束對細胞有絲分裂的影響圖
[0027] 附圖7拉洛他賽膠束對小鼠 Lewis肺癌生長抑制作用圖
[0028] 附圖8拉洛他賽膠束對荷瘤小鼠生存周期的影響圖
【具體實施方式】
[0029] 本發(fā)明將結合下述實施例或實施例做進一步詳細闡述，但應當理解，下述實施例 僅僅用于闡述和解釋本發(fā)明，而并不限制本發(fā)明的范圍。應當理解，對于本發(fā)明中提及但沒 有詳細說明的方法、步驟、裝置、儀器、材料等，普通技術人員可以采用本領域熟知的相應方 法、步驟、裝置、儀器、材料等，或者按照本領域的常規(guī)知識和技術獲得。
[0030] 實施案例1
[0031] 分別稱取180mg載體材料(mPEG^m-PDLLAmo)和20mg拉洛他賽置于圓底燒瓶中，加 入IOmL無水乙醇，超聲使載體材料和藥物充分溶解。將該溶液置于旋轉蒸發(fā)儀40°C下旋蒸 60min將有機溶劑徹底蒸干，得干燥透明的混合薄膜基質。而后加入IOmL在60°C下預熱的注 射用水，在攪拌的條件下水化形成膠束，加入甘露醇，先過〇. 45μπι濾膜粗濾，后過0.22μπι無 菌濾膜精濾除菌，濾液凍干，得到樣品。
[0032] 實施案例2
[0033] 分別稱取150mg載體材料(mPEG2_-PCL2_)和50mg拉洛他賽置于凍干瓶中，加入 5ml叔丁醇，超聲使載體材料和藥物充分溶解。將該溶液凍干，徹底除去有機溶劑，得到藥物 與載體材料的混合基質。然后加入IOmL在60°C下預熱的注射用水，在攪拌的條件下水化形 成膠束，加入蔗糖，先過0.45μπι濾膜粗濾，后過0.22μπι無菌濾膜精濾除菌，濾液凍干，得到樣 品。
[0034] 實施案例3
[0035] 分別稱取180mg載體材料(mPEG5_-PGA6_)和20mg拉洛他賽置于圓底燒瓶中，加入 5ml四氫呋喃，超聲使載體材料和藥物充分溶解。將該溶減壓蒸餾徹底除掉有機溶劑，得干 燥透明的混合薄膜基質。然后加入IOmL在50°C下預熱的注射水，渦旋3min，加入海藻糖，將 水化液先過0.45μπι濾膜粗濾，后過0.22μπι濾膜精濾除菌，濾液凍干即得樣品。
[0036] 實施案例4
[0037] 分別稱取190mg載體材料(mPEG2_-PCL2_)和IOmg拉洛他賽置于圓底燒瓶中，加入 I Oml乙腈，加熱使載體材料和藥物充分溶解。將該溶液噴霧干燥，徹底除去有機溶劑，得到 藥物以及載體材料的混合基質。然后加入SmL在50°C下預熱的注射用水，在攪拌的條件下水 化形成膠束，加入氨基酸，過0.45μπι濾膜粗濾，后過0.22μπι無菌濾膜精濾除菌，濾液凍干，得 到樣品。
[0038] 實施案例5
[0039] 分別稱取195mg載體材料(mPEG2_-PMMA5(xx))和5mg拉洛他賽置于圓底燒瓶中，加入 IOmL異丙醇，超聲使載體材料和藥物充分溶解。將該溶液減壓蒸餾徹底除去有機溶劑，得干 燥透明的混合薄膜基質。而后加入15mL在60°C下預熱的注射用水，在攪拌的條件下水化形 成膠束，加入乳糖，過0.45μπι濾膜粗濾，后過O . 22μπι無菌濾膜精濾除菌，濾液凍干，得到樣 品。
[0040] 實施案例6
[0041 ] 分別稱取199mg載體材料(mPEG2_-PMTC5_)和Img拉洛他賽置于圓底燒瓶中，加入 I OmL二氯甲烷，超聲使載體材料和藥物充分溶解。將該溶液減壓蒸餾徹底除去有機溶劑，得 干燥透明的混合薄膜基質。而后加入IOmL在50°C下預熱的注射用水，在渦旋的條件下水化 形成膠束，加入麥芽糖，先過0.45μπι濾膜粗濾，后過0.22μπι無菌濾膜精濾除菌，濾液凍干，得 到樣品。
[0042] 實施案例7
[0043] 分別稱取1.99g載體材料(mPEG2_-PCL2_)和IOmg拉洛他賽置于圓底燒瓶中，加入 I OmL氯仿，超聲使載體材料和藥物充分溶解。將該溶液噴霧干燥，收集固化物，得到藥物以 及載體材料的混合基質。而后加入IOOmL在60°C下預熱的注射用水，在攪拌條件下水化形成 膠束，加入乳糖，先過0.45μπι濾膜粗濾，后過0.22μπι無菌濾膜精濾除菌，濾液凍干，得到樣 品。
[0044] 實施案例8
[0045] 分別稱取185mg載體材料(mPEG2_-PDLLA棚〇)和15mg拉洛他賽置于圓底燒瓶中，加 入IOmL二氧六環(huán)，超聲使載體材料和藥物充分溶解。將該溶液減壓蒸餾，將有機溶劑徹底除 掉，得干燥透明的混合薄膜基質。而后加入IOmL在60°C下預熱的注射用水，在超聲的條件下 水化形成膠束，加入乳糖，過0.22μπι無菌濾膜，濾液凍干，得到樣品。
[0046] 實施案例9
[0047] 分別稱取150mg載體材料(mPEG2_-PCL35Q())和50mg拉洛他賽置于凍干瓶中，加入 IOmL四氫呋喃，加熱超聲使載體材料和藥物充分溶解。將該溶液凍干，除掉有機溶劑，得到 混合均勻的藥物-材料基質。而后加入IOmL在60°C下預熱的注射用水，在渦旋的條件下水化 形成膠束，加入海藻糖，先過0.45μπι濾膜粗濾，后過0.22μπι無菌濾膜精濾除菌，濾液凍干，得 到樣品。
[0048] 實施案例10
[0049] 分別稱取175mg載體材料(mPEG2_-PGA5_)和25mg拉洛他賽置于圓底燒瓶中，加入 IOmL四氫呋喃，加熱超聲使載體材料和藥物充分溶解。將該溶液減壓蒸餾30min，并于真空 干燥箱中干燥IOh，將有機溶劑徹底揮干，得干燥透明的混合薄膜基質。而后加入IOmL在60 °C下預熱的注射用水，在超聲的條件下水化形成膠束，加入乳糖，先過0.45μπι濾膜粗濾，后 過0.22μπι無菌濾膜精濾除菌，濾液凍干，得到樣品。
[0050] 試驗驗證
[0051] (1)取拉洛他賽粉針劑，用注射用水復溶，并稀釋至lmg/mL，超聲分散均勻后，在25 °(：下，用馬爾文激光粒度儀測試粒徑大小及分布，結果如圖2所示。
[0052] (2)取膠束凍干粉，注射用水復溶后，超聲分散后，滴于銅網(wǎng)上，室溫晾干后，用2% 磷鎢酸負染，室溫晾干，用透射電鏡觀察粒子外觀，并拍照，結果如圖3所示。
[0053] (3)同樣取復溶后的膠束溶液，稀釋后超聲分散，滴于干凈的云母片上，室溫晾干 后，置于探針下掃描膠束外觀，軟件分析處理后，得到3D圖片，如圖4所示。
[0054] (4)為探究納米膠束體外釋放行為，采用透析袋法進行測定，稱取一定量的拉洛他 賽膠束凍干粉用純化水分散后置于透析袋(截留分子量為3.5KDa)內，相當含量的自由藥物 溶解于DMSO中作為對照。將透析袋扎口后置于50mL離心管中，浸沒于30mL含有0.5 吐溫 80的roS(pH=7.4)中。將離心管置于水浴搖床中，水浴溫度為37°C，水平晃動lOOrpm。分別 在O . 5，I，2，4，8，12，24，48，72h時吸取ImL釋放液，并補充ImL新鮮介質。吸取的釋放液 12000rpm離心10min，用高效液相檢測卡巴他賽含量并計算釋放度，繪制釋放曲線，結果如 圖5所示。
[0055] (5)取LLC細胞5 X IO5個接種于在6孔板中，培養(yǎng)12h細胞貼壁后，換液給藥，加入相 當于lyg/mL含量的拉洛他賽膠束以及自由藥物，用不含藥物的正常組作為陰性對照，繼續(xù) 培養(yǎng)48h后，收集細胞，按照細胞周期檢測試劑盒操作步驟，洗滌、固定、染色后，用流式細胞 儀檢測細胞周期，結果如圖6所示。
[0056] (6)采用小鼠皮下腫瘤模型考察拉洛他賽粉針劑的體內抑瘤效果。取小鼠 LLC細胞 IO6個/O.lmL，注射于小鼠右側腋下，待腫瘤長到50-100mm3時，隨機分組并開始治療。分為拉 洛他賽自由藥物組、拉洛他賽膠束組以及生理鹽水組，采用尾靜脈注射，每三天注射一次， 連續(xù)治療4次，治療過程中用游標卡尺測量小鼠腫瘤大小，并記錄小鼠體重?？瞻捉M腫瘤長 到2000mm 3以上后，統(tǒng)一處死并解剖腫瘤，計算抑瘤率。剩余小鼠繼續(xù)飼養(yǎng)，考察生存時間。 腫瘤生長體積以及生存周期如圖7,8所示。
【主權項】
1. 一種拉洛他賽水溶性粉針劑，其特征在于該粉針劑以兩親性嵌段聚合物為載體材 料，親水端是聚乙二醇單甲醚，疏水端可以是聚乳酸、聚己內酯、聚谷氨酸、聚三亞甲基碳酸 酯以及聚甲基丙烯酸甲酯等，優(yōu)選聚乳酸、聚己內酯。2. 權利要求1所述的拉洛他賽水溶性粉針劑，其特征在于所用兩親性嵌段聚合物的親 水端聚乙二醇單甲醚均分子量為2000,疏水端聚乳酸、聚己內酯、聚谷氨酸、聚三亞甲基碳 酸酯以及聚甲基丙烯酸甲酯分子量為1000~10000之間，優(yōu)選2000~5000。3. 根據(jù)權利要求書1或2所述拉洛他賽水溶性粉針劑，其特征在于制備方法包括以下步 驟： 1) 將載體材料以及拉洛他賽充分溶解于有機溶劑中，使材料及藥物形成均勻的溶液I; 2) 將溶液I中的有機溶劑可通過減壓蒸餾或直接冷凍干燥或噴霧干燥中的一種方式徹 底除掉，優(yōu)選減壓蒸餾，得到均勻的材料-藥物透明薄膜基質； 3) 向上述基質中加入預熱的注射用水，通過晃動、攪拌、超聲、渦旋等方式，載體材料水 化自組裝成膠束，將拉洛他賽包裹于疏水性內核中，形成拉洛他賽膠束溶液Π ; 4) 向拉洛他賽膠束溶液Π 中加入凍干保護劑，然后分別過0.45μπι粗濾，再過0.22μπι精 濾除菌； 5) 將濾液置于_40°C冰箱中，預凍2~6h，優(yōu)選2-3h，再逐步升華除掉水分，凍干即得拉 洛他賽水溶性粉針劑。4. 根據(jù)權利要求3所述的拉洛他賽水溶性粉針劑制備方法，其特征在于載體材料與拉 洛他賽藥物的質量比例為3:1~100:1。5. 根據(jù)權利要求3中所述的粉針劑制備步驟（1)中有機溶劑可以是乙腈、甲醇、乙醇、異 丙醇、四氫呋喃、二氧六環(huán)、二氯甲烷、氯仿中的任一種。6. 根據(jù)權利要求3所述的粉針劑制備步驟(2)中減壓蒸餾過程中壓力為-0.1~5MPa，優(yōu) 選-0.1~-0.08MPa。7. 根據(jù)權利要求3所述的粉針劑制備步驟（2)中直接冷凍干燥工藝，其溶劑可以是乙 醇:水(1:10~1 :100)，叔丁醇:水(1:10~1:100)，優(yōu)選叔丁醇與水(2 :8~4:6)。8. 根據(jù)權利要求3所述的粉針劑制備步驟(3)中所述預熱注射用水，其特征在于溫度為 40 ~65 °C，優(yōu)選55-60 °C。9. 根據(jù)權利要求3所述粉針劑制備步驟(4)中所述凍干保護劑選自乳糖、甘露醇、蔗糖、 海藻糖、葡萄糖、麥芽糖、氨基酸、聚乙二醇果糖、海藻酸鈉或者明膠中的至少一種。10. 根據(jù)權利要求1或2所述的拉洛他賽水溶性粉針劑，用于常見腫瘤的治療，例如乳腺 癌、非小細胞肺癌、前列腺癌、卵巢癌、宮頸癌、結腸癌、黑色素瘤，胰腺癌，腎癌、骨髓瘤、甲 狀腺髓樣癌、非何杰金氏淋巴瘤等癌癥。
【文檔編號】A61K47/34GK105982868SQ201510975809
【公開日】2016年10月5日
【申請日】2015年12月23日
【發(fā)明人】王成, 張震, 劉宗銀, 徐益, 楊爽
【申請人】山東華鉑凱盛生物科技有限公司