一種兩親性膠束納米囊及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種具有式I所示結(jié)構(gòu)的兩親性膠束納米囊，并提供了所述兩親性膠束納米囊的制備方法，以羧基化甲氧基聚乙二醇?b?聚丙交酯?乙交酯和氨基化β?環(huán)糊精為原料，在保護(hù)氣氛中進(jìn)行反應(yīng)，得到所述兩親性膠束納米囊。同時，本發(fā)明還提供了所述兩親性膠束納米囊在制備載藥膠束中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的兩親性膠束納米囊具有“外親水、內(nèi)疏水”的核殼結(jié)構(gòu)，可以對藥物進(jìn)行有效的包覆，包封率較高；利用載藥膠束在給藥過程中，能夠有效提高藥物的載藥量和藥物輸送率，可控制藥物的緩慢釋放，長時間維持藥效，提高藥物的生物利用率。
【專利說明】
一種兩親性膠束納米囊及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及生物醫(yī)用材料技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種兩親性膠束納米囊及其制備方 法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 中藥是一座巨大的寶庫，很多中藥的療效不但經(jīng)受住了長期醫(yī)療實(shí)踐的檢驗(yàn)，而 且也已被現(xiàn)代科學(xué)研究所證實(shí)，但一些中藥的特性卻極大地限制了其在臨床上的應(yīng)用。比 如，三七是一種中國的珍稀藥材，其主要活性成分為三七總皂苷，具有擴(kuò)張血管、降低心肌 耗氧量、延長凝血時間、調(diào)節(jié)免疫和抗癌等功效;但它卻存在刺激性強(qiáng)、味道略苦、容易吸 潮、溶解性差、生物利用率低的缺點(diǎn)。以它為原料，傳統(tǒng)的口服制劑有三七總皂苷片、三七總 皂苷顆粒劑等，但其藥物動力學(xué)、體內(nèi)代謝研究表明：經(jīng)過這些傳統(tǒng)方式處理后，三七總皂 苷吸收率差、消除半衰期較長。
[0003] 納米技術(shù)在不斷地促進(jìn)科技的進(jìn)步，因而受到越來越多研究者的關(guān)注，現(xiàn)已經(jīng)被 廣泛地應(yīng)用到信息產(chǎn)業(yè)、航空航天、軍事、化工、冶金、環(huán)境保護(hù)、生命科學(xué)等領(lǐng)域。納米給藥 系統(tǒng)是納米技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用成果，是指粒子直徑在10~l〇〇〇nm之間的給藥系統(tǒng)，這 種藥物傳遞系統(tǒng)能夠增強(qiáng)藥效、降低藥物毒性以及改變藥物的體內(nèi)過程，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)藥物的 特異靶向性和藥物的釋放可控性。
[0004] 針對中藥臨床應(yīng)用中存在的吸收率差、消除半衰期較長的問題，研究者們嘗試以 環(huán)糊精或聚乙二醇-聚乳酸嵌段共聚物，如(PEG) 3-PLA嵌段共聚物，作為藥物載體，采用 納米給藥系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)藥物在體內(nèi)的傳遞。該種藥物傳遞方式與傳統(tǒng)方式相比，具有提高藥物 穩(wěn)定性、藥物緩釋和控釋的優(yōu)勢，但是仍存在包封率和載藥量低的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種兩親性膠束納米囊及其制備方法和應(yīng)用，本發(fā)明提供 的兩親性膠束納米囊可以對藥物進(jìn)行有效的包覆，包封率較高；以所述兩親性膠束納米囊 為載體制備的載藥膠束，在給藥過程中能夠有效提高藥物的載藥量和藥物輸送率，可控制 藥物的緩慢釋放，長時間維持藥效，提高藥物的生物利用率。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案如下：
[0007] 本發(fā)明提供了一種兩親性膠束納米囊，具有式I所示結(jié)構(gòu)：
[0008]
[0009] 其中，x = l~1000，y = l~1000，z = l~1000。
[0010] 優(yōu)選的，所述x = 2~700，y = 2~700，z = 2~700。
[0011] 本發(fā)明提供了所述兩親性膠束納米囊的制備方法，包括以下步驟：
[0012] (1)將β-環(huán)糊精進(jìn)行氨基化反應(yīng)，得到氨基化β-環(huán)糊精；
[0013] 將甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯進(jìn)行羧基化反應(yīng)，得到羧基化甲氧基聚乙 二醇-b_聚丙交酯-乙交酯；
[0014] (2)在保護(hù)氣氛和緩沖溶液中，將所述步驟（1)得到的羧基化甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯和氨基化β-環(huán)糊精與N-羥基琥珀酰亞胺以及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙 基碳二亞胺鹽酸鹽進(jìn)行反應(yīng)，得到具有式I所示結(jié)構(gòu)的兩親性膠束納米囊。
[0015] 優(yōu)選的，所述步驟(1)中將β-環(huán)糊精進(jìn)行氨基化反應(yīng)具體包括以下步驟：
[0016] 將β-環(huán)糊精、對甲苯磺酰氯與溶劑I混合反應(yīng)，得到6-對甲苯磺?；?β-環(huán)糊精；
[0017] 將所述6-對甲苯磺?；?β_環(huán)糊精與氨基化試劑進(jìn)行氨基化反應(yīng)，得到氨基化β_ 環(huán)糊精；
[0018] 其中，所述溶劑I包括氫氧化鈉溶液或吡啶，所述氨基化試劑包括多元胺化合物。
[0019] 優(yōu)選的，所述步驟（1)中將甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯進(jìn)行羧基化反應(yīng) 具體包括以下步驟：
[0020] 在保護(hù)氣氛中，將甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯、丁二酸酐、4-二甲氨基吡 啶與二氯甲烷進(jìn)行羧基化反應(yīng)，得到羧基化甲氧基聚乙二醇-b_聚丙交酯-乙交酯。
[0021] 優(yōu)選的，所述步驟⑵中羧基化甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯、氨基化β-環(huán) 糊精、Ν-羥基琥珀酰亞胺和1-(3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽的質(zhì)量比為1: (1.5~3.5):(0.5~2.0):(3.0~7.0)。
[0022]優(yōu)選的，所述步驟(2)具體為：
[0023] 將所述羧基化甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯、N-羥基琥珀酰亞胺、1-(3-二 甲氨基丙基)-3_乙基碳二亞胺鹽酸鹽和緩沖溶液混合，在保護(hù)氣氛中進(jìn)行活化反應(yīng)；
[0024]調(diào)節(jié)所述活化反應(yīng)產(chǎn)物的pH值為6.7~7.3，然后與氨基化β-環(huán)糊精混合，在保護(hù) 氣氛中進(jìn)行反應(yīng)，得到具有式I所示結(jié)構(gòu)的兩親性膠束納米囊。
[0025]優(yōu)選的，所述步驟(2)中緩沖溶液包括磷酸鹽緩沖溶液或三羥甲基氨基甲烷鹽酸 鹽緩沖溶液。
[0026]本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述兩親性膠束納米囊或采用上述技術(shù)方案所述方 法制備得到的兩親性膠束納米囊在制備載藥膠束中的應(yīng)用，其中，所述載藥膠束包括所述 兩親性膠束納米囊載體和被所述載體包覆的藥物。
[0027] 優(yōu)選的，所述藥物包括三七皂苷R1、三七皂苷Rgl、阿霉素或穿心蓮內(nèi)酯。
[0028] 本發(fā)明提供了一種具有式I所示結(jié)構(gòu)的兩親性膠束納米囊，并提供了所述兩親性 膠束納米囊的制備方法，以羧基化甲氧基聚乙二醇-b_聚丙交酯-乙交酯和氨基化β_環(huán)糊精 為原料，在保護(hù)氣氛中進(jìn)行反應(yīng)，得到所述兩親性膠束納米囊。本發(fā)明還提供了所述兩親性 膠束納米囊在制備載藥膠束中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的兩親性膠束納米囊具有"外親水、內(nèi)疏 7Κ"的核殼結(jié)構(gòu)，可以對藥物進(jìn)行有效的包覆，包封率高達(dá)41.6%。本發(fā)明提供的載藥膠束 的載藥量達(dá)8.6%，在載藥膠束給藥過程中，能夠有效提高藥物輸送率;同時，本發(fā)明提供的 載藥膠束可控制藥物緩慢釋放，維持藥效的時間長達(dá)48h，能夠有效提高藥物的生物利用 率;此外，本發(fā)明提供的所述兩親性膠束納米囊的制備方法操作簡便，產(chǎn)率高達(dá)79.73%。
【具體實(shí)施方式】
[0029] 本發(fā)明提供了一種兩親性膠束納米囊，具有式I所示結(jié)構(gòu)：
[0030]
[0031 ]其中，x = l~1000，y = l~1000，z = l~1000。
[0032] 在本發(fā)明中，所述X優(yōu)選為2~700，更優(yōu)選為3~400，最優(yōu)選為4~100;所述y優(yōu)選 為2~700，更優(yōu)選為3~400，最優(yōu)選為4~100:所述z優(yōu)選為2~700，更優(yōu)選為3~400，最優(yōu) 選為4~100。
[0033] 本發(fā)明提供了所述兩親性膠束納米囊的制備方法，包括以下步驟：
[0034] (1)將β-環(huán)糊精進(jìn)行氨基化反應(yīng)，得到氨基化β-環(huán)糊精；
[0035]將甲氧基聚乙二醇-b_聚丙交酯-乙交酯進(jìn)行羧基化反應(yīng)，得到羧基化甲氧基聚乙 二醇-b_聚丙交酯-乙交酯；
[0036] (2)在保護(hù)氣氛和緩沖溶液中，將所述步驟（1)得到的羧基化甲氧基聚乙二醇-b- 聚丙交酯-乙交酯和氨基化β-環(huán)糊精與N-羥基琥珀酰亞胺以及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙 基碳二亞胺鹽酸鹽進(jìn)行反應(yīng)，得到具有式I所示結(jié)構(gòu)的兩親性膠束納米囊。
[0037] 本發(fā)明將β_環(huán)糊精(β-CD)進(jìn)行氨基化反應(yīng)，得到氨基化β-環(huán)糊精(6-NH2-i3_CD); 將甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯(mPEG-PLGA)進(jìn)行羧基化反應(yīng)，得到羧基化甲氧基 聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯(mPEG-PLGA-COOH)。
[0038] 在本發(fā)明中，所述將β-環(huán)糊精進(jìn)行氨基化反應(yīng)優(yōu)選具體包括以下步驟：
[0039]將β_環(huán)糊精、對甲苯磺酰氯(TsCl)與溶劑I混合反應(yīng)，得到6-對甲苯磺酰基-β-環(huán) 糊精(6-〇Ts-0-CD);
[0040] 將所述6-〇Ts_f3-⑶與氨基化試劑進(jìn)行氨基化反應(yīng)，得到6-ΝΗ2_β-⑶；
[0041 ]其中，所述溶劑I包括氫氧化鈉溶液或吡啶，所述氨基化試劑包括多元胺化合物。 [0042] 本發(fā)明將β-CTKTsCl與溶劑I混合反應(yīng)，得到6-〇Ts-0-CD。在本發(fā)明中，所述β-CD、 TsCl和溶劑I的質(zhì)量比優(yōu)選為1: (4~12): (100~200)，更優(yōu)選為1: (6~10): (120~140)。
[0043] 在本發(fā)明中，所述溶劑I優(yōu)選包括氫氧化鈉溶液或吡啶;所述氫氧化鈉溶液的摩爾 濃度優(yōu)選為〇. 1~〇. 8mol/L。
[0044] 在本發(fā)明中，所述將β-⑶、TsCl與溶劑I混合反應(yīng)優(yōu)選具體為：
[0045] 將β-⑶溶于溶劑I中，攪拌2~20min溶解后，向得到的混合物料中加入部分TsCl， 攪拌反應(yīng)1~3h，再加入剩余TsCl，繼續(xù)攪拌反應(yīng)2~8h，得到所述6-〇Ts-f3-⑶。
[0046] 本發(fā)明對于所述攪拌所采用的方式?jīng)]有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的 攪拌的技術(shù)方案即可，本發(fā)明優(yōu)選采用磁力攪拌方式進(jìn)行攪拌。在本發(fā)明中，所述攪拌的轉(zhuǎn) 速優(yōu)選為20~50rpm，更優(yōu)選為30~40rpm。
[0047] 在本發(fā)明中，按所占 TsCl的質(zhì)量百分?jǐn)?shù)計(jì)，所述部分TsCl優(yōu)選為40 %~60 %。
[0048] 本發(fā)明優(yōu)選在所述反應(yīng)完成后，對得到的產(chǎn)物進(jìn)行后處理，得到6-〇Ts-i3_CD。在本 發(fā)明中，所述后處理優(yōu)選包括以下步驟：
[0049] 反應(yīng)結(jié)束后，過濾，將得到的濾液置于冰水浴中，調(diào)節(jié)所述濾液的pH值為5.8~ 6.2，攪拌至濾液出現(xiàn)渾濁，于冰箱中1~3°C冷藏12~24h，再次過濾，得到6-〇Ts-f3-⑶粗產(chǎn) 品；
[0050] 將所述e-OTs-β-⑶粗產(chǎn)品與二次水混合，溶解后趁熱過濾，將得到的濾液于冰箱 中1~3°C冷藏12~24h進(jìn)行重結(jié)晶，重復(fù)操作2~3次，將重結(jié)晶得到的產(chǎn)品在25~60°C下真 空干燥12~24h，得到6-〇Ts-0-CD。
[0051] 在本發(fā)明中，進(jìn)行所述后處理時調(diào)節(jié)所述濾液的pH值為5.8~6.2。本發(fā)明對于調(diào) 節(jié)所述濾液的pH值為5.8~6.2所采用的方式或試劑沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員 熟知的用于調(diào)節(jié)pH值的技術(shù)方案即可。本發(fā)明優(yōu)選采用10%~15%的鹽酸溶液調(diào)節(jié)所述濾 液的pH值為5.8~6.2。
[0052] 在本發(fā)明中，將所述濾液的pH值調(diào)節(jié)為5.8~6.2后，攪拌至濾液出現(xiàn)渾濁。本發(fā)明 對于所述攪拌所采用的方式?jīng)]有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的攪拌的技術(shù)方案 即可，本發(fā)明優(yōu)選采用磁力攪拌方式進(jìn)行攪拌。在本發(fā)明中，所述攪拌的轉(zhuǎn)速優(yōu)選為20~ 50rpm，更優(yōu)選為30~40rpm;所述攪拌的時間優(yōu)選為4~6h。
[0053]在本發(fā)明中，將所述攪拌至出現(xiàn)渾濁后，于冰箱中1~3°C冷藏12~24h。在本發(fā)明 中，所述冷藏時間優(yōu)選為15~20h。
[0054] 在本發(fā)明中，得到6-〇Ts-0-CD粗產(chǎn)品后，將所述6-〇Ts-0-CD粗產(chǎn)品與二次水混合。 在本發(fā)明中，所述6-〇Ts-0-⑶粗產(chǎn)品與二次水的質(zhì)量比優(yōu)選為1:90~110。
[0055]在本發(fā)明中，將所述6-〇Ts-i3_CD粗產(chǎn)品與二次水混合后，溶解后趁熱過濾。在本發(fā) 明中，所述溶解的溫度優(yōu)選為45~55°C。
[0056]在本發(fā)明中，完成所述趁熱過濾后，將得到的濾液于冰箱中1~3°C冷藏12~24h進(jìn) 行重結(jié)晶。在本發(fā)明中，所述進(jìn)行重結(jié)晶時的冷藏時間優(yōu)選為15~20h。
[0057] 在本發(fā)明中，將重結(jié)晶得到的產(chǎn)品在25~60°C下真空干燥12~24h，得到e-OTs-β-CD。在本發(fā)明中，所述真空干燥的溫度優(yōu)選為35~45 °C ;所述真空干燥的時間優(yōu)選為15~ 20h;所述真空干燥的真空度優(yōu)選為8~12Pa。
[0058] 得到6-〇Ts-i3_CD后，本發(fā)明優(yōu)選將所述6-〇Ts-i3_CD與氨基化試劑進(jìn)行氨基化反 應(yīng)，得到6-NH 2-f3-CD。在本發(fā)明中，所述6-〇Ts-f3-CD和氨基化試劑的質(zhì)量比優(yōu)選為1: (50~ 150)，更優(yōu)選為1:(70~120)。
[0059] 在本發(fā)明中，所述氨基化試劑優(yōu)選包括多元胺化合物。在本發(fā)明中，所述多元胺化 合物優(yōu)選包括乙二胺或三乙胺。
[0060] 在本發(fā)明中，所述氨基化反應(yīng)優(yōu)選具體為：
[0061 ]將所述6-〇Ts-i3-⑶與氨基化試劑混合，在攪拌條件下，于50~85°C進(jìn)行氨基化反 應(yīng) 12 ~36h，得到 6-NH2-0-CD。
[0062]本發(fā)明對于所述攪拌所采用的方式?jīng)]有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的 攪拌的技術(shù)方案即可，本發(fā)明優(yōu)選采用磁力攪拌方式進(jìn)行攪拌。在本發(fā)明中，所述攪拌的轉(zhuǎn) 速優(yōu)選為20~50rpm，更優(yōu)選為30~40rpm。
[0063] 在本發(fā)明中，所述氨基化反應(yīng)的溫度優(yōu)選為60~70°C;所述氨基化反應(yīng)的時間優(yōu) 選為18~28h。
[0064] 本發(fā)明優(yōu)選在所述氨基化反應(yīng)完成后，對得到的產(chǎn)物進(jìn)行后處理，得到6-ΝΗ2_β-CD。在本發(fā)明中，所述氨基化反應(yīng)后處理優(yōu)選包括以下步驟：
[0065]將氨基化反應(yīng)產(chǎn)物冷卻到室溫，然后于55~65°C下，旋蒸時間25~35min。靜置、冷 卻到室溫，向得到的物料中加入預(yù)冷的無水乙醇，在冰水浴中靜置，出現(xiàn)白色沉淀，過濾得 到6-ΝΗ2-β-〇)粗產(chǎn)品；
[0066] 將所述6-ΝΗ2_β-⑶粗產(chǎn)品溶于超純水中，再加入預(yù)冷的無水乙醇，得到白色沉淀， 過濾，重復(fù)操作2~3次，然后在20~50°C下真空干燥2~3天，得到所述6-NH2_0-CD。
[0067] 其中，所述6-ΝΗ2_β-⑶粗產(chǎn)品、超純水與預(yù)冷的無水乙醇的質(zhì)量比優(yōu)選為（1.8~ 2.2): (0.8~1.2): (180~220)。在本發(fā)明中，進(jìn)行氨基化反應(yīng)后處理時，將氨基化反應(yīng)產(chǎn)物 旋蒸并靜置、冷卻到室溫后得到的物料中加入預(yù)冷的無水乙醇，在冰水浴中靜置，出現(xiàn)白色 沉淀，過濾得到6-NH 2-i3-CD粗產(chǎn)品。在本發(fā)明中，所述冷卻到室溫后得到的物料與所述預(yù)冷 的無水乙醇的質(zhì)量比優(yōu)選為1:90~110。
[0068]在本發(fā)明中，所述預(yù)冷的無水乙醇的溫度優(yōu)選為1~2°C。
[0069]在本發(fā)明中，所述在冰水浴中靜置的時間優(yōu)選為2.5~3.5h。
[0070] 在本發(fā)明中，得到6-NH2KD粗廣品后，將所述6-NH2KD粗廣品溶于超純水中， 再加入預(yù)冷的無水乙醇，得到白色沉淀，過濾，重復(fù)操作2~3次，然后在20~50°C下真空干 燥2~3天，得到所述6-NH2-0-CD。在本發(fā)明中，所述6-NH2-0-CD粗產(chǎn)品、超純水與預(yù)冷的無水 乙醇的質(zhì)量比優(yōu)選為（1.8~2.2) :(0.8~1.2) :(180~220)。
[0071 ]在本發(fā)明中，所述預(yù)冷的無水乙醇的溫度優(yōu)選為1~2°C。
[0072] 在本發(fā)明中，所述真空干燥的溫度優(yōu)選為28~40 °C;所述真空干燥的真空度優(yōu)選 為8~12Pa。
[0073] 在本發(fā)明中，所述將甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯進(jìn)行羧基化反應(yīng)優(yōu)選具 體包括以下步驟：
[0074]在保護(hù)氣氛中，將甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯(mPEG-PLGA)、丁二酸酐、 4_二甲氨基吡啶與二氯甲烷進(jìn)行羧基化反應(yīng)，得到羧基化甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙 交酯(mPEG-PLGA-COOH)。
[0075]在本發(fā)明中，所述mPEG-PLGA、丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶與二氯甲烷的物質(zhì)的量 比優(yōu)選為 1:(4.5~5.5) :(0.25~0.5) :(0.075~0.08)。
[0076] 本發(fā)明在將mPEG-PLGA進(jìn)行羧基化反應(yīng)前，優(yōu)選對丁二酸酐先進(jìn)行活化處理。在本 發(fā)明中，所述對丁二酸酐進(jìn)行活化處理的方法，優(yōu)選包括以下步驟：
[0077] 將丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶和二氯甲烷在保護(hù)氣氛中進(jìn)行活化反應(yīng)。
[0078] 本發(fā)明對于所述保護(hù)氣氛所采用的保護(hù)氣種類沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù) 人員熟知的用于保護(hù)氣氛的氣體即可。本發(fā)明優(yōu)選采用氮?dú)庾鳛楸Ｗo(hù)氣。在本發(fā)明中，所述 活化反應(yīng)優(yōu)選在室溫下進(jìn)行，即無需進(jìn)行加熱或降溫;所述活化反應(yīng)的時間優(yōu)選為1~5h， 更優(yōu)選為2~4h。
[0079] 完成所述對丁二酸酐進(jìn)行活化處理后，本發(fā)明優(yōu)選將所述活化反應(yīng)產(chǎn)物與mPEG-PLGA在保護(hù)氣氛中進(jìn)行反應(yīng)，得到mPEG-PLGA-COOH。
[0080] 本發(fā)明對于所述保護(hù)氣氛所采用的保護(hù)氣種類沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù) 人員熟知的用于保護(hù)氣氛的氣體即可。本發(fā)明優(yōu)選采用氮?dú)庾鳛楸Ｗo(hù)氣。
[0081 ]在本發(fā)明中，所述活化產(chǎn)物與mPEG-PLGA的反應(yīng)優(yōu)選在冰水浴中和攪拌條件下進(jìn) 行。本發(fā)明對于所述攪拌所采用的方式?jīng)]有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的攪拌 的技術(shù)方案即可，本發(fā)明優(yōu)選采用磁力攪拌方式進(jìn)行攪拌。在本發(fā)明中，所述攪拌的轉(zhuǎn)速優(yōu) 選為20~50rpm，更優(yōu)選為30~40rpm。
[0082] 在本發(fā)明中，所述活化產(chǎn)物與mPEG-PLGA的反應(yīng)時間優(yōu)選為12~48h，更優(yōu)選為20 ~35h〇
[0083] 本發(fā)明優(yōu)選在所述羧基化反應(yīng)完成后，對得到的產(chǎn)物進(jìn)行后處理，得到mPEG-PLGA-C00H。在本發(fā)明中，所述羧基化反應(yīng)后處理優(yōu)選包括以下步驟：
[0084] 將羧基化反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物進(jìn)行離心，得到上清液；
[0085]將所述上清液依次用稀鹽酸和飽和氯化鈉溶液各洗滌分層2~3次；
[0086] 將所述分層得到的下層液體干燥；
[0087] 將所述干燥后的產(chǎn)物過濾，將得到的濾液與預(yù)冷的無水乙醚混合，密封后于冰箱 中1~3 °C冷藏過夜，再次過濾后真空干燥濾餅，得到mPEG-PLGA-COOH。
[0088] 本發(fā)明在進(jìn)行所述羧基化反應(yīng)后處理時，將羧基化反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物進(jìn)行離 心，得到上清液。在本發(fā)明中，所述離心的轉(zhuǎn)速優(yōu)選為8000~lOOOOrpm，更優(yōu)選為8500~ 9500rpm;所述離心的時間優(yōu)選為5~10min。
[0089] 在本發(fā)明中，得到上清液后，將所述上清液依次用稀鹽酸和飽和氯化鈉溶液各洗 滌分層2~3次。在本發(fā)明中，所述稀鹽酸的pH值優(yōu)選為1.5~2.5。本發(fā)明優(yōu)選使用分液漏斗 進(jìn)行所述分層，得到下層液體。
[0090] 在本發(fā)明中，完成所述分層后，將所述分層得到的下層液體干燥。在本發(fā)明中，所 述干燥優(yōu)選使用無水硫酸鈉干燥過夜;其中，所述無水硫酸鈉優(yōu)選加至不結(jié)塊位置。
[0091] 在本發(fā)明中，將所述分層得到的下層液體干燥后，將所述干燥后的產(chǎn)物過濾，將得 到的濾液與預(yù)冷的無水乙醚混合，密封后于冰箱中-16~-20°c冷藏過夜，再次過濾后真空 干燥濾餅，得到mPEG-PLGA-COOH。在本發(fā)明中，所述濾液與預(yù)冷的無水乙醚的體積比優(yōu)選為 1:(3 ~8)〇
[0092]在本發(fā)明中，所述預(yù)冷的無水乙醚的溫度優(yōu)選為-16~_20°C。
[0093] 在本發(fā)明中，所述真空干燥的溫度優(yōu)選為23~27°C;所述真空干燥的時間優(yōu)選為 20~28h;所述真空干燥的真空度優(yōu)選為8~12Pa。
[0094] 得到所述6-ΝΗ2-β-〇)和所述mPEG-PLGA-⑶0H后，本發(fā)明在保護(hù)氣氛和緩沖溶液 中，將所述mPEG-PLGA-COOH和6-ΝΗ 2-β-〇)與N-羥基琥珀酰亞胺以及1 -(3-二甲氨基丙基)- 3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽進(jìn)行反應(yīng)，得到具有式I所示結(jié)構(gòu)的兩親性膠束納米囊(mPEG-PLGA-β-CD)。
[0095] 在本發(fā)明中，所述mPEG-PLGA-COOH、6-NH2-0-CD、N-羥基琥珀酰亞胺和1-(3-二甲 氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽的質(zhì)量比優(yōu)選為1:(1.5~3.5) :(0.5~2.0):(3.0~ 7.0)，更優(yōu)選為 1:(2.0~2.5) :(1.0~1.5) :(4.0~5.5)。
[0096]在本發(fā)明中，所述緩沖溶液優(yōu)選包括磷酸鹽緩沖溶液或三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽 緩沖溶液。在本發(fā)明中，所述磷酸鹽緩沖溶液的pH值優(yōu)選為5.8~6.2。在本發(fā)明中，所述三 輕甲基氨基甲燒鹽酸鹽緩沖溶液的pH值優(yōu)選為6.7~7.3。
[0097] 在本發(fā)明中，所述mPEG-PLGA-⑶0H和6-ΝΗ2-β-〇)與N-羥基琥珀酰亞胺以及1-(3- 二甲氨基丙基)-3_乙基碳二亞胺鹽酸鹽的反應(yīng)具體優(yōu)選為：
[0098] 將所述mPEG-PLGA-C00H、N_羥基琥珀酰亞胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞 胺鹽酸鹽和緩沖溶液混合，在保護(hù)氣氛中進(jìn)行活化反應(yīng)；
[0099]調(diào)節(jié)所述活化反應(yīng)產(chǎn)物的pH值為6.7~7.3，然后與6-NH2-f3-CD混合，在保護(hù)氣氛 中進(jìn)行反應(yīng)，得到mPEG-PLGA-0-CD。
[0100] 本發(fā)明將所述mPEG-PLGA-C00H、N_羥基琥珀酰亞胺、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基 碳二亞胺鹽酸鹽和緩沖溶液混合，在保護(hù)氣氛中進(jìn)行活化反應(yīng)。本發(fā)明對于所述保護(hù)氣氛 所采用的保護(hù)氣種類沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的用于保護(hù)氣氛的氣體即 可。本發(fā)明優(yōu)選采用氮?dú)庾鳛楸Ｗo(hù)氣。
[0101] 在本發(fā)明中，所述活化反應(yīng)的時間優(yōu)選為0.5~3.5h，更優(yōu)選為1.0~2.5h。
[0102] 在本發(fā)明中，所述活化反應(yīng)優(yōu)選在室溫下攪拌進(jìn)行反應(yīng)。本發(fā)明對于所述攪拌所 采用的方式?jīng)]有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的攪拌的技術(shù)方案即可，本發(fā)明優(yōu) 選采用磁力攪拌方式進(jìn)行攪拌。在本發(fā)明中，所述攪拌的轉(zhuǎn)速優(yōu)選為20~50rpm，更優(yōu)選為 30~40rpm。
[0103] 完成所述活化反應(yīng)后，本發(fā)明調(diào)節(jié)所述活化反應(yīng)后產(chǎn)物的pH值為6.7~7.3,然后 與6-NH2-f3-CD混合，在保護(hù)氣氛中進(jìn)行反應(yīng)，得到mPEG-PLGA-f3-CD。本發(fā)明優(yōu)選采用pH值調(diào) 節(jié)劑調(diào)節(jié)所述活化反應(yīng)完成后產(chǎn)物的pH值為6.7~7.3。在本發(fā)明中，對于所述pH值調(diào)節(jié)劑 的種類沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的pH值調(diào)節(jié)劑即可。本發(fā)明優(yōu)選采用飽 和氫氧化鈉溶液作為pH值調(diào)節(jié)劑。
[0104] 本發(fā)明對于所述保護(hù)氣氛所采用的保護(hù)氣種類沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù) 人員熟知的用于保護(hù)氣氛的氣體即可。本發(fā)明優(yōu)選采用氮?dú)庾鳛楸Ｗo(hù)氣。
[0105] 在本發(fā)明中，所述活化反應(yīng)后產(chǎn)物與6-NH2-i3-CD的反應(yīng)時間優(yōu)選為3~9h，更優(yōu)選 為4~7h。
[0106] 在本發(fā)明中，所述活化反應(yīng)后產(chǎn)物與6-NH2-i3_CD的反應(yīng)優(yōu)選在室溫下攪拌進(jìn)行反 應(yīng)。本發(fā)明對于所述攪拌所采用的方式?jīng)]有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的攪拌 的技術(shù)方案即可，本發(fā)明優(yōu)選采用磁力攪拌方式進(jìn)行攪拌。在本發(fā)明中，所述攪拌的轉(zhuǎn)速優(yōu) 選為20~50rpm，更優(yōu)選為30~40rpm。
[0107] 本發(fā)明優(yōu)選在所述活化反應(yīng)后產(chǎn)物與6-NH2-i3_CD的反應(yīng)完成后，對得到的產(chǎn)物進(jìn) 行后處理，得到mPEG-PLGA-f3-CD。在本發(fā)明中，所述活化反應(yīng)后產(chǎn)物與6-NH 2-f3-CD反應(yīng)的后 處理優(yōu)選包括以下步驟：
[0108] 將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物采用超純水透析；
[0109] 將所述透析得到的透析液進(jìn)行冷凍干燥，得到mPEG-PLGA-β-⑶。
[0110] 在本發(fā)明中，進(jìn)行所述活化反應(yīng)后產(chǎn)物與6-NH2-i3-CD反應(yīng)的后處理時，將反應(yīng)結(jié) 束后得到的產(chǎn)物采用超純水透析。本發(fā)明優(yōu)選將反應(yīng)產(chǎn)物置于透析袋中進(jìn)行透析，所述透 析的時間優(yōu)選為12~48h，更優(yōu)選為20~35h。在本發(fā)明中，所述透析袋的截留分子量優(yōu)選為 3500Da。在本發(fā)明中，所述透析袋在使用前優(yōu)選用沸水煮制20~40min，更優(yōu)選為25~ 35min;在所述透析過程中，優(yōu)選每隔5~7h換一次水。 完成所述透析后，本發(fā)明將所述透析得到的透析液進(jìn)行冷凍干燥，得到所述mPEG-PLGAKD。在本發(fā)明中，所述冷凍干燥的溫度優(yōu)選為-45~-55°C ;所述冷凍干燥的真空度 優(yōu)選為8.0~10.0 Pa。
[0112] 本發(fā)明提供了上述技術(shù)方案所述兩親性膠束納米囊或采用上述技術(shù)方案所述方 法制備得到的兩親性膠束納米囊在制備載藥膠束中的應(yīng)用，其中，所述載藥膠束包括所述 兩親性膠束納米囊載體和被所述載體包覆的藥物。
[0113] 在本發(fā)明中，所述藥物和兩親性膠束納米囊的質(zhì)量比優(yōu)選為1:(10~15)。在本發(fā) 明中，所述藥物優(yōu)選包括三七皂苷R1、三七皂苷Rgl、阿霉素或穿心蓮內(nèi)酯。
[0114] 本發(fā)明對于所述載藥膠束的制備方法沒有特殊的限定，采用本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知 的制備載藥膠束的技術(shù)方案即可。本發(fā)明優(yōu)選采用透析法制備載藥膠束，包括以下步驟：
[0115] 將藥物和兩親性膠束納米囊溶于甲醇中，在超聲條件下滴加超純水，再超聲10~ 30min;將得到的溶液置于透析袋內(nèi)，在室溫條件下，透析12~48h;冷凍干燥透析后的溶液， 得到所述載藥膠束。
[0116] 在本發(fā)明中，所述藥物的質(zhì)量與甲醇和超純水的體積比優(yōu)選為1 Omg: (0.5~2.0) mL:(2.0~4.0)mL。
[0117] 在本發(fā)明中，所述滴加超純水的速度優(yōu)選為0.25~0.35mL/min。
[0118] 在本發(fā)明中，所述超聲的功率優(yōu)選為280~320W。
[0119] 在本發(fā)明中，所述透析袋的截留分子量優(yōu)選為3500Da。在本發(fā)明中，所述透析袋在 使用前優(yōu)選用沸水煮制20~40min，更優(yōu)選為25~35min;在所述透析過程中，優(yōu)選每隔5~ 7h換一次水。
[0120] 在所述透析過程中優(yōu)選每隔5~7h換一次水。
[0121] 在本發(fā)明中，所述冷凍干燥的溫度優(yōu)選為-45~_55°C ;所述冷凍干燥的真空度優(yōu) 選為 8.0 ~lO.OPa。
[0122] 下面將結(jié)合本發(fā)明中的實(shí)施例，對本發(fā)明中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。顯 然，所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí) 施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬 于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
[0123] 實(shí)施例1:
[0124] 載藥膠束 mPEG2Q〇()-PLGAi()()()KD/Rl (X = 45，y = 7，z = 7)的制備
[0125] (1)6-ΝΗ2-β-〇)的制備
[0126] 6-〇Ts-0_CD 的制備：
[0127] ①粗產(chǎn)品的制備:在冰水浴中，將lmmolf3-⑶溶于20mL 0.2mol/L氫氧化鈉溶液中， 35rpm下磁力攪拌5min后，加入2mmol TsCl，反應(yīng)2h后，再加入2mmol TsCl，繼續(xù)反應(yīng)3h。
[0128] ②粗產(chǎn)品的分離:反應(yīng)后的溶液pH值為13.26,過濾掉未反應(yīng)的TsCl，將濾液置于 冰水浴中，調(diào)節(jié)pH值至6.0，35rpm下磁力攪拌至溶液出現(xiàn)渾池，在冰箱中2°C冷藏24h，過濾 得到6-〇Ts-0-CD粗產(chǎn)品。
[0129] ③粗產(chǎn)品的純化:將6-〇Ts-f3_CD粗產(chǎn)品與二次水混合，加熱溶解，并趁熱過濾，在 冰箱中2°C冷藏12h進(jìn)行重結(jié)晶；重復(fù)操作2次，將重結(jié)晶得到的產(chǎn)品在25°C下真空干燥12h， 得到白色粉末狀6-〇TsKD。
[0130] 稱量得到的干燥純凈樣品6-〇Ts_f3-⑶，產(chǎn)率為38.3%。
[0131] 6_NH2_0_CD的制備：
[0132] ①粗產(chǎn)品的制備:將1 .Ommol 6_0TsKD與60mmol乙二胺混合，在60°C下磁力攪 拌反應(yīng)24h。
[0133] ②粗產(chǎn)品的分離：將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物冷卻到室溫，然后于50°C下，旋蒸 25min。靜置、冷卻到室溫，向得到的物料中加入20mL預(yù)冷的無水乙醇，體系變渾濁，在冰水 浴中靜置，出現(xiàn)白色沉淀，過濾得到6-NH 2-i3-CD粗產(chǎn)品。
[0134] ③粗產(chǎn)品的純化:按6-ΝΗ2_β-⑶粗產(chǎn)品、超純水和預(yù)冷的無水乙醇的質(zhì)量比為2: 1:200，將得到的6-NH 2-i3-CD粗產(chǎn)品溶于超純水中，再加入預(yù)冷的無水乙醇，得到白色沉淀， 過濾，重復(fù)操作2次，然后在25 °C下真空干燥2天，得到淡黃色粉末狀6-NH2-i3-CD。
[0135] 稱量得到的干燥純凈樣品6-ΝΗ2_β-⑶，產(chǎn)率為80.16%。
[0136] (2)羧基化 mPEG2〇()()-PLGAi()()() (mPEG2〇()()-PLGAi()()()-COOH)的制備
[0137] ①丁二酸酐的活化:將3. Ommol 丁二酸酐和0.015g的4-二甲氨基R比啶溶于5. OmL的 二氯甲烷中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下于室溫反應(yīng)2h。
[0138] ②粗產(chǎn)品的制備:將活化后得到的物料與1 .Ommol mPEG^-PLGAKxxKffl(購自濟(jì)南 岱罡生物工程有限公司）混合，在冰水浴中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，35rpm磁力攪拌24h。
[0139] ③粗產(chǎn)品的分離純化:將反應(yīng)后得到的產(chǎn)物全部轉(zhuǎn)入離心管中，于SOOOrpm下離心 1 Omin，將上清液置于分液漏斗中，依次分別用15mL pH= 2的稀鹽酸、15mL飽和氯化鈉溶液 各洗滌2次。完成洗滌后，放出下層液體，將無水硫酸鈉加至不結(jié)塊位置，干燥過夜。過濾，向 所得濾液中加入5倍體積預(yù)冷的無水乙醚，密封后于冰箱中2°C冷藏過夜，過濾并真空干燥 濾餅，得到 mPEG2Q()()-PLGAi_-C00H。
[0140] 稱量得到的干燥純凈產(chǎn)品mPEG2_-PLGA1(xx)-C00H，產(chǎn)率為75.3%。
[0141] (3)兩親性膠束納米囊mPEG2_-PLGA1(xx)-0-CD的制備
[0142] ① mPEG2_-PLGAi_-C00H的活化：將1 · Ommol mPEG2_-PLGAi_-C00H、1 · Ommol N-羥基琥珀酰亞胺、5.0mmol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和6.0mL pH=6.0 的磷酸鹽緩沖液混合，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，于室溫35rpm磁力攪拌反應(yīng)lh。
[0143] ②粗產(chǎn)品的制備：用飽和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)活化反應(yīng)后得到的反應(yīng)體系的pH值至 7.0，然后加入2.5mmol 6-NH2-f3-CD，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，于室溫35rpm磁力攪拌繼續(xù)反應(yīng)5h。
[0144] ③粗產(chǎn)品的分離純化:將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物置于經(jīng)沸水煮制30min的透析袋 中，用超純水透析24h，每隔6h換一次水；將得到的透析液冷凍干燥12h，得到mPEG 2〇00-PLGAioo〇-e-CD〇
[0145] 稱量得到的干燥純凈產(chǎn)品mPEG2_-PLGA1(xx)-0-CD，產(chǎn)率為81 · 35%。
[0146] 將得到的產(chǎn)品進(jìn)行1HNMR分析，分析結(jié)果為：（H-1，3.38，3H)，（H-2，H-3，3.65，4)， (H-4，4·82，2H)，（H-5，5·20，2H)，（H-6，1·55，3H)，（H-7，2·81，2H)，（H-8，2·84，2H)，（H-9， 2 · 00，2H)，（H-10，2 · 31，2H)，證明產(chǎn)品是mPEG2_-PLGAi_-0-CD。
[0147] (4)載藥Jj父束 mPEG2〇〇()_PLGAi_-0-CD/Rl 的制備
[0148] 將l〇mg三七皂苷R1 和 150mg mPEG2_-PLGAi_-0-CD溶于l.OmL甲醇中，在300W超聲 條件下以〇.25mL/min的速度滴加3mL超純水，再超聲20min。將得到的溶液置于透析袋內(nèi)，在 室溫條件下，透析24h，每隔6h換一次水。最后在-50°C、真空度為9.0Pa的條件下冷凍干燥透 析后的溶液，得到載藥膠束mPEG2〇〇()-PLGAi()(x)KD/Rl 〇
[0149] 稱量得到的載藥膠束mPEG-o-PLGAKXM-e-CD/Rl，產(chǎn)率為57.12%。
[0150] 采用高效液相色譜法測定所述載藥膠束mPEG^oo-PLGAnxjo-e-CD/Rl的載藥量和包 封率，其中，流動相：有機(jī)相為色譜純乙腈，有機(jī)相流速為〇 . 32mL/min ;水相為質(zhì)量分?jǐn)?shù) 0.05%的磷酸水溶液，水相流速為1.28mL/min。利用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算得到所述載藥膠束 mPEG2〇()()-PLGAi_-0-CD/Rl的載藥量為6.52%，包封率為36.2%。
[0151] 將實(shí)施例1制備的載藥膠束mPEG^-PLGAKxw-fi-CD/Rl進(jìn)行體外釋放實(shí)驗(yàn)，包括以 下步驟：
[0152] 將50mg載藥膠束mPEG2_-PLGA1()(x)-0-CD/R 1 溶于lmL磷酸鹽緩沖液(pH=7 · 4)中，將 得到的載藥膠束溶液轉(zhuǎn)入截留分子量為l〇〇〇Da的透析袋內(nèi)，然后將透析袋置于磷酸鹽緩沖 液(pH=7.4)中，于恒溫(T = 36.5 °C)水浴搖床內(nèi)透析。
[0153] 在0min、5min、15min、30min、45min、lh、2h、4h、6h、8h、10h、12h、24h、36h、48h、60h、 72h、84h、96h和108h時，分別取lmL透析液，再補(bǔ)充lmL新配制的磷酸鹽緩沖液(pH=7.4)。將 取出的透析液經(jīng)冷凍干燥后，用高效液相色譜法測試其中藥物的含量。
[0154] 測試結(jié)果顯示，藥物在釋放48h時，仍可以檢測到。說明該載藥膠束可以實(shí)現(xiàn)藥物 的緩慢釋放，長時間維持藥效。
[0155] 實(shí)施例2:
[0156] 載藥膠束11^^2()()()卞11^2()()()^0/1?1(叉=45,7=14,2 = 14)的制備
[0157] (1)6-ΝΗ2-β-〇)的制備
[0158] 6-〇Ts-0_CD 的制備：
[0159] ①粗產(chǎn)品的制備：在冰水浴中，將lmmolf3-⑶溶于20mL 0.35mol/L氫氧化鈉溶液 中，35rpm下磁力攪拌lOmin后，加入3mmol TsCl，反應(yīng)1.5h后，再加入3mmol TsCl，繼續(xù)反應(yīng) 2.5h〇
[0160] ②粗產(chǎn)品的分離:反應(yīng)后的溶液pH值為12.69，過濾掉未反應(yīng)的TsCl，將濾液置于 冰水浴中，調(diào)節(jié)pH值至6.0，35rpm下磁力攪拌至溶液出現(xiàn)渾池，在冰箱中3°C冷藏20h，過濾 得到6-〇Ts-0-CD粗產(chǎn)品。
[0161] ③粗產(chǎn)品的純化:將6-〇Ts-f3_CD粗產(chǎn)品與二次水混合，加熱溶解，并趁熱過濾，在 冰箱中3°C冷藏12h進(jìn)行重結(jié)晶；重復(fù)操作2次，將重結(jié)晶得到的產(chǎn)品在25°C下真空干燥12h， 得到白色粉末狀6-〇TsKD。
[0162] 稱量得到的干燥純凈樣品6-〇Ts_f3-⑶，產(chǎn)率為40.5%。
[0163] 6_NH2_0_CD的制備：
[0164] ①粗產(chǎn)品的制備：將1 ·Ommol 6-〇Ts-0-CD與65mmol乙二胺混合，在55°C下磁力攪 拌反應(yīng)20h。
[0165] ②粗產(chǎn)品的分離：將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物冷卻到室溫，然后于60°C下，旋蒸 30min。靜置、冷卻到室溫，向得到的物料中加入20mL預(yù)冷的無水乙醇，體系變渾濁，在冰水 浴中靜置，出現(xiàn)白色沉淀，過濾得到6-NH 2-i3-CD粗產(chǎn)品。
[0166] ③粗產(chǎn)品的純化：按6-NH2-f3_CD粗產(chǎn)品、超純水和預(yù)冷的無水乙醇的質(zhì)量比為 1.8:1:180，將得到的6-ΝΗ 2-β-⑶粗產(chǎn)品溶于超純水中，再加入預(yù)冷的無水乙醇，得到白色 沉淀，過濾，重復(fù)操作2次，然后在35°C下真空干燥1天，得到淡黃色粉末狀6-NH 2-i3-CD。
[0167] 稱量得到的干燥純凈樣品6-ΝΗ2_β-⑶，產(chǎn)率為83.70 %。
[0168] (2)羧基化 mPEG2_-PLGA2_ (mPEG2_-PLGA2_-COOH)的制備
[0169] ①丁二酸酐的活化:將2.5mmol丁二酸酐和0.014g 4-二甲氨基吡啶溶于4.5mL的 二氯甲烷中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下于室溫反應(yīng)3h。
[0170] ②粗產(chǎn)品的制備:將活化后得到的物料與1 .Ommol mPEG2(xx)-PLGA2_-〇H(購自濟(jì)南 岱罡生物工程有限公司）混合，在冰水浴中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，35rpm磁力攪拌24h。
[0171] ③粗產(chǎn)品的分離純化:將反應(yīng)后得到的產(chǎn)物全部轉(zhuǎn)入離心管中，于SOOOrpm下離心 1 Omin，將上清液置于分液漏斗中，依次分別用15mL pH= 2的稀鹽酸、15mL飽和氯化鈉溶液 各洗滌2次。完成洗滌后，放出下層液體，將無水硫酸鈉加至不結(jié)塊位置，干燥過夜。過濾，向 所得濾液中加入5倍體積預(yù)冷的無水乙醚，密封后于冰箱中：TC冷藏過夜，過濾并真空干燥 濾餅，得到 mPEG2〇()()-PLGA2_-COOH。
[0172] 稱量得到的干燥純凈產(chǎn)品mPEG2(xx)-PLGA2(xx)-COOH，產(chǎn)率為75.3%。
[0173] (3)兩親性膠束納米囊 mPEG2Q()()-PLGA2()(X)-0-CD的制備
[0174] ① mPEG2_-PLGA2_-COOH的活化：將1 ·Ommol mPEG2_-PLGA2_-COOH、1 ·5mmol N-羥基琥珀酰亞胺、4.5mmol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和5.5mL pH=6.0 的磷酸鹽緩沖液混合，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，于室溫35rpm磁力攪拌反應(yīng)0.5h。
[0175] ②粗產(chǎn)品的制備：用飽和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)活化反應(yīng)后得到的反應(yīng)體系的pH值至 7.0，然后加入2. Ommol 6-NH2-f3-CD，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，于室溫35rpm磁力攪拌繼續(xù)反應(yīng)6h。
[0176] ③粗產(chǎn)品的分離純化:將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物置于經(jīng)沸水煮制30min的透析袋 中，用超純水透析20h，每隔6h換一次水；將得到的透析液冷凍干燥18h，得到mPEG 2〇00-PLGA2〇〇〇-P-CD〇
[0177] 稱量得到的干燥純凈產(chǎn)品mPEG2(xx)-PLGA2(xx)-β-CD，產(chǎn)率為76.31%。
[0178] (4)載藥Jj父束 mPEG2__PLGA2_KD/Rl 的制備
[0179] 將l〇mg三七皂苷R1和lOOmg mPEG2_-PLGA2_KD溶于1.5mL甲醇中，在300w超聲 條件下以滴加的速度〇. 3mL/min滴加2.5mL超純水，再超聲lOmin。將得到的溶液置于透析袋 內(nèi)，在室溫條件下，透析18h，每隔6h換一次水。最后在-55°C、真空度為8.0Pa的條件下冷凍 干燥透析后的溶液，得到載藥膠束mPEGmoo-PLGAmm-e-⑶/R1。
[0180] 載藥膠束mPEG2_-PLGA2_-0-CD/Rl的產(chǎn)率為63 · 7 %，載藥量為8 · 6 %，包封率為 41.1%〇
[0181] 實(shí)施例3:
[0182] 載藥膠束 mPEG2_-PLGAi_KD/Rg l(x = 45，y = 7，z = 7)的制備
[0183] (1)6-ΝΗ2-β-〇)的制備
[0184] 6-〇Ts-0_CD 的制備：
[0185] ①粗產(chǎn)品的制備:在冰水浴中，將lmm〇lf3-⑶溶于30mL 0.4mol/L氫氧化鈉溶液中， 35rpm下磁力攪拌5min后，加入2mmol TsCl，反應(yīng)1.5h后，再加入3mmol TsCl，繼續(xù)反應(yīng)3h。
[0186] ②粗產(chǎn)品的分離:反應(yīng)后的溶液pH值為13.29,過濾掉未反應(yīng)的TsCl，將濾液置于 冰水浴中，調(diào)節(jié)pH值至6.0，35rpm下磁力攪拌至溶液出現(xiàn)渾池，在冰箱中3°C冷藏24h，過濾 得到6-〇Ts-0-CD粗產(chǎn)品。
[0187] ③粗產(chǎn)品的純化:將6-〇Ts-f3_CD粗產(chǎn)品與二次水混合，加熱溶解，并趁熱過濾，在 冰箱中3°C冷藏24h進(jìn)行重結(jié)晶；重復(fù)操作2次，將重結(jié)晶得到的產(chǎn)品在50°C下真空干燥18h， 得到白色粉末狀6-〇TsKD。
[0188] 稱量得到的干燥純凈樣品6-〇Ts-f3_CD，產(chǎn)率為45.4%。
[0189] 6-ΝΗ2-β-〇)的制備：
[0190] ①粗產(chǎn)品的制備：將1 ·Ommol 6-〇Ts-0-CD與80mmol乙二胺混合，在65°C下磁力攪 拌反應(yīng)24h。
[0191] ②粗產(chǎn)品的分離：將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物冷卻到室溫，然后于65°C下，旋蒸 35min。靜置、冷卻到室溫，向得到的物料中加入30mL預(yù)冷的無水乙醇，體系變渾濁，在冰水 浴中靜置，出現(xiàn)白色沉淀，過濾得到6-NH 2-i3-CD粗產(chǎn)品。
[0192] ③粗產(chǎn)品的純化：按6-NH2-i3_CD粗產(chǎn)品、超純水和預(yù)冷的無水乙醇的質(zhì)量比為 2.2:1: 220，將得到的6-ΝΗ2-β-⑶粗產(chǎn)品溶于超純水中，再加入預(yù)冷的無水乙醇，將得到的 6-NH 2-i3-CD粗產(chǎn)品溶于超純水中，再加入預(yù)冷的無水乙醇，得到白色沉淀，過濾，重復(fù)操作2 次，然后在50°C下真空干燥1天，得到淡黃色粉末狀6-NH 2-i3-CD。
[0193] 稱量得到的干燥純凈樣品6-ΝΗ2_β-⑶，產(chǎn)率為84.3 %。
[0194] (2)羧基化 mPEG2_-PLGAi。。。(mPEG2_-PLGAi_-C00H)的制備
[0195] ①丁二酸酐的活化:將3.Ommol丁二酸酐和0.022g 4-二甲氨基吡啶溶于5.OmL的 二氯甲烷中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下于室溫反應(yīng)2h。
[0196] ②粗產(chǎn)品的制備:將活化后得到的物料與1 .Ommol mPEG^-PLGAKxxKffl(購自濟(jì)南 岱罡生物工程有限公司）混合，在冰水浴中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，35rpm磁力攪拌20h。
[0197] ③粗產(chǎn)品的分離純化:將反應(yīng)后得到的產(chǎn)物全部轉(zhuǎn)入離心管中，于SOOOrpm下離心 1 Omin，將上清液置于分液漏斗中，依次分別用15mL pH= 2的稀鹽酸、15mL飽和氯化鈉溶液 各洗滌2次。完成洗滌后，放出下層液體，將無水硫酸鈉加至不結(jié)塊位置，干燥過夜。過濾，向 所得濾液中加入6倍體積預(yù)冷的無水乙醚，密封后于冰箱中_18°C冷藏過夜，過濾并真空干 燥濾餅，得到 mPEGmoQ-PLGAiQQo-COOH。
[0198] 稱量得到的干燥純凈產(chǎn)品mPEG^oo-PLGAKXM-COOH，產(chǎn)率為70.6%。
[0199] (3)兩親性膠束納米囊mPEGwoo-PLGAiooo-e-CD的制備
[0200] ① mPEG2_-PLGAi_-C00H的活化：將l.Ommol mPEG2_-PLGAi_-C00H、2.0mmol N-羥基琥珀酰亞胺、5.0mmol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和5.5mL pH=6.0 的磷酸鹽緩沖液混合，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，于室溫35rpm磁力攪拌反應(yīng)0.5h。
[0201] ②粗產(chǎn)品的制備：用飽和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)活化反應(yīng)后得到的反應(yīng)體系的pH值至 7.0，然后加入2. Ommol 6-NH2-f3-CD，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，于室溫35rpm磁力攪拌繼續(xù)反應(yīng)6h。
[0202] ③粗產(chǎn)品的分離純化:將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物置于經(jīng)沸水煮制30min的透析袋 中，用超純水透析24h，每隔6h換一次水；將得到的透析液冷凍干燥18h，得到mPEG 2〇00-PLGAioo〇-e-CD〇
[0203] 稱量得到的干燥純凈產(chǎn)品mPEG2_-PLGA1(xx)-0-CD，產(chǎn)率為76.3%。
[0204] (4)載藥膠束 mPEG-o-PLGAiooo-e-CD/Rg 1 的制備
[0205] 將 10mg三七皂苷Rgl和 100mg mPEG2_-PLGAi_-0-CD溶于 1 .OmL甲醇中，在300w超 聲條件下以〇. 3mL/min的速度滴加3mL超純水，再超聲15min。將得到的溶液置于透析袋內(nèi)， 在室溫條件下，透析24h，每隔6h換一次水。最后在-50°C、真空度為8.0Pa的條件下冷凍干燥 透析后的溶液，得到載藥膠束mPEG2〇〇()-PLGAi()()()-0-CD/Rg 1 〇
[0206] 載藥膠束mPEG2_-PLGA1(xx)-0-CD/Rgl的產(chǎn)率為59.7%，載藥量為8.3%，包封率為 41.2%〇
[0207] 實(shí)施例4:
[0208] 載藥膠束11^62〇〇〇卞11^2〇〇〇-0-〇)/1^1(叉=45,7=14,2 = 14)的制備
[0209] (1)6-ΝΗ2-β-〇)的制備
[0210] 6-〇Ts-0_CD 的制備：
[0211] ①粗產(chǎn)品的制備：在冰水浴中，將lmmolf3-⑶溶于35mL 0.45mol/L氫氧化鈉溶液 中，35rpm下磁力攪拌5min后，加入3mmol TsCl，反應(yīng)2h后，再加入3mmol TsCl，繼續(xù)反應(yīng)3h。
[0212] ②粗產(chǎn)品的分離:反應(yīng)后的溶液pH值為13.26,過濾掉未反應(yīng)的TsCl，將濾液置于 冰水浴中，調(diào)節(jié)pH值至6.0，35rpm下磁力攪拌至溶液出現(xiàn)渾池，在冰箱中3°C冷藏24h，過濾 得到6-〇Ts-0-CD粗產(chǎn)品。
[0213] ③粗產(chǎn)品的純化:將6-〇Ts-f3_CD粗產(chǎn)品與二次水混合，加熱溶解，并趁熱過濾，在 冰箱中3°C冷藏24h進(jìn)行重結(jié)晶；重復(fù)操作2次，將重結(jié)晶得到的產(chǎn)品在55°C下真空干燥12h， 得到白色粉末狀6-〇TsKD。
[0214] 稱量得到的干燥純凈樣品6-〇Ts-f3_CD，產(chǎn)率為46.69%。
[0215] 6_NH2_0_CD的制備：
[0216] ①粗產(chǎn)品的制備:將1 ·Ommol 6-〇Ts-0-CD與lOOmmol乙二胺混合，在65°C下磁力攪 拌反應(yīng)24h。
[0217] ②粗產(chǎn)品的分離：將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物冷卻到室溫，然后于65°C下，旋蒸 30min。靜置、冷卻到室溫，向得到的物料中加入30mL預(yù)冷的無水乙醇，體系變渾濁，在冰水 浴中靜置，出現(xiàn)白色沉淀，過濾得到6-NH2-i3-CD粗產(chǎn)品。
[0218] ③粗產(chǎn)品的純化:按6-ΝΗ2_β-⑶粗產(chǎn)品、超純水和預(yù)冷的無水乙醇的質(zhì)量比為2: 1.8:200，將得到的6-NH 2-f3-CD粗產(chǎn)品溶于超純水中，再加入預(yù)冷的無水乙醇，將得到的6-ΝΗ2-β-⑶粗產(chǎn)品溶于超純水中，再加入預(yù)冷的無水乙醇，得到白色沉淀，過濾，重復(fù)操作2 次，然后在35°C下真空干燥2天，得到淡黃色粉末狀6-NH 2-i3-CD。
[0219] 稱量得到的干燥純凈樣品6-ΝΗ2_β-⑶，產(chǎn)率為85.8%。
[0220] (2)羧基化 mPEG2_-PLGA2_(mPEG2_-PLGA2_-COOH)的制備
[0221] ①丁二酸酐的活化:將3.0mmol丁二酸酐和0.017g 4-二甲氨基吡啶溶于5.0mL的 二氯甲烷中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下于室溫反應(yīng)3h。
[0222] ②粗產(chǎn)品的制備:將活化后得到的物料與1 .Ommol mPEG2(xx)-PLGA2(xx)-〇H(購自濟(jì)南 岱罡生物工程有限公司）混合，在冰水浴中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，35rpm磁力攪拌20h。
[0223] ③粗產(chǎn)品的分離純化:將反應(yīng)后得到的產(chǎn)物全部轉(zhuǎn)入離心管中，于SOOOrpm下離心 1 Omin，將上清液置于分液漏斗中，依次分別用15mL pH= 2的稀鹽酸、15mL飽和氯化鈉溶液 各洗滌2次。完成洗滌后，放出下層液體，將無水硫酸鈉加至不結(jié)塊位置，干燥過夜。過濾，向 所得濾液中加入5倍體積預(yù)冷的無水乙醚，密封后于冰箱中_18°C冷藏過夜，過濾并真空干 燥濾餅，得到 mPEG2〇()()-PLGA2_-COOH。
[0224] 稱量得到的干燥純凈產(chǎn)品mPEG2(xx)-PLGA2(xx)-COOH，產(chǎn)率為75.3%。
[0225] (3)兩親性膠束納米囊mPEG2_-PLGA2Q(X)-0-CD的制備
[0226] ① mPEG2_-PLGA2_-COOH的活化：將1 ·Ommol mPEG2_-PLGA2_-COOH、1 ·Ommol N-羥基琥珀酰亞胺、3.Ommol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和5.5mL pH=6.0 的磷酸鹽緩沖液混合，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，于室溫35rpm磁力攪拌反應(yīng)1. Oh。
[0227] ②粗產(chǎn)品的制備：用飽和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)活化反應(yīng)后得到的反應(yīng)體系的pH值至 7.0，然后加入2. Ommol 6-NH2-f3-CD，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，于室溫30rpm磁力攪拌繼續(xù)反應(yīng)6h。
[0228] ③粗產(chǎn)品的分離純化:將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物置于經(jīng)沸水煮制30min的透析袋 中，用超純水透析20h，每隔6h換一次水；將得到的透析液冷凍干燥24h，得到mPEG 2〇00-PLGA2〇〇〇-P-CD〇
[0229] 稱量得到的干燥純凈產(chǎn)品mPEG2(xx)-PLGA2(xx)-β-CD，產(chǎn)率為78.91%。
[0230] (4)載藥膠束 mPEG2_-PLGA2_KD/Rg 1 的制備
[0231] 將l〇mg三七皂苷Rgl和lOOmg mPEG2_-PLGA2_-P-CD溶于l.OmL甲醇中，在300w超 聲條件下以〇.3mL/min的速度滴加3mL超純水，再超聲20min。將得到的溶液置于透析袋內(nèi)， 在室溫條件下，透析24h，每隔6h換一次水。最后在-50°C、真空度為8.0Pa的條件下冷凍干燥 透析后的溶液，得到載藥膠束mPEG2〇〇()-PLGA2()()()-i5-CD/Rg 1 〇
[0232] 載藥膠束mPEG2_-PLGA2(xx)-0-CD/Rgl的產(chǎn)率為68 · 7 %，載藥量為8 · 1 %，包封率為 41.6%〇
[0233] 實(shí)施例5:
[0234] 載藥膠束11^65()()^311^1_()-0-〇)/1?1(叉=1〇,7 = 69,2 = 86)的制備
[0235] (1)6-ΝΗ2-β-〇)的制備
[0236] 6-〇Ts-0_CD 的制備：
[0237] ①粗產(chǎn)品的制備：在冰水浴中，將lmmolf3-⑶溶于20mL 0.35mol/L氫氧化鈉溶液 中，35rpm下磁力攪拌lOmin后，加入3mmol TsCl，反應(yīng)1.5h后，再加入3mmol TsCl，繼續(xù)反應(yīng) 2.5h〇
[0238] ②粗產(chǎn)品的分離:反應(yīng)后的溶液pH值為12.69,過濾掉未反應(yīng)的TsCl，將濾液置于 冰水浴中，調(diào)節(jié)pH值至6.0，35rpm下磁力攪拌至溶液出現(xiàn)渾池，在冰箱中3°C冷藏20h，過濾 得到6-〇Ts-0-CD粗產(chǎn)品。
[0239] ③粗產(chǎn)品的純化:將6-〇Ts-f3_CD粗產(chǎn)品與二次水混合，加熱溶解，并趁熱過濾，在 冰箱中3°C冷藏12h進(jìn)行重結(jié)晶；重復(fù)操作2次，將重結(jié)晶得到的產(chǎn)品在25°C下真空干燥12h， 得到白色粉末狀6-〇TsKD。
[0240] 稱量得到的干燥純凈樣品6-〇Ts-f3_CD，產(chǎn)率為40.51%。
[0241 ] 6-ΝΗ2-β-〇)的制備：
[0242] ①粗產(chǎn)品的制備：將l.Ommol 6-〇Ts-0-CD與65mmol乙二胺混合，在55°C下磁力攪 拌反應(yīng)20h。
[0243] ②粗產(chǎn)品的分離：將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物冷卻到室溫，然后于60°C下，旋蒸 30min。靜置、冷卻到室溫，向得到的物料中加入20mL預(yù)冷的無水乙醇，體系變渾濁，在冰水 浴中靜置，出現(xiàn)白色沉淀，過濾得到6-NH 2-i3-CD粗產(chǎn)品。
[0244] ③粗產(chǎn)品的純化:按6-ΝΗ2_β-⑶粗產(chǎn)品、超純水和預(yù)冷的無水乙醇的質(zhì)量比為2: 1:200，將得到的6-NH 2-i3-CD粗產(chǎn)品溶于超純水中，再加入預(yù)冷的無水乙醇，得到白色沉淀， 過濾，重復(fù)操作2次，然后在35°C下真空干燥1天，得到淡黃色粉末狀6-NH 2-i3-CD。
[0245] 稱量得到的干燥純凈樣品6-ΝΗ2_β-⑶，產(chǎn)率為83.70 %。
[0246] (2)羧基化 mPEGsQQ-PLGAiQ· (mPEG5M-PLGAi_()-C00H)的制備
[0247] ①丁二酸酐的活化:將2.5mmol丁二酸酐和0.014g 4-二甲氨基吡啶溶于4.5mL的 二氯甲烷中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下于室溫反應(yīng)3h。
[0248] ②粗產(chǎn)品的制備:將活化后得到的物料與1 .Ommol mPEGMo-PLGAKMoo-OH(購自濟(jì)南 岱罡生物工程有限公司）混合，在冰水浴中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，35rpm磁力攪拌24h。
[0249] ③粗產(chǎn)品的分離純化:將反應(yīng)后得到的產(chǎn)物全部轉(zhuǎn)入離心管中，于SOOOrpm下離心 1 Omin，將上清液置于分液漏斗中，依次分別用15mL pH= 2的稀鹽酸、15mL飽和氯化鈉溶液 各洗滌2次。完成洗滌后，放出下層液體，將無水硫酸鈉加至不結(jié)塊位置，干燥過夜。過濾，向 所得濾液中加入5倍體積預(yù)冷的無水乙醚，密封后于冰箱中：TC冷藏過夜，過濾并真空干燥 濾餅，得到 mPEG5QQ-PLGAi_()-C00H。
[0250] 稱量得到的干燥純凈產(chǎn)品ihPEGmo-PLGAkxxm-COOH，產(chǎn)率為75.83%。
[0251] (3)兩親性膠束納米囊mPEGMo-PLGAioooo-e-CD的制備
[0252] ① mPEG5〇()-PLGAi()_-C00H的活化：將1 · Ommol mPEG5〇()-PLGAi()_-C00H、1 · 5mmol N-羥基琥珀酰亞胺、4.5mmol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和5.5mL pH=6.0 的磷酸鹽緩沖液混合，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，于室溫35rpm磁力攪拌反應(yīng)0.5h。
[0253] ②粗產(chǎn)品的制備：用飽和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)活化反應(yīng)后得到的反應(yīng)體系的pH值至 7.0，然后加入2. Ommol 6-NH2-f3-CD，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，于室溫35rpm磁力攪拌繼續(xù)反應(yīng)6h。
[0254] ③粗產(chǎn)品的分離純化:將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物置于經(jīng)沸水煮制30min的透析袋 中，用超純水透析20h，每隔6h換一次水；將得到的透析液冷凍干燥18h，得到mPEG 500-PLGAiooooKD 〇
[0255] 稱量得到的干燥純凈產(chǎn)品mPEG5(X)-PLGA1(xxx)-β-CD，產(chǎn)率為76.31%。
[0256] (4)載藥膠束 mPEG5QQ-PLGAi_()-0-CD/R 1 的制備
[0257] 將l〇mg三七皂苷R1 和lOOmg mPEG5〇()-PLGAi_)-0-CD溶于 1.5mL甲醇中，在300w超聲 條件下以滴加的速度〇. 3mL/min滴加2.5mL超純水，再超聲lOmin。將得到的溶液置于透析袋 內(nèi)，在室溫條件下，透析18h，每隔6h換一次水。最后在-55°C、真空度為8.0Pa的條件下冷凍 干燥透析后的溶液，得到載藥膠束mPEGsoo-PLGAKjom-e-⑶/R1。
[0258] 載藥膠束mPEG5(x)-PLGA1_()-β-CD/Rl的產(chǎn)率為63·74%，載藥量為8·6%，包封率為 41.1%〇
[0259] 實(shí)施例6:
[0260] 載藥膠束 mPEGi_-PLGAi5_KD/Rl (X = 22，y = 104，z = 129)的制備
[0261] (1)6-ΝΗ2-β-〇)的制備
[0262] 6-〇Ts-0_CD 的制備：
[0263] ①粗產(chǎn)品的制備：在冰水浴中，將lmmolf3-⑶溶于20mL 0.35mol/L氫氧化鈉溶液 中，35rpm下磁力攪拌10min后，加入3mmol TsCl，反應(yīng)1.5h后，再加入3mmol TsCl，繼續(xù)反應(yīng) 2.5h〇
[0264] ②粗產(chǎn)品的分離:反應(yīng)后的溶液pH值為12.69，過濾掉未反應(yīng)的TsCl，將濾液置于 冰水浴中，調(diào)節(jié)pH值至6.0，35rpm下磁力攪拌至溶液出現(xiàn)渾池，在冰箱中3°C冷藏20h，過濾 得到6-〇Ts-0-CD粗產(chǎn)品。
[0265] ③粗產(chǎn)品的純化:將6-〇Ts-f3_CD粗產(chǎn)品與二次水混合，加熱溶解，并趁熱過濾，在 冰箱中3°C冷藏12h進(jìn)行重結(jié)晶；重復(fù)操作2次，將重結(jié)晶得到的產(chǎn)品在25°C下真空干燥12h， 得到白色粉末狀6-〇TsKD。
[0266] 稱量得到的干燥純凈樣品6-〇Ts-f3_CD，產(chǎn)率為68.55%。
[0267] 6-ΝΗ2-β-〇)的制備：
[0268] ①粗產(chǎn)品的制備：將1 .Ommol 6_0TsKD與65mmol乙二胺混合，在55°C下磁力攪 拌反應(yīng)20h。
[0269] ②粗產(chǎn)品的分離：將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物冷卻到室溫，然后于60°C下，旋蒸 30min。靜置、冷卻到室溫，向得到的物料中加入20mL預(yù)冷的無水乙醇，體系變渾濁，在冰水 浴中靜置，出現(xiàn)白色沉淀，過濾得到6-NH 2-i3-CD粗產(chǎn)品。
[0270]③粗產(chǎn)品的純化:按6-ΝΗ2_β-⑶粗產(chǎn)品、超純水和預(yù)冷的無水乙醇的質(zhì)量比為2: 1.2:200，將得到的6-ΝΗ2-β-⑶粗產(chǎn)品溶于超純水中，再加入預(yù)冷的無水乙醇，得到白色沉 淀，過濾，重復(fù)操作2次，然后在35°C下真空干燥1天，得到淡黃色粉末狀6-NH 2-i3-CD。
[0271 ] 稱量得到的干燥純凈樣品6-ΝΗ2_β-⑶，產(chǎn)率為53.58 %。
[0272] (2)羧基化 mPEGi_-PLGAi5_(mPEGi_-PLGAi5__COOH)的制備
[0273] ①丁二酸酐的活化:將2.5mmol丁二酸酐和0.014g 4-二甲氨基吡啶溶于4.5mL的 二氯甲烷中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下于室溫反應(yīng)3h。
[0274] ②粗產(chǎn)品的制備:將活化后得到的物料與1 .Ommol mPEG1Q(x)-PLGA15(xx)-〇H(購自濟(jì) 南岱罡生物工程有限公司）混合，在冰水浴中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，35rpm磁力攪拌24h。
[0275] ③粗產(chǎn)品的分離純化:將反應(yīng)后得到的產(chǎn)物全部轉(zhuǎn)入離心管中，于SOOOrpm下離心 1 Omin，將上清液置于分液漏斗中，依次分別用15mL pH= 2的稀鹽酸、15mL飽和氯化鈉溶液 各洗滌2次。完成洗滌后，放出下層液體，將無水硫酸鈉加至不結(jié)塊位置，干燥過夜。過濾，向 所得濾液中加入5倍體積預(yù)冷的無水乙醚，密封后于冰箱中：TC冷藏過夜，過濾并真空干燥 濾餅，得到 mPEGi_-PLGAi5__C00H。
[0276] 稱量得到的干燥純凈產(chǎn)品mPEGiooo-PLGAiMoo-COOH，產(chǎn)率為65·72%。
[0277] (3)兩親性膠束納米囊mPEGiooo-PLGAisooo-e-CD的制備
[0278] ① mPEGi_-PLGAi5__⑶0H的活化：將1 · Ommol mPEGi_-PLGAi5__⑶OH、1 · 5mmol N-羥基琥珀酰亞胺、4.5mmol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和5.5mL pH = 6.0的磷酸鹽緩沖液混合，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，于室溫35rpm磁力攪拌反應(yīng)0.5h。
[0279] ②粗產(chǎn)品的制備：用飽和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)活化反應(yīng)后得到的反應(yīng)體系的pH值至 7.0，然后加入2. Ommol 6-NH2-f3-CD，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，于室溫35rpm磁力攪拌繼續(xù)反應(yīng)6h。
[0280] ③粗產(chǎn)品的分離純化:將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物置于經(jīng)沸水煮制30min的透析袋 中，用超純水透析20h，每隔6h換一次水；將得到的透析液冷凍干燥18h，得到mPEGiooo-PLGAi5〇o『P-CD 〇
[0281] 稱量得到的干燥純凈產(chǎn)品mPEG1_-PLGA15(xx)-β-CD，產(chǎn)率為66·87%。
[0282] (4)載藥膠束 mPEGiooo-PLGABooo-e-CD/Rl 的制備
[0283] 將l〇mg三七皂苷R1 和lOOmg mPEGi_-PLGAi5_-P_CD溶于 1.5mL甲醇中，在300w超 聲條件下以滴加的速度〇. 3mL/min滴加2.5mL超純水，再超聲10min。將得到的溶液置于透析 袋內(nèi)，在室溫條件下，透析18h，每隔6h換一次水。最后在-55°C、真空度為8.0Pa的條件下冷 凍干燥透析后的溶液，得到載藥膠束mPEGKjoo-PLGAismo-e-CD/Rl 〇
[0284] 載藥膠束mPEG1_-PLGA15(xx)-β-CD/Rl的產(chǎn)率為79.73%，載藥量為8.6%，包封率為 41.1%〇
[0285] 實(shí)施例7:
[0286] 載藥膠束 mPEG2_-PLGA2〇_KD/Rl (X = 45，y = 139，z = 172)的制備
[0287] (1)6-ΝΗ2-β-〇)的制備
[0288] 6-〇Ts-0_CD 的制備：
[0289] ①粗產(chǎn)品的制備：在冰水浴中，將lmmolf3-⑶溶于20mL 0.35mol/L氫氧化鈉溶液 中，35rpm下磁力攪拌10min后，加入3mmol TsCl，反應(yīng)1.5h后，再加入3mmol TsCl，繼續(xù)反應(yīng) 2.5h〇
[0290] ②粗產(chǎn)品的分離:反應(yīng)后的溶液pH值為12.69，過濾掉未反應(yīng)的TsCl，將濾液置于 冰水浴中，調(diào)節(jié)pH值至6.0，35rpm下磁力攪拌至溶液出現(xiàn)渾池，在冰箱中3°C冷藏20h，過濾 得到6-〇Ts-0-CD粗產(chǎn)品。
[0291] ③粗產(chǎn)品的純化:將6-〇Ts-f3_CD粗產(chǎn)品與二次水混合，加熱溶解，并趁熱過濾，在 冰箱中3°C冷藏12h進(jìn)行重結(jié)晶；重復(fù)操作2次，將重結(jié)晶得到的產(chǎn)品在25°C下真空干燥12h， 得到白色粉末狀6-〇TsKD。
[0292] 稱量得到的干燥純凈樣品6-〇Ts-f3_CD，產(chǎn)率為75.15%。
[0293] 6-ΝΗ2-β-〇)的制備：
[0294] ①粗產(chǎn)品的制備：將l.Ommol 6-〇Ts-0-CD與65mmol乙二胺混合，在55°C下磁力攪 拌反應(yīng)20h。
[0295] ②粗產(chǎn)品的分離：將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物冷卻到室溫，然后于60°C下，旋蒸 30min。靜置、冷卻到室溫，向得到的物料中加入20mL預(yù)冷的無水乙醇，體系變渾濁，在冰水 浴中靜置，出現(xiàn)白色沉淀，過濾得到6-NH2-i3-CD粗產(chǎn)品。
[0296] ③粗產(chǎn)品的純化:按6-ΝΗ2_β-⑶粗產(chǎn)品、超純水和預(yù)冷的無水乙醇的質(zhì)量比為2: 1:190,將得到的6-NH 2-i3-CD粗產(chǎn)品溶于超純水中，再加入預(yù)冷的無水乙醇，得到白色沉淀， 過濾，重復(fù)操作2次，然后在35°C下真空干燥1天，得到淡黃色粉末狀6-NH 2-i3-CD。
[0297] 稱量得到的干燥純凈樣品6-ΝΗ2_β-⑶，產(chǎn)率為63.48%。
[0298] (2)羧基化 mPEG2_-PLGA2〇_(mPEG2_-PLGA2()_-COOH)的制備
[0299] ①丁二酸酐的活化:將2.5mmol丁二酸酐和0.014g 4-二甲氨基吡啶溶于4.5mL的 二氯甲烷中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下于室溫反應(yīng)3h。
[0300] ②粗產(chǎn)品的制備：將活化后得到的物料與1 .Ommol mPEG2_-PLGA2Q_-〇H(購自濟(jì) 南岱罡生物工程有限公司）混合，在冰水浴中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，35rpm磁力攪拌24h。
[0301] ③粗產(chǎn)品的分離純化:將反應(yīng)后得到的產(chǎn)物全部轉(zhuǎn)入離心管中，于SOOOrpm下離心 1 Omin，將上清液置于分液漏斗中，依次分別用15mL pH= 2的稀鹽酸、15mL飽和氯化鈉溶液 各洗滌2次。完成洗滌后，放出下層液體，將無水硫酸鈉加至不結(jié)塊位置，干燥過夜。過濾，向 所得濾液中加入5倍體積預(yù)冷的無水乙醚，密封后于冰箱中：TC冷藏過夜，過濾并真空干燥 濾餅，得到 mPEG2〇()()-PLGA2_()-COOH。
[0302] 稱量得到的干燥純凈產(chǎn)品mPEG2_-PLGA2Q_-COOH，產(chǎn)率為70 · 16%。
[0303] (3)兩親性膠束納米囊mPEG2_-PLGA2_ Q-0-CD的制備
[0304] ① mPEG2_-PLGA2Q_-⑶0H的活化：將1 · Ommol mPEG2_-PLGA2Q_-⑶OH、1 · 5mmol N-羥基琥珀酰亞胺、4.5mmol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和5.5mL pH = 6.0的磷酸鹽緩沖液混合，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，于室溫35rpm磁力攪拌反應(yīng)0.5h。
[0305] ②粗產(chǎn)品的制備：用飽和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)活化反應(yīng)后得到的反應(yīng)體系的pH值至 7.0，然后加入2. Ommol 6-NH2-f3-CD，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，于室溫35rpm磁力攪拌繼續(xù)反應(yīng)6h。
[0306] ③粗產(chǎn)品的分離純化:將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物置于經(jīng)沸水煮制30min的透析袋 中，用超純水透析20h，每隔6h換一次水；將得到的透析液冷凍干燥18h，得到mPEG 2〇00-PLGA20000KD 〇
[0307] 稱量得到的干燥純凈產(chǎn)品mPEG2_-PLGA2_ Q-0-CD，產(chǎn)率為67 · 56%。
[0308] (4)載藥 Jj父束 mPEG2Q〇()_PLGA2()_KD/Rl 的制備
[0309] 將l〇mg三七皂苷R1 和lOOmg mPEG2_-PLGA2Q_KD溶于 1.5mL甲醇中，在300w超 聲條件下以滴加的速度〇. 3mL/min滴加2.5mL超純水，再超聲10min。將得到的溶液置于透析 袋內(nèi)，在室溫條件下，透析18h，每隔6h換一次水。最后在-55°C、真空度為8.0Pa的條件下冷 凍干燥透析后的溶液，得到載藥膠束mPEG 2_-PLGA2_Q-f3-CD/Rl 〇
[0310] 載藥膠束mPEG2_-PLGA2_()-β-CD/Rl的產(chǎn)率為63.25%，載藥量為8.6%，包封率為 41.1%〇
[0311] 實(shí)施例8:
[0312 ]載藥膠束 mPEGsooo-PLGAisoooKD/Rl (叉=68,7 = 125,2 = 155)的制備
[0313] (1)6-ΝΗ2-β-〇)的制備
[0314] 6-〇Ts-0_CD 的制備：
[0315] ①粗產(chǎn)品的制備：在冰水浴中，將lmmolf3-⑶溶于20mL 0.35mol/L氫氧化鈉溶液 中，35rpm下磁力攪拌lOmin后，加入3mmol TsCl，反應(yīng)1.5h后，再加入3mmol TsCl，繼續(xù)反應(yīng) 2.5h〇
[0316] ②粗產(chǎn)品的分離:反應(yīng)后的溶液pH值為12.69，過濾掉未反應(yīng)的TsCl，將濾液置于 冰水浴中，調(diào)節(jié)pH值至6.0，35rpm下磁力攪拌至溶液出現(xiàn)渾池，在冰箱中3°C冷藏20h，過濾 得到6-〇Ts-0-CD粗產(chǎn)品。
[0317] ③粗產(chǎn)品的純化:將6-〇Ts-f3_CD粗產(chǎn)品與二次水混合，加熱溶解，并趁熱過濾，在 冰箱中3°C冷藏12h進(jìn)行重結(jié)晶；重復(fù)操作2次，將重結(jié)晶得到的產(chǎn)品在25°C下真空干燥12h， 得到白色粉末狀6-〇TsKD。
[0318] 稱量得到的干燥純凈樣品6-〇Ts-f3_CD，產(chǎn)率為55.32%。
[0319] 6-ΝΗ2-β-〇)的制備：
[0320] ①粗產(chǎn)品的制備：將l.Ommol 6-〇Ts-0-CD與65mmol乙二胺混合，在55°C下磁力攪 拌反應(yīng)20h。
[0321] ②粗產(chǎn)品的分離：將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物冷卻到室溫，然后于60°C下，旋蒸 30min。靜置、冷卻到室溫，向得到的物料中加入20mL預(yù)冷的無水乙醇，體系變渾濁，在冰水 浴中靜置，出現(xiàn)白色沉淀，過濾得到6-NH 2-i3-CD粗產(chǎn)品。
[0322] ③粗產(chǎn)品的純化：按6-ΝΗ2-β-CD粗產(chǎn)品、超純水和預(yù)冷的無水乙醇的質(zhì)量比為 1.9:1: 200，將得到的6-ΝΗ2-β-⑶粗產(chǎn)品溶于超純水中，再加入預(yù)冷的無水乙醇，得到白色 沉淀，過濾，重復(fù)操作2次，然后在35°C下真空干燥1天，得到淡黃色粉末狀6-NH 2-i3-CD。
[0323] 稱量得到的干燥純凈樣品6_見12^0，產(chǎn)率為58.25%。
[0324] (2)羧基化 mPEG3_-PLGAi8_(mPEG3_-PLGAi8_-C00H)的制備
[0325] ①丁二酸酐的活化:將2.5mmol丁二酸酐和0.014g 4-二甲氨基吡啶溶于4.5mL的 二氯甲烷中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下于室溫反應(yīng)3h。
[0326] ②粗產(chǎn)品的制備:將活化后得到的物料與1 .Ommol mPEG3_-PLGA18_-〇H(購自濟(jì) 南岱罡生物工程有限公司）混合，在冰水浴中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，35rpm磁力攪拌24h。
[0327] ③粗產(chǎn)品的分離純化:將反應(yīng)后得到的產(chǎn)物全部轉(zhuǎn)入離心管中，于SOOOrpm下離心 1 Omin，將上清液置于分液漏斗中，依次分別用15mL pH= 2的稀鹽酸、15mL飽和氯化鈉溶液 各洗滌2次。完成洗滌后，放出下層液體，將無水硫酸鈉加至不結(jié)塊位置，干燥過夜。過濾，向 所得濾液中加入5倍體積預(yù)冷的無水乙醚，密封后于冰箱中：TC冷藏過夜，過濾并真空干燥 濾餅，得到 mPEG3_-PLGAi8_-C00H。
[0328] 稱量得到的干燥純凈產(chǎn)品mPEG3_-PLGA18_-C00H，產(chǎn)率為66.16%。
[0329] (3)兩親性膠束納米囊mPEG3_-PLGA18(x)()-0-CD的制備
[0330] ① mPEG3_-PLGAi8_-⑶0H的活化：將1 · Ommol mPEG3_-PLGAi8_-⑶OH、1 · 5mmol N-羥基琥珀酰亞胺、4.5mmol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和5.5mL pH = 6.0的磷酸鹽緩沖液混合，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，于室溫35rpm磁力攪拌反應(yīng)0.5h。
[0331] ②粗產(chǎn)品的制備：用飽和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)活化反應(yīng)后得到的反應(yīng)體系的pH值至 7.0，然后加入2. Ommol 6-NH2-f3-CD，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，于室溫35rpm磁力攪拌繼續(xù)反應(yīng)6h。
[0332] ③粗產(chǎn)品的分離純化:將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物置于經(jīng)沸水煮制30min的透析袋 中，用超純水透析20h，每隔6h換一次水；將得到的透析液冷凍干燥18h，得到mPEG 3〇00-PLGAl800〇KD 〇
[0333] 稱量得到的干燥純凈產(chǎn)品mPEG3_-PLGA18(xx)-0-CD，產(chǎn)率為57 · 56%。
[0334] (4)載藥 Jj父束 mPEG3Q〇()_PLGAi8_KD/Rl 的制備
[0335] 將 10mg三七皂苷R1 和 100mg mPEG3_-PLGAi8_-P-CD溶于 1.5mL甲醇中，在300w超 聲條件下以滴加的速度〇. 3mL/min滴加2.5mL超純水，再超聲lOmin。將得到的溶液置于透析 袋內(nèi)，在室溫條件下，透析18h，每隔6h換一次水。最后在-55°C、真空度為8.0Pa的條件下冷 凍干燥透析后的溶液，得到載藥膠束mPEG 3_-PLGA18m〇-i3-CD/Rl 〇
[0336] 載藥膠束mPEG3_-PLGAi8(xx)-0-CD/Rl的產(chǎn)率為68.74%，載藥量為8.6%，包封率為 41.1%〇
[0337] 實(shí)施例9:
[0338] 載藥膠束 mPEGsoQQ-PLGAsiQQoKD/Rl (叉=113，丫 = 146,2 = 181)的制備
[0339] (1)6-ΝΗ2-β-〇)的制備
[0340] 6-〇Ts-0_CD 的制備：
[0341] ①粗產(chǎn)品的制備：在冰水浴中，將lmmolf3-⑶溶于20mL 0.35mol/L氫氧化鈉溶液 中，35rpm下磁力攪拌10min后，加入3mmol TsCl，反應(yīng)1.5h后，再加入3mmol TsCl，繼續(xù)反應(yīng) 2.5h〇
[0342] ②粗產(chǎn)品的分離:反應(yīng)后的溶液pH值為12.69，過濾掉未反應(yīng)的TsCl，將濾液置于 冰水浴中，調(diào)節(jié)pH值至6.0，35rpm下磁力攪拌至溶液出現(xiàn)渾池，在冰箱中3°C冷藏20h，過濾 得到6-〇Ts-0-CD粗產(chǎn)品。
[0343] ③粗產(chǎn)品的純化:將6-〇Ts-f3_CD粗產(chǎn)品與二次水混合，加熱溶解，并趁熱過濾，在 冰箱中3°C冷藏12h進(jìn)行重結(jié)晶；重復(fù)操作2次，將重結(jié)晶得到的產(chǎn)品在25°C下真空干燥12h， 得到白色粉末狀6-〇TsKD。
[0344] 稱量得到的干燥純凈樣品6-〇Ts-f3_CD，產(chǎn)率為60.32%。
[0345] 6_NH2_P_CD的制備：
[0346] ①粗產(chǎn)品的制備：將l.Ommol 6-〇Ts-0-CD與65mmol乙二胺混合，在55°C下磁力攪 拌反應(yīng)20h。
[0347] ②粗產(chǎn)品的分離：將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物冷卻到室溫，然后于60°C下，旋蒸 30min。靜置、冷卻到室溫，向得到的物料中加入20mL預(yù)冷的無水乙醇，體系變渾濁，在冰水 浴中靜置，出現(xiàn)白色沉淀，過濾得到6-NH 2-i3-CD粗產(chǎn)品。
[0348] ③粗產(chǎn)品的純化:按6-ΝΗ2_β-⑶粗產(chǎn)品、超純水和預(yù)冷的無水乙醇的質(zhì)量比為2: 1.2:200，將得到的6-ΝΗ 2-β-⑶粗產(chǎn)品溶于超純水中，再加入預(yù)冷的無水乙醇，得到白色沉 淀，過濾，重復(fù)操作2次，然后在35°C下真空干燥1天，得到淡黃色粉末狀6-NH 2-i3-CD。
[0349] 稱量得到的干燥純凈樣品6-ΝΗ2_β-⑶，產(chǎn)率為51.98%。
[0350] (2)羧基化 mPEGsQQQ-PIi^iQQQUPEGsQQQ-PIi^iQQQ-COOH)的制備
[0351 ] ①丁二酸酐的活化:將2.5mmol丁二酸酐和0.014g 4-二甲氨基吡啶溶于4.5mL的 二氯甲烷中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下于室溫反應(yīng)3h。
[0352] ②粗產(chǎn)品的制備:將活化后得到的物料與1 .Ommol mPEG5Q(x)-PLGA21(xx)-〇H(購自濟(jì) 南岱罡生物工程有限公司）混合，在冰水浴中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下，35rpm磁力攪拌24h。
[0353] ③粗產(chǎn)品的分離純化:將反應(yīng)后得到的產(chǎn)物全部轉(zhuǎn)入離心管中，于SOOOrpm下離心 1 Omin，將上清液置于分液漏斗中，依次分別用15mL pH= 2的稀鹽酸、15mL飽和氯化鈉溶液 各洗滌2次。完成洗滌后，放出下層液體，將無水硫酸鈉加至不結(jié)塊位置，干燥過夜。過濾，向 所得濾液中加入5倍體積預(yù)冷的無水乙醚，密封后于冰箱中：TC冷藏過夜，過濾并真空干燥 濾餅，得到 mPEG5QQ()-PLGA2i_-COOH。
[0354] 稱量得到的干燥純凈產(chǎn)品mPEG5_-PLGA21_-COOH，產(chǎn)率為58 · 63 %。
[0355] (3)兩親性膠束納米囊mPEG5Q〇()-PLGA2 iqqqKD的制備
[0356] ① mPEG5_-PLGA2i_-⑶0H的活化：將1 · Ommol mPEG5_-PLGA2i_-⑶OH、1 · 5mmol N-羥基琥珀酰亞胺、4.5mmol 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和5.5mL pH = 6.0的磷酸鹽緩沖液混合，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，于室溫35rpm磁力攪拌反應(yīng)0.5h。
[0357] ②粗產(chǎn)品的制備：用飽和氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)活化反應(yīng)后得到的反應(yīng)體系的pH值至 7.0，然后加入2. Ommol 6-NH2-f3-CD，氮?dú)獗Ｗo(hù)條件下，于室溫35rpm磁力攪拌繼續(xù)反應(yīng)6h。
[0358] ③粗產(chǎn)品的分離純化:將反應(yīng)結(jié)束后得到的產(chǎn)物置于經(jīng)沸水煮制30min的透析袋 中，用超純水透析20h，每隔6h換一次水；將得到的透析液冷凍干燥18h，得到mPEG 5〇00-PLGA2IOO0KD 〇
[0359] 稱量得到的干燥純凈產(chǎn)品mPEG5_-PLGA21(xx)-β-CD，產(chǎn)率為59·63%。
[0360] (4)載藥 Jj父束 mPEG5Q〇()_PLGA2i_KD/Rl 的制備
[0361] 將l〇mg三七皂苷R1 和lOOmg mPEG5_-PLGA2i_-P-CD溶于 1.5mL甲醇中，在300w超 聲條件下以滴加的速度〇. 3mL/min滴加2.5mL超純水，再超聲10min。將得到的溶液置于透析 袋內(nèi)，在室溫條件下，透析18h，每隔6h換一次水。最后在-55°C、真空度為8.0Pa的條件下冷 凍干燥透析后的溶液，得到載藥膠束mPEG 5QQ()-PLGA21m()-i3-CD/Rl。
[0362] 載藥膠束mPEG5_-PLGA21(xx)-β-CD/Rl的產(chǎn)率為45.33%，載藥量為8.6%，包封率為 41.1%〇
[0363] 由以上實(shí)施例可以看出，本發(fā)明提供的具有"外親水、內(nèi)疏水"核殼結(jié)構(gòu)的兩親性 膠束納米囊，可以對藥物進(jìn)行有效的包覆，包封率高達(dá)41.6 %。本發(fā)明提供的載藥膠束的載 藥量達(dá)8.6%，在載藥膠束給藥過程中，能夠有效提高藥物輸送率;同時，本發(fā)明提供的載藥 膠束可控制藥物緩慢釋放，維持藥效的時間長達(dá)48h，能夠有效提高藥物的生物利用率;此 外，本發(fā)明提供的所述兩親性膠束納米囊的制備方法操作簡便，產(chǎn)率高達(dá)79.73%。
[0364] 以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也應(yīng) 視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種兩親性膠束納米囊，具有式I所示結(jié)構(gòu)：其中，x=l~1000，y=l~1000，z = l~1000。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的兩親性膠束納米囊，其特征在于，所述X = 2~700，y = 2~700， z = 2 ~700〇3. 權(quán)利要求1或2所述兩親性膠束納米囊的制備方法，包括以下步驟： (1) 將β-環(huán)糊精進(jìn)行氨基化反應(yīng)，得到氨基化β-環(huán)糊精； 將甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯進(jìn)行羧基化反應(yīng)，得到羧基化甲氧基聚乙二 醇-b_聚丙交酯-乙交酯； (2) 在保護(hù)氣氛和緩沖溶液中，將所述步驟（1)得到的羧基化甲氧基聚乙二醇-b-聚丙 交酯-乙交酯和氨基化β-環(huán)糊精與N-羥基琥珀酰亞胺以及1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳 二亞胺鹽酸鹽進(jìn)行反應(yīng)，得到具有式I所示結(jié)構(gòu)的兩親性膠束納米囊。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（1)中將β-環(huán)糊精進(jìn)行氨基 化反應(yīng)具體包括以下步驟： 將β-環(huán)糊精、對甲苯磺酰氯與溶劑I混合反應(yīng)，得到6-對甲苯磺?；?β-環(huán)糊精； 將所述6-對甲苯磺?；?β-環(huán)糊精與氨基化試劑進(jìn)行氨基化反應(yīng)，得到氨基化β-環(huán)糊 精； 其中，所述溶劑I包括氫氧化鈉溶液或吡啶，所述氨基化試劑包括多元胺化合物。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟（1)中將甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯進(jìn)行羧基化反應(yīng)具體包括以下步驟： 在保護(hù)氣氛中，將甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯、丁二酸酐、4-二甲氨基吡啶與 二氯甲烷進(jìn)行羧基化反應(yīng)，得到羧基化甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中羧基化甲氧基聚乙二 醇-b-聚丙交酯-乙交酯、氨基化β-環(huán)糊精、N-羥基琥珀酰亞胺和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙 基碳二亞胺鹽酸鹽的質(zhì)量比為1:(1.5~3.5) :(0.5~2.0):(3.0~7.0)。7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)具體為： 將所述羧基化甲氧基聚乙二醇-b-聚丙交酯-乙交酯、N-羥基琥珀酰亞胺、1-(3-二甲氨 基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽和緩沖溶液混合，在保護(hù)氣氛中進(jìn)行活化反應(yīng)； 調(diào)節(jié)所述活化反應(yīng)產(chǎn)物的pH值為6.7~7.3，然后與氨基化β-環(huán)糊精混合，在保護(hù)氣氛 中進(jìn)行反應(yīng)，得到具有式I所示結(jié)構(gòu)的兩親性膠束納米囊。8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其特征在于，所述步驟(2)中緩沖溶液包括磷酸鹽 緩沖溶液或三羥甲基氨基甲烷鹽酸鹽緩沖溶液。9. 權(quán)利要求1或2所述兩親性膠束納米囊或權(quán)利要求3~8任意一項(xiàng)所述方法制備得到 的兩親性膠束納米囊在制備載藥膠束中的應(yīng)用，其中，所述載藥膠束包括所述兩親性膠束 納米囊載體和被所述載體包覆的藥物。10. 根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物包括三七皂苷RU三七皂苷Rgl、 阿霉素或穿心蓮內(nèi)酯。
【文檔編號】A61K47/34GK105997941SQ201610320365
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月14日
【發(fā)明人】門毅, 徐文慧, 張文生
【申請人】北京師范大學(xué)