冬蟲(chóng)夏草在制備預(yù)防和/或治療胰腺纖維化的藥物中的應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及冬蟲(chóng)夏草的藥物用途，提供了一種冬蟲(chóng)夏草在制備預(yù)防和/或治療胰腺纖維化的藥物中的應(yīng)用，所述藥物包括作為活性成分的冬蟲(chóng)夏草和一種或多種可藥用輔料，所述冬蟲(chóng)夏草選自天然冬蟲(chóng)夏草、冬蟲(chóng)夏草發(fā)酵菌絲體、以及天然冬蟲(chóng)夏草和冬蟲(chóng)夏草發(fā)酵菌絲體的提取物，所述提取物選自水提取物、醇提取物、酯提取物、醚提取物、氯仿提取物中的一種或幾種的組合。本發(fā)明通過(guò)實(shí)驗(yàn)考察了冬蟲(chóng)夏草對(duì)大鼠胰腺纖維化的影響，證實(shí)了冬蟲(chóng)夏草具有抗胰腺纖維化的作用。因此，冬蟲(chóng)夏草可作為活性成分用于制備抗胰腺纖維化的藥物，具有巨大的社會(huì)效益和研究?jī)r(jià)值。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
冬蟲(chóng)夏草在制備預(yù)防和/或治療膜腺纖維化的藥物中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，設(shè)及冬蟲(chóng)夏草的藥物用途，尤其設(shè)及其在制備預(yù)防和/或治 療膜腺纖維化的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 近年來(lái)慢性膜腺炎發(fā)病率日益增高。其主要病理學(xué)改變?yōu)槟は倮w維化，膜腺纖維 化主要是由于膜腺組織中^膠原為主的細(xì)胞外基質(zhì)（糾化曰。611111曰1'111曰化;[義，6〔1)合成與 沉積增加，降解減少，兩者失去動(dòng)態(tài)平衡所致。運(yùn)種沉積不僅由ECM合成增多引起，更大程度 上是由降解減少引起。其中膜腺星狀細(xì)胞(pancreatic stellate cell,PSC)的活化被公認(rèn) 為是膜腺纖維化發(fā)生的始動(dòng)環(huán)節(jié)，膜腺損傷后腺泡細(xì)胞的壞死修復(fù)過(guò)程可導(dǎo)致膜腺星狀細(xì) 胞的活化、增殖并分泌大量的細(xì)胞外基質(zhì)，最終導(dǎo)致膜腺纖維化，膜腺星狀細(xì)胞通過(guò)激活、 轉(zhuǎn)化，促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)的形成，進(jìn)而導(dǎo)致膜腺纖維化。轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-ei(TGF-m)是膜腺纖 維化發(fā)生、發(fā)展中最重要的細(xì)胞因子，是激活膜腺星狀細(xì)胞(PSCs)并促進(jìn)其表達(dá)ECM和分泌 基質(zhì)金屬蛋白酶(匪P-1)，金屬蛋白酶組織抑制劑（TIMP)關(guān)鍵因素。此外，急性膜腺炎時(shí)， R0S迅速增加，引起直接的膜腺組織損傷，加重病變。反復(fù)的急性膜腺炎發(fā)作可能因腺泡破 壞、氧化應(yīng)激而激活PSC，使細(xì)胞外基質(zhì)合成增加、降解減少，最終導(dǎo)致基質(zhì)沉積和纖維化發(fā) 生。目前尚缺乏治療膜腺纖維化的有效藥物。
[0003] 冬蟲(chóng)夏草是一種天然存在的稀有中藥材，富含了蟲(chóng)草多糖、蟲(chóng)草素、蟲(chóng)草酸、蟲(chóng)草 多膚、麥角醬醇等多種單體活性成分。天然冬蟲(chóng)夏草生長(zhǎng)條件苛刻，自然寄生率低，加上人 們的濫采，導(dǎo)致天然資源緊缺，價(jià)格昂貴。
[0004] 現(xiàn)代研究證明冬蟲(chóng)夏草W其調(diào)節(jié)陰陽(yáng)、肺腎雙補(bǔ)之特性，補(bǔ)而不峻、溫而不火之優(yōu) 勢(shì)，廣泛應(yīng)用于免疫、屯、血管、呼吸、泌尿生殖、消化、神經(jīng)系統(tǒng)疾病，備受關(guān)注。但尚未有文 獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)過(guò)其具有預(yù)防和治療膜腺纖維化的作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種冬蟲(chóng)夏草在制備預(yù)防和/或治療膜腺纖維化的藥物中 的應(yīng)用。
[0006] 進(jìn)一步地，所述藥物包括作為活性成分的冬蟲(chóng)夏草和一種或多種可藥用輔料。
[0007] 進(jìn)一步地，所述冬蟲(chóng)夏草選自天然冬蟲(chóng)夏草、冬蟲(chóng)夏草發(fā)酵菌絲體、W及天然冬蟲(chóng) 夏草和冬蟲(chóng)夏草發(fā)酵菌絲體的提取物。所述提取物選自水提取物、醇提取物、醋提取物、酸 提取物、氯仿提取物中的一種或幾種的組合，優(yōu)選天然冬蟲(chóng)夏草和冬蟲(chóng)夏草發(fā)酵菌絲體的 水提取物。
[000引進(jìn)一步地，所述冬蟲(chóng)草夏發(fā)酵菌絲體為冬蟲(chóng)夏草菌（Cordyceps sinensis (Berkeley)Sacc)中騙幅蛾擬青霉、中華被毛抱巧irsutela sinensis)、中華頭抱菌、騙幅 蛾被抱霉和/或中華束絲抱菌采用工業(yè)化發(fā)酵生產(chǎn)的冬蟲(chóng)夏草菌絲體。
[0009]進(jìn)一步地，所述發(fā)酵的培養(yǎng)基選自大米、小米、玉米、小麥、大麥、養(yǎng)麥、±豆汁、糊 精、葡萄糖、蛋白腺、酵母膏、教皮、蠶蛹粉、憐酸二氨鐘、憐酸氨二鐘、氯化鋼、氯化儀、氯化 儘、氯化鐘、氯化巧、硫酸儀、硫酸亞鐵、硫酸儘中的一種或幾種。
[0010] 進(jìn)一步地，所述可藥用輔料包括但不限于:填充劑如淀粉、薦糖、糊精、乳糖、可壓 性淀粉、微晶纖維素、山梨醇等;粘合劑如纖維素衍生物（甲基纖維素、乙基纖維素、徑丙纖 維素、徑丙甲纖維素、簇甲基纖維素鋼）、海藻酸鋼、明膠、聚乙締化咯燒酬等;濕潤(rùn)劑如水、 乙醇、甘油等;崩解劑如干淀粉、簇甲基淀粉鋼、徑丙甲纖維素、交聯(lián)聚維酬、泡騰崩解劑、瓊 月旨、碳酸巧、碳酸氨鋼等;吸收促進(jìn)劑如季錠化合物;表面活性劑如十六燒醇;吸附載體如高 嶺±和皂粘±;潤(rùn)滑劑如滑石粉、硬脂酸巧、硬脂酸儀和聚乙二醇等;注射溶劑如注射用水、 植物油、油酸乙醋、丙二醇、聚乙二醇、乙醇、甘油、苯甲醇等；緩沖劑如醋酸-醋酸鋼、構(gòu)祿 酸-構(gòu)祿酸鋼、酒石酸-酒石酸鋼、憐酸氨二鋼-憐酸二氨鋼、碳酸氨鋼-碳酸鋼等;抑菌劑如 苯甲醇、徑丙下醋/甲醋、苯酪、Ξ氯叔下醇等；局麻劑利多卡因、苯甲醇、Ξ氯叔下醇等;等 滲調(diào)節(jié)劑如氯化鋼、葡萄糖、甘油等;抗氧劑如亞硫酸鋼、亞硫酸氨鋼、焦亞硫酸鋼等;助懸 劑如明膠、甲基纖維素、果膠等;保護(hù)劑乳糖、薦糖、麥芽糖等;乳化劑如吐溫、司盤(pán)、泊洛沙 姆、十二烷基硫酸鋼、脂肪酸甘油醋;基質(zhì)如PEG6000、PEG4000、硬脂酸鋼、氨化植物油、蟲(chóng)蠟 等。另外還包括色素、香味劑、甜味劑、助溶劑、吸收促進(jìn)劑等。
[0011] 進(jìn)一步地，所述藥物中冬蟲(chóng)夏草的含量為0.1-99.9%重量百分比，優(yōu)選為1-95% 重量百分比、10-85 %重量百分比、15-70 %重量百分比、20-60 %重量百分比或25-50 %重量 百分比。
[0012] 進(jìn)一步地，所述藥物通過(guò)腸道或者非腸道途徑給藥。給藥制劑包括片劑、膠囊劑、 顆粒劑、注射劑、霜?jiǎng)?、軟膏劑、貼劑、噴霧劑、滴丸、混懸劑等。給藥途徑包括皮下、皮內(nèi)、動(dòng) 脈內(nèi)、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、滑液內(nèi)、胸骨內(nèi)、銷(xiāo)內(nèi)、病灶內(nèi)、煩內(nèi)注射或輸注，或者，日服、局 部、直腸、經(jīng)鼻、經(jīng)頰、陰道、舌下、皮內(nèi)、粘膜、氣管、尿道給藥，或者通過(guò)吸入氣霧或植入蓄 積或者針刺方式給藥。
[0013] 進(jìn)一步地，所述給藥制劑可W按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)生產(chǎn)方法制備，例如使冬蟲(chóng)夏 草與一種或多種輔料混合，然后將其制成所需的劑型。
[0014] 本發(fā)明通過(guò)實(shí)驗(yàn)考察了冬蟲(chóng)夏草對(duì)大鼠膜腺纖維化的影響，證實(shí)了冬蟲(chóng)夏草具有 抗膜腺纖維化的作用。因此，冬蟲(chóng)夏草可作為活性成分用于制備抗膜腺纖維化的藥物，具有 巨大的社會(huì)效益和研究?jī)r(jià)值。
【具體實(shí)施方式】
[0015] W下通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍不受具體實(shí) 施例的任何限制，而是由權(quán)利要求加 W限定。
[0016] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于通過(guò)設(shè)計(jì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)方法，研究冬蟲(chóng)夏草的抗膜腺 纖維化作用。采用兩種動(dòng)物模型：第一種，模型組及藥物組采用膜膽管中注入硝基苯 橫酸溶液(TNBS)的方法，制備慢性膜腺炎模型;第二種，模型組和藥物組采用腹腔注射二乙 基二硫代氨基甲酸鋼(DDC)(500mg/kg體重）建立氧化損傷導(dǎo)致的膜腺纖維化模型。觀察不 同劑量的冬蟲(chóng)夏草對(duì)該模型損傷的修復(fù)作用。
[0017]實(shí)施例1
[0018] 冬蟲(chóng)夏草菌(Cordyc邱S sinesis)中華被毛抱化irsutela sinensis)菌株經(jīng)液體 發(fā)酵培養(yǎng)所得菌絲體，干燥粉碎制得冬蟲(chóng)夏草發(fā)酵菌絲體粉末，備用。
[0019] 實(shí)施例2
[0020] 將天然冬蟲(chóng)夏草烘干，經(jīng)超微粉碎，制得冬蟲(chóng)夏草極細(xì)粉，備用。
[0021] 實(shí)施例3
[0022] 動(dòng)物選用Wistar大鼠，雄性，體重180-200g，分為對(duì)照組，模型組，給藥組(高、中、 低)。
[0023] 實(shí)施例1-2制得的粉末用0.5%簇甲基纖維素鋼溶液作為溶劑配制成Ξ個(gè)劑量的 混懸液:〇.75gAkg · d)、1.5gAkg · d)、3.0gAkg · d)，37°C預(yù)溫備用。
[0024] 造模方法:模型組及給藥組采用膜膽管中注入2%TNBS的方法，制備慢性膜腺炎模 型造模;空白對(duì)照組為正常大鼠。
[0025] 分組及給藥方法:大鼠隨機(jī)分為模型組，實(shí)施例1-2的粉末0.75g/化g · d)、1.5g/ 化g · d)、3.0gAkg · d)S個(gè)劑量組，另設(shè)空白對(duì)照組。造模后，給藥組大鼠于造模后第5周 開(kāi)始灌胃不同濃度冬蟲(chóng)夏草粉混懸液(〇.75gAkg · d)、1.5gAkg · d)、3.0gAkg · d))。空 白對(duì)照組、模型組均灌胃等量生理鹽水，各組大鼠均于造模后第8周處死。
[0026] 檢測(cè)指標(biāo)：
[0027] 1.膜腺組織學(xué)觀察:將Ξ組大鼠膜腺組織病理切片進(jìn)行纖維化評(píng)分。高倍鏡下進(jìn) 行形態(tài)學(xué)分析，觀察膜腺組織中腺泡細(xì)胞萎縮、小葉內(nèi)或小葉間纖維化W及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn) 等病理改變，膜腺纖維化的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)為0分:無(wú)上述病理改變；1分:上述損傷輕微且局限于 小葉內(nèi)（不超過(guò)50 % ); 2分:小葉內(nèi)有較廣泛的上述損傷(超過(guò)50 % ); 3分:上述損傷廣泛存 在于小葉間和小葉內(nèi)，或者小葉結(jié)構(gòu)破壞。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0028] 表1大鼠膜腺纖維化評(píng)分
[0029]
[0030] 與對(duì)照組比較，*P < 0.01;與對(duì)模型比較，咕< 0.01。
[0031] 結(jié)果顯示，對(duì)照組大鼠膜腺無(wú)明顯病理改變，而模型組大鼠的膜腺明顯萎縮，間質(zhì) 膠原纖維增生，腺泡萎縮，給藥組較模型組纖維化程度明顯減少。將Ξ組大鼠膜腺組織病理 切片進(jìn)行纖維化評(píng)分，發(fā)現(xiàn)模型組大鼠膜腺纖維化程度高于對(duì)照組，有顯著性差異。
[0032] 2.膜腺組織免疫組化檢查：W胞質(zhì)及核內(nèi)出現(xiàn)棟黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞，根據(jù)陽(yáng)性 細(xì)胞分布情況，每例切片隨機(jī)觀察3個(gè)不重疊的100倍視野，采用Imag-pro-plus圖像分析系 統(tǒng)計(jì)算TGF-β 1，MMP-1，TIMP-1陽(yáng)性表達(dá)部位染色面積與視野內(nèi)膜腺間質(zhì)總面積的比值，并 取平均值作為每個(gè)樣本的檢測(cè)值，然后通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行半定量分析。結(jié)果見(jiàn)表2。
[0033] 表2膜腺組織中TGF-化、MMP-1、TIMP-1的表達(dá)
[0034]
[0035] 與對(duì)照組比較，吁< 0.01;與對(duì)模型比較，咕< 0.01。
[0036] 結(jié)果顯示，與對(duì)照組比較，模型組TGF-β 1、TIΜP-1免疫組化表達(dá)明顯增強(qiáng)（P < 0.01);與模型組比較，給藥組TGF-βΚΤΙΜΡ-Ι免疫組化表達(dá)顯著減弱，有顯著性差異，給藥 前后ΜΜΡ-1表達(dá)無(wú)顯著變化。
[0037] 實(shí)施例4
[0038] 動(dòng)物選用Wistar大鼠，雄性，體重180-200g，分為對(duì)照組，模型組，給藥組(高、中、 低)。
[0039] 實(shí)施例1-2制得的粉末用0.5%簇甲基纖維素鋼溶液作為溶劑配制成Ξ個(gè)劑量的 混懸液:〇.75gAkg · d)、1.5gAkg · d)、3.0gAkg · d)，37°C預(yù)溫備用。
[0040] 造模方法:模型組和藥物組采用腹腔注射二乙基二硫代氨基甲酸鋼(孤C)(500mg/ kg體重），建立氧化損傷導(dǎo)致的膜腺纖維化模型。
[0041] 分組及給藥方法:大鼠隨機(jī)分為模型組，實(shí)施例1-2的粉末0.75g/化g · d)，1.5g/ 化g · d)3.0gAkg · d)S個(gè)劑量組，另設(shè)空白對(duì)照組;模型組和給藥組采用腹腔注射二乙基 二硫代氨基甲酸鋼(DDC)(500mg/kg體重)建立氧化損傷導(dǎo)致的膜腺纖維化模型，每周2次， 連續(xù)6周，對(duì)照組注射等量生理鹽水。
[0042] 檢測(cè)指標(biāo)：采用酶標(biāo)法和分光光度法測(cè)定大鼠膜腺組織中MDA、S0D、LDH及G細(xì)含 量，結(jié)果見(jiàn)表3-4。
[0043] 表3實(shí)施例1給藥組大鼠膜腺組織中SOD、MDA、GSH及LDH的含量
[0044]
[0045] 與對(duì)照組比較，*P < 0.01;與對(duì)模型比較，咕< 0.01。
[0046] 表4實(shí)施例2給藥組大鼠膜腺組織中SOD、MDA、GSH及LDH的含量
[0047]
[004引與對(duì)照組比較，吁<0.01;與對(duì)模型比較，咕<0.01。
[0049] 結(jié)果顯示，與正常組比較，模型組膜腺組織中SOD活力明顯降低、MDA含量明顯升 高、G細(xì)含量明顯降低、LD田舌力明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01);與模型組相比，各劑量 藥物治療組SOD活力升高、MDA含量降低、G細(xì)含量升高，LD巧舌力降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意 義(P<0.01)，且均W高劑量組效果最顯著(P<0.01)。
[0050] 實(shí)施例5冬蟲(chóng)夏草膠囊
[0051] 取冬蟲(chóng)夏草粉15g，加入淀粉150克，用PVP溶液制粒后，裝膠囊。
[0052] 實(shí)施例6冬蟲(chóng)夏草軟膠囊
[0053] 將冬蟲(chóng)夏草發(fā)酵菌絲體干燥粉碎后，稱(chēng)取5g與食用玉米油50g混合，充分?jǐn)垊蛑频?軟膠囊內(nèi)容物;稱(chēng)取明膠、甘油和水各適量(質(zhì)量比為明膠:甘油:水=1:0.5:1)制備囊材膠 液;采用旋轉(zhuǎn)模壓法，將內(nèi)容物和囊材膠液裝入自動(dòng)旋轉(zhuǎn)制囊機(jī)中，壓制得軟膠囊，適量液 狀石蠟作為潤(rùn)滑劑。
[0054] 實(shí)施例7冬蟲(chóng)夏草混懸液
[0055] 取冬蟲(chóng)夏草干燥細(xì)粉5g，用0.5%簇甲基纖維素鋼溶液作為溶劑配制成濃度為 20 %混懸液。
[0056] 實(shí)施例8冬蟲(chóng)夏草滴丸
[0057] 稱(chēng)取冬蟲(chóng)夏草發(fā)酵菌絲體干燥粉末200g，加入陽(yáng)G4000化g作為基質(zhì)，適量液體石 蠟為冷卻劑；藥液溫度50°C，滴速為每分鐘10滴，滴距4.0cm，冷卻柱長(zhǎng)25cm，滴口內(nèi)徑 2.0cm，冷卻劑溫度0°C (冰水?。?。
[005引最后應(yīng)說(shuō)明的是，W上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明， 盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，其依然可 W對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。 凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的 保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 冬蟲(chóng)夏草在制備預(yù)防和/或治療胰腺纖維化的藥物中的應(yīng)用。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物包括作為活性成分的冬蟲(chóng)夏草和 一種或多種可藥用輔料。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述冬蟲(chóng)夏草選自天然冬蟲(chóng)夏草、冬蟲(chóng)夏 草發(fā)酵菌絲體、以及天然冬蟲(chóng)夏草和冬蟲(chóng)夏草發(fā)酵菌絲體的提取物。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述提取物選自水提取物、醇提取物、酯提 取物、醚提取物、氯仿提取物中的一種或幾種的組合。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述冬蟲(chóng)草夏發(fā)酵菌絲體為冬蟲(chóng)夏草菌 (Cordyceps sinensis(Berkeley)Sacc)中蝙蝠蛾擬青霉、中華被毛抱（Hirsutela s inens is)、中華頭孢菌、蝙蝠蛾被孢霉和/或中華束絲孢菌發(fā)酵生產(chǎn)的冬蟲(chóng)夏草菌絲體。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述發(fā)酵的培養(yǎng)基選自大米、小米、玉米、 小麥、大麥、蕎麥、土豆汁、糊精、葡萄糖、蛋白胨、酵母膏、麩皮、蠶蛹粉、磷酸二氫鉀、磷酸氫 二鉀、氯化鈉、氯化鎂、氯化錳、氯化鉀、氯化鈣、硫酸鎂、硫酸亞鐵、硫酸錳中的一種或幾種。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物中冬蟲(chóng)夏草的含量為0.1-99.9% 重量百分比，優(yōu)選為1-95 %重量百分比、10-85 %重量百分比、15-70 %重量百分比、20-60 % 重量百分比或25-50 %重量百分比。
【文檔編號(hào)】A61P1/18GK105998089SQ201610519858
【公開(kāi)日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年7月5日
【發(fā)明人】王玉花, 王輝, 鞏俐英, 薛霞科, 巴得霞, 劉芙蓉
【申請(qǐng)人】青海珠峰冬蟲(chóng)夏草工程技術(shù)研究有限公司