秦艽及其提取物在制備治療和/或預(yù)防皮膚癬的藥物的用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了秦艽及其提取物在制備抗真菌的藥品、消毒用品或日化用品中的用途。本發(fā)明還提供了一種新的秦艽提取物及其制備方法。本發(fā)明秦艽及提取物可以抑制真菌，治療真菌引起的皮膚癬，為臨床提供了一種新的選擇。
【專利說明】
秦巧及其提取物在制備治療和/或預(yù)防皮膚癌的藥物的用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及秦巧及其提取物在制備治療和/或預(yù)防皮膚癖的藥物的用途，屬藥物 領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 秦巧為龍膽科（Gentianaceae)龍膽屬（Gentiana L.)秦巧組（Sect. Cruciata Gaudin)植物的干燥根，是我國常用的大宗藥材之一。秦巧組植物全世界約20種，《中國藥 典》（2010年版一部）收錄的秦巧藥材有秦巧（Gentiana macrophylla Pall.)、麻花秦巧 (Gentiana straminea Maxim.)、粗莖秦尤（Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.)或 小秦巧(Gentiana dahurica Fisch.)。另外，管花秦巧作為上述秦巧的近緣種，常作為地方 習(xí)用品種。在我國，秦巧已有2000多年的藥用歷史。中藥《神農(nóng)本草經(jīng)》記載："其味苦、平、無 毒。治寒熱邪氣，寒濕風(fēng)搏，肢節(jié)痛，下水，利小便"；藏藥《晶珠本草》記載："其味苦、平，具有 清熱利膽、舒筋止痛的功效，用于治療風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肺結(jié)核、低熱盜汗、黃痘型肝炎等癥。
[0003] 皮膚癖病是指由皮膚癖菌引起的表皮、毛發(fā)、甲板等組織的淺表性真菌感染，包括 手足癖、體股癖、頭癖、甲癖等。皮膚癖菌按菌落特征，顏色和大分生抱子的形態(tài)可分為:毛 癖菌屬（Trichophyton Malmsten)、小抱子菌屬（Micmsponwi Gruby)、表皮癖菌屬 (Ερ??ΙθΓηιοφ^?οη Sabouraud)。運(yùn)些真菌廣泛的存在于世界各地，主要存在于±壤里及人 和動物上。皮膚癖菌所致的淺部真菌病是皮膚科常見病，有較高的發(fā)病率和復(fù)發(fā)率，至少有 10-20%的世界人口可能感染運(yùn)些病原體。由皮膚癖菌引起的手足癖可占皮膚科口診病例 的20% W上。紅色毛癖菌則是臨床最常見的親人性皮膚癖菌，約80%的體股癖和72%的手 足癖由該菌引起，多為慢性感染，病程遷延，復(fù)發(fā)率高。須癖毛癖菌的感染在體股癖、手足癖 及甲癖的致病菌中僅次于紅色毛癖菌，居第二位。目前市場上治療皮膚癖病的產(chǎn)品主要有 鹽酸特比糞芬、酬康挫、硝酸咪康挫、硝酸益康挫等，多為化學(xué)合成的抗生素類藥物。關(guān)于抗 生素類藥物刺激性較大、或毒副作用較大、或易產(chǎn)生耐藥性等缺點(diǎn)一直備受關(guān)注。
[0004] 因此，研制天然來源的治療皮膚癖病的藥物具有重要的現(xiàn)實(shí)意義及開發(fā)潛力。
[0005] 未見秦巧及其提取物抗皮膚癖相關(guān)致病菌或者治療皮膚癖的相關(guān)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案是提供了秦巧及其提取物在制備抗真菌方面的新用途。
[0007] 本發(fā)明首先提供了秦巧及其提取物在制備抗真菌的藥品、消毒用品或日化用品中 的用途。
[0008] 藥品是指用于預(yù)防、治療、診斷人的疾病，有目的地調(diào)節(jié)人的生理機(jī)能并規(guī)定有適 應(yīng)癥或者功能主治、用法和用量的物質(zhì)
[0009] 消毒用品包括消毒劑、消毒器械(含生物指示物、化學(xué)指示物和滅菌物品包裝物）、 衛(wèi)生用品和一次性使用醫(yī)療用品。
[0010] 日化用品是指人們?nèi)粘Ｉ钪惺褂玫目萍蓟瘜W(xué)制品，包括洗發(fā)水、沐浴露、化妝 品、洗衣粉等。
[0011] 優(yōu)選地，所述的秦巧是龍膽科植物秦巧Gentiana macrophylla化11.、麻花秦巧 Gentiana straminea Maxim.、粗莖秦尤 Gentiana crassicaulis Duthie ex Burk.、小秦 尤Gentiana dahurica Fisch.或管花秦尤Gentiana siphonantha Maxim, ex Kusnez .的干 燥根。
[0012] 優(yōu)選地，所述的秦巧的提取物為乙醇提取物。
[0013] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述的秦巧的乙醇提取物是由下述方法制備：取秦巧，用50%- 80%乙醇提取，即可。
[0014] 優(yōu)選地，所述秦巧的乙醇提取物是由下述方法制備：
[0015] 1)取秦巧，粉碎，得到秦巧粉；
[0016] 2)將秦巧粉和50-80%乙醇溶液混勻，提取溫度為45-60°C，料液比為1:10~1:30， 提取時(shí)間為45~90min，提取3次，得到秦巧提取液；
[0017] 3)將秦巧提取液減壓濃縮，溫度45-60°C，真空度-0.05~-0.09Mpa，得到秦巧提取 浸膏。
[0018] 4)將秦巧提取浸膏進(jìn)行干燥得到秦巧提取物。
[0 019 ]其中，所述抗真菌的藥品、消毒用品或日化用品是抗犬小抱子菌(Μ i C r 0 S P 0 r U m canis)、須癖毛癖菌（Trichophyton mentagrophyte)或紅色毛癖菌（Trichophyton rubr皿)的藥品、消毒用品或日化用品。
[0020] 其中，所述抗真菌的藥品、消毒用品或日化用品是治療和/或預(yù)防皮膚癖的藥品、 消毒用品或日化用品。
[0021] 其中，所述治療和/或預(yù)防皮膚癖的藥品、消毒用品或日化用品是治療和/或預(yù)防 犬小抱子菌(Microsporum canis)、須癖毛癖菌（Trichophyton η?θη?3κ；Γ€φ1?5^?θ)或紅色毛 癖菌(Trichophyton rubr皿）引起的皮膚癖的藥品、消毒用品或日化用品。
[0022] 本發(fā)明還提供了一種秦巧提取物，步驟如下:它按照如下方法制備：
[0023] 1)取秦巧，粉碎，得到秦巧粉；
[0024] 2)將秦巧粉和50-80%乙醇溶液混勻，提取溫度為45-60°C，料液比為1:10~1:30， 提取時(shí)間為45~90min，提取3次，得到秦巧提取液；
[00巧]3)將秦巧提取液減壓濃縮，溫度45-60°C，真空度-0.05~-0.09Mpa，得到秦巧提取 浸膏。
[0026] 4)將秦巧提取浸膏進(jìn)行干燥得到秦巧提取物。
[0027] 優(yōu)選地，它按照如下方法制備：
[00巧]1)取龍膽科植物管花秦巧Gentiana siphonantha Maxim.ex Kusnez.的干燥根， 粉碎，得到秦巧粉；
[0029] 2)將秦巧粉和50%乙醇溶液混合均勻，提取溫度為45°C，料液比為1: 30，提取時(shí)間 為45min，提取3次，得到秦巧提取液；
[0030] 3)將秦巧提取液減壓濃縮，溫度45°C，真空度-0.09Mpa，得到秦巧提取浸膏；
[0031] 4)將秦巧提取浸膏進(jìn)行干燥，得到秦巧提取物。
[0032] 本發(fā)明還提供了一種制備前述秦巧提取物的方法，步驟如下：
[0033] 1)取秦巧，粉碎，得到秦巧粉；
[0034] 2)將秦巧粉和50-80%乙醇溶液混勻，提取溫度為45-60°C，料液比為1:10~1:30， 提取時(shí)間為45~90min，提取3次，得到秦巧提取液；
[00巧]3)將秦巧提取液減壓濃縮，溫度45-60°C，真空度-0.05~-0.09Mpa，得到秦巧提取 浸膏。
[0036] 4)將秦巧提取浸膏進(jìn)行干燥，得到秦巧提取物。
[0037] 本發(fā)明秦巧及提取物可W抑制犬小抱子菌(Microsporum canis)、須癖毛癖菌 (Trichophyton ment曰grophyte)或紅色毛癖菌（Trichophyton rubrum)等真菌，治療由犬 小抱子菌(Microsporum canis)、須癖毛癖菌（Trichophyton η?θη?3κ；Γ€φ1?5^?θ)或紅色毛癖 菌(Trichophyton rubrum)引起的皮膚癖，應(yīng)用前景良好。
[0038] 顯然，根據(jù)本發(fā)明的上述內(nèi)容，按照本領(lǐng)域的普通技術(shù)知識和慣用手段，在不脫離 本發(fā)明上述基本技術(shù)思想前提下，還可W做出其它多種形式的修改、替換或變更。
[0039] W下通過實(shí)施例形式的【具體實(shí)施方式】，對本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說 明。但不應(yīng)將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于W下的實(shí)例。凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容 所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。
[0040]
【附圖說明】
[0041] 圖1為本發(fā)明不同濃度秦巧提取物對須癖毛癖菌抑制作用的掃描電鏡圖；
[0042] 圖2為本發(fā)明不同濃度秦巧提取物對混合菌懸液造模后豚鼠治愈后的皮損表觀 圖；
[0043] 圖3豚鼠表皮皮損得分評價(jià)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0044] 實(shí)施例1本發(fā)明藥品的制備
[0045] 1、秦巧提取物的制備：
[0046] 1)取秦巧（管花秦巧Gentiana si地onantha Maxim, ex Kusnez .的干燥根）粉碎， 得到秦巧粉。
[0047] 2)將秦巧粉和提取溶劑50%乙醇溶液混合均勻，提取溫度為45°C，料液比為1:30， 提取時(shí)間為45min，提取3次，得到秦巧提取液。
[004引3)將秦巧提取液減壓濃縮，溫度45°C，真空度-0.09Mpa，得到秦巧提取浸膏。
[0049] 4)將秦巧提取浸膏進(jìn)行冷凍干燥，溫度-80°C，時(shí)間2地，得到秦巧提取物。
[0050] 2、處方:按例1所述的乙醇提取所得秦巧提取物lOg，甘油50g，脫水山梨醇硬脂酸 醋（司盤-60)10g，凡：t林250邑。
[0051] 3、制法:取提取物與甘油置水浴上加熱至溶解，加入脫水山梨醇硬脂酸醋（司盤- 60)攬勻，最后加入凡±林，攬勻，即得軟膏劑。
[0052] 4、性狀:本品為黃褐色軟膏。
[0053] 5、用法與用量:取適量涂于患處或用紗布敷于患處，一日3-5次。
[0054] 實(shí)施例2本發(fā)明藥品的制備
[0055] 1、秦巧提取物的制備：
[0化6]同實(shí)施例1。
[0057] 2、處方:按例1所述的乙醇提取所得秦巧提取物lOg，乙醇490ml。
[0058] 3、制法:取提取物，溶于適量乙醇中，如不透明可用干燥濾器或?yàn)V材過濾，再添加 乙醇適量至處方配比量，攬勻，即得醋劑。
[0059] 4、性狀:本品為無色或淡棟色澄明液體，有特殊氣味，并有清涼感。
[0060] 5、用法與用量:外用，局部涂搔，一日3次。
[0061 ]實(shí)施例3本發(fā)明日化用品(化妝品）的制備
[0062] 1、秦巧提取物的制備
[0063] 1)取秦巧（秦巧Gentiana macrophylla Pall.的干燥根），粉碎，得到秦巧粉。
[0064] 2)將秦巧和提取溶劑80%乙醇溶液混合均勻，提取溫度為60°C，料液比為1:10,提 取時(shí)間為90min，提取3次，得到秦巧提取液。
[0065] 3)將秦巧提取液減壓濃縮，溫度60°C，真空度-0.05Mpa，得到秦巧提取浸膏。
[0066] 4)將秦巧提取浸膏進(jìn)行冷凍干燥，溫度-20°C，時(shí)間2地，得到秦巧提取物。
[0067] 2、制備
[0068] 取秦巧提取物，與化妝品領(lǐng)域允許的輔料混合，即得化妝品。
[0069] 實(shí)施例4本發(fā)明消毒用品（消毒劑)的制備
[0070] 1、粗莖秦巧提取物的制備
[0071 ] 1)取粗莖秦巧（粗莖秦巧Gentiana erassicaulis Duthie ex Burk.的干燥根）， 粉碎，得到粗莖秦巧。
[0072] 2)將粗莖秦巧和提取溶劑60%乙醇溶液混合均勻，提取溫度為55°C，料液比為1: 20，提取時(shí)間為60min，提取3次，得到粗莖秦巧提取液。
[0073] 3)將粗莖秦巧提取液減壓濃縮，溫度50°C，真空度-0.07Mpa，得到粗莖秦巧提取浸 膏。
[0074] 4)將粗莖秦巧提取浸膏進(jìn)行冷凍干燥，溫度-50°C，時(shí)間24h，得到粗莖秦巧提取 物。
[00巧]2、制備
[0076] 取粗莖秦巧提取物，與消毒劑領(lǐng)域允許的輔料混合，即得消毒劑。
[0077] W下用實(shí)驗(yàn)例的方式來說明本發(fā)明的有益效果：
[0078] 實(shí)驗(yàn)例1秦巧抑制真菌的作用 [00巧]1材料與儀器
[0080] 1.1實(shí)驗(yàn)菌株
[0081 ] 犬小抱子菌(Microsporum canis 00287)，來自于由北京大學(xué)第一附屬醫(yī)院皮膚 科真菌室；
[0082] 須癖毛癖菌(Trichophyton mentagrophyte 60050)，來自于北京大學(xué)第一附屬醫(yī) 院皮膚科真菌室；
[0083] 紅色毛癖菌（Trichophyton rubrum ATCC10218)，購于杭州市第Ξ人民醫(yī)院皮膚 科。
[0084] 1.2藥物與試劑
[00化]秦巧（管花秦巧Gentiana siphonantha Maxim, ex Kusnez .的干燥根），2013年8 月，采于青海省口源縣青石嘴鎮(zhèn)。
[0086] 秦巧提取物的制備：
[0087] 1)將秦巧粉碎，得到秦巧粉。
[0088] 2)將秦巧粉和提取溶劑50 %乙醇溶液混合均勻，提取溫度為45 °C，料液比為1: 30，提取時(shí)間為45min，提取3次，得到秦巧提取液。
[0089] 3)將秦巧提取液減壓濃縮，溫度45°C，真空度-0.09Mpa，得到秦巧提取浸膏。
[0090] 4)將秦巧提取浸膏進(jìn)行冷凍干燥，溫度-80°C，時(shí)間2地，得到秦巧提取物。
[0091 ] 1.3主要材料試劑與儀器
[0092] 表1.實(shí)驗(yàn)中所需材料與試劑
[0093]
[0096] 2、實(shí)驗(yàn)方法
[0097] 2.1最低抑菌濃度MIC值的測定
[0098] 準(zhǔn)確稱取秦巧提取物，用無菌水將其溶解制成儲備液。
[0099] 取無菌試管，將儲備液用RPMI-1640培養(yǎng)基(Gibco公司）連續(xù)倍比稀釋至2倍終濃 度（20yg/mL)。
[0100] 根據(jù)美國臨床和實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會化SI推薦的《M38-A實(shí)驗(yàn)方案，將犬小抱子菌 (Microsporum canis)、須癖毛癖菌（Trichophyton mentagrophyte)或紅色毛癖菌 (Tri chophyton rubrum)分別置于SDA培養(yǎng)基上，于28 °C恒溫培養(yǎng)(MJX-250B-Z電熱恒溫培 養(yǎng)箱，上海君犧科學(xué)儀器有限公司）14天后，用無菌鹽水制備含有犬小抱子菌、須癖毛癖菌 或紅色毛癖菌的菌絲及抱子的菌懸液。分別取1(Κ)化終濃度的麻花巧提取物的稀釋液，由高 濃度到低濃度分別加入到無菌96孔細(xì)胞培養(yǎng)板的第巧L至第10孔中，并分別加入10化L菌懸 液，使每一濃度的受試樣稀釋液和菌懸液分別被1:1稀釋到終濃度。第11孔作為生長對照孔 僅加菌懸液10化L和培養(yǎng)基l(K)yL。第12孔作為空白對照孔僅加培養(yǎng)基2(K)yL。將接種后的細(xì) 胞培養(yǎng)板置于28°C恒溫培養(yǎng)，培養(yǎng)14天后，根據(jù)MIC值的判定標(biāo)準(zhǔn)(0:肉眼清晰；1:略模糊， 80%受抑制;2:濁度顯著降低，50%受抑制;3:濁度輕度降低;4:濁度未降低)五個(gè)判定點(diǎn)中 的1或2作為判定終點(diǎn)，在不攬動的情況下與對照孔對比。
[0101] 2.2抑菌圈試驗(yàn)
[0102] 用接種環(huán)挑取各試管斜面的犬小抱子菌、須癖毛癖菌或紅色毛癖菌種于無菌水 中，用手振蕩數(shù)分鐘使抱子分散，過濾后制成混合抱子懸液。用無菌吸管向各培養(yǎng)皿中注入 一定濃度的混合抱子懸浮液0.5mL。向各培養(yǎng)皿內(nèi)注入15ml~20ml的烙化狀瓊脂培養(yǎng)基(約 45Γ)，將菌液與培養(yǎng)基混合均勻，待其冷卻。用綴子將圓片濾紙?jiān)诓煌瑵舛鹊穆榛ㄇ商崛?物中浸潰片刻，取出置于帶菌培養(yǎng)基平板的中央，蓋上蓋子。置適宜溫度下，培養(yǎng)2~3d，觀 察濾紙片圓片周圍抑菌圈的有無及大小。
[0103] 2.3SEM電鏡觀察
[0104] 參照N(XLS推薦的M38-A方案，將10化1藥液分別由高濃度到低濃度加人無菌的96 孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，用RPMI-1640培養(yǎng)基連續(xù)倍比稀釋至2倍終濃度(2化g/mU ;第5孔為生長 對照孔僅加菌懸液和RPMI-1640培養(yǎng)基，不加藥物；第6孔為空白對照孔(RPMI-1 640培養(yǎng) 基）d28°C解育3d后挑取各孔菌落迅速進(jìn)行電鏡樣品制備。將各孔菌絲調(diào)出，分別置于無菌 的1.5ml離屯、管中，4 °C冰箱中W 2.5 %戊二醒固定過夜;PBS溶液洗3次，每次20min;
[0105] 30 % -50 % -70 % -85 % -90 % -100 % 系列乙醇各脫水15min，100 % 乙醇脫水3次； 25%-50%-75%-100%叔下醇梯度置換15111111，100%叔下醇置換3。冷凍干燥，真空鍛膜，掃 描電鏡觀察。
[0106] 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0107] 3.1最低抑菌濃度MIC值的測定
[0108] 結(jié)果顯示，秦巧提取物對須癖毛癖菌、犬小抱子菌和紅色毛癖菌的最低抑菌濃度 MIC的范圍值為32-6化g/mL，陽性對照組鹽酸特比糞芬(TBF)的MIC范圍值在0.5-1.化g/ml， 抑菌效果能達(dá)到陽性對照物鹽酸特比糞芬的1/50左右，表現(xiàn)出較強(qiáng)的抑制皮膚癖菌的效 果。
[0109] 3.2抑菌圈試驗(yàn)
[0110] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表3所示：
[0111] 表3.秦巧提取物對巧巾菌株體外抑菌活性(測量抑菌圈大小cm)
[0112]
[0113] 抑菌圈結(jié)果顯示，秦巧提取物對于運(yùn)Ξ種菌株都具有抑菌性，其中在lOOmg/ml濃 度，對紅色毛癖菌顯現(xiàn)出抑菌性。在200mg/ml~400mg/ml時(shí)，對巧中菌株都有抑菌性，其中對 須癖毛癖菌的抑制性最強(qiáng)，抑菌圈大小在9.5~12.22cm左右。
[0114] 3.3SEM電鏡觀察
[0115] 電鏡觀察結(jié)果顯示，2化g/ml秦巧提取物作用后，須癖毛癖菌的菌絲形態(tài)基本 正常，菌絲表面有輕微糖感，不光滑。4化g/ml濃度作用后，須癖毛癖菌菌絲形態(tài)基本正常， 多數(shù)菌絲出現(xiàn)表面塌陷;8化g/ml濃度作用后，菌絲形態(tài)明顯變化，粗細(xì)不一，縮窄處菌絲干 痕;160μg/ml濃度作用后，菌絲普遍出現(xiàn)明顯變形，粗細(xì)不一，W菌絲干痕為主。
[0116]實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，本發(fā)明秦巧及其提取物可W有效抑制犬小抱子菌(Microsporum canis)、須癖毛癖菌（Trichophyton mentagrophyte)或紅色毛癖菌（Trichophyton r ubr皿)Ξ種真菌的生長，抑制作用強(qiáng)。
[0117]實(shí)驗(yàn)例2秦巧治療和預(yù)防皮膚癖的作用 [011引1材料與儀器
[0119] 1.1實(shí)驗(yàn)菌株
[0120] 犬小抱子菌(Microsporum canis 00287)，來自于由北京大學(xué)第一附屬醫(yī)院皮膚 科真菌室；
[0121 ] 須癖毛癖菌(Trichophyton mentagrophyte 60050)，來自于北京大學(xué)第一附屬醫(yī) 院皮膚科真菌室；
[0122] 紅色毛癖菌（Trichophyton rubrum ATCC10218)，購于杭州市第Ξ人民醫(yī)院皮膚 科。
[0123] 1.2藥物與試劑
[0124] 秦巧（管花秦巧Gentiana si地onantha Maxim, ex Kusnez .的干燥根），2013年8月 采于青海省口源縣青石嘴鎮(zhèn)。
[0125] 秦巧提取的制備：
[0126] 1)將秦巧地下部分干燥，粉碎，得到秦巧粉。
[0127] 2)將秦巧粉和提取溶劑50%乙醇溶液混合均勻，提取溫度為45°C，料液比為1:30， 提取時(shí)間為45min，提取3次，得到秦巧提取液。
[01%] 3)將秦巧提取液減壓濃縮，溫度45°C，真空度-0.09Mpa，得到秦巧提取浸膏。
[0129] 4)將秦巧提取浸膏進(jìn)行冷凍干燥，溫度-80°C，時(shí)間2地，得到秦巧提取物。
[0130] 1.3主要試劑與儀器
[0131] 試劑與材料:PC/1%TBF-鹽酸特比糞芬(TBF，X0144,諾華制藥）；簇甲基纖維素鋼 (CMC，陽G-3350，Sigma);無水乙醇（山東禹王實(shí)業(yè)有限公司化工分公司）；80目砂紙;一次性 注射器。
[0132] 儀器：超凈工作臺（SW-CJ-1D，蘇州凈化儀器生產(chǎn)有限公司）；電熱恒溫培養(yǎng)箱 (MJX-150B-Z，上海博訊實(shí)業(yè)有限公司）；不誘鋼壓力蒸汽滅菌鍋(BXM-30R，上海博訊實(shí)業(yè)有 限公司）；顯微鏡（DM500，Leica);移液槍（Dragonlab-TopPette 1，上海勝科儀器有限公 司）；推毛器(PW228 Jovos/奔騰）。
[0133] 2、實(shí)驗(yàn)方法
[0134] 犬小抱子菌、須癖毛癖菌、紅色毛癖菌活化后分別接種于SDA培養(yǎng)基，30°C培養(yǎng)7 天，無菌生理鹽水洗脫后充分震蕩混勻，調(diào)整巧巾菌株混合菌懸液濃度為1.0 X 108CF U/mL。 腹腔注射麻醉劑，豚鼠背部雙側(cè)分別剪毛后脫毛，各形成約2.5 X 2.5cm的無毛區(qū)，用無菌砂 紙?jiān)跓o毛區(qū)打磨至點(diǎn)狀滲血后，均勻涂抹菌懸液l(K)yL。在接種菌液第3天，將造模成功的25 只豚鼠分別編號，按隨機(jī)數(shù)字表法分為5組（陰性對照組/5%乙醇溶劑組/10%秦巧提取物/ 30%秦巧提取物/陽性對照組1%TBF)，每組5只。每天由專人定時(shí)涂藥1次，每次1(Κ)化連續(xù) 14天。
[0135] 每天由同一實(shí)驗(yàn)者定時(shí)觀察紅斑、丘疹、鱗屑情況，記錄每只豚鼠皮損評分。標(biāo)準(zhǔn) 為:4分:皮損紅腫，皮膚增厚、皮屑致密，布滿整個(gè)皮損部位;3分:皮損紅腫，皮屑間有點(diǎn)狀 的正常皮膚，正常皮膚累計(jì)小于1/4;2分:皮損微紅、不腫，皮屑間有線狀正常皮膚，正常皮 膚累計(jì)小于1/2; 1分:皮損不紅、不腫，有少許皮屑，1/2W上正常皮膚;0分:皮損不紅、不腫， 基本為正常皮膚。
[0136] 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0137] 結(jié)果如圖3所示：
[0138] 陰性對照組(NC)與5%乙醇組之間無明顯差異，即溶劑組對患病豚鼠無治愈作用 的影響。
[0139] NC與陽性對照組(PC/1%TBF)、10%秦巧提取物和30%秦巧提取物之間都具有極 顯著差異。
[0140] PC與5 %乙醇之間具有及顯著差異，而10 %秦巧提取物和30 %秦巧提取物與PC之 間不具有差異性。
[0141] 5%乙醇與10%秦巧提取物和30%秦巧提取物之間具有極顯著差異，而10%秦巧 提取物與30%秦巧提取物之間只具有顯著差異。
[0142] W上可知，秦巧提取物的治愈效果具有劑量依賴性。秦巧提取物具有治愈皮膚癖 的功能的。
[0143] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明，本發(fā)明秦巧及其提取物可W有效預(yù)防和治療犬小抱子菌 (Microsporum canis)、須癖毛癖菌（Trichophyton mentagrophyte)或紅色毛癖菌 (Trichophyton rubrum)等真菌引起的皮膚癖。
[0144] 綜上，本發(fā)明秦巧及提取物抗真菌、W及預(yù)防和/或治療皮膚癖的作用，可W制備 成為抗真菌的藥品、消毒用品或日化用品，應(yīng)用前景良好。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 秦艽及其提取物在制備抗真菌的藥品、消毒用品或日化用品中的用途。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用途，其特征在于:所述的秦充是龍膽科植物秦充Gent iana macrophy 1 la Pal 1 ·、麻花秦充Gent iana straminea Maxim ·、粗莖秦充Gent iana crassicaulis Duthie ex Burk.、小秦充Gentiana dahurica Fisch.或管花秦充Gentiana siphonantha Maxim.ex Kusnez.的干燥根。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的用途，其特征在于:所述的秦艽的提取物為乙醇提取物。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于:所述的秦艽的乙醇提取物是由下述方法制 備:取秦艽，用50%-80%乙醇提取，即可。 優(yōu)選地，所述秦艽的乙醇提取物是由下述方法制備： 1) 取秦艽，粉碎，得到秦艽粉； 2) 將秦艽粉和50-80 %乙醇溶液混勻，提取溫度為45-60°C，料液比為1:10~1: 30,提取 時(shí)間為45~90min，提取3次，得到秦艽提取液； 3) 將秦艽提取液減壓濃縮，溫度45-60°C，真空度-0.05~-0.09Mpa，得到秦艽提取浸 膏。 4) 將秦艽提取浸膏進(jìn)行干燥，得到秦艽提取物。5. 根據(jù)權(quán)利要求1~4任意一項(xiàng)所述的用途，其特征在于:所述抗真菌的藥品、消毒用品 或日化用品是抗犬小孢子菌（Microsporum canis)、須癬毛癬菌（Trichophyton mentagrophyte)或紅色毛癬菌（Trichophyton rubrum)的藥品、消毒用品或日化用品。6. 根據(jù)權(quán)利要求1~4所述的的用途，其特征在于:所述抗真菌的藥品、消毒用品或日化 用品是治療和/或預(yù)防皮膚癬的藥品、消毒用品或日化用品。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的的用途，其特征在于:所述治療和/或預(yù)防皮膚癬的藥品、消毒 用品或日化用品是治療和/或預(yù)防犬小孢子菌（Microsporum canis)、須癬毛癬菌 (Trichophyton mentagrophyte)或紅色毛癬菌（Trichophyton rubrum)引起的皮膚癬的藥 品、消毒用品或日化用品。8. -種秦艽提取物，其特征在于:它按照如下方法制備： 1) 取秦艽，粉碎，得到秦艽粉； 2) 將秦艽粉和50-80 %乙醇溶液混勻，提取溫度為45-60°C，料液比為1:10~1: 30,提取 時(shí)間為45~90min，提取3次，得到秦艽提取液； 3) 將秦艽提取液減壓濃縮，溫度45-60°C，真空度-0.05~-0.09Mpa，得到秦艽提取浸 膏。 4) 將秦艽提取浸膏進(jìn)行干燥，得到秦艽提取物。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的提取物，其特征在于:它按照如下方法制備： 1) 取龍膽科植物管花秦充Gentiana siphonantha Maxim.ex Kusnez.的干燥根，粉碎， 得到秦充粉； 2) 將秦艽粉和50 %乙醇溶液混合均勻，提取溫度為45°C，料液比為1: 30，提取時(shí)間為 45min，提取3次，得到秦艽提取液； 3) 將秦艽提取液減壓濃縮，溫度45 °C，真空度-0.09Mpa，得到秦艽提取浸膏； 4) 將秦艽提取浸膏進(jìn)行干燥，得到秦艽提取物。10. -種制備權(quán)利要求8或9所述秦充提取物的方法，其特征在于:步驟如下： 1) 取秦艽，粉碎，得到秦艽粉； 2) 將秦艽粉和50-80 %乙醇溶液混勻，提取溫度為45-60°C，料液比為1:10~1: 30,提取 時(shí)間為45~90min，提取3次，得到秦艽提取液； 3) 將秦艽提取液減壓濃縮，溫度45-60°C，真空度-0.05~-0.09Mpa，得到秦艽提取浸 膏。 4) 將秦艽提取浸膏進(jìn)行干燥，得到秦艽提取物。
【文檔編號】A01P3/00GK105998171SQ201610536551
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年7月8日
【發(fā)明人】王小艷, 周文娜, 王洪倫, 徐恒
【申請人】中國科學(xué)院西北高原生物研究所, 中國科學(xué)院西北高原生物研究所湖州高原生物資源產(chǎn)業(yè)化創(chuàng)新中心