馬甲子或其提取物在制備治療痤瘡的藥物中的用圖
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥領域，涉及馬甲子或其提取物的新用途，具體是馬甲子或其提取物在制備治療痤瘡的藥物中的用途。外用馬甲子及其提取物，可有效改善痤瘡癥狀及組織病理，效果均優(yōu)于臨床常用對照藥物，說明外用馬甲子及其提取物治療痤瘡在療效上優(yōu)于現(xiàn)有常用藥物。
【專利說明】
馬甲子或其提取物在制備治療瘦瘡的藥物中的用途
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領域，設及馬甲子或其提取物的新用途，具體是馬甲子或其提取 物在制備治療瘦瘡的藥物中的用途。
【背景技術】
[0002] 馬甲子（Paliurus ramosissimusiXour. )Poi;r)為落葉灌木，是一種常見藥用植 物，據(jù)報道枝葉根花果均藥用。性味苦、平，無毒。能除寒活血，發(fā)表解熱，消腫，治跌打損傷 及屯、腹疼痛。但尚未見馬甲子及其提取物可用于治療瘦瘡的報道。
[0003] 瘦瘡是毛囊皮脂腺單位的一種慢性炎癥性皮膚病，主要好發(fā)于青少年，對青少年 的屯、理和社交影響很大，臨床表現(xiàn)W好發(fā)于面部的粉刺、丘疹、脈瘤、結節(jié)等多形性皮損為 特點。瘦瘡的發(fā)生主要與皮脂分泌過多、毛囊皮脂腺導管堵塞、細菌感染和炎癥反應等因素 密切相關。進入青春期后人體內雄激素特別是睪酬的水平迅速升高，促進皮脂腺發(fā)育并產(chǎn) 生大量皮脂。同時毛囊皮脂腺導管的角化異常造成導管堵塞，皮脂排出障礙，形成角質栓即 微粉刺。毛囊中多種微生物尤其是瘦瘡丙酸桿菌大量繁殖，瘦瘡丙酸桿菌產(chǎn)生的脂酶分解 皮脂生成游離脂肪酸，同時趨化炎癥細胞和介質，最終誘導并加重炎癥反應。皮損好發(fā)于面 部及上胸背部。瘦瘡的非炎癥性皮損表現(xiàn)為開放性和閉合性粉刺。閉合性粉刺(又稱白頭） 的典型皮損是約1毫米大小的膚色丘疹，無明顯毛囊開口。開放性粉刺(又稱黑頭)表現(xiàn)為圓 頂狀丘疹伴顯著擴張的毛囊開口。粉刺進一步發(fā)展會演變成各種炎癥性皮損，表現(xiàn)為炎性 丘疹、脈瘤、結節(jié)和囊腫。炎性丘疹呈紅色，直徑1~5毫米不等;脈瘤大小一致，其中充滿了 白色脈液;結節(jié)直徑大于5毫米，觸之有硬結和疼痛感;囊腫的位置更深，充滿了脈液和血液 的混合物。運些皮損還可融合形成大的炎性斑塊和竇道等。炎癥性皮損消退后常常遺留色 素沉著、持久性紅斑、凹陷性或肥厚性癒痕。臨床上根據(jù)瘦瘡皮損性質和嚴重程度將瘦瘡分 為3度、4級：1級唯度）：僅有粉刺;2級（中度）：除粉刺外，還有一些炎性丘疹;3級（中度）：除 粉刺外，還有較多的炎性丘疹或脈瘤;4級(重度）：除有粉刺、炎性丘疹及脈瘤外，還有結節(jié)、 囊腫或癒痕。瘦瘡治療的局部外用藥物主要包括維A酸類(維A酸乳膏、阿達帕林凝膠、他扎 羅汀凝膠）、過氧化苯甲酯、抗生素類(克林霉素、紅霉素、氯霉素等）、壬二酸、硫橫洗劑等。 運些藥物臨床有效，但維A酸等本身有一定毒副作用，而抗生素類對部分病例并無療效，此 夕h運些藥物治療后的復發(fā)率也較高。因此，尋求安全有效的藥物仍為研究重點。
[0004] 本發(fā)明的發(fā)明人在研究過程中發(fā)現(xiàn)馬甲子及其提取物具有良好的治療瘦瘡作用。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明提供的馬甲子及其提取物的新用途為馬甲子或其提取物在制備治療瘦瘡 的藥物中的應用。具體的，所述藥物為外用藥物。
[0006] 應用時，馬甲子采用馬甲子全株植物或其中任一部位的鮮品或干品；其中，藥用部 位可為根、莖、葉、花、果任一部位或其混合。最優(yōu)選的部位為葉。
[0007] 鑒于藥材的采集期和保存便利性，為了便于臨床用藥，可W馬甲子全株植物或其 中任一部位的鮮品或干品為原料藥，粉碎后直接制備成適宜的制劑應用，也可w制成提取 物后制備成適宜的制劑應用。具體的，所述馬甲子為鮮品或干品的粉碎品或提取物，粉碎品 W馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥，采用粉碎機或其他器械粉碎制 得;提取物W馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥，采用常規(guī)提取方法制 備而得。
[0008] 應用時，馬甲子提取物是W馬甲子全株植物或其中任一部位為原料藥，采用常規(guī) 提取方法制備而得。本發(fā)明所得馬甲子提取物主要成分包括黃酬類、祗類、生物堿類、香豆 素類;進一步還包括上述黃酬、祗、生物堿、香豆素的巧及其單體成分;還包括多糖類和纖維 素。
[0009] 本發(fā)明馬甲子的粉碎品的制備方法如下：
[0010] A、W馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥；
[00川 B、粉碎，過篩，即得。
[0012] 所述粉碎包括粉碎機或其他器械粉碎。
[0013] 采用上述方法制備的粉碎品，稱為馬甲子粉碎品。
[0014] 本發(fā)明馬甲子提取物的制備方法如下：
[001引制備方法一：
[0016] 所述馬甲子的提取物的制備方法一：
[0017] A、W馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥；
[001引B、粉碎，過篩；
[0019] C、W水或有機溶劑提取、干燥、即得。
[0020] 上述技術方案中，步驟C所述有機溶劑選自甲醇、乙醇、丙酬、異丙醇、乙酸乙醋或 石油酸;優(yōu)選乙醇。
[0021] 上述技術方案中，步驟C所述提取采用浸潰、回流、滲漉或其他常規(guī)方法提?。?br>[0022] 上述技術方案中，步驟C所述干燥為減壓干燥、冷凍干燥、噴霧干燥、微波干燥或其 他常規(guī)干燥方法。
[0023] 制備方法二：
[0024] A、W馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥；
[00巧]B、粉碎，過篩；
[0026] C、W溶劑a提取，濾液濃縮，得濃縮液；
[0027] D、W溶劑b萃取步驟C所得濃縮液，得萃取液，干燥，即得；
[00%]或，干燥步驟C所得濃縮液得提取物1，W溶劑b固-液萃取，干燥，即得。
[0029] 上述技術方案中，步驟C所述提取方法采用浸潰、回流、滲漉或其他常規(guī)方法提取；
[0030] 上述技術方案中，步驟C所述溶劑a選自選自水和常規(guī)有機溶劑（甲醇、乙醇、丙酬、 異丙醇、乙酸乙醋或石油酸）；優(yōu)選乙醇。
[0031] 上述技術方案中，步驟D所述溶劑b選自乙酸乙醋、石油酸或正下醇；優(yōu)選乙酸乙 醋。
[0032] 上述技術方案中，步驟DW溶劑b萃取步驟C所得濃縮液，得萃取液的方式屬于液- 液萃取;W干燥步驟C所得濃縮液得提取物1，采用溶劑b萃取的方式屬于固-液萃取。
[0033] 上述技術方案中，步驟D所述干燥為減壓干燥、冷凍干燥、噴霧干燥、微波干燥或其 他常規(guī)干燥方法。
[0034] 制備方法二：
[0035] A、W馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥；
[0036] B、W水或有機溶劑提取、干燥、即得。
[0037] 上述技術方案中，步驟B所述有機溶劑選自甲醇、乙醇、丙酬、異丙醇、乙酸乙醋或 石油酸;優(yōu)選乙醇。
[0038] 上述技術方案中，步驟B所述提取采用浸潰、回流、滲漉或其他常規(guī)方法提取；
[0039] 上述技術方案中，步驟B所述干燥為減壓干燥、冷凍干燥、噴霧干燥、微波干燥或其 他常規(guī)干燥方法。
[0040] 制備方法四：
[0041] A、W馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥；
[0042] B、W溶劑a提取，濾液濃縮，得濃縮液；
[0043] C、W溶劑b萃取步驟B所得濾液，得液相，干燥，即得；
[0044] 或，濃縮并干燥步驟B所得濾液得提取物1，W溶劑b提取，干燥提取液，即得。
[0045] 上述技術方案中，步驟B所述提取方法采用浸潰、回流、滲漉或其他常規(guī)方法提取；
[0046] 上述技術方案中，步驟B所述溶劑a選自選自水和常規(guī)有機溶劑（甲醇、乙醇、丙酬、 異丙醇、乙酸乙醋或石油酸）；優(yōu)選乙醇。
[0047] 上述技術方案中，步驟C所述溶劑b選自乙酸乙醋、石油酸或正下醇；優(yōu)選乙酸乙 醋。
[0048] 上述技術方案中，步驟CW溶劑b萃取步驟B所得濃縮液，得萃取液的方式屬于液- 液萃取;W干燥步驟B所得濃縮液得提取物1，采用溶劑b萃取的方式屬于固-液萃取。
[0049] 上述技術方案中，步驟C所述干燥為減壓干燥、冷凍干燥、噴霧干燥、微波干燥或其 他常規(guī)干燥方法。
[0050] 采用上述方法制備的提取物，如W方法一和Ξ制備所得，W方法一的步驟C或方法 Ξ的步驟B所用溶劑命名為對應的提取物，如馬甲子乙醇提取物，馬甲子甲醇提取物、馬甲 子異丙醇提取物、馬甲子乙酸乙醋提取物、馬甲子石油酸提取物。如按方法二和四制備所 得，則W方法二的步驟D或方法四的步驟C所用溶劑b命名為對應的提取物，如馬甲子石油酸 提取物，馬甲子乙酸乙醋提取物;而方法二步驟D和方法四步驟C所得提取物1則W方法二步 驟C和方法四步驟B所用溶劑a命名對應的提取物，如馬甲子乙醇提取物，馬甲子甲醇提取 物、馬甲子異丙醇提取物。
[0051] 上述技術方案中，提取物的制備方法一的步驟C和制備方法Ξ的步驟B所使用的溶 劑與馬甲子的用量關系為，溶劑添加量為馬甲子質量的1-40倍;優(yōu)選的，溶劑添加量為馬甲 子質量的2-20倍;更進一步的，溶劑添加量為馬甲子質量的4-12倍。
[0052] 上述技術方案中，提取物的制備方法二的步驟C和制備方法四的步驟B所使用的溶 劑a與馬甲子的用量關系為，溶劑a添加量為馬甲子質量的1-40倍;優(yōu)選的，溶劑a添加量為 馬甲子質量的2-20倍;更進一步的，溶劑a添加量為馬甲子質量的4-12倍。
[0053] 優(yōu)選的，溶劑a采用乙醇時，乙醇添加量為馬甲子質量的1-40倍;優(yōu)選的，乙醇添加 量為馬甲子質量的2-20倍;更進一步的，優(yōu)選甲醇或乙醇添加量為馬甲子質量的4-12倍。
[0054] 其中，所述乙醇的濃度為10-95%。優(yōu)選的，采用乙醇濃度為40-95%。最優(yōu)選的，采 用乙醇濃度為60-95 %。
[0055] 本發(fā)明所述的藥物為外用制劑。W馬甲子或其提取物作為活性成分，加入藥劑學 中可接受的輔料，按常規(guī)方法制備而得的外用制劑;包括軟膏劑、乳膏劑、凝膠劑、涂膜劑、 搔劑、洗劑、噴霧劑、混懸劑、溶液劑、乳劑、糊劑或己布劑。
[0056] 其中，W馬甲子為活性成分時，是鮮品或干品植物直接粉碎，加入藥劑學中可接受 的輔料，按常規(guī)方法制備而得的外用制劑。
[0057] 其中，W馬甲子提取物為活性成分時，是采用前述提取方法制備得到提取物，加入 藥劑學中可接受的輔料，按常規(guī)方法制備而得的外用制劑。
[0058] 綜上，外用馬甲子及其提取物，可有效改善瘦瘡癥狀及組織病理，效果均優(yōu)于臨床 常用對照藥物，說明外用馬甲子及其提取物治療瘦瘡在療效上優(yōu)于現(xiàn)有常用藥物。
【具體實施方式】
[0059] W下通過對本發(fā)明【具體實施方式】的描述說明但不限制本發(fā)明。
[0060] 本發(fā)明的技術方案如下：
[0061] 用于治療瘦瘡的馬甲子藥材原粉或馬甲子提取物，取馬甲子葉、馬甲子莖葉、馬甲 子全株植物粉碎，或取馬甲子葉、馬甲子莖葉、馬甲子全株植物，加入馬甲子質量1-40倍的 水或常規(guī)有機溶劑（甲醇、乙醇、丙酬、異丙醇、乙酸乙醋或石油酸)提取;或者進一步將提取 物進一步用乙酸乙醋或石油酸提取;提取液濃縮后干燥，制得馬甲子提取物；馬甲子提取物 或馬甲子藥材原粉，成分包括祗類、黃酬類、生物堿類、香豆素類、多糖類和纖維素類W及 祗、黃酬、生物堿、香豆素的巧類和單體。
[0062] 所述的馬甲子提取物或馬甲子藥材原粉，為馬甲子用水或常規(guī)有機溶媒提取，或 將馬甲子鮮品或干品直接粉碎入藥;有機溶媒包括甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸乙醋、石油酸或 其他常規(guī)溶劑;所述提取方法包括浸潰、回流或滲漉或其他常規(guī)提取方法;所述干燥方法包 括減壓干燥、冷凍干燥、噴霧干燥、微波干燥或其他常規(guī)干燥方法。
[0063] 所述的馬甲子提取物或馬甲子藥材原粉的制劑，包括軟膏劑、乳膏劑、凝膠劑、涂 膜劑、搔劑、洗劑、噴霧劑、混懸劑、溶液劑、乳劑、糊劑或己布劑。
[0064] 所述的馬甲子提取物或馬甲子藥材原粉的應用，為用于制備治療瘦瘡的外用藥。
[0065] -、馬甲子提取物或馬甲子藥材原粉的制備方法
[0066] 1.全株水提取物的制備
[0067] 取馬甲子全株化g粉碎，加入8倍量的水煎煮提取3次，收集提取液，減壓濃縮并干 燥即得馬甲子水提取物。
[0068] 2.全株乙醇提取物的制備
[0069] 取馬甲子全株化g粉碎，加入8倍量的95%乙醇浸潰提取數(shù)次，收集提取液，減壓回 收乙醇至無醇味，干燥即得馬甲子乙醇提取物。
[0070] 3.莖葉乙醇、石油酸和乙酸乙醋提取物的制備
[007。 取馬甲子莖葉5kg粉碎，加入10倍量的95 %乙醇回流提取數(shù)次，收集提取液，60°C 減壓回收乙醇至無醇味，干燥即得馬甲子乙醇提取物。將馬甲子乙醇提取物加水分散后，依 次用石油酸、乙酸乙醋萃取，得到馬甲子石油酸提取物和乙酸乙醋提取物。
[0072] 4.全株石油酸和乙酸乙醋提取物的制備
[0073] 取馬甲子全株化g粉碎，加入10倍量的甲醇浸潰提取數(shù)次，收集提取液，40°C下減 壓回收甲醇，干燥即得馬甲子甲醇提取物，將馬甲子甲醇提取物加水分散后，依次用石油 酸、乙酸乙醋萃取，得到馬甲子石油酸提取物和乙酸乙醋提取物。
[0074] 5.取馬甲子全株化g，干燥，粉碎，過80目藥篩。
[0075] 6.取馬甲子全株鮮品化g，粉碎，過60目藥篩。
[0076] 二、馬甲子提取物的成分研究
[0077] (一)成分的定性研究
[0078] 樣品供試液的配制：取全株乙醇提取物樣品Ig，溶于25ml無水乙醇中，離屯、。取上 清液2ml，無水乙醇稀釋5倍，至終濃度為0.008g/ml。
[00巧]1、Ξ祗類成分的檢識
[0080] (1 化-Β 反應
[0081] 將樣品溶于乙酸酢中，加濃硫酸一乙酸酢（1:20)數(shù)滴，可產(chǎn)生黃^紅^紫^藍等 顏色變化，最后稱色，表明含有Ξ祗類化合物。
[0082] (2 化址 lenbe;rg 反應
[0083] 將樣品的氯仿或醇溶液點于濾紙上，噴20%五氯化錬的氯仿溶液(或Ξ氯化錬飽 和的氯仿溶液），干燥后60-70°C加熱，顯藍色，表明含有Ξ祗類化合物。
[0084] (3)R-H 反應
[00化]將樣品供試液滴在濾紙上，噴出25%Ξ氯乙酸乙醇溶液，加熱至100°C，顯紅色，逐 漸變?yōu)樽仙?，表明含有Ξ祗類化合物?br>[0086] (4)Salkowki 反應
[0087] 將樣品溶于氯仿，加入濃硫酸后，在硫酸層呈現(xiàn)紅色或藍色，氯仿層有綠色巧光出 現(xiàn)，表明含有Ξ祗類化合物。
[0088] (5)Tschugaeff 反應
[0089] 將樣品溶于冰乙酸中，加乙酷氯數(shù)滴及氯化鋒結晶數(shù)粒，稍加熱，則呈現(xiàn)淡紅色或 紫紅色，表明含有Ξ祗類化合物。
[0090] 2、黃酬類成分的檢識
[0091] (1)鹽酸一儀粉還原反應(還原反應顯色）
[0092] 取少量樣品溶于ImL乙醇中，加入少許儀粉及濃鹽酸，振蕩片刻，觀察反應顏色呈 紫紅色，表明含有黃酬類化合物。
[0093] (2)Ξ氯化侶反應(金屬離子的絡合反應顯色）
[0094] 用玻璃棒薩取樣品供試液涂于濾紙上，吹干，噴1 %的Ξ氯化侶乙醇溶液，吹干，觀 察現(xiàn)象。置紫外燈下顯鮮黃色，表明含有黃酬類化合物。
[00Μ] (3)Ξ氯化鐵反應(金屬離子的絡合反應顯色）
[0096] 用玻璃棒薩取供試液涂于濾紙上，吹干，在紫外燈下觀察巧光后，噴3 %的Ξ氯化 鐵乙醇溶液，吹干，出現(xiàn)暗藍色巧光斑點，再經(jīng)氨熏后轉變?yōu)闂澤晒獍唿c，表明含有黃酬 類化合物。
[0097] (4)堿性試劑顯色
[0098] 用玻璃棒薩取供試液涂于濾紙上，干燥后，噴W氨氧化鋼水溶液或暴露于氨蒸汽 中，在日光燈下觀察時，氨蒸汽能使樣品色點轉變?yōu)榱咙S色，表明含有黃酬類化合物。
[0099] 3、生物堿類成分的檢識
[0100] (1)改良艦化祕鐘(Dragendorf f)法
[0101] ①次硝酸祕〇.85g溶于10ml冰醋酸與40ml水中；②艦化鐘8g溶于20ml水中。試液① 與試液②等量混合置棟色瓶內保存作膽備液。用前將1ml膽備液、4ml冰醋酸與12ml水混合。 將樣品供試液加入上述試劑中，呈紅棟色溶液，加蒸饋水一搖即有沉淀產(chǎn)生，表明含有生物 堿類化合物。
[0102] (2)艦-艦化鐘(Wagner)法
[0103] 艦Ig與艦化鐘lOg溶于50ml水，加2ml乙酸，加水至100ml。取上述試劑適量，加入 1ml樣品供試液即顯棟褐色，表明含有生物堿類化合物。
[0104] (3)娃鶴酸（Bertrand)法
[01化]5g娃鶴酸溶于100ml水中，加濃鹽酸少量調至pH=2左右。取上述試劑適量，加入 1ml樣品供試液即顯棟褐色，表明含有生物堿類化合物。
[0106] 4、香豆素類成分的檢識
[0107] (1)異徑朽酸鐵反應
[0108] ① a.鹽酸徑胺20g溶于50ml水，用乙醇稀釋至200ml，冷處保存;b.氨氧化鐘50g溶 于少許水中，加500ml乙醇。②氯化鐵(FeC13 ·細20)lOg溶于20ml 36%鹽酸溶液中，加乙酸 200ml搖勻，置密閉容器內保存。使用時將試液① a.與① b.按1:2混合，濾去沉淀，濾液放冰 箱保存。用玻璃棒薩取樣品供試液涂于濾紙上，先噴ab混合試液，稍干，再噴試液②，即顯紅 色，表明含有香豆素類化合物。
[0109] (2)重氮化試劑反應
[0110] ①對硝基苯胺0.35g，溶于濃鹽酸5ml中，加水至50ml;②亞硝酸鋼5g，加水50ml。取 ①、②液等量在冰水浴中混合后使用。取少量樣品供試液滴加重氮化試劑，即顯澄紅色，表 明含有香豆素類化合物。
[011。（二)成分定量分析
[0112] 1、取馬甲子莖葉乙酸乙醋提取物0.1 g，Ξ份，加入10ml容量瓶內，加乙酸乙醋至刻 度，再從中精密吸取4ml溶液加入10ml容量瓶內，揮干溶劑后，加入5%香草醒-冰醋酸 0.4ml、高氯酸1.6ml，混勻，并由乙酸乙醋稀釋至刻度，置70°C恒溫水浴中加熱15min，冷卻 至室溫，并轉移至10ml容量瓶中加乙酸乙醋稀釋至刻度，搖勻，在540nm波長處測定吸收度， 計算供試品溶液中總Ξ祗含量(含Ξ祗W美洲茶酸計）。經(jīng)計算Ig馬甲子提取物中Ξ祗類成 分含418mg。
[0113] 2、取馬甲子葉鮮品粉碎品0.1g，S份，加入10ml容量瓶內，加乙酸乙醋適量，超聲 提取30分鐘，冷卻后定容至刻度，再從中精密吸取4ml溶液加入10ml容量瓶內，揮干溶劑后， 加入5%香草醒-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml，混勻，并由乙酸乙醋稀釋至刻度，置70°C恒溫 水浴中加熱15min，冷卻至室溫，并轉移至10ml容量瓶中加乙酸乙醋稀釋至刻度，搖勻，在 540nm波長處測定吸收度，計算供試品溶液中總Ξ祗含量(含Ξ祗W美洲茶酸計）。經(jīng)計算Ig 馬甲子提取物中Ξ祗類成分含46mg。
[0114] 3、取馬甲子莖葉干品粉碎品0.1g，S份，加入10ml容量瓶內，加乙酸乙醋適量，超 聲提取30分鐘，冷卻后定容至刻度，再從中精密吸取4ml溶液加入10ml容量瓶內，揮干溶劑 后，加入5%香草醒-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml，混勻，并由乙酸乙醋稀釋至刻度，置70°C恒 溫水浴中加熱15min，冷卻至室溫，并轉移至10ml容量瓶中加乙酸乙醋稀釋至刻度，搖勻，在 540nm波長處測定吸收度，計算供試品溶液中總Ξ祗含量(含Ξ祗W美洲茶酸計）。經(jīng)計算Ig 馬甲子提取物中Ξ祗類成分含85mg。
[0115] 4、取馬甲子全株乙醇提取物0.1g，S份，加入10ml容量瓶內，加乙酸乙醋適量，超 聲提取30分鐘，冷卻后定容至刻度，再從中精密吸取4ml溶液加入10ml容量瓶內，揮干溶劑 后，加入5%香草醒-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml，混勻，并由乙酸乙醋稀釋至刻度，置70°C恒 溫水浴中加熱15min，冷卻至室溫，并轉移至10ml容量瓶中加乙酸乙醋稀釋至刻度，搖勻，在 540nm波長處測定吸收度，計算供試品溶液中總Ξ祗含量(含Ξ祗W美洲茶酸計）。經(jīng)計算Ig 馬甲子提取物中Ξ祗類成分含132mg。
[0116] 5、取馬甲子全株水提取物0.1g，S份，加入10ml容量瓶內，加乙酸乙醋適量，超聲 提取30分鐘，冷卻后定容至刻度，再從中精密吸取4ml溶液加入10ml容量瓶內，揮干溶劑后， 加入5%香草醒-冰醋酸0.4ml、高氯酸1.6ml，混勻，并由乙酸乙醋稀釋至刻度，置70°C恒溫 水浴中加熱15min，冷卻至室溫，并轉移至10ml容量瓶中加乙酸乙醋稀釋至刻度，搖勻，在 540nm波長處測定吸收度，計算供試品溶液中總Ξ祗含量(含Ξ祗W美洲茶酸計）。經(jīng)計算Ig 馬甲子提取物中Ξ祗類成分含22mg。
[0117] Ξ、馬甲子制劑的制備 [011引1.軟膏劑的制備
[0119] 取馬甲子莖葉石油酸提取物，加入適宜輔料，如：十八醇、單硬脂酸甘油脂、甘油、 硬脂酸等制成軟膏劑。
[0120] 稱取115g十八醇、115g白凡±林、70g單硬脂酸甘油醋，加熱融化，得到油相，加入 4〇g馬甲子甲醇提取物；另取lOOg甘油、15g十二烷基硫酸鋼、O.Olg鹽酸半脫氨酸，加入 650ml水溶解，得到水相;分別加熱至75°C~80°C，攬拌下將水相緩緩加入油相，然后繼續(xù)攬 拌15分鐘，得到馬甲子甲醇提取物軟膏劑。
[0121] 2.馬甲子乙醇提取物凝膠劑的制備
[0122] 取lOg卡波姆撒入420ml純化水中，攬拌使溶脹，加入100ml丙二醇攬拌溶解，攬拌 下滴加18gS乙醇胺，制成凝膠基質；另取lOOg馬甲子乙醇提取物與2g徑苯乙醋溶解于 350ml乙醇中，攬拌下加入凝膠基質中，攬勻即得。
[0123] 3.馬甲子乙醇提取物涂膜劑的制備
[0124] 取40g聚乙締醇124溶脹于400ml純化水中；另取lOOg馬甲子乙醇提取物溶于400ml 乙醇中，再加入100ml甘油，攬拌均勻后緩緩加入聚乙締醇溶液中，攬勻后過濾，再自濾器上 加乙醇至1000ml，即得。
[0125] 4.馬甲子石油酸提取物搔劑的制備
[0126] 取lOOg馬甲子石油酸提取物細粉置于研鉢中，加入500ml花生油研勻，再緩緩加入 飽和氨氧化巧水溶液至1000ml，研磨至均勻白色乳狀物即得。
[0127] 5.馬甲子乙醇提取物洗劑的制備
[01%]取lOOg馬甲子水提取物細粉置于研鉢中，加入50ml甘油和適量純化水，研磨成糊 狀，逐漸加入純化水至全量混勻即得。
[0129] 6.馬甲子乙醇提取物軟膏劑的制備
[0130] 取馬甲子乙醇提取物，粉碎成極細粉，加至經(jīng)滅菌、濾過后放冷的液體石蠟20g中， 攬勻，再加至已干熱滅菌、濾過并冷至約50°C的凡±林900邑和羊毛脂50g中，攬勻，使凝固， 制成lOOOg，即得。
[0131] 7.馬甲子糊劑的制備
[0132] 取羊毛脂250g、白凡±林250肖置水浴加溫融化并放置保持溫度在60°C左右備用； 將300g馬甲子粉碎品加入上述基質中，不斷攬拌使其混勻，再加入已過篩的淀粉125g及氧 化鋒細粉125g攬拌形成糊狀放冷，即得。
[0133] 8.己布劑的制備
[0134] W聚丙締酸鋼200g、明膠150g、聚乙締醇250g為粘著劑，溶于蒸饋水100ml中，加熱 攬拌至完全溶解靜置待用。將馬甲子乙醇提取物30g、甘油350g、氧化鋒20g混合后一起加入 到粘著劑中，加熱攬拌lOmin后靜置脫氣，待氣泡趕凈后均勻涂布于200mmX25mm的無紡布 基材上，靜置至凝膠化，即得。
[0135] 四、馬甲子提取物對實驗性兔耳瘦瘡模型的影響
[0136] 1試驗方法
[0137] 健康日本大耳白兔72只，體重2.0~2.化g，全雄。動物適應性飼養(yǎng)1周后按體重隨 機選取8只作為正常對照組，剩余64只家兔于耳道口外2cm處2X2cm2范圍，每日涂煤焦油一 次，厚度約為0.5mm。（涂前先將煤焦油水浴加熱融化，每次涂煤焦油前先將上次涂的煤焦油 焦殼取下；正常對照組涂橄攬油，方法同前。）造模3周后，64只家兔按皮損程度輕重隨機分 為8組，分別為馬甲子乙酸乙醋提取物組、馬甲子乙醇提取物組、馬甲子石油酸提取物組、馬 甲子水提取物組、馬甲子鮮葉粉碎品組、馬甲子干葉粉碎品組、模型對照組、陽性對照組(維 胺醋維E乳膏），每組8只。分組后，各劑量組每日上午繼續(xù)涂煤焦油，下午去除煤焦油后在病 損局部涂抹受試藥物1ml/只（鮮葉及干葉粉碎組按Ig鮮葉/只涂抹)或對照藥物(維胺醋維E 乳膏，8mg原藥/lOg膏，按Ig膏/只涂抹），1次/日，連續(xù)2周(模型對照組和正常對照組涂等量 基質）。上述提取物均W鮮葉提取，劑量按鮮葉量計算，濃度相當于Ig鮮葉/ml,下同。
[0138] 末次給藥后24小時，空氣栓塞處死動物，取耳部給藥處皮膚(全層），4%多聚甲醒 溶液固定，肥染色，進行常規(guī)病理觀察。同時免疫組化方法觀察皮膚雄激素受體表達情況。
[0139] 2試驗結果
[0140] 2.1對實驗性兔耳瘦瘡模型角質層厚度的影響
[0141] 由表1可見，除石油酸組外，馬甲子干、鮮葉及其余各提取物組兔耳角質層厚度減 小，與模型對照組比較，統(tǒng)計差異顯著(P<〇.05)。表明本品能減輕實驗性兔耳瘦瘡模型角質 層厚度，且呈一定量效關系。
[0142] 表1馬甲子及提取物對實驗性兔耳瘦瘡模型角質層厚度的影響（*±s》
[0143]
[0144] 注:與模型對照組相比，沖<0.05*沖<0.01。
[0145] 2.2對實驗性兔耳瘦瘡模型表皮厚度的影響
[0146] 由表2可見，馬甲子干、鮮葉及各馬甲子提取物組兔耳表皮厚度無明顯減少，與模 型對照組比較，統(tǒng)計學差異不顯著(P〉〇.05)。結果表明本品對實驗性兔耳瘦瘡模型表皮厚 度影響不明顯，但有降低作用趨勢。
[0147] 表2馬甲子及提取物對實驗性兔耳瘦瘡模型表皮層厚度的影響（i±s)
[014 引
[0149] 注:與模型對照組相比，沖<0.05。
[0150] 2.3對實驗性兔耳瘦瘡模型毛囊擴張程度的影響
[0151] 由表3可見，馬甲子乙酸乙醋提取物組、鮮葉粉碎品組兔耳毛囊擴張減輕，與模型 對照組比較，統(tǒng)計差異顯著(P<〇.05)。其余各組有降低作用趨勢。結果表明本品能減輕實驗 性兔耳瘦瘡模型毛囊擴張程度。
[0152] 表3馬甲子及提取物對實驗性兔耳瘦瘡模型毛囊擴張程度的影響fx±s)
[0153]
[0154] 注:與模型對照組相比，沖<0.05*沖<0.01。
[01W] 2.4對實驗性兔耳瘦瘡模型皮脂腺增生的影響
[0156] 由表4可見，馬甲子干、鮮葉及各馬甲子提取物組兔耳皮脂腺大小均減小，與模型 對照組相比，統(tǒng)計差異顯著(P<〇.05)。表明馬甲子干、鮮葉及提取物能減輕實驗性兔耳瘦瘡 模型皮脂腺增生程度。
[0157] 表4馬甲子及提取物對實驗性兔耳瘦瘡模型皮脂腺增生的影響 [015 引
[0159] 注:與模型對照組相比，*沖<0.01。
[0160] 2.5對實驗性兔耳瘦瘡模型角化物的影響
[0161] 由表5可見，各馬甲子提取物組兔耳毛囊內角化物有減少作用趨勢，與模型對照組 比較，統(tǒng)計差異不顯著(P〉〇.05)。表明馬甲子提取物對減輕實驗性兔耳瘦瘡模型毛囊內角 化物作用不明顯。
[0162] 表5馬甲子及提取物對實驗性兔耳瘦瘡模型角化物的影響（S±S)
[0163]
[0164] 注:與模型對照組相比，*沖<0.01。
[0165] 2.6對實驗性兔耳瘦瘡模型真皮炎性浸潤程度的影響
[0166] 由表6可見，馬機子干、鮮葉及各馬甲子提取物組兔耳真皮炎性浸潤程度有減少作 用趨勢，與模型對照組比較，統(tǒng)計差異不顯著(P〉〇.05)。表明馬甲子提取物組對減輕實驗性 兔耳瘦瘡模型真皮炎性浸潤抑制作用不明顯。
[0167] 表6馬甲子及提取物對實驗性兔耳瘦瘡模型真皮炎性浸潤程度的影響 [016 引
[0169] 注:與模型對照組相比，*沖<0.01。
[0170] 2.7對雄激素受體表達的影響
[0171 ]表7馬甲子及提取物對實驗性兔耳瘦瘡模型A郎日性表達的影響（
[0172]
[0173] 注:與模型對照組相比，沖<0.05*沖<0.01。
[0174] 模型對照組雄激素受體主要表達在兔耳表皮的棘層細胞核，基底層細胞核有少量 陽性表達，毛囊細胞核也可見較多陽性表達。各給藥組陽性表達位置與模型對照組相似，但 表達強度及面積較模型對照組均有不同程度的減少?？瞻讓φ战M僅見極少量陽性表達。由 表7可見，各組與模型對照組相比，雄激素受體表達強度（I0D)減少，統(tǒng)計差異顯著（P< 0.05)，乙酸乙醋組和干、鮮葉組面積(Area)減少。表明馬甲子提取物對瘦瘡動物模型的雄 激素受體表達具有抑制作用。
[0175] 3試驗結論
[0176] 本次實驗結果表明，馬甲子干、鮮葉及提取物對實驗性兔耳瘦瘡具有不同程度治 療作用。能減輕毛囊角化性丘疹，減少局部毛囊角栓。能減輕病理損傷，抑制角質層及皮脂 腺增生，抑制毛囊擴張，對炎性細胞浸潤也有一定的抑制作用。其作用機理可能與其抑制雄 激素受體表達有關。
[0177] 五、抗菌作用
[0178] 采用四種標準菌株進行試驗:金色葡萄球菌、大腸桿菌、綠脈桿菌、白色念珠菌。實 驗細菌的濃度為105~lOeCRJ/mLW乙酸乙醋提取物、乙醇提取物和水提取物為受試物，W 甲硝挫為陽性對照，用TSB(化yptiC Soy化oth)稀釋受試物，使成二倍遞減的系列提取物 濃度。在96孔微量U形板上，每孔加稀釋后的受試物和實驗菌液各50μ1，在微型震蕩器上震 蕩混勻后培養(yǎng)4她測定MIC值，結果見表8。
[0179] 表8馬甲子提取物對常見細菌的抑制作用
[0180]
[0181] 實驗結果:本發(fā)明提取物具有較好的抑菌效果，表明其有助于對抗燒燙傷后的細 菌感染。
[0182] 六、抗炎作用
[0183] 1.試驗方法
[0184] KM小鼠100只，按體重分層隨機均分為10組，分別為模型對照組、陽性對照組(醋酸 可的松軟膏）、乙酸乙醋提取物小劑量組、乙酸乙醋提取物大劑量組、乙醇提取物小劑量組、 乙醇提取物大劑量組、馬甲子石油酸提取物組、馬甲子水提物組、馬甲子鮮葉粉碎品組、馬 甲子干葉粉碎品組。實驗當天，動物稱重，于小鼠右耳兩面仔細涂抹受試物（提取物按 0.05ml/只涂抹，鮮葉或干葉按O.lg鮮葉/只涂抹)或對照物(醋酸可的松軟膏，lOmg原藥/g 膏，O.lg膏/只）溶劑。藥后40min，擦除藥物，于小鼠右耳兩面仔細涂抹二甲苯(30ul)，造型 20minW后處死小鼠，沿小鼠耳廓基沿剪取左右兩耳，稱重，計算腫脹度(兩耳差值）。
[01化]2.試驗結果
[0186] 結果如表9。馬甲子提取物各組對二甲苯刺激所致耳腫脹均有明顯抑制作用，且大 劑量組優(yōu)于小劑量組，乙酸乙醋提取物大劑量組效果與醋酸可的松相近。
[0187] 表9馬甲子及提取物對小鼠二甲苯所致耳腫脹的影響(n = 10,壬±8)
[018 引
[0189] 與模型對照組比較，沖<0.05，*沖<0.01
[0190] 3.試驗結論
[0191] 結果如表9所示。馬甲子干、鮮葉及各種提取物對直接化學刺激所致炎癥有明確的 抗炎作用。
【主權項】
1. 馬甲子或其提取物在制備治療痤瘡的藥物中的用途。2. 根據(jù)權利要求1所述的用途，其特征在于:所述馬甲子采用馬甲子全株植物或其中任 一部位的鮮品或干品； 優(yōu)選的，所述部位為根、莖、葉、花、果任一部位或其混合； 最優(yōu)選的，所述部位為葉。3. 根據(jù)權利要求1或2所述的用途，其特征在于:所述馬甲子為鮮品或干品的粉碎品或 提取物，粉碎品以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥，采用粉碎機或其 他器械粉碎制得;提取物以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥，采用常 規(guī)提取方法制備而得。4. 根據(jù)權利要求1所述的用途，其特征在于:所述馬甲子提取物的制備方法包括： 所述馬甲子的粉碎品的制備方法如下： A、 以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥； B、 以粉碎機或其他器械粉碎，過篩，即得； 所述馬甲子的提取物的制備方法包括以下至少四種方法： 所述馬甲子的提取物的制備方法一： A、 以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥； B、 粉碎，過篩； C、 以水或有機溶劑提取、干燥、即得； 所述馬甲子的提取物的制備方法二： A、 以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥； B、 粉碎，過篩； C、 以溶劑a提取，濾液濃縮，得濃縮液； D、 以溶劑b萃取步驟C所得濃縮液，得萃取液，干燥，即得； 或，干燥步驟C所得濃縮液得提取物1，以溶劑b固-液萃取，干燥，即得； 所述馬甲子的提取物的制備方法三： A、 以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥； B、 以水或有機溶劑提取、干燥、即得； 所述馬甲子的提取物的制備方法四 A、 以馬甲子全株植物或其中任一部位鮮品或干品為原料藥； B、 以溶劑a提取，濾液濃縮，得濃縮液； C、 以溶劑b萃取步驟B所得濃縮液，得萃取液，干燥，即得； 或，干燥步驟B所得濃縮液得提取物1，以溶劑b固-液萃取，干燥，即得。5. 根據(jù)權利要求4所述的提取物的制備方法，其特征在于:滿足以下任意一項： 所述馬甲子的粉碎品的制備方法和馬甲子的提取物的制備方法一和制備方法二中，步 驟B所述粉碎包括粉碎機或其他器械粉碎； 所述馬甲子的提取物的制備方法一和制備方法二中的步驟C，以及所述馬甲子的提取 物的制備方法三和制備方法四中的步驟B，所述提取方法采用浸漬、回流、滲漉或其他常規(guī) 方法提??； 所述馬甲子的提取物的制備方法一的步驟C、馬甲子的提取物的制備方法二的步驟D、 馬甲子的提取物的制備方法三的步驟B、馬甲子的提取物的制備方法四的步驟C所述干燥方 法采用減壓干燥、冷凍干燥、噴霧干燥或微波等常規(guī)干燥方法； 所述馬甲子的提取物的制備方法一的步驟C，以及馬甲子的提取物的制備方法三的步 驟B所述的有機溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇;優(yōu)選乙醇;所述馬甲子的提取物的制備方 法二的步驟C，以及馬甲子的提取物的制備方法四的步驟B所述溶劑a包括水和有機溶劑;所 述的有機溶劑為甲醇、乙醇、丙酮、異丙醇;所述的有機溶劑優(yōu)選乙醇； 所述馬甲子的提取物的制備方法二的步驟D以及馬甲子的提取物的制備方法四的步驟 C所述溶劑b包括乙酸乙酯、石油醚或正丁醇，優(yōu)選乙酸乙酯； 所述馬甲子的提取物的制備方法一的步驟C，以及馬甲子的提取物的制備方法三的步 驟B所使用的溶劑與馬甲子的用量關系為，溶劑添加量為馬甲子質量的1-40倍； 優(yōu)選的，溶劑添加量為馬甲子質量的2-20倍； 進一步優(yōu)選的，溶劑添加量為馬甲子質量的4-12倍； 優(yōu)選的，溶劑采用乙醇時，乙醇添加量為馬甲子質量的2-20倍； 所述馬甲子的提取物的制備方法二的步驟C，以及馬甲子的提取物的制備方法四的步 驟B所使用的溶劑a與馬甲子的用量關系為，溶劑a添加量為馬甲子質量的1-40倍； 優(yōu)選的，溶劑a添加量為馬甲子質量的2-20倍； 進一步優(yōu)選的，溶劑a添加量為馬甲子質量的4-12倍； 溶劑a為乙醇時，所述乙醇的濃度為10-95 % ; 優(yōu)選的，采用乙醇濃度為40-95 % ; 最優(yōu)選的，采用乙醇濃度為60-95 %。6. 根據(jù)權利要求1-5任一項所述的用途，其特征在于：以馬甲子全株植物或其中任一部 位的鮮品/干品的粉碎品或提取物為原料，加入藥劑學可接受的輔料按常規(guī)方法制備而得 的外用制劑。7. 根據(jù)權利要求6所述的用途，其特征在于：所述外用制劑包括軟膏劑、乳膏劑、凝膠 劑、涂膜劑、搽劑、洗劑、噴霧劑、混懸劑、溶液劑、乳劑、糊劑或巴布劑。
【文檔編號】A61K36/72GK105998232SQ201610343646
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月23日
【發(fā)明人】徐超群, 李東曉, 吳亞梅, 詹雁, 阮佳, 譚鐳
【申請人】四川省中醫(yī)藥科學院