專利名稱：含維生素和類黃酮的亮膚組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及亮膚劑，這些亮膚劑在抑制哺乳動物皮膚中黑色素產(chǎn)生的用途以及適合此類用途的組合物。
背景技術(shù)：
某些具有天然較暗皮膚類型的人希望在他們整體皮膚顏色中引入一定程度的增亮。皮膚顏色主要由黑色素的量和類型決定，黑色素是由存在于表皮中的黑色素細(xì)胞產(chǎn)生于皮膚內(nèi)的一種物質(zhì)。黑色素以兩種形式存在，即暗黑色素和亮黑色素。如果暗黑色素的產(chǎn)生減少和/或亮黑色素對暗黑色素產(chǎn)生的比率增加將導(dǎo)致皮膚增亮。
發(fā)明概述我們現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)類黃酮(flavanoid)、維生素C、維生素E和尼克酸的組合協(xié)同減少暗黑色素的產(chǎn)生并增強亮黑色素的產(chǎn)生。
因此，本發(fā)明提供了一種包含類黃酮、維生素C、維生素E和尼克酸的組合物。優(yōu)選類黃酮為松樹皮提取物形式。
當(dāng)包含維生素A時，得到進一步的暗黑色素產(chǎn)生的減少以及亮黑色素產(chǎn)生的增加。因此，在一個優(yōu)選實施方案中，組合物進一步包含維生素A。
當(dāng)組合物中包含維生素B12和半胱氨酸時，得到暗黑色素產(chǎn)生的更大減少以及亮黑色素產(chǎn)生的更大增加。因此，在另一優(yōu)選實施方案中，組合物進一步包含維生素B12和/或半胱氨酸。
組合物可以配制為用于局部和/或全身施用。例如，組合物可以配制為固體劑量形式或配制為局部組合物。
本發(fā)明還提供了一種抑制哺乳動物皮膚中黑色素產(chǎn)生的方法，該方法包括對所述哺乳動物施用本發(fā)明的組合物。
在一個相關(guān)方面，本發(fā)明進一步提供了用于抑制哺乳動物皮膚中黑色素的產(chǎn)生的本發(fā)明組合物。
本發(fā)明進一步提供了一種增加哺乳動物皮膚中亮黑色素對暗黑色素比率的方法，該方法包括對所述哺乳動物施用本發(fā)明的組合物。
本發(fā)明還提供了用于增加哺乳動物皮膚中亮黑色素對暗黑色素的比率的本發(fā)明的組合物。
在另一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的組合物在制備用于抑制哺乳動物皮膚中黑色素的產(chǎn)生和/或增加亮黑色素對暗黑色素比率的組合物。
本發(fā)明還提供了一種抑制個體皮膚中黑色素從黑色素細(xì)胞轉(zhuǎn)移到角質(zhì)形成細(xì)胞的方法，這個方法包括對所述個體施用本發(fā)明的組合物。
本發(fā)明進一步提供了一種抑制哺乳動物皮膚的光保護區(qū)(photo-protected area)內(nèi)黑色素產(chǎn)生的方法，例如抑制暗黑色素的產(chǎn)生，該方法包括對所述哺乳動物施用本發(fā)明的組合物。在一個實施方案中，組合物為局部的形式并施用于所述光保護區(qū)。
在一個相關(guān)方面，本發(fā)明進一步提供了一種增加哺乳動物皮膚光保護區(qū)內(nèi)亮黑色素對暗黑色素比率的方法，該方法包括對所述哺乳動物施用本發(fā)明的組合物。在一個實施方案中，組合物為局部的形式并施用于所述光保護區(qū)。
發(fā)明詳述除非另有說明，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語均具有與本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解相同的含義。
組合物和產(chǎn)品形式類黃酮是多酚化合物并且在自然界中可以廣泛找到。有幾類類黃酮黃烷醇、黃酮醇、黃酮、異黃酮、黃烷酮、原花色素、花色素以及羥基茋。許多此類化合物以糖基化形式存在，特別是作為O-糖苷。一般地，糖基化形式優(yōu)于糖苷配基。
黃酮醇包括槲皮素、堪非醇和楊梅黃酮。黃烷醇包括兒茶素、表兒茶素、沒食子兒茶素、表沒食子兒茶素及其沒食子酸酯，即，沒食子酸兒茶素酯、沒食子酸表兒茶素酯、沒食子酸沒食子兒茶素酯和沒食子酸表沒食子兒茶素酯(EGCg)。黃烷酮包括柚皮素、橙皮素和sakranetin。黃酮包括木犀草素和芹菜配基。異黃酮包括黃豆苷原和染料木黃酮。羥基茋包括白藜蘆醇和氧化白藜蘆醇(oxyresveratrol)。
化合物可以是化學(xué)合成的或從植物材料獲得的。
植物提取物不同于完整植物材料的是，存在于完整植物材料中的各種組分將以不同的量存在于提取物中，或基本上不存在。在提取之前，植物材料可以進行干燥或者機械加工，例如壓碎。
植物材料提取物一般通過溶劑提取制成。溶劑包括“溶劑”包括極性和非極性有機溶劑、水及其混合物。優(yōu)選溶劑為水、乙醇及其混合物。提取程序可以包括加熱步驟?？梢詫θ軇┨崛〉慕M分實施進一步的純化/分離步驟，例如層析或分餾。如本文所使用的，“餾分”是指包含一個或多個上述活性成分的溶劑的任何被分餾的部分，例如通過層析或通過分餾所得到的。
上述各種多酚化合物的適當(dāng)植物來源包括新鮮水果例如葡萄(特別是皮和種子)、蔓越橘、黑醋栗、黑莓和柑橘類水果，以及蔬菜例如洋蔥、羽衣甘藍(lán)、椰菜和菜豆。
通過共同溶解一種或多種花色素可以增加黃酮醇在水性溶劑中的溶解性(參見美國專利號6,569,446)。
在一個優(yōu)選實施方案中，組合物包含原花色素和花色素的混合物。優(yōu)選地原花色素和花色素的混合物作為松樹皮提取物提供，更優(yōu)選法國近海松樹(Pinus pinatus)皮提取物。一種此類提取物可以在商業(yè)上作為PycnogenolTM獲得。
在另一優(yōu)選實施方案中，組合物包含一種或多種黃酮醇。優(yōu)選地，組合物包含楊梅黃酮和/或槲皮素，更優(yōu)選槲皮素。
在另一優(yōu)選實施方案中，組合物包含一種或多種黃烷酮。優(yōu)選地，組合物包含柚皮素、橙皮素和/或sakranetin，更優(yōu)選橙皮素。
可以利用，例如，實施例中所述的測定方法測試其他化合物和/或包含所述化合物的植物提取物以確定它們具有適當(dāng)?shù)幕钚浴?br> 本發(fā)明的組合物可以包含兩種或更多種類黃酮的混合物。在一個實施方案中，不同的類黃酮作為不同的植物提取物提供。
優(yōu)選的松樹皮提取物為法國近海松樹(Pinus pinatus)皮提取物。一種此類優(yōu)選提取物可以在商業(yè)上作為PycnogenolTM獲得。
本發(fā)明的組合物中類黃酮的優(yōu)選量為至少10或20mg。
如本文所使用的，“維生素A”包括視黃醇和其他化學(xué)上相似的、被稱為類視黃醇(retanoids)的化合物。它還包括當(dāng)身體需要時轉(zhuǎn)化為視黃醇的前體，例如β胡蘿卜素和其他類胡蘿卜素(維生素原)。
本發(fā)明的組合物中維生素A的優(yōu)選量為至少0.1或0.2mg。
如本文所使用的，“維生素C”指抗壞血酸或其有機或無機(例如鈉)鹽。也包括一種或多種所述酸及其鹽的混合物。
本發(fā)明的組合物中維生素C的優(yōu)選量為至少100或200mg。
如本文所使用的，“維生素E”包括其任何同分異構(gòu)形式的α-、β-、γ-和δ-生育酚或其任何混合物(包括它們中任何一個的同分異構(gòu)形式的混合物)。維生素E的衍生物可以是油溶性的或水溶性的。油溶性維生素E衍生物的實例包括酯衍生化的維生素E、生育酚乙酸酯、生育酚亞油酸酯、生育酚亞油酸酯/油酸酯、生育酚煙酸酯和生育酚(維生素E醇)。水溶性維生素E衍生物包括維生素E磷酸鈉(VEP)、月桂基亞氨基二丙酸生育酚磷酸酯、生育酚葡糖苷、生育酚琥珀酸酯、托可索侖(tocophersolan)(生育酚聚乙二醇1000琥珀酸酯)、tocophereth-5，10，12，18，以及50(聚乙二醇(PEG)生育酚醚)。對于PEG維生素E衍生物，漸增的數(shù)字代表與維生素E附著的PEG分子的漸增數(shù)目。因此，當(dāng)數(shù)字增加時，水溶性也增加，tocopereth-5具有最低的水溶性而tocopereth-50具有最高的水溶性。如本文所述維生素E衍生物具有α-生育酚的至少50％的生物學(xué)活性，例如，α-生育酚的至少50％的抗氧化劑活性。
本發(fā)明的組合物中維生素E的優(yōu)選量為至少100或200mg。
術(shù)語“維生素B12”或“鈷胺素”是指氰鈷胺素、羥鈷胺素和硝鈷胺素。組合物包含維生素B12時，優(yōu)選組合物還包含維生素A。
本發(fā)明的組合物中維生素B12的優(yōu)選量為至少10或20μg。
“尼克酸”是一組顯示尼克酸活性的化合物的通稱，并包括煙酰胺和煙酸。優(yōu)選地，尼克酸作為煙酰胺提供。
本發(fā)明的組合物中尼克酸例如煙酰胺的優(yōu)選量為至少10或20mg。
如本文所使用的，術(shù)語“半胱氨酸”包括其鹽。組合物包含半胱氨酸時，優(yōu)選組合物還包含維生素A。
本發(fā)明的組合物中半胱氨酸例如L-半胱氨酸的優(yōu)選量為至少50或100mg。
本發(fā)明的組合物可以以局部和/或全身施用的形式提供。例如，所有活性成分可以全身給藥或所有的可以局部給藥或某些可以全身給藥而其余局部給藥。類黃酮組分可以包括兩種或更多種不同餾分或兩種或更多種不同提取方法的產(chǎn)物。這些可以全部全身或全部局部給藥，或各自在局部和全身送遞形式之間分開。
因此，在根據(jù)本發(fā)明的組合物情形中如本文所使用的術(shù)語“組合物”均指包含所有必需成分的單一組合物。然而，該術(shù)語還涵蓋了整體組合物的單個組分在兩種不同的組合物形式之間分開的情況，所述兩種不同的組合物形式作為一種產(chǎn)品一起提供。例如，一種產(chǎn)品可以包括一種用于全身送遞其組分的組合物形式和一種用于局部送遞其組分的組合物形式。包含此類組合物形式組合的產(chǎn)品的實例為護膚膏和營養(yǎng)補充片劑。
局部組合物在一個實施方案中，本發(fā)明的組合物被配制為用于局部施用，即，組合物為局部組合物形式。因此，本發(fā)明的組合物可以局部施用于受試者，即，通過將組合物直接放置或鋪展在皮膚上。
可以通過用藥物學(xué)上可接受的局部載體或稀釋劑，即皮膚病學(xué)上可接受的載體或稀釋劑，組合安全且有效量的一種或多種如上所述活性物質(zhì)來制備此類組合物。
組合物一般包含約0.01wt％-約35wt％，優(yōu)選約0.1wt％-約35wt％，更優(yōu)選約1wt％-約35wt％，例如5或10wt％-約25wt％的每種活性成分?；钚猿煞值目偭恳话銥榧s1wt％-90wt％，更優(yōu)選至少10wt％。
在本發(fā)明中有用的局部組合物可以制成各種各樣的產(chǎn)品類型。這些包括，但不限于洗劑、乳膏、凝膠、棒狀物(sticks)、噴霧劑、軟膏和糊劑。這些產(chǎn)品類型可以包括幾種類型的載體系統(tǒng)，所述載體系統(tǒng)包括，但不限于溶液、乳狀液、凝膠和固體。
在本發(fā)明中有用的配制為溶液的局部組合物一般包括藥物學(xué)上可接受的水性或有機溶劑。術(shù)語“藥物學(xué)上可接受的水性溶劑”和“藥物學(xué)上可接受的有機溶劑”指能夠?qū)⒒钚猿煞址稚⒒蛉芙庥谄渲校⒕哂锌山邮艿陌踩匦?例如刺激和敏化特征)的溶劑。適當(dāng)?shù)挠袡C溶劑的實例包括丙二醇、聚乙二醇(200-600)、聚丙二醇(425-2025)、聚乙烯吡咯烷酮、丙二醇-14丁醚、丙三醇、1，2，4-丁三醇、山梨糖醇酯、1，2，6-己三醇、乙醇、異丙醇、丁二醇及其混合物。這些溶液優(yōu)選包含約0.1wt％-約20wt％，更優(yōu)選約1wt％-約20wt％，再更優(yōu)選約1wt％-約10wt％的每種活性成分。
如果在本發(fā)明中有用的局部組合物被配制為氣溶膠并作為噴霧(spray-on)應(yīng)用于皮膚，則向溶液組合物中加入了推進劑。
局部組合物可以被配制為包含潤膚劑的溶液，所述潤膚劑也就是用于防止或緩解干燥以及用于保護皮膚的材料。各種各樣合適的潤膚劑是已知的且可以在本文中使用(參見Sagarin，Cosmetics，Scienceand Technology 2nd Edition，Vol.1，PP.32-43(1972))。此類組合物優(yōu)選包含約2％-約50％的藥物學(xué)上可接受的局部潤膚劑。
如果載體被配制為乳狀液，則優(yōu)選約1％-約10％，更優(yōu)選約2％-約5％的載體系統(tǒng)包含乳化劑。乳化劑可以是非離子的、陰離子的或陽離子的。合適的乳化劑公開于，例如，McCutcheon′s Detergentsand Emulsifiers，North American Edition，pages 317-324(1986)。
水包油型和油包水型的單一乳狀液護膚制劑，例如洗劑和乳膏，是化妝品領(lǐng)域眾所周知的。此類乳狀液可以穩(wěn)定并增強活性成分的滲入。也可以利用多相乳狀液組合物，例如水包油包水型。一般而言，此類單一的或多相的乳狀液包含水、潤膚劑和乳化劑作為必需成分。
另一種可利用的乳狀液載體系統(tǒng)是微乳狀液載體系統(tǒng)。此類系統(tǒng)包含約9％-約15％的角鯊?fù)?；約25％-約40％的硅油；約8％-約20％的脂肪醇；約15％-約30％的聚氧乙烯山梨糖醇酐單脂肪酸(以商品名Tweens在商業(yè)上可獲得)或其他非離子表面活性劑(non-ionics)；以及約7％-約20％的水。
還可以利用脂質(zhì)體制劑。這些制劑可以穩(wěn)定活性成分并且還可促進滲入不好的活性成分的送遞。根據(jù)Mezei & Gulasekharam，Journalof Pharmaceutics and Pharmacology，Vol.34(1982)，pp.473-474中所述方法或其修改，通過首先將活性成分與磷脂例如二棕櫚酰磷脂酰膽堿、膽固醇和水結(jié)合可以制備此類組合物。用于形成脂質(zhì)體的合適組合物的表皮脂質(zhì)可以替代磷脂。隨后將脂質(zhì)體制劑摻合到上述局部載體系統(tǒng)(例如，凝膠或水包油乳狀液)之一中以生產(chǎn)脂質(zhì)體制劑。Mezei，M.，“Liposomes as a Skin Drug Delivery System”，Topicsin Pharmaceutical Sciences(D.D.Breimer and P.Speiser，eds.)，Elsevier Science Publishers B.V.，New York，N.Y.，1985，pp.345-358中描述了局部應(yīng)用的脂質(zhì)體的其他組合物及化妝品/藥物用途。
如果局部組合物被配制為凝膠或化妝棒，則可以通過向乳膏或洗劑制劑中添加適當(dāng)量的增稠劑來配制此類組合物。
局部組合物也可以配制為美容產(chǎn)品，例如粉底化妝品。粉底化妝品是基于溶液或洗劑的，具有適當(dāng)量的增稠劑、色素和香料。
各種水溶性材料也可存在于組合物中。這些材料包括潤濕劑、蛋白質(zhì)和多肽以及防腐劑。此外，在本文中有用的局部組合物可以包含常規(guī)的化妝品佐劑，例如染料、遮光劑(例如二氧化鈦)、色素和香料。
在本發(fā)明中有用的局部組合物還可包括安全且有效量的滲入增強劑。滲入增強劑的優(yōu)選量為組合物的約1％-約5％。
US 6,068,834中描述了有用的滲入增強劑的實例。其他常規(guī)的護膚產(chǎn)品添加劑也可包括在組合物中?？梢岳?，例如，膠原蛋白、透明質(zhì)酸、彈性蛋白、水解產(chǎn)物、櫻草油、霍霍巴油、表皮生長因子、大豆皂角苷、粘多糖及其混合物。
在本發(fā)明的組合物中包含一種或多種防曬劑是需要的。各種各樣的常規(guī)防曬劑公開于，例如，Cosmetics，Science and Technology 2ndEdition(1972)，Vol.1，Chapter VIII，pages 189及以下所述。也參見US 6，068,834。
防曬劑必須與活性成分相容。組合物優(yōu)選包含約1％-約20％，更優(yōu)選約2％-約10％的防曬劑。確切的量將依賴于所選擇的遮光劑和所需防曬因子(SPF)而變化。
向本發(fā)明的任何組合物中可以添加試劑以改進那些組合物的皮膚牢固性，特別是增強它們對于被水洗掉或擦掉的抗性。提供這個好處的優(yōu)選試劑為乙烯和丙烯酸的共聚物。包含這種共聚物的組合物公開于U.S.4,663,157中。
本發(fā)明涉及抑制哺乳動物，一般為人的皮膚中黑色素產(chǎn)生的方法。在一個實施方案中，此類方法包括將安全且有效量的本發(fā)明組合物施用于皮膚或其皮膚的區(qū)域。活性劑的量及應(yīng)用頻率將依皮膚的初始狀況以及所需最終結(jié)果而變化。一般地，應(yīng)該以足夠的量以及足夠的時間段施用組合物至使皮膚明顯變白。
任何低于毒性水平的劑量均可使用，因此預(yù)期對于某些劑量形式，特別是局部劑量形式，“劑量”為提供所需效果的任何量，并且由于應(yīng)用頻率和應(yīng)用量，所述量應(yīng)該如此大以致于最大有效量是不相關(guān)的。
在局部組合物中安全且有效量的活性成分的應(yīng)用一般為每次應(yīng)用約1μg-約1mg/cm2皮膚，優(yōu)選每次應(yīng)用約2μg-約800μg/cm2皮膚，更優(yōu)選約30μg-約700μg/cm2皮膚，最優(yōu)選約75μg-約250μg/cm2皮膚。應(yīng)用頻率一般為一天約4次到一周約2次，更優(yōu)選為一天約3次到每隔一天約1次，更優(yōu)選每天至少2次。一般優(yōu)選至少一次應(yīng)用發(fā)生在晚上。
全身組合物本發(fā)明的組合物可以與藥物學(xué)上可接受的載體或稀釋劑組合以生產(chǎn)藥物組合物。適合用于此類組合物的藥物學(xué)上可接受的稀釋劑或載體是藥學(xué)領(lǐng)域眾所周知的。本發(fā)明的組合物一般包含0.1-35wt％的每種活性成分，例如1-25wt％的活性成分，更優(yōu)選至少5或10wt％的活性成分。
藥物組合物可以由固體劑量形式組成，例如藥的片劑、硬明膠膠囊、軟明膠膠囊、散裝粉末以及微膠囊。替代地，它可以由液體劑量形式組成，例如水性或非水性溶液、乳狀液或懸浮液。
用于經(jīng)口施用的固體組合物是本發(fā)明的優(yōu)選組合物。本發(fā)明的固體組合物優(yōu)選以單位劑量形式制備，例如以片劑和膠囊形式。在崩解劑，例如玉米淀粉，和潤滑劑，例如硬脂酸鎂存在下，通過將活性組合與惰性稀釋劑例如磷酸鈣混和并通過已知方法將混合物制片，可以制備合適的片劑。如果需要，此類片劑可以通過已知方法配備腸包衣，例如通過使用乙酸鄰苯二甲酸纖維素。類似地，任選為珠形、具有或不具有添加的賦形劑、包含活性組合的膠囊，例如硬或軟明膠膠囊，可以通過常規(guī)方法制備，并且如果需要可以以已知方式配備腸包衣。可以用本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方式配制片劑，從而提供本發(fā)明化合物的受控制的釋放。
本發(fā)明藥物組合物的受控制的釋放形式包括快速釋放制劑，例如可溶性顆?；蛉刍锾畛?melt filled)快速釋放膠囊，延遲釋放制劑，例如配備有腸包衣的片劑，所述腸包衣例如乙酸鄰苯二甲酸纖維素，以及，特別是，緩釋制劑。眾多種類的緩釋制劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。一般地，活性組合可以封裝在延遲釋放的包衣內(nèi)，所述包衣例如纖維素醚和丙烯酸酯的共聚物，或可以與小粒子例如離子交換樹脂珠結(jié)合。替代地，活性組合可以摻合到包含釋放延遲劑的基質(zhì)中，所述基質(zhì)例如親水性樹膠例如黃原膠，纖維素衍生物例如羥丙基甲基纖維素，或多糖、蠟或塑料材料。
活性組合可以被配制成固體劑量形式，在其中兩種活性成分保持分離。例如，劑量形式可以是雙層片劑，其中活性成分包含于不同層中?？梢耘渲撇煌膶?，從而提供每種藥的最佳釋放曲線(profile)。
液體填充組合物，例如粘性液體填充、液體糊劑填充或觸變性液體填充，也適合于經(jīng)口施用。通過將活性組合與某些天然植物油脂肪酸酯混合可以獲得熔化物填充組合物，所述天然植物油脂肪酸酯例如可由Gattefosse獲得的GelucireTM范圍，以提供多種釋放率。合適的熔化物填充膠囊包含10-80％的總活性成分以及20-90％的脂肪酸酯賦形劑，所述脂肪酸酯賦形劑包括一種或多種天然植物油脂肪酸的多元醇酯和甘油三酯。
優(yōu)選的經(jīng)口液體組合物包含1-5wt％的每種活性成分連同1-50wt％的稀釋劑，其余用無菌水補足。任選地組合物可以包含懸浮劑、增稠劑、助溶劑例如醇和/或防腐劑。合適的稀釋劑包括增甜劑，例如山梨糖醇、木糖醇或蔗糖。合適的懸浮劑或增稠劑包括纖維素樹膠、瓊脂或天然樹膠，例如黃原膠?？梢蕴砑颖绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的調(diào)味劑或其他味道掩蔽劑，例如糖精、糖精鈉、acesulpham K或阿斯巴甜。
通過將活性成分與已知用于此類施用的藥物形式組合可以制備適合腸胃外施用的本發(fā)明組合物，例如活性成分在適當(dāng)溶劑例如鹽水中的無菌懸浮液或無菌溶液。
優(yōu)選的施用方式為經(jīng)口。
一般地，應(yīng)該以足夠的量以及足夠的時間段施用組合物至使皮膚明顯變白。
所施用的化合物的量取決于來自藥物組合物的化合物的生物利用率，特別是采用經(jīng)口施用時。然而，一般地，本發(fā)明的化合物給藥的量為約0.01mg/kg-約100mg/kg體重，優(yōu)選約0.1-約30mg/kg體重。藥物組合物的量取決于化合物在其配方內(nèi)的百分比，所述配方隨每劑所需的化合物量、其穩(wěn)定性、釋放特性以及其他藥物學(xué)參數(shù)而變。劑量的施用一般為每周1次或2次到每天1次或2次。
單獨地，活性成分的優(yōu)選劑量設(shè)定如下類黃酮，例如Pycnogenol至少20或50mg/天。
維生素C至少200或500mg/天。
維生素E至少500mg/天。
維生素A至少0.5或1mg/天。
尼克酸，例如煙酰胺至少20或50mg/天。
維生素B12至少20或50μg/天。
L-半胱氨酸至少100或200mg/天。
所述施用途徑和劑量預(yù)期僅作為指導(dǎo)，因為一個有經(jīng)驗的從業(yè)者能夠很容易地決定任何特定個體的最佳施用途徑和劑量。
另一種全身給藥方式包括在食品中給藥任何上述組合物，這因此不必要使用藥物學(xué)上可接受的載體。
如本文所使用的，術(shù)語“食品”既包括如所指的食品也包括飲料。如所指的合適的食品包括涂抹食品、乳制品(包括乳和酸乳酪)、甜點、方便食品/小吃、早餐谷類食物和谷類塊狀食物、方便食物(ready-cook meals)、面包和冷凍甜食例如冰淇淋、冰果汁和針錦果子露以及酸奶冰淇淋。食品還包括飲食/營養(yǎng)補充劑。合適的飲料包括茶、茶味飲料、咖啡、軟飲料(例如碳酸橙汁飲料等)以及果汁。
食品一般補充有本發(fā)明的活性成分，從而它們包含的活性成分的量比它們通常包含的更高。
當(dāng)活性成分在局部和全身方案之間分開時，最佳日劑量范圍的上限值和下限值如適當(dāng)?shù)馗鶕?jù)在局部和全身之間的分離成比例。
用途本發(fā)明的組合物可以用于調(diào)節(jié)哺乳動物，特別是人的皮膚中黑色素的產(chǎn)生。更具體而言，它們可以用于增加皮膚中亮黑色素∶暗黑色素的比率，例如通過抑制皮膚中暗黑色素(真黑色素)的產(chǎn)生。優(yōu)選暗黑色素的產(chǎn)生減少至少15％，更優(yōu)選至少20％或25％。亮黑色素的產(chǎn)生可以增加、減少或保持基本不變。優(yōu)選亮黑色素的產(chǎn)生增加至少20％，更優(yōu)選至少50％。如下文實驗部分所述，例如，利用MelanodermTM系統(tǒng)可以測定黑色素產(chǎn)生的變化。
優(yōu)選亮黑色素∶暗黑色素的比率相對于對照增加至少1.5倍(按暗黑色素相對于對照的百分比除亮黑色素相對于對照的百分比進行測量，例如如果亮黑色素增加至對照的150％而暗黑色素減少為對照的50％，則相對于對照的比率為3∶1)。更優(yōu)選亮黑色素∶暗黑色素的比率增加至少2倍。因此，本發(fā)明的組合物可以用于促使哺乳動物例如人的皮膚增亮。增加皮膚中亮黑色素∶暗黑色素的比率而不是簡單抑制兩種類型黑色素的產(chǎn)生的優(yōu)點在于產(chǎn)生了較好的皮膚色調(diào)。
在一個實施方案中，組合物用于在個體皮膚的光保護區(qū)/太陽保護區(qū)(sun-protected area)中促使皮膚增亮，例如抑制暗黑色素的產(chǎn)生和/或增加亮黑色素∶暗黑色素的比率。
現(xiàn)在參考下列實施例進一步描述本發(fā)明，所述實施例只是說明性的并且是非限制性的。
實施例1在這些實施例中，利用商業(yè)上可獲得的MelanodermTM系統(tǒng)測試評估各種試劑，單獨地和組合地，影響暗黑色素和亮黑色素水平的能力。
類黃酮的來源是松樹皮提取物(Pycnogenol)，從Solgar獲得(Pycnogenol30mg)。其他試劑從Sigma獲得。
表1-測試的試劑。
測試的組合1.煙酰胺2.維生素A3.維生素B124.半胱氨酸5.Pycnogenol+維生素C+維生素E6.Pycnogenol+維生素C+維生素E+煙酰胺7.Pycnogenol+維生素C+維生素E+煙酰胺+維生素A8.Pycnogenol+維生素C+維生素E+煙酰胺+維生素A+維生素B12+半胱氨酸。
MelanodermTM處理方案MelanoDermTMMatTeks系統(tǒng)由正常的、人來源的表皮角質(zhì)形成細(xì)胞(NHEK)和黑色素細(xì)胞(NHM)組成，所述細(xì)胞被培養(yǎng)至形成多層的、高度分化型人表皮。共培養(yǎng)物內(nèi)的NHM經(jīng)歷自發(fā)性黑色素生成，從而導(dǎo)致產(chǎn)生各種色素沉著水平的組織。使用無人工黑色素生成刺激物例如TPA和IBMX的無血清培養(yǎng)基產(chǎn)生組織。在空氣-液體界面上在細(xì)胞培養(yǎng)插入物中使培養(yǎng)物生長，從而允許模擬待測試劑的局部應(yīng)用。將試劑引入培養(yǎng)基中模擬全身應(yīng)用。因此，該模式提供了一種有用的體外評價試劑的方式，所述試劑設(shè)計用于調(diào)節(jié)皮膚色素沉著。
關(guān)于送遞，按MatTek的規(guī)程利用無菌技術(shù)，將melanoderm(MatTek MEL-300-B)放置在含5ml預(yù)加溫維持培養(yǎng)基(EPI-100-MM-PRF)的6孔板中的金屬環(huán)支架上。在37℃和4％ CO2進行過夜培養(yǎng)以使melanoderm充分恢復(fù)并平衡。一旦放置在這些條件下，MEL-300組織就經(jīng)歷黑色素生成和分化。
次日早晨開始處理。將待測試劑溶于適當(dāng)溶劑中并以預(yù)估計黑色素細(xì)胞的細(xì)胞毒性的終濃度添加到加溫培養(yǎng)基中。每次更換培養(yǎng)基，從melanoderm中吸出用過的培養(yǎng)基并保存用于測試毒性(乳酸脫氫酶(Promega))和白細(xì)胞介素-1的釋放(R&D系統(tǒng))，并用新鮮配制的加測試試劑的培養(yǎng)基劑次替代，所述試劑不論是否在melanoderm培養(yǎng)基內(nèi)。將Melanoderm放回培養(yǎng)箱中。每48小時重復(fù)一次這種處理方案，直至在對照和測試試劑之間觀察到相對的變暗差異。
關(guān)于變暗差異的觀察，用照相記錄微觀和宏觀的變暗。melanoderm組織的收獲涉及從其塑料支架上切下組織并隨后定量處理后相對未處理存在的黑色素。
來自Melanoderm組織的黑色素的選擇性增溶作用(1)堿溶性黑色素(亮黑色素)的定量從塑料支架上切下melanoderm樣品并測量組織的凈重。將200μl 1M氫氧化鈉/8M尿素加入melanoderm樣品中，組織在微量離心管中勻漿。將樣品在室溫(RT)下斷斷續(xù)續(xù)地渦旋混合(whirlimix)30分鐘以釋放可溶的黑色素。在13,000rpm離心樣品10分鐘并將含有可溶性黑色素的上清液移至新管中。
通過添加200μl氯仿并隨后通過1分鐘的有力混合從上清液中提取出蛋白質(zhì)。通過13,000rpm離心10分鐘分離相。在微量滴定板中加入150μl上清液(一式兩份)并確定OD340nM。
(2)堿不溶性黑色素(暗黑色素)的定量將1M NaOH加入包含不溶性黑色素的剩余沉淀中并將樣品渦旋1分鐘。隨后將樣品在37℃水浴中溫育96小時，同時每天一次進行混合以釋放不溶性黑色素。樣品隨后和200μl氯仿在13,000rpm離心10分鐘并將190μl上清液移至新管中。再次離心上清液并將150μl上清液移至微量滴定板中用于分析340nm處的吸收。
絕對的黑色素濃度的計算計算出絕對的黑色素，作為由先前測定的亮黑色素標(biāo)準(zhǔn)曲線計算出的實際的黑色素量，所述曲線為x＝(y-0,003)/4.76423(其中x＝黑色素的濃度而y＝340nm處的光密度)。
對于暗黑色素，曲線為x＝(y-0.00553)/3.70312。
結(jié)果
用Pycnogenol+維生素C+維生素E+煙酰胺的組合處理減少的由melanoderm產(chǎn)生的總黑色素在很大程度上超過了單獨的煙酰胺或者Pycnogenol+維生素C+維生素E的組合。當(dāng)加入維生素A用于產(chǎn)生五組分的組合物時，可以看到黑色素產(chǎn)生的進一步抑制。通過包含維生素B12和半胱氨酸，這種減少被進一步增強。在所有三種情況下可溶性黑色素增加，而在所有三種情況下不溶性黑色素減少。
這些結(jié)果顯示在所有情況下類黃酮(Pycnogenol)、維生素C、維生素E和煙酰胺的組合以協(xié)同的方式抑制暗黑色素的產(chǎn)生并增加亮黑色素的產(chǎn)生。在與維生素A的組合中可以看到進一步的效果，還包含維生素B12和半胱氨酸的七種組分組合得到最佳結(jié)果。
實施例2-體內(nèi)功效人的臨床研究研究目的本研究有兩個主要目的檢查經(jīng)口營養(yǎng)補充劑的黑色素減少(hypopigmenting)效果。
檢查經(jīng)口營養(yǎng)補充劑和局部增亮產(chǎn)品之間可能的協(xié)同亮膚效果。
設(shè)計及方法本研究為平行的、雙盲的、隨機的、以安慰劑為對照的探索性試驗?；谧畲蝺?yōu)微量營養(yǎng)物狀況選擇80名參與者參加本研究。在平行設(shè)計中將她們隨機分為兩個相等大小的組以接受具有或不具有活性成分的補充劑，時間段為12周。在干預(yù)期間受試者還在一只臂上應(yīng)用局部產(chǎn)品。局部增亮產(chǎn)品為商業(yè)上可獲得的Ponds DoubleWhite。研究經(jīng)口和局部亮膚之間的協(xié)同作用時，受試者充當(dāng)她們自己的對照。
在干預(yù)前(基線，T1)、干預(yù)4周后(T5)、干預(yù)8周后(T9)以及再次在干預(yù)結(jié)束時(T13)進行照相、比色計(chromameter)、專家評估、黑色素測定儀(Mexameter)、定向差異、血液和尿取樣。在這些時間還完成了自我評估問卷，所述問卷關(guān)于自身察覺的皮膚顏色變化。在干預(yù)前(基線，T1)、干預(yù)8周后(T9)以及再次在干預(yù)結(jié)束時(T13)進行評估皮膚維生素狀況的取樣和皮脂收集。在基線處(T1)、干預(yù)8周后(T9)以及在干預(yù)結(jié)束時(T13)進行了水合和屏障功能。在基線處(T1)和在干預(yù)結(jié)束時(T13)進行彈性測量、復(fù)制物收集和皮膚活組織檢查。
受試者是健康的、女性志愿者，年齡為20-50歲，具有次最優(yōu)的微量營養(yǎng)物狀況，體重指數(shù)(BMI)為18-23kg/m2并且是不吸煙者。
經(jīng)口產(chǎn)品向受試者提供膠囊(產(chǎn)品/安慰劑)。1個經(jīng)口補充劑的劑量由3個膠囊組成，即1個脂溶性以及2個水溶性膠囊。每人每天消耗2劑。
那些接受測試膠囊的受試者消耗Pycnogenol 100mg/天維生素C 1000mg/天維生素E 500mg/天維生素A 1.5mg/天煙酰胺 100mg/天維生素B12100μg/天L-半胱氨 500mg/天酸局部產(chǎn)品將測定量的產(chǎn)品每天2次應(yīng)用于處理臂的肩到腕。早晨應(yīng)用Ponds Day Essence而晚上應(yīng)用Ponds Night Essence(沐浴或淋浴后)。
主要的臨床終點為如由比色計測量的T13的內(nèi)上(IU)臂“太陽保護”部位的皮膚光亮度。這種比色法通過記錄由皮膚反射的光的白-黑(L)、綠-紅(a)和黃-藍(lán)(b)顏色譜測量皮膚的整體光亮度/暗度。
結(jié)果68名日本女性受試者完成了本研究。
用比色計測量時，與安慰劑相比，補充劑阻止了內(nèi)上臂皮膚的變暗。比較由皮膚反射的白-黑(L)、綠-紅(a)和黃-藍(lán)(b)顏色譜時，組間差異是統(tǒng)計學(xué)顯著的(分別為P＝0.045，P＝0.038以及P＝0.031)。
與安慰劑相比較時，補充劑改善了鳥足區(qū)(crow foot area)。差異是統(tǒng)計學(xué)顯著的(P＝0.01)。
補充劑至少與Ponds Double White一樣好或較之更好地阻止了內(nèi)上臂皮膚的變暗。
在上述單個部分提及的本發(fā)明的各種特征和實施方案適當(dāng)?shù)貞?yīng)用于其他部分，已作必要的修正。因此在一個部分中說明的特征適當(dāng)?shù)乜梢耘c其他部分中說明的特征相結(jié)合。
上述說明書中所提及的所有出版物均引入本文作為參考。在不背離本發(fā)明的范圍的情況下，本發(fā)明所述方法和產(chǎn)品的各種修改和變化對于本領(lǐng)域的技術(shù)人員是顯而易見的。盡管本發(fā)明結(jié)合具體的優(yōu)選實施方案進行描述，但應(yīng)當(dāng)理解如所請求保護的本發(fā)明不應(yīng)不適當(dāng)?shù)叵抻诖祟惥唧w的實施方案。事實上，所述用于實現(xiàn)本發(fā)明的模式的各種修改預(yù)期包括在下列權(quán)利要求范圍內(nèi)，所述修改對于相關(guān)領(lǐng)域的技術(shù)人員是顯而易見的。
權(quán)利要求
1.一種組合物，其包含類黃酮、維生素C、維生素E和尼克酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的組合物，其進一步包含維生素A。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的組合物，其進一步包含維生素B12。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或權(quán)利要求3的組合物，其進一步包含半胱氨酸。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任何一項的組合物，其中該類黃酮以松樹皮提取物的形式存在。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任何一項的組合物，其中該組合物被配制用于全身施用。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任何一項的組合物，其中該組合物被配制用于局部施用。
8.一種包括固體劑量形式的亮膚產(chǎn)品，所述固體劑量形式包含有效量的根據(jù)前述權(quán)利要求中任何一項的組合物。
9.一種局部亮膚產(chǎn)品，其包含有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-7中任何一項的組合物。
10.一種抑制哺乳動物皮膚中黑色素產(chǎn)生的方法，該方法包括對所述人類施用有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-7中任何一項的組合物。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中該組合物為全身施用的。
12.根據(jù)權(quán)利要求10的方法，其中該組合物為局部施用的。
13.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任何一項的組合物，其用于抑制哺乳動物皮膚中黑色素的產(chǎn)生。
14.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任何一項的組合物在制備用于抑制哺乳動物皮膚中黑色素產(chǎn)生的組合物中的用途。
15.一種增加哺乳動物皮膚中亮黑色素對暗黑色素比率的方法，該方法包括對所述人類施用有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-7中任何一項的組合物。
16.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任何一項的組合物，其用于增加哺乳動物皮膚中亮黑色素對暗黑色素的比率。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任何一項的組合物在制備用于增加哺乳動物皮膚中亮黑色素對暗黑色素比率的組合物中的用途。
18.一種抑制個體皮膚中黑色素從黑色素細(xì)胞轉(zhuǎn)移到角質(zhì)形成細(xì)胞的方法，其中所述方法包括對所述個體施用有效量的根據(jù)權(quán)利要求1-6中任何一項的組合物。
全文摘要
提供了一種包含類黃酮、維生素C、維生素E和尼克酸的組合物。該組合物可以用作亮膚劑。
文檔編號A61Q19/00GK1960700SQ200580017184
公開日2007年5月9日 申請日期2005年3月10日 優(yōu)先權(quán)日2004年3月30日
發(fā)明者P·R·亞特斯, R·L·查爾斯紐沙姆 申請人:荷蘭聯(lián)合利華有限公司