專利名稱：蠶蛹α-亞麻酸超臨界CO₂萃取分離純化方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種天然生物活性成分的提取及純化的方法，具體涉及一種可應(yīng)用于大規(guī) 模生產(chǎn)的蠶蛹O-亞麻酸超臨界C02萃取分離純化方法。
背景技術(shù)：
純天然生物蠶蛹"-亞麻酸的生理與藥理作用及應(yīng)用。"-亞麻酸(c-Linolenic acid," -LNA)是人類生命的核心物質(zhì)，為"-3系列多不飽和脂肪酸，是維系人類腦進(jìn)化、大腦皮 質(zhì)功能、視網(wǎng)膜、睪丸及精子中乙醇胺磷脂和神經(jīng)磷脂轉(zhuǎn)化、代謝功能的生命核心物質(zhì)， 為體內(nèi)"-3系列多烯脂肪酸EPA和DHA的良好供體。o-LNA在人體內(nèi)不能合成，必須 從體外攝取。1990年3月，華盛頓"-3系列多不飽和脂肪酸國(guó)際會(huì)議上確認(rèn)"-LNA為對(duì) 人體非常重要的人體"必需脂肪醇"。早在1978年，聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織宣布將其作為人類 食物中的"必需脂肪酸"。人體一旦長(zhǎng)期缺乏。-LNA，將導(dǎo)致腦器官、視覺器官功能衰 退和老年性癡呆發(fā)生，并引起高血脂、高膽固醇、高血壓及癌癥等疾病的發(fā)病率上升。目 前，國(guó)外在美國(guó)國(guó)立癌癥研究所(NCI)已將"-LNA列為防癌抗癌保健功能食品上市； 日本亦作為防癌保健品上市；德、日等國(guó)家將。-LNA作為藥物及食品添加劑開發(fā)多項(xiàng)專 利。近年來，o-LNA對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)的功能研究，如改善記憶力、改善學(xué)習(xí)能力、抑制動(dòng)脈 硬化引起的癡呆癥、抑制阿爾茨海默氏癥即老年性癡呆、改善視力等功能引起極大關(guān)注。
利用超臨界C02萃取蠶蛹C7-亞麻酸的工藝與傳統(tǒng)的有機(jī)溶劑萃取法和壓榨法相比，具有
提取率高，操作溫度低，可避免蠶蛹蛋白和不飽和脂肪酸的破壞；利用尿素包合法分離純 化o-亞麻酸與傳統(tǒng)工藝相比，該法工藝比較成熟，所需設(shè)備相對(duì)簡(jiǎn)單，成本低廉，尿素 包合物形成后，還可有效地保護(hù)雙鍵不受氧化，能較完全地保留其生物活性，是大規(guī)模分 離、富集各種不飽和脂肪酸的理想方法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種蠶蛹"-亞麻酸分離純化方法,目的在于解決傳統(tǒng)提取純化方法中提 取率低、"-亞麻酸破壞程度大、費(fèi)用高等缺點(diǎn)。 本發(fā)明的技術(shù)方案如下
一種蠶蛹a -亞麻酸分離純化方法，采用超臨界C02萃取工藝,步驟如下
a. 以天然生物蠶蛹為原料，取蠶蛹干粉置萃取釜中，以超臨界C02為萃取劑，在萃取 壓力20~40 MPa、萃取溫度為40 60'C的條件下萃取0.5 5.0 h;在解析壓力4.0 12 MPa、 解析溫度30 60'C進(jìn)行解析，得蛹油。
b. 取蛹油置于釜中，加入氫氧化鈉醇溶液，在30-75。C條件下攪拌0.5~24h，加水至 溶液澄清，調(diào)pH為1.0-5.0，溶液用有機(jī)溶劑萃取，取有機(jī)溶劑層用水洗至中性，干燥， 得混合脂肪酸。
C.將混合脂肪酸按照混合脂肪酸和尿素為1: 4 1: 12的質(zhì)量比加入濃度為
20%~55%\^尿素的甲醇溶液中，于一15 一2(TC條件下攪拌包合12~36h，過濾，濾渣用 甲醇洗滌，干燥，即得。
上述的步驟b.中氫氧化鈉乙醇溶液的濃度為1.7%~6.5% (w/v)。
優(yōu)選的各步驟條件如下
所述步驟a.中，蠶蛹干粉300g置lL萃取釜中，萃取壓力25MPa、萃取溫度為55t:,萃 取2.5h;解析壓力6.0MPa、解析溫度4(TC。
所述步驟b.中，加入氫氧化鈉乙醇溶液，在65。C條件下攪拌2h。
所述步驟b.中，調(diào)pH為2.5。
所述步驟b.中，有機(jī)溶劑為正己烷。
所述步驟c.中，混合脂肪酸和尿素為1: IO的質(zhì)量比。
所述步驟c.中，尿素的甲醇溶液濃度為30%wt。
所述步驟c.中，攪拌包合24h。
本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)是低溫操作，可避免多不飽和脂肪酸破壞、產(chǎn)品質(zhì)量純度高、萃取時(shí)間短、 操作簡(jiǎn)單方便，與傳統(tǒng)的溶劑法(如石油醚法)和壓榨法相比，具有收率高、工作效率高、 C02可重復(fù)利用、無(wú)殘留溶劑、產(chǎn)品質(zhì)量高、工藝方法技術(shù)含量高、簡(jiǎn)單通用的優(yōu)點(diǎn)，是 一種有效、經(jīng)濟(jì)、可應(yīng)用于工廠機(jī)械化大規(guī)模生產(chǎn)天然生物活性成分的提取純化工藝。
具體實(shí)施例方式
以下實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明，本發(fā)明不受此限制。
實(shí)施例1
a. 以天然生物蠶蛹為原料，取蠶蛹粉碎、千燥得干粉，取干粉300g置1L萃取釜中， 以超臨界C02為萃取劑，在萃取壓力25MPa、萃取溫度為55'C的條件下萃取2.5h;在解 析壓力6.0MPa、解析溫度40。C進(jìn)行解析，得蛹油。
b. 取蛹油置于釜中，加入濃度為3.5% (w/v)氫氧化鈉乙醇溶液，在65'C條件下攪 拌2h，加水至溶液澄清，調(diào)pH為2.5，溶液用正己垸萃取，取正己垸層用水洗至中性， 干燥，得混合脂肪酸。
c. 將混合脂肪酸按照混合脂肪酸和尿素為1: 3的質(zhì)量比例加入濃度為30% wt尿素 的甲醇溶液中，于-20。C條件下攪拌包合24h，過濾，濾渣用甲醇洗滌，干燥，即得。
實(shí)施例2
a. 以天然生物蠶蛹為原料，取蠶蛹粉碎、干燥得干粉，取干粉300g置1L萃取釜中， 以超臨界C02為萃取劑，在萃取壓力20MPa、萃取溫度為40"C的條件下萃取0.5h;在解 析壓力4.0MPa、解析溫度30'C進(jìn)行解析，得蛹油。
b. 取蛹油置于釜中，加入濃度為4.5% (w/v)氫氧化鈉乙醇溶液，在3(TC條件下攪 拌24h，加水至溶液澄清，調(diào)pH為l.O，溶液用正己垸萃取，取正己垸層用水洗至中性， 干燥，得混合脂肪酸。
c.將混合脂肪酸按照混合脂肪酸和尿素為1: 1的質(zhì)量比加入濃度為20% Wt尿素的 甲醇溶液中，于-15'C條件下攪拌包合36h，過濾，濾渣用甲醇洗滌，干燥，即得。 實(shí)施例3
a. 以天然生物蠶蛹為原料，取蠶蛹粉碎、干燥得干粉，取干粉300g置1L萃取釜中， 以超臨界C02為萃取劑，在萃取壓力40MPa、萃取溫度為60'C的條件下萃取5.0h;在解 析壓力12MPa、解析溫度60'C進(jìn)行解析，得蛹油。
b. 取蛹油置于釜中，加入濃度為6% (w/v)氫氧化鈉乙醇溶液，在75'C條件下攪拌 0.5h，加水至溶液澄清，調(diào)pH為5.0，溶液用正己烷萃取，取正己垸層用水洗至中性，干 燥，得混合脂肪酸。
c. 將混合脂肪酸按照混合脂肪酸和尿素為1: 12的質(zhì)量比加入濃度為55。/。wt尿素的 甲醇溶液中，于-40'C條件下攪拌包合12h，過濾，濾渣用甲醇洗滌，干燥，即得。
權(quán)利要求
1. 一種蠶蛹a -亞麻酸分離純化方法，采用超臨界C02萃取工藝，步驟如下a. 以天然生物蠶蛹為原料，取蠶蛹干粉置萃取釜中，以超臨界C02為萃取劑，在萃取 壓力20~40 MPa、萃取溫度為40 60。C的條件下萃取0.5~5.0 h;在解析壓力4.0-12 MPa、 解析溫度30 60°C進(jìn)行解析，得蛹油；b. 取蛹油置于釜中，加入氫氧化鈉醇溶液，在30-75"C條件下攪拌0.5 24h，加水至 溶液澄清，調(diào)pH為1.0 5.0，溶液用有機(jī)溶劑萃取，取有機(jī)溶劑層用水洗至中性，干燥， 得混合脂肪酸；氫氧化鈉乙醇溶液的濃度為1.7%~6.5% (w/v);c. 將混合脂肪酸按照混合脂肪酸和尿素為1: 4 1: 12的質(zhì)量比加入濃度為 20%~55%\￥1尿素的甲醇溶液中，于一15 —20。C條件下攪拌包合12 36h，過濾，濾渣用 甲醇洗滌，干燥，即得。
2. 如權(quán)利要求1所述的蠶蛹a-亞麻酸分離純化方法，其特征在于所述步驟a.中，蠶蛹 干粉300g置1L萃取釜中，萃取壓力25MPa、萃取溫度為55°C,萃取2.5 h;解析壓力6.0 MPa、解析溫度40。C。
3. 如權(quán)利要求1所述的蠶蛹a-亞麻酸分離純化方法，其特征在于所述步驟b.中，加 入氫氧化鈉乙醇溶液，在65'C條件下攪拌2h。
4. 如權(quán)利要求1所述的蠶蛹a -亞麻酸分離純化方法，其特征在于所述步驟b.中,調(diào)pH 為2.5。
5. 如權(quán)利要求1所述的蠶蛹ci-亞麻酸分離純化方法，其特征在于所述步驟b.中，有 機(jī)溶劑為正己垸。
6. 如權(quán)利要求1所述的蠶蛹a -亞麻酸分離純化方法，其特征在于所述步驟c.中,混合 脂肪酸和尿素為1: IO的質(zhì)量比。
7. 如權(quán)利要求1所述的蠶蛹a -亞麻酸分離純化方法，其特征在于所述步驟c.中，尿 素的甲醇溶液濃度為30%wt。
8. 如權(quán)利要求1所述的蠶蛹a-亞麻酸分離純化方法，其特征在于所述步驟c.中,攪拌 包合24h。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種利用超臨界CO₂技術(shù)萃取及純化蠶蛹α-亞麻酸的方法。以天然生物蠶蛹干粉為原料，以超臨界CO₂為萃取劑，萃取得蛹油；蛹油加入氫氧化鈉醇溶液，攪拌，加水至澄清，再用有機(jī)溶劑萃取，將混合脂肪酸和尿素加入尿素的甲醇溶液中，-15～-20℃攪拌包合12～36h，過濾，濾渣用甲醇洗滌，干燥，即得。本發(fā)明系低溫操作，可避免多不飽和脂肪酸破壞、產(chǎn)品質(zhì)量純度高、萃取時(shí)間短、操作簡(jiǎn)單方便，與傳統(tǒng)的溶劑法和壓榨法相比，收率高、效率高、CO₂可重復(fù)利用、無(wú)殘留溶劑、產(chǎn)品質(zhì)量高，適用于工業(yè)機(jī)械化大規(guī)模生產(chǎn)。
文檔編號(hào)C11C1/00GK101121654SQ20071001632
公開日2008年2月13日 申請(qǐng)日期2007年7月24日 優(yōu)先權(quán)日2007年7月24日
發(fā)明者常建暉, 張四喜, 鄧樹海 申請(qǐng)人:山東大學(xué)