專利名稱：軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及到東北地區(qū)的一種漿果的無性繁殖方法，即軟棗獼猴桃的組織培養(yǎng)法。本發(fā)明屬于植物 組織培養(yǎng)技術(shù)和森林培育領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
軟棗獼猴桃果實(shí)是一種珍稀的、天然的、綠色的可食用漿果，因其潛在的營養(yǎng)價(jià)值和商用價(jià)值，是一 種世界珍稀的、純天然的、綠色的可食用漿果，是極具有開發(fā)前景的第三代水果之一。然而由于無計(jì)劃掠 奪式的采摘，致使軟棗獼猴桃資源遭到嚴(yán)重破壞，自然修復(fù)能力降低，蘊(yùn)藏量和可采量銳減，供需矛盾日 益加劇。
我國軟棗獼猴桃的育苗技術(shù)主要是無性繁殖(即分株、壓條、硬枝扦插、綠枝扦插)等技術(shù)，利用組 培技術(shù)繁育軟棗獼猴桃的資料極少。査閱大量相關(guān)資料發(fā)現(xiàn)，只有劉瑞林曾于2001年發(fā)表過組織培養(yǎng)方 面的簡報(bào)。但軟冬獼猴桃組織培養(yǎng)體系尚未建立，優(yōu)良品種的推廣普及尚未完成，苗木供求矛盾日益加劇， 嚴(yán)重影響了軟棗獼猴桃深加工業(yè)的發(fā)展。2007年我所對(duì)軟棗獼猴桃組織培養(yǎng)體系進(jìn)行了系統(tǒng)地研究。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明對(duì)軟棗獼猴桃采用組織培養(yǎng)技術(shù)，以休眠枝條水培后萌發(fā)的嫩枝為外植體，經(jīng)外植體滅菌、嫩 芽接種、分化增殖培養(yǎng)基篩選、生根培養(yǎng)基篩選等步驟，研究培養(yǎng)過程中試管苗的營養(yǎng)需求、激素對(duì)苗木 生長分化的調(diào)控，解決軟棗獼猴桃的微體快速增殖、誘導(dǎo)生根的重要技術(shù)問題，建立了完善的軟棗獼猴桃 組織培養(yǎng)體系，達(dá)到了高效誘導(dǎo)外植體分化增殖和高質(zhì)量保證幼苗成活的目的，并且保存了母體的全部優(yōu) 良性狀，遺傳性狀穩(wěn)定。這種方法可在短期內(nèi)形成大量優(yōu)良試管苗，進(jìn)行規(guī)?；⒐S化生產(chǎn)。


圖l軟棗獼猴桃水培嫩芽接種IO天的長勢情況，葉片展開，葉色濃綠
圖2 a部分處理繼代增殖培養(yǎng)25天分化的試管苗數(shù) b不同處理繼代增殖培養(yǎng)25天試管苗苗高 圖3 a軟棗獼猴桃四種生根處理培養(yǎng)30天，只有處理l未見生根，其余3個(gè)處理均已生根，其中處理4 的生根狀況為最好，生根率達(dá)87.0%。
具體實(shí)施例方式
以軟棗獼猴桃休眠枝條經(jīng)水培后萌發(fā)的嫩枝為外植體，具體由以下四個(gè)步驟組成-
(1) 外植體滅菌首先采用常規(guī)法將水培抽出的嫩芽用洗衣粉溶液洗凈，然后用0. 1%升汞滅菌5 分鐘，以無菌水浸泡40分鐘；
(2) 接種在無菌的條件下將嫩芽接種在初代培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 0. 5mg/L的6-節(jié)基腺嘌呤(6-BA) 、 lmg/L的赤霉素(GA3) ， PH5.8,培育基礎(chǔ)苗。培養(yǎng)溫度為25土2'C， 光照周期12h/d，光強(qiáng)度為20001ux，待培養(yǎng)20天后，苗高約3 4cm，即開始下一個(gè)階段；
(3) 繼代增殖將基礎(chǔ)苗轉(zhuǎn)移到繼代增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖培養(yǎng)。以MS+6-BA (0.5mg/L、 lmg/L) +ZT (0.5mg/L、 lmg/L)或IAA (0. 5mg/L、 lmg/L ) 8種培養(yǎng)基進(jìn)行篩選，培養(yǎng)溫度為25土2'C,光照周期 12h/d，光強(qiáng)度為20001ux，培養(yǎng)30天。結(jié)果最佳增殖培養(yǎng)基是在MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 0.5mg/L的6-芐基腺嘌呤(6-BA) 、 lmg/L的玉米素(ZT);培養(yǎng)25天，增殖倍數(shù)達(dá)4.0;
(4) 生根剪取增殖培養(yǎng)中長度為1. 5 2. Ocm的健壯苗接種到四種生根培養(yǎng)基上，采用單因素試驗(yàn) 設(shè)計(jì)進(jìn)行生根培養(yǎng)篩選。培養(yǎng)溫度為25士2'C，光照周期12h/d，光強(qiáng)度為20001ux。結(jié)果在MS培養(yǎng)基中 添加了0.2mg/L的吲哚丁酸(IBA)的培養(yǎng)基生根效果最好，在培養(yǎng)30天生根率達(dá)87. 0% 。
權(quán)利要求
軟棗獼猴桃(Actinidia arguta)的組織培養(yǎng)方法，其特征在于由以下四個(gè)步驟組成1.外植體滅菌 采用常規(guī)法將水培抽出的嫩芽用洗衣粉溶液洗凈，然后在超靜工作臺(tái)中用0.1％升汞滅菌5分鐘，以無菌水浸泡40分鐘；2.接種 在無菌的條件下將嫩芽接種在初代培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了0.5mg/L的6-芐基氨基嘌呤(6-BA)、1mg/L的赤霉素(GA3)，PH 5.8，培養(yǎng)溫度為25±2℃，光照周期12h/d，光強(qiáng)度為2000lux，待培養(yǎng)20天后，苗高約3～4cm，即開始下一個(gè)階段；3.繼代增殖 將所得的苗木轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖，該培養(yǎng)基是在MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了0.5mg/L的6-芐基腺嘌呤(6-BA)、1mg/L的玉米素(ZT)，PH 5.8，培養(yǎng)溫度為25±2℃，光照周期12h/d，光強(qiáng)度為2000lux，培養(yǎng)25天，增殖倍數(shù)達(dá)4.0；4.生根 剪取增殖培養(yǎng)中長度為1.5～2.0cm的健壯苗接種到生根培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基是在MS培養(yǎng)基中，添加了0.2mg/L的吲哚丁酸(IBA)，PH 5.8，培養(yǎng)溫度為25±2℃，光照周期12h/d，光強(qiáng)度為2000lux，30天生根率達(dá)87.0％。
1. 外植體滅菌采用常規(guī)法將水培抽出的嫩芽用洗衣粉溶液洗凈，然后在超靜工作臺(tái)中用0. 1%升汞滅 菌5分鐘，以無菌水浸泡40分鐘；
2. 接種在無菌的條件下將嫩芽接種在初代培養(yǎng)基上，該培養(yǎng)基是在MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 0.5mg/L 的6-芐基氨基嘌呤(6-BA) 、 lmg/L的赤霉素(GA3) ， ffl5.8，培養(yǎng)溫度為25士2。C，光照周期12h/ d，光強(qiáng)度為20001ux,待培養(yǎng)20天后，苗高約3 4cm，即開始下一個(gè)階段；
3. 繼代增殖將所得的苗木轉(zhuǎn)移到增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行增殖，該培養(yǎng)基是在MS常規(guī)培養(yǎng)基中添加了 0. 5mg/L的6-芐基腺嘌呤(6-BA) 、 lmg/L的玉米素(ZT) ， PH 5.8，培養(yǎng)溫度為25士2。C，光照周 期12h/d，光強(qiáng)度為20001ux，培養(yǎng)25天，增殖倍數(shù)達(dá)4. 0;
4. 生根剪取增殖培養(yǎng)中長度為1. 5 2. Ocm的健壯苗接種到生根培養(yǎng)基，該培養(yǎng)基是在MS培養(yǎng)基中， 添加了 0. 2mg/L的吲哚丁酸(IBA)， PH 5. 8，培養(yǎng)溫度為25土2。C，光照周期12h/ d ,光強(qiáng)度為20001ux, 30天生根率達(dá)87.0% 。
全文摘要
本發(fā)明屬于植物組織培養(yǎng)技術(shù)和森林培育領(lǐng)域，涉及軟棗獼猴桃(Actinidia arguta)的高效繁殖方法。該方法分為外植體滅菌、接種、繼代增殖、生根四個(gè)階段。該方法解決了軟棗獼猴桃的微體快速增殖、誘導(dǎo)生根的重要技術(shù)問題，達(dá)到了高效誘導(dǎo)外植體分化增殖和高質(zhì)量保證幼苗成活的目的，并且保存了母體的全部優(yōu)良性狀，遺傳性狀穩(wěn)定。這種方法可在短期內(nèi)形成大量優(yōu)良試管苗，進(jìn)行規(guī)?；⒐S化生產(chǎn)。
文檔編號(hào)A01H4/00GK101574056SQ20081006446
公開日2009年11月11日 申請(qǐng)日期2008年5月8日 優(yōu)先權(quán)日2008年5月8日
發(fā)明者蘭世波, 周志軍, 李海霞, 田新華, 邢亞娟 申請(qǐng)人:黑龍江省林業(yè)科學(xué)研究所