一種球毛殼菌生物菌肥粉劑的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種球毛殼菌生物菌肥粉劑的制備方法及應(yīng)用，尤其設(shè)及W球毛殼菌 煙laetomiumglobosum)ND35菌株的子囊抱子為活性成分的生物肥料粉劑的制備方法，屬 于農(nóng)業(yè)微生物領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 球毛殼菌（化aetomiumglobosum)ND35菌株是一株分離自健康毛白楊的植物內(nèi)生 真菌，屬于子囊菌口、核菌綱、球殼目、黑抱殼科、毛殼菌屬。
[0003] 球毛殼菌ND35菌株的抑菌譜很廣，對(duì)黃瓜枯萎病菌、苦瓜枯萎病菌、西瓜枯萎病 菌、黃瓜霜霉病菌、蘋果輪紋病菌、蘋果樹腐爛病菌、楊樹爛皮病菌和水泡潰瘍病菌W及立 枯絲核菌的菌絲生長都有明顯的括抗作用，代謝過程中能夠產(chǎn)生具有抑菌活性的抗生物 質(zhì)，并能抑制黃瓜枯萎病菌、苦瓜枯萎病菌、蘋果輪紋病菌和楊樹水泡潰瘍病菌等的抱子萌 發(fā)。在透射電鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)球毛殼ND35與立枯絲核菌接觸并發(fā)生重寄生作用后，球毛殼 ND35菌絲寄生到病原菌菌絲內(nèi)部后，在互作過程中產(chǎn)生了幾了質(zhì)酶和0 -1，3-葡聚糖酶， 會(huì)使其細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生素亂、細(xì)胞壁降解。
[0004] 已有的試驗(yàn)結(jié)果表明，球毛殼菌ND35菌株能有效定殖于蔬菜植物如苦瓜、黃瓜、 番茄、菜豆和經(jīng)濟(jì)林木如楊樹、核桃、板栗W及大田作物如甘馨、小麥、馬鈴馨、煙草、生姜的 植株中，并對(duì)黃瓜、苦瓜、茄子和番茄的生長有明顯的促進(jìn)作用；盆栽條件下接種球毛殼菌 ND35菌株后，可有效地防治黃瓜苗期巧倒病的發(fā)生，也能誘導(dǎo)番茄和菜豆對(duì)灰霉病菌產(chǎn)生 系統(tǒng)抗病性；還可有效防治菜豆立枯病。大田條件下對(duì)楊樹的側(cè)根和胸徑生長具有一定的 促進(jìn)作用并誘導(dǎo)其對(duì)腐爛病菌和葉誘病菌產(chǎn)生抗性。球毛殼菌ND35菌株對(duì)板栗側(cè)根和毛 細(xì)根的生長具有積極影響，可增加板栗花序的數(shù)量、側(cè)根和毛細(xì)根數(shù)量，在后期對(duì)地莖生長 和一級(jí)分枝數(shù)也產(chǎn)生明顯促生作用；對(duì)楊樹桿插苗、菜豆、黃瓜、煙草、生姜的生長表現(xiàn)出促 生作用。通過掃描電鏡觀察球毛殼菌ND35菌株對(duì)楊樹組培苗的侵染定殖發(fā)現(xiàn)：子囊抱子萌 發(fā)后，產(chǎn)生的菌絲多集中于根毛，但并不侵染根毛，主要通過根、莖部表面細(xì)胞間的縫隙侵 入，或在根表面形成附著胞或菌絲足，通過形成侵染釘直接從表皮細(xì)胞侵入，在葉部主要從 氣孔侵入葉片內(nèi)部，侵入根部的菌絲主要定殖于表皮細(xì)胞、外皮層細(xì)胞和細(xì)胞間隙，未進(jìn)入 內(nèi)皮層和維管束組織。
[0005] 球毛殼菌ND35菌株抗生物質(zhì)粗提物對(duì)黃瓜、菜豆和小麥種子的萌發(fā)沒有抑制作 用，能夠顯著增加須根數(shù)、根鮮重和促進(jìn)苗期生長，球毛殼菌ND35菌株活體菌劑的施用并 不會(huì)減少黃瓜、番茄和菜豆根際±壤的細(xì)菌總量，而對(duì)黃瓜根際±壤的有益菌數(shù)量積累有 一定的促進(jìn)作用。球毛殼菌ND35菌株的子囊抱子在河水、水庫水、自來水中均不能萌發(fā)且 能自行消解，當(dāng)濃度不大于l〇5c化/ml時(shí)，不會(huì)對(duì)魚類的生長造成影響；球毛殼菌ND35菌株 的子囊抱子對(duì)小白鼠急性經(jīng)口毒性屬于"低毒"級(jí)，急性經(jīng)皮膚單次刺激試驗(yàn)和經(jīng)兔眼單次 刺激試驗(yàn)結(jié)果均表明為"無刺激性";可推斷，球毛殼菌ND35菌株作為活體微生物制劑，與其 它微生物制劑一樣無毒、無污染、無殘毒，對(duì)±壤中其它有益微生物無不良影響，不影響± 壤和環(huán)境中微生態(tài)循環(huán)，用于設(shè)施蔬菜及陸地等作物±傳病害的生物防治和增產(chǎn)促生無明 顯性風(fēng)險(xiǎn)。
[0006] 球毛殼菌ND35菌株的環(huán)境適應(yīng)性非常強(qiáng)，能夠適應(yīng)惡劣的鹽堿條件。在室內(nèi)，W PDA為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，研究酸堿度和鹽分濃度對(duì)球毛殼菌ND35的菌絲生長和抱子萌發(fā)的影 響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)；在抑值3-12范圍內(nèi)，球毛殼菌ND35的菌絲能夠正常生長，在含1 % -10%的 Ca2\r、N和P的培養(yǎng)基中，球毛殼菌ND35的菌絲依舊能夠正常生長，且生長速率未受到酸 堿度和鹽分的影響；球毛殼菌ND35的子囊抱子在抑值為3-12范圍內(nèi)的PDB培養(yǎng)液中，抱 子的萌發(fā)也未受到影響。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種制備生物菌肥的方法。
[0008] 本發(fā)明提供的制備生物菌肥的方法包括如下步驟：將球毛殼菌（化aetomium globosum)ND35CGMCCNo. 4136的抱子、腐植酸和殼聚糖混勻，得到生物菌肥。
[0009]上述方法中，所述球毛殼菌（Qiaetomiumglobosum)ND35CGMCCNo. 4136 的抱子、 所述腐植酸和所述殼聚糖的配比為2XIQiicfu;(245-275)g;(35-4Wg。
[0010]上述方法中，所述球毛殼菌（Qiaetomiumglobosum)ND35CGMCCNo. 4136 的抱子 為小于100目的抱子粉。
[0011]上述方法中，所述球毛殼菌（Qiaetomiumglobosum)ND35CGMCCNo. 4136 的抱子 粉為將球毛殼菌（化aetomiumglobosum)ND35CGMCCNo. 4136抱子在培養(yǎng)料中發(fā)酵得到的 產(chǎn)物。
[0012] 上述方法中，所述發(fā)酵為將所述抱子W(1-3)X108c化/ml的量接種在含有食用菌 菌慷的培養(yǎng)料中；所述抱子具體W2Xl〇8c化/ml的量接種在所述含有食用菌菌慷的培養(yǎng)料 中。
[0013] 上述方法中，所述含有食用菌菌慷的培養(yǎng)料為將食用菌菌慷和培養(yǎng)液混勻得 到的；所述培養(yǎng)液是將±豆、葡萄糖和水混勻得到的；所述±豆、所述葡萄糖和所述水 配比為70-100)g; (7-10)g; 1000ml;所述±豆、所述葡萄糖和所述水的配比具體為 70g； 7g； 1000ml〇
[0014] 上述方法中，所述食用菌菌慷和培養(yǎng)液的質(zhì)量比為1 ; (2-4);所述食用菌菌慷和 培養(yǎng)液的質(zhì)量比具體為1 ; 2。
[0015] 上述方法中，所述發(fā)酵時(shí)間為25~30天；所述發(fā)酵溫度為20-30°C。
[0016] 上述方法中，所述發(fā)酵時(shí)間具體為28天；所述發(fā)酵溫度具體為25°C。
[0017]上述方法中，在將所述球毛殼菌（Chaetomiumglobosum)ND35CGMCCNo. 4136 的 抱子、所述腐植酸和所述殼聚糖混勻后還包括如下步驟：選取小于100目混勻后的產(chǎn)物。
[0018] 上述方法中，還包括在混勻時(shí)添加填料的步驟。
[0019] 上述方法中，所述填料為高嶺±。
[0020] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供由上述方法制備的生物菌肥。
[0021] 本發(fā)明的最后一個(gè)目的是提供上述生物菌肥在如下（1)-(14)中至少一種中的應(yīng) 用：
[0022] (1)增加植物的株高；
[0023] (2)提高植物的葉綠素a含量；
[0024] (3)提高植物的葉綠素b含量；
[0025] (4)提高植物的葉綠素總含量；
[0026] (5)提高植物的類胡蘿h素含量；
[0027] 做提高植物葉片的還原糖含量；
[002引 （7)提高植物葉片的脯氨酸含量；
[0029] (8)提高植物單株產(chǎn)量；
[0030] (9)增加植物的葉寬；
[0031] (10)增加植物的葉長；
[0032] (11)增加植物的地徑；
[0033] (12)促進(jìn)植物苗期的生長；
[0034] (13)促使植物提前開花結(jié)果；
[0035] (14)防治植物苗期巧倒病。
[0036] 上述應(yīng)用中，所述植物為辣椒和/或黃瓜。
[0037] 上述球毛殼菌（Qiaetomiumglobosum)ND35CGMCCNo. 4136或其抱子或其發(fā)酵產(chǎn) 物在作為生物菌肥添加劑或在制備生物菌肥添加劑的產(chǎn)品中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù) 范圍。
[003引本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)如下（1)-(5)所示：
[0039](1)本發(fā)明使用的抱子為毛殼菌的有性抱子，相對(duì)于木霉菌和非致病鑲刀菌等真 菌的無性抱子，有性抱子在抗逆性方面更具有優(yōu)勢(shì)，能夠有較長的貨架期。
[0040] (2)本發(fā)明發(fā)酵球毛殼菌ND35菌株的原材料是平茹、香茹、金針茹出茹后的廢棄 菌慷，該原料具有成本低、易獲得、培養(yǎng)性狀優(yōu)良、物理性狀好等優(yōu)點(diǎn)。
[0041] (3)本發(fā)明中球毛殼菌ND35菌株的固體培養(yǎng)流程方便簡(jiǎn)單，且適于大規(guī)模培養(yǎng)。
[0042] (4)本發(fā)明粉劑配方中添加了腐植酸與殼聚糖。腐植酸不僅具有肥料增效、改良± 壤、刺激作物生長、改善農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量等功能，還能夠?yàn)榍蛎珰ぞё犹峁┮粋€(gè)緩沖環(huán)境，提 高抱子的生存能力；殼聚糖不僅能夠給抱子的萌發(fā)提供營養(yǎng)，而且能夠誘導(dǎo)球毛殼菌產(chǎn)生 幾了質(zhì)酶，增強(qiáng)球毛殼菌對(duì)多種植物病原菌的括抗活性。
[0043] (5)本發(fā)明粉劑產(chǎn)品使用方法簡(jiǎn)單，可用于作物育苗前的拌種和移栽苗時(shí)的穴施， 因其活性成分--球毛殼菌ND35菌株是一種植物內(nèi)生真菌，可W快速定殖于植物體內(nèi)，使植 物終生受益。
[0044] (6)本發(fā)明采用簡(jiǎn)單的生產(chǎn)技術(shù)和生產(chǎn)設(shè)備，生產(chǎn)出的粉劑生物肥料價(jià)格低廉。該 產(chǎn)品不僅能夠防治多種植物病害，而且還對(duì)作物具有良好的促生作用，促生作用主要表現(xiàn) 在生物量的增加和產(chǎn)量的提高，具有良好的經(jīng)濟(jì)效益。
[0045] 本發(fā)明通過發(fā)酵生產(chǎn)球毛殼菌ND35的抱子粉，然后經(jīng)過粉碎、過篩后添加腐植酸 和殼聚糖，得到生物菌肥粉劑。通過試驗(yàn)表明；該生物菌肥粉劑不僅能夠防治多種植物病 害，還對(duì)作物具有良好的促生作用，使作物在生物量和產(chǎn)量方面有顯著的提高，具有良好的 經(jīng)濟(jì)效益；并且該生物菌肥粉劑使用簡(jiǎn)單，避免了飛揚(yáng)的微粉，減少了環(huán)境污染。在理論上 和市場(chǎng)需求上都具有非常大的可行性。
【附圖說明】
[0046] 圖1為田間應(yīng)用的球毛殼菌生物菌肥粉劑產(chǎn)品。
[0047] 圖2為球毛殼菌生物菌肥粉劑對(duì)辣椒生長的影響。其中，A為對(duì)辣椒株高生長的 影響；B為對(duì)辣椒葉綠素含量的影響（圖柱上方不同小寫字母表示0. 05水平上差異顯著）。
[0048] 圖3為球毛殼菌生物菌肥粉劑對(duì)黃瓜苗生長的影響。其中，A為球毛殼菌生物菌 肥粉劑對(duì)黃瓜葉片中還原糖含量的影響；B為球毛殼菌生物菌肥粉劑對(duì)黃瓜葉片中脯氨酸 含量的影響（圖柱上方不