一種球毛殼菌生物菌肥顆粒劑的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種球毛殼菌生物菌肥顆粒劑的制備方法及應(yīng)用，尤其設(shè)及W球毛殼 菌煙laetomiumglobosum)ND35菌株的子囊抱子為活性成分的生物肥料顆粒劑的制備方 法，屬于農(nóng)業(yè)微生物領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 用于生物防治試驗(yàn)的生防真菌主要有：木霉菌（Trichoderma)、毛殼菌 (Qiaetomium)、菌根真菌（Mycorrhizafungi)、粘霉（Gliocladium)、淡紫擬青霉 (Paecilomyceslilacinus)、小盾殼霉（Coniothyriumminitans)W及酵了母菌（Yeasts) 等（王倡憲，2005)。但能制做成商品化產(chǎn)品應(yīng)用到農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的只有很少的一部分。目 前，在農(nóng)業(yè)上應(yīng)用最為成功的生防菌株是木霉菌，現(xiàn)已做成了各種生防菌劑應(yīng)用到植物病 蟲害防治中；小盾殼霉已被少數(shù)歐洲國(guó)家商品化，被制成可濕性顆粒（PaulitzTC，2001; McQuilkenMP,1995)〇
[0003] 球毛殼菌（C.globosum)ND35菌株是一株分離自健康毛白楊的植物內(nèi)生真菌，屬 于子囊菌口、核菌綱、球殼目、黑抱殼科、毛殼菌屬。球毛殼菌ND35菌株的抑菌譜很廣，能對(duì) 黃瓜枯萎病菌、苦瓜枯萎病菌、西瓜枯萎病菌、黃瓜霜霉病菌、蘋果輪紋病菌、蘋果樹腐爛病 菌、楊樹爛皮病菌和水泡潰瘍病菌W及立枯絲核菌的菌絲生長(zhǎng)都有明顯的括抗作用，代謝 過程中能夠產(chǎn)生具有抑菌活性的抗生物質(zhì)，并能抑制黃瓜枯萎病菌、苦瓜枯萎病菌、蘋果輪 紋病菌和楊樹水泡潰瘍病菌等的抱子萌發(fā)。在透射電鏡下觀察，發(fā)現(xiàn)球毛殼菌ND35與立枯 絲核菌接觸并發(fā)生重寄生作用后，球毛殼菌ND35菌絲寄生到病原菌菌絲內(nèi)部后，在互作過 程中產(chǎn)生了幾了質(zhì)酶和0 -1，3-葡聚糖酶，會(huì)使其細(xì)胞結(jié)構(gòu)發(fā)生素亂、細(xì)胞壁降解。
[0004] 已有的試驗(yàn)結(jié)果表明，球毛殼菌ND35菌株能有效定殖于蔬菜植物如苦瓜、黃瓜、 番茄、菜豆和經(jīng)濟(jì)林木如楊樹、核桃、板栗W及大田作物如甘馨、小麥、馬鈴馨、煙草、生姜的 植株中，并對(duì)黃瓜、苦瓜、茄子和番茄的生長(zhǎng)有明顯的促進(jìn)作用；盆栽條件下可有效地防治 黃瓜苗期巧倒病的發(fā)生。接種球毛殼菌ND35菌株后，對(duì)楊樹的側(cè)根和胸徑生長(zhǎng)具有一定的 促進(jìn)作用并誘導(dǎo)其對(duì)腐爛病菌和葉誘病菌產(chǎn)生抗性，也能誘導(dǎo)番茄和菜豆對(duì)灰霉病菌產(chǎn)生 系統(tǒng)抗病性；還可有效防治菜豆立枯病。球毛殼菌ND35菌株對(duì)板栗側(cè)根和毛細(xì)根的生長(zhǎng)具 有積極影響，可增加板栗花序的數(shù)量、側(cè)根和毛細(xì)根數(shù)量，在后期對(duì)地莖生長(zhǎng)和一級(jí)分枝數(shù) 也產(chǎn)生明顯促生作用；對(duì)楊樹桿插苗、菜豆、黃瓜、煙草、生姜的生長(zhǎng)表現(xiàn)出促生作用。通過 掃描電鏡觀察球毛殼菌ND35菌株對(duì)楊樹組培苗的侵染定殖發(fā)現(xiàn)：子囊抱子萌發(fā)后，產(chǎn)生的 菌絲多集中于根毛，但并不侵染根毛，主要通過根、莖部表面細(xì)胞間的縫隙侵入，或在根表 面形成附著胞或菌絲足，通過形成侵染釘直接從表皮細(xì)胞侵入，在葉部主要從氣孔侵入葉 片內(nèi)部，侵入根部的菌絲主要定殖于表皮細(xì)胞、外皮層細(xì)胞和細(xì)胞間隙，未進(jìn)入內(nèi)皮層和維 管束組織。
[0005] 球毛殼菌ND35菌株的環(huán)境適應(yīng)性非常強(qiáng)，能夠適應(yīng)惡劣的鹽堿條件。在室內(nèi)，W PDA培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，研究酸堿度和鹽分濃度對(duì)球毛殼菌ND35的菌絲生長(zhǎng)和抱子萌發(fā) 的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)；抑值3-12范圍內(nèi)，球毛殼菌ND35的菌絲能夠正常生長(zhǎng)，在含1% -10% 的Ca"、r、N和P的培養(yǎng)基中，球毛殼菌ND35的菌絲依舊能夠正常生長(zhǎng)，且生長(zhǎng)速率未受到 酸堿度和鹽分的影響；球毛殼菌ND35的子囊抱子在抑值為3-12范圍內(nèi)的PDB培養(yǎng)液中， 依舊能夠正常萌發(fā)，抱子的萌發(fā)未受到影響。
[0006] 顆粒劑作為的一種傳統(tǒng)菌肥制劑，具有使用方便、安全，減少環(huán)境污染等優(yōu)點(diǎn)。顆 粒劑能夠避免使用時(shí)微粒飛揚(yáng)、污染環(huán)境、人員吸入微粉等問題；能夠控制有效成分的釋放 速度。延緩持效期；使用時(shí)能夠準(zhǔn)確地到達(dá)需要的地方，不黏附在植物的莖葉上。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種制備生物菌肥的方法。
[000引本發(fā)明提供的制備生物菌肥的方法包括如下步驟：將球毛殼菌（Chaetomium globosum)ND35CGMCCNo. 4136的抱子、腐植酸、殼聚糖和助劑混勻，得到生物菌肥。
[0009] 上述方法中，所述助劑為黃原膠、駿甲基纖維素鋼和氯化巧。
[0010] 上述方法中，所述球毛殼菌（Chaetomiumglobosum)ND35CGMCCNo. 4136 的抱 子、所述腐植酸、所述殼聚糖、所述黃原膠、所述駿甲基纖維素鋼和所述的氯化巧的配比為 3X10"cfu; (265-285)g;巧-20)g;巧-20)g; (15-35)g; (30-50)go
[0011] 上述方法中，所述球毛殼菌（Qiaetomiumglobosum)ND35CGMCCNo. 4136的抱子為 小于200目的抱子粉。
[0012] 上述方法中，所述球毛殼菌（Qiaetomiumglobosum)ND35CGMCCNo. 4136的抱子粉 為將球毛殼菌（化aetomiumglobosum)ND35CGMCCNo. 4136抱子在培養(yǎng)料中發(fā)酵得到的產(chǎn) 物。
[0013] 上述方法中，所述發(fā)酵為將所述抱子W(1-3)X108c化/ml的量接種在含有食用菌 菌慷的培養(yǎng)料中；所述抱子具體W2Xl〇8c化/ml的量接種在所述含有食用菌菌慷的培養(yǎng)料 中。
[0014] 上述方法中，所述含有食用菌菌慷的培養(yǎng)料為將食用菌菌慷和培養(yǎng)液混勻的； 所述培養(yǎng)液是將±豆、葡萄糖和水混勻得到的；所述±豆、所述葡萄糖和所述水配比為 70-100)g; (7-10)g; 1000ml;所述±豆、所述葡萄糖和所述水的配比具體為70g; 7g; 1000ml。
[0015] 上述方法中，所述食用菌菌慷和培養(yǎng)液的質(zhì)量比為1 ; (2-4);所述食用菌菌慷和 培養(yǎng)液的質(zhì)量比具體為1 ; 2。
[0016] 上述方法中，所述發(fā)酵時(shí)間為25~30天；所述發(fā)酵溫度為20-30°C。
[0017] 上述方法中，所述發(fā)酵時(shí)間具體為28天；所述發(fā)酵溫度具體為25°C。
[001引 上述方法中，在將所述球毛殼菌（Qiaetomiumglobosum)ND35CGMCCNo. 4136的抱 子、所述腐植酸、所述殼聚糖、所述黃原膠、所述駿甲基纖維素鋼和所述的氯化巧混勻后還 包括在混勻時(shí)添加填料的步驟。
[0019] 上述方法中，在將所述球毛殼菌（Chaetomiumglobosum)ND35CGMCCNo. 4136的抱 子、所述腐植酸、所述殼聚糖、所述黃原膠、所述駿甲基纖維素鋼和所述的氯化巧混勻后還 包括將所述原料進(jìn)行造粒的步驟，得到生物菌肥。
[0020] 上述方法中，所述填料為娃藻±。
[0021] 本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供由上述方法制備的生物菌肥。
[0022] 本發(fā)明最后一個(gè)目的是提供上述生物菌肥在如下（1)-(14)中至少一種中的應(yīng) 用：
[0023] (1)增加植物的株高；
[0024] (2)提高植物的葉綠素a含量；
[0025] (3)提高植物的葉綠素b含量；
[0026] (4)提高植物的葉綠素總含量；
[0027] (5)提高植物的類胡蘿h素含量；
[002引 （6)提高植物葉片的還原糖含量；
[0029] (7)提高植物葉片的脯氨酸含量；
[0030] (8)提高植物單株產(chǎn)量；
[0031] (9)增加植物的葉寬；
[0032](10)增加植物的葉長(zhǎng)；
[0033](11)增加植物的地徑；
[0034] (12)促進(jìn)植物苗期的生長(zhǎng)；
[0035] (13)促使植物提前開花結(jié)果；
[0036](14)防治植物苗期巧倒病。
[0037] 上述應(yīng)用中，所述植物具體為核桃和/或黃瓜和/或紫馨和/或楊樹。
[003引 上述球毛殼菌（Qiaetomiumglobosum)ND35CGMCCNo. 4136或其抱子或其發(fā)酵產(chǎn) 物在作為生物菌肥添加劑或在制備生物菌肥添加劑的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
[0039] 本發(fā)明的優(yōu)勢(shì)如下（1)-(4)所示：
[0040] (1)本發(fā)明使用的抱子為毛殼菌的有性抱子，相對(duì)于木霉菌和非致病鑲刀菌等真 菌的無性抱子，有性抱子在抗逆性方面更具有優(yōu)勢(shì)。
[0041] (2)本發(fā)明發(fā)酵球毛殼菌ND35的原材料是金針茹出茹后的廢棄菌慷，該原料具有 成本低、易獲得、培養(yǎng)性狀優(yōu)良、物理性狀好等優(yōu)點(diǎn)。
[0042] (3)本發(fā)明顆粒劑配方中添加了腐植酸與殼聚糖。腐植酸不僅具有肥料增效、改良 ±壤、刺激作物生長(zhǎng)、改善農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量等功能，還能夠?yàn)榍蛎珰ぞё犹峁┮粋€(gè)緩沖環(huán)境， 提高抱子的生存能力；殼聚糖不僅能夠給抱子的萌發(fā)提供營(yíng)養(yǎng)，而且能夠誘導(dǎo)球毛殼菌產(chǎn) 生幾了質(zhì)酶，增強(qiáng)球毛殼菌對(duì)多種植物病原菌的括抗活性。
[0043] (4)顆粒劑在制作過程中加入了增稠劑、粘結(jié)劑和助崩解劑等助劑，使得顆粒劑在 濕潤(rùn)條件下能夠迅速崩解，促進(jìn)抱子在±壤中快速分散，盡快能夠使抱子萌發(fā)，在植物上侵 染定殖并與植物建立共生關(guān)系。
[0044] 本發(fā)明采用簡(jiǎn)單的生產(chǎn)技術(shù)和生產(chǎn)設(shè)備發(fā)酵生產(chǎn)球毛殼菌ND35的抱子粉，然后 經(jīng)過粉碎、過篩后添加不同比例的增稠劑、粘結(jié)劑、助崩解劑等，并經(jīng)過圓盤造粒或擠壓造 粒，生產(chǎn)出價(jià)格低廉的生物菌肥顆粒劑。通過實(shí)驗(yàn)表明；該顆粒劑不僅能夠防治多種植物病 害，而且還對(duì)作物具有良好的促生作用，促生作用主要表現(xiàn)在生物量的提高和產(chǎn)量方面的 提高，具有良好的經(jīng)濟(jì)效益；并且該顆粒劑使用簡(jiǎn)單，避免了飛揚(yáng)的微粉，減少了環(huán)境污染， 具有良好的生態(tài)效益。本發(fā)明的球毛殼菌生物菌肥顆粒劑在理論上和市場(chǎng)需求上具有非常 大的可行性。
【附圖說明】
[0045] 圖1為球毛殼菌生物菌肥顆粒劑。
[0046] 圖2為球毛殼菌生物菌肥顆粒劑對(duì)楊樹桿插苗生長(zhǎng)的影響。
[0047] 圖3為球毛殼菌生物菌肥顆粒劑對(duì)紫馨生長(zhǎng)的影響。
[0048] 圖4為球毛殼菌生物菌肥顆粒劑對(duì)黃瓜苗的生長(zhǎng)的影響。
[0049] 圖5為球毛殼菌生物菌肥顆粒劑對(duì)黃瓜苗期巧倒病病的防治效果。
【具體實(shí)施方式】
[0化0] 下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0化1 ] 下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0化2] 本發(fā)明的球毛殼菌（化aetomiumglobosum)ND35菌株的分類命名為球毛殼菌，保 藏號(hào)為CGMCCNo.