專利名稱：新型扁桃酸衍生物及其作為凝血酶抑制劑的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及新型藥學(xué)有效化合物，特別是胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶、尤其是凝血酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑化合物和/或可代謝為這樣的化合物的化合物、它們作為藥物的用途、包含所述化合物的藥用組合物以及其制備的合成路線。
背景技術(shù)：
血液凝固是參與止血(即防止血液自損傷血管流失)和血栓形成(即在血管內(nèi)形成血凝塊，有時(shí)導(dǎo)致血管阻塞)的關(guān)鍵過(guò)程。
血液凝固是一系列復(fù)雜酶反應(yīng)的結(jié)果。這一系列反應(yīng)的最終步驟之一為凝血酶原轉(zhuǎn)化為活化凝血酶。
已知凝血酶在血液凝固中起著重要的作用。它激活血小板，導(dǎo)致血小板聚集，使纖維蛋白原轉(zhuǎn)化為纖維蛋白單體，纖維蛋白單體自發(fā)聚合成為纖維蛋白聚合物，而且凝血酶激活因子X(jué)III，因子X(jué)III再交聯(lián)纖維蛋白聚合物形成不溶性纖維蛋白。此外，凝血酶激活因子V和因子VIII，導(dǎo)致由凝血酶原產(chǎn)生凝血酶的“正反饋”。
預(yù)期有效凝血酶抑制劑通過(guò)抑制血小板的聚集以及纖維蛋白的形成和交聯(lián)而具有抗血栓形成活性。此外，預(yù)期通過(guò)有效抑制正反饋機(jī)制加強(qiáng)抗血栓形成活性。
現(xiàn)有技術(shù)Claesson在Blood Coagul.Fibrinol.(1994)5，411中已經(jīng)介紹了早期開(kāi)發(fā)的低分子量凝血酶抑制劑。
Blomb_ck等(J.Clin.Lab.Invest.24，107增刊，59(1969))報(bào)道了基于纖維蛋白原Aα鏈裂解位點(diǎn)周?chē)陌被嵝蛄械哪敢种苿?。上述作者提出，在所述氨基酸序列中，三肽序列Phe-Val-Arg(P9-P2-P1，此后稱為P3-P2-P1序列)是最有效的抑制劑。
從美國(guó)專利第4,346,078號(hào)和國(guó)際專利申請(qǐng)WO 93/11152中可知道基于在P1-位具有α，ω-氨基烷基胍的二肽基衍生物的凝血酶抑制劑。還有關(guān)于類似的結(jié)構(gòu)相關(guān)性二肽基衍生物的報(bào)道。例如，國(guó)際專利申請(qǐng)WO 94/29336公開(kāi)了在P1-位上具有例如氨基甲基芐脒、環(huán)狀氨基烷基脒和環(huán)狀氨基烷基胍的化合物(國(guó)際專利申請(qǐng)WO97/23499公開(kāi)了某些這類化合物的前體藥物)；歐洲專利申請(qǐng)0 648 780公開(kāi)了在P1-位上具有例如環(huán)狀氨基烷基胍的化合物。
從歐洲專利申請(qǐng)0 468 231、0 559 046和0 641 779中可知道基于肽基衍生物的凝血酶抑制劑，其在P1-位上也具有環(huán)狀氨基烷基胍(例如3-或4-氨基甲基-1-脒基-哌啶)。
歐洲專利申請(qǐng)0 185 390首次公開(kāi)了基于在P1-位上具有精氨酸醛的三肽基衍生物的凝血酶抑制劑。
最近，報(bào)道了P3位修飾的精氨酸醛型肽基衍生物。例如，國(guó)際專利申請(qǐng)WO 93/18060公開(kāi)了在P3位的羥基酸，歐洲專利申請(qǐng)0 526877公開(kāi)了在P3位的脫氨基酸以及歐洲專利申請(qǐng)0 542 525公開(kāi)了在P3位的O-甲基扁桃酸的精氨酸醛型肽基衍生物。
還知道基于在P1位的親電酮的絲氨酸蛋白酶(例如凝血酶)抑制劑。例如，歐洲專利申請(qǐng)0 195 212公開(kāi)了P1位的肽基α-酮基酯和酰胺，歐洲專利申請(qǐng)0 362 002公開(kāi)了P1位的氟代烷基酰胺酮，歐洲專利申請(qǐng)0 364 344公開(kāi)了P1位的α，β，δ-三酮基化合物以及歐洲專利申請(qǐng)0 530 167公開(kāi)了P1位精氨酸的α-烷氧基酮衍生物。
從歐洲專利申請(qǐng)0 293 881可知道胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶的其它基于精氨酸及其異硫脲鎓類似物的碳端硼酸衍生物的結(jié)構(gòu)不同的抑制劑。
最近，歐洲專利申請(qǐng)0 669 317和國(guó)際專利申請(qǐng)WO 95/35309、WO 95/23609、WO 96/25426、WO 97/02284、WO 97/46577、WO96/32110、WO 96/31504、WO 96/03374、WO 98/06740、WO 97/49404、WO 98/57932、WO 99/29664和WO 00/35869公開(kāi)了基于肽基衍生物的凝血酶抑制劑。
具體來(lái)說(shuō)，WO 97/02284和WO 00/42059公開(kāi)了在P3位具有取代扁桃酸的凝血酶抑制劑。
然而，仍然需要有效的胰蛋白酶樣絲氨酸蛋白酶例如凝血酶的抑制劑。還需要具有有利的藥物動(dòng)力學(xué)特征并且相對(duì)于其它絲氨酸蛋白酶、尤其對(duì)參與止血的絲氨酸蛋白酶具有選擇性抑制凝血酶的化合物。預(yù)期對(duì)凝血酶具有競(jìng)爭(zhēng)性抑制活性的化合物尤其可以用作抗凝血?jiǎng)?，因此用于治療血栓形成和相關(guān)疾病。
發(fā)明公開(kāi)根據(jù)本發(fā)明，提供式I化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物。
其中Ra為-OH或-CH2OH；R1為至少一個(gè)任選鹵基取代基；R2為一個(gè)或兩個(gè)C1-3烷氧基取代基，該取代基的烷基部分為被一個(gè)或多個(gè)氟基取代的烷基(即R2為一個(gè)或兩個(gè)氟代烷氧基(C1-3)基團(tuán))；Y為-CH2-或-(CH2)2-；R3為式I(i)或I(ii)的結(jié)構(gòu)片段
其中R4為H或一個(gè)或多個(gè)氟基取代基；X1、X2、X3和X4中的一個(gè)或兩個(gè)為-N-，其余為-CH-。
術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)上可接受的衍生物”包括藥學(xué)上可接受的鹽(例如酸加成鹽)。
縮寫(xiě)詞列于說(shuō)明書(shū)末尾。式I(i)和I(ii)片段中各鍵上的波浪線表示該片段的鍵位。
R1可能代表的鹵基基團(tuán)包括氟基、氯基、溴基和碘基。為了避免疑義，在表示至少一個(gè)任選鹵基基團(tuán)中，R1可以為不存在(因此被H替代，這樣遵守了化合價(jià)規(guī)則)或者可以表示一個(gè)或多個(gè)鹵基原子。
當(dāng)R3為其中R4為一個(gè)或多個(gè)氟基取代基的式I(i)的結(jié)構(gòu)片段時(shí)，優(yōu)選式I化合物包括其中R4為一個(gè)在2位或3位的氟基取代基，或兩個(gè)在2位和5位、或更優(yōu)選在2位和6位的氟基取代基的化合物(其中取代基位置由相對(duì)于式I(i)結(jié)構(gòu)片段連接到分子其余部分(即連接到-NHCH2-基團(tuán))的連接點(diǎn)來(lái)確定)。
當(dāng)R3為式I(ii)結(jié)構(gòu)片段時(shí)，優(yōu)選式I化合物包括這樣的化合物，其中(a)X1、X2、X3和X4之一為-N-，其余為-CH-；或者(b)X1和X3，或者X2和X4都為-N-，其余兩個(gè)(適當(dāng)時(shí))為-CH-。
優(yōu)選式I化合物包括這樣的化合物，其中R1為一個(gè)氟基、氯基或溴基取代基；R2為一個(gè)或多個(gè)氟基取代基取代的C1-2烷氧基，例如-OCHF2、-OCF3-、-OCH2CF3、-OCH2CHF2、-OCH2CH2F或-OCH(CH2F)2；R3為式I(i)結(jié)構(gòu)片段；R4為H。
更優(yōu)選的式I化合物包括這樣的化合物，其中Ra為OH；R1為一個(gè)氯基取代基；R2為-OCF3，優(yōu)選-OCH2CHF2，或更優(yōu)選-OCHF2或-OCH2CH2F。
R1和R2在式I化合物相應(yīng)苯基上的優(yōu)選取代位置包括相對(duì)于苯基與分子其余部分的連接點(diǎn)的兩個(gè)間位(即相對(duì)于連接α-或β-羥酸基團(tuán)的碳原子的3位和/或5位(優(yōu)選3，5-取代))。
可以列舉的式I化合物包括這樣的化合物，其中R2為一個(gè)或兩個(gè)C1-2烷氧基取代基，該取代基烷基部分為一個(gè)或多個(gè)氟基取代基取代的烷基；或者R2為一個(gè)或兩個(gè)C3烷氧基取代基，該取代基烷基部分為一個(gè)或多個(gè)氟基取代基取代的烷基。
式I化合物可以根據(jù)本領(lǐng)域眾所周知的技術(shù)制備，例如下文中介紹的技術(shù)。
本發(fā)明再一方面提供制備式I化合物的方法，所述方法包括(i)使式II化合物， 其中Ra、R1和R2定義同前，與式III化合物偶合， 其中Y和R3定義同前，例如在偶合劑(例如乙二酰氯的DMF、EDC、DCC、HBTU、HATU、PyBOP或TBTU溶液)、合適的堿(例如吡啶、DMAP、TEA、2，4，6-三甲吡啶或DIPEA)以及適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑(例如二氯甲烷、乙腈、EtOAc或DMF)存在下進(jìn)行；(ii)使式IV化合物， 其中Ra、R1、R2和Y定義同前，與式V化合物偶合，R3CH2NH2V其中R3定義同前，例如在以上方法(i)中介紹的條件下進(jìn)行；(iii)對(duì)于制備R1不存在的式I化合物，還原相應(yīng)的如下定義的式Ia化合物，其中R5為OR6，其中R5和R6如下文定義，例如在合適催化劑(例如承載金屬的催化劑如Pd/C(例如10％(w/w)Pd/C))和適當(dāng)溶劑(例如低級(jí)(例如C1-6)烷醇如乙醇)存在下，并任選在合適酸(例如乙酸)存在下和/或按照Synth.Comm.(1998)4351介紹氫化；或者(iv)在本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知條件下，如下文定義的式XVIA或XVIB的相應(yīng)化合物與適當(dāng)?shù)陌痹?例如乙酸銨或氨氣)反應(yīng)，例如使亞氨酸乙酯中間體(由式XVIA或XVIB化合物與HCl(g)在乙醇中反應(yīng)生成)與氨氣在乙醇中反應(yīng)，或者在Tetrahedron Lett.40，7067(1999)中介紹的條件下反應(yīng)，因此將以上文獻(xiàn)公開(kāi)的內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合到本文(例如對(duì)于制備R3為式I(ii)結(jié)構(gòu)片段的式I化合物，其中X2或X4為N，使式XVIB的相應(yīng)化合物與乙酸銨(例如1～30當(dāng)量乙酸銨)在N-乙?；腚装彼?例如1～30當(dāng)量N-乙?；腚装彼?和適當(dāng)溶劑(例如低級(jí)烷基(例如C1-6)醇如甲醇)存在下反應(yīng))。
式II化合物可以用已知技術(shù)和/或標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)獲得。
例如，Ra為OH的式II化合物可以如下制備使式VI醛，
其中R1和R2定義同前，與以下化合物反應(yīng)(a)式VII化合物，R”CNVII其中R”為H或(CH3)3Si，例如在室溫或高溫(例如100℃以下)，在適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑(例如氯仿或二氯甲烷)存在下，并且如果需要在合適的堿(例如TEA)和/或合適的催化體系(例如芐基氯化銨或碘化鋅，或者用手性催化劑，例如Chem.Rev.，(1999)99，3649中介紹的)存在下進(jìn)行，接著在本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的條件下水解(例如下文介紹的條件)；(b)NaCN或KCN，例如在NaHSO3和水存在下，接著水解；(c)氯仿，例如在高溫(例如室溫以上但低于100℃)，在適當(dāng)有機(jī)溶劑(例如氯仿)存在下，并且如果需要在合適的催化體系(例如芐基氯化銨)存在下進(jìn)行，接著水解；(d)式VIII化合物， 其中M為Mg或Li，接著在本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的條件下氧化裂解(例如臭氧分解或者鋨或釕催化)；(e)三(甲硫基)甲烷，在本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的條件下進(jìn)行，接著在例如HgO和HBF4存在下水解。
Ra為-CH2OH的式II化合物可以如下制備還原式IX化合物，
其中R為C1-6烷基或C1-3烷基苯基，R1和R2定義同前，例如在室溫或室溫以下，在合適的還原劑(例如硼氫化鈉)和適當(dāng)有機(jī)溶劑(例如甲醇、乙醇、THF或其混合物)存在下進(jìn)行，接著水解所得式IXA中間體托品酸酯， 其中R、R1和R2定義同前，在本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的條件下進(jìn)行，例如下文的介紹。熟練技術(shù)人員理解所述還原和水解步驟可以用一鍋法完成，例如下文的介紹。
或者，Ra為-OH的式II化合物可以如下制備任選保護(hù)仲羥基下，對(duì)式IXB化合物或其衍生物氧化， 其中R1和R2定義同前，在合適氧化劑(例如結(jié)合合適游離基氧化劑(例如TEMPO)和適當(dāng)次氯酸鹽(例如次氯酸鈉))存在下，在本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的條件下進(jìn)行，例如在-10℃和室溫之間，在合適溶劑(例如水、丙酮或其混合物)、適當(dāng)鹽(例如堿金屬鹵化物如溴化鉀)和合適的堿(例如堿金屬碳酸鹽或碳酸氫鹽如碳酸氫鈉)存在下進(jìn)行。
Ra為-OH的式II化合物的對(duì)映體形式(即對(duì)CO2H基團(tuán)的α位碳原子的取代基具有不同構(gòu)型的化合物)可以通過(guò)對(duì)映體專一性衍生步驟分離。它可以通過(guò)例如酶法實(shí)現(xiàn)。這樣的酶法包括，例如在室溫和回流溫度之間(例如在45～65℃)，在合適的酶(例如Lipase PSAmano)、合適的酯(例如乙酸乙酯)以及合適的溶劑(例如甲基叔丁醚)存在下，α-OH進(jìn)行酯交換反應(yīng)。然后可以用常規(guī)分離技術(shù)(例如色譜法)將衍生的異構(gòu)體與未反應(yīng)的異構(gòu)體分離。
在所述衍生步驟加入到式II化合物的基團(tuán)可以在任何進(jìn)一步反應(yīng)之前或合成式I化合物的任何階段除去。附加的基團(tuán)可以用常規(guī)技術(shù)除去(例如對(duì)于α-OH的酯，可在本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的條件下水解(例如在室溫和回流溫度之間，在合適的堿(例如NaOH)和適當(dāng)溶劑(例如MeOH、水或其混合物)存在下進(jìn)行)))。
Ra為-CH2OH的式II化合物的對(duì)映體形式可以用手性色譜技術(shù)分離(例如手性HPLC)。
式III化合物可以如下制備使式X化合物， 其中Y定義同前，與上文定義的式V化合物偶合，例如在本文介紹的制備式I化合物的類似條件下進(jìn)行。
式IV化合物可以如下制備使上文定義的式II化合物與上文定義的式X化合物偶合，例如在本文介紹的制備式I化合物的類似條件下進(jìn)行。
式VI化合物用已知技術(shù)和/或標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)獲得。例如它們可以如下制備(i)金屬化(其中金屬可以為例如堿金屬，如Li或優(yōu)選二價(jià)金屬如Mg)式XI化合物，
其中Hal為選自Cl、Br和I的鹵素原子，R1和R2定義同前，接著進(jìn)行與合適的甲?；?例如N，N-二甲基甲酰胺)反應(yīng)，例如在下文中介紹的條件下進(jìn)行；(ii)在合適的還原劑(例如DIBAL-H)存在下還原式XII化合物， 其中R1和R2定義同前；(iii)氧化式XIII化合物， 其中R1和R2定義同前，在合適氧化劑存在下(例如MnO2、氯鉻酸吡啶、DMSO和乙二酰氯的組合，或SO3吡啶絡(luò)合物的DMSO溶液)。
式IX化合物可以用相應(yīng)的乙酸苯酯(例如它可以用相應(yīng)苯乙酮按照J(rèn).Am.Chem.Soc.98，6750(1976)的介紹獲得或用相應(yīng)的芐基氰通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)水解步驟獲得)通過(guò)常規(guī)技術(shù)制備，例如類似于J.Org.Chem.54，3831(1989)介紹的技術(shù)和/或下文中介紹的技術(shù)。
式IXB化合物可以如下制備二羥基化相應(yīng)的式XIIIA化合物，
其中R1和R2定義同前，在合適的二羥基化試劑(例如提供OsO4的試劑或試劑混合物，例如AD-mix-α，優(yōu)選AD-mix-β)存在下，例如在本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的條件下，例如在-10℃和室溫之間在適當(dāng)溶劑(例如水、叔丁醇或其混合物)存在下進(jìn)行。當(dāng)使用不對(duì)稱氧化劑例如AD-mix-α或AD-mix-β時(shí)，這種方法可用于制備連接伯羥基和仲羥基的兩個(gè)碳原子的具有特定構(gòu)型基團(tuán)(即R或S)的式IXB化合物。
式XIIIA化合物可以如下制備使上文定義的式XI相應(yīng)化合物與合適的乙烯基陰離子源(例如三丁基(乙烯基)錫)反應(yīng)，在本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的條件下，例如在室溫和回流溫度之間(例如50℃)，在適當(dāng)溶劑(例如甲苯)、適當(dāng)偶聯(lián)劑(例如鈀(O)配位絡(luò)合物如四(三苯基膦)鈀(O))存在下，并任選在適當(dāng)催化劑(例如2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚)存在下進(jìn)行。
文獻(xiàn)已知的式V、VII、VIII、X、XI、XII和XIII的化合物可以由市售獲得或者可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用容易獲得的初始原料和適當(dāng)?shù)脑噭┘胺磻?yīng)條件按本文介紹的類似方法獲得或按常規(guī)合成步驟獲得。式Ia、XVIA及XVIB的化合物可以用下文介紹的方法獲得。
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，用容易獲得的初始原料和適當(dāng)?shù)脑噭┘胺磻?yīng)條件，可以在式I、II、III、IV、V、VI、IX、IXA、IXB、XI、XII、XIII和XIIIA化合物的苯環(huán)上引入和/或用本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的技術(shù)通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)官能團(tuán)相互轉(zhuǎn)化得到取代基。
例如，式I、II、IV、VI、IXA、XI、XII和XIII的化合物可以分別用式XIVA、XIVB、XIVC、XIVD、XIVE、XIVF、XIVG和XIVH的相應(yīng)化合物制備，
其中Ra、R、R1、R3、Y和Hal(適當(dāng)時(shí))定義同前，例如(a)使其與相應(yīng)的氟化鹵代烷(例如氟化氯代烷)反應(yīng)，例如在室溫或以上(例如在回流溫度)，在合適的堿(例如叔丁醇鉀、KOH或NaOH，例如其水溶液)和適當(dāng)有機(jī)溶劑(例如THF、氯仿或異丙醇)存在下進(jìn)行；或(b)使其與式XIVJ、RxS(O)2ORyXIVJ的化合物反應(yīng)，其中Rx為C1-4烷基、C1-4全氟烴基或苯基(任選被甲基、硝基或鹵素取代)，Ry為CH2CF3、CH2CHF2、CH2CH2F或CH(CH2F)2，例如在合適的堿(例如K2CO3)和適當(dāng)溶劑(例如DMF)存在下進(jìn)行，例如在下文所述的兩種情況下。
熟練技術(shù)人員能夠理解這些官能團(tuán)轉(zhuǎn)化也能夠在式II、IV、VI、IXA、XI、XII和XIII化合物的整個(gè)合成法的早期階段進(jìn)行(即分別在式XIVB、XIVC、XIVD、XIVE、XIVF、XIVG和XIVH的適當(dāng)前體上進(jìn)行)。
文獻(xiàn)中已知的式XIVA、XIVB、XIVC、XIVD、XIVE、XIVF、XIVG、XIVH和XIVJ的化合物也可由市售獲得或者可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用容易獲得的初始原料和適當(dāng)?shù)脑噭┘胺磻?yīng)條件按本文介紹的類似方法獲得或按常規(guī)步驟獲得。例如可以在標(biāo)準(zhǔn)條件下脫去相應(yīng)苯酚的保護(hù)獲得式XIVA、XIVB、XIVC、XIVD、XIVE、XIVF、XIVG和XIVH的化合物(其中保護(hù)基團(tuán)可以為例如甲基、烯丙基、芐基或叔丁基)。此外，R1為一個(gè)氯基取代基的式XIVD化合物可以用二鹵代或三鹵代苯獲得(例如1-Br、3-Cl、5-F-苯，用甲氧基取代氟原子(例如使其與NaOMe在1-甲基-2-吡咯烷酮/甲醇中于高溫反應(yīng))，用甲?；脫Q溴(例如按照下文中介紹的式VI化合物的制備方法)，然后脫甲基化(例如用PhSH的1-甲基-2-pyrollidinone在K2CO3存在下進(jìn)行))。
同樣，R1不存在的式I化合物可以如下制備用相應(yīng)的R1為鹵基(例如氯代)的式I化合物(或其合適的前體化合物)，例如在本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的條件下氫化。
可以用常規(guī)技術(shù)將式I化合物從它們的反應(yīng)混合物中分離。
根據(jù)本發(fā)明，式I化合物的藥學(xué)上可接受的衍生物也包括式I化合物的“被保護(hù)”的衍生物和/或作為前體藥物的化合物。
可以列舉可作為式I化合物的前體藥物的化合物包括式Ia化合物及其藥學(xué)上可接受的衍生物，
其中R3a為式I(iii)或I(iv)的結(jié)構(gòu)片段 其中R5為OR6或C(O)OR7；R6為H、C1-10烷基、C1-3烷基芳基或C1-3烷氧基芳基(后兩個(gè)基團(tuán)的烷基部分任選被一個(gè)或多個(gè)氧原子隔斷，后兩個(gè)基團(tuán)的芳基部分任選被一個(gè)或多個(gè)選自鹵基、苯基、甲基或甲氧基的取代基取代，后三個(gè)基團(tuán)也任選被一個(gè)或多個(gè)鹵基取代基取代)；R7為C1-10烷基(后面的基團(tuán)任選被一個(gè)或多個(gè)氧原子隔斷)、C1-3烷基芳基或C1-3烷氧基芳基(后兩個(gè)基團(tuán)的烷基部分任選被一個(gè)或多個(gè)氧原子隔斷，后兩個(gè)基團(tuán)的芳基部分任選被一個(gè)或多個(gè)選自鹵基、苯基、甲基或甲氧基的取代基取代，后三個(gè)基團(tuán)也任選被一個(gè)或多個(gè)鹵基取代基取代)；Ra、R1、R2、Y、R4、X1、X2、X3和X4定義同前。
術(shù)語(yǔ)式Ia化合物的“藥學(xué)上可接受的衍生物”包括藥學(xué)上可接受的鹽(例如酸加成鹽)。
式I(iii)和I(iv)片段中各鍵上的波浪線表示該片段的鍵位。
R6和R7可能表示的烷氧基芳基包括由氧原子連接的烷基和芳基。烷基芳基和烷氧基芳基通過(guò)這些基團(tuán)的烷基部分連接到分子的其余部分，該烷基部分可以(如果有足夠數(shù)量(即3個(gè))碳原子)為支鏈。R6和R7可能表示或被其取代的烷基芳基和烷氧基芳基的芳基部分包括碳環(huán)和雜環(huán)的芳族基團(tuán)，例如苯基、萘基、吡啶基、噁唑基、異噁唑基、噻二唑基、吲哚基和苯并呋喃基等。
R6和R7可能表示的烷基可以為直鏈，或當(dāng)有足夠碳原子(即最少三個(gè))時(shí)，可以為支鏈和/或環(huán)狀。更進(jìn)一步地講，當(dāng)有足夠碳原子(即最少四個(gè))時(shí)，所述烷基還可以為部分環(huán)狀/開(kāi)鏈。所述烷基還可以為飽和基團(tuán)或當(dāng)有足夠碳原子(即最少兩個(gè))時(shí)為不飽和基團(tuán)。
可能取代R6和R7的鹵基基團(tuán)包括氟基、氯基、溴基和碘基。
當(dāng)R5為C(O)OR7時(shí)，優(yōu)選的R7包括(a)直鏈、支鏈或環(huán)狀C3-6烷基，例如C4-6環(huán)烷基；(b)C1-2烷基芳基，例如芐基，任選如前述被取代。
優(yōu)選的式Ia化合物包括其中R5為OR6的化合物。
當(dāng)R5為OR6時(shí)，優(yōu)選的R6基團(tuán)包括(a)H；(b)未取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀C1-8(例如C1-6)烷基，例如直鏈C1-3烷基(例如乙基，優(yōu)選甲基)、支鏈C3-8烷基(例如異丙基、異丁基或4-庚基)或環(huán)狀C4-7烷基(即C4-7環(huán)烷基，例如環(huán)丁基或環(huán)己基)；(c)C1-3烷氧基苯基(例如C2烷氧基苯基)，其中苯基任選被一個(gè)或多個(gè)上述取代基取代(例如三氟甲基)；(d)C1-2烷基芳基(例如甲基芳基)，其中芳基為苯基、吡啶基、噁唑基或異噁唑基，后三個(gè)基團(tuán)任選被一個(gè)或多個(gè)上述取代基取代(例如甲氧基、甲基、溴基和/或氯基)。
優(yōu)選的式Ia化合物包括R5為OR6的化合物，其中R6為直鏈、支鏈(適當(dāng)時(shí))或環(huán)狀(適當(dāng)時(shí))、C1-6(例如C1-4)烷基，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基或環(huán)丁基。
式Ia化合物可以用如下的一種或多種方法制備(a)使上文定義的相應(yīng)式II化合物與式XV化合物反應(yīng)， 其中Y和R3a定義同前，例如在上文介紹的用于合成式I化合物的類似條件下進(jìn)行；(b)使上文定義的相應(yīng)式IV化合物與式XVI化合物反應(yīng)，
R3aCH2NH2XVI其中R3a定義同前，例如在上文介紹的用于合成式I化合物的類似條件下進(jìn)行；(c)對(duì)于制備R5為OH的式Ia化合物，使相應(yīng)的式XVIA或XVIB化合物與羥胺反應(yīng)， 其中Ra、R1、R2、R4、Y、X1、X2、X3和X4定義同前，例如在本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的條件下進(jìn)行；(d)對(duì)于制備R5為OR6的式Ia化合物，使相應(yīng)式I化合物的保護(hù)衍生物，衍生物是例如式XVII化合物， 其中R3b為式I(v)或I(vi)的結(jié)構(gòu)片段或其互變異構(gòu)體
其中Rb為例如-CH2CH2-Si(CH3)3或芐基，Ra、R1、R2、Y、R4、X1、X2、X3和X4定義同前，與式XVIII化合物或其酸加成鹽反應(yīng)，R6ONH2XVIII其中R6定義同前，例如在室溫和回流溫度之間，在適當(dāng)有機(jī)溶劑(例如THF、CH3CN、DMF或DMSO)存在下進(jìn)行，接著在本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的條件下(例如使其與QF或TFA反應(yīng)(例如按照下文所述))除去-C(O)ORb；(e)對(duì)于制備R5為OH的式Ia化合物，使上文定義的式XVII化合物，其中Rb為芐基，與羥胺或其酸加成鹽反應(yīng)，例如在本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的條件下進(jìn)行；(f)對(duì)于制備R5為COOR7的式Ia化合物，使相應(yīng)的上文定義的式I化合物與式XIX化合物反應(yīng)，L1COOR7XIX其中L1為合適的離去基團(tuán)，例如鹵代或硝基苯基(例如4-硝基苯基)，R7定義同前，例如在室溫或室溫附近，在合適的堿(例如NaOH，例如其水溶液)和適當(dāng)有機(jī)溶劑(例如二氯甲烷)存在下進(jìn)行；或者(g)對(duì)于制備R5為OCH3或OCH2CH3的式Ia化合物，使R5為OH的相應(yīng)式Ia化合物分別與硫酸二甲酯或硫酸二乙酯反應(yīng)，例如在合適堿(例如堿金屬氫氧化物如KOH(例如其水溶液，例如為50wt.％))和合適的催化劑(例如季銨鹵化物如芐基三甲基氯化銨(例如在CH2Cl2或THF溶液中，例如為10wt.％))存在下進(jìn)行。
式I(v)和I(vi)片段中各鍵上的波浪線表示該片段的鍵位。
式XVIA和XVIB的化合物可以如下制備使上文定義的相應(yīng)式II化合物與式XIXA或XIXB化合物反應(yīng)，
其中R4、Y、X1、X2、X3和X4定義同前，例如在上文介紹的用于合成式I化合物的類似條件下進(jìn)行。
或者，式XVIA和XVIB的化合物可以如下制備使上文定義的相應(yīng)式IV化合物與式XIXC或XIXD化合物反應(yīng)， 其中R4、X1、X2、X3和X4定義同前，例如在上文介紹的用于合成式I化合物的類似條件下進(jìn)行。
式XVII化合物可以如下制備使上文定義的式II化合物與式XX化合物反應(yīng)， 其中Y和R3b定義同前，例如在上文介紹的用于合成式I化合物的類似條件下進(jìn)行。
或者，式XVII化合物可以如下制備使相應(yīng)的式I化合物與式XIX化合物的相應(yīng)化合物(其中基團(tuán)Rb替代了R7，Rb定義同前)反應(yīng)，例如在上文介紹的有關(guān)合成式Ia化合物的條件下進(jìn)行。
式XV和XX的化合物可以如下制備上文定義的相應(yīng)式X化合物分別與上文定義的式XVI化合物或式XXI化合物反應(yīng)，R3bCH2NH2XXI其中R3b定義同前，例如在上文介紹的用于合成式I化合物的類似條件下進(jìn)行。
文獻(xiàn)已知的式XVI、XVIII、XIX、XIXA、XIXB、XIXC、XIXD和XXI化合物可以由市售獲得或者可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用容易獲得的初始原料和適當(dāng)?shù)脑噭┘胺磻?yīng)條件按本文介紹的類似方法獲得或按常規(guī)步驟獲得。例如，式XIXA和XIXB的化合物可以如下制備使相應(yīng)的式XIXC或XIXD(適當(dāng)時(shí))化合物與式X化合物反應(yīng)，例如在上文介紹的類似條件下進(jìn)行。
如上定義的式I和Ia化合物以及它們的衍生物在下文稱為“本發(fā)明化合物”。
因此，本發(fā)明優(yōu)選的化合物包括下文介紹的實(shí)施例的化合物。在這方面，可以列舉的本發(fā)明化合物包括1 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；2 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；3 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt)；4 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr)；5 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr)；6 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu)；7 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)；8 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(COO環(huán)戊基)；9 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)；10 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；11 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；
Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2-3-(5-Me-異噁12唑))；13 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2-3-吡啶)；14 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiBu)；15 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt)；16 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn)；17 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O環(huán)己基)；18 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu)；Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2CH2OPh(3-19CF3))；20 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Cl))；21 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(3-MeO))；22 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(2-Br))；23 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Me))；24 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-4-庚基)；25 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab；26 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab；27 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；28 Ph(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；29 Ph(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；30 Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；31 Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；32 Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；33 Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；34 Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；35 Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；36 Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；37 Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；
38 Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；39 Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；40 Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；41 Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；42 Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；43 Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；44 Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；45 Ph(3-Cl，5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)；46 Ph(3-Cl，5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)；47 Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Pro-Pab；48 Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Pro-Pab(OMe)；Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((2-脒基)-5-吡啶49基)；Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((2-甲氧基脒50基)-5-吡啶基)；Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((5-脒基)-2-嘧啶51基)；Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((5-甲氧基脒52基)-2-嘧啶基)；53 Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(3-F)；54 Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-diF)；55 Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-diF)(OMe)；56 Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，5-diF)；57 Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，5-diF)(OMe)。
本發(fā)明化合物可能具有互變異構(gòu)現(xiàn)象。所有的互變異構(gòu)形式及其混合物都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)?？梢粤信e的特別互變異構(gòu)體形式包括與式Ia化合物中脒官能團(tuán)的雙鍵位置以及取代基R5的位置相關(guān)的互變異構(gòu)體。
本發(fā)明化合物還包括兩個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱碳原子。因此，可能具有旋光性和/或非對(duì)映異構(gòu)體現(xiàn)象。非對(duì)映異構(gòu)體可以用常規(guī)技術(shù)如色譜法分離。各種立體異構(gòu)體可以用常規(guī)技術(shù)如HPLC技術(shù)分離所述化合物的外消旋混合物或其它混合物得到?；蛘咚枰男庑援悩?gòu)體可以如下制備用適當(dāng)?shù)男庑猿跏荚显诓灰鹜庀饔没虿钕喈悩?gòu)作用下反應(yīng)獲得，或者通過(guò)衍生作用獲得，例如用純手性酸衍生后用常規(guī)技術(shù)(例如HPLC、二氧化硅色譜法)分離非對(duì)映異構(gòu)體衍生物。所有立體異構(gòu)體都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。
本發(fā)明化合物優(yōu)選其中以下片段 為S-構(gòu)型的化合物。
優(yōu)選的本發(fā)明化合物包括當(dāng)Ra為-OH時(shí)，以下結(jié)構(gòu)片段 為R-構(gòu)型的化合物，或者當(dāng)Ra為-CH2OH時(shí)，該片段為S-構(gòu)型的化合物。
以上兩片段中各鍵上的波浪線表示該片段的鍵位。
可以列舉的本發(fā)明化合物包括Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(其中在這時(shí)候Aze表示氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸酯(即為(R)-和/或(S)-構(gòu)象)，以及等效化合物，其中Pab中脒基單元的氫原子由基團(tuán)-OR6(如上文定義)替代，其中R6為C1-3烷基(即Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)、Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt)、Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr)或Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr))。還可以列舉的本發(fā)明化合物包括不是前面句子中指出的具體化合物的那些化合物。
本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員能夠理解在上下文中介紹的方法中可能需要用保護(hù)基團(tuán)保護(hù)中間體化合物的官能團(tuán)。
需要保護(hù)的官能團(tuán)包括羥基、氨基和羧酸。羥基的合適保護(hù)基團(tuán)包括任選取代和/或不飽和的烷基(例如甲基、烯丙基、芐基或叔丁基)、三烷基甲硅烷基或二芳基烷基甲硅烷基(例如叔丁基二甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基或三甲硅烷基)和四氫吡喃基。羧酸的合適保護(hù)基團(tuán)包括C1-6烷基酯或芐基酯。氨基和脒基的合適保護(hù)基團(tuán)包括叔丁氧基羰基、芐氧基羰基或2-三甲硅烷基乙氧基羰基(Teoc)。脒基氮還可以用羥基或烷氧基保護(hù)，可以為單或雙保護(hù)。
官能團(tuán)保護(hù)作用和去保護(hù)作用可以在偶聯(lián)前或偶聯(lián)后進(jìn)行，或者可以在上述反應(yīng)流程的任何其它反應(yīng)之前或之后進(jìn)行。
保護(hù)基團(tuán)可以根據(jù)本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員熟知的技術(shù)或下文所述技術(shù)除去。
本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員能夠理解為了以替代的并且某些情況下更方便的方法獲得本發(fā)明化合物，上述的各個(gè)加工步驟可以按不同秩序進(jìn)行并且/或各個(gè)反應(yīng)可以在整個(gè)合成路線的不同階段進(jìn)行(即結(jié)合特定反應(yīng)在上述不同中間體上加入取代基和/或在上面進(jìn)行化學(xué)轉(zhuǎn)化)。這可能排除或增加對(duì)保護(hù)基團(tuán)的需要。
涉及的化學(xué)過(guò)程類型將決定保護(hù)基團(tuán)的需要和類型以及完成合成的順序。
保護(hù)基團(tuán)的使用在以下文獻(xiàn)中有完整的介紹“Protective Groupsin Organic Chemistry”，主編J W F McOmie，Plenum Press(1973)，“Protective Groups in Organic Synthesis”，第三版，T.W.Greene &P.G.M.Wutz，Wiley-Interscience(1999)。
本發(fā)明化合物的被保護(hù)衍生物可以用化學(xué)方法轉(zhuǎn)化為本發(fā)明化合物，使用標(biāo)準(zhǔn)去保護(hù)技術(shù)(例如氫化)。本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員也能夠理解某些式Ia化合物也可以稱為式I化合物的“被保護(hù)衍生物”。
醫(yī)藥用途本發(fā)明化合物本身可具有藥理活性?？删哂兴龌钚缘谋景l(fā)明化合物包括(但不限于)式I化合物。
然而，本發(fā)明其它化合物(包括式Ia化合物)可能不具有所述活性，但可以胃腸外或口服給予，此后在體內(nèi)代謝形成藥理活性化合物(包括但不限于相應(yīng)的式I化合物)。這類化合物(也包括可能具有部分藥理活性，但該活性明顯低于它們代謝產(chǎn)生的“活性”化合物活性)因此可以稱作所述活性化合物的“前體藥物”。
因此，本發(fā)明化合物是有用的，因?yàn)樗鼈兙哂兴幚砘钚院?或口服或胃腸外給藥后在體內(nèi)代謝形成具有藥理活性的化合物。因此，本發(fā)明化合物適合用作藥物。
因此，本發(fā)明再一方面提供用作藥物的本發(fā)明化合物。
具體來(lái)說(shuō)，本發(fā)明化合物本身是有效的凝血酶抑制劑和/或(例如在前體藥物的情況下)在給藥后代謝形成有效的凝血酶抑制劑，例如其可以在以下所述試驗(yàn)中得到證實(shí)。
所謂“凝血酶抑制劑的前體藥物”包括在口服或胃腸外給藥(參見(jiàn)例如下述試驗(yàn)E)后或其在存在肝微粒體下溫育后(參見(jiàn)下述試驗(yàn)G)，在預(yù)定的時(shí)間(例如約1小時(shí))內(nèi)形成實(shí)驗(yàn)可檢測(cè)量的凝血酶抑制劑的化合物。
因此，預(yù)期本發(fā)明化合物可用于需要抑制凝血酶的疾病和/或適合抗凝劑治療的病癥，包括治療和/或預(yù)防動(dòng)物包括人類的血液和/或組織中的血栓形成和高凝固性。已知高凝固性可以導(dǎo)致血栓栓塞性疾病。可以列舉的高凝固性相關(guān)性病癥和血栓栓塞性疾病包括遺傳性或獲得性激活蛋白C抗性例如因子V-突變(因子V Leiden)以及抗凝血酶III、蛋白C、蛋白S或肝素輔因子II遺傳性或獲得性缺陷。其它已知高凝固性相關(guān)性病癥和血栓栓塞性疾病包括循環(huán)抗磷脂抗體(Lupus抗凝劑)、高半胱氨酸血癥(homocysteinemi)、肝素性血小板減少癥和纖維蛋白溶解缺陷以及凝固綜合征(例如彌散性血管內(nèi)凝血(DIC))和普通血管損傷(例如外科手術(shù)引起的血管損傷)。
治療存在不需要的過(guò)量凝血酶而無(wú)高凝固性跡象的病癥，例如神經(jīng)變性疾病例如阿耳茨海默氏病存在的這種情況。
可以列舉的具體病癥包括治療性和/或預(yù)防性治療靜脈血栓形成(例如DVT)和肺栓塞、動(dòng)脈血栓形成(例如心肌梗塞、不穩(wěn)定性心絞痛、血栓形成性中風(fēng)和外周動(dòng)脈血栓形成)以及通常房顫時(shí)緣自心房或跨壁心肌梗塞后緣自左心室或者充血性心力衰竭引起的系統(tǒng)性栓塞；預(yù)防血栓溶解、經(jīng)皮經(jīng)腔血管成形術(shù)(PTA)和冠脈旁路手術(shù)后的再阻塞(即血栓形成)；防止在顯微手術(shù)和普通血管手術(shù)后再次血栓形成。
其它適應(yīng)癥包括治療性/或預(yù)防性治療細(xì)菌、多發(fā)性損傷、中毒或任何其它機(jī)制引起的彌散性血管內(nèi)凝血；當(dāng)血液與體內(nèi)的外源性表面例如血管移植物、血管移植片固定膜(stent)、血管導(dǎo)管、機(jī)械和生物性修復(fù)瓣膜或任何其它醫(yī)療裝置接觸時(shí)的抗凝處理；當(dāng)血液與體外醫(yī)療裝置例如在心血管手術(shù)期間使用心-肺機(jī)或血液透析時(shí)的抗凝處理；治療性和/或預(yù)防性治療特發(fā)性成人呼吸窘迫綜合征、放療或化療后的肺纖維化、敗血癥性休克、敗血癥、炎性反應(yīng)(包括但不限于水腫)、急性或慢性動(dòng)脈粥樣硬化例如冠狀動(dòng)脈疾病及形成動(dòng)脈硬化斑、腦動(dòng)脈疾病、腦梗塞、腦血栓形成、腦栓塞、外周動(dòng)脈疾病、局部缺血、心絞痛(包括不穩(wěn)定性心絞痛)、再灌注損傷、經(jīng)皮經(jīng)腔血管成形術(shù)(PTA)和冠狀動(dòng)脈旁路搭橋術(shù)后再狹窄。
抑制胰蛋白酶和/或凝血酶的本發(fā)明化合物也可以用于治療胰腺炎。
因此，本發(fā)明化合物適用于治療性和/或預(yù)防性治療上述病癥。
本發(fā)明再一方面提供治療需要抑制凝血酶的病癥的方法，該方法包括給予患有或者易患所述病癥的病人治療有效量的本發(fā)明化合物。
本發(fā)明化合物一般以藥用制劑通過(guò)口服、靜脈內(nèi)、皮下、口腔含化、直腸、經(jīng)皮、鼻腔、氣管、支氣管、任何其它胃腸外途徑或吸入給藥，所述藥用制劑包含本發(fā)明化合物游離堿或藥學(xué)上可接受的無(wú)毒性有機(jī)酸或無(wú)機(jī)酸加成鹽，所述藥用制劑為藥學(xué)上可接受的劑型。
本發(fā)明化合物的優(yōu)選用藥途徑是口服。優(yōu)選的藥用制劑包括含本發(fā)明化合物的改進(jìn)釋放藥用組合物。本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員充分了解本文使用的術(shù)語(yǔ)“改進(jìn)釋放”藥用組合物包括經(jīng)過(guò)格林處理改變了藥物(即本發(fā)明化合物)開(kāi)始釋放和/或釋放速率的任何組合物，因此包括在美國(guó)藥典(USP XXII)前言/引言部分第xliii和xliv頁(yè)提供的定義，該文獻(xiàn)中相關(guān)公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用結(jié)合到本文。
因此，熟練技術(shù)人員可以根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)技術(shù)制備適當(dāng)?shù)母倪M(jìn)釋放制劑(參見(jiàn)例如，Pharmaceutisch Weekblad Scientific Edition，6，57(1984)；Medical Applications of Controlled Release，Vol II，主編Langer和Wise(1984)Bocaraton，F(xiàn)lorida，第1-34頁(yè)；Industrial Aspectsof Pharmaceuticals，主編Sandel，Swedish Pharmaceutical Press(1993)，第93-104頁(yè)；“PharmaceuticsThe Science of Dosage Form Design”，第191-211頁(yè)，主編M.E.Aulton(1988)(Churchill Livingstone))。
因此優(yōu)選的改進(jìn)釋放制劑包括合適的本發(fā)明化合物包含在聚合物基質(zhì)中的改進(jìn)釋放制劑。在這方面，我們優(yōu)選的含本發(fā)明化合物的制劑以所謂的“膨脹”改進(jìn)釋放體系或“凝膠基質(zhì)”改進(jìn)釋放體系形式口服，改進(jìn)釋放體系中本發(fā)明化合物與在水溶液介質(zhì)中膨脹的聚合物(即系水性凝膠組分)一起提供。
我們特別優(yōu)選將本發(fā)明化合物與包含ι-角叉菜膠以及一種或多種中性凝膠聚合物的凝膠基質(zhì)組合物一起配制。
所述優(yōu)選制劑的ι-角叉菜膠含量?jī)?yōu)選15％(重量)以上。優(yōu)選的ι-角叉菜膠等級(jí)包括藥用等級(jí)ι-角叉菜膠(FMC Biopolymer)，其粘度不小于5厘泊(cps)、優(yōu)選5-10cps(將1.5％的溶液加熱至82℃，其后用配置#1轉(zhuǎn)軸的Brookfield LV粘度計(jì)，以轉(zhuǎn)速30rpm在75℃測(cè)定粘度)；工業(yè)級(jí)ι-角叉菜膠(Fluka Biochemica)，優(yōu)選其粘度不小于14mPa.s，將0.3％水溶液加熱至20℃，其后用Haake型落球粘度計(jì)測(cè)定粘度，同時(shí)使用Lauda恒溫器C3和Hakke Mess-System III，鍍金不銹鋼球密度7.8g/cm3。
中性凝膠聚合物可以為單一中性可侵蝕聚合物或者一種以上中性可侵蝕聚合物的混合物，中性可侵蝕聚合物具有凝膠性質(zhì)以及基本不依賴于pH的溶解性。制劑中中性凝膠聚合物含量?jī)?yōu)選為10％(重量)以上、更優(yōu)選20％(重量)以上。
合適的中性凝膠聚合物包括聚氧化乙烯(PEO)，PEO系列衍生物以及組分(例如，適當(dāng)分子量或粘度的聚乙二醇(PEG)，優(yōu)選天然固體狀態(tài))。如果用單一中性凝膠聚合物，PEO優(yōu)選MW≥4百萬(wàn)(4M)，等于水溶液粘度1650-5500mPa.s(或1650-5500cps；用Brookfield RVF粘度計(jì)，第2號(hào)轉(zhuǎn)軸，2rpm，測(cè)試25℃的1％水溶液)。合適PEO的其它實(shí)例包括MW約5百萬(wàn)(5M)、相應(yīng)水溶液粘度5500-7500mPa.s的PEO，或者M(jìn)W約8百萬(wàn)(8M)、相應(yīng)水溶液粘度10000-15000mPa.s的PEO。該范圍值包括該聚合物在25℃檢測(cè)的典型溶液粘度值(cps)，參見(jiàn)USP 24/NF 19，2000版，pp.2285-2286。如果PEG用作單一中性凝膠聚合物，優(yōu)選具有高分量例如MW約20000，相應(yīng)的粘度2700-3500mPa.s(或2700-3500cps)，用毛細(xì)管粘度計(jì)(Ubbelohde或等效設(shè)備在20℃用50％水溶液(w/w)測(cè)得)。[參考EuropeanPharmacopoeia第三版，2000，Supplement，pp.908-909]。
其它合適凝膠聚合物包括具有適當(dāng)?shù)母哒扯鹊睦w維素衍生物例如羥基丙基甲基纖維素(HPMC)或羥基乙基纖維素(HEC)(例如“HPMC10000cps”、“HPMC 15000cps”、“HH型HEC”或“H型HEC”)。當(dāng)用作單一中性聚合物時(shí)，羥基丙基甲基纖維素聚合物如“HPMC10000cps”和“HPMC 15000cps”分別具有表觀粘度7500-14000mPa.s(或7500-14000cps)和11250-21000mPa.s(或11250-21000cps)，所得粘度在20℃用2％(w/w)水溶液測(cè)定，根據(jù)干物質(zhì)計(jì)算，使用毛細(xì)管粘度計(jì)(Ubbelohde或等效設(shè)備)。一種類型的羥基乙基纖維素聚合物，例如“Natrosol 250 Pharma，HH型”，購(gòu)自HerculesIncorporated(Aqualon)，通常具有Brookfield粘度約20,000mPa.s，檢測(cè)使用Brookfield Synchro-Lectric Model LVF儀，檢測(cè)條件為1％溶液濃度，第4號(hào)轉(zhuǎn)軸，轉(zhuǎn)軸轉(zhuǎn)速30rpm，系數(shù)200，25℃(參見(jiàn)NatrosolPhysical and Chemical Properties booklet，33.007-E6(1993)，p.21)。
可以列舉的具體制劑包括將本發(fā)明化合物與50∶50(wt％)比例的ι-角叉菜膠和HPMC(10,000cps)配制的制劑，或者與50∶50(wt％)比例的ι-角叉菜膠和PEO 4M配制的制劑。
所述制劑中其它優(yōu)選賦形劑包括潤(rùn)滑劑例如硬酯酰延胡索酸鈉。
根據(jù)所治療的疾病、患者和給藥途徑，可以給予不同劑量的所述組合物。
本發(fā)明化合物也可以與任何具有不同作用機(jī)制的抗血栓形成藥物聯(lián)合和/或同時(shí)給藥，例如一種或多種以下藥物抗血小板藥物乙酰水楊酸、噻氯匹定、氯吡格雷；血栓烷受體和/或合成酶抑制劑；纖維蛋白原受體拮抗劑；前列環(huán)素模擬物；磷酸二酯酶抑制劑；ADP-受體(P2T)拮抗劑；羧肽酶U(CPU)抑制劑。
本發(fā)明化合物還可以與血栓溶解劑聯(lián)合和/或同時(shí)給藥，例如一種或多種組織纖溶酶原激活物(天然、重組或修飾組織纖溶酶原激活物)、鏈激酶、尿激酶、尿激酶原、茴香酰化纖溶酶原-鏈激酶激活物復(fù)合物(APSAC)、動(dòng)物唾腺纖溶酶原激活物等，其目的是治療血栓形成疾病、尤其是心肌梗塞。
因此，本發(fā)明再一方面提供包含本發(fā)明化合物和藥學(xué)上可接受的輔助劑、稀釋劑或載體的藥用制劑。
本發(fā)明化合物治療性治療人的合適日劑量經(jīng)口用藥為約0.001-100mg/kg體重，經(jīng)胃腸外用藥為0.001-50mg/kg體重。
為了避免疑義，本文使用的術(shù)語(yǔ)“治療”包括治療性和/或預(yù)防性治療。
本發(fā)明化合物與現(xiàn)有技術(shù)的已知化合物相比具有以下優(yōu)點(diǎn)更好效果、更小毒性、更長(zhǎng)作用時(shí)間、更寬活性范圍、更有效、產(chǎn)生更少副作用、更容易吸收和/或更佳的藥動(dòng)學(xué)特征(例如更高的口服生物利用率和/或較低的清除率)以及/或具有其它更有效的藥理學(xué)性質(zhì)、物理或化學(xué)性質(zhì)。本發(fā)明化合物與現(xiàn)有技術(shù)的已知化合物相比可具有的進(jìn)一步優(yōu)勢(shì)是它們的用藥頻率可以更低。
生物學(xué)試驗(yàn)可以使用下列試驗(yàn)方法。
試驗(yàn)A測(cè)定凝血酶凝固時(shí)間(TT)將抑制劑溶液(25μl)與血漿(25μl)溫育3分鐘。然后，加入人凝血酶(T 6769；Sigma Chem.Co.或Hematologic Technologies)緩沖溶液，pH7.4(25μl，4.0 NIH單位/ml)，用自動(dòng)裝置(KC 10；Amelung)測(cè)定凝固時(shí)間。
凝血酶凝固時(shí)間(TT)表示為絕對(duì)值(秒)以及不含有抑制劑的TT(TT0)與含有抑制劑的TT(TTi)的比值。將比值(范圍1-0)對(duì)抑制劑濃度(log轉(zhuǎn)換)作圖，根據(jù)以下方程式擬合為S形劑量-反應(yīng)曲線y＝a/[1+(x/IC50)s]其中a＝最大范圍，即1；s＝劑量-反應(yīng)曲線的斜率；IC50＝凝固時(shí)間倍增的抑制劑濃度。在PC上使用GraFit第3版的軟件程序進(jìn)行計(jì)算，設(shè)定方程等于0開(kāi)始，規(guī)定結(jié)束＝1(Erithacus Software，RobinLeatherbarrow，Imperial College of Science，London，UK)。
試驗(yàn)B采用生色自動(dòng)測(cè)試測(cè)定對(duì)凝血酶的抑制作用采用生色底物方法，在Plato 3300自動(dòng)微量滴定板處理器(RosysAG，CH-8634 Hombrechtikon，Switzerland)上，使用96孔半體積微量滴定板(Costar，Cambridge，MA，USA；目錄號(hào)3690)測(cè)定凝血酶抑制劑的效能。采用DMSO以1∶3(24+48μl)系列稀釋試驗(yàn)物質(zhì)在DMSO(72μl)中的貯備液(0.1-1mmol/L)得到十種不同的濃度，其作為本測(cè)試中的分析樣品。用124μl測(cè)試緩沖液稀釋2μl的試驗(yàn)樣品，加入12μl生色底物在測(cè)試緩沖液中的溶液(S-2366，Chromogenix，Mǒlndal，Sweden)和最后加入12μlα-凝血酶在測(cè)試緩沖液中的溶液(人α-凝血酶，Sigma Chemical Co.或Hematologic Technologies)，混合樣品。最終測(cè)試濃度為試驗(yàn)物質(zhì)0.00068-13.3μmol/L，S-2366 0.30mmol/L，α-凝血酶0.020NIHU/ml。使用在37℃的40分鐘溫育期間線性吸光度遞增計(jì)算與無(wú)抑制劑的空白對(duì)比的試驗(yàn)樣品的百分抑制率。根據(jù)log濃度與％抑制率曲線計(jì)算相當(dāng)于引起凝血酶活性抑制50％的抑制劑濃度的IC50-自動(dòng)測(cè)定值。
試驗(yàn)C測(cè)定對(duì)人凝血酶的抑制常數(shù)Ki使用生色底物方法，于37℃在Cobas Bio離心分析儀(Roche，Basel，Switzerland)上完成Ki測(cè)定。三種不同底物濃度下，測(cè)定在人α-凝血酶與不同濃度試驗(yàn)化合物溫育后殘余酶活性，測(cè)定結(jié)果以405nm吸光度變化表示。
將試驗(yàn)化合物溶液(100μl；通常為含有BSA 10g/L的緩沖液或鹽水)與200μl人α-凝血酶(Sigma Chemical Co)在含有BSA(10g/L)的測(cè)試緩沖液(0.05mol/L Tris-HCl pH7.4，用氯化鈉調(diào)節(jié)離子強(qiáng)度為0.15)中混合，用Cobas Bio分析樣品。將60μl樣品以及20μl水加入到320μl的測(cè)試緩沖液中的底物S-2238(Chromogenix AB，Molndal，Sweden)中，監(jiān)測(cè)吸光度變化(ΔA/分鐘)。S-2238的最終濃度為16、24和50μmol/L，凝血酶的最終濃度為0.125 NIH U/mL。
使用穩(wěn)定態(tài)反應(yīng)速率構(gòu)建Dixon曲線即抑制劑濃度與1/(ΔA/分鐘)的曲線圖。對(duì)于可逆競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑而言，不同底物濃度的數(shù)據(jù)點(diǎn)一般形成直線，其在x處的截距為-Ki。
試驗(yàn)D測(cè)定活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)用Stago生產(chǎn)的試劑PTT Automated 5測(cè)定收集的正常人含枸緣鹽血漿APTT。將所述抑制劑加入到血漿(10μl抑制劑溶液與90μl血漿)中，與APTT試劑溫育3分鐘，然后加入100μl氯化鈣溶液(0.025M)，使用血液凝固分析儀KC10(Amelung)根據(jù)試劑制造商的說(shuō)明測(cè)定APTT。
凝固時(shí)間表示為絕對(duì)值(秒)以及不加抑制劑的APTT(APTT0)與加入抑制劑的APTT(APTTi)的比值。將比值(范圍1-0)對(duì)抑制劑的濃度(log轉(zhuǎn)換)作圖，根據(jù)以下方程擬合為S形劑量-反應(yīng)曲線y＝a/[1+(x/IC50)s]其中a＝最大范圍，即1；s＝劑量-反應(yīng)曲線的斜率；IC50＝凝固時(shí)間倍增的抑制劑濃度。使用GraFit第3版的軟件程序在PC上進(jìn)行計(jì)算，設(shè)定方程等于0開(kāi)始，規(guī)定結(jié)束＝1(Erithacus Software，RobinLeatherbarrow，Imperial College of Science，London，UK)。
IC50APTT定義為活化部分凝血活酶時(shí)間倍增的人血漿抑制劑濃度。
試驗(yàn)E測(cè)定活體外凝血酶時(shí)間檢測(cè)清醒大鼠在口服或胃腸外給予溶解在乙醇∶SolutolTM∶水(5∶5∶90)中的本發(fā)明化合物后對(duì)凝血酶的抑制作用，大鼠在實(shí)驗(yàn)前一或兩天安放導(dǎo)管，以便從頸動(dòng)脈采血。在實(shí)驗(yàn)的當(dāng)天，在給予化合物后的固定時(shí)間采取血樣到含有1份檸檬酸鈉溶液(0.13mol/L)和9份血的塑料試管中。將試管離心獲得血小板極少的血漿。
50μL血漿樣品用100μL冷乙腈沉淀。樣品以4000rpm離心10分鐘。75μL上清液用75μL 0.2％甲酸稀釋。取10μL體積獲得的溶液通過(guò)LC-MS/MS分析，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線確定凝血酶抑制劑濃度。
試驗(yàn)F測(cè)定大鼠血漿清除率測(cè)定雄性Sprague Dawley大鼠的血漿清除率。將化合物溶于水中，以4μmol/kg劑量皮下快速注射給藥。給藥后頻繁收集血樣長(zhǎng)達(dá)5小時(shí)。離心血樣，分離血漿與血細(xì)胞，將血漿轉(zhuǎn)移至含枸緣鹽(終濃度10％)的小瓶中。用100μL冷乙腈沉淀50μL血漿樣品。樣品以4000rpm離心10分鐘。用75μL 0.2％甲酸稀釋75μL上清液。取10μL體積獲得的溶液通過(guò)LC-MS/MS分析，利用標(biāo)準(zhǔn)曲線確定凝血酶抑制劑濃度。利用對(duì)數(shù)/線性梯形規(guī)則計(jì)算血漿濃度-時(shí)間曲線下面積，外推至無(wú)窮時(shí)間。然后如下計(jì)算化合物的血漿清除率(CL)CL＝劑量/AUC數(shù)值報(bào)告為mL/min/kg。
試驗(yàn)G測(cè)定體外穩(wěn)定性從Sprague-Dawley大鼠制備肝微粒體，按照內(nèi)部SOP制備人肝樣品。在輔助因子NADH(2.5mmol/L)和NADPH(0.8mmol/L)存在下，化合物在0.05mol/L TRIS緩沖液(pH7.4)中于37℃溫育，微粒體蛋白總濃度為3mg/mL?；衔锏某跏紳舛葹?或10μmol/L。開(kāi)始溫育后取樣品分析長(zhǎng)達(dá)60分鐘。加入相當(dāng)于3.3％總樣品體積量的20％肉豆蔻酸立即終止收集樣品的酶活性。使用在0時(shí)間收集的樣品作為對(duì)照(START CONC.)，利用LCMS測(cè)定60分鐘樣品保留的化合物濃度(FINAL CONC)。如下計(jì)算凝血酶降解抑制劑的％100%×[STARTCONC]-[FINALCONC][STARTCONC]]]>試驗(yàn)H動(dòng)脈血栓形成模型在頸動(dòng)脈局部施用氯化鐵(FeCl3)誘發(fā)動(dòng)脈損傷。腹膜內(nèi)注射苯巴比妥鈉(80mg/kg；Apoteksbolget；Umea，Sweden)麻醉大鼠，然后在整個(gè)試驗(yàn)中連續(xù)輸注(12mg/kg/h)維持麻醉。在整個(gè)試驗(yàn)中通過(guò)外部加熱使大鼠體溫維持在38℃。試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)為5分鐘控制期。5分鐘后，腹膜內(nèi)給予人125I-纖維蛋白原(80kBq；IM53；AmershamInternational，Buckinghamshire，UK)，其用作隨后纖維蛋白(原)摻入血栓的標(biāo)記。將頸動(dòng)脈段近端放入縱向開(kāi)放的塑料管(6mm；Silastic_；Dow Corning，MI，USA)，其中含有氯化鐵浸濕(2μL，55％w/w；Merck，Darmstadt，Germany)的濾紙(直徑3mm；1F；Munktell，Grycksbo，Sweden)。左頸動(dòng)脈暴露于氯化鐵10分鐘，然后從塑料試管取出浸入鹽水中。50分鐘后，取出頸動(dòng)脈，用鹽水沖洗。此外，注射125I-纖維蛋白原后10分鐘和試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，取對(duì)照血樣測(cè)定血液125I-活度。對(duì)照血樣和血管節(jié)段的125I-活度在試驗(yàn)的同一天用γ計(jì)數(shù)儀(1282 Compugamma；LKB Wallac Oy，Turku，F(xiàn)inland)測(cè)定。血栓大小的檢測(cè)為摻入血管節(jié)段的125I-活度相對(duì)于血液125I-活度(cpm/mg)的相對(duì)量。
一般實(shí)驗(yàn)細(xì)節(jié)TLC在硅膠上進(jìn)行。手性HPLC分析采用46mm×250mmChiralcel OD柱和5cm保護(hù)柱。柱溫保持在35℃。流動(dòng)速率為1.0mL/min。在228nm使用Gilson 115 UV檢測(cè)器。列出了用于各化合物的由己烷、乙醇和三氟乙酸組成的流動(dòng)相及其適當(dāng)比例。通常，將產(chǎn)物溶于最小量乙醇，再將其用流動(dòng)相稀釋。
LC-MS/MS采用HP-1100完成，該儀器配置了CTC-PAL注射器和5μm，4×100mm ThermoQuest，Hypersil BDS-C18柱。使用API-3000(Sciex)MS檢測(cè)器。流動(dòng)速率1.2mL/min，流動(dòng)相(梯度)由10-90％乙腈與90-10％4mM乙酸銨水溶液組成，兩者都包含0.2％甲酸。
用四甲硅烷作內(nèi)標(biāo)記錄1H NMR譜。用列出的用列出的氘化溶劑作內(nèi)標(biāo)記錄13C NMR譜。
實(shí)施例1Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu)(i)3-氯-5-甲氧基苯甲醛在25℃，將3，5-二氯苯甲醚(74.0g，419mmol)的THF(200mL)溶液滴加到含鎂金屬(14.2g，585mmol，預(yù)先用0.5N HCl沖洗)的THF(100mL)。加畢，滴加1，2-二溴乙烷(3.9g，20.8mmol)。將所得深褐色混合物加熱回流3小時(shí)?；旌衔锢鋮s至0℃，一次性加入N，N-二甲基甲酰胺(60mL)。混合物用乙醚(3×400mL)和6N HCl(500mL)分配。合并的有機(jī)萃取液用鹽水(300mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得油狀物。硅膠快速色譜法(用Hex∶EtOAc(4∶1)洗提)(2×)處理獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(38.9g，54％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.90(s，1H)，7.53(s，1H)，7.38(s，1H)，7.15(s，1H)，3.87(s，3H)。
(ii)3-氯-5-羥基苯甲醛將3-氯-5-甲氧基苯甲醛(22.8g，134mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))的二氯甲烷(250ml)溶液冷卻至0℃。在15分鐘內(nèi)滴加三溴化硼(15.8mL，167mmol)。攪拌反應(yīng)混合物2小時(shí)后，緩慢加入水(50ml)。然后將溶液用乙醚(2×100mL)萃取。合并有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。硅膠快速色譜法(用Hex∶EtOAc(4∶1)洗提)處理獲得小標(biāo)題化合物(5.2g，25％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.85(s，1H)，7.35(s，1H)，7.20(s，1H)，7.10(s，1H)，3.68(s，1H)(iii)3-氯-5-二氟甲氧基苯甲醛將3-氯-5-羥基苯甲醛(7.5g，48mmol；參見(jiàn)以上步驟(ii))的2-丙醇(250mL)和30％KOH(100mL)溶液加熱至回流。在攪拌同時(shí)，將CHClF2通入反應(yīng)混合物2小時(shí)。冷卻反應(yīng)混合物，用1N HCl酸化，用EtOAc(2×100mL)萃取。有機(jī)物用鹽水(100mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。硅膠快速色譜法(用Hex∶EtOAc(4∶1)洗提)處理獲得小標(biāo)題化合物(4.6g，46％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.95(s，1H)，7.72(s，1H)，7.52(s，1H)，7.40(s，1H)，6.60(t，JH-F＝71.1Hz，1H)(iv)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OTMS)CN將3-氯-5-二氟甲氧基苯甲醛(4.6g，22.3mmol；參見(jiàn)以上步驟(iii))的二氯甲烷(200mL)溶液冷卻至0℃。加入ZnI2(1.8g，5.6mmol)和三甲硅烷基氰(2.8g，27.9mmol)，反應(yīng)混合物升至室溫，攪拌15小時(shí)。將混合物不完全真空濃縮獲得液體小標(biāo)題化合物，將其直接用于以下步驟(v)無(wú)需進(jìn)一步提純或特征化。
(v)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(NH)OEt將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OTMS)CN(6.82g，22.3mmol；參見(jiàn)以上步驟(iv))滴加到HCl/EtOH(500mL)。將反應(yīng)混合物攪拌15h，然后在真空下部分濃縮獲得液體小標(biāo)題化合物，其直接用于步驟(vi)無(wú)需進(jìn)一步提純或特征化。
(vi)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OEt將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)-CH(OH)C(NH)OEt(6.24g，22.3mmol；參見(jiàn)以上步驟(v)溶于THF(250mL)，加入0.5M硫酸(400mL)，將反應(yīng)物在40℃攪拌65小時(shí)，冷卻，然后在真空下部分濃縮除去大部分THF。然后反應(yīng)混合物用乙醚(3×100mL)萃取，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得固體小標(biāo)題化合物，其直接用于步驟(vii)無(wú)需進(jìn)一步提純或特征化。
(vii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OH將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OEt(6.25g，22.3mmol；參見(jiàn)以上步驟(vi))的2-丙醇(175mL)和20％KOH(350mL)溶液在室溫下攪拌15小時(shí)。然后將反應(yīng)物在真空下部分濃縮除去大部分2-丙醇。剩余混合物用1M硫酸酸化，用乙醚(3×100mL)萃取，用硫酸鈉干燥，真空濃縮獲得固體。用CHCl3∶MeOH∶濃NH4OH(6∶3∶1)洗提的硅膠快速色譜法獲得小標(biāo)題化合物的銨鹽。然后將銨鹽溶于EtOAc(75mL)和H2O(75mL)的混合物，用2N HCl酸化。分離出有機(jī)層，用鹽水(50mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，真空濃縮獲得小標(biāo)題化合物(3.2g，步驟(iv)至(vii)57％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.38(s，1H)，7.22(s，1H)，7.15(s，1H)，6.89(t，JH-F＝71.1Hz，1H)，5.16(s，1H)(viii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(a)和Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(S)CH(OAc)C(O)OH(b)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OH(3.2g，12.7mmol；參見(jiàn)以上步驟(vii))和Lipase PS“Amano”(～2.0g)在乙酸乙酯(125mL)和MTBE(125mL)中的混合物加熱回流48小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻，用Celite_過(guò)濾，濾餅用EtOAc洗滌。真空濃縮濾液，再用硅膠快速色譜法(CHCl3∶MeOH∶濃NH4OH(6∶3∶1))處理獲得小標(biāo)題化合物(a)和(b)的銨鹽。將化合物(a)的鹽溶于水，用2N HCl酸化，用EtOAc萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得小標(biāo)題化合物(a)(1.2g，37％)。
小標(biāo)題化合物(a)1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.38(s，1H)，7.22(s，1H)，7.15(s，1H)，6.89(t，JH-F＝71.1Hz，1H)，5.17(s，1H)(ix)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)在0℃，Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(1.1g，4.4mmol；參見(jiàn)以上步驟(viii))和H-Aze-Pab(Teoc)(參見(jiàn)國(guó)際專利申請(qǐng)WO00/42059，2.6g，5.7mmol)的DMF(50mL)溶液中加入PyBOP(2.8g，5.3mmol)和三甲基吡啶(1.3g，10.6mmol)。反應(yīng)物在0℃攪拌2小時(shí)，然后在室溫再攪拌15小時(shí)。真空濃縮反應(yīng)混合物，采用硅膠快速色譜法(3x)(依次用CHCl3∶EtOH(9∶1)、EtOAc∶EtOH(20∶1)和CH2Cl2∶CH3OH(95∶5)洗提)處理獲得白色固體小標(biāo)題化合物(1.0g，37％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ7.79-7.85(d，J＝8.7Hz，2H)，7.15-7.48(m，5H)，6.89和6.91(t，JH-F＝71.1Hz，1H)，5.12和5.20(s，1H)，4.75-4.85(m，1H)，3.97-4.55(m，6H)，2.10-2.75(m，2H)，1.05-1.15(m，2H)，0.09(s，9H)MS(m/z)611(M+1)+(x)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu，Teoc)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.051g，0.08mmol；參見(jiàn)以上步驟(ix))溶于3mL乙腈，加入0.062g(0.5mmol)O-環(huán)丁基羥胺鹽酸鹽?；旌衔镌?0℃加熱4.5小時(shí)。蒸去溶劑，殘余物在水和乙酸乙酯間分配。水相用乙酸乙酯再萃取兩次，合并的有機(jī)相用水、鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)。獲得0.054g(95％)。
1H-NMR(400MHz；CD3OD)δ8.66-8.50(m，1H)，7.45(d，2H)，7.29(m，3H)，7.15(m，2H)，6.88(t，1H主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.85(t，1H次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.18(s，1H主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.12(s，1H次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.16(m，1H次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.78(m，1H主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.70(m，1H)，4.50-4.30(m，3H)，4.19-3.93(m，3H)，2.71-2.44(m，1H)，2.34-2.11(m，5H)，1.78(m，1H)，1.62(m，1H)，0.96(m，2H)，0.01(s，9H)(xi)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu，Teoc)(0.054g，0.08mmol；參見(jiàn)以上步驟(x))溶于0.5mL CH2Cl2和3mLTFA。反應(yīng)進(jìn)行60分鐘。蒸去TFA，殘余物用制備型HPLC提純。合并需要部分，冷凍干燥(2×)獲得標(biāo)題化合物23mg(54％)。
MS(m/z)536(M-1)-；538(M+1)+1H-NMR(400MHz；CD3OD)δ7.56(d，2H)，7.33(m，3H)，7.15(m，2H)，6.89(t，1H主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.86(t，1H次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.18(s，1H主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體；m，1H次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.11(s，1H次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.77(m，1H主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.58(m，1H)，4.42(m，2H)，4.34(m，1H主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.15(m，1H主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.06(m，1H次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.97(m，1H次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.66(m，1H次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.52(m，1H主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.33-2.25(m，3H)，2.O1-2.20(m，2H)，1.75(m，1H)，1.59(m，1H)13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ172.4，172.3，171.9，171.4，152.3
實(shí)施例2Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)(i)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH，Teoc)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.148g，0.24mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例1(ix))溶于9mL乙腈，加入0.101g(1.45mmol)羥胺鹽酸鹽?；旌衔镌?0℃加熱2.5小時(shí)，用Celite_過(guò)濾，蒸發(fā)。粗制產(chǎn)物(0.145g；純度75％)直接用于下一步驟無(wú)需再提純。
(ii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH，Teoc)(0.145g，0.23mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))溶于0.5mL二氯甲烷和9mL TFA。反應(yīng)進(jìn)行60分鐘。蒸去TFA，殘余物用制備型HPLC提純。合并需要部分，冷凍干燥(2x)獲得標(biāo)題化合物72mg(經(jīng)兩個(gè)步驟收率62％)。
MS(m/z)482(M-1)-；484(M+1)+1H-NMR(400MHz；CD3OD)δ7.58(d，2H)，7.33(m，3H)，7.15(m，2H)，6.89(t，1H主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.86(t，1H次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.18(s，1H主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體；和m，1H次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.12(s，1H次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.77(m，1H主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.42(m，2H)，4.34(m，1H主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.14(m，1H主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.06(m，1H次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.95(m，1H次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.66(m，1H次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.50(m，1H主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.27(m，1H主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.14(m，1H次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ172.4，172.3，172.0，171.4 152.3，152.1實(shí)施例3Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.045g，0.074mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例1(ix)溶于3mL TFA，讓其反應(yīng)1小時(shí)。蒸去TFA，殘余物用水/乙腈冷凍干燥獲得小標(biāo)題化合物的TFA鹽0.043g(100％)。
1H-NMR(400MHz；CD3OD)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ7.8-7.75(m，2H)，7.55-7.5(m，2H)，7.35(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.31(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.19(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.15(m，1H)，7.12(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.89(t，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.87(t，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.22(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.20(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.13(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.80(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.6-4.4(m，2H)，4.37(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.19(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.07(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.98(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.70(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.55(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.29(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.15(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ172.6，172.5，172.0，171.7，167.0MS(m/z)465(M-1)-，467(M+1)+實(shí)施例4Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(COO環(huán)戊基)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFA(74mg，0.13mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例3)和氯甲酸環(huán)戊基酯(44mg，0.30mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入NaOH水溶液(0.5mL，2M，1mmol)。將混合物在室溫下攪拌，反應(yīng)用HPLC監(jiān)測(cè)。2.5小時(shí)后，加入水，將液相分離。水相用二氯甲烷萃取兩次。合并的有機(jī)相用硫酸鎂干燥，用硅膠(首先用二氯甲烷，再用EtOAc)提純。真空除去溶劑后，固體殘余物溶于水/乙腈，冷凍干燥獲得白色固體標(biāo)題化合物。產(chǎn)量33mg(44％)MS(m/z)579(M+1)+1H NMR(400MHz；CD3OD)δ7.79(d，2H)，7.43-7.30(m，5H)，7.20-7.11(m，2H)，6.90(t，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.87(t，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.19(dd，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.18(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.13(m，1H)，5.11(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.78(dd，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.45(m，2H)，4.35(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.16(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.06(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.97(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.68(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.52(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.28(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.16(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，1.90(m，2H)，1.77(m，4H)，1.61(m，2H)13C NMR(羰基和/或脒質(zhì)子；100MHz)δ173.6，173.1，172.6，170.3，165.6實(shí)施例5Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)開(kāi)始用Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFA(73mg，0.13mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例3)和氯甲酸芐基酯(35mg，0.21mmol)根據(jù)以上實(shí)施例4介紹的方法制備標(biāo)題化合物。需要再用反相HPLC(0.1M乙酸銨/MeCN 40/60)提純。真空濃縮合適的部分，用EtOAc萃取。產(chǎn)量24mg(32％)。
MS(m/z)602(M+1)+1H NMR(400MHz；CD3OD)δ7.80(d，2H)，7.43-7.25(m，8H)，7.20-7.10(m，2H)，6.90(t，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.88(t，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.18(dd，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.18(s，2H)，5.17(s，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.11(s，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.78(dd，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.45(m，2H)，4.34(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.15(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.06(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.97(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.66(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.51(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.27(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.15(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)13C NMR(羰基和/或脒質(zhì)子；100MHz)δ173.6，173.1，172.6，170.5，164.9實(shí)施例6Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFA(i)2-硝基-5-三氟甲氧基苯甲酸在低于0℃(冰-MeOH浴)，在20分鐘向3-三氟甲氧基苯甲酸(49.0g，0.24mol)的硫酸(500mL)溶液中加入硝酸鉀(31.3g，0.31mol)的硫酸(200mL)溶液。所得溶液在0℃攪拌2小時(shí)，然后升至室溫，攪拌18小時(shí)。將反應(yīng)物傾入冰中，所得酸性溶液用EtOAc(5×)萃取。合并的有機(jī)物用水(1×)、鹽水(2×)、水(1×)和鹽水(1×)洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得被HOAc污染的粗制固體小標(biāo)題化合物(65.7g)。將粗制小標(biāo)題化合物溶于EtOAc和甲苯，真空濃縮獲得沒(méi)有HOAc的固體(58.4g，97％)，它直接用于下一步驟無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.10(br s，1H)，8.02(d，1H，J＝8Hz)，7.69(d，1H，J＝2Hz)，7.54(dd，1H，J＝2Hz，J＝8Hz)(ii)2-氨基-5-三氟甲氧基苯甲酸2-硝基-5-三氟甲氧基苯甲酸(56.8g，0.23mol；參見(jiàn)以上步驟(i))的EtOH(1000mL)溶液中加入10％Pd/C(5.7g)。所得溶液中通入H25小時(shí)，用Celite_過(guò)濾，真空濃縮獲得固體粗制小標(biāo)題化合物(49.7g，98％)，它直接用于下一步驟無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.66(m，1H)，7.17(d，1H，J＝8Hz)，6.77(d，1H，J＝8Hz)(iii)2-氨基-3-氯-5-三氟甲氧基苯甲酸2-氨基-5-三氟甲氧基苯甲酸(49.0g，0.22mol；參見(jiàn)以上步驟(ii))的HOAc(1200mL)溶液中緩慢加入磺酰氯(41.8g，0.31mol)。觀測(cè)到氣體放出。將所得不均勻混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。再加入HOAc(300mL)以幫助攪拌，接著以每部分5mL加入磺酰氯直到根據(jù)TLC分析初始原料耗盡為止。真空濃縮反應(yīng)物獲得固體，將其在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器用EtOAc(2×)沖洗，接著用乙醚(1×)沖洗除去HOAc。所得固體進(jìn)一步干燥獲得粗制小標(biāo)題化合物的鹽酸鹽(60.5g，94％)，它直接用于下一步驟無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.72(s，1H)，7.44(s，1H)，7.22(s，可交換)(iv)3-氯-5-三氟甲氧基苯甲酸2-氨基-3-氯-5-三氟甲氧基苯甲酸(60.5g，0.22mol；參見(jiàn)以上步驟(iii))的1，4-二噁烷(1000mL)溶液中加入6N HCl(750mL)。溶液中形成一些油狀有機(jī)物。將二噁烷溶液冷卻至低于0℃(冰-MeOH浴)。通過(guò)加液漏斗在15分鐘內(nèi)加入亞硝酸鈉(18.2g，0.26mol)的水(250mL)溶液。將所得溶液攪拌45分鐘。通過(guò)加液漏斗緩慢加入次磷酸(221.5mL 50wt％的H2O溶液，291.2g，2.20mol)。溶液在0℃攪拌1.5小時(shí)，然后升至室溫(觀測(cè)到氣體放出)，攪拌18小時(shí)。將粗制溶液轉(zhuǎn)入分液漏斗，用乙醚(4×)萃取。合并的有機(jī)物用NaHCO3水溶液(3x)萃取。將堿性水層小心地用6N HCl酸化，用二氯甲烷(3×)萃取。二氯甲烷萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得粗制固體小標(biāo)題化合物(26.5g，從3-三氟甲氧基苯甲酸46％)，它直接用于下一步驟無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.98(s，1H)，7.83(s，1H)，7.58(s，1H)(v)3-氯-5-三氟甲氧基芐基醇在氮?dú)夥铡⑹覝叵拢?-氯-5-三氟甲氧基苯甲酸(22.5g，93.5mmol；參見(jiàn)以上步驟(iv))的無(wú)水THF(1200mL)溶液中加入BH3·THF絡(luò)合物溶液(140mL 1M的THF溶液；140.3mmol)。將溶液回流2小時(shí)，冷卻至室溫，攪拌18小時(shí)，小心地用水猝滅，真空濃縮除去大部分THF。殘余物用EtOAc稀釋，有機(jī)物用鹽水(3x)洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得粗制油狀小標(biāo)題化合物(21.2g，100％)，它直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.33(s，1H)，7.17(s，1H)，7.14(s，1H)，4.72(s，2H)，2.05(br s，·1H)(vi)3-氯-5-三氟甲氧基苯甲醛將DMSO(16.1g，205.9mmol)的無(wú)水二氯甲烷(300mL)溶液冷卻至-78℃。通過(guò)注射器緩慢加入乙二酰氯(13.1g，103.0mmol)(觀測(cè)到氣體放出)。所得溶液在-78℃攪拌15分鐘。通過(guò)加液漏斗在15分鐘內(nèi)加入3-氯-5-三氟甲氧基芐基醇(21.2g，93.6mmol；參見(jiàn)以上步驟(v))的二氯甲烷(200mL)溶液?；鞚崛芤涸?78℃攪拌40分鐘，在10分鐘內(nèi)通過(guò)加液漏斗加入DIPEA(60.5g，468.0mmol)。所得均勻溶液在-78℃攪拌1.5小時(shí)，然后升至室溫，攪拌18小時(shí)。真空濃縮粗制溶液，殘余物用EtOAc稀釋，用水(1×)、2N HCl(1×)、鹽水(1×)、NaHCO3水溶液(1×)和鹽水(1×)洗滌。有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得粗制小標(biāo)題化合物(19.9g，95％)，它直接用于下一步驟無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.00(s，1H)，7.83(s，1H)，7.66(s，1H)，7.51(s，1H)(vii)Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R，S)CH(OTMS)CN在0℃，3-氯-5-三氟甲氧基苯甲醛(19.9g，88.6mmol；參見(jiàn)以上步驟(vi))的二氯甲烷(600mL)溶液中加入ZnI2(1.4g，4.4mmol)和三甲硅烷基氰(9.7g，97.5mmol)。在0℃攪拌1.5小時(shí)后，在室溫?cái)嚢?小時(shí)，TLC分析顯示只有初始原料。分批加入碘化鋅直到反應(yīng)繼續(xù)(加入的碘化鋅總共超過(guò)30.0g)。在室溫下攪拌18小時(shí)后，反應(yīng)物用水猝滅，分離出有機(jī)物。有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得粗制液體小標(biāo)題化合物(27.7g，96％)，直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.43(s，1H)，7.28(s，1H)，7.25(s，1H)，5.49(s，1H)，0.38(s，9H)(viii)Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R，S)CH(OH)C(O)OH將Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R，S)CH(OTMS)CN(27.7g，85.6mmol；參見(jiàn)以上步驟(vii))的濃鹽酸(300mL)懸浮液回流3小時(shí)。所得褐色不均勻混合物冷卻至室溫，用乙醚(2x)萃取。初始有機(jī)物用2N NaOH(2x)萃取，將堿性層用2N HCl酸化，用乙醚萃取。乙醚溶液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得粗制小標(biāo)題化合物(4.9g，21％)。對(duì)初始有機(jī)物的TLC分析顯示仍然存在小標(biāo)題化合物，因此用6N NaOH重復(fù)堿性萃取/酸化過(guò)程再獲得粗制小標(biāo)題化合物(2.8g，12％)。對(duì)初始有機(jī)物的TLC分析顯示仍然存在小標(biāo)題化合物，因此有機(jī)物用硫酸鈉干燥，再真空濃縮獲得油狀的小標(biāo)題化合物鈉鹽(18.3g)。然后將鹽再溶于乙醚，有機(jī)物用2N HCl酸化，用鹽水洗滌。所得有機(jī)物用硫酸鈉干燥，用活性炭處理，用Celite_過(guò)濾，真空濃縮獲得粗制固體小標(biāo)題化合物(14.3g，62％)，它直接用于下一步驟無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.53(s，1H)，7.38(s，1H)，7.29(s，1H)，5.23(s，1H)(ix)Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)OH(a)和Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(OAc)C(O)OH(b)將Ph(3-Cl)(5-OCHF3)-(R，S)CH(OH)C(O)OH(7.7g，28.5mmol；參見(jiàn)以上步驟(viii))和Lipase PS“Amano”(3.8g)在MTBE(100mL)和乙酸乙酯(50mL)的混合物在60℃攪拌26小時(shí)。將反應(yīng)物冷卻，用Celite_過(guò)濾，濾餅用EtOAc洗滌。真空濃縮合并的有機(jī)物，再用硅膠快速色譜法(CHCl3∶MeOH∶濃NH4OH(6∶3∶1))處理獲得小標(biāo)題化合物(a)和小標(biāo)題化合物(b)的銨鹽混合物(6.7g)以及e.e.小于95％的小標(biāo)題化合物(a)銨鹽的純樣品(1.2g)。將各部分溶于Et2O，用2N HCl(1×)和鹽水(1×)洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮獲得相應(yīng)羧酸(分別為6.7g和1.1g)。然后將這些部分單獨(dú)再次置于拆分條件，根據(jù)需要通過(guò)硅膠色譜法(根據(jù)需要用CHCl3∶MeOH∶濃NH4OH(6∶3∶1或75∶20∶5或145∶45∶10)洗提)再提純。純化的小標(biāo)題化合物(a)在進(jìn)一步使用前用HCl水溶液或檸檬酸水溶液酸化。小標(biāo)題化合物(b)的銨鹽直接使用無(wú)需特征化。
小標(biāo)題化合物(a)1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.53(s，1H)，7.38(s，1H)，7.29(s，1H)，5.23(s，1H)13C NMR(75MHz，CD3OD)∶δ174.9，150.9，145.4，136.3，126.8，122.0，120.6，118.9，72.9MS(m/z)269(M-1)-(x)Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)在氮?dú)夥障?，將Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.73g，2.70mmol；參見(jiàn)以上步驟(ix))的DMF(40mL)溶液冷卻至0℃。溶液中加入H-Aze-Pab(Teoc)(1.46g，3.24mmol)、三甲基吡啶(0.82g，6.75mmol)和PyBOP(1.83g，3.51mmol)。溶液在0℃攪拌2小時(shí)，升至室溫，攪拌18小時(shí)，用水猝滅，真空濃縮。殘余物用EtOAc稀釋，用水(1×)、碳酸氫鈉水溶液(1×)、檸檬酸水溶液(1×)和鹽水(1×)洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得粗制小標(biāo)題化合物。硅膠快速色譜法(2x)(依次用EtOAc∶MeOH(30∶1)、二氯甲烷∶MeOH(93∶7)洗滌)處理獲得可破碎泡沫狀小標(biāo)題化合物(0.73g，43％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的復(fù)合混合物)δ7.78-7.82(d，2H，J＝8Hz)，7.25-7.54(m，5H)，5.25和5.16(s，1H)，5.22和4.79(m，1H)，3.92-4.58(m，6H)，2.20-2.76(m，2H)，1.04-1.13(m，2H)，0.08(s，9H)MS(m/z)629(M+1)+
(xi)Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab三氟乙酸(1.0mL)加入到攪拌下的冰/水冷卻的Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(101mg；160μmol；參見(jiàn)以上步驟(x))的二氯甲烷(10mL)溶液。1小時(shí)后除去冷卻浴。在室溫下1.5小時(shí)后，加入乙腈(30mL)，減壓小心除去溶劑。將殘余物溶于水，冷凍干燥獲得90mg(92％)標(biāo)題化合物的TFA鹽。
MS(m/z)483(M-1)-；485(M+1)+1H NMR(300MHz；CD3OD)(非對(duì)映異構(gòu)體/旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的復(fù)合物)δ7.70-7.80(m，2H)，7.45-7.58(m，3H)，7.24-7.38(m，2H)，5.26(s，1H)，5.17(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.82(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.35-4.6(m，3H)，4.22(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.92-4.12(m，2H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.70(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.55(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.30(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.16(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)13C NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ173.7，173.4，173.0，172.8，168.1實(shí)施例7Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)HATU(71mg；0.19mmol)加入到攪拌下的冰/水冷卻的Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)OH(39mg；0.14mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例6(ix))的DMF(3mL)溶液。30分鐘后，加入H-Aze-Pab(OMe)×2HCl(69mg；0.21mmol；參見(jiàn)國(guó)際專利申請(qǐng)WO 00/42059)和2，4，6-三甲基吡啶(0.080mL；0.58mmol)的DMF(1.5mL)溶液。將反應(yīng)混合物放置過(guò)夜，讓溫度緩慢升至室溫。真空除去溶劑，粗制產(chǎn)物用反相HPLC(乙腈0.1M乙酸銨水溶液)提純，在冷凍干燥適當(dāng)部分后獲得無(wú)色固體標(biāo)題化合物(61mg，97％)。
MS(m/z)513(M-1)-，515(M+1)+1H NMR(500MHz；CD3OD)δ7.97(bt，1H)，7.53(d，2H)，7.27(t，1H)，7.22(d，2H)，7.19(t，1H)，7.11(t，2H)，6.77(s，1H)，4.92(s，1H)，4.9(bs，3H)，4.81(m，2H)，4.40(m，2H)，4.09(m，1H)3.87(s，3H)，2.58(m，1H)，2.37(m，1H)13C NMR(125 MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳)δ171.8，169.9，156.8實(shí)施例8烷氧基脒類的平行合成法本合成在96-孔R(shí)obbins板上進(jìn)行。在包含適量的O-取代羥胺(下面具體說(shuō)明；所有羥胺都可由市售獲得或用眾所周知的文獻(xiàn)方法制備)的各孔中加入Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(10mg；17μmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例6(x))的乙腈(1.0mL)溶液。將以上板密封，在烘箱中以60℃旋轉(zhuǎn)反應(yīng)混合物過(guò)夜。冷卻并過(guò)濾后，固體用乙腈(3×0.3mL)洗滌。合并的液體部分在真空離心機(jī)濃縮。殘余物在水(0.4mL)和乙酸乙酯(0.4ml)間分配。在液-液萃取完成后，全部用HydromatrixTM柱過(guò)濾。用乙酸乙酯洗滌三次后，合并的濾液在真空離心機(jī)中濃縮。加入二氯甲烷(0.1mL)和三氟乙酸(0.3mL)進(jìn)行脫保護(hù)作用。在室溫下攪拌3小時(shí)后，真空除去溶劑。殘余物在飽和碳酸氫鈉水溶液(0.5mL)和乙酸乙酯(0.5mL)間分配。在萃取、通過(guò)HydromatrixTM過(guò)濾以及濃縮(參見(jiàn)下文)后，將殘余物溶于異丙醇/水(7/3)(1ml)。除去約2％的該溶液，用異丙醇/水(7/3)(1mL)稀釋用于LC-MS分析。真空除去溶劑后，將固體殘余物后轉(zhuǎn)移到96-孔板，用乙腈和乙酸乙酯溶解。溶劑用真空離心機(jī)蒸去獲得以下標(biāo)題化合物Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2-3-(5-Me-異噁唑))(用3-[(氨基氧基)甲基]-5-甲基異噁唑×HCl(18mg；0.11mmol))。產(chǎn)量3.64mg(35％)(MS(m/z)596(M+1)+)；Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2-3-吡啶)(用3-(氨基氧基)甲基吡啶×2 HCl(19mg；96μmol)。產(chǎn)量5.14mg(50％)(MS(m/z)592(M+1)+)；PH(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiBu)(用O-異丁基羥胺×HCl(17mg；140μmol)。產(chǎn)量4.4mg(45％)。MS(m/z)557(M+1)+)；Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt)(用O-乙基羥胺×HCl(14mg；140μmol)。產(chǎn)量4.04mg(42％)。MS(m/z)529(M+1)+)；Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn)(用O-芐基羥胺×HCl(17mg；110umol)。產(chǎn)量3.22mg(29％)。MS(m/z)591(M+1)+)；Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O環(huán)己基)(用O-環(huán)己基羥胺×HCl(15mg；99μmol)。產(chǎn)量2.9mg(26％)。MS(m/z)583(M+1)+)；Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCBu)(用O-環(huán)丁基羥胺×HCl(17mg；140μmol)。產(chǎn)量3.3mg(30％)。MS(m/z)555(M+1)+)；Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2CH2OPh)(3-CF3)(用O-[2-[3-(三氟甲基)苯氧基]乙基]羥胺×HCl(24mg；93μmol)。產(chǎn)量6.52mg(46％)。MS(m/z)689(M+1)+)；Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Cl))(用O-(4-氯代芐基)羥胺×HCl(16mg；82μmol)。產(chǎn)量3.47mg(29％)。MS(m/z)625(M+1)+)；Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(3-MeO))(用O-(3-甲氧基芐基)羥胺×HCl(18mg；94μmol)。產(chǎn)量4.33mg(36％)。MS(m/z)621(M+1)+)；Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(2-Br))(用O-(2-溴代芐基)羥胺×HCl(23mg；96μmol)。產(chǎn)量3.87mg(30％)。MS(m/z)671(M+1)+)；Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Me))(用O-(4-甲基芐基)羥胺×HCl(14mg；81μmol)。產(chǎn)量2.91mg(25％)。MS(m/z)605(M+1)+)；Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-4-庚基)(用O-(4-庚基)羥胺×HCl(15mg；89μmol)。產(chǎn)量17mg(100％)。MS(m/z)599(M+1)+)。
實(shí)施例9Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab×HOAc(i)3-氯-5-甲氧基苯甲酸鎂車(chē)屑(Fluka purum用于Grignard反應(yīng))用以下方式預(yù)處理將車(chē)屑置于玻璃燒結(jié)漏斗，將0.1M鹽酸傾在車(chē)屑上。將車(chē)屑用玻璃棒攪拌幾秒鐘，然后用3份水洗去鹽酸。最后，車(chē)屑用2份丙酮洗滌后裝入瓶中。四氫呋喃(100mL，99.95％)通過(guò)加入RedAl(1g，70％wt在甲苯中)干燥。預(yù)處理的鎂車(chē)屑(5g，200mmol)置于圓底燒瓶中，通入氮3次。將二氯苯甲醚(26g，146mmol)溶于THF(100mL，RedAl干燥)，加入二溴乙烷(1.8g，10mmol)。反應(yīng)混合物中通入氮?dú)?，然后回?小時(shí)。中斷加熱，在2分鐘內(nèi)分批加入干冰(10g)。當(dāng)所有的干冰溶解，將反應(yīng)混合物傾入含鹽酸(400mL，2M)的冰中。接著萃取(乙醚，300mL)獲得小標(biāo)題化合物11.2g，60.2mmol(收率41％)。
1H-NMR(500MHz；丙酮-d6)δ7.57(m，1H)，7.49(m，1H)，7.23(m，1H)，3.91(s，3H)(ii)3-氯-5-羥基苯甲酸氧化鋁(1.65g，60mmol)和碘(21g，82mmol)在甲苯(200mL)中回流2小時(shí)。然后將溶于甲苯(50ml)的3-氯-5-甲氧基苯甲酸(11.2g，60.2mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))與四丁基碘化銨(1.5g，4mmol)一起加入，將混合物再回流2小時(shí)。冷卻至室溫后，接著萃取獲得小標(biāo)題化合物8.7g，50mmol(收率83％)。
1H-NMR(300MHz；丙酮-d6)δ9.27(s，1H)，7.48(m，1H)，7.44(m，1H)，7.11(m，1H)(iii)3-氯-5-二氟甲氧基苯甲酸將溶于氯仿(200mL)的3-氯-5-羥基苯甲酸(6.4g，37.2mmol；參見(jiàn)以上步驟(ii))轉(zhuǎn)移到配置了干冰冷凝器和進(jìn)氣管的500mL三頸圓底燒瓶中。加入氫氧化鈉(100mL，5M)，同時(shí)劇烈攪拌。在室溫通過(guò)進(jìn)氣管分批加入氯代二氟甲烷(氟利昂22；25g，290mmol)。2小時(shí)后，反應(yīng)完成。接著萃取獲得小標(biāo)題化合物6.2g，28mmol(收率75％)。
1H-NMR(500MHz；丙酮-d6)δ7.87(m，1H)，7.74(m，1H)，7.54(m，1H)，7.19(t，1H，JH-F73Hz)(iv)3-氯-5-三氟甲氧基-N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺將3-氯-5-二氟甲氧基苯甲酸(1.8g，8mmol；參見(jiàn)以上步驟(iii))和乙二酰氯(1.5g，11.8mmol)溶于二氯甲烷(50mL)。加入DMF(2滴)，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌30分鐘。然后加入N，O-二甲基羥胺(1g，10.2mmol)和三乙胺(3g，30mmol)，在室溫下再攪拌10分鐘后，減壓濃縮反應(yīng)混合物。將殘余物溶于乙醚(100mL)和水(50mL)。分離后，有機(jī)相用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮。將殘余物用二氧化硅色譜法(己烷/乙酸乙酯2∶1)處理獲得小標(biāo)題化合物2g，7.5mmol(93％)。
1H-NMR(400MHz；CDCl3)δ7.54(m，1H)，7.37(m，1H)，7.27(m，1H)，6.53(t，1H，JH-F73Hz)(v)3-氯-5-二氟甲氧基乙酰苯3-氯-5-二氟甲氧基-N-甲氧基-N-甲基苯甲酰胺(2g，7.5mmol；參見(jiàn)以上步驟(iv))溶于乙醚(100mL)，在氮?dú)夥障吕鋮s至-70℃。將甲基鋰(7mL，11mmol，1.6M的乙醚溶液)用注射器在1分鐘內(nèi)滴加到攪拌下的混合物中。除去干冰浴，讓混合物升至室溫，然后將反應(yīng)物用氯化銨溶液(50mL，5％NH4Cl的水溶液)猝滅。有機(jī)相用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。殘余物用二氧化硅色譜法(己烷∶乙酸乙酯2∶1)處理獲得小標(biāo)題化合物1.5g，6.8mmol(收率90％)。
1H-NMR(600MHz；CDCl3)δ7.77(m，1H)，7.59(m，1H)，7.35(m，1H)，6.56(t，1H，JH-F73Hz)，2.60(s，3H)(vi)3-氯-5-二氟甲氧基苯基乙酸甲酯將3-氯-5-二氟甲氧基乙酰苯(1.5g，6.8mmol；參見(jiàn)以上步驟(v))溶于二氯甲烷(200mL)。加入載于K-10蒙脫石的硝酸鉈(III)×3MeOH(6g，10mmol(約0.6mmol/g)；參見(jiàn)J.Am.Chem.Soc.，98，6750(1976))，將混合物在室溫下攪拌20小時(shí)。過(guò)濾混合物，濾液用碳酸氫鈉(100mL，0.5M)洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。殘余物用二氧化硅色譜法(己烷/乙酸乙酯2∶1)處理獲得小標(biāo)題化合物1g，4mmol(收率56％)。
1H-NMR(500MHz；CDCl3)δ7.14(m，1H)，7.06(m，1H)，6.96(m，1H)，6.50(t，1H，JH-F73Hz)，3.72(s，3H)，3.60(s，1H)(vii)α-甲?；?3-氯-5-二氟甲氧基苯基)乙酸甲酯將3-氯-5-二氟甲氧基苯基乙酸甲酯(1g，4mmol；參見(jiàn)以上步驟(vi))和甲酸甲酯(1g，16mmol)溶于乙醚(100mL)，在冰浴中冷卻(約2℃)。然后加入切碎的鈉(180mg，7.8mmol)和甲醇(1mL)，將混合物置于冰浴在攪拌下過(guò)夜。小心加入水(100mL)，分離出各相。含水相用鹽酸(2M)酸化至pH1，用乙醚(2×100mL)萃取。萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。殘余物用二氧化硅色譜法(己烷∶乙酸乙酯(1∶1))處理獲得小標(biāo)題化合物400mg，1.4mmol(收率36％)。
1H-NMR(400MHz)∶δ12.10(d，1H)，7.32(d，1H)，7.11(m，1H)，7.07(m，1H)，6.94(m，1H)，6.51(t，1H，JF-H73)，3.83(s，3H)
(viii)3-氯-5-二氟甲氧基托品酸將α-甲?；?3-氯-5-二氟甲氧基苯基)乙酸甲酯(400mg，1.4mmol；參見(jiàn)以上步驟(vii))溶于THF∶甲醇(50mL，9∶1)。加入硼氫化鈉，將混合物在室溫下攪拌30分鐘。加入水，將混合物濃縮至產(chǎn)生含水懸浮液，將其溶于乙酸乙酯和水。分離出各相，有機(jī)相用氯化鈉洗滌(15％水溶液)，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，減壓濃縮。殘余物溶于甲醇(30mL)，用氫氧化鈉(1mL，10M)在室溫下水解10分鐘。接著萃取獲得小標(biāo)題化合物180mg，0.68mmol(收率48％)。
1H-NMR(500MHz；CDCl3)δ7.18(m，1H)，7.10(m，1H)，7.00(m，1H)，6.50(t，1H，JF-H73)，4.11(m，1H)，3.90(m，1H)，3.84(m，1H)(ix)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab×HOAc將3-氯-5-二氟甲氧基托品酸(180mg，0.7mmol；參見(jiàn)以上步驟(vii))、H-Aze-Pab(Teoc)×HCl(450mg，1mmol)和PyBOP(530mg，1mmol)溶于DMF(10mL)，隨后加入DIPEA(550mg，3.9mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，然后將其用鹽水(20mL，15％ NaCl)稀釋，用乙酸乙酯(40mL)萃取。萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)至干。殘余物溶于二氯甲烷(5mL)，加入三氟乙酸(5mL)。在室溫下1小時(shí)后，將非對(duì)映異構(gòu)體混合物蒸發(fā)至干，殘余物用反相柱色譜法(乙腈∶水(30∶70)，緩沖液∶乙酸銨0.1M)處理。冷凍干燥獲得標(biāo)題化合物36mg，0.067mmol(收率10.4％)。
MS(ES)481(M+1)+1H-NMR(400MHz；CDCl3)δ7.77(d，2H)，7.57(d，2H)，7.30(m，1H)，7.13(m，2H)，6.87(t，1H，JF-H73Hz)，4.76(m，1H)，4.55(s，2H)，4.37(m，1H)，4.03(m，2H)，3.82(m，1H)，3.72(m，1H)，2.53(m，1H)，2.28(m，1H)，1.92(s，1，5H)13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳)δ172.3，171.9，167.2
實(shí)施例10Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab×TFA(i)3-氯-5-三氟甲氧基芐基甲磺酸酯在0℃、氮?dú)夥障拢?-氯-5-三氟甲氧基芐基醇(6.1g，26.9mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例6(v)的二氯甲烷(250ml)溶液中加入DIPEA(4.2g，32.3mmol)和甲磺酰氯(3.4g，29.6mmol)。溶液在0℃攪拌1.5小時(shí)，用水猝滅。分離出有機(jī)物，然后用水(1×)、1N HCl(1×)、水(1×)和碳酸氫鈉水溶液(1×)洗滌，再用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，濃縮獲得油狀小標(biāo)題化合物(8.2g，99％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.37(s，1H)，7.28(s，1H)，7.18(s，1H)5.23(s，2H)，3.07(s，3H)(ii)3-氯-5-三氟甲氧基芐基氰3-氯-5-三氟甲氧基芐基甲磺酸酯(8.2g，26.8mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))的DMSO(50mL)溶液中加入氰化鈉(2.6g，53.6mmol)。所得不均勻溶液加溫至50℃，超聲波處理1小時(shí)。將反應(yīng)物冷卻，在乙醚和水間分配。有機(jī)物用水(2×)和鹽水(2×)洗滌。合并的水相用Et2O(1×)萃取。合并的有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，在低溫加熱和部分真空下濃縮獲得微紅色揮發(fā)性小標(biāo)題化合物(6.3g，100％)，它直接用于下一步驟無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.32(s，1H)，7.24(s，1H)，7.12(s，1H)，3.78(s，2H)(iii)3-氯-5-三氟甲氧基苯基乙酸3-氯-5-三氟甲氧基芐基氰(6.3g，26.7mmol；參見(jiàn)以上步驟(ii))的2-丙醇(100mL)溶液中加入水(200mL)和氫氧化鉀(7.5g，133.5mmol)。將溶液回流18小時(shí)，冷卻至室溫，然后真空除去2-丙醇。水相用二氯甲烷(2×)洗滌，丟棄洗滌液。堿性水相用2N HCl酸化，用二氯甲烷(3×)萃取。二氯甲烷萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得油狀小標(biāo)題化合物(5.2g，76％)，它直接用于下一步驟無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.25(s，1H)，7.19(s，1H)，7.08(s，1H)，3.68(s，2H)(iv)3-氯-5-三氟甲氧基苯基乙酸乙酯3-氯-5-三氟甲氧基苯基乙酸(5.2g，20.4mmol；參見(jiàn)以上步驟(iii))的EtOH(600mL)溶液中加入硫酸(幾滴)。將溶液回流18小時(shí)，冷卻至室溫，用固體碳酸氫鈉中和，真空除去乙醇。殘余物用EtOAc稀釋，然后用水(1×)、碳酸氫鈉水溶液(1×)和鹽水(1×)洗滌。有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得油狀小標(biāo)題化合物(5.5g，96％)，它直接用于下一步驟無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.24(s，1H)，7.16(s，1H)，7.07(s，1H)，4.13-4.22(q，J＝8Hz，2H)，3.63(s，2H)，1.24-1.32(t，J＝8Hz，3H)(v)Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R，S)CH(CHO)C(O)OEt在氮?dú)夥铡⑿∮?℃(冰-MeOH浴)下，3-氯-5-三氟甲氧基苯基乙酸乙酯(4.5g，15.9mmol；參見(jiàn)以上步驟(iv)的無(wú)水THF(400mL)溶液中加入乙醇鈉(4.5g，63.6mmol)。將冷溶液攪拌40分鐘，加入甲酸乙酯(8.1g，111.3mmol)。溶液在0℃攪拌30分鐘，升至室溫后攪拌2小時(shí)。然后真空除去THF。殘余物用乙醚稀釋，用水(1×)和0.5MNaOH(3×)萃取。含水萃取液用2N HCl酸化，用二氯甲烷(3×)萃取。合并的有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并真空濃縮獲得粗制小標(biāo)題化合物(3.9g)。硅膠快速色譜法(用Hex；EtOAc(4∶1)洗提)處理獲得油狀小標(biāo)題化合物(3.0g，61％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3，異構(gòu)體混合物)δ12.30和12.25(s，1H)，7.39和7.34(s，1H)，7.21(s，1H)，7.17(s，1H)，7.08(s，1H)，4.27-4.37(q，J＝8Hz，2H)，1.28-1.38(t，J＝8Hz，3H)(vi)Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R，S)CH(CH2OH)C(O)OEt在-10℃(冰-MeOH浴)，在5分鐘內(nèi)分批向Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R，S)CH(CHO)C(O)OEt(3.0g，9.66mmol；參見(jiàn)以上步驟(v))的MeOH(200mL)溶液中加入硼氫化鈉(0.7g，19.32mmol)。將溶液在-10℃攪拌45分鐘，再加入硼氫化鈉(0.4g)。再經(jīng)過(guò)15分鐘后，反應(yīng)物用氯化銨水溶液猝滅，用2N HCl使其變?yōu)槿跛嵝?，真空除去MeOH。殘余物用EtOAc稀釋，用H2O(1×)、碳酸氫鈉水溶液(1×)和鹽水(1×)洗滌。有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得粗制小標(biāo)題化合物。硅膠快速色譜法(洗提Hex∶EtOAc(5∶1))處理獲得油狀小標(biāo)題化合物(2.0g，66％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.26(s，1H)，7.19(s，1H)，7.07(s，1H)，4.16-4.28(m，2H)，4.04-4.15(m，1H)，3.76-3.94(m，2H)，2.33(t，J＝6Hz，1H)，1.18-1.30(t，J＝8Hz，3H)(vii)Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R，S)CH2(CH2OH)C(O)OHPh(3-Cl)(5-OCF3)-(R，S)CH(CH2OH)C(O)OEt(2.0g，6.24mmol；參見(jiàn)以上步驟(vi))的THF(50mL)和H2O(25ml)溶液中加入氫氧化鋰一水合物(0.5g，12.48mmol)。溶液在室溫下攪拌1小時(shí)，真空除去THF。殘余物用水稀釋，再用CHCl3(2×)洗滌，丟棄洗滌液。堿性水層用2N HCl酸化，用CHCl3(4×)萃取。三氯甲烷萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得粗制油狀小標(biāo)題化合物(1.5g)。硅膠快速色譜法(洗提CHCl3∶MeOH∶濃NH4OH(梯度7.0∶2.5∶0.5～6∶3∶1))獲得小標(biāo)題化合物的銨鹽(1.1g)。銨鹽在1N HCl和CHCl3間分配。有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得油狀小標(biāo)題化合物(也稱為3-氯-5-三氟甲氧基托品酸)(1.1g，62％)。
-1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.41(s，1H)，7.27(s，1H)，7.24(s，1H)，4.03(m，1H)，3.75-3.87(m，2H)
(viii)Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(a)和Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(b)在0℃以下(冰-MeOH浴)，Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R，S)CH(CH2OH)C(O)OH(0.65g，2.28mmol；參見(jiàn)以上步驟(vii))的DMF溶液中加入H-Aze-Pab(Teoc)(0.90g，2.39mmol)、三甲基吡啶(0.71g，5.70mmol)和PyBOP(1.31g，2.51mmol)。所得溶液在0℃以下攪拌1小時(shí)，升至室溫，攪拌1小時(shí)。然后真空除去DMF。殘余物用EtOAc稀釋，用稀HCl水溶液(1×)、鹽水(1×)、碳酸氫鈉水溶液(1×)和鹽水(1×)滌滌。有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得為非對(duì)映異構(gòu)體混合物的粗制小標(biāo)題化合物(2.1g)。硅膠快速色譜法(3×)(依次用EtOAc∶MeOH(95∶5)、CH2Cl2∶MeOH(97∶3)和CH2Cl2∶MeOH(95∶5)洗提)處理獲得可壓碎的泡沫狀小標(biāo)題化合物非對(duì)映異構(gòu)體(a)(0.51g，35％)和非對(duì)映異構(gòu)體(b)(0.45g，31％)。
小標(biāo)題化合物非對(duì)映異構(gòu)體(a)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的復(fù)合混合物)δ7.79-7.85(d，J＝8Hz，2H)，7.22-7.49(m，5H)，5.17-4.77(m，1H)，4.53-4.18(m，4H)，3.58-4.11(m，5H)，2.47-2.73(m，1H)，2.11-2.34(m，1H)，1.08-1.12(m，2H)，0.07(s，9H)MS(m/z)643(M+1)+(ix)Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab×TFA將Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)，(78mg，0.121mmol；參見(jiàn)以上步驟(vii)-非對(duì)映異構(gòu)體(a))溶于5mL三氟乙酸。10分鐘后，反應(yīng)完成，蒸去溶劑。殘余物用水和乙腈冷凍干燥獲得所需產(chǎn)物。產(chǎn)量70mg(94％)。
MS(m/z)483(M-1)-；485(M+1)+1H-NMR(400MHz；D2O)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體1∶1δ8.83(bt，1H)，7.79(d，1H)，7.72(d，1H)，7.54(d，1H)，7.43(d，2H)，7.35(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.28(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.20(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.05(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.22(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.83(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.57(m，2H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.38(m，2H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.3-3.7(m，5H)，2.77(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.55(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.27(m，1H)13C-NMR(100MHz；D2O)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ172.9，172.2，172.0，171.8，166.9實(shí)施例11Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)(i)Ph(3-Cl)(5-OCF2)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(OMe，Teoc)將Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(100mg，0.155mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例10(viii))溶于12mL四氫呋喃。加入O-甲基羥胺鹽酸鹽(44mg，0.53mmol)，反應(yīng)物在50℃加熱過(guò)夜。蒸發(fā)反應(yīng)混合物，殘余物制備型HLC(CH3CN/0.1M NH4OAc(70/30))提純。蒸發(fā)相關(guān)部分，將殘余物溶于少量乙腈和水，冷凍干燥。重復(fù)冷凍干燥一次。產(chǎn)量80mg(76％)純產(chǎn)物。
1H-NMR(400MHz；CD3OD)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體∶δ7.5-7.4(m，3H)，7.35-7.2(m，4H)，5.15(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.74(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.5-4.25(m，3H)，4.2-3.95(m，4H)，3.91(b，3H)，3.9-3.6(m，2H)，2.63(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.50(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.3-2.1(m，1H)，0.95(m，2H)，0.02(s，9H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，0.01(s，9H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)(ii)Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)將Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(OMe，Teoc)，(80mg，0.12mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))溶于1mL二氯甲烷，在冰浴中冷卻。加入三氟乙酸(3mL)，反應(yīng)燒瓶在冰浴中保持2小時(shí)。蒸發(fā)混合物，溶于乙酸乙酯，用碳酸氫鈉水溶液洗滌三次，然后用水和鹽水洗滌。有機(jī)相用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)。殘余物用少量乙腈和水冷凍干燥。產(chǎn)量60mg(95％)純標(biāo)題產(chǎn)物。
MS(m/z)528(M-1)-；531(M+1)+1H-NMR(500MHz；CD3OD)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ7.65-7.55(m，3H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.45(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.4-7.2(m，4H)，5.15(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.74(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.5-4.3(m，3H)，4.05-3.95(m，2H)，3.85(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.82(s，3H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.81(s，3H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.73(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.67(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.62(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.63(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.50(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.24(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.16(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)13C-NMR(125MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ174.0，173.2，172.7，172.6，155.1實(shí)施例12Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)(i)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe，Teoc)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.40g，0.65mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例1(ix))溶于20mL乙腈，加入0.50g(6.0mmol)O-甲基羥胺鹽酸鹽。將混合物在70℃加熱2小時(shí)。蒸去溶劑，殘余物在水和乙酸乙酯間分配。水相用乙酸乙酯再萃取兩次，合并的有機(jī)相用水、鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)。產(chǎn)量0.41g(91％)。
1H-NMR(400MHz；CDCl3)δ7.83(bt，1H)，7.57(bs，1H)，7.47(d，2H)，7.30(d，2H)，7.20(m，1H)，7.14(m，1H)，7.01(m，1H)，6.53(t，1H)，4.89(s，1H)，4.87(m，1H)，4.47(m，2H)，4.4-4.2(b，1H)，4.17-4.1(m，3H)，3.95(s，3H)，3.67(m，1H)，2.68(m，1H)，2.42(m，1H)0.97(m，2H)，0.01(s，9H)。
(ii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe，Teoc)(0.40g，0.62mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))溶于5mL TFA，讓其反應(yīng)30分鐘。蒸去TFA，殘余物在乙酸乙酯和碳酸氫鈉水溶液間分配。水相用乙酸乙酯再萃取兩次，合并的有機(jī)相用水、鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾并蒸發(fā)。將產(chǎn)物從水/乙腈冷凍干燥。不需要再提純。產(chǎn)量0.28g(85％)。
1H-NMR(600MHz；CDCl3)δ7.89(bt，1H)，7.57(d，2H)，7.28(d，2H)，7.18(m，1H)，7.13(m，1H)，6.99(m，1H)，6.51(t，1H)，4.88(s，1H)，4.87(m，1H)，4.80(bs，2H)，4.48(dd，1H)，4.43(dd，1H)，4.10(m，1H)，3.89(s，3H)，3.68(m，1H)，2.68(m，1H)，2.40(m，1H)。
13C-NMR(125MHz；CDCl3)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ172.9，170.8，152.7，152.6MS(m/z)495(M-1)-，497(M+1)+實(shí)施例13Ph(3-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×HOAcPh(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)(13mg，0.026mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例12)溶于無(wú)水乙醇(5mL)，加入30mg 10％Pd/C。最后加入乙酸(5μL)，混合物在大氣壓下氫化20小時(shí)。將混合物用Celite_過(guò)濾，蒸發(fā)，然后用反相HPLC(0.1M aq.乙酸銨/MeCN)提純。冷凍干燥合適的部分獲得白色固體標(biāo)題化合物8.5mg(66％)。
1H-NMR(400MHz；CD3OD)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體∶δ7.73-7.78(m，2H)，7.55(d，2H)，7.19-7.43(m，3H)，7.06-7.13(m，1H)，6.83(t，1H，JHF＝74Hz，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.81(t，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.20(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.19(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.15(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.78(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.4-4.6(幾個(gè)峰，2H)，4.35(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.08(m，1H)，3.99(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.70(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.52(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.30(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.15(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，1.89(s，3H)。
13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ173.7，172.9，168.3。
MS(m/z)433(M+1)+；431(M-1)-實(shí)施例14Ph(3-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFAPh(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFA(34mg，0.057mmol，實(shí)施例6)溶于5mL乙醇，加入20mg 10％Pd/C。將混合物在大氣壓下氫化過(guò)夜。將混合物用Celite_過(guò)濾，蒸發(fā)，然后在水/乙腈中冷凍干燥。
1H-MR(400MHz；CD3OD)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ7.8-7.7(m，2H)，7.55(m，2H)，7.5-7.2(m，4H)，5.24(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.23(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.18(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.77(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.6-4.45(m，2H)，4.36(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.08(m，1H)，3.99(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.70(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.52(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.30(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.15(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)。
13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ174.1，173.9，173.5，172.9，168.2。
19-F NMR(282MHz；CD3OD)-59.8和-59.9(3F，分別為次要和主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，-77.4(3F)說(shuō)明此鹽為T(mén)FA鹽。
MS(m/z)451.3(M+1)+實(shí)施例15Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFA(i)3-氯-5-三氟乙氧基苯甲醛在氮?dú)夥铡⑹覝叵?，向磁攪拌下?-氯-5-羥基苯甲醛(2.0g，12.8mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例1(ii))和碳酸鉀(2.3g，16.6mmol)的DMF(35mL)溶液中加入對(duì)甲苯磺酸2，2，2-三氟乙酯(4.2g，16.6mmol)。將混合物加熱至110℃7小時(shí)，然后在室溫下攪拌過(guò)夜。將反應(yīng)物冷卻至0℃，傾入冰冷的2N HCl(100mL)，用EtOAc(2×75mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用0.5N HCl(2×50ml)洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，然后真空濃縮。褐色油狀物用硅膠色譜法(洗提Hex∶EtOAc(6∶1))處理獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(1.9g，61％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.44(s，1H)，7.56(s，1H)，7.33(s，1H)，7.28(s，1H)，4.42(q，J＝8Hz，2H)(ii)Ph(3-Cl)(5-OCH2CF2)-(R，S)CH(OTMS)CN在氮?dú)夥铡?℃下，向3-氯-5-三氟乙氧基苯甲醛(5.2g，21.7mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))和碘化鋅(1.7g，5.4mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液中用注射器滴加三甲硅烷基氰(4.3g，43.3mmol)。將混合物在0℃攪拌3小時(shí)，然后用水(150mL)稀釋。分離出有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，然后真空濃縮獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(6.9g，95％)，它直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.27(s，1H)，6.98(s，2H)，544(s，1H)，4.38(q，J＝8Hz，2H)，0.30(s，9H)(iii)Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R，S)CH(OH)C(O)OH將濃鹽酸(170mL)加入到Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R，S)CH(OTMS)CN(6.9g，20.4mmol；參見(jiàn)以上步驟(ii))，在100℃攪拌1小時(shí)。冷卻至室溫后，反應(yīng)物進(jìn)一步冷卻至0℃，用3N NaOH(300mL)緩慢堿化。將此混合物用乙醚(2×100mL)洗滌，水層用2N HCl(50mL)酸化。然后水層用EtOAc(2×100mL)萃取，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，再真空濃縮獲得淺黃色油狀小標(biāo)題化合物(5.3g，92％)，它直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.18(s，1H)，7.07(s，1H)，7.02(s，1H)，5.13(s，1H)，4.58(q，J＝8Hz，2H)(iv)Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)(R)CH(OH)C(O)OH(a)和Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(S)CH(OAc)C(O)OH(b)在氮?dú)夥障?，將Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R，S)CH(OH)C(O)OH(7.06g，24.8mmol；參見(jiàn)以上步驟(iii))和Lipase PS“Amano”(4.30g)的乙酸乙酯(250mL)和MTBE(250mL)溶液在70℃加熱40小時(shí)。反應(yīng)物冷卻至室溫，過(guò)濾除去酶，用EtOAc洗滌，然后真空濃縮濾液。硅膠色譜法(洗提CHCl3∶MeOH∶Et3N(92∶6∶2))處理獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(a)的三乙胺鹽(3.02g)。將小標(biāo)題化合物(a)的鹽溶于水(150ml)，用2N HCl酸化，用EtOAc(2×75mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，然后真空濃縮獲得乳白色固體小標(biāo)題化合物(a)(2.18g)。此外，用上述的柱色譜法獲得小標(biāo)題化合物(b)的三乙胺鹽(4.73g)。
小標(biāo)題化合物(a)的數(shù)據(jù)mp98-103℃1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.18(s，1H)，7.07(s，1H)，7.02(s，1H)，5.13(s，1H)，4.58(q，J＝8Hz，2H)。
13C NMR(75MHz，CD3OD)δ175.4，159.6，144.6，136.2，125.0(q，J＝277Hz)，121.8，115.9，113.1，73.3，67.0(q，J＝35Hz)HPLC分析98.6％，＞99％ee，Chiralcel OD柱(97∶3∶0.5Hex∶EtOH∶TFA流動(dòng)相)[α]25D＝-81.5°(c＝1.0，MeOH)APCI-MS(M-1)＝283m/z(v)Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)在氮?dú)夥铡?℃下，Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.50g，1.8mmol；參見(jiàn)以上步驟(iv)(化合物(a)))的DMF(20mL)溶液中加入H-Aze-Pab(Teoc)×HCl(1.03g，2.3mmol)、PyBOP(1.01g，1.9mmol)和DIPEA(0.57g，4.4 mmol)。反應(yīng)物在0℃攪拌2小時(shí)，然后在室溫下攪拌20小時(shí)。真空濃縮混合物，殘余物用硅膠色譜法(依次用CHCl3∶EtOH(10∶1)、EtOAc∶EtOH(10∶1)洗提)處理兩次獲得可壓碎的白色泡沫狀小標(biāo)題化合物(0.55g，48％)。
mp90-95℃Rf＝0.42(10∶1 CHCl3∶EtOH)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的復(fù)合混合物)δ7.78-7.81(m，2H)，7.38-7.41(m，2H)，7.12-7.16(m，1H)，7.00-7.06(m，2H)，5.09-5.22和4.75-4.79(m，2H)，3.94-4.61(m，8H)，2.09-2.75(m，2H)，1.04-1.11(m，2H)，0.70(s，9H)APCI-MS(M+1)＝643m/z(vi)Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFAPh(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.066g，0.103mmol；參見(jiàn)以上步驟(v)溶于3mL TFA，讓其反應(yīng)30分鐘。蒸去TFA，殘余物用水/乙腈冷凍干燥獲得0.060g(94％)標(biāo)題化合物的TFA鹽。
1H-NMR(400MHz；CD3OD)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ7.8-7.7(m，2H)，7.6-7.5(m，2H)，7.2-7.0(m，3H)，5.21(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.17(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.11(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.81(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.6-4.4(m，4H)，4.37(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.16(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.06(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.99(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.70(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.54(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.29(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.15(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ172.2，171.8，171.7，167.0。
MS(m/z)499.3(M+1)+
實(shí)施例16Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)在氮?dú)夥铡?℃下，Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.48g，1.7mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例15(iv)(化合物(a))的DMF(20mL)溶液中加入H-Aze-Pab(OMe)×2HCl(0.74g，2.2mmol)、PyBOP(0.97g，1.9mmol和DIPEA(0.55g，4.2mmol)。將反應(yīng)物在0℃攪拌2小時(shí)，然后在室溫下攪拌20小時(shí)。真空濃縮混合物，殘余物用硅膠色譜法(依次用CHCl3∶EtOH(10∶1)和EtOAc∶EtOH(10∶1)洗滌)處理兩次獲得可壓碎的白色泡沫狀標(biāo)題化合物(0.62g，69％)。
mp75-80℃Rf＝0.43(10∶1 CHCl3∶EtOH)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的復(fù)合混合物)δ7.57-7.60(m，2H)，7.32-7.36(m，2H)，7.13-7.17(m，1H)，7.00-7.06(m，2H)，5.09-5.19和4.74-4.80(m，2H)，3.93-4.62(m，6H)，3.81(s，3H)，2.10-2.73(m，2H)APCI-MS(M+1)＝529m/z實(shí)施例17Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFA(i)甲磺酸2，2-二氟乙基酯在氮?dú)夥铡?℃下，向磁攪拌下的2，2-二氟乙醇(1.52g，18.5mmol)的二氯甲烷(20mL)溶液中加入三乙胺(5.61g，55.5mmol)和甲磺酰氯(2.54g，22.2mmol)。將混合物在0℃攪拌1.5小時(shí)，用二氯甲烷(50mL)稀釋，用2N HCl(50mL)洗滌。水層用二氯甲烷(30ml)萃取，合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌(30mL)，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，然后真空濃縮獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(2.52g，85％)，它直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.02(tt，J＝3Hz，J＝55Hz，1H)，4.39(dt，J＝3Hz，J＝13Hz，2H)，3.13(s，3H)
(ii)3-氯-5-二氟乙氧基苯甲醛在氮?dú)夥?、室溫下，?-氯-5-羥基苯甲醛(1.50g，9.6mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例1(ii))和碳酸鉀(1.72g，12.5mmol)的DMF(10mL)溶液中滴加甲磺酸2，2-二氟乙基酯(2.0g，12.5mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))的DMF(10ml)溶液。將混合物加熱至100℃6小時(shí)，然后在室溫下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)物冷卻至0℃，傾入冰冷的2N HCl(100mL)，用EtOAc萃取(2×75mL)。合并的有機(jī)萃取液用0.5N HCl(2×50mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，然后真空濃縮。褐色油狀物用硅膠色譜法處理(洗提Hex∶EtOAc(5∶1))獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(1.35g，64％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.92(s，1H)，7.52(s，1H)，7.31(s，1H)，7.22(s，1H)，6.12(tt，J＝3Hz，J＝55Hz，1H)，4.26(dt，J＝3Hz，J＝15Hz，2H)(iii)Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R，S)CH(OTMS)CN在氮?dú)夥铡?℃下，向3-氯-5-二氟乙氧基苯甲醛(1.35g，6.1mmol；參見(jiàn)以上步驟(ii))和碘化鋅(0.48g，1.5mmol)的二氯甲烷(50mL)溶液中滴加三甲硅烷基氰(1.21g，12.2mmol)。將混合物在0℃攪拌3小時(shí)，然后用水(50mL)稀釋。分離出有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，然后真空濃縮獲得褐色油狀小標(biāo)題化合物(1.85g，95％)，它直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.13(s，1H)，6.94(s，2H)，6.10(tt，J＝3Hz，J＝55Hz，1H)，5.43(s，1H)，4.20(dt，J＝3Hz，J＝15Hz，2H)，0.28(s，9H)(iv)Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OH將濃鹽酸(60mL)加入到Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R，S)CH(OTMS)CN(1.85g，5.8mmol；參見(jiàn)以上步驟(iii))，在100℃攪拌1小時(shí)。冷卻至室溫后，反應(yīng)物進(jìn)一步冷卻至0℃，用3N NaOH(～180mL)緩慢堿化，用乙醚(2×75mL)洗滌。水層用2N HCl(20mL)酸化，用EtOAc(2×75mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，然后真空濃縮獲得淺黃色固體小標(biāo)題化合物(1.50g，97％)，它直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.15(s，1H)，7.05(s，1H)，6.98(s，1H)，6.19(tt，J＝4Hz，J＝55Hz，1H)，5.12(s，1H)，4.25(dt，J＝4Hz，J＝17Hz，2H)(v)Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(S)CH(OAc)C(O)OH(a)和Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(b)在氮?dú)夥障聦h(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R，S)CH(OH)C(O)OH(3.90g，14.6mmol；參見(jiàn)以上步驟(iv))和Lipase PS“Amano”(2.50g)的乙酸乙酯(140mL)和MTBE(140mL)溶液在70℃加熱40小時(shí)。將反應(yīng)物冷卻至室溫，過(guò)濾除去酶，用EtOAc洗滌，真空濃縮濾液。硅膠色譜法(洗提CHCl3∶MeOH∶Et3N(92∶6∶2))處理獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(a)的三乙胺鹽。此外，獲得小標(biāo)題化合物(b)的三乙胺鹽(1.47g)，將此鹽溶于水(100mL)，用2N HCl酸化，用EtOAc(2×75mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，然后真空濃縮獲得乳白色固體小標(biāo)題化合物(b)(1.00g)。
小標(biāo)題化合物(b)數(shù)據(jù)mp103-106℃Rf＝0.39(90∶8∶2 CHCl3∶MeOH∶Et3N)1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.13(s，1H)，7.04(s，1H)，6.97(s，1H)，6.17(tt，J＝4Hz，J＝55Hz，1H)，5.12(s，1H)，4.24(dt，J＝4Hz，J＝8Hz，2H)。
13C NMR(75MHz，CD3OD)δ175.5，160.3，144.5，136.1，121.3，115.7，115.3，(t，J＝240Hz)，112.9，73.4，68.6(t，J＝29Hz)HPLC分析96.2％，＞95.0％ee，Chiral Pak AD柱(95∶5∶0.5Hex∶EtOH∶TFA流動(dòng)相)[α]25D＝-84.0°(c＝0.85 MeOH)
APCI-MS(M-1)＝265m/z(vi)Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)在氮?dú)夥铡?℃下，Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.35g，1.3mmol；參見(jiàn)以上步驟(v)(化合物(b)))的DMF(18mL)溶液中加入H-Aze-Pab(Teoc)×HCl(0.76g，1.7mmol)、PyBOP(0.75g，1.4mmol)和DIPEA(0.43g，3.3mmol)。將反應(yīng)物在0℃攪拌2小時(shí)，然后在室溫?cái)嚢?0小時(shí)。真空濃縮混合物，殘余物用硅膠色譜法(依次用CHCl3∶EtOH(10∶1)、EtOAc∶EtOH(10∶1)洗提)處理兩次獲得可壓碎的白色泡沫狀小標(biāo)題化合物(0.69g，84％)。
mp108-118℃Rf＝0.48(10∶1 CHCl3∶EtOH)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體復(fù)合混合物)δ7.78-7.81(m，2H)，7.40-7.43(m，2H)，7.09-7.12(m，1H)，6.96-7.02(m，2H)，6.16(t，J＝57Hz，1H)，5.09-5.20和4.75-4.80(m，2H)，3.95-4.55(m，8H)，2.10-2.75(m，2H)，1.04-1.11(m，2H)，0.07(s，9H)APCI-MS(M+1)＝625m/z(vii)Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFAPh(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.086g，0.138mmol；參見(jiàn)以上步驟(vi)溶于3mL TFA，讓其反應(yīng)1小時(shí)。蒸去TFA，殘余物用水/乙腈冷凍干燥獲得0.080g(98％)標(biāo)題化合物的TFA鹽。
1H-NMR(300MHz；CD3OD)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ7.8-7.7(m，2H)，7.6-7.5(m，2H)，7.15-6.95(m，3H)，6.35-5.95(m，1H)，5.20(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.14(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.10(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.80(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.6-4.0(m，6H)，2.70(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.53(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.29(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.15(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)。
13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ174.0，173.8，173.4，172.9，168.2MS(m/z)481.2(M+1)+實(shí)施例18Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)在氮?dú)夥铡?℃下，Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.30g，1.7mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例17(v)(化合物(b)))的DMF(15ml)溶液中加入H-Aze-Pab(OMe)×2HCl(0.49g，1.5mmol)、PyBOP(0.65g，1.2mmol)和DIPEA(0.36g，2.8mmol)。將反應(yīng)物在0℃攪拌2小時(shí)，然后在室溫下攪拌20小時(shí)。真空濃縮混合物，殘余物用硅膠色譜法(依次用CHCl3∶EtOH(10∶1)、EtOAc∶EtOH(10∶1)和CHCl3∶MEOH(20∶1)洗提)處理三次獲得可壓碎的白色泡沫狀標(biāo)題化合物(0.47g，81％)。
mp65-75℃Rf＝0.37(10∶1 CHCl3∶EtOH)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體復(fù)合混合物)δ7.58-7.60(m，2H)，7.32-7.35(m，2H)，7.09-7.12(m，1H)，6.96-7.02(m，2H)，6.16(t，J＝55Hz，1H)，5.08-5.18和4.74-4.80(m，2H)，3.96-4.50(m，6H)，3.80(s，3H)，2.10-2.75(m，2H)APCI-MS(M+1)＝511m/z。
實(shí)施例19Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFA(i)Ph(3-Cl)(5-TMSO)-(R，S)CH(OTMS)CN在0℃，3-氯-5-羥基苯甲醛(9.8g，62.6mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例1(ii))和碘化鋅(5.0g，15.7mmol)的無(wú)水二氯甲烷(500mL)溶液中加入三甲硅烷基氰(13.7g，138mmol)。反應(yīng)混合物升至室溫，攪拌過(guò)夜。加入水(250mL)，分離出各層。水層用二氯甲烷(2×300mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，然后真空濃縮獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(16.9g，83％)，直接使用無(wú)需再提純。
Rf＝0.42(3∶1 Hex∶EtOAc)1H NMR(300Mz，CDClC3)δ7.06(s，1H)，6.86(s，2H)，5.40(s，1H)，0.30(s，9H)，0.24(s，9H)。
(ii)Ph(3-Cl)(5-OH)-(R，S)CH(OH)C(O)OH在氮?dú)夥障?，Ph(3-Cl)(5-OTMS)-(R，S)CH(OTMS)CN(22.6g，68.8mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))的濃鹽酸(200mL)溶液回流3小時(shí)。反應(yīng)物冷卻至0℃，用2N NaOH緩慢堿化。將混合物用乙醚(3×100ml)洗滌除去有機(jī)雜質(zhì)。水層用2N HCl酸化，用EtOAc(3×200mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，然后真空濃縮獲得褐色油狀小標(biāo)題化合物(9.3g，67％)，直接使用無(wú)需再提純。
Rf＝0.23(6∶3∶1 CHCl3∶MeOH∶濃NH4OH)1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.05(s，1H)，6.94(s，1H)，6.73(s，1H)，5.03(s，1H)。
(iii)Ph(3-Cl)(5-OH)-(R，S)CH(OH)C(O)OEtPh(3-Cl)(5-OH)-(R，S)CH(OH)C(O)OH(9.3g，46.0mmol；參見(jiàn)以上步驟(ii))的無(wú)水EtOH(200mL)溶液中加入濃硫酸(0.25mL)，反應(yīng)物在氮?dú)夥障禄亓?小時(shí)。反應(yīng)物冷卻至0℃，加入固體碳酸氫鈉(0.2g)。將反應(yīng)物真空濃縮，用飽和碳酸氫鈉(100mL)和乙醚(3×50mL)分配。合并的有機(jī)萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，然后真空濃縮獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(6.9g，65％)，它直接使用無(wú)需再提純。
Rf＝0.62(6∶3∶1 CHCl3∶MeOH∶濃NH4OH)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.99(s，1H)，6.81(s，2H)，5.07(s，1H)，4.16-4.32(m，2H)，1.23(t，J＝7Hz，3H)。
(iv)Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R，S)CH(OH)C(O)OEt在密封燒瓶中，在氮?dú)夥铡?℃下，Ph(3-Cl)(5-OH)-(R，S)CH(OH)C(O)OEt(6.1g，26.8mmol；參見(jiàn)以上步驟(iii))的DMF(100mL)溶液中加入碳酸銫(13.1g，40.2mmol)。反應(yīng)混合物在0℃攪拌15分鐘，接著加入碘化鉀(0.5g，2.7mmol)。反應(yīng)物冷卻至-78℃，將氯氟甲烷(18.4g，268mmol)通入容器中。然后將密封燒瓶加溫至室溫，攪拌18小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至0℃，小心排氣以除去過(guò)量氯氟甲烷，用水(20mL)和乙醚(3×50mL)分配。合并的有機(jī)物用鹽水(2×50mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。硅膠快速色譜法(洗提Hex∶EtOAc(梯度9∶1至3∶1))處理獲得淺黃色油狀小標(biāo)題化合物(2.4g，35％)。
注意在紫外光下此化合物在TLC上微弱可見(jiàn)。用溴甲酚綠染色TLC可以使其顯現(xiàn)。
Rf＝0.46(2∶1 Hex∶EtOAc)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.21(s，1H)，7.08(s，1H)，7.05(s，1H)，5.70(d，JH-F＝54Hz，2H)，5.12(d，J＝5Hz，1H)，3.80-4.35(m，2H)，3.50(d，J＝5Hz，1H)，1.26(t，J＝7Hz，3H)。
(v)Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R，S)CH(OH)C(O)OH在氮?dú)夥铡?℃下，Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R，S)CH(OH)C(O)OEt(1.8g，6.8mmol；參見(jiàn)以上步驟(iv))的水∶THF(30mL，1∶2)溶液中加入氫氧化鋰一水合物(0.40g，10.3mmol)。將混合物在0℃攪拌2小時(shí)。真空濃縮反應(yīng)混合物，用水(5mL)和乙醚(2×20mL)分配。在0℃將水層小心地用0.2N HCl酸化，用EtOAc(3×30mL)萃取。合并的有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得無(wú)色油狀小標(biāo)題化合物(1.4g，87％)，它在靜置時(shí)固化為白色固體。
Rf＝0.43(6∶2∶1 CHCl3∶MeOH∶Et3N)1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.24(s，1H)，7.17(s，1H)，7.07(s，1H)，5.78(d，JH-F＝54Hz，2H)，5.13(s，1H)。
(vi)Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH(a)和Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-在氮?dú)夥障拢瑢h(3-Cl)(5-OCH2F)-(R，S)CH(OH)C(O)OH(3.2g，13.9mmol；參見(jiàn)以上步驟(v))和Lipase PS“Amano”(1.9g)的乙酸乙酯(150mL)和MTBE(150mL)混合物在70℃加熱3天。將反應(yīng)混合物冷卻，用Celite_過(guò)濾，濾餅用EtOAc洗滌。真空濃縮濾液，將其用硅膠快速色譜法(洗提CHCl3∶MeOH∶Et3N(15∶1∶0.5))處理獲得小標(biāo)題化合物(a)的三乙胺鹽(0.50g，21％)，無(wú)需中和直接使用。此外，獲得小標(biāo)題化合物(b)的三乙胺鹽(0.46g，20％)。
小標(biāo)題化合物(a)的數(shù)據(jù)Rf＝0.19(15∶1∶0.5 CHCl3∶MeOH∶Et3N)1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.26(s，1H)，7.18(s，1H)，6.97(s，1H)，5.74(d，JH-F＝54Hz，2H)，4.81(s，1H)，3.17(q，J＝7Hz，6H)，1.28(t，J＝7Hz，9H)。
小標(biāo)題化合物(b)的數(shù)據(jù)Rf＝0.33(15∶1∶0.5 CHCl3∶MeOH∶Et3N)1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.28(s，1H)，7.19(s，1H)，7.09(s，1H)，5.76(d，JH-F＝54Hz，2H)，5.75(s，1H)，3.17(q，J＝7Hz，6H)，2.16(s，3H)，1.28(t，J＝7Hz，9H)。
(vii)Ph(3-Cl)(5-OCH2F)(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)在氮?dú)夥铡?℃下，Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH的三乙胺鹽(0.50g，1.50mmol；參見(jiàn)以上步驟(vi))和HAze-Pab(Teoc)·HCl(0.87g，1.90mmol)的無(wú)水DMF(15mL)溶液中加入PyBOP(0.85g，2.60mmol)和DIPEA(0.48g，3.70mmol)。將反應(yīng)物升至室溫，攪拌過(guò)夜。真空濃縮反應(yīng)混合物，用硅膠快速色譜法(依次用CHCl3∶EtOH(9∶1)和EtOAc∶EtOH(20∶1)洗提)處理兩次獲得可壓碎的白色泡沫狀小標(biāo)題化合物(0.23g，26％)。
Mp88-92℃Rf＝0.61(9∶1 CHCl3∶EtOH)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的復(fù)合混合物)δ7.81(d，J＝8Hz，2H)，7.40-7.42(m，2H)，7.06-7.23(m，3H)，5.76(d，JH-F＝51Hz，2H)，5.10-5.16和4.77-4.83(m，2H)，3.80-4.49(m，6H)，2.30-2.53(m，2H)，1.08(t，J＝7Hz，2H)，0.08(s，9H)。
APCI-MS(M+1)＝593m/z(viii)Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFA將Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.051g，0.086mmol；參見(jiàn)以上步驟(vii))溶于3mL TFA，讓其反應(yīng)20分鐘。蒸去TFA，殘余物用水/乙腈冷凍干燥。產(chǎn)物純度95％，含有5％脫氟甲基化產(chǎn)物。嘗試用制備型RPLC(CH3CN∶0.1M NH4OAc)純化失敗，將部分為醋酸鹽的產(chǎn)物溶于5mL TFA，蒸發(fā)，冷凍干燥獲得26mg(51％)標(biāo)題化合物的TFA鹽。純度95％。
1H-NMR(600MHz；CD3OD)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ7.8-7.7(m，2H)，7.6-7.5(m，2H)，7.21(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.17(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.13(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.09(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.07(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.04(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.73(d，2H)，5.18(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.16(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.09(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.78(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.56(d，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.50(d，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.46(d，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.45(d，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.35(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.14(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.05(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.97(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.68(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.52(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.28(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.19(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)。
13C-NMR(150MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ173.9，1733，172.9，168.2。
ESI-MS+(M+1)＝449(m/z)實(shí)施例20Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)在氮?dú)夥铡?℃下，Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH的三乙胺鹽(0.60g，1.80mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例19(vi))和HAze-Pab(OMe)·2HCl(0.79g，2.30mmol)的DMF(15mL)溶液中加入PyBOP(1.04g，1.90mmol)和DIPEA(0.58g，4.50mmol)。將反應(yīng)物升至室溫，攪拌過(guò)夜。真空濃縮反應(yīng)混合物，用硅膠快速色譜法(先用CHCl3∶EtOH(9∶1)洗提，然后用EtOAc∶EtOH(20∶1)洗提兩次)處理三次獲得可壓碎的白色泡沫狀標(biāo)題化合物(0.22g，26％)。
Mp66-70℃Rf＝0.45(9∶1 CHCl3∶EtOH)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體復(fù)合混合物)δ7.59(d，J＝8Hz，2H)，7.32(d，J＝7Hz，2H)，7.06-7.23(m，3H)，5.75(s，JH-F＝54Hz，1H)，5.10-5.16和4.78-4.84(m，2H)，4.11-4.45(m，4H)，3.80(s，3H)，2.10-2.75(m，2H)。
13C-NMR(150MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ173.0，170.8，170.7，152.5。
APCI-MS(M+1)＝479m/z實(shí)施例21Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFA(i)甲磺酸2-單氟代乙酯在氮?dú)夥铡?℃下，向磁攪拌下的2-氟乙醇(5.0g，78.0mmol)的二氯甲烷(90mL)溶液中加入三乙胺(23.7g，234mmol)和甲磺酰氯(10.7g，93.7mmol)。將混合物在0℃攪拌1.5h，用二氯甲烷(100mL)稀釋，用2N HCl(100mL)洗滌。水層用二氯甲烷(50ml)萃取，合并的有機(jī)萃取液用鹽水(75mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(9.7g，88％)，它直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.76(t，J＝4Hz，1H)，4.64(t，J＝4Hz，1H)，4.52(t，J＝4Hz，1H)，4.43(t，J＝4Hz，1H)，3.09(s，3H)。
(ii)3-氯-5-單氟代乙氧基苯甲醛在氮?dú)夥?、室溫下，?-氯-5-羥基苯甲醛(8.2g，52.5mmol，參見(jiàn)以上實(shí)施例1(ii))和碳酸鉀(9.4g，68.2mmol)的DMF(10mL)溶液滴加甲磺酸2-單氟代乙酯(9.7g，68.2mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))的DMF(120mL)溶液。將混合物加熱至100℃5小時(shí)，然后在室溫下攪拌過(guò)夜。反應(yīng)物冷卻至0℃，傾入冰冷的2N HCl，用EtOAc萃取。合并的有機(jī)萃取液用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。褐色油狀物用硅膠色譜法(用Hex∶EtOAc(4∶1)洗提)處理獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(7.6g，71％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.92(s，1H)，7.48(s，1H)，7.32(s，1H)，7.21(s，1H)，4.87(t，J＝4Hz，1H)，4.71(t，J＝3Hz，1H)，4.33(t，J＝3Hz，1H)，4.24(t，J＝3Hz，1H)。
(iii)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R，S)CH(OTMS)CN在氮?dú)夥铡?℃下，向3-氯-5-單氟代乙氧基苯甲醛(7.6g，37.5mmol；參見(jiàn)以上步驟(ii))和碘化鋅(3.0g，9.38mmol)的二氯甲烷(310mL)溶液滴加三甲硅烷基氰(7.4g，75.0mmol)。將混合物在0℃攪拌3小時(shí)，然后在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。反應(yīng)物用水(300mL)稀釋，分離出有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得褐色油狀小標(biāo)題化合物(10.6g，94％)，直接使用無(wú)需再提純或特征化。
(iv)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R，S)CH(OH)C(O)OH將濃鹽酸(100mL)加入到Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R，S)CH(OTMS)CN(10.6g，5.8mmol；參見(jiàn)以上步驟(iii))，將溶液在100℃攪拌3小時(shí)。冷卻至室溫后，反應(yīng)物進(jìn)一步冷卻至0℃，用3N NaOH(～300mL)緩慢堿化，用乙醚(3×200mL)洗滌。水層用2N HCl(80mL)酸化，用EtOAc萃取(3×300mL)。合并的EtOAc萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得淺黃色固體小標(biāo)題化合物(8.6g，98％)，直接使用無(wú)需再提純。
Rf＝0.28(90∶8∶2 CHCl3∶MeOH∶濃NH4OH)1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.09(s，1H)，7.02(s，1H)，6.93(s，1H)，5.11(s，1H)，4.77-4.81(m，1H)，4.62-4.65(m，1H)，4.25-4.28(m，1H)，4.15-4.18(m，1H)。
(v)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(S)CH(OAc)C(O)OH(a)和Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH(b)在氮?dú)夥障拢瑢h(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R，S)CH(OH)C(O)OH(8.6g，34.5mmol；參見(jiàn)以上步驟(iv))和Lipase PS“Amano”(4.0g)的乙酸乙酯(250mL)和MTBE(250mL)溶液在70℃加熱3天。反應(yīng)物冷卻至室溫，用Celite_過(guò)濾除去酶。濾餅用EtOAc洗滌，真空濃縮濾液。用硅膠色譜法(洗提CHCl3∶MeOH∶Et3N(90∶8∶2))處理獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(a)的三乙胺鹽。此外，獲得小標(biāo)題化合物(b)的三乙胺鹽(4.0g)。將小標(biāo)題化合物(b)的鹽溶于H2O(250mL)，用2N HCl酸化，用EtOAc(3×200mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(b)(2.8g，32％)。
小標(biāo)題化合物(b)的數(shù)據(jù)Rf＝0.28(90∶8∶2 CHCl3∶MeOH∶濃NH4O)1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.09(s，1H)，7.02(s，1H)，6.93(s，1H)，5.11(s，1H)，4.77-4.81(m，1H)，4.62-4.65(m，1H)，4.25-4.28(m，1H)，4.15-4.18(m，1H)。
(vi)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)在氮?dú)夥铡?℃下，Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH(940mg，3.78mmol；參見(jiàn)以上步驟(v))的DMF(30ml)溶液中加入HAze-Pab(Teoc)·HCl(2.21g，4.91mmol)、PyBOP(2.16g，4.15mmol)和DIPEA(1.22g，9.45mmol)。反應(yīng)物在0℃攪拌2小時(shí)，然后在室溫下攪拌4小時(shí)。真空濃縮混合物，殘余物用硅膠色譜法(依次用CHCl3∶EtOH(15∶1)和EtOAc∶EtOH(20∶1)洗提)處理兩次獲得可壓碎的白色泡沫狀小標(biāo)題化合物(450mg，20％)。
Mp80-88℃Rf＝0.60(10∶1 CHCl3∶EtOH)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體復(fù)合混合物)δ7.79(d，J＝8Hz，2H)，7.42(d，J＝8Hz，2H)，7.05-7.08(m，1H)，6.93-6.99(m，2H)，5.08-5.13(m，1H)，4.75-4.80(m，2H)，4.60-4.68(m，1H)，3.95-4.55(m，8H)，2.10-2.75(m，2H)，1.05-1.11(m，2H)，0.08(s，9H)。
APCI-MS(M+1＝607)m/z。
(vii)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFA將Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.357g，0.589mmol；參見(jiàn)以上步驟(vi))溶于10mL TFA，讓其反應(yīng)40分鐘。蒸去TFA，殘余物用水/乙腈冷凍干燥獲得0.33g(93％)標(biāo)題化合物的TFA鹽。
1H-NMR(600MHz；CD3OD)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ7.8-7.7(m，2H)，7.54(d，2H)，7.08(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.04(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.99(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.95(s，1H)，6.92(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.18(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.14(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.08(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.80(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.73(m，1H)，4.65(m，1H)，4.6-4.4(m，2H)，4.35(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.21(多重峰型雙峰；2H)，4.12(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.06(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.99(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.69(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.53(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.29(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.14(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)。
13C-NMR(150MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳)δ172.8，172.1，167.4。
ESI-MS+(M+1)＝463(m/z)實(shí)施例22Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)在氮?dú)夥铡?℃下，Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)OH(818mg，3.29mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例21(v))的DMF(30ml)溶液中加入HAze-Pab(OMe)·2HCl(1.43g，4.27mmol)、PyBOP(1.89g，3.68mmol)和DIPEA(1.06g，8.23mmol)。反應(yīng)物在0℃攪拌2小時(shí)，然后在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。真空濃縮混合物，殘余物用硅膠色譜法處理(依次用CHCl3∶EtOH(15∶1)和EtOAc∶EtOH(20∶1))兩次獲得可壓碎的白色泡沫狀標(biāo)題化合物(880mg，54％)。
Mp65-72℃Rf＝0.60(10∶1 CHCl3∶EtOH)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體復(fù)合混合物)δ7.58-7.60(d，J＝8Hz，2H)，7.34(d，J＝7Hz，2H)，7.05-7.08(m，2H)，6.95-6.99(m，1H)，5.08-5.13(m，1H)，4.77-4.82(m，1H)，4.60-4.68(m，1H)，3.99-4.51(m，7H)，3.82(s，3H)，2.10-2.75(m，2H)。
13C-NMR(150MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳)δ173.3，170.8，152.5。
APCI-MS(M+1)＝493m/z。
實(shí)施例23Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFA(i)甲磺酸1，3-二氟異丙酯在氮?dú)夥铡?℃下，向磁攪拌下的1，3-二氟-2-丙醇(7.0g，72.8mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液加入三乙胺(22.1g，219mmol)和甲磺酰氯(10.0g，87.4mmol)。將混合物在0℃攪拌3小時(shí)。將混合物用2NHCl(150mL)洗滌，分離出各層。水層用二氯甲烷(200mL)萃取，合并的有機(jī)萃取液用鹽水(100mL)洗滌，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(11.5g，91％)，它直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ4.97-5.08(m，1H)，4.75-4.77(m，2H)，4.59-4.61(m，2H)，3.12(s，3H)。
(ii)Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)CHO在氮?dú)夥铡⑹覝叵拢?-氯-5-羥基苯甲醛(8.0g，50.7mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例1(ii))和碳酸鉀(9.1g，66.0mmol)的DMF(75mL)溶液中滴加甲磺酸1，3-二氟異丙酯(11.5g，66.0mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))的DMF(75mL)溶液。將混合物加熱至110℃18小時(shí)。將反應(yīng)物冷卻至0℃，傾入冰冷的2N HCl(200mL)，用EtOAc(3×250mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。褐色油狀物用硅膠色譜法(用Hex∶EtOAc(4∶1)洗提)處理獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(4.4g，37％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.92(s，1H)，7.51(s，1H)，7.36(s，1H)，7.26(s，1H)，4.70-4.89(m，3H)，4.63-4.68(m，2H)。
(iii)Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R，S)CH(OTMS)CN在氮?dú)夥铡?℃下，向Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)CHO(4.4g，18.7mmol；參見(jiàn)以上步驟(ii))和碘化鋅(1.5g，4.67mmol)的二氯甲烷(200mL)溶液中滴加三甲硅烷基氰(3.7g，37.3mmol)。將混合物在0℃攪拌3小時(shí)，在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，然后用水(200mL)稀釋。分離出有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得褐色油狀小標(biāo)題化合物(5.5g，87％)，直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.12(s，1H)，7.00(s，2H)，5.42(s，1H)，4.70-4.80(m，3H)，4.59-4.64(m，2H)，0.26(s，9H)。
(iv)Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F2)-(R，S)CH(OH)C(O)OH將濃鹽酸(50mL)加入到Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)(R，S)CH(OTMS)CN(5.5g，16.3mmol；參見(jiàn)以上步驟(iii))，將溶液在100℃攪拌1.5小時(shí)。冷卻至室溫后，反應(yīng)物進(jìn)一步冷卻至0℃，用3NNaOH(～200mL)緩慢堿化，用乙醚(3×200mL)洗滌。水層用2N HCl(75mL)酸化，用EtOAc(3×200mL)萃取。合并的EtOAc萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得褐色油狀小標(biāo)題化合物(4.6g，100％)，直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.14(s，1H)，7.08(s，1H)，7.02(s，1H)，5.12(s，1H)，4.70-4.90(m，3H)，4.52-4.67(m，2H)。
(v)Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(S)CH(OAc)C(O)OH(a)和Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F2)-(R)CH(OH)C(O)OH(b)在氮?dú)夥障?，將Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R，S)CH(OH)C(O)OH(4.6g，16.4mmol；參見(jiàn)以上步驟(iv))和Lipase PS“Amano”(3.0g)的乙酸乙酯(150mL)和MTBE(150mL)溶液在70℃加熱2.5天。反應(yīng)物冷卻至室溫，用Celite_過(guò)濾除去酶。濾餅用EtOAc洗滌，真空濃縮濾液。硅膠色譜法(洗提CHCl3∶MeOH∶Et3N(90∶8∶2))處理獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(a)的三乙胺鹽。此外，獲得小標(biāo)題化合物(b)的三乙胺鹽(2.2g)，將此鹽溶于水(100mL)，用2N HCl酸化，用EtOAc(3×200mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(b)(1.4g，29％)。
小標(biāo)題化合物(b)的數(shù)據(jù)1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.14(s，1H)，7.08(s，1H)，7.02(s，1H)，5.12(s，1H)，4.70-4.90(m，3H)，4.52-4.67(m，2H)。
(vi)Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)在氮?dú)夥铡?℃下，Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)OH(824mg，2.94mmol；參見(jiàn)以上步驟(v))的DMF(30mL)溶液中加入HAze-Pab(Teoc)·HCl(1.71g，3.81mmol)、PyBOP(1.68g，3.23mmol)和DIPEA(949mg，7.34mmol)。將反應(yīng)物在0℃攪拌2小時(shí)，然后在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。真空濃縮混合物，殘余物用硅膠色譜法(依次用CHCl3∶EtOH(15∶1)、EtOAc∶EtOH(20∶1)洗提)處理兩次獲得可壓碎的白色泡沫狀小標(biāo)題化合物(720mg，38％)。
Mp78-84℃Rf＝0.62(10∶1 CHCl3∶EtOH)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體復(fù)合混合物)δ7.79(d，J＝8Hz，2H)，7.42(d，J＝8Hz，2H)，7.00-7.12(m，3H)，5.08-5.20(m，1H)，3.97-4.80(m，12H)，2.10-2.75(m，2H)，1.05-1.11(m，2H)，0.08(s，9H)。
APCI-MS(M+1)＝639m/z。
(vii)Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFAPh(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.129g，0.202mmol；參見(jiàn)以上步驟(vi))溶于3mL TFA，讓其反應(yīng)20分鐘。蒸去TFA，殘余物用水/乙腈冷凍干燥獲得0.123g(100％)標(biāo)題化合物的TFA鹽。
1H-NMR(400MHz；CD3OD)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ7.8-7.7(m，2H)，7.55(d，2H)，7.2-7.0(m，3H)，5.18(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.15(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.08(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.80(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體，部分被CD3OH的峰屏蔽)，4.75-4.4(m，7H)，4.38(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.15(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.1-3.9(m，2H，2個(gè)信號(hào)來(lái)自次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.70(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.53(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.30(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.15(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)。
13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ172.9，172.6，172.2，171.7，167.1。
ESI-MS+(M+1)＝495(m/z)
實(shí)施例24Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)在氮?dú)夥铡?℃下，Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)OH(513mg，1.83mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例23(v)的DMF(30ml)溶液中加入HAze-Pab(OMe)·2HCl(797mg，2.38mmol)、PyBOP(1.04g，2.01mmol)和DIPEA(591mg，4.57mmol)。將反應(yīng)物在0℃攪拌2小時(shí)，然后在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。真空濃縮混合物，殘余物用硅膠色譜法(依次用CHCl3∶EtOH(15∶1)、EtOAc∶EtOH(20∶1)洗提)處理兩次獲得可壓碎的白色泡沫狀標(biāo)題化合物(370mg，39％)。
Mp58-63℃Rf＝0.66(10∶1 CHCl3∶EtOH)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體復(fù)合混合物)δ7.58-7.60(d，J＝8Hz，2H)，7.34(d，J＝8Hz，2H)，7.00-7.12(m，3H)，5.08-5.20(m，1H)，4.65-4.82(m，3H)，4.28-4.65(m，5H)，3.92-4.18(m，2H)，3.82(s，3H)，2.10-2.75(m，2H)。
13C-NMR(150MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳)δ173.2，170.8，152.5。
APCI-MS(M+1)＝525m/z。
實(shí)施例25Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFA(i)1-溴-3-氟-5-芐氧基苯將氫化鈉(60％分散于油中，24.0g，0.48mol)分批加入攪拌下的無(wú)水芐基醇(64.5g，0.60mol)的THF(1.0L)溶液。將混合物攪拌1小時(shí)后，在1小時(shí)內(nèi)滴加1-溴-3，5-二氟苯(76.8g，0.40mmol)的THF(100ml)溶液。反應(yīng)物在室溫下攪拌2天。加入水(400ml)，真空除去THF。水層用己烷(3×150mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用2N NaOH(2×100mL)洗滌，然后用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得淺黃色油狀小標(biāo)題化合物(110.7g，98％)，直接使用無(wú)需再提純。
Rf＝0.47(Hex)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.36-7.41(m，5H)，6.94(bs，1H)，6.87(d，JH-F＝8Hz，1H)，6.63(d，JH-F＝10Hz，1H)，5.03(s，2H)。
(ii)3-溴-5-氟苯酚在0℃，1-溴-3-氟-5-芐氧基苯(110.0g，0.39mol；參見(jiàn)以上步驟(i))和N，N-二甲基苯胺(474.0g，3.92mol)的無(wú)水二氯甲烷(1.0L)溶液中加入氯化鋁(156.0g，1.17mol)。10分鐘后，除去冰浴，繼續(xù)攪拌2小時(shí)。小心加入3N HCl(600mL)猝滅反應(yīng)。分離出各層，水層用CH2Cl2(2×150mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用2N HCl(250ml)和水(3×250mL)洗滌。有機(jī)層中加入15％KOH(500mL)，分離出水層。有機(jī)層再用2N KOH(2×70mL)萃取。合并的水層用二氯甲烷(3×100ml)洗滌，然后用4N HCl酸化。水層用乙醚(3×125mL)萃取，合并的乙醚萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得褐色油狀小標(biāo)題化合物(69.0g，92％)，直接使用無(wú)需再提純。
Mp33-35℃Rf＝0.25(CHCl3)1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.38(s，1H)，6.90(dd，JH-F＝11Hz，J＝2Hz，1H)，6.81(s，1H)，6.59(dt，JH-F＝11Hz，J＝2Hz，1H)。
APCI-MS(M-1)＝189m/z(iii)1-溴-3-氟-5-二氟甲氧基苯將3-溴-5-氟苯酚(6.1g，31.0mmol；參見(jiàn)以上步驟(ii))和氯代二氟甲烷(13.0g，150.0mmol)的i-PrOH(100mL)和30％KOH(80mL)混合物在密閉燒瓶中于80-85℃加熱18小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，分離出各層。真空濃縮有機(jī)層獲得無(wú)色油狀物。水層用乙醚(3×30mL)萃取。粗制油狀物以及合并的有機(jī)萃取液用2N NaOH(3×30mL)和水(3×30mL)洗滌。然后有機(jī)物用硫酸鈉干燥，通過(guò)小硅膠填料過(guò)濾，然后真空濃縮獲得無(wú)色油狀小標(biāo)題化合物(6.1g，79％)，直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.11-7.14(m，2H)，6.84(dt，J＝9Hz，J＝2Hz，1H)，6.50(t，JH-F＝72Hz，1H)。
(iv)1-氟-3-二氟甲氧基-5-乙烯苯在氮?dú)夥铡?5℃下，將三(丁基)乙烯基錫(7.0g，22.2mmol)加入1-溴-3-氟-5-二氟甲氧基苯(4.9g，20.2mmol；參見(jiàn)以上步驟(iii))、雙(三苯基膦)二氯化鈀(II)(1.42g，2.02mmol)和無(wú)水氯化鋰(0.90g，20.2mmol)的THF(40mL)懸浮液，混合物攪拌5小時(shí)。反應(yīng)混合物冷卻至0℃，加入1N NaOH(90mL)。將兩相性混合物劇烈攪拌1小時(shí)，然后分離出各層。水層用乙醚(3×70mL)萃取。合并的有機(jī)層用2NNaOH(2×40mL)和水(40mL)洗滌，然后用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。硅膠快速色譜法(洗提己烷)處理獲得無(wú)色油狀小標(biāo)題化合物(2.2g，57％)。
Rf＝0.47(Hex)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.93-6.99(m，2H)，6.73-6.78(m，1H)，6.67(dd，J＝18Hz，J＝11Hz，1H)，6.51(t，JH-F＝73Hz，1H)，5.77(d，J＝18Hz，1H)，5.36(d，J＝11Hz，1H)。
(v)Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OH將2-甲基-2-丙醇(140mL)、水(140mL)和AD-mix-β(39.2g)混合在一起，冷卻至0℃。一次性加入溶于少量2-甲基-2-丙醇的1-氟-3-二氟甲氧基-5-乙烯苯(5.0g，26.4mmol；參見(jiàn)以上步驟(iv))，將此不均勻漿狀物在0℃劇烈攪拌直到TLC顯示不存在初始原料為止。在0℃加入亞硫酸鈉(42.0g)猝滅反應(yīng)，然后升至室溫，攪拌60分鐘。反應(yīng)混合物用乙醚(3×120mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。硅膠快速色譜法(洗提CHCl3∶EtOAc(3∶2))處理獲得無(wú)色油狀小標(biāo)題化合物(5.8g，98％)。
Rf＝0.41(3∶2 CHCl3∶EtOAc)
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.96-6.99(m，2H)，6.77-6.82(m，1H)，6.51(t，JH-F＝73Hz，1H)，4.79-4.85(m，1H)，3.76-3.84(m，1H)，3.58-3.66(m，1H)，2.66(d，J＝3Hz，1H)，2.00(t，J＝6Hz，1H)。
HPLC分析89.2％，＞99％ee，ChiralPak AD柱(95∶5 Hex∶EtOH流動(dòng)相)。
(vi)Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OTBS將Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OH(5.5g，24.7mmol；參見(jiàn)以上步驟(v))、4-(二甲基氨基)吡啶(121mg，1.0mmol)和三乙胺(3.0g，29.6mmol)的無(wú)水二氯甲烷(100mL)溶液冷卻至0℃。滴加1.0M叔丁基二甲硅烷基氯的二氯甲烷(26.0mL，26.0mmol)溶液，將反應(yīng)混合物升至室溫，攪拌過(guò)夜。加入飽和氯化銨溶液(60mL)，分離出各層。有機(jī)層用飽和氯化銨溶液(60mL)和水(2×35mL)洗滌，然后用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，然后真空濃縮。硅膠快速色譜法(洗提CHCl3∶Hex(3∶1))處理獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(7.9g，85％)。
Rf＝0.47(3∶1 CHCl3∶Hex)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.95-6.98(m，2H)，6.76-6.79(m，1H)，6.51(t，JH-F＝73Hz，1H)，4.71-4.74(m，1H)，3.75-3.80(m，1H)，3.48-3.54(m，1H)，2.99(bs，1H)，0.91(s，9H)，0.05(s，3H)，0.00(s，3H)。
(vii)Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS在氮?dú)夥铡?℃下，向Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OTBS(7.9g，0.51mmol；參見(jiàn)以上步驟(vi))和DIPEA(4.9g，48.1mmol)的無(wú)水二氯甲烷(50mL)溶液滴加2-甲氧基乙氧基甲基氯(6.6g，48.1mmol)。將混合物攪拌24小時(shí)。加入飽和氯化銨溶液(70mL)，分離出各層。有機(jī)層用飽和氯化銨溶液(70mL)和水(3×60mL)洗滌，然后用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(8.8g，99％)，直接使用無(wú)需再提純。
Rf＝0.41(4∶1 CHCl3∶EtOAc)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.20(s，1H)，7.06(s，1H)，7.02(s，1H)，6.50(t，JH-F＝73Hz，1H)，4.79-4.81(m，1H)，4.66-4.68(m，2H)，3.47-3.82(m，6H)，3.36(s，3H)，0.85(s，9H)，0.01(s，3H)，0.00(s，3H)。
(viii)Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OH在室溫下，Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS(9.3g，21.9mmol；參見(jiàn)以上步驟(vii))的THF(60mL)溶液中加入1.0M四丁基氟化銨的THF(70.0mL，70.0mmol)溶液，在氮?dú)夥障聦⒒旌衔飻嚢柽^(guò)夜。真空濃縮反應(yīng)物。將黃色殘余物溶于乙醚(100mL)和己烷(100mL)，依次用飽和氯化銨溶液(2×150mL)和水(3×70mL)洗滌。有機(jī)層用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。硅膠快速色譜法(洗提Hex∶EtOAc(1∶1))處理獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(4.2g，62％)。
Rf＝0.42(1∶1 Hex∶EtOAc)1H NMR(300MHz，CDCl3)δ6.91-6.95(m，2H)，6.75-6.81(m，1H)，6.51(t，JH-F＝73Hz，1H)，4.80-4.82(m，1H)，4.70-4.74(m，2H)，3.88-3.93(m，1H)，3.67-3.71(m，3H)，3.53-3.56(m，2H)，3.39(s，3H)，2.96-2.99(m，1H)。
(ix)Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH將Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OH(4.2g，13.4mmol；參見(jiàn)以上步驟(vii))的丙酮(100mL)溶液加入5％NaHCO3水溶液(35mL)。將磁攪拌下的不均勻混合物冷卻至0℃，加入溴化鉀(159mg，1.3mmol)和2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基，游離基(2.2g，14.1mmol)。然后在20分鐘內(nèi)滴加次氯酸鈉(5.25％，30mL)，同時(shí)劇烈攪拌混合物并保持在0℃。1小時(shí)后，再加入次氯酸鈉(30mL)和5％ NaHCO3溶液(35mL)，繼續(xù)在0℃攪拌2小時(shí)。真空除去丙酮。水層用乙醚(4×40mL)洗滌。用10％檸檬酸將水層酸化至pH3.5，用EtOAc(4×50mL)萃取。合并的EtOAc萃取液依次用水(4×30ml)和鹽水(60mL)洗滌，然后用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得無(wú)色油狀小標(biāo)題化合物(4.3g，98％)，它直接使用無(wú)需再提純。
Rf＝0.74(8.0∶1.5∶0.5 CHCl3∶MeOH∶Et3N)1H NMR(300MHz，丙酮-d6)δ7.16-7.18(m，2H)，7.16(t，JH-F＝89Hz，1H)，7.00-7.03(m，1H)，5.30(s，1H)，4.88(d，J＝7Hz，1H)，4.80(d，J＝7Hz，1H)，3.54-3.75(m，2H)，3.46-3.49(m，2H)，3.28(s，3H)。
(x)Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)在氮?dú)夥铡?℃下，Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH(1.1g，3.4mmol；參見(jiàn)以上步驟(ix))的DMF(20mL)溶液中加入HAze-Pab(Teoc)·HCl(2.0g，4.4mmol)、PyBOP(1.9g，3.7mmol)和DIPEA(1.1g，8.4mmol)。將反應(yīng)物在0℃攪拌2小時(shí)，然后在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。真空濃縮混合物，殘余物用硅膠色譜法(依次用CHCl3∶EtOH(15∶1)、EtOAc∶EtOH(20∶1)洗提)處理兩次獲得可壓碎的白色泡沫狀小標(biāo)題化合物(1.3g，56％)。
Rf＝0.65(15∶1 CHCl3∶EtOH)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的復(fù)合混合物)δ7.80-7.84(m，2H)，7.40-7.46(m，2H)，6.95-7.16(m，3H)，6.92和6.88(t，JH-F＝73 Hz，1H)，5.28和5.08(s，1H)，5.18-5.22和4.70-4.78(m，1H)，4.50-4.75(m，1H)，4.30-4.49(m，2H)，4.21-4.26(m，3H)，3.97-4.08(m，1H)，3.35-3.72(m，6H)，3.30(s，3H)，2.10-2.75(m，2H)，1.05-1.11(m，2H)，0.08(s，9H)。
(xi)Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)將Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(590mg，0.87mmol；參見(jiàn)以上步驟(x))和四溴化碳(287mg，0.87mmol)的2-丙醇(20mL)混合物回流1.5小時(shí)。真空濃縮混合物，然后用水(50mL)和EtOAc(3×50mL)分配。水層再用EtOAc(2×10mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用鹽水(30mL)洗滌，然后用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。硅膠快速色譜法(洗提CHCl3∶EtOH(15∶1))處理獲得可壓碎的白色泡沫狀小標(biāo)題化合物(60mg，12％)。
Rf＝0.46(15∶1 CHCl3∶EtOH)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體復(fù)合混合物)δ7.74(d，J＝8Hz，2H)，7.35-7.37(m，2H)，6.97-7.07(m，2H)，6.80-6.84(m，1H)，6.82和6.80(t，JH-F＝73Hz，1H)，5.10和5.06(s，1H)，4.68-4.70(m，1H)，3.97-4.60(m，6H)，2.10-2.75(m，2H)，1.05-1.11(m，2H)，0.08(s，9H)。
APCI-MS(M+1)＝595m/z(xii)Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFA將Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.053g，O.089mmol；參見(jiàn)以上步驟(xi))溶于3mL TFA，讓其反應(yīng)80分鐘，同時(shí)用冰浴冷卻。蒸去TFA，殘余物用水/乙腈冷凍干燥獲得0.042g(80％)標(biāo)題化合物的TFA鹽。
1H-NMR(300MHz；CD3OD)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ7.7-7.6(m，2H)，7.5-7.4(m，2H)，7.1-6.6(m，4H)，5.2-5.0(m，1H和1H的次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，約4.8(前一信號(hào)被CD3OH信號(hào)屏蔽的主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.6-4.3(m，2H)，4.26(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.10(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.96(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.89(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.60(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.44(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.19(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.05(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)。
13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳)δ172.8，172.0，167.0。
ESI-MS+(M+1)＝451(m/z)
實(shí)施例26Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)(i)Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe)在氮?dú)夥铡?℃下，Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH(1.0g，3.1mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例25(ix))的DMF(30mL)溶液中加入HAze-Pab(OMe)·2HCl(1.4g，4.1mmol)、PyBOP(1.8g，3.4mmol)和DIPEA(1.0g，7.8mmol)。反應(yīng)物在0℃攪拌2小時(shí)，然后在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。真空濃縮混合物，殘余物用硅膠色譜法處理兩次(依次用CHCl3∶EtOH(15∶1)、EtOAc洗提)獲得可壓碎的白色泡沫狀小標(biāo)題化合物(1.5g，79％)。
Rf＝0.24(EtOAc)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的復(fù)合混合物)δ7.58-7.62(m，2H)，7.32-7.38(m，2H)，7.03-7.16(m，3H)，6.92和6.88(d，JH-F＝73Hz，1H)，5.27和5.08(s，1H)，5.22-5.15和4.75-4.80(m，1H)，4.38-4.65(m，5H)，3.92-4.27(m，1H)，3.82(s，3H)，3.43-3.68(m，4H)，3.29(s，3H)，2.28-2.85(m，2H)。
(ii)Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)將Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe)(828mg，2.33mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))和四溴化碳(525mg，2.33mmol)的2-丙醇(20ml)混合物回流8小時(shí)，然后在室溫下攪拌過(guò)夜。真空濃縮混合物，殘余物用H2O(70ml)和EtOAc(50ml)分配。水層用EtOAc(2×25mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用鹽水(35mL)洗滌，然后用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。硅膠快速色譜法(洗提CHCl3∶EtOH(15∶1))處理獲得可壓碎的白色泡沫狀標(biāo)題化合物(520mg，74％)。
Mp73-81℃Rf＝0.43(15∶1 CHCl3∶EtOH)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的復(fù)合混合物)δ7.59(d，J＝8Hz，2H)，7.32-7.37(m，2H)，7.05-7.14(m，2H)，6.87-6.92(m，1H)，6.90和6.86(t，JH-F＝73Hz，1H)，5.13-5.18和4.75-4.85(m，2H)，4.15-4.45(m，4H)，3.81(s，3H)，2.10-2.75(m，2H)。
13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳)δ172.0，171.4，153.9。
APCI-MS(M+1)＝481m/z實(shí)施例27Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFA(i)1，3-二溴-5-芐氧基苯在氮?dú)夥?、室溫下，分批將氫化鈉(9.9g，0.414mol，95％干燥的)加入攪拌下的芐基醇(41.0g，0.394mol)的THF(1.0L)溶液，攪拌1小時(shí)。在此溶液中滴加1，3-二溴-5-氟苯(100.0g，0.394mol)。攪拌過(guò)夜后，混合物用水(600mL)和EtOAc(4×600mL)分配。合并的有機(jī)萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。硅膠快速色譜法(洗提己烷)處理獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(101.3g，75％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.30-7.48(m，5H)，7.18(s，1H)，7.06(s，2H)，4.99(s，2H)。
(ii)3，5-二溴苯酚在氮?dú)夥?、室溫下，分批將氯化鋁(11.7g，87.6mmol)加入1，3-二溴-5-芐氧基苯(10.0g，29.2mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))和N，N-二甲基苯胺(35.4g，292mmol)的二氯甲烷(100mL)溶液中。30分鐘后，混合物用1N HCl(300mL)和EtOAc(5×150mL)分配。合并的有機(jī)萃取液用飽和NaHCO3(150mL)和鹽水(150mL)洗滌，然后用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。硅膠快速色譜法(洗提Hex∶EtOAc(9∶1))處理獲得白色固體小標(biāo)題化合物(6.1g，82％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.21(s，1H)，6.97(s，2H)，5.88(bs，1H)。
(iii)1，3-二溴-5-單氟代甲氧基苯在一個(gè)測(cè)定了皮重、密封的350ml圓底壓力燒瓶中包含3，5-二溴苯酚(10.0g，39.7mmol；參見(jiàn)以上步驟(ii))和Cs2CO3(20.7g，63.5mmol)的DMF(150ml)懸浮液，在-78℃穿過(guò)隔板向其中通入氯氟甲烷5分鐘。將隔板用Teflon塞子替代，然后密封燒瓶，讓其升至室溫，稱量燒瓶，計(jì)算出包含9.0g(131mmol)氯氟甲烷。溶液用油浴裝置在70℃加熱過(guò)夜。將燒瓶冷卻至室溫，小心地釋放壓力，將內(nèi)含物用水(100mL)稀釋。水層用乙醚(3×200mL)萃取，然后合并的有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。硅膠快速色譜法(洗提己烷)處理獲得白色固體小標(biāo)題化合物(7.9g，71％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.40(s，1H)，7.18(s，2H)，5.67(d，JH-F＝53Hz，2H)。
(iv)1-溴-3-單氟代甲氧基-5-乙烯苯在氮?dú)夥障拢瑢⑷?丁基)乙烯基錫(10.0g，31.4mmol)滴加到1，3-二溴-5-單氟代甲氧基苯(8.5g，29.9mmol；參見(jiàn)以上步驟(iii))、四(三苯基膦)鈀(O)(690mg，0.599mmol)和2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚(刮勺端量(spatula tip))的甲苯(100mL)溶液。將混合物在70℃攪拌8小時(shí)?；旌衔锢鋮s至0℃，加入1N NaOH(70mL)。1小時(shí)后，將混合物用CH2Cl2(3×300mL)萃取，然后合并的有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。硅膠快速色譜法(洗提己烷)處理獲得無(wú)色油狀小標(biāo)題化合物(4.3g，57％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.30(s，1H)，7.16(s，1H)，7.01(s，1H)，6.60(dd，J＝6Hz，J＝11Hz，1H)，5.74(d，J＝16Hz，1H)，5.67(d，JH-F＝53Hz，2H)，5.32(d，J＝8Hz，1H.)(v)Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)CH2OH將2-甲基-2-丙醇(100mL)、H2O(100mL)和AD-mix-β(27.5g)混合在一起，冷卻至0℃。一次性加入1-溴-3-單氟代甲氧基-5-乙烯苯(4.3g，17.3mmol；參見(jiàn)以上步驟(iv))，將此不均勻漿狀物在0℃劇烈攪拌直到TLC顯示不存在初始原料為止。在0℃加入飽和亞硫酸鈉(200mL)猝滅反應(yīng)，然后升至室溫，攪拌60分鐘。反應(yīng)混合物用EtOAc(3×150mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得無(wú)色油狀小標(biāo)題化合物(4.9g，100％)，直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.30(s，1H)，7.15(s，1H)，7.11(s，1H)，5.70(d，JH-F＝53Hz，2H)，4.62-4.70(m，1H)，3.52-3.70(m，2H)。
HPLC分析92.1％，96.9％ee，ChiralPak AD柱(95∶5 Hex∶EtOH流動(dòng)相)。
(vi)Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)CH2OTBSPh(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)CH2OH(4.9g，18.6mmol；參見(jiàn)以上步驟(v))、4-(二甲基氨基)吡啶(453mg，3.71mmol)和DIPEA(8.9g，93.0mmol)的無(wú)水二氯甲烷(200mL)溶液中滴加1.0M叔丁基二甲硅烷基氯的二氯甲烷(22.3mL，22.3mmol)溶液。反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?0小時(shí)。在混合物中滴加DIPEA(8.9g，93.0mmol)和2-甲氧基乙氧基甲基氯(13.9g，111mmol)。16小時(shí)后，再加入2-甲氧基乙氧基甲基氯(2.2g)，將反應(yīng)物攪拌過(guò)夜。混合物用H2O(100mL)稀釋，分離出各層。水層用二氯甲烷(3×200mL)萃取，然后合并的有機(jī)層用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。硅膠快速色譜法(洗提Hex∶EtOAc(5∶1))處理獲得無(wú)色油狀小標(biāo)題化合物(4.8g，55％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.29(s，1H)，7.22(s，1H)，7.05(s，1H)，5.74(d，JH-F＝53Hz，2H)，4.84(d，J＝7Hz，1H)，4.70-4.74(m，2H)，3.50-3.91(m，6H)，3.42(s，3H)，0.90(s，9H)，0.05(s，3H)，0.01(s，3H)。
(vii)Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)CH2OH在室溫下，Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS(4.7g，10.1mmol；參見(jiàn)以上步驟(vi))的THF(100mL)溶液中加入1.0M四丁基氟化銨的THF(13.1ml，13.1mmol)溶液，將混合物攪拌1小時(shí)?；旌衔镉盟?100mL)和EtOAc(3×100mL)分配，然后合并的有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得無(wú)色油狀小標(biāo)題化合物(3.3g，92％)，直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.22(s，1H)，7.14(s，1H)，7.03(s，1H)，5.71(d，JH-F＝53Hz，2H)，4.80-4.82(m，1H)，4.58-4.66(m，2H)，3.71-3.77(m，1H)，3.39-3.65(m，5H)，3.27(s，3H)。
(viii)Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)C(O)OH將Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)CH2OH(2.1g，6.0mmol；參見(jiàn)以上步驟(vii))的丙酮(40mL)溶液加入5％ NaHCO3水溶液(15mL)。將磁攪拌下的不均勻混合物冷卻至0℃，加入溴化鉀(70mg，0.60mmol)和2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基，游離基(976mg，5.8mmol)。然后在10分鐘內(nèi)滴加次氯酸鈉(5.25％，15mL)，同時(shí)將混合物劇烈攪拌并保持在0℃。1小時(shí)后，再加入次氯酸鈉(10mL)和NaHCO3溶液(20mL)，繼續(xù)在0℃攪拌4小時(shí)。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去丙酮。水層用10％NaHCO3溶液(30mL)稀釋，用乙醚(3×20mL)洗滌。用10％檸檬酸將水層酸化至pH3.5，用EtOAc(3×40mL)萃取。合并的EtOAc萃取液用水(3×50mL)和鹽水(50mL)洗滌，然后用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得無(wú)色油狀小標(biāo)題化合物(1.7g，78％)，它直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.38(s，1H)，7.25(s，1H)，7.18(s，1H)，5.76(d，JH-F＝53Hz，2H)，5.21(s，1H)，4.83(d，J＝7Hz，1H)，4.75(d，J＝7Hz，1H)，3.62-3.78(m，2H)，3.48-3.52(m，2H)，3.32(s，3H)。
(ix)Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)在氮?dú)夥铡?℃下，Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)C(O)OH(1.0g，2.72mmol；參見(jiàn)以上步驟(viii))的DMF(20mL)溶液中加入HAze-Pab(Teoc)·HCl(1.6g，3.5mmol)、PyBOP(1.6g，3.0mmol)和DIPEA(880mg，6.81mmol)。反應(yīng)物在0℃攪拌2小時(shí)，然后在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。真空濃縮混合物，殘余物用硅膠色譜法處理兩次(依次用CHCl3∶EtOH(15∶1)、EtOAc∶EtOH(20∶1)洗提)獲得可壓碎的白色泡沫狀小標(biāo)題化合物(1.2g，62％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體復(fù)合混合物)δ7.80-7.84(m，2H)，7.40-7.46(m，2H)，7.13-7.32(m，3H)，5.84-5.87(m，1H)，5.67-5.69(m，1H)，5.25和5.07(s，1H)，5.18-5.23和4.80-4.88(m，1H)，3.97-4.79(m，8H)，3.60-3.71(m，2H)，3.40-3.53(m，2H)，3.32(s，3H)，2.10-2.75(m，2H)，1.05-1.11(m，2H)，0.08(s，9H)。
(x)Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)將Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(347mg，0.478mmol；參見(jiàn)以上步驟(ix))和四溴化碳(159mg，0.478mmol)的2-丙醇(10mL)混合物回流1.5小時(shí)。真空濃縮混合物，然后用水(20mL)和EtOAc(3×30mL)分配。合并的有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。硅膠快速色譜法(洗提CHCl3∶EtOH(15∶1))處理獲得可壓碎的白色泡沫狀小標(biāo)題化合物(59mg，19％)。
Mp81-87℃Rf＝0.58(9∶1 CHCl3∶EtOH)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體復(fù)合混合物δ7.84(d，J＝8Hz，2H)，7.40-7.48(m，2H)7.18-7.30(m，3H)，5.80(d，JH-F＝53Hz，2H)，5.21和5.15(s，1H)，5.18-5.24和4.80-4.88(m，1H)，3.98-4.54(m，6H)，2.10-2.70(m，2H)，1.05-1.11(m，2H)，0.08(s，9H)。
APCI-MS(M+1)＝637m/z(xi)Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFA將Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.073g，0.11mmol；參見(jiàn)以上步驟(x))溶于5mL TFA，讓其反應(yīng)90分鐘，同時(shí)用冰浴冷卻。蒸去TFA，殘余物用制備型RPLC(CH3CN∶0.1MNH4OAc(30∶70))提純。蒸發(fā)相關(guān)部分，從水/乙腈冷凍干燥獲得49mg(77％)標(biāo)題化合物的醋酸鹽。
1H-NMR(300MHz；CD3OD)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ7.8-7.7(m，2H)，7.54(m，2H)，7.37(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.33(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.25-7.1(m，2H)，5.75(d，2H)，5.22(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.18(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.11(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.80(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.6-4.4(m，2H)，4.37(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.16(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.1-3.9(m，2H，2個(gè)信號(hào)來(lái)自次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.70(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.52(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.30(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.15(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，1.89(s，3H)。
ESI-MS+(M+1)＝493/495(m/z)實(shí)施例28Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFA(i)1，3-二溴-5-二氟甲氧基苯在一個(gè)測(cè)定了皮重、密封的350ml圓底壓力燒瓶中包含3，5-二溴苯酚(10.0g，39.7mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例27(ii))的2-丙醇(100mL)和30％KOH(80mL)溶液，在-78℃穿過(guò)隔板向其中通入氯代二氟甲烷15分鐘。將隔板用Teflon塞子替代，然后密封燒瓶，讓其升至室溫，稱量燒瓶，計(jì)算出包含12.0g(138mmol)氯代二氟甲烷。溶液用油浴裝置在80℃回流過(guò)夜。將燒瓶冷卻至室溫，小心地釋放壓力，將內(nèi)含物用水(200mL)稀釋。水層用CHCl3(2×150mL)萃取，然后合并的有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。殘余物用Kugelrohr蒸餾法在80℃、0.2mm Hg下提純獲得澄清液態(tài)小標(biāo)題化合物(9.6g，80％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.55(s，1H)，7.26(s，2H)，6.52(t，JH-F＝68Hz，1H)。
(ii)1-溴-3-二氟甲氧基-5-乙烯苯在氮?dú)夥障拢瑢⑷?丁基)乙烯基錫(10.5g，33.1mmol)滴加到1，3-二溴-5-二氟甲氧基苯(9.1g，30.1mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))、四(三苯基膦)鈀(O)(700mg，0.60mmol)和2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚(刮勺端量)的甲苯(125mL)溶液?；旌衔镌?0℃攪拌過(guò)夜?；旌衔锢鋮s至0℃，加入1N NaOH(70mL)。1小時(shí)后，將混合物用二氯甲烷(3×300mL)萃取，然后合并的有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。硅膠快速色譜法(洗提己烷)處理獲得無(wú)色油狀小標(biāo)題化合物(5.1g，68％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.53(s，1H)，7.18(s，1H)，7.08(s，1H)，6.60(dd，J＝6Hz，J＝11Hz，1H)，6.57(t，JH-F＝68Hz，1H)，5.77(d，J＝11Hz，1H)，5.36(d，J＝8Hz，1H)。
(iii)Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OH將2-甲基-2-丙醇(150mL)、水(150mL)和AD-mix-β(27.8g)混合在一起，冷卻至0℃。一次性加入1-溴-3-二氟甲氧基-5-乙烯苯(4.6g，18.6mmol；參見(jiàn)以上步驟(ii))，將此不均勻漿狀物在0℃劇烈攪拌直到TLC顯示不存在初始原料為止，然后將溶液升至室溫，攪拌過(guò)夜。在0℃加入飽和亞硫酸鈉(300mL)猝滅反應(yīng)，然后升至室溫，攪拌60分鐘。反應(yīng)混合物用EtOAc(3×200mL)萃取。合并的有機(jī)萃取液用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得無(wú)色油狀小標(biāo)題化合物(5.0g，95％)，直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.43(s，1H)，7.23(s，1H)，7.16(s，1H)，6.86(t，JH-F＝75Hz，1H)，4.64-4.67(m，1H)，3.54-3.59(m，2H)。
HPLC分析88.6％，96.3％ee，ChiralPak AD柱(95∶5 Hex∶EtOH流動(dòng)相)。
(iv)Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMFM)CH2OTBS向Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)CH2OH(4.9g，17.3mmol；參見(jiàn)以上步驟(iii))、4-(二甲基氨基)吡啶(420mg，3.5mmol)和DIPEA(11.2g，86.3mmol)的無(wú)水二氯甲烷(250mL)溶液中滴加1.0M叔丁基二甲硅烷基氯的二氯甲烷(20.7mL，20.7mmol)溶液。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。在混合物中滴加DIPEA(11.2g，86.3mmol)和2-甲氧基乙氧基甲基氯(12.9g，104mmol)。3天后，再加入2-甲氧基乙氧基甲基氯(3.3g)，將反應(yīng)物攪拌過(guò)夜?；旌衔镉盟?250mL)稀釋，分離出各層。水層用二氯甲烷(2×250mL)萃取，然后將合并的有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。硅膠快速色譜法(用Hex∶EtOAc(4∶1)洗提)處理獲得無(wú)色油狀小標(biāo)題化合物(4.3g，51％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.40(s，1H)，7.25(s，1H)，7.08(s，1H)，6.58(t，JH-F＝75Hz，1H)，4.84(d，J＝7Hz，1H)，4.70-4.74(m，2H)，3.50-3.91(m，6H)，3.42(s，3H)，0.90(s，9H)，0.12(s，3H)，0.05(s，3H)。
(v)PH(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OH在室溫下，Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OTBS(3.3g，6.9mmol；參見(jiàn)以上步驟(iv))的THF(60mL)溶液中加入1.0M四丁基氟化銨的THF(9.0mL，9.0mmol)溶液。將反應(yīng)物攪拌45分鐘，然后混合物用水(150mL)和EtOAc(2×120mL)分配。合并的有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得黃色油狀小標(biāo)題化合物(2.5g，98％)，直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.35(s，1H)，7.21(s，1H)，7.08(s，1H)，6.83(t，JH-F＝73Hz，1H)，4.73(d，J＝7Hz，1H)，4.59-4.68(m，2H)，340-380(m，6H)，3.26(s，3H)。
(vi)Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH將Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)CH2OH(3.0g，8.1mmol；參見(jiàn)以上步驟(v))的丙酮(60mL)溶液加入到5％NaHCO3水溶液(25mL)。將磁攪拌下的不均勻混合物冷卻至0℃，然后加入溴化鉀(100mg，0.81mmol)和2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基，游離基(1.3g，8.5mmol)。然后在10分鐘內(nèi)滴加次氯酸鈉(5.25％，19mL)，同時(shí)將混合物劇烈攪拌并保持在0℃。1小時(shí)后，再加入次氯酸鈉(17mL)和NaHCO3溶液(34mL)，繼續(xù)在0℃攪拌4小時(shí)。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去丙酮。水層用10％NaHCO3溶液(30mL)稀釋，用乙醚(3×20mL)洗滌。用10％檸檬酸將水層酸化至pH3.5，用EtOAc(3×40ml)萃取。合并的EtOAc層用水(3×50mL)和鹽水(50mL)洗滌，然后用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮獲得無(wú)色油狀小標(biāo)題化合物(2.1g，66％)，它直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.51(s，1H)，7.32(s，1H)，7.24(s，1H)，6.88(t，JH-F＝73Hz，1H)，5.21(s，1H)，4.84(d，J＝7Hz，1H)，4.76(d，J＝7Hz，1H)，3.62-3.80(m，2H)，3.48-3.52(m，2H)，3.32(s，3H)。
(vii)Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)在氮?dú)夥铡?℃下，Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH(1.0g，2.62mmol；參見(jiàn)以上步驟(vi))的DMF(50mL)溶液中加入HAze-Pab(Teoc)·HCl(1.5g，3.38mmol)、PyBOP(1.5g，2.9mmol)和DIPEA(840mg，6.50mmol)。將反應(yīng)物在0℃攪拌2小時(shí)，然后在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。真空濃縮混合物，殘余物用硅膠色譜法(洗提CHCl3∶EtOH(15∶1))處理獲得可壓碎的白色泡沫狀小標(biāo)題化合物(1.1g，59％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體復(fù)合混合物)δ7.79-7.83(m，2H)，7.26-7.52(m，5H)，6.94和6.91(t，JH-F＝73Hz，1H)，5.27和5.07(s，1H)，5.20-5.23和4.80-4.88(m，1H)，4.01-4.79(m，8H)，3.60-3.71(m，2H)，3.40-3.53(m，2H)，3.32(s，3H)，2.10-2.75(m，2H)，1.05-1.11(m，2H)，0.08(s，9H)。
(viii)Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)將Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(369mg，0.496mmol；參見(jiàn)以上步驟(vii))和四溴化碳(165mg，0.496mmol)的2-丙醇(10mL)混合物回流12小時(shí)。真空濃縮混合物，然后用水(15mL)和EtOAc(5×20mL)分配。合并的有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。硅膠快速色譜法(洗提CHCl3∶EtOH(15∶1))處理獲得可壓碎的白色泡沫狀小標(biāo)題化合物(134mg，41％)。
Mp92-98℃Rf＝0.37(9∶1 CHCl3∶EtOH)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的復(fù)合混合物)δ7.80-7.86(m，2H)，7.40-7.48(m，2H)7.10-7.33(m，3H)，6.92和6.88(t，JH-F＝73Hz，1H)，5.18和5.11(s，1H)，5.18-5.24和4.76-4.80(m，1H)，3.98-4.54(m，6H)，2.10-2.70(m，2H)，1.05-1.11(m，2H)，0.08(s，9H)。
APCI-MS(M+1)＝655m/z(ix)Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab×TFA將Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(0.081g，0.124mmol；參見(jiàn)以上步驟(viii))溶于5mL TFA，讓其反應(yīng)80分鐘，同時(shí)用冰浴冷卻。蒸去TFA，殘余物制備型RPLC(CH3CN∶0.1MNH4OAc(30∶70))提純。蒸發(fā)相關(guān)部分，從水/乙腈冷凍干燥獲得59mg(83％)標(biāo)題化合物的醋酸鹽。
1H-NMR(300MHz；CD3OD)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ7.8-7.7(m，2H)，7.6-7.4(m，3H)，7.3-7.2(m，2H)，6.89(t，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.87(t，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.23(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.21(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.13(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.80(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.6-4.4(m，2H)，4.38(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.20(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.1-3.9(m，2H，2個(gè)信號(hào)來(lái)自次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.70(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.54(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.29(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.15(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，1.89(s，3H)。
13C-NMR(75MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳)δ172.0，171.7，167.0。
MS(m/z)511/513(M+1)+實(shí)施例29Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)(i)Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe)在氮?dú)夥铡?℃下，Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)OH(957mg，2.48mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例28(vi))的DMF(30mL)溶液中加入HAze-Pab(OMe)·2HCl(1.1g，3.2mmol)、PyBOP(1.4g，2.7mmol)和DIPEA(804mg，6.2mmol)。將反應(yīng)物在0℃攪拌2小時(shí)，然后在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。真空濃縮混合物，殘余物用硅膠色譜法處理兩次(依次用CHCl3∶EtOH(9∶1)、EtOAc∶EtOH(15∶1)洗提)獲得可壓碎的白色泡沫狀小標(biāo)題化合物(1.1g，72％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的復(fù)合混合物)δ7.59-7.65(m，2H)，7.20-7.55(m，5H)，6.95和6.91(t，JH-F＝73Hz，1H)，5.27和5.07(s，1H)，5.18-5.23和4.75-4.84(m，1H)，3.87-4.89(m，6H)，3.84(s，3H)，3.60-3.71(m，2H)，3.40-3.53(m，2H)，3.32(s，3H)，2.10-2.75(m，2H)。
(ii)Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)將Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OMEM)C(O)-Aze-Pab(OMe)(1.1g，1.8mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))和四溴化碳(583mg，1.8mmol)的2-丙醇(30mL)混合物回流2.5天。在此期間，再加入四溴化碳(0.90mmol分為5份，每隔一定時(shí)間加入一份50mg)以確保反應(yīng)完成。真空濃縮混合物，然后用H2O(50mL)和EtOAc(5×25mL)分配。合并的有機(jī)物用硫酸鈉干燥，過(guò)濾，真空濃縮。硅膠快速色譜法(洗提CHCl3∶EtOH(15∶1))處理獲得可壓碎的白色泡沫狀標(biāo)題化合物(460mg，50％)。
Mp71-75℃Rf＝0.63(9∶1 CHCl3∶EtOH)1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的復(fù)合混合物)δ7.59(d，J＝8Hz，2H)，7.20-7.54(m，5H)，6.90和6.87(t，JH-F＝73Hz，1H)，5.18和5.11(s，1H)，4.76-4.80(m，1H)，3.98-4.54(m，4H)，3.82(s，3H)，2.10-2.70(m，2H)。
13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ172.5，172.1，171.6，154.1。
APCI-MS(M+1)＝542m/z實(shí)施例30Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)(i)Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)將Boc-Aze-Pab(Z)(參見(jiàn)國(guó)際專利申請(qǐng)WO 97/02284，92mg，0.197mmol)溶于10mL飽和HCl(g)的EtOAc溶液，讓其反應(yīng)10分鐘。蒸去溶劑，殘余物與Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(50mg，0.188mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例17(v))、PyBOP(109mg，0.209mmol)混合，最后與二異丙基乙胺(96mg，0.75mmol)的2mL DMF溶液混合。將混合物攪拌2小時(shí)，然后傾入50mL水中，用EtOAc萃取三次。合并的有機(jī)相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。粗制產(chǎn)物用硅膠快速色譜法(EtOAc∶MeOH(9∶1))處理。產(chǎn)量100mg(87％)。
1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ7.85-7.75(m，2H)，7.45-7.25(m，7H)，7.11(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.08(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.05-6.9(m，2H)，6.13(bt，1H)，5.25-5.05(m，3H)，4.77(m，1H，部分信號(hào)被CD3OH信號(hào)屏蔽)，4.5-3.9(m，7H)，2.64(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.47(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.25(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.13(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)(ii)Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)將羥胺鹽酸鹽(65mg，0.94mmol)和三乙胺(0.319g，3.16mmol)在8mL THF中混合，在40℃用超聲波處理1小時(shí)。加入Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)(96mg，0.156mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))以及8mL THF。將混合物在40℃攪拌4.5天。蒸去溶劑，粗制產(chǎn)物用制備型RPLC(CH3CN∶0.1M NH4OAc(40∶60))提純。產(chǎn)量30mg(38％)。純度99％。
1H NMR(300MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ7.6-7.55(m，2H)，7.35-7.3(m，2H)，7.12(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.09(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.05-6.9(m，2H)，6.15(多重峰的三重峰，1H)，5.15(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.13(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.08(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.77(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.5-4.2(m，SH)，4.08(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.97(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.66(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.50(m，1H主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.27(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.14(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)。
13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ172.8，172.2，171.4，159.1，158.9，154.2。
APCI-MS(M+1)＝497/499m/z實(shí)施例31Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pah(OH)(i)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)將Boc-Aze-Pab(Z)(130mg，0.279mmol)溶于15ml飽和HCl(g)的EtOAc溶液，讓其反應(yīng)10分鐘。蒸去溶劑，殘余物與Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)-C(O)OH(63mg，0.188mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例21(v))的3mL DMF溶液、PyBOP(147mg，0.279mmol)混合，最后與二異丙基乙胺(134mg，1.03mmol)混合。將混合物攪拌130分鐘，然后傾入75mL水中，用EtOAc萃取三次。合并的有機(jī)相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。粗制產(chǎn)物用硅膠快速色譜法(EtOAc/MeOH＝95/5)處理。產(chǎn)量119mg(79％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.06(bt，1H)，7.67(d，2H)，7.45-7.25(m，5H)，7.18(d，2H)，6.89(m，1H)，6.84(m，1H)，6.76(m，1H)，5.16(s，2H)，4.84(s，1H)，4.79(m，1H)，4.66(多重峰型雙峰，2H)，4.4-4.3(m，2H)，4.10(多重峰型雙峰，2H)，4.02(m，1H)，3.67(m，1H)，2.46(m，1H)，2.28(m，1H)。
(ii)Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)將羥胺鹽酸鹽(80mg，1.16mmol)和三乙胺(0.392g，3.87mmol)在9mL THF中混合，在40℃用超聲波處理1小時(shí)。加入Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)(96mg，0.156mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))和9mL THF。將混合物在40℃攪拌48小時(shí)，在室溫?cái)嚢?天。蒸去溶劑，粗制產(chǎn)物用制備型RPLC(CH3CN∶0.1M NH4OAc(30∶70))提純。產(chǎn)量72mg(78％)。純度100％。
1H NMR(400MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ7.6-7.55(m，2H)，7.35-7.25(m，4H)，7.07(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.04(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.0-6.9(m，2h)，5.12(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.08(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.04(s，1H)，4.78(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.68(多重峰型雙峰，2H)，4.5-4.25(m，3H)，4.20(多重峰型雙峰，2H)4.06(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.97(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.65(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.48(m，1H主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.27(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.14(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物δ172.3，171.5，159.8，154.3APCI-MS(M+1)＝479/481m/z
實(shí)施例32Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(i)Boc-Pro-Pab(Teoc)將Boc-Pro-Pab(Z)(參見(jiàn)國(guó)際專利申請(qǐng)WO 97/02284，15.0g，0.0321mol)溶于150ml乙醇，加入200mg 10％ Pd/C(50％水分)。將混合物在大氣壓下攪拌并氫化2小時(shí)，通過(guò)Hyflo過(guò)濾，濃縮。產(chǎn)物直接使用無(wú)需再提純。從此產(chǎn)物中取10g(0.029mol)，將其溶于300mlTHF。加入Teoc-p-硝基苯基碳酸酯(10g，0.035mol)。在3分鐘內(nèi)加入碳酸鉀(5.2g，0.038mol)的50mL水溶液，將所得溶液攪拌3天，濃縮，剩余物用EtOAc萃取三次。合并的有機(jī)層用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。粗制產(chǎn)物用硅膠快速色譜法(二氯甲烷∶丙酮(4∶1))處理。產(chǎn)量9.8g(69％)。
(ii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(Teoc)將Boc-Pro-Pab(Teoc)(107mg，0.218mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))溶于10mL飽和HCl(g)的EtOAc溶液，讓其反應(yīng)10分鐘。蒸去溶劑，殘余物與Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(50mg，0.198mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例1(viii))的3mL DMF溶液、PyBOP(115mg，0.218mmol)混合，最后與二異丙基乙胺(104mg，0.80mmol)混合。將混合物攪拌2小時(shí)，然后傾入75mL水中，用EtOAc萃取三次。合并的有機(jī)相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。粗制產(chǎn)物用硅膠快速色譜法(EtOAc∶MeOH(95∶5))處理。產(chǎn)量89mg(72％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.54(bt，1H)，7.47(d，2H)，7.12(m，1H)，7.08(d，2H)，7.02(m，1H)，6.95(m，1H)，6.50(t，1H)，5.21(s，1H)，4.42(m，1H)，4.35-4.15(m，3H)，3.59(m，1H)，2.94(m，1H)，2.1-1.7(m，4H)，1.06(m，2H)，0.04(s，9H)。
(iii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab×TFA將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Pro-Pab(Teoc)(85mg，0.136mmol；參見(jiàn)以上步驟(ii))溶于1mL二氯甲烷，用冰浴冷卻。加入TFA(4mL)，將反應(yīng)物攪拌90分鐘。蒸去TFA，殘余物從水和乙腈冷凍干燥。產(chǎn)量79mg(92％)。純度94％。
1H NMR(400MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ7.85-7.7(m，2H)，7.58(d，2H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.47(d，2H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.35(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.27(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.2.7.1(m，2H)，6.88(t，1H)，5.38(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.22(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.58(d，1H)，4.5-4.2(m，2H)，3.8-3.5(m，1H)，3.35(m，1H)，2.2-1.8(m，4H)。
13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳)δ173.6，171.1，167.0。
APCI-MS(M+1)＝481/483m/z實(shí)施例33Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(OMe)(i)4-疊氮基甲基-N-甲氧基-苯甲脒將4-疊氮基甲基苯甲腈(17.3g，0.109mol；Nishiyama等；Chem.Lett.(1982)1477)溶于500mL甲苯和200mL無(wú)水乙醇。將溶液冷卻至-10℃，通入HCl(g)直到飽和。當(dāng)蒸去大部分溶劑后，將混合物保存于冰箱2天。加入乙醚后傾析出去。將產(chǎn)物重新溶于O-甲基羥胺(10.5g，0.125mol)和三乙胺(56mL)的200mL甲醇溶液。將混合物靜置3天，由此蒸去甲醇而加入EtOAc。有機(jī)相用水、稀HOAc和碳酸氫鈉水溶液洗滌，用硫酸鈉干燥，再用EtOAc稀釋至總體積500mL。將25mL樣品蒸發(fā)至干。剩余物932mg?？偖a(chǎn)量18.6g(83％)。
(ii)4-氨基甲基-N-甲氧基-苯甲脒4-疊氮基甲基-N-甲氧基-苯甲脒(11.3g，0.055mol；參見(jiàn)以上步驟(i))的200mL乙醇溶液中加入200mg PtO2。恒定通入氫氣將混合物氫化4小時(shí)，接著用Celite_過(guò)濾，蒸發(fā)。產(chǎn)量7.34g(74％)。
(iii)Boc-Pro-Pab(OMe)Boc-Pro-OH(9.7g，0.045mol)、4-氨基甲基-N-甲氧基-苯甲脒(7.34g，0.041mol；參見(jiàn)以上步驟(ii))和二甲基氨基吡啶(7.8g，0.064mol)的300mL乙腈懸浮液中加入EDC堿(11.7mL，0.068mol)。將混合物攪拌18小時(shí)，濃縮，在水和EtOAc間分配。有機(jī)層用水、碳酸氫鈉水溶液洗滌，用硫酸鎂干燥，蒸發(fā)。粗制產(chǎn)物用硅膠快速色譜法(EtOAc)處理。產(chǎn)量9.73g(63％)。
(iv)H-Pro-Pab(OMe)×2 HCl將Boc-Pro-Pab(OMe)(9.7g，0.026mol；參見(jiàn)以上步驟(iii))溶于250mL EtOAc。冰冷卻的溶液中通入HCl(g)5分鐘使其飽和。立即沉淀出產(chǎn)物，加入125mL無(wú)水乙醇。將混合物用超聲波處理直到大部分材料固化。加入乙醚(200mL)，過(guò)濾懸浮液。幾塊沒(méi)有固化的材料再次用無(wú)水乙醇和乙醚處理。干燥固體。產(chǎn)量7.57g(86％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.74(d，2H)，7.58(d，2H)，4.55(s，2H)，438(m，1H)，3.98(s，3H)，3.45-3.3(m，2H)，2.50(m，1H)，2.15-2.0(m，3H)(v)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Pro-Pab(OMe)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(50mg，0.198mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例1(viii))、H-PRO-Pab(OMe)(76mg，0.218mmol，參見(jiàn)以上步驟(iv))和PyBOP(115mg，0.218mmol)溶于2mL DMF。加入二異丙基乙胺(104mg，0.80mmol)，將混合物攪拌2.5小時(shí)。將混合物傾入50mL水中，用EtOAc萃取三次，合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。殘余物用硅膠快速色譜法(EtOAc∶MeOH(95∶5))處理。產(chǎn)量37mg(36％)。純度98％。
1H NMR(400MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ7.60(d，2H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.57(d，2H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.4-7.1(m，5H)，6.89(t，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.87(t，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.35(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.21(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.72(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.5-4.35(m，1H和2H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.3-4.25(m，2H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.814(s，3H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.807(s，3H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.75-3.5(m，1H)，3.35(m，1H)，2.2-1.8(m，4H)13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ173.3，173.2，171.3，171.0，153.9，152.4APCI-MS(M+1)＝511/513m/z實(shí)施例34Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((2-脒基)-5-吡啶基) (i)6-氰基煙酸煙酸N-氧化物(51g，0.37mol)的1.2L DMF溶液中加入NaCN(54g，1.1mol)，接著加入三乙胺(255mL，1.83mol)和TMSCl(185mL)。將反應(yīng)混合物在110℃攪拌10小時(shí)，過(guò)濾，濃縮濾液。將殘余物溶于100mL 2N HCl，用二氯甲烷萃取。合并有機(jī)層，濃縮，用水重結(jié)晶獲得12g(22％)產(chǎn)物。
(ii)5-(羥基甲基)吡啶-2-腈在0℃，6-氰基煙酸(12g，0.081mol；參見(jiàn)以上步驟(i))的THF溶液中加入Et3N(12.4mL，0.0892mol)，接著加入氯甲酸乙酯(8.53mL，0.0892mol)。將反應(yīng)混合物攪拌15分鐘，加入NaBH4(6.14g，0.162mol)。然后將混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜，用水猝滅，用二氯甲烷萃取。濃縮有機(jī)層，用柱色譜法提純獲得4g(20％)上述醇。
(iii)5-(疊氮基甲基)吡啶-2-腈將5-(羥基甲基)吡啶-2-腈(4g，0.03mol；參見(jiàn)以上步驟(ii))溶于25mL二氯甲烷，在冰浴中冷卻。先滴加甲磺酰氯(2.32mL，0.0300mol)，再滴加三乙胺(4.6ml，0.033mol)。將反應(yīng)混合物攪拌，在反應(yīng)逐步完成后，粗制甲磺酸酯用NaN3(7.35g，0.113mol)的20mL DMF溶液處理。反應(yīng)混合物在40℃攪拌2小時(shí)，用水稀釋，用乙酸乙酯萃取。濃縮有機(jī)層獲得3.95g(83％)粗制疊氮化物。
(iv)5-(叔丁氧基羰基氨基甲基)吡啶-2-腈5-(疊氮基甲基)吡啶-2-腈(3.95g，0.0248mol；參見(jiàn)以上步驟(iii))的30mL THF和10mL水溶液中加入三苯基膦(7.8g，0.0298mol)，將所得溶液攪拌24小時(shí)。然后加入三乙胺(3.8mL，0.027mol)，接著加入Boc酸酐(5.4g，0.025mol)，攪拌2小時(shí)。反應(yīng)混合物在水和乙酸乙酯間分配。濃縮有機(jī)層，用柱色譜法提純獲得2.1g(36％)小標(biāo)題化合物。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.6(s，1H)，8.0(d，1H)，8.9(d，1H)，4.1(m，2H)，1.4(s，9H)(v)5-(氨基甲基)吡啶-2-腈×2HCl將5-(叔丁氧基羰基氨基甲基)吡啶-2-腈(0.200g，0.86mmol，參見(jiàn)以上步驟(iv))溶于10mL飽和HCl(g)的EtOAc溶液，攪拌30分鐘。蒸去溶劑獲得0.175g(99％)小標(biāo)題化合物的二鹽酸鹽。
1H NMR(500MHz，D2O)δ8.79(s，1H)，8.17(d，1H)，8.05(d，1H)，4.38(s，2H)
(vi)Boc-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN)5-(氨基甲基)吡啶-2-腈×2HCl(0.175g，0.85mmol；參見(jiàn)以上步驟(v))、Boc-Aze-OH(0.201g，1.00mmol)和TBTU(0.321g，1.00mmol)的5mL DMF混合物中加入二甲基氨基吡啶(0.367g，3.00mmol)。將混合物攪拌過(guò)夜，隨后傾入水中，用EtOAc萃取三次。合并的有機(jī)相用碳酸氫鈉水溶液洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。粗制產(chǎn)物開(kāi)始結(jié)晶，將其直接用于下一步驟。產(chǎn)量0.23g(73％)。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.66(s，1H)，8.2-7.8(寬峰，1H)，7.79(d，1H)，7.67(d，1H)，4.73(m，1H)，4.65-4.5(m，2H)，3.94(m，1H)，3.81(m，1H)，2.6.2.35(m，2H)，1.8(寬峰，1H)，1.45(s，9H)(vii)H-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN)×2HCl將Boc-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN)(0.23g，0.73mmol；參見(jiàn)以上步驟(vi))溶于10mL飽和HCl(g)的EtOAc溶液，攪拌30分鐘。蒸去溶劑獲得0.21g(100％)小標(biāo)題化合物的二鹽酸鹽。
1H NMR(500MHz，D2O)δ8.64(s，1H)，8.0-7.9(m，2H)，5.19(m，1H)，4.65-4.55(m，2H)，4.20(m，1H)，4.03(m，1H)，2.88(m，1H)，2.64(m，1H)(viii))Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN)H-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN)×2HCl(0.206g，0.713mmol；參見(jiàn)以上步驟(vii))、Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.180g，0.713mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例1(viii))和PyBOP(0.408g，0.784mmol)的5mLDMF混合物中加入二甲基氨基吡啶(0.367g，3.00mmol)。將混合物攪拌過(guò)夜，隨后傾入水中，用EtOAc萃取三次。合并的有機(jī)相用碳酸氫鈉水溶液洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。粗制產(chǎn)物用硅膠快速色譜法(EtOAc)處理獲得純產(chǎn)物。產(chǎn)量0.197g(61％)。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.63(m，1H)，8.22(bt，1H)，7.78(m，1H)，7.67(m，1H)，7.21(m，1H)，7.16(m，1H)，7.04(m，1H)，6.56(t，1H)，4.97(bd，1H)，4.92(m，1H)，4.6-4.5(m，2H)，4.40(bd，1H)，4.18(m，1H)，3.80(m，1H)，2.69(m，1H)，2.46(m，1H)，1.92(s，1H)APCI-MS(M+1)＝451/453m/z(ix)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH2-((2-脒基)-5-吡啶基)×HOAc將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH2-5-Py(2-CN)(0.200g，0.444mmol；參見(jiàn)以上步驟(viii))、乙酸銨(1.00g，0.0130mol)和N-乙?；腚装彼?2.00g，0.0122mol)的10mL甲醇在50℃加熱2天。用制備型RPLC(CH3CN∶0.1M NH4OAc(30∶79))處理并將合適部分用(CH3CN∶0.1M NH4OAc(5∶95-40∶60)再次處理，用水和乙腈冷凍干燥后獲得60mg(26％)標(biāo)題化合物的純凈醋酸鹽。純度100％。
1H NMR(500MHz，D2O，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ8.68(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.62(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.05-7.9(m，2H)，7.33(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.27(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.22(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.17(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.01(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.84(t，1H)，5.32(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.20(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.13(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.88(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.65-4.55(m，2H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.45-4.35(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體加上1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.31(d，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.2-4.05(m，1H加上1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.80(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.61(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.33(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.24(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，1.93(s，3H)13C-NMR(100MHz；D2O)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ181.6，173.3，172.7，172.6，172.3，162.6，162.3APCI-MS(M+1)＝468/470m/z
實(shí)施例35Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((2-甲氧基脒基)-5-吡啶基) (i)Boc-NH-CH2-[(2-(氨基(羥基亞氨基)甲基))-5-吡啶基]將5-(叔丁氧基羰基氨基甲基)吡啶-2-腈(1.00g，4.29mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例34(iv))溶于10mL乙醇，加入羥胺鹽酸鹽(0.894g，0.0129mol)和三乙胺(1.30g，0.0129mol)。將混合物在室溫下攪拌6天?；旌衔镌谒投燃淄殚g分配。水層用二氯甲烷萃取，合并的有機(jī)相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。產(chǎn)量0.96g(84％)。
1H NMR(400MHz，丙酮-d6)δ9.01(bs，1H)，8.50(bs，1H)，7.87(m，1H)，7.70(m，1H)，6.58(寬峰，1H)，5.70(寬峰，2H)，4.31(d，2H)，141(s，9H)(ii)Boc-Aze-NH-CH2-(2-(脒基)-5-吡啶基)×HOAc本反應(yīng)根據(jù)Judkins等，Synth.Comm.(1998)4351中介紹的方法進(jìn)行。Boc-NH-CH2-[(2-(氨基(羥基亞氨基)甲基))-5-吡啶基](0.910g，3.42mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))、醋酸酐(0.35mL，3.7mmol)和0.35g 10％Pd/C(50％水分)的100mL乙酸懸浮液在5atm壓力下氫化5小時(shí)?；旌衔镉肅elite_過(guò)濾，濃縮。殘余物用水和乙腈冷凍干燥獲得0.97g(92％)小標(biāo)題化合物。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ8.74(s，1H)，8.12(d，1H)，7.98(d，1H)，4.38(s，2H)，1.92(s，3H)，1.46(s，9H)
(iii)Boc-NH-CH2-(2-(氨基(三甲硅烷基乙基亞氨基)甲基)-5-吡啶基)Boc-NH-CH2-(2-(脒基)-5-吡啶基)×HOAc(0.96g，3.1mmol；參見(jiàn)以上步驟(ii))的75mL THF懸浮液中加入碳酸鉀(1.07g，7.7mmol)和Teoc-p-硝基苯基碳酸酯(1.14g，4.02mmol)的15mL水溶液。將混合物攪拌過(guò)夜。加入過(guò)量的甘氨酸和碳酸鉀，反應(yīng)繼續(xù)進(jìn)行2小時(shí)。蒸去THF，剩余物用EtOAc萃取三次。合并的有機(jī)相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。產(chǎn)物可以直接使用無(wú)需再提純。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ9.31(寬峰，1H)，8.52(s，1H)，8.41(d，1H)，8.35(寬峰，1H)，7.74(d，1H)，4.97(寬峰，1H)，4.39(m，2H)，4.26(m，2H)，1.46(s，9H)，1.14(m，2H)，0.07(s，9H)(iv)H2N-CH2-(2-(氨基(三甲硅烷基乙基亞氨基)甲基)-5-吡啶基)×2HCl將Boc-NH-CH2-(2-(氨基(三甲硅烷基乙基亞氨基)甲基)-5-吡啶基)(0.23g，0.58mmol；參見(jiàn)以上步驟(iii))溶于25mL飽和HCl(g)的EtOAc溶液，攪拌30分鐘。蒸去溶劑，產(chǎn)物直接使用無(wú)需再提純。產(chǎn)量0.21g(98％)。
1H NMR(500MHz，D2O)δ8.89(s，1H)，8.25(s，2H)，4.55(m，2H)，4.42(s，2H)，1.20(m，2H)，0.09(s，9H)(v)Boc-Aze-NH-CH2-(2-(氨基(三甲硅烷基乙基亞氨基)甲基)-5-吡啶基)H2N-CH2-(2-(氨基(三甲硅烷基乙基亞氨基)甲基)-5-吡啶基)×2HCl(0.21g，0.57mmol；參見(jiàn)以上步驟(iv))、Boc-Aze-OH(0.127g，0.631mmol)和TBTU(233mg，0.726mmol)的5mL DMF溶液中加入二甲基氨基吡啶(269mg，2.20mmol)。將混合物攪拌過(guò)夜，傾入100mL水中，用EtOAc萃取三次。合并的有機(jī)相用碳酸氫鈉水溶液和水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。粗制產(chǎn)物用硅膠快速色譜法(EtOAc)處理獲得170mg(56％)所需產(chǎn)物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ9.33(寬峰，1H)，8.54(s，1H)，8.41(d，1H)，8.36(寬峰，1H)，7.75(m，1H)，4.72(m，1H)，4.56(m，2H)，4.26(m，2H)，3.93(m，1H)，3.80(m，1H)，2.6-2.4(m，2H)，1.42(s，9H)，1.14(m，2H)，0.07(s，9H)(vi)H-Aze-NH-CH2-(2-(氨基(三甲硅烷基乙基亞氨基)甲基)-5-吡啶基)×2HCl將Boc-Aze-NH-CH2-(2-(氨基(三甲硅烷基乙基亞氨基)甲基)-5-吡啶基)(170mg，0.356mmol；參見(jiàn)以上步驟(v))溶于25mL飽和HCl(g)的EtOAc溶液，攪拌30分鐘。蒸去溶劑，產(chǎn)物直接使用無(wú)需再提純。產(chǎn)量160mg(100％)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ9.00(m，1H)，8.84(m，1H)，8.23(d，2H)，8.10(m，1H)，5.09(m，1H)，4.7-4.6(m，2H)，4.51(m，2H)，4.14(m，1H)，3.97(m，1H)，2.86(m，1H)，2.58(m，1H)，1.22(m，2H)，0.11(s，9H)(vii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-(2-(氨基)(三甲基甲硅烷基乙基亞氨基)甲基)-5-吡啶基)H-Aze-NH-CH2-(2-(氨基(三甲硅烷基乙基亞氨基)-甲基)-5-吡啶基)×2HCl(160mg，0.462mmol；參見(jiàn)以上步驟(vi))、Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(131mg，0.462mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例1(viii))和PyBOP(263mg，0.505mmol)的5mL DMF溶液中加入二異丙基乙胺(0.30mL，1.71mmol)。將混合物攪拌過(guò)夜，傾入100mL水中，用EtOAc萃取三次。合并的有機(jī)相用碳酸氫鈉水溶液和水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。粗制產(chǎn)物用硅膠快速色譜法(EtOAc∶MeOH(95∶5))處理獲得148mg(52％)所需產(chǎn)物。
(viii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-(2-(甲氧基-氨基(三甲硅烷基乙基亞氨基)甲基)-5-吡啶基)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)-C(O)-Aze-NH-CH2-(2-(甲氧基氨基(三甲硅烷基乙基亞氨基)甲基)-5-吡啶基)(148mg，0.242mmol；參見(jiàn)以上步驟(vii))和O-甲基羥胺(202mg，2.42mmol)的10mL乙腈懸浮液在70℃加熱3小時(shí)?；旌衔镌谒虴tOAc間分配。水層用EtOAc萃取兩次，合并的有機(jī)相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。粗制產(chǎn)物用硅膠快速色譜法(EtOAc∶MeOH(95∶5))處理獲得44mg(28％)純產(chǎn)物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.55(m，1H)，8.05(bt，1H)，7.70(m，1H)，7.58(s，1H)，7.56(d，1H)，7.22(m，1H)，7.16(m，1H)，7.03(m，1H)，6.50(t，1H)，4.92(s，1H)，4.89(m，1H)，4.55-4.45(m，2H)，4.38(寬峰，1H)，4.2-4.1(m，3H)，4.00(s，3H)，3.73(m，1H)，2.69(m，1H)，2.44(m，1H)，0.97(m，2H)，0.02(s，9H)(ix)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((2-甲氧基-脒基)-5-吡啶基)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-(2-(甲氧基氨基(三甲基甲硅烷基乙基亞氨基)甲基)-5-吡啶基)(44mg，0.069mmol；參見(jiàn)以上步驟(viii))溶于2mL TFA，讓其反應(yīng)1小時(shí)。蒸去TFA，殘余物在EtOAc和碳酸氫鈉水溶液間分配。水層用EtOAc萃取，合并的有機(jī)相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。產(chǎn)量30mg(88％)。純度＞95％。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.44(m，1H)，8.03(bt，1H)，7.91(m，1H)，7.60(m，1H)，7.19(m，1H)，7.13(m，1H)，7.00(m，1H)，6.52(t，1H)，5.6-5.45(寬峰，2H)，4.90(s，1H)，4.89(m，1H)，4.55-4.4(m，2H)，4.27(寬峰，1H)，4.12(m，1H)，3.92(s，3H)，2.68(m，1H)，2.41(m，1H)
13C-NMR(100MHz；CDCl3)(羰基和/或脒碳)δ173.0，170.9，152.6APCI-MS(M+1)＝498/500m/z實(shí)施例36Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-(Aze-NH-CH2-((5-脒基)-2-嘧啶基) (i)2-氨基-2-亞氨基乙基氨基甲酸酯·AcOH將N-Boc-氨基乙腈(40.2g，257.4mmol)和N-乙?；腚装彼?42.0g，257.4mmol)在60℃溶于甲醇(300mL)，通入氨氣18小時(shí)。真空除去溶劑。在離子交換色譜法(Amberlite IRA-400(AcOH))和用丙酮重結(jié)晶后，獲得28.4g(53％)白色固體小標(biāo)題化合物。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ4.41(t，J＝4.9Hz，1H)，4.01(s，2H)，2.91(d，J＝5.0Hz，2H)，2.01(s，3H)，1.46(s，9H)(ii)1，3-雙(二甲基氨基)-2-氰基三次甲基高氯酸鹽(trimethiniumperchlorate)在0℃，將3-二甲基氨基丙烯腈(25.0g，260.0mmol)的氯仿(75mL)溶液滴加到(氯代亞甲基)二甲基氯化銨(50.0g，390.1mmol)的氯仿(175mL)溶液。將反應(yīng)混合物在0℃再攪拌2小時(shí)，然后讓其升至室溫過(guò)夜，隨后回流加熱8小時(shí)。真空除去溶劑。將殘余物加入到在水(150mL)和乙醇(300mL)中的高氯酸鈉(110g，0.898mmol)混合物。將混合物加熱回流15分鐘，然后冷卻，讓其在冰箱中靜置過(guò)夜。收集沉淀，用乙醇重結(jié)晶獲得23.8g(52％)無(wú)色針狀小標(biāo)題化合物。
mp140-141℃1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.24(s，2H)，3.59(s，6H)，3.51(s，6H)(iii)Boc-NH-CH2-(5-氰基)-2-嘧啶在氮?dú)夥铡?0-75℃下，將2-氨基-2-亞氨基乙基氨基甲酸叔丁酯·AcOH(5.0g，23.8mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))和1，3-雙(二甲基氨基)-2-氰基三次甲基高氯酸鹽(6.0g，23.8mmol；參見(jiàn)以上步驟(ii))的吡啶(300ml)混合物攪拌16小時(shí)，然后加熱回流6小時(shí)?；旌衔锢鋮s至室溫，真空除去溶劑。殘余物用熱的1∶1乙酸乙酯和氯仿混合物萃取，用小二氧化硅墊過(guò)濾，濃縮獲得粗制產(chǎn)物。二氧化硅快速色譜法(洗提氯仿)處理獲得4.0g(71％)無(wú)色油狀標(biāo)題化合物，它在靜置時(shí)固化。
mp86-87℃Rf＝0.77(二氧化硅，3∶2乙酸乙酯/氯仿)1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ9.25(s，2H)，7.39(bt，1H)，4.39(d，J＝6Hz，2H)，1.38(s，9H)。
13C NMR(750MHz，DMSO-d6)δ170.4，160.3，155.8，115.2，106.9，80.0，46.3，28.1APCI-MS(M+1)＝235 m/z(iv)Boc-Aze-NH-CH2-((5-氰基)-2-嘧啶基)將Boc-NH-CH2-(5-氰基)-2-嘧啶(1.14g，4.87mmol；參見(jiàn)以上步驟(iii))溶于50mL飽和HCl(g)的EtOAc溶液，讓其反應(yīng)1小時(shí)，濃縮。將殘余物溶于20mL DMF，在冰浴中冷卻。加入二異丙基乙胺(3.5mL，0.020mol)、Boc-Aze-OH(1.08g，5.37mmol)和HATU(2.80g，5.38mmol)，反應(yīng)混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。蒸去溶劑，將產(chǎn)物用制備型RPLC(CH3CN∶0.1M NH4OAc(40∶60))提純。蒸去乙腈，水層用EtOAc萃取三次。合并的有機(jī)層用硫酸鎂干燥，蒸發(fā)。產(chǎn)量1.12g(72％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.95(s，2H)，4.82(d，2H)，4.74(m，1H)，3.95(m，1H)，3.84(m，1H)，2.6-2.4(m，2H)，1.47(s，9H)(v)Boc-Aze-NH-CH2-((5-脒基)-2-嘧啶基)×HOAc在氮?dú)夥障拢瑢oc-Aze-NH-CH2-((5-氰基)-2-嘧啶基)(0.83g，2.6mmol；參見(jiàn)以上步驟(iv))、N-乙?；腚装彼?0.43g，2.6mmol)和乙酸銨(0.60g，7.8mmol)的10mL甲醇溶液在60℃加熱2天。蒸去溶劑，粗制產(chǎn)物用制備型RPLC(梯度CH3CN∶0.1M NH4OAc(5∶95至100∶0))提純。將需要部分冷凍干燥獲得1.0g(93％)所需產(chǎn)物。
1H NMR(300MHz，D2O，信號(hào)被HDO的信號(hào)屏蔽)δ9.17(s，2H)，4.1-3.9(m，2H)，2.60(m，1H)，2.29(m，1H)，1.93(s，3H)，1.44(s，9H)(vi)Boc-Aze-NH-CH2-[(5-(氨基(三甲硅烷基乙基亞氨基)甲基))-2-嘧啶基]Boc-Aze-NH-CH2-((5-脒基)-2-嘧啶基)×HOAc(0.95g，2.41mmol；參見(jiàn)以上步驟(v))的50ml THF懸浮液中加入Teoc-p-硝基苯基碳酸酯(0.85g，3.0mmol)和碳酸鉀(1.0g，7.2mmol)的10mL水溶液。將混合物攪拌24小時(shí)，濃縮后在水和二氯甲烷間分配。有機(jī)層用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。粗制產(chǎn)物用硅膠快速色譜法(庚烷∶EtOAc(1∶1))處理。產(chǎn)量1.04g(90％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.16(s，2H)，4.80(d，2H)，4.73(m，1H)，4.26(m，2H)，4.0-3.8(m，2H)，2.6-2.4(m，2H)，1.47(s，9H)，1.12(m，2H)，0.07(s，9H)(vii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-[(5-(氨基(三甲硅烷基乙基亞氨基)甲基))-2-嘧啶基]將Boc-Aze-NH-CH2-[(5-(氨基(三甲硅烷基乙基亞氨基)甲基))-2-嘧啶基](0.209g，0.437mmol；參見(jiàn)以上步驟(vi))溶于25mL飽和HCl(g)的EtOAc溶液，讓其反應(yīng)15分鐘。蒸去溶劑，將剩余物溶于4mLDMF。加入Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.100g，0.396mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例1(viii))、PyBOP(0.231g，0.444mmol)和二異丙基乙胺(0.208g，1.61mmol)，將混合物攪拌80分鐘。反應(yīng)混合物傾入100mL水中，用EtOAc萃取三次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。粗制產(chǎn)物用制備型RPLC(CH3CN∶0.1MNH4OAc(1∶1))提純。產(chǎn)量63mg(26％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ9.3(寬峰，1H)，9.03(s，2H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，9.00(s，2H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.25(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.9(寬峰，1H)，7.80(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.2-6.9(m，3H)，6.50(t，1H)，5.14(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.08(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.94(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.80(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.7-4.4(m，2H)，4.3-3.9(m，3H)，3.74(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.7-2.1(m，2H)，1.03(m，2H)，0.01(s，9H)(viii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((5-脒基)-2-嘧啶基)×TFA將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-[(5-(氨基(三甲硅烷基乙基亞氨基)甲基))-2-嘧啶基](21mg，0.034mmol；參見(jiàn)以上步驟(vii))溶于0.5mL二氯甲烷，在冰浴中冷卻。加入TFA(2mL)，將混合物攪拌60分鐘，然后濃縮。將產(chǎn)物用水和乙腈冷凍干燥。產(chǎn)量20mg(100％)。純度100％。
1H NMR(400MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物，信號(hào)被HDO的信號(hào)屏蔽)δ9.08(s，2H)，7.4-7.1(m，3H)，6.88(t，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.85(t，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.30(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.22(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.20(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.73(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.34(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.21(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.15-3.95(m，2H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.73(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.57(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.45-2.25(m，2H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ173.0，172.6，172.1，171.0，163.4。
APCI-MS(M+1)＝469/471 m/z實(shí)施例37Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((5-甲氧基脒基)-2-嘧啶基) (i)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-[(5-(甲氧基氨基-(三甲硅烷基乙基亞氨基)甲基))-2-嘧啶基]將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-[(5-(氨基(三甲硅烷基乙基亞氨基)甲基))-2-嘧啶基](40mg，0.065mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例36(vii))和O-甲基羥胺(33mg，0.40mmol)的3mL乙腈懸浮液在70℃加熱3小時(shí)?；旌衔镌谒虴tOAc間分配。水層用EtOAc萃取兩次，合并的有機(jī)相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。產(chǎn)量33mg(79％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ8.76(s 2H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.70(s，2H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.18(m，1H)，7.62(s，1H)，7.4-6.9(m，4H)，6.50(bt，1H)，5.3-4.5(m，4H)，4.2-4.05(m，3H)，3.96(s，3H)，3.68(m，1H)，2.8-2.2(m，2H)，2.1(寬峰，1H)，0.96(m，2H)，0.01(s，9H)(ii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((5-甲氧基-脒基)-2-嘧啶基)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-[(5-(甲氧基氨基-(三甲硅烷基乙基亞氨基)甲基))-2-嘧啶基](33mg，0.052mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))溶于0.5ml二氯甲烷，在冰浴中冷卻。加入TFA(2mL)，將混合物攪拌2小時(shí)，然后濃縮。將產(chǎn)物用水和乙腈冷凍干燥。產(chǎn)量31mg(81％)。純度100％。
1H NMR(400MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的混合物，信號(hào)被HDO的信號(hào)屏蔽)δ8.96(s，2H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，8.94(s，2H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.4-7.3(m，1H)，7.2-7.1(m，2H，6.88(t，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.85(t，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.29(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.24(s，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.20(s，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.75-4.55(m，2H)，4.33(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.19(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.15-3.95(m，2H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.88(s，3H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.86(s，3H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.72(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.56(m，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.45-2.25(m，2H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ172.8，172.6，172.1，171.8，167.8，167.7，155.1，152.3，152.1APCI-MS(M+1)＝499/501 m/z
實(shí)施例38Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(3-F) (i)2-氟-4-乙烯苯甲腈在氮?dú)夥障拢瑢?-溴-2-氟苯甲腈(4.92g，0.0246mol)、乙烯基三丁基錫(0.78g，0.246mol)和四三苯基膦(0.67g，0.58mmol)的250mL甲苯溶液回流過(guò)夜。蒸去溶劑，殘余物用硅膠快速色譜法(庚烷∶二氯甲烷(1∶1)至純二氯甲烷)處理。使獲得的無(wú)色油狀物結(jié)晶。產(chǎn)量3.0g(82％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.56(m，1H)，7.3-7.2(m，2H)，6.69(m，1H)，5.89(d，1H)，5.51(d，1H)(ii)2-氟-4-羥基甲基苯甲腈向2-氟-4-乙烯苯甲腈(1.3g，8.8mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))的40mL二氯甲烷和5mL甲醇冷溶液(-78℃)中通入臭氧(50L/h，29g/m3)30分鐘。隨后通入氬氣以除去過(guò)量臭氧。加入硼氫化鈉(0.67g，0.018mol)，除去冷卻浴。攪拌混合物，讓其反應(yīng)1小時(shí)。蒸發(fā)混合物，加入2M HCl。將混合物用乙醚萃取兩次，合并的乙醚部分用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。使粗制產(chǎn)物結(jié)晶。產(chǎn)量1.1g(81％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.59(m，1H)，7.3-7.2(m，2H)，4.79(d，2H)，2.26(t，1H)
(iii)甲磺酸4-氰基-3-氟芐基酯將2-氟-4-羥基甲基苯甲腈(1.3g，8.6mmol；參見(jiàn)以上步驟(ii))溶于50mL CH2Cl2，用冰浴冷卻。加入三乙胺(0.87g，8.6mmol)和甲磺酰氯(0.99g，8.7mmol)。攪拌1.5小時(shí)后，反應(yīng)混合物用1M HCl洗滌。有機(jī)相用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。產(chǎn)物可以無(wú)需提純直接使用。獲得無(wú)色油狀物1.8g(92％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.66(m，1H)，7.35-7.3(m，2H)，5.26(s，2H)，3.07(s，3H)(iv)4-疊氮基甲基-2-氟苯甲腈甲磺酸4-氰基-3-氟芐基酯(1.8g，7.9mmol；參見(jiàn)以上步驟(iii))的冰冷溶液中加入疊氮化鈉(0.80g，0.012mol)。將混合物攪拌過(guò)夜，然后傾入200mL水中，用乙醚萃取三次。合并的乙醚相用水洗滌5次，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。粗制無(wú)色油狀物可以直接使用無(wú)需再提純。產(chǎn)量1.2g(87％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.64(m，1H)，7.25-7.18(m，2H)，4.47(s，2H)(v)4-氨基甲基-2-氟苯甲腈向攪拌下的二氯化錫二水合物(0.45g，2.4mmol)的20mL乙腈懸浮液中加入苯硫酚(1.07g，9.7mmol)和三乙胺(0.726g，7.17mmol)。其后，加入4-疊氮基甲基-2-氟苯甲腈(0.279g，1.58mmol；參見(jiàn)以上步驟(iv))的幾毫升乙腈溶液。1.5小時(shí)后，疊氮化物耗盡，蒸去溶劑。將殘余物溶于二氯甲烷，用2M NaOH洗滌三次。有機(jī)相用1M HCl萃取兩次。合并的酸性水相用二氯甲烷洗滌，然后用2M NaOH堿化，用二氯甲烷萃取三次。有機(jī)相用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)獲得0.172g(72％)所需的小標(biāo)題化合物，它可以無(wú)需提純直接使用。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.58(m，1H)，7.3-7.2(m，2H)，3.98(s，2H)，1.55-1.35(寬峰，2H)(vi)Boc-Aze-NHCH2-Ph(3-F，4-CN)Boc-Aze-OH(0.194g，0.96mmol)的5mL DMF冰冷溶液中加入TBTU(0.50g，9.6mmol)。30分鐘后加入一種包括4-氨基甲基-2-氟苯甲腈(0.17g，0.81mmol；參見(jiàn)以上步驟(v))和二異丙基乙胺(0.326g，2.53mmol)的7mL DMF溶液。所得溶液在室溫下攪拌過(guò)夜。蒸去溶劑，將產(chǎn)物用制備型RPLC(CH3CN∶0.1M NH4OAc(50∶50))提純。冷凍干燥獲得0.237g(74％)所需的小標(biāo)題化合物。
1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.70(m，1H)，7.35-7.25(m，2H)，4.65-4.35(m，3H)，4.0-3.85(m，2H)，2.51(m，1H)，2.19(m，1H)，1.40(s，9H)(vii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NHCH2-Ph(3-F，4-CN)將Boc-Aze-NHCH2-Ph(3-F，4-CN)(0.118g，0.354mmol；得自步驟(vi))溶于30mL飽和HCl(g)的EtOAc溶液。將反應(yīng)物攪拌20分鐘，蒸發(fā)。將所得二鹽酸鹽和HATU(0.152g，0.400mmol)溶于5mLDMF。將該溶液加入Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.101g，0.400mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例1(viii))的5mL DMF冰冷溶液。反應(yīng)物在室溫下攪拌過(guò)夜。蒸去溶劑，將產(chǎn)物用制備型RPLC(CH3CN∶0.1MNH4OAc(50∶50))提純。冷凍干燥獲得0.130g(77％)所需的小標(biāo)題化合物。
1H NMR(500MHz，CD3OD旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ7.7-7.6(m，1H)，7.35-7.1(m，5H)，6.88(t，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.86(t，1H，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.25-5.1(m，1H加上下一質(zhì)子的次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.80(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.6-4.4(m，2H)，4.36(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.18(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.07(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.98(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.70(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.53(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.29(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.16(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)(viii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(3-F)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NHCH2-Ph(3-F，4-CN)(0.130g，0.278mmol；參見(jiàn)以上步驟(viii))溶于80ml飽和HCl(g)的乙醇溶液。將混合物在室溫反應(yīng)過(guò)夜。蒸去溶劑，將殘余物重新溶于100mL飽和NH3(g)的乙醇溶液。反應(yīng)在室溫下緩慢進(jìn)行2天。溫度升至50℃，反應(yīng)再繼續(xù)進(jìn)行3天。初始原料耗盡，蒸去溶劑。將產(chǎn)物用制備型RPLC提純，冷凍干燥獲得17mg(13％)標(biāo)題化合物的HOAc鹽。
1H NMR(600MHz，CD3OD旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ7.65-7.6(m，1H)，7.4-7.3(m，3H)，7.25-7.1(m，2H)，7.15-6.7(m，1H)，5.25-5.1(m，1H加上下一質(zhì)子的次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.8(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體部分被CD3OH屏蔽)，4.6-3.95(m，4H)，2.69(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.56(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.28(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.14(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，1.90(s，3H)13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ180.6，173.4，173.1，172.9，164.5，162.3，159.8APCI-MS(M+1)＝485/487 m/z實(shí)施例39Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-diF)
(i)2，6-二氟-4[(甲基亞磺酰基)(甲硫基)甲基]苯甲腈在氬氣氛下，將(甲基亞磺?；?(甲硫基)甲烷(7.26g，0.0584mol)溶于100mL無(wú)水THF，冷卻至-78℃。在攪拌下滴加丁基鋰的己烷溶液(16mL 1.6M，0.0256mol)。將混合物攪拌15分鐘。同時(shí)，在氬氣氛下，將3，4，5-三氟苯甲腈(4.0g，0.025mmol)的100mL無(wú)水THF溶液冷卻至-78℃，在35分鐘內(nèi)將前一溶液用套管加入后一溶液。30分鐘后，除去冷卻浴，當(dāng)反應(yīng)物達(dá)到室溫后，將其傾入400mL水中。蒸去THF，剩余的水層用乙醚萃取三次。合并的乙醚相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。產(chǎn)量2.0g(30％)。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.4-7.25(m，2H)，5.01(s，1H，非對(duì)映體(diasteromer))，4.91(s，1H，非對(duì)映體)，2.88(s，3H，非對(duì)映體)，2.52(s，3H，非對(duì)映體)，2.49(s，3H，非對(duì)映體)，2.34(s，3H，非對(duì)映體)，1.72(寬峰，1H)(ii)2，6-二氟-4-甲酰基苯甲腈將2，6-二氟-4[(甲基亞磺酰基)(甲硫基)甲基]苯甲腈(2.17g，8.32mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))溶于90mL THF，加入3.5mL濃硫酸。將混合物置于室溫3天，隨后傾入450mL水中。用EtOAc萃取三次，接著合并的乙醚相用碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌兩次，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。產(chǎn)量1.36g(98％)。甲酰基的位置由13C NMR確定。在162.7ppm，氟化碳原子的信號(hào)具有預(yù)期偶合形式，分別為約260Hz和6.3Hz的偶合常數(shù)，對(duì)應(yīng)于氟原子的同碳偶合和間位偶合。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ10.35(s，1H)，7.33(m，2H)(iii)2，6-二氟-4-羥基甲基苯甲腈將2，6-氟-4-甲?；郊纂?1.36g，8.13mmol；參見(jiàn)以上步驟(ii))溶于25mL甲醇，用冰浴冷卻。在攪拌下分批加入硼氫化鈉(0.307g，8.12mmol)，將反應(yīng)物放置65分鐘。蒸去溶劑，殘余物在乙醚和碳酸氫鈉水溶液間分配。乙醚層再用碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。粗制產(chǎn)物很快結(jié)晶，可以直接使用無(wú)需再提純。產(chǎn)量1.24g(90％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.24(m，2H)，4.81(s，2H)，2.10(寬峰，1H)(iv)甲磺酸4-氰基-2，6-二氟芐基酯向攪拌下的2，6-二氟-4-羥基甲基苯甲腈(1.24g，7.32mmol；參見(jiàn)以上步驟(iii))和甲磺酰氯(0.93g，8.1mmol)的60mL二氯甲烷冰冷溶液加入三乙胺(0.81g，8.1mmol)。在0℃3小時(shí)后，將混合物用1M HCl洗滌兩次，用水洗滌一次，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。產(chǎn)物可以直接使用無(wú)需再提純。產(chǎn)量1.61g(89％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.29(m，2H)，5.33(s，2H)，3.07(s，3H)(v)4-疊氮基甲基-2，6-二氟苯甲腈將甲磺酸4-氰基-2，6-氟芐基酯(1.61g，6.51mmol；參見(jiàn)以上步驟(iv))和疊氮化鈉(0.72g，0.0111mol)在10mL水和20mL DMF中的混合物在室溫下攪拌過(guò)夜。接著將其傾入200mL水中，用乙醚萃取三次。合并的乙醚相用水洗滌5次，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。蒸發(fā)少量樣品用于NMR，產(chǎn)物結(jié)晶。小心蒸發(fā)其余部分，但不要完全蒸干。基于NMR和分析型HPLC，認(rèn)為產(chǎn)量(理論產(chǎn)量1.26g)幾乎為定量的。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.29(m，2H)，4.46(s，2H)(vi)4-氨基甲基-2，6-二氟苯甲腈本反應(yīng)根據(jù)J.Chem.Res.(M)(1992)3128介紹的方法進(jìn)行。520mg 10％Pd/C(50％水分)的20mL水懸浮液中加入硼氫化鈉(0.834g，0.0221mol)的20mL水溶液。結(jié)果產(chǎn)生一些氣體。將4-疊氮基甲基-2，6-二氟苯甲腈(1.26g，6.49mmol；參見(jiàn)以上步驟(v))溶于50mL THF，在15分鐘內(nèi)，將其加入冰浴冷卻的以上含水混合物。將混合物攪拌4小時(shí)，隨后加入20mL 2M HCl，混合物用Celite過(guò)濾。Celite再用水沖洗，合并的水相用EtOAc洗滌，隨后用2M NaOH堿化。接著用二氯甲烷萃取三次，合并的有機(jī)相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。產(chǎn)量0.87g(80％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.20(m，2H)，3.96(s，2H)，1.51(寬峰，2H)(vii)2，6-二氟-4-叔丁氧基羰基氨基甲基苯甲腈將4-氨基甲基-2，6-二氟苯甲腈溶液(0.876g，5.21mmol；參見(jiàn)以上步驟(vi))溶于50mL THF，加入二碳酸二叔丁酯(1.14g，5.22mmol)的10mL THF溶液。將混合物攪拌3.5小時(shí)。蒸去THF，殘余物在水和EtOAc間分配。有機(jī)層用0.5M HCl和水洗滌三次，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。產(chǎn)物可以直接使用無(wú)需再提純。產(chǎn)量1.38g(99％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.21(m，2H)，4.95(寬峰，1H)，4.43(寬峰，2H)，1.52(s，9H)(viii)Boc-Pab(2，6-diF)(OH)將2，6-二氟-4-叔丁氧基羰基氨基甲基苯甲腈(1.38g，5.16mmol；參見(jiàn)以上步驟(vii))、羥胺鹽酸鹽(1.08g，0.0155mol)和三乙胺(1.57g，0.0155mol)的20mL乙醇混合物在室溫下攪拌36小時(shí)。蒸去溶劑，殘余物在水和二氯甲烷間分配。有機(jī)層用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。產(chǎn)物可以直接使用無(wú)需再提純。產(chǎn)量1.43g(92％)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.14(m，2H)，4.97(寬峰，1H)，4.84(寬峰，2H)，4.40(寬峰，2H)，1.43(s，9H)(ix)Boc-Pab(2，6-diF)×HOAc本反應(yīng)根據(jù)Judkins等，Synth.Comm.(1998)4351介紹的方法進(jìn)行。Boc-Pab(2，6-diF)(OH)(1.32g，4.37mmol；參見(jiàn)以上步驟(viii))，醋酸酐(0.477g，4.68mmol)和442mg 10％Pd/C(50％水分)的100mL乙酸溶液在5atm壓力下氫化3.5小時(shí)。將混合物用Celite過(guò)濾，用乙醇沖洗，蒸發(fā)。殘余物用乙腈、水以及幾滴乙醇冷凍干燥。小標(biāo)題產(chǎn)物可以直接使用無(wú)需再提純。產(chǎn)量0.1.49g(99％)。
1H NMR(400MHz，CD3OD)δ7.45(m，2H)，4.34(s，2H)，1.90(s，3H)，1.40(s，9H)(x)Boc-Pab(2，6-diF)(Teoc)Boc-Pab(2，6-diF)×HOAc(1.56g，5.49mmol；參見(jiàn)以上步驟(ix))的100mL THF和1mL水溶液中加入2-(三甲硅烷基)乙基對(duì)硝基苯基碳酸酯(1.67g，5.89mmol)。在5分鐘內(nèi)滴加碳酸鉀(1.57g，0.0114mol)的20mL水溶液。將混合物攪拌過(guò)夜。蒸去THF，殘余物在水和二氯甲烷間分配。水層用二氯甲烷萃取，合并的有機(jī)相用碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。硅膠快速色譜法(庚烷/EtOAc＝2/1)處理獲得1.71g(73％)純化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.43(m，2H)，4.97(寬峰，1H)，4.41(寬峰，2H)，4.24(m，2H)，1.41(s，9H)，1.11(m，2H)，0.06(s，9H)(xi)Boc-Aze-Pab(2，6-diF)(Teoc)將Boc-Pab(2，6-diF)(Teoc)(1.009g，2.35mmol；參見(jiàn)以上步驟(x))溶于50mL飽和HCl(g)的EtOAc溶液。將混合物放置10分鐘，蒸發(fā)后溶于18mL DMF，然后用冰浴冷卻。加入Boc-Aze-OH(0.450g，2.24mmol)、PyBOP(1.24g，2.35mmol)，最后加入二異丙基乙胺(1.158g，8.96mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)，然后傾入350mL水中，用EtOAc萃取三次。合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。硅膠快速色譜法(庚烷∶EtOAc(1∶3))處理獲得1.097g(96％)所需化合物。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.46(m，2H)，4.65-4.5(m，3H)，4.23(m，2H)，3.87(m，1H)，3.74(m，1H)，2.45-2.3(m，2H)，1.40(s，9H)，1.10(m，2H)，0.05(s，9H)(xii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-diF)(Teoc)將Boc-Aze-Pab(2，6-diF)(Teoc)(0.256g，0.500mmol；參見(jiàn)以上步驟(xi))溶于20mL飽和HCl(g)的EtOAc溶液。將混合物放置10分鐘，蒸發(fā)后溶于5mL DMF。加入Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.120g，0.475mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例1(viii))、PyBOP(0.263g，0.498mmol)，最后加入二異丙基乙胺(0.245g，1.89mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí)，然后傾入350mL水中，用EtOAc萃取三次。合并的有機(jī)相用鹽水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。硅膠快速色譜法(EtOAc)處理獲得0.184g(60％)所需的小標(biāo)題化合物。
1H NMR(400MHz，CD3OD，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ7.55-7.45(m，2H)，7.32(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.27(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.2-7.1(m，2H)，6.90(t，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.86(t，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.15(s，LH，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.12(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.06(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.72(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.6-4.45(m，2H)，4.30(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.24(m，2H)，4.13(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.04(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.95(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.62(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.48(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.22(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.10(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，1.07(m，2H)，0.07(m，9H)(xiii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-diF)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-diF)(Teoc)(81mg，0.127mmol；參見(jiàn)以上步驟(xii))溶于0.5mL二氯甲烷，用冰浴冷卻。加入TFA(3mL)，將反應(yīng)物放置75分鐘。蒸去TFA，殘余物用水和乙腈冷凍干燥。粗制產(chǎn)物用制備型RPLC(CH3CN∶0.1MNH4OAc(35∶65))提純獲得39mg(55％)標(biāo)題化合物的HOAc鹽，純度99％。
1H NMR(400MHz，CD3OD旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ7.5-7.4(m，2H)，7.32(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.28(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.2-7.1(m，3H)6.90(t，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.86(t，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.15(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.14(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.07(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.72(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.65-4.45(m，2H)，4.30(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.16(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.03(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.95(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.63(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.48(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.21(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.07(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，1.89(s，3H)13C-NMR(75 MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ171.9，171.2，165.0，162.8，160.4APCI-MS(M+1)＝503/505 m/z。
實(shí)施例40Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pah(2，6-diF)(OMe) (i)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-diF)(OMe，Teoc)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-diF)(Teoc)(64mg，0.099mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例39(xii))和O-甲基羥胺鹽酸鹽(50mg，0.60mmol)的4mL乙腈混合物在70℃加熱3小時(shí)。蒸去溶劑，殘余物在水和EtOAc間分配。水層用EtOAc萃取兩次，合并的有機(jī)相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。產(chǎn)物可以直接使用無(wú)需再提純。產(chǎn)量58mg(87％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.90(bt，1H)，7.46(m，1H)，7.25-6.95(m，5H)，6.51，t，1H)，4.88(s，1H)，4.83(m，1H)，4.6-4.5(m，2H)，4.4-3.9(m，4H)，3.95(s，3H)，3.63(m，1H)，2.67(m，1H)，2.38(m，1H)，1.87(寬峰，1H)，0.98(m，2H)，0.01，s，9H)(ii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-diF)(OMe)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-diF)(OMe，Teoc)(58mg，0.086mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))溶于3mL TFA，用冰浴冷卻，讓其反應(yīng)2小時(shí)。蒸去TFA，將殘余物溶于EtOAc。有機(jī)層用碳酸鈉水溶液和水洗滌兩次，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。殘余物用水和乙腈冷凍干燥獲得42mg(92％)標(biāo)題化合物。純度94％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.95(bt，1H)，7.2-7.1(m，4H)，6.99(m，1H)，6.52(t，1H)，4.88(s，1H)，4.85-4.75(m，3H)，4.6-4.45(m，2H)，4.29(寬峰，1H)，4.09(m，1H)，3.89(s，3H)，3.69(m，1H)，2.64(m，1H)，2.38(m，1H)，1.85(寬峰，1H)13C-NMR(100MHz；CDCl3)(羰基和/或脒碳)δ172.1，169.8，151.9APCI-MS(M+1)＝533/535 m/z實(shí)施例41Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，5-diF)
(i)2，5-二氟-4[(甲基亞磺酰基)(甲硫基)甲基]苯甲腈在氬氣氛下，將(甲基亞磺?；?(甲硫基)甲烷(3.16g，0.0255mol)溶于50mL無(wú)水THF，然后冷卻至-78℃。在攪拌下滴加丁基鋰的己烷溶液(16mL 1.6M，0.0256mol)。將混合物攪拌15分鐘。其間，在氬氣氛下將2，4，5-三氟苯甲腈(2.0g；0.013mol)的50mL無(wú)水THF溶液冷卻至-78℃，在3-5分鐘內(nèi)將前一溶液用套管加入后一溶液。30分鐘后，除去冷卻浴，當(dāng)反應(yīng)物達(dá)到室溫后，將其傾入200mL水中。蒸去THF，剩余的水層用乙醚萃取三次。合并的乙醚相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。粗制產(chǎn)物開(kāi)始結(jié)晶，它也可以直接在下一步使用。產(chǎn)量2.8g(84％)。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.51-7.44(m，2H，主要非對(duì)映異構(gòu)體)，7.39(dd，1H，次要非對(duì)映異構(gòu)體)，5.00(s，1H，次要非對(duì)映異構(gòu)體)，4.92(s，1H，主要非對(duì)映異構(gòu)體)，2.59(s，3H，次要非對(duì)映異構(gòu)體)，2.56(s，1H，主要非對(duì)映異構(gòu)體)，2.46(s，1H，次要非對(duì)映異構(gòu)體)，2.40(s，1H，主要非對(duì)映異構(gòu)體)(ii)2，5-二氟-4-甲?；郊纂鎸?，5-二氟-4[(甲基亞磺?；?(甲硫基)甲基]苯甲腈(2.8g，0.0107mol；參見(jiàn)以上步驟(i))溶于100mL THF，加入6.5g濃硫酸。將混合物置于室溫6天，隨后傾入500ml水中。接著用乙醚萃取三次，合并的乙醚相用水洗滌幾次，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。粗制產(chǎn)物用硅膠快速色譜法(庚烷∶EtOAc(8∶2))處理。產(chǎn)量1.2g(67％)。用13C NMR確定甲?；恢?。如果甲?；?位則會(huì)出現(xiàn)以下情況，在160.1和158.4的氟化碳的碳信號(hào)分別為雙峰和非四重峰。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ10.36(d，1H)，7.72(dd，1H)，7.54(dd，1H)(iii)2，5-二氟-4-羥基甲基苯甲腈將2，5-二氟-4-甲酰基苯甲腈(3.60g，0.0215mol；參見(jiàn)以上步驟(ii))溶于50mL甲醇，用冰浴冷卻。在攪拌下分批加入硼氫化鈉(0.815g，0.0215mol)，將反應(yīng)物放置45分鐘。加入水(300ml)，然后小心加入2M HCl直到獲得酸性pH。將混合物用乙醚萃取三次，合并的乙醚相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。粗制產(chǎn)物很快結(jié)晶，并可以直接使用無(wú)需再提純。產(chǎn)量3.1g(85％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.45(dd，1H)，7.30(dd，1H)，4.85(s，2H)，2.10(寬峰，1H)(iv)甲磺酸4-氰基-2，5-二氟芐基酯在攪拌下，向2，5-二氟-4-羥基甲基苯甲腈(3.10g，0.0183mol；參見(jiàn)以上步驟(iii))和甲磺酰氯(2.21g，0.0192mol)的60mL二氯甲烷冰冷溶液中加入三乙胺(1.95g，0.0192mol)。在0℃1.5小時(shí)后，混合物用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。產(chǎn)物可以直接使用無(wú)需再提純。產(chǎn)量4.5g(99％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.45-7.35(m，2H)，5.32(s，2H)，3.13(s，3H)(v)4-疊氮基甲基-2，5-二氟苯甲腈在室溫下，將甲磺酸4-氰基-2，5-二氟芐基酯(4.5g，0.0182mol；參見(jiàn)以上步驟(iv))和疊氮化鈉(2.0g，0.031mol)的20mL水和40mLDMF混合物攪拌2小時(shí)。隨后將其傾入300mL水中，用乙醚萃取三次。合并的乙醚相用水洗滌幾次，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。蒸發(fā)少量樣品用于NMR，產(chǎn)物結(jié)晶。小心蒸發(fā)其余部分，但不要完全蒸干?；贜MR和分析型HPLC，認(rèn)為產(chǎn)量(理論3.5g)幾乎為定性。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ.38(dd，1H)，7.32(dd，1H)，4.54(s，2H)(vi)4-氨基甲基-2，5-二氟苯甲腈本反應(yīng)根據(jù)J.Chem.Res.(M)(1992)3128介紹的方法進(jìn)行。300mg10％Pd/C(50％水分)的20mL水懸浮液中加入硼氫化鈉(0.779g，0.0206mol)的20mL水溶液。結(jié)果產(chǎn)生一些氣體。將4-疊氮基甲基-2，5-二氟苯甲腈(1.00g，5.15mmol；得自步驟(v))溶于60mL THF，將其加入到在冰浴冷卻的以上水溶液混合物。將混合物攪拌1.5小時(shí)，然后加入10mL 2M HCl，將混合物用Celite過(guò)濾。Celite再用水沖洗，合并的水相用EtOAc洗滌，隨后用2M NaOH堿化。接著用二氯甲烷萃取三次，合并的有機(jī)相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。產(chǎn)量0.47g(54％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.39(dd，1H)，7.29(dd，1H)，3.99(s，2H)，1.45(寬峰，2H)(vii)2，5-二氟-4-叔丁氧基羰基氨基甲基苯甲腈將4-氨基甲基-2，5-二氟苯甲腈(0.46g，2.7mmol；參見(jiàn)以上步驟(vi))和二碳酸二叔丁酯(0.60g，2.7mmol)的10mL THF溶液攪拌過(guò)夜。蒸去THF，殘余物在水和EtOAc間分配。有機(jī)層用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。產(chǎn)物可以直接使用無(wú)需再提純。產(chǎn)量0.71g(97％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.35-7.2(m，2H)，5.11(寬峰三峰，1H)，4.38(d，2H)，1.45(s，9H)(viii)Boc-Pab(2，5-diF)(OH)在室溫下，將2，5-二氟-4-叔丁氧基羰基氨基甲基苯甲腈(0.70g，2.6mmol；參見(jiàn)以上步驟(vii))、羥胺鹽酸鹽(0.54g，7.8mmol)和三乙胺(0.79g，7.8mmol)的10mL乙醇混合物攪拌6天。然后它在水和二氯甲烷間分配。水層用二氯甲烷萃取，合并的有機(jī)相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。產(chǎn)物可以直接使用無(wú)需再提純。產(chǎn)量0.72g(92％)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.27(dd，1H)，7.12(dd，1H)，4.29(s，2H)，1.47(s，9H)
(ix)Boc-Pab(2，5-diF)×HOAc本反應(yīng)根據(jù)Judkins等，Synth.Comm.(1998)4351介紹的方法進(jìn)行。Boc-Pab(2，5-diF)(OH)(0.70g，2.3mmol；參見(jiàn)以上步驟(viii))，醋酸酐(0.25g，2.4mmol)和230mg of 10％Pd/C(50％水分)的70mL乙酸溶液在5atm壓力下氫化2.5小時(shí)。將混合物用Celite過(guò)濾，蒸發(fā)。殘余物用乙腈和水冷凍干燥。產(chǎn)物可以在下一步直接使用無(wú)需再提純。產(chǎn)量0.80g(100％)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.49(dd，1H)，7.31(dd，1H)，4.33(s，2H)，1.91(s，3H)，1.46(s，9H)(x)Boc-Pab(2，5-diF)(Teoc)Boc-Pab(2，5-diF)×HOAc(0.80g，2.3mmol；參見(jiàn)以上步驟(ix))的50mL THF懸浮液中加入2-(三甲硅烷基)乙基對(duì)硝基苯基碳酸酯(0.85g，3.0mmol)。滴加碳酸鉀(0.80g，5.8mmol)的10mL水溶液。將混合物攪拌過(guò)夜。在溶液中加入甘氨酸(0.100g)和碳酸鉀(0.75g)破壞過(guò)量的Teoc試劑，讓其再反應(yīng)2小時(shí)。蒸去THF，殘余物在水和二氯甲烷間分配。水層用二氯甲烷萃取，合并的有機(jī)相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。硅膠快速色譜法(庚烷∶EtOAc(2∶1))處理獲得0.72g(72％)純化合物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ8.00(dd，1H)，7.15(dd，1H)，4.98(寬峰，1H)，4.36(bd，2H)，4.24(m，2H)，1.45(s，9H)，1.12(m，2H)，0.07(s，9H)(xi)H-Pab(2，5-diF)(Teoc)×2HCl將Boc-Pab(2，5-diF)(Teoc)(0.38g，0.88mmol；參見(jiàn)以上步驟(x))溶于50mL飽和HCl(g)的EtOAc溶液。將混合物放置30分鐘，蒸發(fā)。
1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.75-7.6(m，2H)，4.46(m，2H)，4.3(s，2H)，1.15(m，2H)，0.07(s，9H)
(xii)Boc-Aze-Pab(2，5-diF)(Teoc)在攪拌下的Boc-Aze-OH(0.189g，0.94mmol)、H-Pab(2，5-diF)(Teoc)×2HCl(0.36g，0.89mmol；參見(jiàn)以上步驟(xi))和PyBOP(0.54g，1.03mmol)的5mL DMF溶液中加入二異丙基乙胺(0.49g，3.8mmol)，讓混合物反應(yīng)過(guò)夜。然后將其傾入碳酸氫鈉水溶液中，用EtOAc萃取三次。合并的有機(jī)相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。硅膠快速色譜法(庚烷∶EtOAc(3∶7))處理獲得足夠純度的化合物。產(chǎn)量0.25g(48％)。
1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.98(dd，1H)，7.13(dd，1H)，4.69(m，1H)，4.53(m，2H)，4.22(m，2H)，3.92(m，1H)，3.79(m，1H)，2.55-2.35(m，2H)，1.44(s，9H)，1.11(m，2H)，0.06(s，9H)(xiii)H-Aze-Pab(2，5-diF)(Teoc)×2HCl將Boc-Aze-Pab(2，5-diF)(Teoc)(0.25g，0.49mmol；參見(jiàn)以上步驟(xii))溶于50mL飽和HCl(g)的EtOAc溶液。將混合物放置30分鐘，蒸發(fā)。產(chǎn)物直接用于下一步驟無(wú)需再提純。產(chǎn)量0.23g(97％)。
1H NMR(400 MHz，CD3OD)δ7.59(dd，1H)，7.47(dd，1H)，05.14(m，1H)，4.54(m，2H)，448(m，2H)，4.15(m，1H)，3.96(m，1H)，2.87(m，1H)，2.56(m，1H)，1.17(m，2H)，0.05(s，9H)(xiv)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，5-diF)(Teoc)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)OH(0.12g，0.47mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例1(viii))、H-Aze-Pab(2，5-diF)(Teoc)×2HCl(0.23g，0.47mmol；參見(jiàn)以上步驟(xiii))和PyBOP(0.27g，0.52mmol)的10mL DMF溶液中加入二異丙基乙胺(0.245g，1.90mmol)，將混合物攪拌過(guò)夜。將其傾入水中，用EtOAc萃取三次。合并的有機(jī)相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。硅膠快速色譜法(EtOAc)處理獲得100mg純凈部分和30mg 90％純凈部分?？偖a(chǎn)量0.13g(41％)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.80(寬峰，1H)，8.05(bt，1H)，7.94(dd，1H)，7.20(m，1H)，7.2-7.1(m，2H)，7.02(m，1H)，6.54(t，1H)，4.93(s，1H)，4.91(m，1H)，4.51(m，2H)，4.28(寬峰，1H)，4.23(m，2H)，4.13(m，1H)，3.74(m，1H)，2.69(m，1H)，2.43(m，1H)，1.73(寬峰，1H)，1.11(m，2H)，1.11(s，9H)(xv)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，5-diF)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，5-diF)(Teoc)(60mg(0.093mmol)的純凈部分，得自步驟(xiv))溶于3mL TFA，置于室溫1小時(shí)。蒸去TFA，殘余物用水和乙腈冷凍干燥獲得55mg(96％)標(biāo)題化合物的TFA鹽，純度＞99％。
1H NMR(500MHz，CD3OD旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ7.55-7.3(m，3H)，7.2-7.1(m，2H)，6.88(t，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.86(t，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.22(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.20(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.13(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.80(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.6-4.45(m，2H)，4.36(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.19(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.07(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.98(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.70(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.54(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.28(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.14(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)13C-NMR(75MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體混合物)δ173.0，172.6，172.1，172.0，162.4APCI-MS(M+1)＝503/505 m/z。
實(shí)施例42Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，5-diF)(OMe) (i)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze Pab(2，5-diF)(OMe，Teoc)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，5-diF)(Teoc)(40mg，0.062mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例41(xiv))和O-甲基羥胺鹽酸鹽(58mg，0.70mmol)的5mL乙腈混合物在70℃加熱2小時(shí)。蒸去溶劑，殘余物在水和EtOAc間分配。水層用EtOAc萃取，合并的有機(jī)相用水洗滌，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)。產(chǎn)物可以直接使用無(wú)需再提純。產(chǎn)量35mg(84％)。
1H NMR(600MHz，CDCl3)δ7.99(bt，1H)，7.72(s，1H)，7.20(m，1H)7.15-7.1(m，1H)，7.07(dd，1H)，7.01(m，1H)，6.53(t，1H)，4.90(s，1H)，4.88(m，1H)，4.48(m，2H)，4.2-4.1(m，3H)，3.95(s，3H)，3.67(m，1H)，2.68(m，1H)，241(m，1H)，0.97(m，2H)，0.07(s，9H)(ii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，5-diF)(OMe)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，5-diF)(OMe，Teoc)(35mg，0.052mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))溶于3mL TFA，讓其反應(yīng)30分鐘。蒸去TFA，殘余物用水和乙腈冷凍干燥獲得29mg(99％)標(biāo)題化合物。純度97％。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.01(bt，1H)，7.45(dd，1H)，7.20(m，1H)，7.15(m，1H)，7.09(dd，1H)，7.02(m，1H)，6.54(t，1H)，5.2-5.0(m，2H)，4.95-4.85(m，2H)，4.6-4.4(m，2H)，4.25(寬峰，1H)，4.13(m，1H)，3.90(s，3H)，3.71(m，1H)，2.69(m，1H)，2.43(m，1H)13C-NMR(75MHz；CDCl3)(羰基和/或脒碳)δ173.0，170.9，152.6APCI-MS(M+1)＝533/535 m/z。
實(shí)施例43Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt)(i)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt，Teoc)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(55mg，0.090mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例1(ix))和O-乙基羥胺鹽酸鹽(53mg，0.54mmol)溶于4mL THF。將混合物在60℃攪拌5小時(shí)。蒸去溶劑。殘余物用硅膠色譜法(洗提二氯甲烷∶甲醇(95∶5))處理獲得55mg(93％)小標(biāo)題化合物。
1H NMR(400MHz；CDCl3)δ7.84(bt，1H)，7.59(bs，1H)，7.47(bd，1H)，7.29(bd，1H)，7.21(m，1H)，7.14(m，1H)，7.02(m，1H)，6.53(t，1H)，4.90(s，1H)，4.86(m，1H)，4.55-4.4(m，2H)，4.25-4.1(m，5H)，3.69(m，1H)，2.66(m，1H)，2.41(m，1H)，1.33(t，3H)，0.98(m，2H)，0.02(s，9H)(ii)Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt，Teoc)(55mg，0.084mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))的0.5mL二氯甲烷冰冷溶液中加入3mL TFA。將混合物攪拌(冰浴)160分鐘。產(chǎn)物用制備型HPLC提純。合并需要部分，冷凍干燥(2×)獲得20mg(47％)標(biāo)題化合物。
1H-NMR(400MHz；CD3OD)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ7.59(bd，2H)，7.35(m，1H)，7.32(bd，2H)，7.25-7.1(m，2H)，6.89(t，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.86(t，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.18(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.18(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.11(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.77(m，1H)，4.5-4.3(m，3H)，4.2-3.9(m，3H)，2.67(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.52(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.28(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.15(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，1.28(t，3H)13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ172.4，171.9，171.4，153.8，152.3MS(m/z)509(M-1)-，511(M+1)+實(shí)施例44Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr)(i)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R))CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr，Teoc)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(53mg，0.087mmol；參見(jiàn)實(shí)施例1(ix))和O-正丙基羥胺鹽酸鹽58mg(0.52mmol)溶于4mL THF。將混合物在60℃攪拌5小時(shí)。蒸去溶劑。殘余物用硅膠色譜法(洗提二氯甲烷∶甲醇(95∶5))處理獲得51mg(88％)小標(biāo)題化合物。
1H-NMR(400MHz；CDCl3)δ7.84(m，1H)，7.59(bs，1H)，7.47(bd，2H)，7.28(bd，2H)，7.21(m，1H)，7.14(m，1H)，7.02(m，1H)，6.53(t，1H)，4.90(s，1H)，4.85(m，1H)，4.55-44(m，2H)，4.2-4.05(m，5H)，3.69(m，1H)，2.65(m，1H)，2.41(m，1H)，1.74(m，2H)，1.05-0.95(m，5H)，0.03(s，9H)(ii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr，Teoc)(51mg，0.078mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))的0.5mL二氯甲烷冰冷溶液中加入3mL TFA。將混合物攪拌(冰浴)110分鐘。產(chǎn)物用制備型HPLC提純。蒸發(fā)需要部分，冷凍干燥獲得20mg(47％)標(biāo)題化合物。
1H-NMR(500MHz；CD3OD)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ7.61(bd，2H)，7.38(m，1H)，7.35(bd，2H)，7.22(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.18(m，1H)，7.15(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.92(t，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.89(t，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.20(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.20(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.80(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.5-4.4(m，2H，包括對(duì)應(yīng)于在4.37的主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體的次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.37(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.18(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.09(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，3.99(m，2H)，2.70(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.54(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.30(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.18(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，1.73(m，2H)，1.01(t，3H)13C-NMR(125MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ1714，153.8，152.3MS(m/z)523(M-1)-，525(M+1)+實(shí)施例45Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O-)-Aze-Pab(OiPr)(i)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr，Teoc)將Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Teoc)(50mg，0.082mmol；參見(jiàn)以上實(shí)施例1(ix))和O-異丙基羥胺鹽酸鹽55mg(0.49mmol)溶于4mL THF。將混合物在60℃攪拌5小時(shí)。蒸去溶劑。殘余物用硅膠色譜法(洗提二氯甲烷∶甲醇(95∶5))處理獲得46mg(84％)小標(biāo)題化合物。
1H-NMR(400MHz；CDCl3)δ7.84(m，1H)，7.57(bs，1H)，748(bd，2H)，7.29(bd，2H)，7.21(m，1H)，7.14(m，1H)，7.02(m，1H)，6.53(t，1H)，4.91(s，1H)，4.87(m，1H)，4.55-4.45(m，2H)，4.42(m，1H)，4.2-4.1(m，3H)，3.69(m，1H)，2.66(m，1H)，2.42(m，1H)，1.30(d，6H)，0.98(m，2H)，0.02(s，9H)(ii)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr)Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr，Teoc)(46mg，0.069mmol；參見(jiàn)以上步驟(i))的0.5mL 二氯甲烷冰冷溶液中加入3mL TFA。將混合物攪拌(冰浴)150分鐘。產(chǎn)物用制備型HPLC提純。蒸發(fā)需要部分，冷凍干燥(2×)，獲得22mg(58％)標(biāo)題化合物。
1H-NMR(400MHz；CD3OD)旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體δ7.59(d，2H)，7.35(m，1H)，7.32(d，2H)，7.19(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，7.15(m，1H)，7.12(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.89(t，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，6.86(t，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.18(s，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.18(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，5.12(s，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.78(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，4.5-3.9(m，5H)，2.67(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.52(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.28(m，1H，主要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，2.15(m，1H，次要旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)，1.26(d，6H)13C-NMR(100MHz；CD3OD)(羰基和/或脒碳，旋轉(zhuǎn)異構(gòu)體)δ171.9，171.4，153.6。
MS(m/z)523(M-1)-，525(M+1)+實(shí)施例46實(shí)施例3、6、9、10、13-15、17、19、21、23、25、27、28、32、34、36、38、39和41的標(biāo)題化合物按照以上試驗(yàn)A進(jìn)行測(cè)試，發(fā)現(xiàn)IC50TT值小于3.5μM。發(fā)現(xiàn)實(shí)施例3、6、9、10、13、15、17、19、21、23、27、32、34和39的IC50TT值小于0.02μM；發(fā)現(xiàn)實(shí)施例25和28的IC50TT值小于0.03μM，發(fā)現(xiàn)實(shí)施例14的IC50TT值小于0.04μM；發(fā)現(xiàn)實(shí)施例38和41的IC50TT值小于0.15μM。
實(shí)施例47實(shí)施例3、6、13、15、17、19、21、23、25、27、28、32和34的標(biāo)題化合物按照以上試驗(yàn)D進(jìn)行測(cè)試，發(fā)現(xiàn)IC50APTT值小于1μM。
實(shí)施例48實(shí)施例1、2、4、5、7、12、16、18、20、22、24、26、29、30、33以及43-45的標(biāo)題化合物按照以上試驗(yàn)E進(jìn)行測(cè)試，發(fā)現(xiàn)其相應(yīng)活性抑制劑(游離脒)在大鼠具有口服和/或胃腸外生物利用性。
實(shí)施例49實(shí)施例1、2、7、8、11、12、16、18、20、22、24、26、29、33、37、40、43和45的標(biāo)題化合物按照以上試驗(yàn)G進(jìn)行測(cè)試，發(fā)現(xiàn)以上化合物在人和大鼠的肝微粒體轉(zhuǎn)化為相應(yīng)的活性抑制劑(游離脒)。
縮寫(xiě)Ac＝乙?；鵄cOH＝乙酸APCI＝常壓化學(xué)電離作用(與MS相關(guān))API＝常壓電離作用(與MS相關(guān))aq.＝含水的AUC＝曲線以下區(qū)域Aze＝(S)-氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸鹽(除非另有說(shuō)明)AzeOH＝氮雜環(huán)丁烷-2-羧酸Bn＝芐基Boc＝叔丁氧基羰基BSA＝牛血清白蛋白Bu＝丁基Bzl＝芐基CI＝化學(xué)電離作用(與MS相關(guān))d＝天DCC＝二環(huán)己基碳化二亞胺DIBAL-H＝二異丁基氫化鋁DIPEA＝二異丙基乙胺DMAP＝4-(N，N-二甲基氨基)吡啶DMF＝二甲甲酰胺DMSO＝二甲基亞砜DVT＝深靜脈血栓形成
EDC＝1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽e.e＝對(duì)映體過(guò)量Et＝乙基ether＝乙醚EtOAc＝乙酸乙酯EtOH＝乙醇Et2O＝乙醚h＝小時(shí)HATU＝鄰(氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽HBTU＝[N，N，N’，N’-四甲基-鄰-(苯并三唑-1-基)脲鎓六氟磷酸鹽]HCl＝鹽酸、氯化氫氣體或鹽酸鹽(取決于上下文)Hex＝己烷HOAc＝乙酸HPLC＝高效液相色譜法LC＝液相色譜Me＝甲基MEM＝甲氧基乙氧基甲基MeOH＝甲醇min＝分鐘MS＝質(zhì)譜法MTBE＝甲基叔丁基醚NADH＝煙酰胺腺嘌呤二核甙酸，還原形式NADPH＝煙酰胺腺嘌呤二核甙酸磷酸鹽，還原形式NIH＝國(guó)家衛(wèi)生研究院(美國(guó))NIHU＝國(guó)家衛(wèi)生研究院?jiǎn)挝籒MR＝核磁共振OAc＝醋酸根Pab＝對(duì)脒基芐基氨基
H-Pab＝對(duì)脒基芐基胺Ph＝苯基Pr＝丙基Pro＝(S)-脯氨酸基PyBOP＝(苯并三唑-1-基氧基)三吡咯烷基鏻六氟磷酸鹽QF＝四丁基氟化銨RedAl＝雙(2-甲氧基乙氧基)氫化鋁鈉RPLC＝反相高效液相色譜法rt/RT＝室溫SOPs＝標(biāo)準(zhǔn)操作步驟TBTU＝[N，N，N’，N’-四甲基-鄰-(苯并三唑-1-基)脲鎓四氟硼酸鹽]TEA＝三乙胺Teoc＝2-(三甲硅烷基)乙氧基羰基TEMPO＝2，2，6，6-四甲基-1-哌啶氧基游離基TFA＝三氟乙酸THF＝四氫呋喃THP＝四氫吡喃基TLC＝薄層色譜法TMSCl＝三甲硅烷基氯TMSCN＝三甲硅烷基氰UV＝紫外線Z＝芐氧基羰基前綴n，s，i和t具有它們的通常含義正、仲、異和叔。前綴c是指環(huán)狀。
權(quán)利要求
1.一種式I化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物， 其中Ra為-OH或-CH2OH；R1為一個(gè)或多個(gè)任選鹵基取代基；R2為一個(gè)或兩個(gè)C1-3烷氧基取代基，該取代基的烷基部分為被一個(gè)或多個(gè)氟基取代的烷基；Y為-CH2-或-(CH2)2-；R3為式I(i)或I(ii)的結(jié)構(gòu)片段 其中R4為H或一個(gè)或多個(gè)氟基取代基；X1、X2、X3和X4中的一個(gè)或兩個(gè)為-N-，其余為-CH-。
2.權(quán)利要求1要求保護(hù)的化合物，其中R1為一個(gè)氟基、氯基或溴基取代基。
3.權(quán)利要求2要求保護(hù)的化合物，其中R1為一個(gè)氯基。
4.任一項(xiàng)前述權(quán)利要求要求保護(hù)的化合物，其中R2為-OCHF2、-OCF3、-OCH2CF3、-OCH2CHF2、-OCH2CH2F或-OCH(CH2F)2。
5.權(quán)利要求4要求保護(hù)的化合物，其中R2為-OCHF2、-OCH2CHF2或-OCH2CH2F。
6.任一項(xiàng)前述權(quán)利要求要求保護(hù)的化合物，其中R3為式I(i)結(jié)構(gòu)片斷。
7.權(quán)利要求6要求保護(hù)的化合物，其中R4為H。
8.權(quán)利要求6要求保護(hù)的化合物，其中當(dāng)R4為一個(gè)或多個(gè)氟基取代基時(shí)，R4為2-位或3-位的一個(gè)氟基取代基，或者為2-位和5-位或2-位和6-位的兩個(gè)氟基取代基。
9.權(quán)利要求8要求保護(hù)的化合物，其中R4為在2-位的一個(gè)氟基取代基或者為在2-位和6-位的兩個(gè)氟基取代基。
10.任一項(xiàng)前述權(quán)利要求要求保護(hù)的化合物，其中Ra為OH。
11.任一項(xiàng)前述權(quán)利要求要求保護(hù)的化合物，其中R1和R2在式I化合物相應(yīng)苯基上的取代位點(diǎn)為相對(duì)于相應(yīng)苯基與分子其余部分的連接點(diǎn)的一個(gè)或兩個(gè)間位。
12.權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)定義的式I化合物的藥學(xué)上可接受的衍生物，所述衍生化合物為式Ia化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物， 其中R3a為式I(iii)或I(iv)的結(jié)構(gòu)片段 其中R5為OR6或C(O)OR7；R6為H、C1-10烷基、C1-3烷基芳基或C1-3烷氧基芳基(后兩個(gè)基團(tuán)的烷基部分任選被一個(gè)或多個(gè)氧原子隔斷，后兩個(gè)基團(tuán)的芳基部分任選被一個(gè)或多個(gè)選自鹵基、苯基、甲基或甲氧基的取代基取代，后三個(gè)基團(tuán)也任選被一個(gè)或多個(gè)鹵基取代基取代)；R7為C1-10烷基(后一基團(tuán)任選被一個(gè)或多個(gè)氧原子隔斷)、C1-3烷基芳基或C1-3烷氧基芳基(后兩個(gè)基團(tuán)的烷基部分任選被一個(gè)或多個(gè)氧原子隔斷，后兩個(gè)基團(tuán)的芳基部分任選被一個(gè)或多個(gè)選自鹵基、苯基、甲基或甲氧基的取代基取代，后三個(gè)基團(tuán)也任選被一個(gè)或多個(gè)鹵基取代基取代)；Ra、R1、R2、Y、R4、X1、X2、X3和X4同權(quán)利要求1-11任一項(xiàng)的定義(合適時(shí))。
13.權(quán)利要求12要求保護(hù)的化合物，其中R5為OR6。
14.權(quán)利要求13要求保護(hù)的化合物，其中R6為H或未取代的直鏈、支鏈或環(huán)狀C1-8烷基。
15.權(quán)利要求14要求保護(hù)的化合物，其中R6為H或C1-6烷基。
16.權(quán)利要求14要求保護(hù)的化合物，其中R6為直鏈C1-3烷基、支鏈C3-8烷基或環(huán)狀C4-7烷基。
17.權(quán)利要求15或16要求保護(hù)的化合物，其中R6為甲基、乙基、正丙基、異丙基或環(huán)丁基。
18.權(quán)利要求1-17任一項(xiàng)要求保護(hù)的化合物，其中以下片段 為S-構(gòu)型。
19.權(quán)利要求1-18任一項(xiàng)要求保護(hù)的化合物，其中當(dāng)Ra為-OH時(shí)，以下片段 為R-構(gòu)型，或者當(dāng)Ra為-CH2OH時(shí)，該片段為S-構(gòu)型。
20.權(quán)利要求1要求保護(hù)的化合物，所述化合物為1 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；2 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；3 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab；4 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab；5 Ph(3-OCHF2)-(R)CH(OH)-CO-Aze-Pab；6 Ph(3-OCF3)-(R)CH(OH)-CO-Aze-Pab；7 Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；8 Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；9 Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；10 Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；11 Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；12 Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；13 Ph(3-Br)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；14 Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab；15 Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Pro-Pab；16 Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((2-脒基)-5-吡啶基)；17 Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((5-脒基)-2-嘧啶基)；18 Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(3-F)；19 Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-diF)；20 Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，5-diF).21 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；22 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt)；23 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OnPr)；24 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiPr)；25 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu)；26 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)；27 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(COO環(huán)戊基)；28 Ph(3-Cl)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(Z)；29 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；30 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2-3-(5-Me-異噁唑))；31 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2-3-吡啶)；32 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OiBu)；33 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OEt)；34 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn)；35 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O環(huán)己基)；36 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OcBu)；37 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OCH2CH2OPh(3-CF3))；38 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Cl))；39 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(3-MeO))；40 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(2-Br))；41 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OBn(4-Me))；42 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(O-4-庚基)；43 Ph(3-Cl)(5-OCF3)-(S)CH(CH2OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；44 Ph(3-Cl)(5-OCH2CF3)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；45 Ph(3-Cl)(5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；46 Ph(3-Cl)(5-OCH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；47 Ph(3-Cl)(5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；48 Ph(3-Cl)(5-OCH(CH2F)2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；49 Ph(3-F)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；50 Ph(3-Br)(5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OMe)；51 Ph(3-Cl，5-OCH2CHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)；52 Ph(3-Cl，5-OCH2CH2F)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(OH)；53 Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Pro-Pab(OMe)；54 Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((2-甲氧基-脒基)-5-吡啶基)；55 Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-NH-CH2-((5-甲氧基-脒基)-2-嘧啶基)；56 Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，6-diF)(OMe)；57 Ph(3-Cl，5-OCHF2)-(R)CH(OH)C(O)-Aze-Pab(2，5-diF)(OMe)。
21.一種藥用制劑，所述藥用制劑包含權(quán)利要求1-20任一項(xiàng)定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物和藥學(xué)上可接受的佐劑、稀釋劑或載體。
22.權(quán)利要求21要求保護(hù)的制劑，其中所述佐劑、稀釋劑和/或載體使化合物釋放得到改進(jìn)。
23.權(quán)利要求21或22要求保護(hù)的制劑，所述制劑適合口服用藥。
24.權(quán)利要求22或23要求保護(hù)的制劑，所述制劑為凝膠基質(zhì)改進(jìn)釋放體系，該體系包含親水性凝膠組分和活性成分。
25.權(quán)利要求1-20任一項(xiàng)定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物，其用作藥物。
26.權(quán)利要求1-20任一項(xiàng)定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物，其用于治療需要抑制凝血酶的疾病。
27.權(quán)利要求1-20任一項(xiàng)定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物，其用于治療需要抗凝治療的疾病。
28.權(quán)利要求1-20任一項(xiàng)定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物，其用于治療血栓形成。
29.權(quán)利要求1-20任一項(xiàng)定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物，其用作抗凝劑。
30.權(quán)利要求1-20任一項(xiàng)定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物的用途，所述用途為在制備用于治療需要抑制凝血酶的疾病的藥物中用作活性成分。
31.權(quán)利要求1-20任一項(xiàng)定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物的用途，所述用途為在制備用于治療需要抗凝治療的疾病的藥物中用作活性成分。
32.權(quán)利要求30或31要求保護(hù)的用途，其中所述疾病為血栓形成。
33.權(quán)利要求30或31要求保護(hù)的用途，其中所述疾病為血液和/或組織中凝固性過(guò)高。
34.權(quán)利要求1-20任一項(xiàng)定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物的用途，所述用途為在制備抗凝劑中用作活性成分。
35.一種治療需要抑制凝血酶的疾病的方法，所述方法包括給予患有或易患這類疾病的人治療有效量的權(quán)利要求1-20任一項(xiàng)定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物。
36.一種治療需要抗凝治療的疾病的方法，所述方法包括給予患有或易患這類疾病的人治療有效量的權(quán)利要求1-20任一項(xiàng)定義的化合物或其藥學(xué)上可接受的衍生物。
37.權(quán)利要求35或36要求保護(hù)的方法，其中所述疾病為血栓形成。
38.權(quán)利要求35或36要求保護(hù)的方法，其中所述疾病為血液和/或組織中凝固性過(guò)高。
39.一種制備權(quán)利要求1定義的式I化合物的方法，所述方法包括(i)使式II化合物， 其中Ra、R1和R2同權(quán)利要求1定義，與式III化合物偶合， 其中Y和R3同權(quán)利要求1定義；(ii)使式IV化合物， 其中Ra、R1、R2和Y同權(quán)利要求1定義，與式V化合物偶合，R3CH2NH2V其中R3同權(quán)利要求1定義；(iii)對(duì)于制備R1不為一個(gè)或多個(gè)鹵基基團(tuán)的式I化合物，還原相應(yīng)的權(quán)利要求12定義的式Ia化合物，其中R5為OR6，其中R5和R6同權(quán)利要求12定義；(iv)使權(quán)利要求47定義的式XVIA或XVIB相應(yīng)化合物與氨源反應(yīng)；(v)使式XIVA化合物 其中Ra、R1、R3和Y同權(quán)利要求1定義，與以下化合物反應(yīng)(a)相應(yīng)的氟化鹵代鏈烷；或(b)對(duì)于制備其中R2為-OCH2CF3、-OCH2CHF2、-OCH2CH2F或-OCH(CH2F)2的式I化合物，與式XIVJ化合物反應(yīng)，RxS(O)2ORyXIVJ其中Rx為C1-4烷基、C1-4全氟代烷基或苯基(任選被甲基、硝基或鹵基取代)，Ry為-CH2CF3、-CH2CHF2、-CH2CH2F或-CH(CH2F)2；(vi)對(duì)于制備R1不為一個(gè)或多個(gè)鹵基基團(tuán)的式I化合物，氫化其中R1為一個(gè)或多個(gè)鹵基基團(tuán)的相應(yīng)式I化合物；或(vii)使權(quán)利要求1要求保護(hù)的化合物的保護(hù)衍生物去保護(hù)。
40.權(quán)利要求39定義的式II化合物或其被保護(hù)的衍生物。
41.權(quán)利要求40要求保護(hù)的化合物，其中當(dāng)Ra為-OH時(shí)，該化合物為R-構(gòu)型(關(guān)于Ra連接的碳原子)，或者當(dāng)Ra為-CH2OH時(shí)，該化合物為S-構(gòu)型。
42.權(quán)利要求39定義的式IV化合物或其被保護(hù)的衍生物。
43.一種式VIa化合物或其被保護(hù)的衍生物， 其中R1為鹵基，R2同權(quán)利要求1定義。
44.一種式IXa化合物或其被保護(hù)的衍生物， 其中R為C1-6烷基或C1-3烷基苯基，R1為鹵基，R2同權(quán)利要求1定義。
45.一種式IXAa化合物或其被保護(hù)的衍生物， 其中R同權(quán)利要求44定義，R1為鹵基，R2同權(quán)利要求1定義。
46.一種式XIVBa化合物或其苯酚O-保護(hù)的衍生物， R1為鹵基，Ra同權(quán)利要求1定義。
47.一種制備權(quán)利要求12定義的式Ia化合物的方法，所述方法包括(a)使權(quán)利要求39定義的相應(yīng)式II化合物與式XV化合物反應(yīng)， 其中Y同權(quán)利要求1定義，R3a同權(quán)利要求12定義；(b)使權(quán)利要求39定義的相應(yīng)式IV化合物與式XVI化合物反應(yīng)，R3aCH2NH2XVI其中R3a同權(quán)利要求12定義；(c)對(duì)于制備R5為OH的式Ia化合物，使相應(yīng)的式XVIA或XVIB化合物與羥胺反應(yīng)， 其中Ra、R1、R2、R4、Y、X1、X2、X3和X4同權(quán)利要求1定義；(d)對(duì)于制備R5為OR6的式Ia化合物，使式XVII化合物， 其中R3b為式I(v)或I(vi)的結(jié)構(gòu)片段或其互變異構(gòu)體 其中Rb為-CH2CH2-Si(CH3)3或芐基，Ra、R1、R2、Y、R4、X1、X2、X3和X4同權(quán)利要求1定義，與式XVIII化合物或其酸加成鹽反應(yīng)，R6ONH2XVIII其中R6同權(quán)利要求12定義，接著除去-C(O)ORb基團(tuán)；(e)對(duì)于制備R5為OH的式Ia化合物，使以上定義的式XVII化合物，其中Rb為芐基，與羥胺或其酸加成鹽反應(yīng)；(f)對(duì)于制備R5為COOR7的式Ia化合物，使權(quán)利要求1定義的相應(yīng)式I化合物與式XIX化合物反應(yīng)，L1COOR7XIX其中L1為離去基團(tuán)，R7同權(quán)利要求12定義；或者(g)對(duì)于制備R5為OCH3或OCH2CH3的式Ia化合物，使R5為OH的相應(yīng)式Ia化合物分別與硫酸二甲酯或硫酸二乙酯反應(yīng)。
48.權(quán)利要求47定義的式XVIA或XVIB化合物或其被保護(hù)的衍生物。
49.權(quán)利要求47定義的式XVII化合物或其被保護(hù)的衍生物。
全文摘要
本發(fā)明提供式(I)化合物及其藥學(xué)上可接受的衍生物(包括前體藥物)，其中R
文檔編號(hào)C07C45/51GK1487919SQ0182231
公開(kāi)日2004年4月7日 申請(qǐng)日期2001年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2000年12月1日
發(fā)明者T·英哈德特, T 英哈德特, A·約翰松, 菜, A·斯文松, 乃 申請(qǐng)人:阿斯特拉曾尼卡有限公司