專(zhuān)利名稱(chēng)：從柿葉中提取活性成分熊果酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬天然藥物領(lǐng)域，尤其涉及一種從柿葉中提取活性成分熊果酸的方法。
背景技術(shù)：
柿科(the family Ebenaceae)柿屬植物，全世界總共有240多種，它們主要廣泛地分布于熱帶有亞熱帶地區(qū)，溫帶偶有分布。我國(guó)大約有56種，產(chǎn)于西南部至東南部，北至遼寧(侯寬昭編，中國(guó)種子植物科屬詞典，第二版，北京科技出版社，1984，159)。此發(fā)明所用柿葉，是柿樹(shù)的干燥葉，其味苦、酸、澀，性涼，具有清肺止咳、涼血、降血壓之功效。主要用于咳喘、肺氣腫、各種內(nèi)出血、高血壓等病癥?，F(xiàn)代研究表明，柿葉含有豐富的黃酮類(lèi)、鞣質(zhì)、樹(shù)脂、維生素C、內(nèi)脂香豆素類(lèi)、揮發(fā)油及熊果酸、齊墩果酸等三萜酸，世界各地的柿葉都含有熊果酸(Row L.Ramachandra et al，Indian Journal of chemistry，1969，7204-206；Mallavadhani U.V.et al，Biochemical Systematics and Ecology，1998，26941-942；甄漢深等，中藥材，2001，24(3)182；Mallavadhani U.V.et al，Pharmaceutical Biology，2001，39(1)20-24；Chen Guang et al，Clinica ChimicaActa 2002，32011-16)。
熊果酸具有廣泛的藥用價(jià)值(Liu Jie，Journal of Ethnopharmacology，1995，4957-68)，如抗高血壓、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗氧化等作用(Somova L.I.etal，Journal of Ethnopharmacology，2003，84299-305)，且它對(duì)多種致癌細(xì)胞具有細(xì)胞毒、誘導(dǎo)分化及抗血管形成作用，其防癌抗癌作用已引起重視，成為現(xiàn)代腫瘤藥研究的新熱點(diǎn)(Chiang Lien-Chai et al，The American Journal ofChinese Medicine，2003，3l(1)37-46；夏國(guó)豪等，國(guó)外醫(yī)學(xué)腫瘤學(xué)分冊(cè)，2002，29(6)420-422)，熊果酸也有可能成為抗HIV的潛在藥物(QuéréLuc et al，Biochemical and Biophysical Research Communications 1996，227484-488)。
熊果酸(Ursolic acid)又名烏蘇酸或?yàn)跛魉幔瑢偃祁?lèi)化合物，分子式為C30H18O3，化學(xué)名稱(chēng)為3β-羥基-熊果烷-12-烯-28-羧酸，為無(wú)色針狀晶體。熊果酸溶于甲醇、乙醇、氯仿、丙酮等，易溶于1，4-二氧六環(huán)、吡啶，不溶于水及石油醚。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種簡(jiǎn)單、低成本、高產(chǎn)率、較適合工業(yè)生產(chǎn)的從柿葉中提取活性成分熊果酸的方法。
一種從柿葉中提取熊果酸的方法將粉碎過(guò)的柿葉用低碳鏈醇浸取，回收溶劑得到浸膏，浸膏用低極性溶劑脫脂后再用中等極性溶劑浸取，回收溶劑得到浸取物，該浸取物用低極性溶劑脫去脂溶性成分后，溶于低碳鏈醇中用活性炭脫色，過(guò)濾，濾液經(jīng)回收溶劑得到白色的熊果酸粗提物，熊果酸粗提物再用低碳鏈醇重結(jié)晶幾次可得到無(wú)色針狀結(jié)晶的熊果酸精品又一種從柿葉中提取熊果酸的方法將粉碎過(guò)的柿葉用低碳鏈醇浸取，回收溶劑得到浸膏，浸膏用低極性溶劑脫脂后再用中等極性溶劑浸取，回收溶劑得到浸取物，該浸取物用低極性溶劑脫去脂溶性成分后，溶于低碳鏈醇中用活性炭脫色，過(guò)濾，濾液經(jīng)回收溶劑得到白色的熊果酸粗提物，熊果酸粗品用低碳鏈醇溶解，濃縮，加堿溶液調(diào)pH至10～11，再活性炭脫色，過(guò)濾，濾液加酸溶液調(diào)pH至1～2，并過(guò)濾，干燥，再用低碳鏈醇重結(jié)晶就可得到熊果酸精品。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)是所用柿葉在我國(guó)分布廣泛，但柿葉往往被當(dāng)作廢料扔掉或燒掉，因此本發(fā)明柿葉原料易得；所用各種化學(xué)試劑都很常見(jiàn)，容易大批量購(gòu)買(mǎi)；所用有機(jī)溶劑都可回收再用，提取后柿葉廢渣可用作肥料，又一種從柿葉中提取熊果酸的方法中，過(guò)濾后得到的酸液可以作為下一批次生產(chǎn)所需的酸溶液，因此“三廢”處理量小且容易，對(duì)環(huán)境基本上不產(chǎn)生污染；采用脫脂過(guò)程，使得到的浸取物因含很少脂類(lèi)物質(zhì)而不會(huì)產(chǎn)生粘稠狀物，為后續(xù)步驟處理帶來(lái)了方便；采用脫色過(guò)程，使粗產(chǎn)品的中熊果酸純度進(jìn)一步提高，有利于后續(xù)步驟中形成晶體且使晶體純度提高；文獻(xiàn)方法中從柿葉里提取熊果酸都用到柱色譜方法，而本發(fā)明不需用柱色譜技術(shù)，因此本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，快捷。綜上所述，本發(fā)明所用原料廉價(jià)易得，對(duì)環(huán)境基本不產(chǎn)生污染，工藝簡(jiǎn)單易行、快捷，所獲得的熊果酸成本較低、純度高，所以適合工業(yè)規(guī)?；a(chǎn)。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1將柿葉(采自浙江省)自然晾干，粉碎，取柿葉粉，用8倍量石油醚(沸點(diǎn)60-90℃)4次脫去脂溶性成分(每次2小時(shí)，60℃，800r/min)。脫脂后的柿葉用8倍量乙酸乙酯浸取3次(每次3小時(shí)，70℃，800r/min)，常壓蒸餾回收乙酸乙酯得到黃綠色固體。乙酸乙酯浸取物用20倍量的石油醚(沸點(diǎn)60-90℃)脫去脂溶性成分(4次，每次3小時(shí)，60℃，800r/min)，再將脫脂后的固體溶于乙醇中用活性炭脫色4次(每次1小時(shí)，70℃，500r/min)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用無(wú)水乙醇重結(jié)晶得到無(wú)色針狀結(jié)晶的熊果酸精品，得率約0.51％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例2將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，用4倍量正己烷4次脫去脂溶性成分(每次2小時(shí)，60℃，800r/min)。脫脂后的柿葉用8倍量二氯甲烷室溫浸取3次(每次8小時(shí)，800r/min)，常壓蒸餾回收二氯甲烷得到黃綠色固體。二氯甲烷浸取物在索氏抽提裝置中用正己烷脫去脂溶性成分，再將脫脂后的固體溶于甲醇中用活性炭脫色4次(每次2小時(shí)，室溫，500r/m)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收甲醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用甲醇重結(jié)晶得到無(wú)色針狀結(jié)晶的熊果酸精品，得率約0.42％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例3將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，用8倍量環(huán)己烷4次脫去脂溶性成分(每次3小時(shí)，70℃，500r/m)。脫脂后的柿葉用三氯甲烷在滲漉裝置中提取，減壓蒸餾回收三氯甲烷得到黃綠色固體。三氯甲烷浸取物在索氏抽提裝置中用環(huán)己烷脫去脂溶性成分，再將脫脂后的固體溶于乙醇中用活性炭脫色4次(每次1小時(shí)，70℃，400r/min)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用乙醇重結(jié)晶得到無(wú)色針狀結(jié)晶的熊果酸精品，得率約0.46％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例4將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，用8倍量環(huán)庚烷4次脫去脂溶性成分(每次2小時(shí)，80℃，500r/m)。脫脂后的柿葉用四氯甲烷在滲漉裝置中提取，減壓蒸餾回收四氯甲烷得到黃綠色固體。四氯甲烷浸取物用20倍量的環(huán)庚烷脫去脂溶性成分(4次，每次2小時(shí)，80℃，500r/m)，再將脫脂后的固體溶于甲醇中用活性炭脫色4次(每次2小時(shí)，室溫，400r/min)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收甲醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用甲醇重結(jié)晶得到無(wú)色針狀結(jié)晶的熊果酸精品，得率約0.48％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例5將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，用8倍量正己烷和環(huán)己烷的混合物4次(正己烷/環(huán)己烷＝1/1，室溫，每次12小時(shí))脫去脂溶性成分。脫脂后的柿葉用二氯乙烷在索氏提取裝置中浸取，減壓蒸餾回收二氯乙烷得到黃綠色固體。二氯乙烷浸取物在索氏抽提裝置中用石油醚(沸點(diǎn)60-90℃)脫去脂溶性成分，再將脫脂后的固體溶于甲醇中用活性炭脫色4次(每次2小時(shí)，室溫，500r/m)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收甲醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用甲醇重結(jié)晶得到無(wú)色針狀結(jié)晶的熊果酸精品，得率約0.45％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例6將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，用8倍量石油醚(沸點(diǎn)60-90℃)4次脫去脂溶性成分(每次2小時(shí)，60℃，500r/min)。脫脂后的柿葉用12倍量丙酮在超聲輔助提取裝置中提取3次(每次3小時(shí)，室溫800r/min)，常壓蒸餾回收丙酮得到黃綠色固體。丙酮浸取物用30倍量的石油醚(沸點(diǎn)60-90℃)脫去脂溶性成分(4次，每次3小時(shí)，60℃，800r/min)，再將脫脂后的固體溶于乙醇中用活性炭脫色4次(每次1小時(shí)，70℃，500r/min)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用無(wú)水乙醇重結(jié)晶得到無(wú)色針狀結(jié)晶的熊果酸純品，得率約0.56％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例7將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，用8倍量石油醚(沸點(diǎn)60-90℃)4次脫去脂溶性成分(每次2小時(shí)，60℃，800r/min)。脫脂后的柿葉用8倍量乙酸乙酯浸取3次(70℃，800r/min，每次3小時(shí))，常壓蒸餾回收乙酸乙酯得到黃綠色固體。乙酸乙酯浸取物用10倍量的石油醚(沸點(diǎn)60-90℃)脫去脂溶性成分(4次，每次3小時(shí)，60℃，800r/min)，再將脫脂后的固體溶于乙醇中用活性炭脫色4次(每次1小時(shí)，70℃，500r/min)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用無(wú)水乙醇和甲醇的混合物(乙醇/甲醇＝5/1)重結(jié)晶得到無(wú)色針狀結(jié)晶的熊果酸精品，得率約0.51％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例8將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，用8倍量石油醚(沸點(diǎn)60-90℃)4次脫去脂溶性成分(每次2小時(shí)，60℃，800r/min)。脫脂后的柿葉用8倍量乙酸乙酯和二氯甲烷的混合物(乙酸乙酯/二氯甲烷＝1/1)室溫浸取3次(每次8小時(shí)，800r/min)，常壓蒸餾回收乙酸乙酯和二氯甲烷得到黃綠色固體。乙酸乙酯和二氯甲烷的混合物浸取物在索氏抽提裝置中用正己烷脫去脂溶性成分，再將脫脂后的固體溶于甲醇中用活性炭脫色4次(每次2小時(shí)，室溫，500r/m)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收甲醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用甲醇重結(jié)晶得到無(wú)色針狀結(jié)晶的熊果酸精品，得率約0.45％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例9將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，將粉碎過(guò)的柿葉用8倍量甲醇室溫浸取3次(每次12小時(shí)，800r/min)，減壓蒸餾回收甲醇得到浸膏，甲醇浸膏用20倍量石油醚(沸點(diǎn)60-90℃)4次脫去脂溶性成分(每次2小時(shí)，60℃，800r/min)。脫脂后的浸膏用乙酸乙酯在索氏抽提裝置中提取，減壓蒸餾回收乙酸乙酯得到黃綠色固體。乙酸乙酯浸取物用20倍量的石油醚(沸點(diǎn)60-90℃)脫去脂溶性成分(4次，每次3小時(shí)，60℃，800r/min)，再將脫脂后的固體溶于乙醇中用活性炭脫色4次(每次1小時(shí)，70℃，500r/min)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用無(wú)水乙醇重結(jié)晶得到無(wú)色針狀結(jié)晶的熊果酸精品，得率約0.40％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例10將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，將粉碎過(guò)的柿葉用12倍量乙醇在超聲輔助提取裝置中提取3次(每次1小時(shí)，室溫800r/min)，減壓蒸餾回收乙醇得到浸膏，乙醇浸膏在索氏抽提裝置中用正己烷脫去脂溶性成分。脫脂后的浸膏用8倍量二氯甲烷浸取3次(每次8小時(shí)，室溫，800r/min)，常壓蒸餾回收二氯甲烷得到黃綠色固體。二氯甲烷浸取物用10倍量的環(huán)己烷脫去脂溶性成分(4次，每次3小時(shí)，60℃，800r/min)，再將脫脂后的固體溶于甲醇中用活性炭脫色4次(每次1小時(shí)，60℃，500r/min)至濾液無(wú)色，濾液回收甲醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用甲醇重結(jié)晶得到無(wú)色針狀結(jié)晶的熊果酸精品，得率約0.42％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例11將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，將粉碎過(guò)的柿葉用丙醇在滲漉裝置中提取，減壓蒸餾回收丙醇得到浸膏，丙醇浸膏在索氏抽提裝置中用環(huán)己烷脫去脂溶性成分。脫脂后的浸膏用8倍量三氯甲烷浸取3次(每次2小時(shí)，50℃，800r/min)，減壓蒸餾回收三氯甲烷得到黃綠色固體。三氯甲烷浸取物用10倍量的正庚烷脫去脂溶性成分(4次，每次3小時(shí)，80℃，800r/min)，再將脫脂后的固體溶于甲醇中用活性炭脫色4次(每次1小時(shí)，60℃，500r/min)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收甲醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用甲醇重結(jié)晶得到無(wú)色針狀結(jié)晶的熊果酸精品，得率約0.44％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例12將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，將粉碎過(guò)的柿葉用12倍量乙醇提取(3次，每次3小時(shí)，70℃，800r/min)，減壓蒸餾回收乙醇得到浸膏，乙醇浸膏在索氏抽提裝置中用石油醚(沸點(diǎn)60-90℃)脫去脂溶性成分。脫脂后的浸膏用8倍量四氯甲烷浸取3次(每次6小時(shí)，室溫，800r/min)，減壓蒸餾回收四氯甲烷得到黃綠色固體。四氯甲烷浸取物用10倍量的正己烷脫去脂溶性成分(4次，每次3小時(shí)，60℃，800r/min)，再將脫脂后的固體溶于乙醇中用活性炭脫色4次(每次1小時(shí)，70℃，500r/min)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用乙醇重結(jié)晶得到無(wú)色針狀結(jié)晶的熊果酸精品，得率約0.48％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例13將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，將粉碎過(guò)的柿葉用乙醇在索氏抽提裝置中提取，減壓蒸餾回收乙醇得到浸膏，乙醇浸膏在索氏抽提裝置中用正庚烷脫去脂溶性成分。脫脂后的浸膏用8倍量二氯乙烷浸取3次(每次2小時(shí)，70℃，800r/min)，常壓蒸餾回收二氯乙烷得到黃綠色固體。二氯乙烷浸取物用20倍量的正庚烷脫去脂溶性成分(4次，每次3小時(shí)，80℃，800r/min)，再將脫脂后的固體溶于乙醇中用活性炭脫色4次(每次1小時(shí)，70℃，500r/min)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用甲醇重結(jié)晶得到無(wú)色針狀結(jié)晶的熊果酸精品，得率約0.42％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例14將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，將粉碎過(guò)的柿葉用12倍量乙醇在超聲輔助提取裝置中提取3次(每次1小時(shí)，室溫，800r/min)，減壓蒸餾回收乙醇得到浸膏，乙醇浸膏在索氏抽提裝置中用正己烷脫去脂溶性成分。脫脂后的浸膏用8倍量乙酸乙酯浸取3次(每次3小時(shí)，70℃，800r/min)，減壓蒸餾回收乙酸乙酯烷得到黃綠色固體。乙酸乙酯浸取物用20倍量的石油醚(沸點(diǎn)60-90℃)脫去脂溶性成分(4次，每次3小時(shí)，60℃，800r/min)，再將脫脂后的固體溶于乙醇中用活性炭脫色4次(每次1小時(shí)，70℃，500r/min)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用乙醇和甲醇的混合物(乙醇/甲醇＝5/1)重結(jié)晶得到無(wú)色針狀結(jié)晶的熊果酸精品，得率約0.52％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例15將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，將粉碎過(guò)的柿葉用乙醇在索氏抽提裝置中提取，減壓蒸餾回收乙醇得到浸膏，乙醇浸膏在索氏抽提裝置中用正己烷脫去脂溶性成分。脫脂后的浸膏用8倍量乙酸乙酯和丙酮的混合物(乙酸乙酯/丙酮＝1/1)浸取3次(每次2小時(shí)，40℃，800r/min)，常壓蒸餾回收乙酸乙酯和丙酮得到黃綠色固體。乙酸乙酯和丙酮混合物的浸取物用30倍量的正己烷脫去脂溶性成分(4次，每次3小時(shí)，60℃，800r/min)，再將脫脂后的固體溶于乙醇和甲醇的混合物(乙醇/甲醇＝5/1)中用活性炭脫色4次(每次1小時(shí)，70℃，500r/min)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收乙醇和甲醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗提物用甲醇重結(jié)晶得到無(wú)色針狀結(jié)晶的熊果酸精品，得率約0.42％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例16將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，用8倍量石油醚(沸點(diǎn)60-90℃)4次脫去脂溶性成分(每次2小時(shí)，60℃，800r/min)。脫脂后的柿葉用8倍量乙酸乙酯浸取3次(70℃，800r/min，每次3小時(shí))，常壓蒸餾回收乙酸乙酯得到黃綠色固體。乙酸乙酯浸取物用15倍量的石油醚(沸點(diǎn)60-90℃)脫去脂溶性成分(4次，每次3小時(shí)，60℃，800r/min)，再將脫脂后的固體溶于乙醇中用活性炭脫色4次(每次1小時(shí)，70℃，500r/min)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗品用乙醇溶解，濃縮至有少量沉淀后，加入1mol·L-1NaOH溶液調(diào)pH至11，活性炭脫色，再用1mol·L-1HCl調(diào)pH至2，此時(shí)有大量白色沉淀析出，過(guò)濾得到白色固體，用水洗至濾液呈中性和無(wú)Cl-為止，如此精制3次，可得到純度更高的熊果酸產(chǎn)品，然后再用無(wú)水乙醇重結(jié)晶得到無(wú)色針狀晶體的熊果酸精品得率約0.50％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例17將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，用8倍量正己烷4次脫去脂溶性成分(每次2小時(shí)，60℃，800r/min)。脫脂后的柿葉用8倍量二氯甲烷室溫浸取3次(每次12小時(shí)，800r/min)，常壓蒸餾回收二氯甲烷得到黃綠色固體。二氯甲烷浸取物在索氏抽提裝置中用正己烷脫去脂溶性成分，再將脫脂后的固體溶于甲醇中用活性炭脫色4次(每次2小時(shí)，室溫，500r/m)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收甲醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗品用乙醇溶解，濃縮至有少量沉淀后，加入1mol·L-1KOH溶液調(diào)pH至10，活性炭脫色，再用1mol·L-1H2SO4調(diào)pH至1，此時(shí)有大量白色沉淀析出，過(guò)濾得到白色固體，用水洗至濾液呈中性和無(wú)SO42-為止，如此精制3次，可得到純度更高的熊果酸產(chǎn)品，然后再用甲醇重結(jié)晶得到無(wú)色針狀晶體的熊果酸精品得率約0.44％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例18將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，將粉碎過(guò)的柿葉用12倍量乙醇提取(3次，每次3小時(shí)，70℃，800r/min)，減壓蒸餾回收乙醇得到浸膏，乙醇浸膏在索氏抽提裝置中用石油醚(沸點(diǎn)60-90℃)脫去脂溶性成分。脫脂后的浸膏用8倍量四氯甲烷浸取3次(每次6小時(shí)，室溫，800r/min)，減壓蒸餾回收四氯甲烷得到黃綠色固體。四氯甲烷浸取物用10倍量的正己烷脫去脂溶性成分(4次，每次3小時(shí)，60℃，800r/min)，再將脫脂后的固體溶于乙醇中用活性炭脫色4次(每次1小時(shí)，70℃，500r/min)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗品用乙醇溶解，濃縮至有少量沉淀后，加入Ca(OH)2溶液調(diào)pH至10，活性炭脫色，再用1mol·L-1HCl溶液調(diào)pH至1，此時(shí)有大量白色沉淀析出，過(guò)濾得到白色固體，用水洗至濾液呈中性和無(wú)Cl-為止，如此精制3次，可得到純度更高的熊果酸產(chǎn)品，然后再用甲醇重結(jié)晶得到無(wú)色針狀晶體的熊果酸精品得率約0.41％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例19將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，用8倍量石油醚(沸點(diǎn)60-90℃)4次脫去脂溶性成分(每次2小時(shí)，60℃，800r/min)。脫脂后的柿葉用8倍量乙酸乙酯和二氯甲烷的混合物(乙酸乙酯/二氯甲烷＝1/1)室溫浸取3次(每次8小時(shí)，800r/min)，常壓蒸餾回收乙酸乙酯和二氯甲烷得到黃綠色固體。乙酸乙酯和二氯甲烷的混合物浸取物在索氏抽提裝置中用正己烷脫去脂溶性成分，再將脫脂后的固體溶于甲醇中用活性炭脫色4次(每次2小時(shí)，室溫，500r/m)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收甲醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗品用乙醇溶解，濃縮至有少量沉淀后，加入1mol·L-1KOH溶液調(diào)pH至10，活性炭脫色，再用2mol·L-1H3PO4溶液調(diào)pH至2，此時(shí)有大量白色沉淀析出，過(guò)濾得到白色固體，用水洗至濾液呈中性和無(wú)PO43-為止，如此精制3次，可得到純度更高的熊果酸產(chǎn)品，然后再用甲醇重結(jié)晶得到無(wú)色針狀晶體的熊果酸精品得率約0.43％(以干燥柿葉計(jì))。
實(shí)施例20將柿葉自然晾干，粉碎，取柿葉粉，將粉碎過(guò)的柿葉用乙醇在滲漉裝置中提取，減壓蒸餾回收乙醇得到浸膏，乙醇浸膏在索氏抽提裝置中用正己烷脫去脂溶性成分。脫脂后的浸膏用8倍量乙酸乙酯和丙酮的混合物(乙酸乙酯/丙酮＝1/1)浸取3次(每次2小時(shí)，40℃，800r/min)，常壓蒸餾回收乙酸乙酯和丙酮得到黃綠色固體。乙酸乙酯和丙酮混合物的浸取物用10倍量的正己烷脫去脂溶性成分(4次，每次3小時(shí)，60℃，800r/min)，再將脫脂后的固體溶于乙醇中用活性炭脫色4次(每次1小時(shí)，70℃，500r/min)至濾液無(wú)色，濾液減壓蒸餾回收乙醇后得到白色的熊果酸粗提物。熊果酸粗品用乙醇溶解，濃縮至有少量沉淀后，加入1mol·L-1NaOH和KOH的混合溶液調(diào)pH至10，活性炭脫色，再用1mol·L-1H2SO4和HCl的混合溶液調(diào)pH至2，此時(shí)有大量白色沉淀析出，過(guò)濾得到白色固體，用水洗至濾液呈中性和無(wú)SO42-及Cl-為止，如此精制3次，可得到純度更高的熊果酸產(chǎn)品，然后再用甲醇重結(jié)晶得到無(wú)色針狀晶體的熊果酸精品得率約0.45％(以干燥柿葉計(jì))。
鑒別高效液相色譜(HPLC)方法取少量熊果酸產(chǎn)品及標(biāo)準(zhǔn)品用甲醇分別溶解，進(jìn)行HPLC分析并比較，HPLC測(cè)定條件儀器Agilent 1100series色譜柱Hypersil ODS-C18柱(200mm×4.6mm，5μm)，流動(dòng)相甲醇/水(91/9)，流速0.5ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)220nm，溫度30℃。標(biāo)準(zhǔn)品(購(gòu)自陜西慧科植物開(kāi)發(fā)有限公司)保留時(shí)間為13.189min，產(chǎn)品保留時(shí)間為13.082min，兩者基本一致。
紅外光譜將熊果酸產(chǎn)品及標(biāo)準(zhǔn)品用溴化鉀壓片法在紅外光譜儀上(Impact-410，美國(guó)Nicolet公司)測(cè)定，結(jié)果兩者的振動(dòng)吸收峰基本一致。
核磁共振譜將熊果酸產(chǎn)品及標(biāo)準(zhǔn)品作氫(1H)核磁共振分析。儀器Advance DMX500瑞士Bruker公司，工作頻率1H-NMR 500MHz，溶劑氘代DMSO，測(cè)定溫度300K。結(jié)果顯示熊果酸產(chǎn)品及標(biāo)準(zhǔn)品的核磁共振譜基本一致。
綜合以上分析可證實(shí)，本發(fā)明從柿葉中提取得到的無(wú)色針狀晶體為熊果酸。
權(quán)利要求
1.一種從柿葉中提取活性成分熊果酸的方法，其特征在于將粉碎過(guò)的柿葉用低碳鏈醇浸取，回收溶劑得到浸膏，浸膏用低極性溶劑脫脂后再用中等極性溶劑浸取，回收溶劑得到浸取物，該浸取物用低極性溶劑脫去脂溶性成分后，溶于低碳鏈醇中用活性炭脫色，過(guò)濾，濾液經(jīng)回收溶劑得到白色的熊果酸粗提物，熊果酸粗提物再用低碳鏈醇重結(jié)晶幾次可得到無(wú)色針狀結(jié)晶的熊果酸精品
2.根據(jù)權(quán)利1所述的一種從柿葉中提取活性成分熊果酸的方法，其特征在于所說(shuō)的低極性溶劑為石油醚、正己烷、環(huán)己烷、正庚烷或它們的混合物，所說(shuō)的中等極性溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、二氯乙烷、乙酸乙酯、丙酮或它們的混合物，所說(shuō)的低碳鏈醇為甲醇、乙醇、丙醇或它們的混合物。
3.根據(jù)權(quán)利1所述的一種從柿葉中提取活性成分熊果酸的方法，其特征在于所說(shuō)的脫脂及浸取采用冷浸、熱浸、索氏提取、滲漉或超聲輔助提取方法，所說(shuō)的脫色采用冷浸、熱浸方法，所說(shuō)的回收溶劑采用常壓蒸餾或減壓蒸餾。
4.一種從柿葉中提取活性成分熊果酸的方法，其特征在于將粉碎過(guò)的柿葉用低碳鏈醇浸取，回收溶劑得到浸膏，浸膏用低極性溶劑脫脂后再用中等極性溶劑浸取，回收溶劑得到浸取物，該浸取物用低極性溶劑脫去脂溶性成分后，溶于低碳鏈醇中用活性炭脫色，過(guò)濾，濾液經(jīng)回收溶劑得到白色的熊果酸粗提物，熊果酸粗品用低碳鏈醇溶解，濃縮，加堿溶液調(diào)pH至10～11，再活性炭脫色，過(guò)濾，濾液加酸溶液調(diào)pH至1～2，并過(guò)濾，干燥，再用低碳鏈醇重結(jié)晶就可得到熊果酸精品。
5.根據(jù)權(quán)利4所述的一種從柿葉中提取活性成分熊果酸的方法，其特征在于所說(shuō)的低極性溶劑為石油醚、正己烷、環(huán)己烷、正庚烷或它們的混合物，所說(shuō)的中等極性溶劑為二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳、二氯乙烷、乙酸乙酯、丙酮或它們的混合物，所說(shuō)的低碳鏈醇為甲醇、乙醇、丙醇或它們的混合物。
6.根據(jù)權(quán)利4所述的一種從柿葉中提取熊果酸的方法，其特征在于所說(shuō)的脫脂及浸取采用冷浸、熱浸、索氏提取、滲漉或超聲輔助提取方法，所說(shuō)的脫色采用冷浸、熱浸方法，所說(shuō)的回收溶劑采用常壓蒸餾或減壓蒸餾。
7.根據(jù)權(quán)利4所述的一種從柿葉中提取活性成分熊果酸的方法，其特征在于所說(shuō)堿為堿金屬的堿、堿土金屬的堿或它們的混合物，酸為中、強(qiáng)酸或它們的混合物。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種從柿葉中提取活性成分熊果酸的方法。它是將粉碎過(guò)的柿葉用低碳鏈醇浸取，回收溶劑得到浸膏，浸膏用低極性溶劑脫脂后再用中等極性溶劑浸取，回收溶劑得到浸取物，該浸取物用低極性溶劑脫去脂溶性成分后，溶于低碳鏈醇中用活性炭脫色，過(guò)濾，濾液經(jīng)回收溶劑得到白色的熊果酸粗提物，熊果酸粗提物再用低碳鏈醇重結(jié)晶幾次可得到無(wú)色針狀結(jié)晶的熊果酸精品。本發(fā)明所用原料廉價(jià)易得，對(duì)環(huán)境基本不產(chǎn)生污染，工藝簡(jiǎn)單易行、快捷，所獲得的熊果酸成本較低、純度高，所以適合工業(yè)規(guī)?；a(chǎn)。
文檔編號(hào)C07J63/00GK1763072SQ20051011822
公開(kāi)日2006年4月26日 申請(qǐng)日期2004年6月29日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月29日
發(fā)明者何潮洪, 范杰平 申請(qǐng)人:浙江大學(xué)