專利名稱：N－脫乙?；虼锼蓧A、它們的用途和含有它們的藥物制劑的制作方法

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及式I的N-脫乙酰基硫代秋水仙堿衍生物 其中-Linker是二價直鏈或支鏈C1-C8烷基殘基、C3-C8環(huán)烷基、亞苯基或C4-C6雜環(huán)；-G1和G2連接點可以相同或不同，為-CO-、-CONH-、-CR2-，其中R2是氫或直鏈C1-C4烷基殘基，或G1-Linker-G2基團(tuán)是-CO-基團(tuán)。
式I化合物具有抗增殖、抗炎、抗關(guān)節(jié)炎和抗病毒活性。
背景技術(shù)：
在醫(yī)學(xué)實踐中，秋水仙堿和硫代秋水仙堿已長時間為人所知。秋水仙堿被用于治療痛風(fēng)和相關(guān)炎性狀態(tài)。3-O-脫甲基硫代秋水仙堿糖苷在攣縮導(dǎo)致的肌肉疼痛和痙攣狀態(tài)中用作弛緩劑(miorelaxant)。但是，在兩種情況下這些化合物的使用均因為它們的高毒性而受到限制。
秋水仙堿和硫代秋水仙堿還是已知的抗增殖化合物，即能夠通過與微管相互作用而使微管去穩(wěn)定化的化合物。眾多秋水仙堿和硫代秋水仙堿衍生物作為抗腫瘤藥物的可能用途已有研究。由于它們的低治療指數(shù)，沒有一種已獲得成功，唯一的例外是脫碳秋水仙堿(demecolchicine)，其在六十年代被引入治療，用于治療各種白血病形式，隨后被更為有效的長春花生物堿代替。
WO01/68597公開了硫代秋水仙堿二聚體，其中硫代秋水仙堿殘基通過線性脂族酰氨基或酰氨基-脲基橋連接。

發(fā)明內(nèi)容
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，式I化合物具有高于秋水仙堿和硫代秋水仙堿的抗增殖活性，尤其是對表達(dá)MDR(多藥耐藥性)顯型的細(xì)胞。
本發(fā)明化合物還較WO01/68597公開的二聚體更為有利。此外，已發(fā)現(xiàn)，在Linker中引入芳族堿性殘基增加了化合物細(xì)胞毒性的大小級別。引入能夠適當(dāng)?shù)卦诳臻g定位硫代秋水仙堿殘基的Linker擴(kuò)大了對耐藥性腫瘤的活性譜。經(jīng)證明，式I化合物的細(xì)胞毒性與最有效的抗腫瘤藥物的細(xì)胞毒性相當(dāng)，但是對耐藥性腫瘤的活性譜顯著更寬。
發(fā)明詳述本發(fā)明公開了式I的N-脫乙?；虼锼蓧A衍生物 -Linker是二價直鏈或支鏈C1-C8烷基殘基、C3-C8環(huán)烷基、亞苯基或C4-C6雜環(huán)；-G1和G2連接點可以相同或不同，為-CO-、-CONH-、-CR2-，其中R2是氫或直鏈C1-C4烷基，或G1-Linker-G2基團(tuán)是-CO-基團(tuán)，條件是當(dāng)G1和G2都是CO時，或當(dāng)G1是-CONH-且G2是-CO-時，Linker不是烷基殘基。
烷基二價殘基的實例包括具有2、3、4、5或6個碳原子的直鏈殘基。
環(huán)烷基的實例包括1，3-亞環(huán)己基和1，4-亞環(huán)己基。
亞苯基的實例包括1，2-、1，3-、1，4-亞苯基。
雜環(huán)基的實例包括吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哌啶基、哌嗪基，通過環(huán)的兩個碳原子、例如在3，5或2，5或2，6位連接于G1和G2基團(tuán)。
G1和G2優(yōu)選均為CO或CONH。
Linker優(yōu)選為如上所定義的亞苯基、亞環(huán)烷基或雜環(huán)基，優(yōu)選包含至少一個堿性氮的雜環(huán)基(吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哌啶基)。
一些具體式I化合物的通式報告如下


式I化合物具有抗增殖、抗炎、抗關(guān)節(jié)炎和抗病毒活性。
本發(fā)明的化合物如以下所述制備。
其中G1和G2為CO的本發(fā)明式I化合物(二酰胺)如下制備使N-脫乙?；虼锼蓧A與所需二羧酸的活化衍生物在惰性溶劑中反應(yīng)。在活化二羧酸衍生物中，特別優(yōu)選的是酰氯和混合酸酐，特別是與三氟乙酸。在惰性溶劑中，特別優(yōu)選鹵代溶劑。作為替代選擇，使N-脫乙酰基秋水仙堿與所需二羧酸在DMAP(4-N，N-二甲基氨基吡啶)和縮合劑DCC(二環(huán)己基碳二亞胺)存在下于室溫或在加熱下反應(yīng)，同時劇烈攪伴，直到初始產(chǎn)物消失。
其中G1和G2為CONH的本發(fā)明式I化合物(二脲)如下制備使N-脫乙?；虼锼蓧A與所需二異氰酸酯在惰性溶劑中反應(yīng)。當(dāng)所選擇的異氰酸酯非市售可得時，則用碳二亞胺和堿處理，通過Lossen重排相應(yīng)的羥肟酸原位生成之。作為替代選擇，通過用四乙酸鉛處理相應(yīng)的酰胺產(chǎn)生異氰酸酯。
其中G1和G2為-CR2-的化合物(二胺)如下制備用適當(dāng)?shù)亩┻€原性胺化N-脫乙?；虼锼蓧A。作為替代選擇，通過用適當(dāng)?shù)柠u素-或甲苯磺酸衍生物烷基化硫代秋水仙堿的氮，獲得二胺。在少數(shù)情況下，通過用硼烷還原，由相應(yīng)的二酰胺制備二胺。
具有不同G1和G2的化合物通過組合上述方法以兩步制備。
式I化合物的活性在大量表達(dá)不同耐藥性的腫瘤細(xì)胞中評價。已在卵巢、結(jié)腸、肝和胰腫瘤系中觀察到最為關(guān)注的活性。
表2報告了與WO01/68597實施例3公開的二聚體相比的一些本發(fā)明化合物的IC50值(以納摩爾表示)。
表2-72小時候硫代秋水仙堿二聚體的IC501(以nMol表示)

1IC50與未處置細(xì)胞相比抑制細(xì)胞生長50％的濃度。
按照M.C.Alley等人，Cancer Research 1998，48，589-601所述的方法，評價細(xì)胞毒性活性。
所有具有所述間隔基的硫代秋水仙堿二聚體經(jīng)證明具有抗增殖、抗炎和抗病毒活性。這些化合物因此可用于治療各種起源的瘤形成、變形性類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎以及治療其逆轉(zhuǎn)錄病毒成分已得到確認(rèn)的Kaposi腫瘤?？紤]到若干人體腫瘤的起源，對病毒復(fù)制的抑制作用結(jié)合活性增殖組織中細(xì)胞增殖的抑制作用特別受到關(guān)注。
為此，本發(fā)明的化合物可作為適合于靜脈內(nèi)、胃腸外、口服、透皮施用的藥物組合物施用。本發(fā)明特別有用的方面涉及制備與血漿蛋白、尤其工程人白蛋白的復(fù)合物。這些衍生物的蛋白復(fù)合物如下獲得向白蛋白的濃溶液加入化合物的二烷溶液，所持續(xù)的時間允許所涉及的分子類別之間發(fā)生反應(yīng)。在兩種分子類別(白蛋白和秋水仙堿衍生物)于生理pH和離子強(qiáng)度條件下反應(yīng)后，將所得溶液凍干。如果凍干的溶液在絕對無菌條件下制備，則可即用于靜脈內(nèi)注射；該凍干溶液在分散于適合和相容的賦形劑后，可以壓縮并經(jīng)口服途徑施用，提供的藥物血漿濃度接近于通過胃腸外途徑可獲得的濃度。作為使用血漿蛋白的替代選擇，如果化合物的水溶性差，可以有利地使用適合于人胃腸外施用的各種官能團(tuán)化的環(huán)糊精或丙烯酰基質(zhì)(acryl matrices)。
取決于施用途徑，化合物的劑量可為1至20mg/m2體表面積。優(yōu)選的施用途徑是局部注射、靜脈內(nèi)和口服施用。
組合物的實例包括冷凍干燥的小瓶劑、有載體的(supported)凍干片劑和可飲用溶液。在本發(fā)明中也包括任何其他可溶解化合物至施用可接受程度的試劑，如Tween、Cremophor和其與PEG和醇類的適合的混合物。
以下實施例更為詳細(xì)地闡述本發(fā)明。
實施例實施例1-3，5-吡啶二羧酸二-(N-脫乙酰基硫代秋水仙堿)酰胺將10gN-脫乙?；虼锼蓧A溶于60ml二氯甲烷。然后在劇烈攪拌下加入2.24g(0.5eq)3，5-吡啶羧酸、1.64g(0.5eq)N，N-二甲基氨基吡啶(DMAP)和8.3g(1.5eq)二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)。將混合物在攪拌下放置，通過TLC(AcOEt∶MeOH 10∶1)監(jiān)測反應(yīng)，直至試劑消失(約12小時)。然后將溶液通過硅藻土過濾，用二氯甲烷洗滌過濾墊(2×100ml)。合并有機(jī)相，首先用等體積的1N HCl洗滌，然后用1N NaOH洗滌。將有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥，在真空下蒸發(fā)。殘余物經(jīng)硅膠過濾純化(AcOEt∶MeOH 10∶1)。將所得產(chǎn)物在固定干燥器中于40℃真空下干燥過夜，得到7.5g終產(chǎn)物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)1.00-1.42(m，2H)，1.50-2.00(m，2H)，2.05-2.30(m，2H)，2.30-2.50(m，2H)，2.52(s，3H，SMe)，3.71(s，3H，MeO-1)，3.90(s，3H，MeO-2)，3.96(s，3H，MeO-3)，4.80-4.92(m，2H，H-7)，6.47(s，2H，H-8)，7.18(d，12.0Hz，2H，H-12)，7.38(d，12.0Hz，2H，H-11)，7.67(s，2H，H-4)，8.52(br s，2H，NH)，9.28(s，2H，H-2’+H-6’)，9.60(s，1H，H-4’)；13CNMR(75MHz，CDCl3)182.64，164.25，158.88，154.12，152.59，152.34，151.33，141.92，139.33，135.48，134.47，132.74，129.04，128.54，127.48，125.71，107.74，61.88，61.61，56.49，53.03，30.09，15.41.
IR(KBr)2934，2854，1664，1605，1540，1485，1424，1403，1349，1321，1266，1235，1195，1153，1137，1095，1051，1021，978，921，842，796，703.
實施例2-反-1，4-環(huán)己烷二羧酸二-(N-脫乙?；虼锼蓧A)酰胺將10g N-脫乙酰基硫代秋水仙堿溶于60ml二氯甲烷。然后在劇烈攪拌下加入2.31g(0.5eq)反-1，4-環(huán)己烷二羧酸、1.64g(0.5eq)DMAP和8.3g(1.5eq)DCC。將混合物在攪拌下放置12小時，通過TLC(AcOEt∶MeOH10∶1)監(jiān)測，然后經(jīng)硅藻土過濾，用二氯甲烷(2×20ml)洗滌過濾墊。合并有機(jī)相，用等體積的1N HCl、1N NaOH和鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥。在減壓下蒸發(fā)溶劑后，殘余物經(jīng)直接柱色譜純化(AcOEt∶MeOH 12∶1)。將產(chǎn)物從甲醇結(jié)晶(10v/v)，在固定干燥器中于40℃真空下干燥過夜，得到6.6g純產(chǎn)物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)1.30-1.45(m)，1.45-1.70(m，2H)，1.80-1.89(m)，1.89-2.10(m)，2.18-2.56(m)，2.43(s，3H，SMe)，3.69(s，3H，MeO-1)，3.92(s，3H，MeO-2)，3.97(s，3H，MeO-3)，4.80-4.92(m，2H，H-7)，6.47(s，2H，H-8)，7.09(d，12.0Hz，2H，H-12)，7.34(d，12.0Hz，2H，H-11)，7.86(s，2H，H-4)，8.93(br s，2H，NH).
13CNMR(75MHz，CDCl3)182.44，176.35，158.52，153.80，152.96，151.55，141.97，139.22，135.04，134.69，129.93，127.09，126.37，107.04，62.39，61.68，56.45，51.13，44.59，36.92，30.63，29.61，27.84，15.36.
IR(KBr)3442，3285，2934，2855，1674，1602，1532，1484，1454，1424，1403，1390，1348，1321，1281，1256，1236，1195，1153，1136，1094，1022，982，942，921，841，619，582.
實施例3-3，5-苯二羧酸二-(N-脫乙?；虼锼蓧A)酰胺按照實施例1的方法，從5g間苯二酸開始，獲得產(chǎn)物，為結(jié)晶固體(產(chǎn)率82％)。
1HNMR(300MHz，CDCl3)1.00-1.42(m，2H)，1.50-2.00(m，2H)，2.05-2.30(m，2H)，2.30-2.50(m，2H)，2.52(s，3H，SMe)，3.71(s，3H，MeO-1)，3.90(s，3H，MeO-2)，3.96(s，3H，MeO-3)，4.80-4.92(m，2H，H-7)，6.47(s，2H，H-8)，7.18(d，12.0Hz，2H，H-12)，7.38(d，12.0Hz，2H，H-11)，7.67(s，2H，H-4)，8.52(br s，2H，NH)，8.05(m，2H，H-4′+H-6′)，8.50(m，1H，H-2’)，7.46(dd，8.0Hz，H-5’).
實施例4-N-脫乙酰基硫代秋水仙堿1，4-苯二胺二脲將2.0g N-脫乙?；虼锼蓧A溶于150ml無水四氫呋喃。然后加入0.5當(dāng)量1，4-亞苯基二異氰酸酯(0.4g)。將反應(yīng)混合物在攪拌、室溫下放置兩天，通過TLC(DCM-EtOH 95∶5，Rf＝0.30)監(jiān)測。蒸出溶劑，粗品從乙酸乙酯中重結(jié)晶，得到0.95g純產(chǎn)物(38％)。
1HNMR(300MHz，DMSO-d6)1.72-1.88(m)，2.08-2.36(m)，2.58-2.70(m)，2.42(s，3H，SMe)，3.58(s，3H，MeO-1)，3.82(s，3H，MeO-2)，3.87(s，3H，MeO-3)，4.24-4.35(m，2H，H-7)，6.82(s，2H，H-8)，7.17(d，12.0Hz，2H，H-12)，7.27(d，12.0Hz，2H，H-11)，7.13(s，2H，H-4)，8.52(br s，2H，NH).
實施例5-N-脫乙?；虼锼蓧A1，3-苯二胺二脲按照實施例4的方法，從2.0g N-脫乙?；虼锼蓧A和0.4g 1，3-亞苯基二異氰酸酯開始，得到所需產(chǎn)物(產(chǎn)率42％)。
1HNMR(300MHz，DMSO-d6)1.72-1.88(m)，2.08-2.36(m)，2.58-2.68(m)，2.43(s，3H，SMe)，3.58(s，3H，MeO-1)，3.83(s，3H，MeO-2)，3.87(s，3H，MeO-3)，4.24-4.35(m，2H，H-7)，6.82(s，2H，H-8)，7.18(d，12.0Hz，2H，H-12)，7.28(d，12.0Hz，2H，H-11)，7.14(s，2H，H-4)，8.48(br s，2H，NH).
實施例6-2，9-二氮雜癸二酸二-(N-脫乙酰基硫代秋水仙堿)酰胺按照實施例4的方法，從2.0g N-脫乙?；虼锼蓧A和0.4g 1，4-丁烷二異氰酸酯開始，得到所需產(chǎn)物(產(chǎn)率63％，0.4g)。TLC(DCM-EtOH＝95∶5)Rf＝0.38。
1HNMR(300MHz，CDCl3)1.80-1.95(m)，2.38-2.54(m)，2.70-2.95(m)，3.40-3.60(m)，2.50(s，3H，SMe)，3.69(s，3H，MeO-1)，3.95(s，3H，MeO-2)，3.98(s，3H，MeO-3)，4.54-4.65(m，2H，H-7)，6.58(s，2H，H-8)，7.21(d，12.0Hz，2H，H-12)，7.43(d，12.0Hz，2H，H-11)，7.81(s，2H，H-4)，8.20(br s，2H，NH).
實施例7-1，3-苯亞甲基-二-N-脫乙?；虼锼蓧A將2.0g N-脫乙?；虼锼蓧A溶于100ml氯仿。加入0.5當(dāng)量間苯二醛縮二甲醇和0.01％吡啶鎓甲苯磺酸鹽。將混合物回流過夜，冷卻至室溫，置于冰浴中。加入8當(dāng)量的三乙酰氧基硼氫化鈉，將混合物于攪拌下放置一天。然后過濾溶液，用相同體積的0.1N HCl、然后用飽和碳酸氫鈉水溶液洗滌。有機(jī)相經(jīng)硫酸鈉干燥，蒸出溶劑。粗品經(jīng)快速色譜法純化，得到0.49g產(chǎn)物。
1HNMR(300MHz，CDCl3)1.00-1.42(m，2H)，1.50-2.00(m，2H)，2.05-2.30(m，2H)，2.30-2.50(m，2H)，2.52(s，3H，SMe)，3.71(s，3H，MeO-1)，3.90(s，3H，MeO-2)，3.96(s，3H，MeO-3)，4.80-4.92(m，2H，H-7)，6.47(s，2H，H-8)，7.18(d，12.0Hz，2H，H-12)，7.38(d，12.0Hz，2H，H-11)，7.67(s，2H，H-4)，8.52(br s，2H，NH)，7.02(m，5H).
實施例8-與人白蛋白復(fù)合的3，5-吡啶二羧酸二-(N-脫乙酰基硫代秋水仙堿)酰胺的注射制劑將1g 3，5-吡啶二羧酸二-(N-脫乙酰基硫代秋水仙堿)酰胺溶于20ml二烷。將所得溶液緩慢滴至5％白蛋白生理溶液中，得到均勻的乳狀懸液。將混合物在攪拌下于無菌條件放置2小時，然后凍干。
凍干產(chǎn)品準(zhǔn)備用于通過注射途徑施用。
權(quán)利要求
1.式I化合物 其中-Linker是二價直鏈或支鏈C1-C8烷基殘基、C3-C8環(huán)烷基、亞苯基或C4-C6雜環(huán)；-G1和G2連接點可以相同或不同，為-CO-、-CONH-、-CR2-，其中R2是氫或直鏈C1-C4烷基殘基，或G1-Linker-G2基團(tuán)是-CO-基團(tuán)。條件是當(dāng)G1和G2都是CO，或當(dāng)G1是-CONH-且G2是-CO-時，Linker不是二價烷基殘基。
2.權(quán)利要求1所述的化合物，其中G1和G2都是CO或CONH。
3.權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中Linker是亞苯基、C5-C6亞環(huán)烷基或雜環(huán)基。
4.權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中Linker選自具有2至6個碳原子的二價直鏈烷基殘基。
5.權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中Linker選自1，3-亞環(huán)己基和1，4-亞環(huán)己基。
6.權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中Linker選自1，2-、1，3-或1，4-亞苯基。
7.權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中Linker選自吡啶基、哌啶基、哌嗪基，與G1和G2基團(tuán)在3，5或2，5或2，6位連接。
8.式I化合物，用于抗腫瘤、抗關(guān)節(jié)炎、抗炎和抗病毒。
9.藥物組合物，含有式I化合物作為活性成分，混合有適合的載體和/或賦形劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一系列式(I)的N－脫乙酰基硫代秋水仙堿衍生物，其中Linker是二價直鏈或支鏈C
文檔編號C07D213/82GK1972908SQ200580003821
公開日2007年5月30日 申請日期2005年2月1日 優(yōu)先權(quán)日2004年2月3日
發(fā)明者E·邦巴爾代利, G·豐塔納 申請人:因德納有限公司