專利名稱：用于治療惡性胸腔積液的vegf抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及惡性胸腔積液(MPE)患者的治療方法。更具體而言，本發(fā)明涉及由于晚期(advanced)非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)、乳癌、淋巴瘤、白血病或間皮瘤而有MPE的患者的治療方法。
相關(guān)領(lǐng)域描述在人類癌癥中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)的表達(dá)幾乎是普遍的，這與它作為腫瘤新血管生成的關(guān)鍵媒介物的作用相一致。在多個(gè)不同的異種移植模型中，通過(guò)結(jié)合該分子或其VEGFR-2受體以阻斷VEGF的功能抑制了植入的腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)(參見，例如，Gerber等人(2000)Cancer Res.606253-6258)。被稱為“VEGF捕獲劑”或“VEGFR1R2捕獲劑”的可溶性VEGF拮抗劑已經(jīng)得到描述(Kim等人(2002)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9911399-404；Holash等人(2002)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9911393-8)。
發(fā)明概述在第一個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于患有惡性胸腔積液的人類患者的治療方法，包括對(duì)所述人類患者施用治療上有效量的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)捕獲拮抗劑(trap antagonist)。WO 00/75319中描述了VEGF捕獲蛋白拮抗劑。
根據(jù)本發(fā)明，VEGF捕獲蛋白拮抗劑是融合蛋白，包含與多聚化組分融合的來(lái)自兩種不同VEGF受體蛋白的免疫球蛋白(Ig)樣結(jié)構(gòu)域組分。更具體而言，本發(fā)明的VEGF捕獲蛋白拮抗劑包含兩個(gè)融合多肽的二聚體，每個(gè)多肽包含F(xiàn)lt-1的免疫球蛋白(Ig)樣結(jié)構(gòu)域2和Fltk-1或Flt-4的Ig樣結(jié)構(gòu)域3以及多聚化組分。也可存在其他組分，或本發(fā)明的VEGF捕獲蛋白拮抗劑可以基本上或僅由這些組分組成。本發(fā)明方法中使用的VEGF捕獲拮抗劑包括優(yōu)選的可溶性融合多肽，所述融合多肽選自乙?；腇lt-1(1-3)-Fc、Flt-1(1-3R-＞N)-Fc、Flt-1(1-3ΔB)-Fc、Flt-1(2-3ΔB)-Fc、Flt-1(2-3)-Fc、Flt-1D2-VEGFR3D3-FcΔC1(a)、Flt-1D2-Flk-1D3-FcΔC1(a)和VEGFR1R2-FcΔC1(a)。在一個(gè)具體且優(yōu)選的實(shí)施方案中，VEGF捕獲拮抗劑是具有SEQ ID NO1中所示核苷酸序列和SEQ ID NO2中所示氨基酸序列的VEGFR1R2-FcΔC1(a)(也稱為VEGF捕獲劑R1R2)。本發(fā)明包括VEGF捕獲劑(trap)的用途，所述VEGF捕獲劑與SEQ ID NO1中所示核苷酸序列和/或SEQ ID NO2中所示氨基酸序列有至少90％、95％、98％或至少99％的同源性。
VEGF捕獲劑可以通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法施用，包括皮下、肌內(nèi)、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、鼻內(nèi)或口服給藥。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，VEGF捕獲劑通過(guò)皮下注射或靜脈內(nèi)注射施用。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，VEGF捕獲劑通過(guò)皮下注射施用。
如下所述，患有惡性胸腔積液的人類患者還可能經(jīng)歷其他醫(yī)療操作，例如為了引流治療插入胸腔導(dǎo)管或標(biāo)準(zhǔn)胸管胸廓造口術(shù)。本發(fā)明方法可以組合在一個(gè)實(shí)施方案中，所施用的VEGF捕獲蛋白的量為0.3mg/kg-30mg/kg的劑量范圍。在一個(gè)更具體的實(shí)施方案中，VEGF捕獲劑以0.5mg/kg-10mg/kg的范圍每天施用一次。在另一實(shí)施方案中，VEGF捕獲劑以0.3mg/kg-30mg/kg的劑量范圍每周施用至少一次。在另一實(shí)施方案中，VEGF捕獲劑以0.3mg/kg-30mg/kg的劑量范圍每月施用至少一次。
在第二個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于患有與非小細(xì)胞肺癌相關(guān)的惡性胸腔積液的人類患者的治療方法，包括對(duì)所述人類患者施用治療上有效量的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)捕獲劑。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所施用的VEGF捕獲劑是包含兩個(gè)融合多肽的二聚體，所述融合多肽具有SEQ ID NO2的序列。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，本發(fā)明方法與獲得胸膜腔引流的標(biāo)準(zhǔn)治療處理相組合。
在第三個(gè)方面，本發(fā)明的特征在于血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)拮抗劑在制備用于通過(guò)下述方法治療患有惡性胸腔積液的人類患者的藥物中的用途，所述VEGF拮抗劑包含兩個(gè)融合多肽的二聚體，每個(gè)多肽包含F(xiàn)lt-1的免疫球蛋白(Ig)樣結(jié)構(gòu)域2和Fltk-1或Flt-4的Ig樣結(jié)構(gòu)域3以及多聚化組分，所述方法包括對(duì)所述患者施用治療上有效量的所述VEGF拮抗劑。VEGF拮抗劑優(yōu)選選自乙?；腇lt-1(1-3)-Fc、Flt-1(1-3R-＞N)-Fc、Flt-1(1-3ΔB)-Fc、Flt-1(2-3ΔB)-Fc、Flt-1(2-3)-Fc，F(xiàn)lt-1D2-VEGFR3D3-FcΔC1(a)、Flt-1D2-Flk-1D3-FcΔC1(a)和VEGFR1R2-FcΔC1(a)；更優(yōu)選地，VEGF拮抗劑是包含SEQ ID NO2的氨基酸序列的VEGFR1R2-FcΔC1(a)。
其他目的和優(yōu)點(diǎn)經(jīng)參閱隨后的詳細(xì)描述將是顯而易見的。
發(fā)明詳述在描述本方法之前，應(yīng)當(dāng)理解本發(fā)明不限于所描述的具體方法和實(shí)驗(yàn)條件，因?yàn)榇祟惙椒ê蜅l件可以改變。還應(yīng)當(dāng)理解本文所使用的術(shù)語(yǔ)僅用于描述具體實(shí)施方案，并不希望用于限制，因?yàn)楸景l(fā)明的范圍將僅由所附的權(quán)利要求來(lái)限定。
如本說(shuō)明書和附加權(quán)利要求中所使用的，除非上下文明確說(shuō)明否則單數(shù)形式的“a”、“an”和“the”包括復(fù)數(shù)。因此例如提及“一種方法”包括本文所描述的和/或閱讀本公開內(nèi)容等后對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見的類型的一種或多種方法和/或步驟。
除非另外定義，本文所使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解相同的含義。盡管與本文所述那些類似或等同的任何方法和材料均可用于本發(fā)明的實(shí)踐或測(cè)試中，現(xiàn)在還是描述優(yōu)選的方法和材料。
一般描述血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子/血管通透因子(VEGF)最初被鑒別為能夠增加血管通透性的腫瘤來(lái)源因子。后來(lái)發(fā)現(xiàn)它是內(nèi)皮細(xì)胞的增殖因子。在胚胎中，VEGF絕對(duì)是脈管系統(tǒng)發(fā)育所必需的。在成人中，VEGF在與血管通透性增加和血管發(fā)生相關(guān)的各種正常和病理過(guò)程中是上調(diào)的。
VEGF相關(guān)的血管發(fā)生生長(zhǎng)因子家族包括VEGF本身(VEGF-A)及相關(guān)蛋白VEGF-B、-C、-D和E，以及胎盤生長(zhǎng)因子(PLGF)。此外，至少存在4種不同的VEGF-A同種型。然而，由于某些家族成員僅在最近才被鑒別，它們的生物學(xué)重要性仍知之甚少。VEGF及其相關(guān)因子的作用由一組3個(gè)受體酪氨酸激酶即VEGFR1、VEGFR2和VEGFR3介導(dǎo)。
與來(lái)自動(dòng)物研究的預(yù)測(cè)一致，基于來(lái)自早期臨床試驗(yàn)的初步報(bào)告，利用人源化單克隆抗體阻斷VEGF已在癌癥患者中顯現(xiàn)出有希望的結(jié)果報(bào)告(Bergsland等人(2000)ASCO Abstract #939)。由于其對(duì)VEGF較大的親和力及其結(jié)合VEGF家族其他成員例如PLGFs的能力，VEGF捕獲蛋白是有效且有用的抗癌治療劑。
每年，超過(guò)160,000美國(guó)人被診斷有肺癌，并且大約35,000美國(guó)人被診斷有由肺癌引起的惡性胸腔積液(Jemal等人(2002)CACancer J.Clin.5223-47)。這些患者中的大多數(shù)有非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)。惡性積液在小細(xì)胞肺癌患者中相對(duì)較不普遍，在某些系列中發(fā)生率小于所有SCLC患者的3％。對(duì)于NSCLC患者，惡性胸腔積液在TNM病期分類中被認(rèn)為不是轉(zhuǎn)移性疾病，而是T4疾病。然而，與沒(méi)有惡性積液的IIIB期患者相比，有惡性積液的IIIB期疾病患者的生存更差(在一項(xiàng)回顧性研究中5年存活率為16％對(duì)45％)(Naruke等人(1997)Chest 1121710-7)。有惡性胸腔積液的肺癌患者被認(rèn)為是晚期疾病，并且不適合手術(shù)或放射治療。
不是所有的惡性胸腔積液都含有惡性細(xì)胞。各種回顧性研究報(bào)告在10-50％的可疑惡性積液中檢測(cè)到惡性細(xì)胞(Johnston(1985)Cancer 56905-9)；因此，胸腔積液不是必須包含惡性細(xì)胞才被認(rèn)為是惡性的。在一項(xiàng)回顧性研究中，有NSCLC和胸腔積液的患者中，無(wú)論流體細(xì)胞學(xué)測(cè)試的結(jié)果是陽(yáng)性還是陰性，如果陰性的患者具有臨床判斷為由潛在的肺癌引起的帶血的和/或滲出性液體，存活時(shí)間沒(méi)有差別(Sugiura等人(1997)Clin.Cancer Res.347-50)。在沒(méi)有可見癌細(xì)胞的情況下，臨床判斷是宣布積液“惡性”所必須的，因?yàn)閹а姆e液也可由創(chuàng)傷性胸腔穿刺術(shù)或肺梗塞引起。大約5-10％的肺癌患者有非惡性胸腔積液，這由肺膨脹不全、阻塞性肺炎、淋巴或靜脈梗阻或肺栓子引起。
惡性胸腔積液的當(dāng)前治療來(lái)自轉(zhuǎn)移癌的癥狀性惡性胸腔積液(即呼吸短促)需要引流。這可以通過(guò)大容量胸腔穿刺術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)。然而，惡性積液很快便再次積聚，因而常常利用更確定的引流操作來(lái)處理，所述引流操作包括胸管胸廓造口術(shù)并隨后滴注硬化劑，例如滑石、博來(lái)霉素或四環(huán)素，以便使胸膜愈合結(jié)疤并消除腔壁與臟胸膜之間可能的間隙。需要這種操作的患者一般被醫(yī)院接受并被插入胸管。一般地，用胸管胸廓造口術(shù)治療的大多數(shù)MPE患者患有晚期非小細(xì)胞肺癌。
對(duì)于MPE的確定性治療，胸管胸廓造口術(shù)和胸膜固定術(shù)的替代方法包括安置非固定式胸膜腔導(dǎo)管(Pleur-XTMCatheter，DenverBiomedical，Golden，CO)。這種技術(shù)允許用每天連續(xù)引流治療MPE門診病人直到生理性胸膜瘢痕出現(xiàn)，或者癌癥由化學(xué)療法充分治療。
已經(jīng)報(bào)告了在144名具有復(fù)發(fā)的癥狀性MPE患者中Pleur-XTM與標(biāo)準(zhǔn)胸管胸廓造口術(shù)和強(qiáng)力霉素胸膜固定術(shù)的隨機(jī)比較(Putnam等人(1999)Cancer 861992-9)。兩個(gè)治療組中的積液復(fù)發(fā)率類似，與13％的用Pleur-XTM治療的患者相比(n＝99)，21％的強(qiáng)力霉素治療的患者經(jīng)歷了胸腔積液的復(fù)發(fā)(n＝45)。兩個(gè)治療組中癥狀改善的程度幾乎相同。對(duì)于Pleur-XTM患者，每隔一天進(jìn)行引流，并將導(dǎo)管原位保留直至達(dá)到胸膜聯(lián)合。胸膜聯(lián)合(pleural symphysis)被定義為3次連續(xù)引流嘗試沒(méi)有得到任何胸膜液。胸膜聯(lián)合的標(biāo)準(zhǔn)是3次連續(xù)引流嘗試得到≤50ml胸膜液。在已公開的研究中，用Pleur-XTM治療的患者當(dāng)時(shí)有46％達(dá)到胸膜聯(lián)合，胸膜聯(lián)合的時(shí)間中值為26天(范圍8-223天)。Pleur-XTM導(dǎo)管的早期并發(fā)癥包括發(fā)熱(3％)、氣胸(3％)、導(dǎo)管錯(cuò)位(2％)、肺復(fù)張后肺水腫(1％)以及在床邊麻醉過(guò)程中的過(guò)度鎮(zhèn)靜(1％)。晚期并發(fā)癥包括導(dǎo)管管道周圍的蜂窩組織炎(6％)，所有人用抗生素治療均有效，并且無(wú)一要求去除導(dǎo)管。當(dāng)時(shí)有7％報(bào)告在液體引流過(guò)程中有疼痛。兩個(gè)治療組的生存中值相同，為大約3個(gè)月。
在一個(gè)機(jī)構(gòu)對(duì)100名用Pleur-XTM導(dǎo)管治療的患者的回顧性研究中證明沒(méi)有與導(dǎo)管安置或使用相關(guān)的死亡率，并且81％的患者沒(méi)有發(fā)病(Putnam等人(2000)Ann.Thorac.Surg.69369-75)。并發(fā)癥包括由小腔形成引起的液體復(fù)發(fā)(8％)、導(dǎo)管故障(8％)以及感染/膿胸(5％)。21％的患者達(dá)到胸膜聯(lián)合，而大多數(shù)患者由于并發(fā)癥要求去除導(dǎo)管或帶著還在原位的胸膜腔導(dǎo)管死亡。用Pleur-XTM治療的患者組與具有類似人口統(tǒng)計(jì)的用標(biāo)準(zhǔn)胸管胸廓造口術(shù)和胸膜固定術(shù)治療的68名患者組進(jìn)行回顧性比較。注意到，與用胸管和胸膜固定術(shù)治療的患者相比較，Pleur-XTM組經(jīng)歷了較短的住院治療時(shí)間以及較低的護(hù)理成本。兩組間存活時(shí)間中值沒(méi)有差別(3.4個(gè)月)。一項(xiàng)有28名患者的較小型回顧性研究報(bào)告了42％的胸膜聯(lián)合率，發(fā)生在19天的時(shí)間中值處(范圍7-96天)(Pollak等人(2001)J.Vasc.Interv.Radiol.12201-8)。11名肺萎陷綜合征患者的系列病例證明良好的癥狀改善，但沒(méi)能達(dá)到胸膜聯(lián)合(Pien等人(2001)Chest 1191641-6)。
定義術(shù)語(yǔ)“治療上有效劑量”是指產(chǎn)生施用預(yù)期效應(yīng)的劑量。確切的劑量將取決于治療目的，并且將由本領(lǐng)域技術(shù)人員利用已知技術(shù)來(lái)確定(參見，例如Lloyd(1999)The Art，Science and Technology ofPharmaceutical Compounding)。取決于被治療的病狀，有效性可以用常規(guī)方法來(lái)測(cè)量。對(duì)于癌癥治療，有效性例如可以通過(guò)評(píng)估疾病進(jìn)展時(shí)間或測(cè)定應(yīng)答率來(lái)測(cè)量。治療上有效量也指當(dāng)維持一定時(shí)間時(shí)顯示對(duì)抑制疾病癥狀有效的靶血清濃度，例如谷血清濃度。
術(shù)語(yǔ)“阻滯劑”、“抑制劑”或“拮抗劑”是指延緩或阻止化學(xué)或生理反應(yīng)或應(yīng)答的物質(zhì)。通常的阻滯劑或抑制劑包括但不限于反義分子、抗體、拮抗劑及其衍生物。更具體地，VEGF阻滯劑或抑制劑的實(shí)例是基于VEGF受體的拮抗劑，包括，例如，抗VEGF抗體或VEGF捕獲劑例如VEGFR1R2-FcΔC1(a)(SEQ ID NO1-2)。關(guān)于基于VEGF受體的拮抗劑(包括VEGFR1R2-FcΔC1(a))的完整描述參見PCT公開WO 00/75319。
術(shù)語(yǔ)“藥品說(shuō)明書(package insert)”用于指通常包括在治療產(chǎn)品商品包裝中的用法說(shuō)明書，它包含關(guān)于此類治療產(chǎn)品使用的適應(yīng)癥、用途、用量、用法、禁忌癥和/或警告的信息。
術(shù)語(yǔ)“靜脈內(nèi)輸注”指經(jīng)過(guò)一段時(shí)間將藥物導(dǎo)入動(dòng)物或人類患者靜脈內(nèi)，所述時(shí)間大于約5分鐘，優(yōu)選大約30-90分鐘，盡管根據(jù)本發(fā)明，可替代地實(shí)施靜脈內(nèi)輸注10小時(shí)或更短時(shí)間。
術(shù)語(yǔ)“皮下給藥”指從藥物容器中通過(guò)相對(duì)緩慢、持續(xù)的輸送將藥物導(dǎo)入動(dòng)物或人類患者的皮膚下，優(yōu)選在皮膚和下層組織之間的袋(pocket)內(nèi)。該袋可以通過(guò)將皮膚向上擠或拉離下層組織產(chǎn)生。
VEGF和惡性胸腔積液(MPE)的關(guān)聯(lián)癌細(xì)胞通過(guò)下列方式導(dǎo)致胸腔積液，即侵襲胸膜、阻斷胸膜間隙的淋巴引流和/或表達(dá)增加血管滲透性的生長(zhǎng)因子和炎性細(xì)胞因子，血管滲透性增加促進(jìn)毛細(xì)血管滲漏和進(jìn)一步的癌細(xì)胞侵襲，(Yano等人(2000)Am J.Pathol.1571893-903)。各種信號(hào)傳導(dǎo)分子和酶可以促進(jìn)這個(gè)過(guò)程，包括VEGF、IL-6、IL-8、TGF、金屬蛋白酶以及纖維蛋白溶酶原。VEGF在這個(gè)過(guò)程中的重要性由在惡性積液和腹水中發(fā)現(xiàn)的高濃度VEGF支持，其水平常常比非惡性積液高10倍(Kraft等人(1999)Cancer 85178-87)。VEGF已經(jīng)涉及來(lái)自各種形式癌癥的MPE的發(fā)病機(jī)理，所述癌癥包括肺癌、間皮瘤、乳癌和淋巴瘤(參見，例如Thickett等人(1999)Thorax 54707-10)。
一項(xiàng)有127名具有各種良性和惡性積液的患者的研究發(fā)現(xiàn)胸膜液中的VEGF水平是惡性的可靠標(biāo)記(100％敏感，84％對(duì)惡性特異，截?cái)嘀禐?000pg/ml)(Momi等人(2002)Respir.med.96817-22)。在另一項(xiàng)研究中，發(fā)現(xiàn)出血性惡性胸腔積液在胸膜液中含有的VEGF水平明顯高于非出血性MPE，并且在胸膜活組織檢查樣本中的惡性細(xì)胞通過(guò)利用抗VEGF抗體的免疫組織化學(xué)(IHC)就VEGF進(jìn)行了可靠染色(Ishimoto等人(2002)Oncology 6370-5)。在另一系列病例中，與良性肺病患者相比較，肺癌和胸腔積液患者中VEGF的血液和胸膜液水平明顯較高(Kishiro等人(2002)Respirology 793-8)。
VEGF抑制劑在動(dòng)物模型中已經(jīng)顯示出可防止胸腔積液(Yano等人(2000)Clin.Cancer Res.6957-65)。有一項(xiàng)研究用取自癌癥患者的胸膜液處理培養(yǎng)的內(nèi)皮細(xì)胞，并證明增強(qiáng)了內(nèi)皮細(xì)胞增殖，所述內(nèi)皮細(xì)胞增殖的增強(qiáng)在體外可以通過(guò)用VEGF抑制劑處理而被阻斷(多克隆抗VEGF抗體以及SU5416)(Verheul等人(2000)Oncologist5Suppl.145-50)。另一項(xiàng)研究將惡性胸腔積液樣品注入小鼠體內(nèi)，并證明血管滲透性增強(qiáng)，所述血管滲透性增強(qiáng)在體內(nèi)可以通過(guò)用VEGF抑制劑處理而被阻斷(抗Flk-1抗體)(Zebrowski等人(1999)Clin.Cancer Res.53364-8)。
VEGF捕獲拮抗劑在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，VEGF捕獲拮抗劑是受體-Fc融合蛋白，它由人VEGFR1和VEGFR2受體胞外域的主要配體結(jié)合部分融合人IgG1的Fc部分而組成。具體地，該VEGF捕獲劑由來(lái)自VEGFR1的Ig結(jié)構(gòu)域2組成，所述VEGFR1的Ig結(jié)構(gòu)域2與來(lái)自VEGFR2的Ig結(jié)構(gòu)域3融合，所述VEGFR2的Ig結(jié)構(gòu)域3又與IgG1的Fc結(jié)構(gòu)域融合(SEQ IDNO2)。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，將編碼VEGF捕獲劑的表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到CHO細(xì)胞內(nèi)，所述CHO細(xì)胞將VEGF捕獲劑分泌到培養(yǎng)基中。所產(chǎn)生的VEGF捕獲劑是蛋白分子量為97kDa的二聚糖蛋白，并包含～15％的糖基化從而產(chǎn)生115kDa的總分子量。
因?yàn)閂EGF捕獲劑利用高親和力受體的結(jié)合結(jié)構(gòu)域來(lái)結(jié)合其配體，所以其對(duì)VEGF的親和力大于單克隆抗體。VEGF捕獲劑結(jié)合VEGF-A(KD＝0.5pM)、PLGF1(KD＝1.3nM)以及PLGF2(KD＝50pM)；與VEGF家族其他成員的結(jié)合還未被完全表征。
組合治療在眾多實(shí)施方案中，VEGF捕獲劑可以與一種或多種另外的化合物或療法組合施用，包括第二種VEGF捕獲分子、化學(xué)治療劑、外科手術(shù)、用于完成胸膜腔引流的導(dǎo)管裝置以及放射。組合治療包括施用包含VEGF捕獲劑和一種或多種另外的試劑的單一藥物劑量制劑；以及施用其自身分開的藥物劑量制劑形式的VEGF捕獲劑和一種或多種另外的試劑。例如，VEGF捕獲劑與細(xì)胞毒性試劑、化學(xué)治療劑或生長(zhǎng)抑制劑可以以單一劑量組合物例如組合制劑的形式一起給患者施用，或每種試劑可以以分開的劑量制劑形式施用。使用分開的劑量制劑時(shí)，本發(fā)明的VEGF特異性融合蛋白以及一種或多種另外的試劑可以同時(shí)施用，或在分別錯(cuò)開的時(shí)間即順次地施用。
如本文所使用的，術(shù)語(yǔ)“細(xì)胞毒性試劑”指抑制或阻止細(xì)胞功能和/或?qū)е录?xì)胞破壞的物質(zhì)。該術(shù)語(yǔ)希望包括放射性同位素(例如，I131、I125、Y90和Re186)，化學(xué)治療劑，以及毒素，例如細(xì)菌、真菌、植物或動(dòng)物來(lái)源的酶活性毒素或其片段。
“化學(xué)治療劑”是在癌癥治療中有用的化學(xué)化合物。化學(xué)治療劑的實(shí)例包括烷化劑例如三胺硫磷和環(huán)磷酰胺(Cytoxan)；烷基磺酸鹽類例如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶類例如苯佐替哌(benzodopa)、卡波醌、美妥替哌(meturedopa)和烏瑞替哌(uredopa)；乙撐亞胺類和甲基蜜胺類(methylamelamines)，包括六甲蜜胺、三乙撐蜜胺、三乙撐磷酰胺、三乙撐硫代磷酰胺和三羥甲基蜜胺(trimethylolomelamine)；氮芥類例如苯丁酸氮芥、萘氮芥、cholophosphamide、磷雌氮芥、異環(huán)磷酰胺、氮芥、鹽酸氧氮芥、苯丙氨酸氮芥、新氮芥、苯芥膽甾醇、松龍苯芥、氯乙環(huán)磷酰胺、尿嘧啶氮芥；硝基脲類(nitrosureas)例如雙氯乙基亞硝脲、氯脲菌素、福莫司汀、環(huán)己亞硝脲、嘧啶亞硝脲、雷莫司??；抗生素例如阿克拉霉素(aclacinomysins)、放射菌素、authramycin、重氮絲氨酸、博來(lái)霉素、放線菌素C、刺孢霉素、carabicin、洋紅霉素、嗜癌霉素、色霉素、放線菌素D、柔紅霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、阿霉素、表柔比星、依索比星、去甲氧基柔紅霉素、麻西羅霉素、絲裂霉素、霉酚酸、諾加霉素、橄欖霉素、派來(lái)霉素、potfiromycin、嘌呤霉素、三鐵阿霉素、羅多比星、鏈黑霉素、鏈唑霉素、殺結(jié)核菌素、烏苯美司、新制癌菌素、佐柔比星；抗代謝物例如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU)；葉酸類似物例如二甲葉酸、甲氨蝶呤、蝶酰三谷氨酸、三甲曲沙；嘌呤類似物例如氟達(dá)拉濱、6-巰基嘌呤、硫唑鳥嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物例如環(huán)胞苷、氮雜胞苷、6-氮雜尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、雙脫氧尿苷、去氧氟尿苷、依諾他賓、氟尿嘧啶脫氧核苷；雄激素類例如卡魯睪酮、屈他雄酮丙酸酯、環(huán)硫雄醇、美雄烷、睪內(nèi)酯；抗腎上腺藥(anti-adrenals)例如氨苯哌酮、米托坦、曲洛司坦；葉酸補(bǔ)充劑例如frolinic acid；醋葡醛內(nèi)酯；醛磷酰胺糖苷(aldophosphamide glycoside)；氨基乙酰丙酸；安吖啶；bestrabucil；比山群；依達(dá)曲沙；磷胺氮芥(defofamine)；秋水仙胺；地吖醌；elfornithine；依利醋銨；依托格魯；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；氯尼達(dá)明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌達(dá)醇；二胺硝吖啶；噴司他??；蛋氨氮芥；吡柔比星；鬼臼酸；2-乙基肼；甲基芐肼；PSK；丙亞胺；西佐喃；鍺螺胺；細(xì)交鏈孢菌酮酸；三亞胺醌；2，2′，2″-三氯三乙胺；烏拉坦；長(zhǎng)春酰胺；氮烯咪胺；甘露醇氮芥；二溴甘露醇；二溴衛(wèi)矛醇；哌泊溴烷；gacytosine；阿糖胞嘧啶(“Ara-C”)；環(huán)磷酰胺；三胺硫磷；紫杉烷類，例如紫杉醇(Taxol，Bristol-Myers Squibb Oncology，Princeton，N.J.)和多西他賽(Taxotere；Aventis Antony，F(xiàn)rance)；苯丁酸氮芥；吉西他濱；6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲氨蝶呤；鉑類似物例如順鉑和卡鉑；長(zhǎng)春堿；鉑；依托泊苷(VP-16)；異環(huán)磷酰胺；絲裂霉素C；米托蒽醌；長(zhǎng)春新堿；長(zhǎng)春瑞濱；諾維本；諾消靈；替尼泊苷；道諾霉素；氨喋呤；希羅達(dá)；伊班膦酸鹽；CPT-11；拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑RFS 2000；二氟甲基鳥氨酸(DMFO)；視黃酸；esperamicins；卡培他濱；以及上述任何一種的藥物學(xué)上可接受的鹽、酸或衍生物。這個(gè)定義中還包括抗激素劑，所述抗激素劑產(chǎn)生調(diào)節(jié)或抑制激素對(duì)腫瘤的作用的效果，例如抗雌激素劑包括例如他莫昔芬、雷洛昔芬、抑制芳香酶(aromatase)的4(5)-咪唑、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬、那洛昔芬(keoxifene)、LY 117018、奧那司酮和托瑞米芬(Fareston)；以及抗雄激素劑例如氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、醋酸亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及上述任何一種的藥物學(xué)上可接受的鹽、酸或衍生物。
“生長(zhǎng)抑制劑”用于本文時(shí)指在體外或體內(nèi)抑制細(xì)胞特別是癌細(xì)胞生長(zhǎng)的化合物或組合物。生長(zhǎng)抑制劑的實(shí)例包括阻斷細(xì)胞周期進(jìn)程(在除S期以外的階段)的試劑，例如誘導(dǎo)G1停止和M期停止的試劑。典型的M期阻滯劑包括長(zhǎng)春花(長(zhǎng)春新堿和長(zhǎng)春堿)，Taxol，以及拓?fù)洚悩?gòu)酶II抑制劑例如阿霉素、表柔比星、柔紅霉素、依托泊苷和博來(lái)霉素。那些阻止G1的試劑也可以造成S期停止，例如，DNA烷化劑例如他莫昔芬、潑尼松、氮烯咪胺、氮芥、順鉑、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶和ara-C。
藥物組合物在本發(fā)明方法實(shí)踐中有用的藥物組合物包括治療上有效量的活性劑以及藥物學(xué)上可接受的載體。術(shù)語(yǔ)“藥物學(xué)上可接受的”指經(jīng)聯(lián)邦或州政府管理機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的或在美國(guó)藥典或其他普遍公認(rèn)的藥典中列出的用于動(dòng)物并且更具體而言用于人的。術(shù)語(yǔ)“載體(carrier)”指稀釋劑、佐劑、賦形劑或用于施用治療劑的媒介物。此類藥物載體可以是無(wú)菌的液體，例如水和油，包括石油、動(dòng)物、植物或合成來(lái)源的那些，例如花生油、大豆油、礦物油、芝麻油等。適當(dāng)?shù)乃幬镔x形劑包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、麥芽、米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、單硬脂酸甘油酯、滑石、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、丙稀、甘醇、水、乙醇等。需要時(shí)，該組合物還可包含少量濕潤(rùn)劑或乳化劑或pH緩沖劑。這些組合物可采取的形式有溶液、懸浮液、乳狀液、片劑、丸劑、膠囊、粉劑、持續(xù)釋放制劑等。該組合物可以被配制為含常規(guī)粘合劑和載體例如甘油三酯的栓劑?？诜苿┛梢园?biāo)準(zhǔn)載體例如藥物級(jí)別的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。E.W.Martin在″Remington′s PharmaceuticalSciences″中描述了適當(dāng)?shù)乃幬镙d體的實(shí)例。
在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，該組合物依照常規(guī)操作配制為適合于人類靜脈內(nèi)、皮下或肌內(nèi)給藥的藥物組合物。必要時(shí)，該組合物還可包括增溶劑和局部麻醉劑例如利多卡因以減輕注射位置處的疼痛。該組合物通過(guò)輸注施用時(shí)，它可以在包含藥物級(jí)別的無(wú)菌水或鹽水的輸注瓶中分散。該組合物通過(guò)注射施用時(shí)，可以提供1安瓿的無(wú)菌注射用水或鹽水，從而使得成分可以在施用前被混合。
本發(fā)明的活性劑可以被配制為中性或鹽形式。藥物學(xué)上可接受的鹽包括由游離的氨基基團(tuán)形成的鹽，例如由鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等衍生的鹽，以及由游離的羧基基團(tuán)形成的鹽，例如由氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣、氫氧化鐵、異丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、組氨酸、普魯卡因等衍生的鹽。
將在糖尿病治療中有效的本發(fā)明活性劑的量可以基于本說(shuō)明書通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)臨床技術(shù)來(lái)確定。此外，體外測(cè)定法可任選用于幫助鑒定最佳劑量范圍。用于制劑中的精確劑量還將取決于給藥途徑以及病狀的嚴(yán)重度，并且應(yīng)該根據(jù)從業(yè)醫(yī)生的判斷以及每個(gè)受試者的情況來(lái)決定。從由體外或動(dòng)物模型測(cè)試系統(tǒng)得到的劑量-響應(yīng)曲線可以外推出有效劑量。
對(duì)于全身給藥，最初可以由體外測(cè)定法估計(jì)治療上有效的劑量。例如，可以在動(dòng)物模型中配制劑量以達(dá)到循環(huán)濃度范圍，所述循環(huán)濃度范圍包括如細(xì)胞培養(yǎng)中所測(cè)定的IC50。此類信息可用于更精確地測(cè)定在人中的有用劑量。也可利用本領(lǐng)域眾所周知的技術(shù)由體內(nèi)數(shù)據(jù)例如動(dòng)物模型估計(jì)最初劑量。本領(lǐng)域普通的技術(shù)人員基于動(dòng)物數(shù)據(jù)可以很容易地優(yōu)化對(duì)人的給藥。
可以單獨(dú)調(diào)整劑量和間隔以提供足夠維持療效的化合物的血漿水平。無(wú)需過(guò)度實(shí)驗(yàn)，本領(lǐng)域技術(shù)人員將能夠優(yōu)化治療上有效的局部劑量。
當(dāng)然，所施用的化合物的量將取決于被治療的受試者，取決于該受試者的體重、痛苦的嚴(yán)重度、給藥方式以及開處方的醫(yī)師的判斷。當(dāng)癥狀可檢測(cè)時(shí)或甚至當(dāng)它們不可檢測(cè)時(shí)，可以間歇地重復(fù)該療法。該療法可以被單獨(dú)提供或與其他藥物組合提供。
給藥方法本發(fā)明提供了包括對(duì)受試者施用有效量的本發(fā)明試劑的治療方法。在一個(gè)優(yōu)選方面，該試劑是基本上純化的(例如，基本上不含限制其效果或產(chǎn)生所不希望的副作用的物質(zhì))。受試者優(yōu)選為動(dòng)物，例如牛、豬、馬、雞、貓、狗等，優(yōu)選為哺乳動(dòng)物，最優(yōu)選為人。
各種遞藥系統(tǒng)是已知的并且可以用于施用本發(fā)明試劑，例如封裝在脂質(zhì)體中、微粒、微囊、能夠表達(dá)該化合物的重組細(xì)胞、受體介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)吞作用(參見，例如Wu和Wu，1987，J.Biol.Chem.2624429-4432)、構(gòu)建核酸作為逆轉(zhuǎn)錄病毒或其他載體的一部分，等等。導(dǎo)入方法可以是經(jīng)腸的或腸胃外的，包括但不限于皮內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、鼻內(nèi)以及口服。所述化合物可以通過(guò)任何方便的途徑施用，例如通過(guò)輸注或推注，通過(guò)經(jīng)上皮的或粘膜與皮膚的襯層(例如口腔粘膜，直腸和腸粘膜等)的吸收，并且可以與其他生物學(xué)活性試劑一起施用。施用可以是全身的或局部的。施用可以是急性的或長(zhǎng)期的(例如每日、每周、每月等等)，或者可以與其他試劑組合。
在另一實(shí)施方案中，可以在囊泡特別是脂質(zhì)體中輸送活性劑(參見Langer(1990)Science 2491527-1533)。在另一實(shí)施方案中，以控釋系統(tǒng)輸送活性劑。在一個(gè)實(shí)施方案中，可以利用泵(參見Langer(1990)，同上)。在另一實(shí)施方案中，可以使用聚合物材料(參見Howard等人，(1989)J.Neurosurg.71105)。在其中本發(fā)明的活性劑是編碼蛋白質(zhì)的核酸的另一實(shí)施方案中，通過(guò)將其構(gòu)建為合適的核酸表達(dá)載體的一部分并施用之從而使得它變成細(xì)胞內(nèi)的，該核酸可施用于體內(nèi)以促進(jìn)其編碼的蛋白質(zhì)的表達(dá)，例如通過(guò)利用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(參見，例如美國(guó)專利號(hào)4,980,286)，或通過(guò)直接注射，或通過(guò)利用微粒轟擊(例如，基因槍；Biolistic，Dupont)，或用脂質(zhì)或細(xì)胞表面受體或轉(zhuǎn)染劑包裹，或通過(guò)將其與已知進(jìn)入核的同源異型框樣肽連接施用(參見例如Joliot等人，1991，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 881864-1868)等?？商娲?，通過(guò)同源重組，核酸可以被導(dǎo)入細(xì)胞內(nèi)并整合到宿主細(xì)胞DNA內(nèi)以便表達(dá)。
具體實(shí)施方案惡性胸腔積液(MPE)是晚期非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)的常見并發(fā)癥。癥狀性MPE一般通過(guò)引流來(lái)治療，并且非固定式胸膜腔導(dǎo)管(Pleur-XTM)已經(jīng)顯示為用于此用途的標(biāo)準(zhǔn)胸管胸廓造口術(shù)的可行替代療法。雖然MPE的引流可以提供癥狀改善，但化學(xué)療法是顯示改善晚期NSCLC患者總體存活率的唯一療法。帶有原位Pleur-XTM導(dǎo)管的患者還可以用化學(xué)療法進(jìn)行治療，然而由于據(jù)報(bào)告導(dǎo)管相關(guān)感染的發(fā)生率為3-5％，在這種情況下非骨髓抑制性化學(xué)療法將是優(yōu)選的?？紤]到體內(nèi)數(shù)據(jù)提示VEGF在MPE產(chǎn)生中有突出作用，上述VEGF捕獲拮抗劑在MPE的治療中可能具有特別的功效。
本發(fā)明的其他特征在下列示例性實(shí)施例的描述過(guò)程中將是顯而易見的，所述實(shí)施例為了舉例說(shuō)明本發(fā)明而給出并不是希望限制本發(fā)明。
實(shí)施例提出下列實(shí)施例是為了給本領(lǐng)域普通技術(shù)人員提供如何制造并使用本發(fā)明方法和組合物的完整公開內(nèi)容和描述，而不是希望限制本發(fā)明人視為其發(fā)明的范圍。已付出努力確保關(guān)于所使用的數(shù)字(例如量、溫度等)的精確性，但某些試驗(yàn)誤差和偏差應(yīng)當(dāng)被說(shuō)明。除非另有說(shuō)明，份是重量份，分子量是平均分子量，溫度是攝氏度數(shù)，和壓力為大氣壓或接近大氣壓。
實(shí)施例1患者選擇和治療包含標(biāo)準(zhǔn)(1)病理診斷為IIIB-IV期的NSCLC成人患者，所述患者適合于全身化療并且具有需要引流治療的MPE；(2)至少70％的Karnofsky體力狀況；(3)足夠的血細(xì)胞計(jì)數(shù)、腎和肝功能；(4)維持非固定式Pleur-XTM引流導(dǎo)管的能力。
排除標(biāo)準(zhǔn)(1)正在用另一種試劑進(jìn)行化學(xué)治療；(2)以前用VEGF抑制劑進(jìn)行過(guò)化學(xué)治療；(3)活性的或未治療的腦轉(zhuǎn)移。
首要終點(diǎn)(1)安全性和耐受性；(2)化學(xué)治療前后VEGF-A的血清和胸腔積液水平的改變；(3)化學(xué)治療前后從MPE分離的脫落細(xì)胞的系列基因表達(dá)分析。
其他待測(cè)的結(jié)果變量(1)隨著時(shí)間過(guò)去收集的胸膜液的體積和比率；(2)胸膜聯(lián)合/Pleur-XTM導(dǎo)管去除的時(shí)間。胸膜聯(lián)合被定義為，在至少一周內(nèi)每隔一天進(jìn)行的3次連續(xù)引流得到≤50ml胸膜液，這提示可以去除導(dǎo)管；(3)放射學(xué)的應(yīng)答率；(4)疾病進(jìn)展的時(shí)間；(5)胸腔積液的復(fù)發(fā)率；(6)存活率。
方案概要VEGF捕獲劑的最佳劑量和時(shí)間表仍未確定?；谀壳暗腎期試驗(yàn)的設(shè)計(jì)，建議VEGF捕獲劑的II期劑量為0.3-5mg/kg，IV q2w。合格的患者在登記前必須提供試服志愿書。患者被醫(yī)院接受以安置Pleur-XTM非固定式引流導(dǎo)管(第0天)。為了預(yù)防肺復(fù)張后肺水腫，初始引流體積被限制為1500cc胸膜液。在第0-1天的過(guò)程中每隔8小時(shí)可以引流一次另外的液體(最高達(dá)1000cc)。從第3天開始，胸膜液引流每隔一天進(jìn)行一次(qod)。為了確保液體足夠分析，在任何后續(xù)計(jì)劃的液體收集的前一天不引流胸膜液。
如下所述將胸膜液初始樣本進(jìn)行處理以用于細(xì)胞病理學(xué)、提取腫瘤特異性RNA和VEGF-A水平。在第0-1天獲得胸部CT掃描，隨后開始化學(xué)治療。從第1天開始每2周輸送一次VEGF捕獲劑。每周收集一次胸膜液(第1天、第8天等)。第8天從MPE分離脫落細(xì)胞用于基因微陣列分析。確定Pleur-XTM導(dǎo)管正確運(yùn)行并施行了第1天的化學(xué)治療后，患者出院。在第1天以及此后每周的化學(xué)治療后24-72小時(shí)獲得另外的胸膜液樣本和VEGF水平。
由于下述原因中的任何一個(gè)，患者離開本研究(1)無(wú)法忍受化學(xué)治療的副作用；(2)由病史、體格檢查和/或CT掃描確定的疾病進(jìn)展；(3)達(dá)到胸膜聯(lián)合并去除Pleur-XTM導(dǎo)管；(4)任何與Pleur-XTM導(dǎo)管相關(guān)的并發(fā)癥并且不能恢復(fù)Pleur-XTM導(dǎo)管運(yùn)行。一旦離開本研究，患者將由治療醫(yī)生自行處理治療，但將被長(zhǎng)期隨訪胸腔積液的復(fù)發(fā)、治療進(jìn)展的時(shí)間和存活。
實(shí)施例2.胸膜液的標(biāo)準(zhǔn)分析在胸廓造口術(shù)或大容量胸腔穿刺術(shù)中收集的胸腔積液樣本被用于分析惡性細(xì)胞的存在。在分析前樣本在冰上最多保存3天。將大約50ml的液體置于錐形管內(nèi)并離心10分鐘。沉淀的碎片在2ml緩沖的防腐液中重懸浮，隨后利用自動(dòng)化Thin-prep Processor或手動(dòng)式雙漏斗Cytospin裝置固定在載玻片上。所得到的載玻片用標(biāo)準(zhǔn)PAP染色法或Diff-Quik染色法進(jìn)行染色，隨后在顯微鏡下檢查。還可以對(duì)制備的、固定的載玻片實(shí)施免疫細(xì)胞化學(xué)染色以幫助診斷。因此，為了完整的病理分析，需要的胸膜液最大量為50ml。剩余樣本保存在冰箱中，并且一般在幾天后丟棄。
胸腔積液中發(fā)現(xiàn)的細(xì)胞類型包括血細(xì)胞(白細(xì)胞和紅細(xì)胞)、反應(yīng)性間皮細(xì)胞和惡性細(xì)胞。樣本之間惡性細(xì)胞的濃度變化很大。免疫細(xì)胞化學(xué)常規(guī)用于細(xì)胞學(xué)分析以區(qū)別增生性間皮細(xì)胞與惡性細(xì)胞，并幫助鑒定惡性細(xì)胞的來(lái)源部位(Fetsch等人(2001)Cancer93293-308)。肺癌中常見的診斷困境是區(qū)別腺癌(NCSLC)與間皮瘤。為了進(jìn)行這種區(qū)分，病理學(xué)家利用幾種重要的抗原，包括鈣視網(wǎng)膜蛋白，它幾乎只在間皮瘤中表達(dá)，以及BerEP4、B72.3和CA19-9，它們只在腺癌中表達(dá)。BerEP4是通過(guò)用來(lái)自MCF7乳癌細(xì)胞株的細(xì)胞免疫小鼠而制備的抗體。BerEP4與存在于上皮細(xì)胞的表面上和細(xì)胞質(zhì)中的兩種糖蛋白(包括人上皮細(xì)胞抗原，HEA)反應(yīng)(藥品說(shuō)明書，Carrpenteria(1998)Dako Corp.)。該抗體不與間皮細(xì)胞、神經(jīng)、神經(jīng)膠質(zhì)、肌肉或間充質(zhì)組織(包括淋巴組織)反應(yīng)。在各種系列中，BerEP4已經(jīng)顯示與所有被測(cè)腺癌的32-96％反應(yīng)，在肺癌中比率較高(＞80％)，而與間皮細(xì)胞反應(yīng)性低(0-8％)。
本發(fā)明可以其他具體形式體現(xiàn)，而不離開其精神或基本屬性。
序列表<110>Regeneron Pharmaceuticals，Inc.
Memorial Sloan-Kettering Cancer Center<120>用于治療惡性胸腔積液的VEGF抑制劑<130)>718A-WO<140>To be Assigned<141>2005-06-17<150>60/580,893<151>2004-06-18<160>2<170>FastSEQ for Windows Version 4.0<210>1<211>1377<212>DNA<213>智人<400>1atggtcagct actgggacac cggggtcctg ctgtgcgcgc tgctcagctg tctgcttctc 60acaggatcta gttccggaag tgataccggt agacctttcg tagagatgta cagtgaaatc 120cccgaaatta tacacatgac tgaaggaagg gagctcgtca ttccctgccg ggttacgtca 180cctaacatca ctgttacttt aaaaaagttt ccacttgaca ctttgatccc tgatggaaaa 240cgcataatct gggacagtag aaagggcttc atcatatcaa atgcaacgta caaagaaata 300gggcttctga cctgtgaagc aacagtcaat gggcatttgt ataagacaaa ctatctcaca 360catcgacaaa ccaatacaat catagatgtg gttctgagtc cgtctcatgg aattgaacta 420tctgttggag aaaagcttgt cttaaattgt acagcaagaa ctgaactaaa tgtggggatt 480gacttcaact gggaataccc ttcttcgaag catcagcata agaaacttgt aaaccgagac 540ctaaaaaccc agtctgggag tgagatgaag aaatttttga gcaccttaac tatagatggt 600gtaacccgga gtgaccaagg attgtacacc tgtgcagcat ccagtgggct gatgaccaag 660aagaacagca catttgtcag ggtccatgaa aaggacaaaa ctcacacatg cccaccgtgc 720ccagcacctg aactcctggg gggaccgtca gtcttcctct tccccccaaa acccaaggac 780accctcatga tctcccggac ccctgaggtc acatgcgtgg tggtggacgt gagccacgaa 840gaccctgagg tcaagttcaa ctggtacgtg gacggcgtgg aggtgcataa tgccaagaca 900aagccgcggg aggagcagta caacagcacg taccgtgtgg tcagcgtcct caccgtcctg 960caccaggact ggctgaatgg caaggagtac aagtgcaagg tctccaacaa agccctccca 1020
gcccccatcg agaaaaccat ctccaaagcc aaagggcagc cccgagaacc acaggtgtac 1080accctgcccc catcccggga tgagctgacc aagaaccagg tcagcctgac ctgcctggtc 1140aaaggcttct atcccagcga catcgccgtg gagtgggaga gcaatgggca gccggagaac 1200aactacaaga ccacgcctcc cgtgctggac tccgacggct ccttcttcct ctacagcaag 1260ctcaccgtgg acaagagcag gtggcagcag gggaacgtct tctcatgctc cgtgatgcat 1320gaggctctgc acaaccacta cacgcagaag agcctctccc tgtctccggg taaatga 1377<210>2<211>458<212>PRT<213>智人<400>2Met Val Ser Tyr Trp Asp Thr Gly Val Leu Leu Cys Ala Leu Leu Ser1 5 10 15Cys Leu Leu Leu Thr Gly Ser Ser Ser Gly Ser Asp Thr Gly Arg Pro20 25 30Phe Val Glu Met Tyr Ser Glu Ile Pro Glu Ile Ile His Met Thr Glu35 40 45Gly Arg Glu Leu Val Ile Pro Cys Arg Val Thr Ser Pro Asn Ile Thr50 55 60Val Thr Leu Lys Lys Phe Pro Leu Asp Thr Leu Ile Pro Asp Gly Lys65 70 75 80Arg Ile Ile Trp Asp Ser Arg Lys Gly Phe Ile Ile Ser Asn Ala Thr85 90 95Tyr Lys Glu Ile Gly Leu Leu Thr Cys Glu Ala Thr Val Asn Gly His100 105 110Leu Tyr Lys Thr Asn Tyr Leu Thr His Arg Gln Thr Asn Thr Ile Ile115 120 125Asp Val Val Leu Ser Pro Ser His Gly Ile Glu Leu Ser Val Gly Glu130 135 140Lys Leu Val Leu Asn Cys Thr Ala Arg Thr Glu Leu Asn Val Gly Ile145 150 155 160Asp Phe Asn Trp Glu Tyr Pro Ser Ser Lys His Gln His Lys Lys Leu165 170 175Val Asn Arg Asp Leu Lys Thr Gln Ser Gly Ser Glu Met Lys Lys Phe180 185 190Leu Ser Thr Leu Thr Ile Asp Gly Val Thr Arg Ser Asp Gln Gly Leu195 200 205Tyr Thr Cys Ala Ala Ser Ser Gly Leu Met Thr Lys Lys Asn Ser Thr210 215 220Phe Val Arg Val His Glu Lys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys225 230 235 240Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
245 250 255Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys260 265 270Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp275 280 285Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu290 295 300Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu305 310 315 320His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn325 330 335Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly340 345 350Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu355 360 365Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr370 375 380Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn385 390 395 400Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe405 410 415Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn420 425 430Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr435 440 445Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys450 45權(quán)利要求
1.血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)拮抗劑在制備用于通過(guò)下述方法治療患有惡性胸腔積液的人類患者的藥物中的用途，所述VEGF拮抗劑包含兩個(gè)融合多肽的二聚體，每個(gè)多肽包含F(xiàn)lt-1的免疫球蛋白(Ig)樣結(jié)構(gòu)域2和Fltk-1或Flt-4的Ig樣結(jié)構(gòu)域3以及多聚化組分，所述方法包括對(duì)所述患者施用治療上有效量的所述VEGF拮抗劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的用途，其中所述VEGF拮抗劑選自乙?；腇lt-1(1-3)-Fc、Flt-1(1-3R-＞N)-Fc、Flt-1(1-3ΔB)-Fc、Flt-1(2-3ΔB)-Fc、Flt-1(2-3)-Fc，F(xiàn)lt-1D2-VEGFR3D3-FcΔC1(a)、Flt-1D2-Flk-1D3-FcΔC1(a)和VEGFR1R2-FcΔC1(a)。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的用途，其中所述VEGF拮抗劑是包含SEQ ID NO2的氨基酸序列的VEGFR1R2-FcΔC1(a)。
4.根據(jù)前述權(quán)利要求中任何一項(xiàng)的用途，其中所述藥物被配制成用于皮下、肌內(nèi)、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、鼻內(nèi)或口服給藥。
5.根據(jù)前述權(quán)利要求中任何一項(xiàng)的用途，其中所述惡性胸腔積液與非小細(xì)胞肺癌相關(guān)。
6.根據(jù)前述權(quán)利要求中任何一項(xiàng)的用途，其中所述方法進(jìn)一步包括以胸膜腔引流治療患者。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的用途，其中所述引流是經(jīng)由胸腔導(dǎo)管或胸管胸廓造口術(shù)進(jìn)行的。
8.根據(jù)前述權(quán)利要求中任何一項(xiàng)的用途，其中所述方法進(jìn)一步包括用化學(xué)治療劑治療所述患者。
9.根據(jù)前述權(quán)利要求中任何一項(xiàng)的用途，其中所述方法包括以約0.3mg/kg-約30mg/kg，優(yōu)選0.5-10mg/kg，更優(yōu)選1-6mg/kg的劑量施用所述VEGF拮抗劑。
10.根據(jù)前述權(quán)利要求中任何一項(xiàng)的用途，其中所述方法包括每1-3天、每1-2周或每月施用一次所述VEGF拮抗劑。
11.根據(jù)前述權(quán)利要求中任何一項(xiàng)的用途，其中所述方法包括每周一次或更頻繁地通過(guò)皮下注射施用所述VEGF拮抗劑。
12.一種治療患有惡性胸腔積液的人類患者的方法，其包括對(duì)所述人類患者施用有效量的如權(quán)利要求1、2或3中所定義的VEGF拮抗劑。
13.根據(jù)權(quán)利要求12的方法，其中所述施用如權(quán)利要求4、9、10或11中任何一項(xiàng)所定義。
14.根據(jù)權(quán)利要求12-13中任何一項(xiàng)的方法，其中所述患者如權(quán)利要求6或7中所定義進(jìn)一步以胸膜腔引流進(jìn)行治療。
15.根據(jù)權(quán)利要求12-14中任何一項(xiàng)的方法，其進(jìn)一步包括用化學(xué)治療劑治療所述患者。
全文摘要
通過(guò)對(duì)人類患者施用有效量的血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)抑制劑來(lái)治療患有惡性胸腔積液的人類患者的方法。該VEGF抑制劑是包含二聚體蛋白的VEGF捕獲蛋白，所述二聚體蛋白具有兩個(gè)融合多肽，所述融合多肽具有SEQ ID NO2的序列。
文檔編號(hào)C07K16/28GK1968709SQ200580020091
公開日2007年5月23日 申請(qǐng)日期2005年6月17日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月18日
發(fā)明者J·M·塞德鮑姆, C·G·阿佐利, M·G·吉里斯, J·杜邦 申請(qǐng)人:瑞澤恩制藥公司, 斯隆凱特林防癌紀(jì)念中心