專利名稱：去乙酰車葉草酸甲酯的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及去乙酰車葉草酸甲酯的制備方法，尤其是從茜草科植物中的提取制備方法。
背景技術(shù)：
去乙酰車葉草酸甲酯為一種環(huán)烯醚萜類化合物，環(huán)烯醚萜及其苷類在植物界分布較廣，以雙子葉植物，尤其是唇形科、茜草科、龍膽科等植物中分布相當廣泛。目前已從植物中分離并鑒定結(jié)構(gòu)的環(huán)烯醚萜類化合物已超過800種，其中大都為苷類成分，并且有顯著的藥理作用，如梔子苷、京尼平苷和京尼平苷酸是清熱瀉火中藥山梔子的主成分，京尼平苷顯示有顯著的瀉下作用和利膽作用。
去乙酰車葉草酸甲酯作為梔子中的一種環(huán)烯醚萜苷類成分，有報道其具有導瀉的作用。由于環(huán)烯醚萜苷易水解，所以給制備造成了相當?shù)碾y度。在眾多環(huán)烯醚萜類化合物中，關(guān)于去乙酰車葉草酸甲酯的研究的非常少，在中國中藥雜志1999年第24卷第一期“大黃梔子果實化學成分的研究”中曾記載了它的制備方法。采用的是將梔子藥材(4kg)醇提，石油醚脫脂，反復過聚酰胺柱和葡聚糖凝膠柱層析的方法制備，并將洗脫液用氯仿、正丁醇萃取，經(jīng)大孔樹脂純化，再經(jīng)硅膠柱或制備層析，可得去乙酰車葉草酸甲酯(3mg)。其結(jié)構(gòu)式如下 梔子甙 R＝葡萄糖， R1＝H京尼平-1-β-D-龍膽雙糖甙 R＝龍膽雙糖，R1＝H雞矢藤次甙甲酯 R＝葡萄糖， R1＝β-OH去乙?；嚽安菟峒柞? R＝葡萄糖， R1＝α-OH
該方法采用了易燃的石油醚做溶劑，并使用了價格較高的聚酰胺柱層析，工藝比較復雜，提取收率不高。
在ZL 91101254.0“用環(huán)烯醚萜甙或其甙元作為制造染發(fā)化妝品的應用”中去乙酰車葉草酸甲酯可以作為制造染發(fā)化妝品的成份之一，可使染發(fā)獲得較好的效果。其制備由車葉草甙(1.0g)溶于蒸餾水中，通過加入BaO在甲醇中的飽和溶液將pH值調(diào)至10，將溶液放置使之形成白色渾濁，將其中和濃縮后，通過硅膠柱色譜法處理，可得去乙酰車葉草酸甲酯(1.80mg)。其車葉草甙由墊子草提取純化制得，32.8kg的墊子草可得68.0g車葉草甙，需萃取，濃縮，上色譜柱，等程序。這個專利的兩步制備較為復雜。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問題是公開一種去乙酰車葉草酸甲酯的制備方法，以克服現(xiàn)有技術(shù)所存在的方法比較復雜，收率低的缺陷。
本發(fā)明的方法包括如下步驟①、采用有機溶劑對含有去乙酰車葉草酸甲酯的植物藥材提取分離；②、分離液反復經(jīng)硅膠柱色譜及凝膠柱色譜分離；③、相應流份進行結(jié)晶與重結(jié)晶，獲得去乙酰車葉草酸甲酯；本發(fā)明優(yōu)選包括如下步驟將含有去乙酰車葉草酸甲酯的植物藥材用6～10重量倍的體積濃度為30～95％的乙醇回流提取，提取時間為1～4小時，提取液在60～90℃的溫度下真空濃縮至比重為1.05～1.40(80℃)，將有機溶劑加入濃縮液，依次進行三步萃取第一步萃取用的有機溶劑選自環(huán)己烷、正己烷、乙醚或氯仿中的一種或其中的兩種依次進行，第一步萃取用的有機溶劑與濃縮液的體積比為第一步萃取用的有機溶劑∶濃縮液＝2～10∶1；
第二步萃取用的有機溶劑選自乙酸乙酯，第二步萃取用的有機溶劑與第一步的萃余液的體積比為第二步萃取用的有機溶劑∶第一步的萃余液＝1.5～10∶1；第三步萃取用的有機溶劑選自正丁醇，第三步萃取用的有機溶劑與第二步的萃余液的體積比為第三步萃取用的有機溶劑∶第二步的萃余液＝2～20∶1；或?qū)饪s液拌入吸附劑，用有機溶劑對吸附劑進行回流洗脫，回流洗脫分三步進行，所用的有機溶劑前兩步與萃取用有機溶劑相同，第三步采用的有機溶劑選自正丁醇、丙酮、乙醇或甲醇中的一種或其中的兩種依次進行。
按照本發(fā)明優(yōu)選的方法，先將濃縮液拌入硅藻土，干燥，然后依次用濃縮液6～18倍體積的有機溶劑進行回流提取0.5～5小時，濃縮液與硅藻土的重量比例為1∶0.5～8。
取含去乙酰車葉草酸甲酯的第三步萃取液或回流洗脫液，濃縮，上硅膠柱色譜及凝膠柱色譜分離，色譜過程可多次進行，兩種色譜可以依次交替反復；硅膠柱色譜采用硅膠進行裝柱，用氯仿、甲醇和水的混合物梯度洗脫，體積份數(shù)為氯仿95～60份，甲醇5～40份，水0～10份；凝膠柱色譜采用的是葡聚糖凝膠sephadex LH20裝柱，用甲醇進行洗脫，收集去乙酰車葉草酸甲酯流份，可得去乙酰車葉草酸甲酯粗品，結(jié)晶，得去乙酰車葉草酸甲酯純品。
所說的含有去乙酰車葉草酸甲酯的植物為茜草科植物，優(yōu)選白花蛇舌草；術(shù)語“梯度洗脫”指的是使流動相中含有兩種或兩種以上不同極性的溶劑，在洗脫過程中連續(xù)或間斷改變流動相的組成，以調(diào)節(jié)它的極性，使每個流出的組分都有合適的容量因子，并使樣品中的所有組分可在最短的分析時間內(nèi)，以適用的分離度獲得完滿的選擇性分離。
按照本發(fā)明優(yōu)選的方法，梯度洗脫時，先采用氯仿和甲醇的混合物洗脫3～5次，氯仿與甲醇的體積份數(shù)比例由氯仿∶甲醇＝90∶10份起，氯仿依次遞減2～3份，甲醇依次遞增2～3份，最后采用氯仿、甲醇和水的混合物洗脫，體積份數(shù)比例為氯仿∶甲醇∶水＝75～88∶12～25∶0～5。
本發(fā)明的特點1.制備過程簡單，重現(xiàn)性好，純度高，可達98％以上。
2.采用的提取溶劑為常用溶劑，簡便易得。
3.硅膠柱色譜及凝膠柱色譜提取的方法簡便，為現(xiàn)在通用的技術(shù)方法，易于推廣。


圖1為去乙酰車葉草酸甲酯質(zhì)譜。
圖2為去乙酰車葉草酸甲酯IR譜圖3為去乙酰車葉草酸甲酯UV譜具體實施方式
實施例1取白花蛇舌草藥材750g，粗碎，用6倍重量的體積濃度為70％的乙醇回流提取三次，每次1小時，獲得提取液，將提取液在80℃下真空濃縮至比重為1.30(80℃)，將濃縮液依次用800ml的正己烷、500ml的乙酸乙酯和1200ml的正丁醇萃取，取正丁醇萃取液濃縮，經(jīng)硅膠柱色譜，采用氯仿、甲醇和水的混合物進行梯度洗脫，體積份數(shù)依次為氯仿∶甲醇∶水＝90∶10∶0，88∶12∶0，85∶15∶0，80∶20∶10，收集含去乙酰車葉草酸甲酯流份，結(jié)晶得去乙酰車葉草酸甲酯粗品，然后將粗品溶解于適量有機溶劑中，過葡聚糖凝膠sephadex LH20柱色譜，用甲醇洗脫，收集去乙酰車葉草酸甲酯流份，進行結(jié)晶，重結(jié)晶，得去乙酰車葉草酸甲酯純品120mg，純度為98％。質(zhì)譜見圖1，紅外光譜見圖2，紫外光譜見圖3。
白色結(jié)晶，mp.131～135℃，茴香醛-硫酸試劑顯蘭色；IR vmaxcm-13369(OH)，2908，1689，1635，1440，1375，1311；UV λmax(MeOH)nm236；FABMS 427(M++Na)；1H NMR(500MHz)δppm7.63(1H，brsH3)，5.96(1H，brs H7)，4.91(1H，d，J＝9Hz，H1)，4.78(1H，m，H6)，4.18，4.38(各1H，d，J＝16，H10)，3.3～3.7(6H，糖中含氧碳的偕氫)，3.67(3H，s，OCH3)，3.06(1H，t，J＝6Hz，H5)，2.58(1H，t，J＝7Hz，H9)；13CNMR(125MHz)(D2O)172.5(C11)，157.7(C3)，151.8(C8)，131.4(C7)，109.4(C4)，103.3(C1)，78.8(C3)，78.3(C5)，76.7(C6)，75.4(C2)，72.1(C4)，63.2(C6)，62.7(C10)，54.5(OCH3)，47.0(C9)，43.0(C5)。
結(jié)構(gòu)通式如下 R1＝HR2＝CH3實施例2取白花蛇舌草藥材750g，粗碎，用9倍重量的體積濃度為90％的乙醇回流提取三次，每次2.5小時，獲得提取液，將提取液在80℃下真空濃縮至比重為1.05(80℃)，將濃縮液依次用1000ml的正己烷、500ml的氯仿、1000ml的乙酸乙酯和1500ml的正丁醇萃取，取正丁醇萃取液經(jīng)硅膠柱色譜，采用氯仿、甲醇和水的混合物進行梯度洗脫，體積份數(shù)順序依次為氯仿∶甲醇∶水＝95∶5∶0.5，90∶10∶5，85∶15∶5，收集含去乙酰車葉草酸甲酯流份，過葡聚糖凝膠sephadex LH20柱色譜，用甲醇洗脫，收集去乙酰車葉草酸甲酯流份，進行結(jié)晶，重結(jié)晶，得去乙酰車葉草酸甲酯純品121mg，純度為98.2％。
實施例3取白花蛇舌草藥材750g，粗碎，用8倍重量的體積濃度為90％的乙醇回流提取三次，每次2小時，獲得提取液，將提取液在70℃下真空濃縮至比重為1.35(80℃)，獲得濃縮液；將濃縮液拌入250克硅藻土，依次用2300ml的氯仿、2500ml的乙酸乙酯、2100ml的乙醇進行回流洗脫4小時，取乙醇洗脫液濃縮，上硅膠柱色譜，采用氯仿，甲醇，水的混合溶液進行梯度洗脫，體積份數(shù)順序依次為氯仿∶甲醇∶水＝90∶10∶0，88∶12∶0；洗脫液上葡聚糖凝膠sephadex LH20柱，用甲醇洗脫，再反復經(jīng)硅膠柱和葡聚糖凝膠柱色譜，收集去乙酰車葉草酸甲酯流份，得去乙酰車葉草酸甲酯粗品，進行結(jié)晶，重結(jié)晶，得去乙酰車葉草酸甲酯純品130mg，純度為98.5％。
權(quán)利要求
1.一種去乙酰車葉草酸甲酯的制備方法，其特征在于，包括如下步驟①、采用有機溶劑對含有去乙酰車葉草酸甲酯的植物藥材提取分離；②、分離液反復經(jīng)硅膠柱色譜及凝膠柱色譜分離；③、相應流份進行結(jié)晶與重結(jié)晶，獲得去乙酰車葉草酸甲酯。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，包括如下步驟將含有去乙酰車葉草酸甲酯的植物藥材用乙醇回流提取，提取液濃縮，將有機溶劑加入濃縮液，依次進行三步萃取第一步萃取用的有機溶劑選自環(huán)己烷、正己烷、乙醚或氯仿中的一種或其中的兩種依次進行；第二步萃取用的有機溶劑選自乙酸乙酯；第三步萃取用的有機溶劑選自正丁醇；或?qū)饪s液拌入吸附劑，用有機溶劑回流洗脫吸附劑，依次進行三步回流洗脫；前兩步有機溶劑與萃取用有機溶劑相同，第三步采用的有機溶劑選自正丁醇、丙酮、乙醇或甲醇中的一種或其中的兩種依次進行。取含去乙酰車葉草酸甲酯的第三步萃取液或回流洗脫液，濃縮，上硅膠柱色譜及凝膠柱色譜分離；硅膠柱色譜用氯仿、甲醇和水的混合物梯度洗脫；凝膠柱色譜用甲醇進行洗脫，收集去乙酰車葉草酸甲酯流份，結(jié)晶，得去乙酰車葉草酸甲酯純品。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，將含有去乙酰車葉草酸甲酯的植物藥材用6～10重量倍的體積濃度為30～95％的乙醇回流提取，提取時間為1～4小時。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，提取液在60～90℃的溫度下真空濃縮至比重為1.05～1.40(80℃)。5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，第一步萃取用的有機溶劑與濃縮液的體積比為第一步萃取用的有機溶劑∶濃縮液＝2～10∶1；第二步萃取用的有機溶劑與第一步的萃余液的體積比為第二步萃取用的有機溶劑∶第一步的萃余液＝1.5～10∶1；第三步萃取用的有機溶劑與第二步的萃余液的體積比為第三步萃取用的有機溶劑第二步的萃余液＝2～20∶1。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，先將濃縮液拌入吸附劑，然后依次用6～18倍體積的有機溶劑進行回流洗脫0.5～5小時，濃縮液與吸附劑的體積重量比例為1∶0.5～8。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的方法，其特征在于，吸附劑優(yōu)選硅藻土。
8.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，色譜過程可多次進行，兩種色譜依次交替反復。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，硅膠柱色譜用氯仿、甲醇和水的混合物梯度洗脫，體積份數(shù)為氯仿95～60份，甲醇5～40份，水0～10份。
10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，凝膠柱色譜采用的是葡聚糖凝膠sephadex LH20裝柱。
11.根據(jù)權(quán)利要求1～10任一項所述的方法，其特征在于，所說的含有去乙酰車葉草酸甲酯的植物為茜草科植物。
全文摘要
本發(fā)明涉及去乙酰車葉草酸甲酯的制備方法。包括如下步驟①采用有機溶劑對含有去乙酰車葉草酸甲酯的植物藥材提取分離；②分離液經(jīng)硅膠柱色譜及凝膠柱色譜；③相應流份進行結(jié)晶與重結(jié)晶，獲得去乙酰車葉草酸甲酯。本發(fā)明制備過程簡單，重現(xiàn)性好，純度高，可達98％以上，采用的提取溶劑為常用溶劑，簡便易得，硅膠柱色譜及凝膠柱色譜提取的方法簡便，為現(xiàn)在通用的技術(shù)方法，易于推廣。
文檔編號C07H1/08GK101085794SQ20061002753
公開日2007年12月12日 申請日期2006年6月10日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月10日
發(fā)明者斯建勇, 沈連鋼, 韋飛燕, 張艷華 申請人:廣西壯族自治區(qū)花紅藥業(yè)股份有限公司