專利名稱：一種分離純化去乙酰車葉草酸甲酯的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥有效成分提取技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種采用高速逆流色譜法分離純化去乙酰車葉草酸甲酯的方法。
背景技術(shù)：
去乙酷車葉草酸甲酉旨(deacetyl asperulosidic acid methyl ester)，別名去乙酰車葉草苷酸甲酯，分子式=C17H24O11,分子量為404. 366，去乙酰車葉草酸甲酯為白色粉末， 易溶于甲醇和水，是從桅子、白花蛇舌草等植物中分離得到的環(huán)烯醚萜類化合物，環(huán)烯醚萜類化合物在植物界分布廣泛，且具有顯著的藥理作用，如具有瀉下和利膽作用的京尼平苷等。有文獻報道去乙酰車葉草酸甲酯具有導(dǎo)瀉作用?，F(xiàn)有制備去乙酰車葉草酸甲酯的報道
1、王鋼力等在文獻“大黃桅子果實化學(xué)成分的研究”中以桅子為原料，石油醚脫脂、反復(fù)過聚酰胺柱和葡聚糖凝膠柱層析的方法，氯仿、正丁醇作為洗脫機，經(jīng)大孔樹脂純化，再經(jīng)硅膠柱或制備薄層層析，得到去乙酰車葉草酸甲酯(王鋼力，趙淑杰，陳德昌，等.大黃桅子果實化學(xué)成分的研究.中國中藥雜志，1999，24 (1):38-39.)。2、中國專利申請?zhí)?00610027531. 5“去乙酰車葉草酸甲酯的制備方法”，采用乙醇
回流提取，提取液濃縮，有機溶劑三步萃取。分離也反復(fù)經(jīng)硅膠柱色譜及凝膠柱色譜分離， 結(jié)晶、重結(jié)晶，得到去乙酰車葉草酸甲酯。上述方法均反復(fù)使用固體填料柱色譜，操作繁瑣，生產(chǎn)周期長，樣品損失較大，得率低，成本高，不適合工業(yè)化生產(chǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種用高速逆流色譜法從白花蛇舌草中分離純化去乙酰車葉草酸甲酯的方法，高速逆流色譜法不同于傳統(tǒng)的柱色譜需使用固體填料，而是應(yīng)用兩相互不混溶的溶劑系統(tǒng)在支撐管內(nèi)高速行星運動的方式下進行天然產(chǎn)物的分離純化，因而無不可逆吸附，具有樣品無損失、無污染、高效、快速和大制備量分離的優(yōu)點。本發(fā)明的技術(shù)方案是這樣實現(xiàn)的
采用高速逆流色譜儀進行制備，其工藝流程如下
將白花蛇舌草全草粉碎，50%乙醇微波提取20min，反復(fù)提取3_6次，提取液過濾濃縮后得白花蛇舌草粗浸膏；
溶劑系統(tǒng)由正庚烷、二氯甲烷、甲醇和水組成，其體積比為(0. 5-2) (4-6) (3-5) (2-4)，將上述溶劑系統(tǒng)配置于分液漏斗中充分振搖，靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將白花蛇舌草粗浸膏溶解于下相溶液中備用，在室溫條件下用高速逆流色譜儀進行分離，將固定相充滿逆流色譜柱，然后使主機轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速為800-900r/min，再將流動相泵入柱內(nèi)，由進樣閥進入制備好的樣品溶液，根據(jù)檢測器圖譜收集流分，濃縮干燥得產(chǎn)品。本發(fā)明的積極效果是本發(fā)明采用高速逆流色譜法，無需固體填料，無不可逆吸附，樣品無損失、無污染、高效，通過多次進樣，連續(xù)制備，大大縮短了制備時間，提高制備量；本發(fā)明方法工藝簡單、效率高、產(chǎn)品純度高。
具體實施例方式下面將結(jié)合具體實施例對本發(fā)明進行詳盡的解釋，但下面所提供的實施例只是為了說明本發(fā)明，并不是對本發(fā)明的限制。實施例1
取白花蛇舌草全草500g粉碎成粗粉，用50%乙醇微波提取20min，反復(fù)提取6次，提取液過濾后濃縮，得到白花蛇舌草粗浸膏；
選用正庚烷、二氯甲烷、甲醇和水為溶劑系統(tǒng)，按體積比1:4:3:2配置于分液漏斗中充分振搖，靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將白花蛇舌草粗浸膏IOOmg溶解于5ml 下相溶液中備用，在室溫條件下用半制備高速逆流色譜儀進行分離，取固定相泵入高速逆流色譜柱中，開動主機，調(diào)整轉(zhuǎn)速900rpm，泵入流動相，待有液體流出，調(diào)整流速2ml/min， 由進樣閥進樣品溶液，根據(jù)紫外檢測器圖譜收集目標(biāo)成分，連續(xù)制備，低溫干燥得到IOlmg 去乙酰車葉草酸甲酯，經(jīng)UV、IR、MS、2HNMR、13CNMR等表征其物理性狀的數(shù)據(jù)與現(xiàn)有文獻一致。實施例2:
取白花蛇舌草全草500g粉碎成粗粉，用50%乙醇微波提取20min，反復(fù)提取5次，提取液過濾后濃縮，得到白花蛇舌草粗浸膏；
選用正庚烷、二氯甲烷、甲醇和水為溶劑系統(tǒng)，按體積比0.5:5:4:3配置于分液漏斗中充分振搖，靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將白花蛇舌草粗浸膏IOOmg溶解于 5ml下相溶液中備用，在室溫條件下用半制備高速逆流色譜儀進行分離，取固定相泵入高速逆流色譜柱中，開動主機，調(diào)整轉(zhuǎn)速900rpm，泵入流動相，待有液體流出，調(diào)整流速^iil/ min，由進樣閥進樣品溶液，根據(jù)紫外檢測器圖譜收集目標(biāo)成分，連續(xù)制備，低溫干燥得到 100. 5mg去乙酰車葉草酸甲酯，經(jīng)UV、頂、MS、2HNMR、13CNMR等表征其物理性狀的數(shù)據(jù)與現(xiàn)有文獻一致。實施例3:
取白花蛇舌草全草500g粉碎成粗粉，用50%乙醇微波提取20min，反復(fù)提取4次，提取液過濾后濃縮，得到白花蛇舌草粗浸膏；
選用正庚烷、二氯甲烷、甲醇和水為溶劑系統(tǒng)，按體積比2:5:3:4配置于分液漏斗中充分振搖，靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將白花蛇舌草粗浸膏IOOmg溶解于5ml 下相溶液中備用，在室溫條件下用半制備高速逆流色譜儀進行分離，取固定相泵入高速逆流色譜柱中，開動主機，調(diào)整轉(zhuǎn)速850rpm，泵入流動相，待有液體流出，調(diào)整流速3ml/min， 由進樣閥進樣品溶液，根據(jù)紫外檢測器圖譜收集目標(biāo)成分，連續(xù)制備，低溫干燥得到98. 5mg 去乙酰車葉草酸甲酯，經(jīng)UV、IR、MS、2HNMR、13CNMR等表征其物理性狀的數(shù)據(jù)與現(xiàn)有文獻一致。實施例4:
取白花蛇舌草全草500g粉碎成粗粉，用50%乙醇微波提取20min，反復(fù)提取3次，提取液過濾后濃縮，得到白花蛇舌草粗浸膏；選用正庚烷、二氯甲烷、甲醇和水為溶劑系統(tǒng)，按體積比1:6:5:2配置于分液漏斗中充分振搖，靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將白花蛇舌草粗浸膏IOOmg溶解于 5ml下相溶液中備用，在室溫條件下用半制備高速逆流色譜儀進行分離，取固定相泵入高速逆流色譜柱中，開動主機，調(diào)整轉(zhuǎn)速800rpm，泵入流動相，待有液體流出，調(diào)整流速2. 5ml/ min，由進樣閥進樣品溶液，根據(jù)紫外檢測器圖譜收集目標(biāo)成分，連續(xù)制備，低溫干燥得到 97. Omg去乙酰車葉草酸甲酯，經(jīng)UV、IR、MS、2HNMR、13CNMR等表征其物理性狀的數(shù)據(jù)與現(xiàn)有文獻一致。
權(quán)利要求
1.1、一種分離純化去乙酰車葉草酸甲酯的方法，其特征在于采用高速逆流色譜儀進行制備，其工藝流程如下將白花蛇舌草全草粉碎，50%乙醇微波提取20min，反復(fù)提取3_6次，提取液過濾濃縮后得白花蛇舌草粗浸膏；溶劑系統(tǒng)由正庚烷、二氯甲烷、甲醇和水組成，其體積比為(0. 5-2) (4-6) (3-5) (2-4)，將上述溶劑系統(tǒng)配置于分液漏斗中充分振搖，靜置分層，取上相為固定相，下相為流動相，將白花蛇舌草粗浸膏溶解于下相溶液中備用，在室溫條件下用高速逆流色譜儀進行分離，將固定相充滿逆流色譜柱，然后使主機轉(zhuǎn)動，轉(zhuǎn)速為800-900r/min，再將流動相泵入柱內(nèi)，由進樣閥進入制備好的樣品溶液，根據(jù)檢測器圖譜收集流分，濃縮干燥得產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種分離純化去乙酰車葉草酸甲酯的方法，采用半制備型高速逆流色譜儀，其特征在于，溶劑系統(tǒng)由正庚烷、二氯甲烷、甲醇、水組成，將溶劑系統(tǒng)置于分液漏斗中充分振搖后靜置分層，取上相作固定相，下相為流動相，將白花蛇舌草粗提物溶解于下相溶液中制成樣品溶液，通過高速逆流色譜儀，紫外光譜儀檢測，按色譜峰收集流分，濃縮干燥，得到高純度去乙酰車葉草酸甲酯。本發(fā)明方法不需使用固體填料，沒有不可逆吸附，高效、快速和大制備量分離去乙酰車葉草酸甲酯的方法，且其制備工藝簡單，容易操作，純化效率高，為白花蛇舌草中有效成分的提取利用奠定了堅實的基礎(chǔ)。
文檔編號C07H1/08GK102336793SQ20111022556
公開日2012年2月1日 申請日期2011年8月8日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月8日
發(fā)明者劉東鋒, 郭琴 申請人:南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司