專利名稱：：Il-17a和il-17f拮抗劑以及使用所述拮抗劑的方法IL-17A和IL-17F拮抗劑以及使用所述拮抗劑的方法
背景技術(shù)：
：細(xì)胞因子是介導(dǎo)多種生物學(xué)效應(yīng)的可溶性小蛋白質(zhì)，所述生物學(xué)效應(yīng)包括對多種細(xì)胞類型的生長和分化的調(diào)節(jié)(參見例如，Araiefa/.，J/z/h/."/oc力e瓜i"義783(1990);Mosmann，C〃,r,iaaz7朋o人J:311(1991);PaulandSeder,7《241(1994))。屬于細(xì)胞因子的蛋白質(zhì)包括白細(xì)胞介素、干擾素、集落刺激因子、肺瘤壞死因子和其他的調(diào)節(jié)性分子。例如，人類白細(xì)胞介素-17是一種刺激白細(xì)胞介素-6、胞內(nèi)粘附M1、白細(xì)J!&^^素-8、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子和前列腺素E2的表達(dá)的細(xì)胞因子，它還參與了CD34+造血前體選擇成熟為嗜中性粒細(xì)胞的過程(YaoWa/.，//鵬朋o/.Ji^5483(1995);Fossiezefa丄，/^r;.#edJ《J:2593(1996))。結(jié)合細(xì)胞因子的受體通常由一種或多種膜內(nèi)在蛋白質(zhì)構(gòu)成，它們以高親和力結(jié)合細(xì)胞因子，并將這一結(jié)合事件通過某些受體亞基的胞質(zhì)部分傳導(dǎo)至細(xì)胞?；诟鞣N細(xì)胞因子受體的^卜配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的相似性，可以將^4t細(xì)胞因子受體分為幾類。已經(jīng)證實(shí)的一些細(xì)胞因子及其受體的體內(nèi)活性，表明了，的細(xì)胞因子、細(xì)胞因子受體、細(xì)胞因子激動劑和細(xì)胞因子拮抗劑具有臨床應(yīng)用前景，并且也表明需要這些其他的細(xì)胞因子、細(xì)胞因子受體、細(xì)胞因子激動劑和細(xì)胞因子拮抗劑。例如，已經(jīng)證實(shí)的促炎細(xì)胞因子家族的體內(nèi)活性，表明了促炎襯的拮抗劑具有多種臨床應(yīng)用前景，并且樣明需要這些促炎襯的拮抗劑。圖lA和lB是人類IL-17RCxl(SEQIDNO:2)的外顯子結(jié)構(gòu)的示意圖。對于密碼子被外顯子/內(nèi)^接頭掩^的那些氨基酸，已除去接頭部分以將完整的密碼子包含在內(nèi)。圖2A和2B是人類IL-17RCx4(SEQIDNO:166)的外顯子結(jié)構(gòu)的示意圖。圖3是人類IL-17RA(SEQIDNO:21)的外顯子結(jié)構(gòu)的示意圖。6圖4A和4B是本文所述的位于SEQIDNO:157和158中的一種本發(fā)明怖^的可溶性多肽的外顯子結(jié)構(gòu)的示意圖。這一可溶性多肽既包括來自人類IL-17RA(SEQIDN0:21)的外顯子,也包括來自人類IL-17RCxl(SEQIDNO:2)的外顯子。圖5是使用實(shí)施例34所述方法進(jìn)行的一種典型測定的結(jié)果的示意圖。該圖^)Prizffl軟件程序生成的。Y值卩化標(biāo)準(zhǔn)化的MFI值，所述標(biāo)準(zhǔn)化過程是將只有配體的孔的MFI值設(shè)為最大值(1000，將沒有S己體/沒有可溶性受體的對照孔的MFI值設(shè)為最小值(OW,由此表示配體與細(xì)胞的結(jié)合百分比。用軟件計(jì)算了每條曲線的IC50值。M實(shí)施方式本發(fā)明通過提，炎細(xì)胞因子IL-17A和IL-17F的拮抗劑滿足了上述需要。糾而言，所述促炎細(xì)胞因子IL-17A和IL-17F具有高度的序列相似性，并具有許多共同的生物學(xué)性質(zhì)，而JL^由激活的T細(xì)胞產(chǎn)生。它們都作為可^U^^種自身免疫性和炎性疾病進(jìn)程的因子，所述疾病包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和哮喘。事實(shí)上在一些/v類疾病的小鼠模型中，能夠抑制IL-17A功能的試劑顯著降低了疾病的發(fā)病率和嚴(yán)重程度。IL-17A通過與其同源受體IL-17受體(IL-17R)相互作用而介導(dǎo)其效應(yīng)，但是還未識別到IL-17F的受體。以前我們已經(jīng)報(bào)菱了IL-17RC是IL-17A和IL-17F二者的受體，并且以相近的高親和力與二者結(jié)合。另一方面，IL-17R以高親和力與IL-17A結(jié)合，但僅以非常低的親和力與IL-17F結(jié)合。與上述報(bào)道相一致的是，已顯示可溶形式的IL-17R在表達(dá)^—種受體的細(xì)胞中阻斷IL-17A的結(jié)合和信號傳導(dǎo)，但是它不會千擾IL-17F與IL-17RC的結(jié)合或IL-17F對IL-17RC的作用。既然有人已經(jīng)提出IL-17A千預(yù)可以作為對一些自身免疫性疾病的有效療法，那么4吏用能夠阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17A和/或IL-17F的活性的本發(fā)明的拮抗劑應(yīng)該能夠比僅耙向這兩種細(xì)胞因子之一的療法更異阮勢，所ii4^發(fā)明的拮抗劑包括可溶性的IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA受體。本發(fā)明還提供了上迷拮抗劑用于炎性疾病的用途，以;M目關(guān)組合物和方法。A)綜述的表現(xiàn)或結(jié)果，所述生物途徑在正常生理M下對于下述過程非常重要:對損害或損傷的應(yīng)答，對損害或損傷的起始修復(fù)，以及對于外來的器官產(chǎn)生先天或后天的防御。當(dāng)上述正常生理途徑導(dǎo)致附加的損害或損傷時(shí)就^JL生疾病或病癥，所述損害或損傷可能直接與應(yīng)答的強(qiáng)度相關(guān)，或作為異常調(diào)節(jié)或it^刺激的結(jié)果，或作為自身的反應(yīng)，或;Ul述方式的組合。雖然上述疾病的發(fā)生通常會涉及多個步驟的途徑，并通常會涉及多種不同的生物系統(tǒng)/途徑，但是對上述一種或多種途徑中的關(guān)統(tǒng)泉進(jìn)行干預(yù)仍可具有^j^性或治療性效果。治療性干預(yù)可以通過拮抗有害過程/途徑或刺激有利過程/途徑而進(jìn)行。已經(jīng)知道并已廣^JW究過許多免疫相關(guān)疾病。這類疾病包括免疫介導(dǎo)的炎性疾病(例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、免疫介導(dǎo)的腎臟疾病、肝膽管疾病、炎性腸病(I則、銀屑病和哮喘)、非免疫介導(dǎo)的炎性疾病、傳染性疾病、免疫缺陷性疾病、瘤形成等。T淋巴細(xì)胞(T細(xì)胞)是哺乳動物的免疫應(yīng)答的一個重要部分。T細(xì)胞識別由的抗原。所述抗原與MHC^"—^^現(xiàn)于抗原呈遞細(xì)胞、病^感染的細(xì)胞、癌癥細(xì)胞、移植物等的表面。T細(xì)胞系統(tǒng)會清除這些可能對宿主哺乳動物的M產(chǎn)生威脅的改變過的細(xì)胞。T細(xì)胞包括輔助T細(xì)胞和細(xì)^^性T細(xì)胞。輔助T細(xì)胞在識別到抗原呈遞細(xì)胞上的抗原一MHC復(fù)合物后會大量增殖。輔助T細(xì)to分泌多種細(xì)胞因子，即淋巴因子，它們在B細(xì)胞、細(xì)I&^性T細(xì)胞和多種參與免^1答的其他細(xì)胞的激活中起關(guān)鍵性作用。在體液和細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答中的一個關(guān)鍵事件是輔助T細(xì)胞的激活和克隆擴(kuò)增。輔助T細(xì)胞的激活過禾1^始于T細(xì)胞受體(TCR)—CD3復(fù)合物與抗原呈遞細(xì)g面上的抗原一MHC的相互作用。這一相互作用介導(dǎo)了一系列,的生物化學(xué)事件并導(dǎo)致IL-2的高親和性受體沐時(shí)是IL-4的高親和性受體)的表達(dá)，所述級聯(lián)的生物化學(xué)事件謗導(dǎo)靜息的輔助T細(xì)胞進(jìn)入細(xì)胞周期(G0期轉(zhuǎn)變至G1期)。激活的T細(xì)胞經(jīng)過增殖和分化周期，成為記憶細(xì)M效應(yīng)細(xì)胞。除了通過TCR介導(dǎo)的信號"卜，1細(xì)胞的激活還涉及由抗原呈遞細(xì)|&#^丈的細(xì)胞因子誘導(dǎo)的或通過與抗原呈遞細(xì)胞和T細(xì)胞上的膜結(jié)合分子的相互作用誘導(dǎo)的另外的共刺激。已顯示細(xì)胞因子IL-l和IL-6可提供共刺激信號。另夕卜，抗原呈遞細(xì)胞表面Ji^達(dá)的B7分子與T細(xì)胞表面Ji^達(dá)的CD28和CTLA-4分子之間的相互作用也導(dǎo)致T細(xì)胞的激活。激活的T細(xì)j^4達(dá)更多數(shù)量的細(xì)胞粘附分于，例如ICAM-1、整聯(lián)蛋白、VLA-4、LFA-1、CD56等等。在混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)物或混合淋巴細(xì)胞M(MLR)中的T細(xì)胞增殖是一種化合物刺激免疫系統(tǒng)的能力的公認(rèn)指標(biāo)。在多種免^答中，炎癥細(xì)M潤受傷或感染的位置。遷移細(xì)胞可為嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸'1±*立細(xì)胞、單核細(xì)l&il淋巴細(xì)胞，它們^T通過受影響組織的組織學(xué)檢查而確定。CurrentProtocolsinImmunology,ed.JohnE.Coligan，1994，JohnWiley&Sons,Inc?？赏ㄟ^抑制免a答治療免疫相關(guān)疾病。使用能抑制有免疫刺激活性的分子的可溶性受體和/或中和抗體對于治療免疫介導(dǎo)疾病和炎性疾病將是有利的。可以應(yīng)用能抑制免M答的W(直接應(yīng)用蛋白質(zhì)或通過4^抗體激動劑)來抑制免a答，并由jthM)^免疫相關(guān)疾病。白細(xì)Jf&介素-17(IL-17A)已初L識別為;(^鼠猴(Saimiri)親T'淋巴細(xì)胞皰滲病毒(HSV)編碼的蛋白質(zhì)的細(xì)胞直系同源物[參見Rouvieretal.，J.Immunol.,150(12):5445-5456(19993);Yaoetal.,J.Immunol.,122(12):5483-5486(1995)和Yaoetal.，Immunity,3(6):811-821(1995)]。后續(xù)的鑒定研究顯示，這一蛋白是能在多種外周組織中誘導(dǎo)促炎應(yīng)答的有效細(xì)胞因子。IL-17A是一種大小約為32kDa的由二4u鍵連接的同二聚體細(xì)胞因子，它僅由CD4+激活的記憶T細(xì)胞合成和分泌(參見Fossiezetal.，Int.Rev.Immunol.，16:541-551[1998]的綜述)。特別地，IL-17被合成為一種帶有一個19至23個g的N端信號序列的155個M酸的前體多肽，并且以由二^l^i^接的同二聚⑩蛋白的形式分泌。11-17A/^開于W09518826(1995)、WO9715320(1997)和W09704097(1997)以及美國專利No.6,063，372。雖然IL-17A的組織分布范圍很窄，但是它卻^JL現(xiàn)對多種類型的細(xì)^5具有多重生物學(xué)活性。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)IL-17A能夠刺激多種細(xì)胞因子的產(chǎn)生。它誘導(dǎo)粘附細(xì)胞例如成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞、上皮細(xì)I^內(nèi)皮細(xì)胞分泌IL-6、IL-8、IL-12、白血病抑制因子(LIF)、前列腺素E2、MCP-1和G-CSF。IL-17Aii能夠誘導(dǎo)ICAM-1的表面表達(dá)、T細(xì)胞的增殖和CD34+人類祖細(xì)胞的生長以及分化為嗜中性粒細(xì)胞。IL-17A還參與骨代謝，并且它還被證明在以激活的T細(xì)胞的存在和TNF-ct的產(chǎn)生為特征的病理性疾病中起重要作用，所述病理性疾病例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨^UV物的^^(VanBezooijenetal.，J.BoneMiner.Res.14:1513-1521[1999])。已發(fā)現(xiàn)來自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的滑液組織的激活T細(xì)胞分泌的IL-17A數(shù)量高于來自正常個體或骨關(guān)節(jié)炎患者的量(Chabaudetal.，ArthritisRheum.42:963-970[1999])。表明這種促炎細(xì)胞因子會積^U^促進(jìn)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎中的滑液炎癥。除了IL-17A的促炎作用夕卜，它似乎iiit過另一種機(jī)制參與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的病理學(xué)。例如，已顯示IL-17A可以誘導(dǎo)破骨細(xì)胞分化因子(ODF)的mRNA在成骨細(xì)胞中的表達(dá)(Kotakeetal.，J.Clin.Invest.,103:1345-1352[1999])。ODF刺激祖細(xì)胞分化為破骨細(xì)胞，破骨細(xì)胞是參與骨吸收的細(xì)胞。由于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者的滑液中IL-17A的水平顯著增高，因此IL-17A誘導(dǎo)的破骨細(xì)胞形成似乎在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的骨吸收中起關(guān)鍵作用。IL-17A還被認(rèn)為在某些其他自身免疫性障礙例如多發(fā)性硬化中起關(guān)鍵作用(Matuseviciusetal.，Mult.Scler.，5:101-104[1999])。另外還顯示，在人類巨噬細(xì)胞中，IL-17A通過胞內(nèi)信號傳導(dǎo)刺激Ca"流入和[cAMP]的減少(Jo麗ovicetal.，J.Immunol.，160:3513[1998])。用IL-17A處理成纖維細(xì)l&^i秀導(dǎo)NF—kb的激活[Yaoetal.，Immunity,3:811(1995)，Jovanovicetal.，見上文]，而用IL-17A處理巨噬細(xì)胞^"激活NF-kB和促細(xì)胞分裂劑激活的蛋白激酶(Shalom-Bareketal.，J.Biol.Chem.，273:27467[1998])。此外，IL-17A還與參與骨和軟骨生長的哺乳動物細(xì)胞因子樣因子7具有序列相似性。與IL-17A多肽具有序列相似性的絲蛋白質(zhì)有人類胚胎來源白細(xì)胞介素相關(guān)因子(EDIRF)和白細(xì)胞介素-20。與IL-17A的多種作用相一致的是，發(fā)現(xiàn)IL-17A的細(xì)胞表面受體廣j^4達(dá)于許多組織和細(xì)胞類型中(Yaoetal.，Cytokine,9:794[1997])。雖斜艮據(jù)人類IL-17A受體(IL-17R)的絲酸序列(866個絲酌預(yù)計(jì)該蛋白具有一個單跨膜結(jié)構(gòu)域和一個525個氨基酸的長胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，但是該受體序列是獨(dú)特的，并不類似于來自細(xì)胞因子/生長因子受體家族的任何受體的序列。將這一發(fā)現(xiàn)與IL-17A本身與，已知蛋白不相似這-^人i^目結(jié)合，表明IL-17AA其受體可能屬于一個信號傳導(dǎo)蛋白和受體的新家族。已經(jīng)證實(shí)IL-17A的活性是通it^合其獨(dú)特的細(xì)#面受體而被介導(dǎo)的，其中以前的研究顯示將T細(xì)胞與可溶形式的IL-17A受體多^M目接觸會抑制由PHA、伴刀豆球蛋白A和抗TCR單克隆抗體i秀導(dǎo)的T細(xì)胞增殖和IL-2的產(chǎn)生(Yaoetal.，J.Immunol.,155:5483-5486[1995])。因此，人們對于識別和表征與已知細(xì)胞因子受體特別是IL-17A受體具有同源性的新多肽具有濃厚的興趣。IL-17F的表維式似乎與IL-17M目似，以至于它僅包^^激活的004+T細(xì)胞和單核細(xì)胞(Stamesetal.J.Immunol.167:4137-4140[2001])。已經(jīng)證實(shí)IL-17F在成纖維細(xì)胞中誘導(dǎo)G-CSF、IL-6和IL-8(Hymowitzetal，EMBOJ.20:5322-5341[2001]),在內(nèi)皮細(xì)胞中誘導(dǎo)TGF-b(Starnesetal.J.Immunol.167:4137-4140[2001])。最近報(bào)道了一種由樹突細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子IL-23可以——主要在記憶T細(xì)胞中——介導(dǎo)IL-17A和IL-17F的產(chǎn)生(Aggarwaletal.J.Biol.Chenu278:1910-1914[2003])。此外，在患關(guān)節(jié)炎和哮喘的個體體內(nèi)均顯示出IL-17A和IL-17F二者的it^達(dá)或上調(diào)(參見Moseleyetal.CytokineGrowthFactorRev14:155-174[2003]的綜述)。對于關(guān)節(jié)炎而言，上述細(xì)胞因子作用方式的特征為風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎相關(guān)的軟骨和關(guān)節(jié)損傷。例如，已經(jīng)證實(shí)"工軟骨移植物中，IL-17A和IL-17F會通過釋放軟骨蛋白聚糖糖胺聚糖和膠原片段并同時(shí)抑制新的蛋白聚糖和M^、的合成來增強(qiáng)M的降解(Caietal.Cytokine16:10—21[2001];AUuretalArthritisRheum44:2078-2083[2001])。與IL-17M目似，已顯示在小鼠體內(nèi)IL-17F的ii^達(dá)也會增加肺嗜中'l^^立細(xì)胞的募集，并導(dǎo)致Thl相關(guān)細(xì)胞因子在肺中的表達(dá)增加，所述Thl相關(guān)細(xì)胞因子包括IL-6、IFN-y、IP-10和MIG(Starnesetal.J.Immunol.167:4137-4140[2001])。在遭受變應(yīng)原攻擊的哮喘患者的T細(xì)胞中IL-17F也會上調(diào)(KawaguchietalLImmunol167:4430—4435[2001]),狄現(xiàn)IL-17F能誘導(dǎo)NHBE中IL-6和IL-8的產(chǎn)生。與IL-17A不同的是，IL-17F似乎在體外能夠抑制血管發(fā)生(Starnesetal.J.Immunol.167:4137—4140[2001])。在多種人類組織中用RNA印跡4f^測不到IL-17F的mRNA,但發(fā)現(xiàn)它在激活CD4+T細(xì)J^單核細(xì)^J^會顯著JHM皮誘導(dǎo)。同樣，在小鼠中，發(fā)現(xiàn)Th2細(xì)#肥大細(xì)胞(mastrcell)在^C^L活時(shí)會表達(dá)IL-17F。參見D咖ont，ExpertOpin.Ther.Patents13(3)(2003)。與IL-17A類似，在小鼠中^^現(xiàn)IL-17F的表達(dá)可被IL-23上調(diào)。IL-17細(xì)胞因子/受體家族似乎代表了細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)中的一個獨(dú)特的信號傳導(dǎo)系統(tǒng)，這個系統(tǒng)可以為免C^答和炎癥應(yīng)答的處理提供一種新的手段。因此，本發(fā)明基于如下發(fā)現(xiàn):發(fā)現(xiàn)了新的IL-17家族受體IL-17RC，以及它與IL-17A和IL-17F二者相結(jié)合的能力。起初是在使用生物信息學(xué)手段尋找與IL-17RA相關(guān)的蛋白質(zhì)時(shí)識別出了IL-17RC，并且是通過編碼IL-17受糾目關(guān)蛋白IL-17RC的cDNA識別出它的。雖然它與能結(jié)合IL-17家族典型成員IL-17A的IL-17受體(IL-17RA)具有明顯的相似性，而且也識別了IL-17細(xì)胞因子家族的五個其他成員，但是之前并未報(bào)道iiIL-17RC的特異性配體。然而如2005年6月10日提交的公布號為No.20060002925的美國專利申請No.11/150，533所述，IL-17A和IL-17F,皮識別為IL-17RC的特異性配體。具體而言，使用被編碼人類IL-17RA(hlL-17RA)或IL-17RC(hIL-17RC)的構(gòu)建^l定轉(zhuǎn)染的幼倉鼠腎細(xì)胞(朋K)識別了上述配體。使用針對hlL-17RA的單克隆抗體或針對hlL-17RC的多克隆抗血清，通itFACS分析確證了受體在表面的表達(dá)。為評估細(xì)胞因子的結(jié)合，^JU了生物素化形式的人類IL-17A、C、D、E和F，以及熒光染料綴合的鏈親和素，通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞因子與被轉(zhuǎn)染細(xì)胞的結(jié)合。結(jié)果清楚地顯示穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的表達(dá)hlL-17RA的BHK細(xì)胞不出所料地明顯結(jié)合人類IL-17A(hlL-17A)，而用空表達(dá)栽⑩染的細(xì)胞不能與所測試的任何IL-17家族成員相結(jié)合。還觀察到了人類IL-17F(hIL-17F)與hlL-17RA轉(zhuǎn)染細(xì)胞的相對較弱的結(jié)合，但是所測試的IL-17家族的其他成員沒有明顯的結(jié)合。還檢測了MlL-17家族成員與hlL-17RC轉(zhuǎn)染細(xì)胞的結(jié)合，注意到這些細(xì)胞都表現(xiàn)出與hlL-17F的明顯結(jié)合。此外，觀察到這些細(xì)胞與hlL-17A明顯結(jié)合，但是不與hIL-17C、D或E結(jié)合。上述數(shù)拾江明hlL-17RC是hlL-17F和hlL-17A二者的共同受體。此夕卜，還^"測了各種細(xì)胞因子濃度下的熒光水平，以確定hlL-17A和F對于hIL-17RA和hlL-17RC的相對親和力。通過比較各種細(xì)胞因子在其轉(zhuǎn)染體上的平均熒光強(qiáng)度，注意到hlL-17A與hlL-17RA的結(jié)合要比hlL-17F強(qiáng)得多，但^f起來兩種細(xì)胞因子與hIL-17RC轉(zhuǎn)染細(xì)胞的結(jié)合都同樣好。值得關(guān)注的是，細(xì)胞因子與同時(shí)表達(dá)兩種受體的細(xì)胞的結(jié)合看^^是加和性的，沒有協(xié)同性的跡象。接著，通過嘗試與未標(biāo)記的細(xì)胞因子的竟?fàn)幮越Y(jié)合，研究了這種結(jié)合的特染的朋K細(xì)胞^"^培養(yǎng)，并通itFACS定量分析結(jié)合的生物素化物;的量。^果顯示hIL-UA和F與hlL-17RC的結(jié)合都是特異性的，因?yàn)闈?gt;1逐漸增加的未標(biāo)記細(xì)胞因子^"f擾生物素化物質(zhì)的結(jié)合。事實(shí)上，未標(biāo)記的hlL-17A和F可以有效地與生物素化形式的這兩種細(xì)胞因子相互竟?fàn)幗Y(jié)合hlL-17RC轉(zhuǎn)染細(xì)胞，&明這兩種細(xì)胞因子以相近的親和力與hIL-17RC結(jié)合，并且它們的結(jié)合位點(diǎn)縱使不同也是有所重疊的。未標(biāo)記的hlL-17A也能與生物素化的hlL-17A和F有放fe竟?fàn)幗Y(jié)合hlL-17RA轉(zhuǎn)染細(xì)胞，而未標(biāo)記的hlL-17F表現(xiàn)出^上不能與hlL-17A竟?fàn)幗Y(jié)合hIL-17RA。錄明雖然hlL-17F表現(xiàn)出結(jié)合hlL-17RA的特異性，但是這種相互作用的親合度似乎比hlL-17A和hlL-17RA之間的相互作用要弱得多。進(jìn)4亍了飽和結(jié)^^研究以測量hlL-17A和F與hlL-17RC和hlL-17RA結(jié)合的親和力。在妙結(jié)合糾下，將穩(wěn)定表iihlL-17RA或hlL-17RC的朋K細(xì)胞系與碘化的hlL-17A或F—起培養(yǎng)，以測定每種細(xì)胞因子對于每種受體的親和常數(shù)。hlL-17A以相近的親和力與hlL-17RA和hlL-17RC結(jié)合(表l)。具體而言，如方法部分中所述，使用被所示受體轉(zhuǎn)染的BHK細(xì)胞來測定對于hlL-17A和hlL-17F的Ka值。結(jié)果顯示的是來自三次平行實(shí)驗(yàn)測定的平均Kd值。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>工表示hlL-17RC的xl剪接變體。此夕卜，hlL-17F對hlL-17RC的親和力與hlL-17樹這一受體的親和力相當(dāng)接近(見上表l)。然而與使用生物素化細(xì)胞因子所得到的結(jié)果相一致的是，hIL-17F對hlL-17RA的親和力比其他同樣條件測得的親和力低了將近1000倍。i^明雖然hlL-17A和F以相近的親和力與hlL-17RC結(jié)合，但是它們對hlL-17RA的親和力卻迥然不同。hlL-17RC以高親和力結(jié)合hlL-17A和F的這一，JL^結(jié)^^明，表iihlL-17RC的細(xì)胞對于hlL-17A和F應(yīng)有相等的應(yīng)答能力。另一方面，由于hlL-17RA以高親和力結(jié)合hIL-17A，而hlL-17F的相應(yīng)親和力要低約1000倍，這表明表達(dá)hIL-17RA的細(xì)胞在生理?xiàng)l降下可能只對hlL-17A有應(yīng)答。在之前的研究中已顯示出hlL-17RA的表達(dá)十分廣泛，但是^gi復(fù)了其^iijk細(xì)胞中的表達(dá)較高，而在，組織中較低。因此檢測了hIL-17RC的表達(dá)，以確定各表^式中的重疊程度。RNA印跡分析顯示，hlL-17RC在lM且織例如腎上腺、前列腺、肝#甲狀腺中表ii7K平較高，而在itii組織中沒有可^"測的表達(dá)。為進(jìn)一步研究這些受體^itjk細(xì)胞中的表達(dá)，還用多絲:FACS分析檢測了生物素化hlL-17A和F與外周血單核細(xì)胞(PBMC)的結(jié)合。結(jié)果顯示hlL-17A幾乎與所檢測的所有PBMC亞群都結(jié)合，而hlL-17F與任何上述亞群都沒有可檢測的結(jié)合。這一結(jié)果與hIL-17RA以高親和力結(jié)合hIL-17A但不結(jié)合hlL-17F的能力相符，而且與在PBMC中檢測hIL-17RC的mRNA的結(jié)果^目符?？傊鲜鰯?shù)據(jù)表明IL-17RC優(yōu)先在非壯組織中表達(dá)，而IL-17RA優(yōu)先^itj6L細(xì)胞中表達(dá)。hlL-17A和F與hlL-17RC轉(zhuǎn)染細(xì)胞的高親和力結(jié)合表明可溶形式的hIL-17RC可能是一種有效的治療手段。這類分子可能是這兩種細(xì)胞因子的有效拮抗劑。為直^^^r驗(yàn)上述推斷，以Fc-融^白的形式產(chǎn)生了可溶形式的人類hlL-17RC,并測試了它抑制hlL-17A和F的結(jié)合的能力。然后將上皿果與用可溶形式的hlL-17RA獲得的結(jié)果進(jìn)行比較。在結(jié)合反應(yīng)中使用了濃度it^斤增加的hIL-17RC-Ig或hIL-17RA-Ig,^H吏用FACS分析來評估可溶性受體對于生物素化細(xì)胞因子與穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的朋K細(xì)胞的結(jié)合的影響?？扇躀ihlL-17RC以;i^目同的程;l抑制hlL-17A和F的結(jié)合，而IL-17R家族的另一成員hlL-17RD的Fc-融^"白卻沒有作用。另一方面，可溶性hlL-17RA有艦阻斷了hlL-17A的結(jié)合，但是對hlL-17F的結(jié)合M沒有作用。在;)^測hlL-17A與iijk細(xì)胞的結(jié)合時(shí)^Mf到了相似的結(jié)果。這一結(jié)合可以^iiIL-17RA-Ig和hlL-17RC-Ig有效地阻斷，但不會凈處IL-17RD-Ig阻斷。上述數(shù)據(jù)與親和力測量所得到的結(jié)勤目一致，表明可溶性受體與它們的膜錨定形式的作用相同。作為評估人類hlL-17RC-Ig與hlL-17A和F結(jié)合的能力的另一種方式，Biacore分析評估了可溶性受體對這些細(xì)胞因子的親和力?？扇苄詇IL-l7RC以高親和力結(jié)合hlL-17A和F(表2)，這為將這一試劑在體內(nèi)用作hlL-17A和F兩者效果的拮抗劑的想法提供了額外的支持。M而言，將可溶性受獲到芯片上，并如下所述i^Ui行結(jié)合實(shí)驗(yàn)。ND=沒有可檢測的結(jié)合。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>由于人類的剪接變體非常多，因4誠們僅針對這些分子的一個亞群進(jìn)行了初始實(shí)驗(yàn)。被選擇用于這一分析的那些分子也不盡相同，有的含有外顯子7，有的不含有外顯子7，但是與小鼠的相應(yīng)分子不同的是所有的剪接變體^P^有整個外顯子8。存在于小鼠外顯子8序列中部的隱藏剪接受體并不存在于人類外顯子8中。然而，所測試的M剪接變體可以含有或不含有hlL-17RC外顯子12。這些變體被命名為hlL-17RCxl(在外顯子組成上與上述的小鼠xl相同)、hlL-17RCx4(在外顯子組成上與上述的小鼠x4相同)、hlL-17RCx2和hlL-17RCx7。另夕卜，在293F細(xì)胞中短暫表組些剪接變體，并測試了它們結(jié)合生物素化的小鼠和人類IL-17A和F的能力，測試結(jié)果總結(jié)于表3中。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表示完全包含于轉(zhuǎn)錄物中的外顯子。2(+)表示可檢測的明顯的細(xì)胞因子結(jié)合，所i^合是根據(jù)FACS所測熒光的顯著增加而評估的。(-)表示焚光沒有明顯的變化。與之前的實(shí)驗(yàn)結(jié)^目一致的是，hlL-17RCxl可以與hlL-17A和F兩者結(jié)合，但是不與任一種小鼠細(xì)胞因子結(jié)合。hIL-17RCx4也可以與這兩種人類細(xì)胞因子結(jié)合，與其小鼠相應(yīng)分子類似，它可以結(jié)合mlL-17F但不結(jié)合mlL-17A。hIL-17RCx2和x7不能結(jié)合測試的四種細(xì)胞因子中的任一種，但是它們在轉(zhuǎn)染細(xì)胞的表面有顯著的表達(dá)，因?yàn)獒槍IL-17RC的多克隆抗血清能染色CD8+細(xì)胞(數(shù)據(jù)未示出)。上述結(jié)合實(shí)驗(yàn)的結(jié)果^I定轉(zhuǎn)染的BHK細(xì)胞中也得到了很好的重復(fù)?？傊?，上述數(shù)據(jù)支持了下述結(jié)論IL-17RC蛋白的關(guān)鍵部分是結(jié)合人類細(xì)胞因子所必需的。多種出版物都涉及IL-17A，^"較少的出版物涉及IL-17F,^i人為它們會加重小鼠體內(nèi)的^f、誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(CIA)和人類類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的疾病進(jìn)程和嚴(yán)重程度。檢測了^^原免疫而誘發(fā)CIA的小鼠的關(guān)節(jié)和引流淋巴結(jié)(DLN)中的mIL-17A和F兩者的表達(dá)。通過實(shí)時(shí)PCR進(jìn)行的分析清楚地證實(shí)，與未免疫的對照相比，在患病小鼠的上述兩種組織中這兩種細(xì)胞因子均上調(diào)，清楚地表明表達(dá)與疾病相關(guān)。此外，ii^目同組織中檢測了mlL-17RA和mlL-17RC的相對表達(dá)。然而，在這種情況下，并沒有發(fā)現(xiàn)任一受體的表達(dá)與疾病之間的可重復(fù)的相關(guān)性。而且，DLN與非itiL組織(^A)相比，表ii7jc平有明顯的差異。與前述研究/v類受體表達(dá)的實(shí)M勤目一致，發(fā)現(xiàn)mIL-17RA^itjM且織中的表達(dá)更高，mIL-17RC在非itiL組織中的表達(dá)更高。這一數(shù)據(jù)表明mlL-17A^mlL-17F表達(dá)的表現(xiàn)形式與疾病相關(guān)，也表明這兩種必需受體在患病組織和正常組織中都有，i^明中和這些細(xì)胞因子可能是防止疾病A艮的有效療法。因此，證明IL-17A和F的同源受體為IL-17RC。值得注意的是，hlL-17RC以相似的親和力結(jié)合hIL-17A和F。由于這兩個IL-17家a員具有55。/fl的序列同一性，因此它們具有共同的受體也并不意外。然而，hlL-17RA與hlL-17A結(jié)合的親和力很高，但是與hlL-17F結(jié)合的親和力要低將近1000倍，i^明在生理?xiàng)l件下hIL-17RA不會結(jié)合hlL-17F。這暗示著表達(dá)hlL-17RC的細(xì)胞應(yīng)該對hIL-17A和F都產(chǎn)生應(yīng)答，而^JJihlL-17RA的細(xì)胞應(yīng)該僅對IL-17A有應(yīng)答。這一差異可能會影響這些細(xì)胞因子對不同組織的作用。通*達(dá)分析，顯示雖然IL-17RA的表達(dá)十分廣泛，但是它^Eitjk細(xì)胞中的表達(dá)更高，而IL-17RC傾向于在非itii組織中表達(dá)而不在造血細(xì)胞中表達(dá)。與此一致的是人類外周4核細(xì)胞的所有亞群都結(jié)合hIL-17A,但都不結(jié)合hlL-17F。而且，"明非#組織將會對IL-17A和F都有應(yīng)答，而itiL細(xì)l^^對IL-17A有應(yīng)答。對于細(xì)胞因子與不同IL-17RC剪接變體結(jié)合的這一;^測發(fā)現(xiàn)了受體中的細(xì)胞因子結(jié)合所必需的兩部分，這兩部分在小鼠和人類細(xì)胞因子的結(jié)^#性上有細(xì)孩i的差異。而且，不論所檢測的受體種類，對于細(xì)胞因子而言這些結(jié)^#性都是一致的。如表3中的數(shù)據(jù)所示，由于hIL-17A和F僅結(jié)合人類xl變體和人類x4變體，因此，外顯子12和整個外顯子8都是這些細(xì)胞因子結(jié)合IL-17RC所必需的。上述所有同種型都含有整個外顯子8和外顯子12，但是它們在是否含有外顯子7方面有所差異。ii^明外顯子7不是結(jié)合人類細(xì)胞因子所必需的。從現(xiàn)有信息似乎可以明顯看出生成IL-17A和IL-17F兩者功能的拮抗劑的重要性，現(xiàn)有信息表明IL-17A和F的表達(dá)與多種自身免疫性和炎性疾病的進(jìn)程都有很強(qiáng)的關(guān)聯(lián)性。這兩種細(xì)胞因子可誘導(dǎo)雞炎性細(xì)胞因子和趨化因子以及M金屬蛋白酶，它們會加重自身免疫性關(guān)節(jié)炎中的膠原和骨損傷。這一試劑可以作為與hL-17A和F有關(guān)的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和，炎性疾病的有效療法。因此，開發(fā)了可溶形式的人類IL-17RC作為IL-17A和IL-17F兩者的拮抗劑。這些可溶性IL-17RC多肽是有治療效果的。然而，由于各種因素，可溶性IL-17RC^U舉由m^"技術(shù)中可用的各種生產(chǎn)系統(tǒng)分泌。而且分泌的量也不足以滿足工業(yè)生產(chǎn)的需要。因此，在本領(lǐng)域中需要開發(fā)能夠被足量表ii^分泌的IL-17A和IL-17F的拮抗劑，所述的表達(dá)量和分泌量能夠^U文大至用于工業(yè)生產(chǎn)。因此，本發(fā)明通過提供可^t4錄分泌的IL-17A和IL-17F拮抗劑滿足了上述需要。具體而言，本發(fā)明基于開發(fā)和發(fā)現(xiàn)了多種非天然存在的可溶性分子或可溶性多肽，所述非天然存在的可溶性分子或可溶性多肽能夠結(jié)合、拮抗和/或阻斷IL-17A和IL-17F與其同源受體的結(jié)合。所述可溶性多肽包括IL-17RC的一部分。所述可溶性多Jlfc^可同時(shí)包括IL-17RC的一部分和IL-17RA的一部分("IL-17RC/IL-17RA")。圖4A和4B以ASEQIDNO:157和158描述了一種這樣的優(yōu)選實(shí)施方案。這種可溶性多肽包括人類IL-17RA(SEQIDNO:21)的外顯子1-6和人類IL-17RCxl(SEQIDN0:2)的外顯子8-16。更M而言，這種可溶性多肽是與FcM融合的，所i^Fc分子例如SEQIDNo:157和158中包含的Fc5。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以容易地認(rèn)識到，可以^JH沐Fc^^以及能導(dǎo)致形成二聚體的4沐其他襯。因此，IL-17F和IL-17A活性的拮抗劑，例如本發(fā)明的IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA可溶性受體，可用于炎性疾病的治療性療法，特別是作為IL-17F和IL-17A兩者的拮抗劑單獨(dú)或結(jié)合用于治療與這些分子有關(guān)的疾病。此外，IL-17A和IL-17F活性的拮抗劑，例如本發(fā)明的可溶性受體，可用于M炎性疾病的治療性療法，例如在下列疾病的治療中可以(單獨(dú)地或共同地)結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17F和IL-17A，所述疾病例如銀屑病、特應(yīng)性和接觸性皮炎、IBD、IBS、結(jié)腸炎、內(nèi)毒素血癥、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎、成人呼吸系統(tǒng)疾病(ARD)、感染性>^克、多器官功能衰竭，炎'^^損傷例如哮喘、慢性阻塞'l"鄉(xiāng)病(C0PD)、氣道高^性、慢性支氣管炎、過敏性哞喘、細(xì)菌性肺炎、銀屑病、濕滲，以及炎性腸病例如潰瘍性結(jié)腸炎和克隆病(Crohn'sdisease)、幽門^>^^桿菌(Ae//co6acter/y^/ari)感染、由于皿炎癥(即由于感染、損傷等)引起的內(nèi)粘連和/或,、系統(tǒng)性紅斑狼疳(SLE)、多發(fā)'l^^化、系統(tǒng)'l!^更化病、腎病綜合征、器官同種異^#植物排斥、移植物抗宿主疾病(GVHD)、腎、肺、心臟等器官的移^t排斥、M^菌細(xì)胞壁(SCW)誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、牙齦炎/牙周炎、皰務(wù)l"生間質(zhì)角膜炎、包括前列腺癌、腎癌、結(jié)腸癌、卵巢癌、宮頸癌、白血病的癌癥、血管發(fā)生、再狹窄和川崎病。細(xì)胞因子受體亞基以多結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)為特征，包括一個配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和一個通常參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的效應(yīng)結(jié)構(gòu)域。多聚體細(xì)胞因子受體包括單體、同二聚體(例如，PDGF受體ccoc和PP同種型，紅細(xì)胞生成素受體，MPL[血小板生成素受體]和G"CSF受體)、每一亞，具有配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和效應(yīng)結(jié)構(gòu)域的異二聚體(例如PDGF受體otP同種型)和由具有不同功能亞基構(gòu)成的多聚體(例如IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7和GM-CSF受^0。一些受體亞基是多種受體所共有的。例如，AIC2B亞基是IL-3和GM-CSF受體所共有的組成部分，它本身不能結(jié)合配體，但包括一個胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域。許多細(xì)胞因子受體基于其結(jié)構(gòu)和功能都可被歸入四個相關(guān)家族中的一個。例如I型造血受體的特M于具有一個包括保守半M酸^J^WSXWS基序的結(jié)構(gòu)域。在某些造血受體中還存在以J^克鍵環(huán)為特征的^fe結(jié)構(gòu)域，包括蛋白激酶結(jié)構(gòu)域、纖連蛋白m型結(jié)構(gòu)域和免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域。細(xì)胞因子受體結(jié)構(gòu)的綜述可參見Urdal，Ann.R印ortsMed.Chem.221-228，1991和Cosman，Cytokine!:95-106，1993。通常認(rèn)為在促^^物體獲得新生物功能的選擇壓力下，在已有受體基因的復(fù)制過程中會產(chǎn)生新的受體家絲員，導(dǎo)致產(chǎn)生多基因家族。因此家絲員就會含有^a先基因的殘留泉逸，可以利用這些特征來分離和識別其他的家;^員。因此，本發(fā)明涉及IL-17A和IL-17F的拮抗劑，所述拮抗劑能夠通過^—種配體對應(yīng)的一種或多種受體阻斷^-~種配體的結(jié)^^和/或信號傳導(dǎo)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，這類拮抗劑是基于圖1-4所示的IL-17RC的多肽結(jié)構(gòu)?；谑欠窈幸恍┨囟ǖ耐怙@子，IL-17RC受體具有許多種剪接變體。如下所述，這些外顯子中有一些是配體(IL-17A和/或IL-17F)結(jié)合所必需的。本發(fā)明部分地基于這一發(fā)現(xiàn)IL-17RC和IL-17家族的其他成員例如IL-17RA(SEQIDNO:21)之間具有相似的結(jié)構(gòu)("結(jié)構(gòu)域")。具體而言，識別了三個結(jié)構(gòu)域1)結(jié)構(gòu)域l(SEQIDNO:159和160)包括IL-17RC的外顯子8-10。i^t應(yīng)于IL-17RCxl(SEQIDNO:2)的絲酸絲193-276和IL-17RCx4(SEQIDNO:166)的絲^J^208-291。2)結(jié)構(gòu)域2(SEQIDNO:161和162)包括IL-17RC的外顯子11-13。iW應(yīng)于IL-17RCxl(SEQIDNO:2)的絲酸絲277-370和IL-17RCx4(SEQIDNO:166)的絲MJ^292-385。3)結(jié)構(gòu)域3(SEQIDNO:163和164)包括IL-17RC的外顯子8-10。iW應(yīng)于IL-17RCxl(SEQIDNO:2)的絲Mj371-447和IL-17RCx4(SEQIDNO:166)的絲MJ^386-462。因此，本發(fā)明涉M于圖1所示外顯子的不同組合的可溶性IL-17RC多肽。糾而言，這些可溶性多肽的實(shí)例包括1)變體1210(SEQIDNO:67和68),它包括人類IL-17RCxl的外顯子l-6和8-16，并通iti^接物(SEQIDNO:176和177)融^^有Fc10(SEQIDNO:174和175)。變體1210還具有來自otPA(多肽序列示于SEQIDNO:178)的一個前原信號肽(pre-prosignalp印tide)。也可以使用Fc5或本領(lǐng)域已知的任啊等同物代替FclO。2)變體1390(SEQIDNO:69和70)，它包括人類IL-17RCxl的外顯子l-6和8-16，并融^^有FclO(SEQIDN0:174和175)。變體1390還具有一個天然信號序列。也可以^^)Fc5或本領(lǐng)域已知的^^r等同物代替Fc10。3)變體1341(SEQIDNO:71和72),它包括鼠類IL-17RA的外顯子1-6和人類IL-17RCxl的外顯子8-16，并通iti^接物(SEQIDNO:176和177)融合有FclO(SEQIDN0:174和175)。變體1341還具有來自鼠類IL-17RA(SEQIDN0:181)的一個信號肽。也可以^^IFc5或本領(lǐng)域已知的^fi^r等同物代替Fc10。4)變體1342(SEQIDNO:73和74)，它包括人類IL-17RCxl的外顯子8-16,通過連《^物(SEQIDNO:176和177)融^^有Fc10(SEQIDNO:174和175)。變體1342還具有來自otPA(多財(cái)列示于SEQIDNO:178)的一個前原信號肽。也可以使用Fc5或本領(lǐng)域已知的^^等同物代替Fc10。5)變體S1(SEQIDNO:77和78)，它包括人類IL-17RCxl的外顯子l-7，并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體sl還具有天然信號序列。也可以^^Fc10或本領(lǐng)域已知的^^T等同物代替Fc5。6)變體S2(SEQIDNO:81和82),它包括人類IL-17RCxl的外顯子1-8,并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體S2還具有天然信號序列。也可以使用FclO或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc5。7)變體S3(SEQIDNO:85和86)，它包括人類IL-17RCxl的外顯子l-9，并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體S3還具有天然信號序列。也可以使用FclO或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc5。8)變體S4(SEQIDN0:89和90)，它包括人類IL-17RCxl的外顯子l-10，并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體S4還具有天然信號序列。也可以使用Fc1O或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc5。9)變體S5(SEQIDNO:93和94)，它包括人類IL-17RCxl的外顯子l-11，并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體S5還具有天然信號序列。也可以偵月Fc1O或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc5。10)變體S6(SEQIDN0:97和98),它包括人類IL-17RCxl的外顯子14-16，并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體S6還具有天然信號序列。也可以使用FclO或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc5。11)變體S7(SEQIDNO:101和102)，它包括人類IL-17RCxl的外顯子ll-16，并融合有Fc5(SEQIDN0:179和180)。變體S7還具有天然信號序列。也可以使用FclO或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc5。12)變體S10(SEQIDNO:105和106)，它包括AJUL-17RCxl的外顯子7-16，并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體S10還具有天然信號序列。也可以使用Fc1O或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc5。13)變體S11(SEQIDNO:109和110)，它包:^人類IL-17RCxl的外顯子l-7和14-16，并融^^有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體S11還具有天然信號序列。也可以^J)FclO或本領(lǐng)域已知的^^r等同物代替Fc5。14)變體S12(SEQIDNO:113和114)，它包括人類IL-17RCxl的外顯子l-7和ll-16，并融^^有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體S12還具有天然信號序列。也可以4^1Fcl0或本領(lǐng)域已知的^^T等同物代替Fc5。15)變體S13(SEQIDNO:117和118)，它包括人類IL-17RCxl的外顯子l-13和人類IL-17RA的外顯子7-9，并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體S13還具有天然信號序列。也可以^J^FclO或本領(lǐng)域已知的^^T等同物代替Fc5。16)變體S14(SEQIDNO:121和122)，它包括鼠類IL-17RA的外顯子l-6、人類IL-17RCxl的外顯子8-13和鼠類IL-17RA的外顯子7-9，并融合有Fc5(SEQIDN0:179和180)。變體S13還具有天然信號序列。也可以使用FclO或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc5。17)變體1407(SEQIDN0:139和140)，它包括人類IL-17RA的外顯子1-10和人類IL-17RCxl的外顯子8-16，并融合有Fc5(SEQIDNO:179和180)。變體1407還具有來自人類IL-17RC的天然信號肽。也可以使用FclO或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc5。18)變體1459(SEQIDNO:151和152)，它包括人類IL-17RCxl的外顯子l-6和8-16，并融合有Fc5(SEQIDN0:179和180),并具有一個Leu21Ala的置換(與IL-17RCxl相比)。變體1459還具有來自otPA(多肽序列示于SEQIDNO:178)的一個前原信號肽。也可以使用FclO或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc5。19)變體1454(SEQIDNO:157和158)包括人類IL-17RA的外顯子1-6和人類IL-17RCxl的外顯子8-16,與Fc5(SEQIDNO:179和180)融合。變體1454i^具有來自人類IL-17RA的天然信號生也可以使用FclO或本領(lǐng)域已知的任何等同物代替Fc5。上述變體僅4化了有P緣目的本發(fā)明實(shí)施方案。本領(lǐng)域技術(shù)人員基于本申請?zhí)貏e是其中附圖1-4的教導(dǎo)，不必進(jìn)行過多的實(shí)驗(yàn)就能夠容易地設(shè)計(jì)和測試其他的IL-17RC變體和/或IL-17RC/IL-17RA變體。例如，可以用于替上文乂>開的信號肽的其他信號肽包括人^類生長激素信號肽(SEQIDN0:168和169)、鼠類免疫球蛋白重鏈可變區(qū)(VH26-10)(SEQIDNO:170和171)或人類CD33(SEQIDN0:172和173)。除^t發(fā)明以外，本發(fā)明提供了本發(fā)明的可溶性受體的新用途。這些可溶性受體可以僅基于IL-17RC(命名為"IL-17RC"或"可溶性IL-17RC"或，，sIL-17RC",這些命名在本文中可以互換使用)，或可以基于IL-17RA與IL-17RC相組合的部分("IL-17RC/IL-17RA"或"雜合RC/M"、"RC/RA"或其^f^f可變體，，，這些命名在本文中可以互換使用)。本發(fā)明還提供可用于人類炎性疾病和自身免疫性疾病的可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽片段和融*白。本發(fā)明的可溶性受體可用于阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17F和/或IL-17A的活性，以用于治療下述炎癥和炎性疾病，例如銀屑病、銀屑病關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、內(nèi)毒素血癥、IBD、IBS、結(jié)腸炎、哮喘、同種^移植物排斥、免疫介導(dǎo)的腎病、肝膽管疾病、多發(fā)寸W更化、動脈粥樣硬化、肺瘤生^i。快或退行性關(guān)節(jié)疾病，以A^文公開的，炎性疾病。SEQIDN0:1提供了一種示例性的編碼人類IL-17RC("IL-17RCxl")的核苷酸序列；它所編碼的多肽示于SEQIDNO:2。IL-17RC是IL-17A(SEQIDNO:13和14)和IL-17F(SEQIDNO:15和16)的共同受體。IL-17RC可以以單體、同二聚體或異二聚體的形式起作用。優(yōu)g,IL-17RC以同二聚體形式作為IL-17A和/或IL-17F的受體。如本申請所述，單體受體或同二聚體受體均可只含有IL-17RC，或者可含有其他IL-17家族受體例如IL-17RA的部分(IL-17RC/IL-17RA")。因此，本發(fā)明包括這樣一種可溶性受體，所述可溶I"生受體包括IL-17RC與IL-17RA，IL-17RE或4^f可其他IL-17家族受體相組合的部分。IL-17RC還可以作為IL-17相關(guān)細(xì)胞因子的異二聚體受體的亞基。例如，IL-17RC可以與IL-17RA或另一種IL-17樣受體形成異二聚體。IL-17RO^開于同為本申請Ai斤有的美國專利申請No.10/458，647和同為本申請Ai斤有的國際申請公布W001/04304中，這兩篇文獻(xiàn)均通過援引的方式全文納A^文。對編碼IL-17RC(SEQIDNO:1)的人類cDNA克隆的分析揭示了一個編碼692個氨基酸(SEQIDNO:2)的開放讀碼框，該開放讀碼框中包括一個約20個M酸殘基(SEQIDN0:2的氨基酸gl至20)的推定的信號序列、一個大約431個氨基酸g(SEQIDNO:2的絲酸絲21-452;SEQIDNO:3)的^卜配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域、一個約20個JtJ^酸g(SEQIDNO:2的#^酸殘基453-473)的跨膜結(jié)構(gòu)域和一個大約203個JLijMJ^(SEQIDNO:2的a^J^474至677)的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。此外，SEQIDN0:224議了一個配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域。SEQIDNO:165也顯示了編碼人類IL-17RC的一種變體(命名為"IL-17RCx4")的另一個示例性核苷酸序列，它所編碼的多肽示于SEQIDNO:166。預(yù)計(jì)的信號肽為SEQIDNO:165的戎基1-60和SEQIDNO:166的^1-20;胞外結(jié)構(gòu)域?yàn)镾EQIDNO:165的殘基61-1401和SEQIDNO:166的殘基21-467;聘^膜結(jié)構(gòu)域?yàn)镾EQIDNO:165的gl402-1464和SEQIDNO:166的殘基468-488;胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域?yàn)镾EQIDNO:165的gl465-2121和SEQIDNO:166的g489-707。SEQIDN0:4也顯示了編碼人類IL-17RC的一種變體(命名為"IL-17RC-1")的另一個示例性核苷酸序列，它所編碼的多肽示于SEQIDNO:5。IL-17RC-l/厶開于同為本申ifrA^斤有的美國專利申請No.10/458，647和同為本申請人所有的國際申請公聊001/04304中，這兩篇文獻(xiàn)均通過援引的方式全文納7^文。序列分析顯示IL-17RC-1為一種截短形式的受體多肽。也就^JC，IL-17RC-1缺少SEQIDNO:2的絲^J^1-113。SEQIDNO:IO表示含有IL-17RC的N末端部分的IL-17RC-1多肽的U酸序列。對IL-17RC和IL-17RC-1的^J^序列進(jìn)行比較，M現(xiàn)這兩種多肽分別代表不同的剪接變體。IL-17RC的M斷列包括一個17個M酸的區(qū)段(SEQIDNO:2的M^JJ39至355),而IL-17RC-1沒有這一區(qū)段；IL-17RC-1在絲酸479之后包括一個13個氨基酸的區(qū)段(SEQIDNO:5的絲絲基350至362)，而IL-17RC沒有這一區(qū)段。SEQIDNO:ll顯示了一種含有上述兩個絲酸區(qū)段的多肽，而SEQIDNO:12顯示了一種不含有上述13個氨基酸區(qū)段和17個g酸區(qū)段的多肽的Mg列。SEQIDNO:23也顯示了編碼人類IL-17RC的一種變體(命名為"IL-17RC-6")的又一個示例性核苷酸序列，它所編碼的多肽示于SEQIDNO:24。IL-17RC-6與SEQIDNO:2所示的IL-17RC相比含有一個25個M酸絲的缺失。具體而言，IL-17RC-6不含有SEQIDNO:2的絲酸錄94至絲絲基118。對編碼IL-17RC-6(SEQIDNO:23)的人類cDNA克隆的分析顯示，它含有一個大約427個M酸g(SEQIDNO:24的M^Jd-427)的胞夕卜配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域、一個大約20個M酸殘基(SEQIDN0:24的M酸g428-448)的跨膜結(jié)構(gòu)域和一個大約218個絲酸殘基(SEQIDNO:24的M酸戎基449至667)的月包內(nèi)結(jié)構(gòu)域。SEQIDNO:25顯示了編碼鼠類IL-17RC的一種變體的一個示例性核苷,列，它所編碼的多肽示于SEQIDNO:26。鼠類IL-17RC是鼠類IL-17A(SEQIDNO:17和18)和鼠類IL-17F(SEQIDNO:19和20)的共同受體。對編碼IL-17RC(SEQIDNO:25)的鼠類cDM克隆進(jìn)行的分析揭示了一個大約449個氨基酸瓶基(SEQIDNO:27)的胞夕卜配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域。另外，SEQIDNO:28代表了一個配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域。SEQIDN0:29顯示了編碼鼠類IL-17RC的一種變體的另一個示例性核苷酸序列，它所編碼的多肽示于SEQIDNO:30。IL-17RC基因位于染色體3p25-3p24，如下所述，這一區(qū)域與多種障礙和疾病相關(guān)。RNA印跡分析顯示，IL-17RC基因在甲^U^、腎上腺、前列#肝臟組織中有很強(qiáng)的表達(dá)，在心臟、小腸、胃和氣管組織中表達(dá)較弱。相反地，它在腦、胎盤、肺、骨錄肌、腎臟、月、脾臟、胸腺、睪丸、卵巢、結(jié)腸、外周血白細(xì)胞、脊柱、淋巴結(jié)和骨髓中表達(dá)極少或不表達(dá)。上述》見察結(jié)果顯示IL-17RC序列可以用于區(qū)分各種不同的組織。如下所述，本發(fā)明提供包括與參照#^酸序列具有至少70%、至少80%、或至少90%、或大于95%，例如96%、97°yi、98%或大于99%或更高的同一性的^酸序列的分離多肽，所述參照M酸序列為SEQIDN0:2的g^基21-692，其中所述分離的多肽可以特異'lti也結(jié)合這樣一種抗體，所述抗體能特異性結(jié)合含有SEQIDN0:2的M酸序列的多肽。本發(fā)明還4^供包括與參照M酸序列具有至少70%、至少80%或至少90%同一性的#^酸序列的分離多肽，所述參照絲蔣列選自(a)SEQIDN0:2的絲^J^21至452，(b)SEQIDNO:10的M酸殘基21至435，(c)SEQIDNO:2的^酸g21至677和(d)SEQIDNO:2的M酸gl至692，其中所述分離的多肽可以特異'Hi也結(jié)合這樣一種抗體，所述抗體能特異性結(jié)合由SEQIDNO:2的^酸序列或SEQIDNO:IO的氨基酸序列構(gòu)成的多肽。示例性多肽包括含有SEQIDNO:2、SEQIDNO:10、SEQIDNO:ll或SEQIDNO:12的M酸序列的多肽。本發(fā)明還提供包括胞外結(jié)構(gòu)域的分離的多肽，其中所iil&外結(jié)構(gòu)域包括SEQIDNO:2的M酸序列的Mto^21至452或者SEQIDNO:10的#^*列的M酸g21至435。這類多M可包括位于所iiJ!&外結(jié)構(gòu)^U^末端位置的跨膜結(jié)構(gòu)域，其中所ii^膜結(jié)構(gòu)域包括SEQIDN0:2的JLS酸g453至473。這些多M可包括位于所述跨膜結(jié)構(gòu)域M^端位置的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域，其中所i^fe內(nèi)結(jié)構(gòu)域包括SEQIDNO:2的^J^MJ^474至677或者SEQIDNO:10的MMJ^57至673，任選地，這類多皿可包括位于所i^卜結(jié)構(gòu)域J^末端位置的信號分泌序列(signalsecretorysequence),其中所述信號分泌序列包括SEQIDN0:2的^J^酸序列的^^^l4l至20。本發(fā)明還包括IL-17RC多肽的變體，其中所述多肽變體的#^斷列與SEQIDNO:2的M酸序列具有至少7(^同一性、至少80%同一性、至少90%同一性、至少95°/。同一性或大于95%的同一性，并且其中多肽變體的^酸序列與SEQIDN0:2的M酸序列之間的任何差異都是由一個或多個保守性M酸置換導(dǎo)致的。此外，本發(fā)明還提供上文公開的能與IL-17F(例如SEQIDN0:16所示的人類IL-17F多肽序列)結(jié)合的分離的多肽。人類IL-17F多核苷酸序列示于SEQIDNO:15。小鼠IL-17F多核苷酸序列示于SEQIDN0:19，其相應(yīng)的多肽示于SEQIDNO:20。本發(fā)明還提供上文公開的能與IL-17A(例如SEQIDNO:14所示的人類IL-17A多肽序列)結(jié)合的分離的多肽。人類IL-17A多核苷齡列示于SEQIDNO:13。小鼠IL-17A多核苷酸序列示于SEQIDN0:17,其相應(yīng)的多肽示于SEQIDNO:18。本發(fā)明還提供下述的分離的多^表位，所述分離的多^表位包括SEQIDNO:2或3的g酸序列的至少15個連續(xù)的^^g基。示例性多肽包括含有SEQIDN0:2或3或者由SEQIDN0:2或3組成的多肽，含有SEQIDNO:2或3或者由SEQIDN0:2或3組成的多肽的抗原性表位，或者含有SEQIDNO:2或3或者由SEQIDNO:2或3組成的多肽的功能性IL-17A或IL-17F結(jié)合片段。此外，本發(fā)明還提供上文公開的能結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17F或IL-17A的活性的分離的多肽。本發(fā)明還包括IL-17RC多肽變體，其中所述多肽變體的M酸序列與SEQIDNO:2的M酸^^具有至少70y。同一性、至少80%同一性、至少90%同一性、至少95%同一性或大于95%的同一性，例如96%、97°/。、98%或大于99%或更高的同一性，并且其中多肽變體的M酸序列與SEQIDNO:2的相應(yīng)g酸序列之間的^f可差異都是由一個或多怖守性絲紅換導(dǎo)致的。這類保守性絲M換在本文中有述。此外，本發(fā)明還提供上文公開的能結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17F或IL-17A的活性的分離的多肽。本發(fā)明還提供藥物組合物，所述藥物組*包括可藥用載體和至少一種這類表達(dá)栽體或包括這類表達(dá)載體的重組病毒。本發(fā)明還包括藥物組合物，所述藥物組M包括可藥用載體和本文所述的多本發(fā)明還4^供了融M白，所述融^白包括IL-17RC多AMp免疫球蛋白部分。在這類融M白中，免疫球蛋白部分可為免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)，例如人類Fc片段。本發(fā)明還包括編碼這類融^^白的分離的核酸^。參考下文的*#^述可以更清楚地認(rèn)識到本發(fā)明的上述方面和務(wù)他方面。此外，下文引用了多種參考文獻(xiàn)，它們都以援引的方式全文納^^文。必趙在下文的說明中廣泛4M了多種術(shù)語。sy^供下迷定義以便理解本發(fā)明。本文所使用的"核酸"或"核酸分子"指多核苷酸，例如脫to糖核酸(DM)或核糖核酸(RNA)、寡核苷酸、通過聚合^A^(PCR)生成的片段，和通過^^T連接^、^v^、內(nèi)切Sl^用和外切g(shù)l^用生成的片段。核酸分子可由天然存在的核苷酸單體構(gòu)成(例如DNA和MA)，或者可由天然存在的核苷酸的類似物構(gòu)成(例如天然存在的核苷酸的ot對映體形式)，或由它們的組合樹t^包括例如^)鹵素。、)^、、^^疊^MC或多個^，或者##官能化為醚或酯。此外，整個^^可以,皮其立體上或電子Ji^目似的結(jié)構(gòu)所取代，例如氮雜糖和^^環(huán)糖類似物。4^^部分的修飾的實(shí)例包^T^^化的噤呤和嘧啶、?；泥溥屎袜滓Щ蚱鋇ffc^知的雜環(huán)取代。核酸單體可以通過磷酸二酯鍵相連接或者通過這類鍵的類似物相連接。磷酸二S旨鍵的類似物包括碌u^磷酸酯、二為t代磷酸酯、磷酸竭酰酯(phosphoroselenoate)、磷酸二竭酰酯(phosphorodiselenoate)、刷義^^磷酸酉旨(phosphoroanilothioate)、酰苯胺磷酸酯(phosphoranilidate)，氨基磷酸酯等等。術(shù)語"核酸分子"還包括所謂的"肽核酸"，所述肽核酸包括與聚,主鏈相連的天然存在的或經(jīng)#^的核酸#。核酸可為單鏈核酸或雙鏈核酸。術(shù)語"核酸分子的互補(bǔ)體"指的是具有與參照核苷酸序列反向互補(bǔ)的核苷酸序列的核酸分子。例如，序列5，ATGCACGGG3，與5，CCCGTGCAT3，互補(bǔ)。術(shù)語"筒并核苷酸序列"指的是與編碼一種多肽的參照核酸分子相比具有一個或多個筒并密碼子的核苷酸序列。簡并密碼子具有不同的核苷酸三聯(lián)體，但是卻編碼相同的M^J^(即GAU和GAC三:^體均編碼Asp)。術(shù)語"結(jié)構(gòu)基因"指的是這樣一種核酸分子，它會被轉(zhuǎn)錄為信使RNA(mRNA),該信使RMI^被翻譯為特定多肽的特征性M酸序列。"分離的核^^"為未^^在生物體基因I1DNA中的核^^。例如，從細(xì)胞的基因組DNA中分離出來的編碼生長因子的DNA分子^A—種分離的DNA分子。分離的核^子的另一個實(shí)例為未^^在生物體基因組中的化學(xué)合成的核酸分子。從特定物種中分離的核酸^^要小于該物種染色體的完整DNA分子。"核酸襯構(gòu)建體"為一種單絲雙鏈的核酸分子，它經(jīng)過人類干預(yù)而被修飾，從而含有以自然界中不存在的排列方式組M連接的核酸區(qū)段。"線性DM"是指具有游離的5，和3，末端的非環(huán)狀DM分子。線性DM可以從例如質(zhì)粒的閉合環(huán)柳NA分子通過酶消化或物理破壞來制備。"互補(bǔ)DNA(cDNA)"為從mRNA;j^iiit^轉(zhuǎn)錄^^備生成的單勉NA分子。通常，^J^與mRM的-^分互補(bǔ)的引物來啟動反轉(zhuǎn)錄。^^頁域技^Mv員還^^術(shù)語"cDNA，，來指由這種單^DNAM及其互補(bǔ)DNA鏈組成的雙勉NA分子。術(shù)語"cDNA"還指MNA^l合成的cDNAM的克隆。"啟動子"為指導(dǎo)結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)錄的核苷酸序列。通常，啟動子位于基因的5，非編碼區(qū)，接鵬構(gòu)基因的轉(zhuǎn)^^位點(diǎn)。具有啟動轉(zhuǎn)錄功能的啟動子中的序列元件通常以共有核苷酸序列為特征。這些啟動子元件包括RNA聚合酶結(jié)合位點(diǎn)、TATA序列、CAAT序列、分化特異性元件(DSE;McGehee"a/.，脫^w/o"/加/.7:551(1993))、環(huán)AMP應(yīng)答元件(CRE)、血清應(yīng)答元件(SRE;Treis咖n，5fe肌'加"http://Ca/cer(1990))、糖絲激素應(yīng)答元件(GRE),以及其他轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合位點(diǎn)，例如CRE/ATF((VReillyWa/.，/.C&e瓜267:19938(1992))、AP2(Yeefa/"/5io/.C力e瓜25728(1994))、SP1、c層應(yīng)答元件結(jié)合蛋白(CREB;Loeken，C朋e￡r/,.J:253(1993))和八聚體因子(綜述可參見WatsonWa/.，eds.，M/ectf7ar5/0/0#7o/*Me6fe加，4thed.(TheBenjamin/Cu咖ingsPublishingCompany,Inc.1987)和Lemaigre和Rousseau，A'oc力e瓜/.1(1994))。如果啟動子為一種可誘導(dǎo)的啟動子，那么轉(zhuǎn)錄的7jc平^)應(yīng)^i秀導(dǎo)劑而提高。與此不同的是，如果啟動子為組成型啟動子，那么M^7K平就不受誘導(dǎo)劑的調(diào)節(jié)。還已知一些可抑制的啟動子。"核心啟動子"包括啟動子功能所必需的核苷#列，包括TATA盒和轉(zhuǎn)錄起點(diǎn)。根據(jù)這一定義，核心啟動子在缺少可增強(qiáng)活性或賦予組織特異性活性的特定序列時(shí)可能具有或不具有可檢測的活性。"調(diào)控元件，，為調(diào)節(jié)核心啟動子活性的核苷酸序列。例如，調(diào)控元件可包括能與下述的細(xì)胞因子結(jié)合的核苷酸序列，所述細(xì)胞因子可以使轉(zhuǎn)錄專一M優(yōu)先地在特定細(xì)胞、組織或細(xì)胞器中進(jìn)行。這些類型的調(diào)控元件通常與以"細(xì)胞特異性"、"組織特異性"或"細(xì)胞器特異性"方式表達(dá)的基因相關(guān)聯(lián)。"增強(qiáng)子"是一種能提高轉(zhuǎn)錄效率的調(diào)控元件，所迷轉(zhuǎn)^t率的提高與增強(qiáng)子相對于轉(zhuǎn)f^位點(diǎn)的距離和方向沒有關(guān)系。"異源DNA，，指的是并不天然存在于給定宿主細(xì)胞中的一種DNA分子或一群DNA分子。對于特定宿主細(xì)胞而言的異源DM分子可以含有來源于宿主細(xì)胞物種的DNA(即內(nèi)源DNA)，前M宿主DM與非宿主DNA(即外源DM)相組合。例如，的MAWI^皮認(rèn)為是異源DNA分子。反itijt,異源DM分子可以包括與外源啟動子有效連接的內(nèi)源基因。作為另一實(shí)例，如果一種包括來源于野生型細(xì)胞的基因的DNA襯被51入缺少該野生型基因的突變體細(xì)胞中，則這種DNA襯nM皮認(rèn)為是異源DM。"多肽，，為g酸^itit^鍵連接形成的聚合物，包括天然形成的多肽和^^成多肽。少于約10個M酸g的多肽"""^^皮稱為"肽"。"蛋白質(zhì)"是包括一個或多個多肽鏈的大W。蛋白質(zhì)也可能含有非AUa分例如糖類基團(tuán)。產(chǎn)生蛋白質(zhì)的細(xì)胞可能^t類取4W^其他非肽類取^m引入到所述蛋白質(zhì)中，并且根悟不同細(xì)胞類型可能會引入不同的取代基。本文中27定義的蛋白質(zhì)是根據(jù)它們的^J^i鏈結(jié)構(gòu)定義的；通常并不特別指明例如糖類基團(tuán)等^4^^，但是它們可以存在。由非宿主DM分子編碼的肽或多肽為"異源"肽或多肽。"克隆載體"為能夠在宿主細(xì)胞中自主復(fù)制的核^子，例如質(zhì)粒、粘豐域噬菌體。克隆栽體通常含有一個或少^L個限制性內(nèi)切核酸Sli只別位點(diǎn)，從而可以以確定性方式插入核^子而不喪失載體1^的生物學(xué)功能，也可以插入編碼標(biāo)記基因的核苷酸序列，所述標(biāo)記基因適用于識別和篩選凈好斤述克隆載>^#化的細(xì)胞。標(biāo)記基因通常包括能夠提供四環(huán)素抗'氨節(jié)青霉素抗性的基因。"表ii^體"為編碼能夠在宿主細(xì)胞中M的基因的核^f"。通常，表達(dá)載體包括一個轉(zhuǎn)錄啟動子、一個基因和一個轉(zhuǎn)^f止子?；虻谋韎iit常處于啟動子的控制之下，這樣的基因被稱為與啟動子"有^b^接"。類々她，如果一個調(diào)控元件能夠調(diào)節(jié)一個核心啟動子的活性，則稱該調(diào)節(jié)元件與該核心啟動子"有艦接，，。"重組宿主"為含有異源核^子例如克隆載M表ii^體的細(xì)胞。在本文中，重組宿主的一個實(shí)例為通it4ii^體產(chǎn)生IL-17RC的細(xì)胞。相反也，IL-17RC可以由IL-17RC的"天然來源"的且不含有表達(dá)載體的細(xì)胞產(chǎn)生。"#轉(zhuǎn)化體"為異源DNA被^到細(xì)胞的基因組DNA中的重組宿主細(xì)胞。"融合蛋白"為由包括至少兩個基因的核苷酸序列的核酸分子所表達(dá)的雜合蛋白。例如，融合蛋白可以包括與一種可結(jié)合親和基質(zhì)的多目融合的IL-17RC多肽的至少一^分。這樣的融M白為4M親和色i粉離大量IL-17RC提供了手段。術(shù)語"受體"指的是可以與被稱為"配體"的生物活性襯相結(jié)合的細(xì)胞相關(guān)蛋白。這種相互作用介導(dǎo)了配體對細(xì)胞的作用。受體可為膜結(jié)合受體、細(xì)^i^質(zhì)受體或核受體;單體受體(例如促甲W^:素受體、腎上腺素能受體)或多聚體受體(例如PDGF受體、生長激素受體、IL-3受體、GM"CSF受體、G-CSF受體、紅細(xì)胞生成素受體和IL-6受體)。膜結(jié)合受體的特征在于具有多結(jié)構(gòu)域結(jié)構(gòu)，包括;^卜配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和通常參與信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的胞內(nèi)效應(yīng)結(jié)構(gòu)域。在某些膜結(jié)M體中，J^卜配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和胞內(nèi)效應(yīng)結(jié)構(gòu)域位于構(gòu)成完整功能性受體的分離的多RJi。""^1而言，配體與受體的結(jié)^^導(dǎo)致受體的構(gòu)象變化，所，象變化會引^t應(yīng)結(jié)構(gòu)域和細(xì)胞內(nèi)其他分子之間的相互作用，這又會導(dǎo)致細(xì)胞代謝的變化。通常與受體-配糾目互作用相關(guān)的代謝事件包括基因轉(zhuǎn)錄、磷酸化、去磷酸化、環(huán)AMP產(chǎn)量提高、細(xì)胞釣的運(yùn)動、細(xì)JM3旨類的運(yùn)動、細(xì)胞粘附、肌醇脂類的水解和磷脂的水解。"可溶Ii受體"是不與細(xì)艦結(jié)合的受體多肽?？扇躭"生受體通常為沒有跨膜結(jié)構(gòu)域和細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域，也沒有其他連接方式例如通過糖基磷脂酰肌醇(gpi)與細(xì)I&J^相連的配體結(jié)合受體多肽?？扇苄允荏w可包括附加的M酸殘基，例如為便于純化多肽而提供的親和標(biāo)善，或者用于提供多肽與底物的結(jié)合位點(diǎn)的親和標(biāo)各，或免疫球蛋白恒定區(qū)序列。許多細(xì)胞表面受體具有天然存在的可溶1樹應(yīng)物，它們是由蛋白水解產(chǎn)生的或由以其他方式剪接的mRNA翻譯產(chǎn)生?？扇苄允荏w可為單體、同二聚體、異二聚體或多聚體的形式，多聚體受體通常包括不多于9個亞基、優(yōu)選地包括不多于6個亞基、最優(yōu)選地包括不多于3個亞基。當(dāng)受體多l(xiāng)^殳有足夠的跨膜和胞內(nèi)多肽區(qū)段部分來分別提供膜錨定或信號轉(zhuǎn)導(dǎo)時(shí)，就稱所述受體多tt^上沒有跨膜和胞內(nèi)多肽區(qū)段。細(xì)胞因子受體的可溶性受體通常包括胞夕卜細(xì)胞因子結(jié)合結(jié)構(gòu)域而不含跨膜結(jié)構(gòu)域和胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。例如，代束性的可溶性受體包括SEQIDN0:167(多核苷船和SEQIDNO:21(多肽)表示的IL-17RA的可溶性受體。本領(lǐng)域技^A員完全能夠確定已知細(xì)胞因子受體序列中哪一段序列包括胞外細(xì)胞因子結(jié)合結(jié)構(gòu)域而不含跨膜結(jié)構(gòu)域和胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員通itit傳密碼子可以容易i^角定編碼這類可溶性受體多肽的多核苷酸。術(shù)語"分泌信號序列"指的是編碼這樣一種肽的DNA序列，所述肽("分泌肽")作為一種較大多肽的一部分，指引所述較大多肽itX合成該多肽的細(xì)胞的分泌途徑。所述較大多肽通常在所述分泌途徑中被切割以除去分泌肽。"分離的多肽"為差4Ui不含有夾雜的細(xì)胞組分的多肽，所述夾雜的細(xì)胞組分例如天然狀態(tài)下與所述多肽共存的糖類、脂類或其他蛋白質(zhì)性質(zhì)的雜質(zhì)。通常，分離的多肽制品所含有的所述多肽的^yt很高，即至少約80°/純度，至少約90°/。純度、至少約95%純度、高于95%純度，例如96°/、97°/?；?8°/?；蚋叩募兌?，或高于99%的純度。顯示某種具體蛋白制品含有分離多肽的一種方法是對所述蛋白質(zhì)制品進(jìn)行的十二^1^酸鈉(SDS)-聚丙烯,皿電泳并對所述皿進(jìn)行考馬斯亮藍(lán)染色之后，出現(xiàn)單一條帶就表明所述制品含有分離的多肽。然而，術(shù)語"分離的"并不排除同一種多肽的不同物理形式的存在，例如二聚體形式或者糖基化或衍生化形式。本文中^^1的術(shù)語"^J^端"和"mi^端"指的是多肽中的位置。在上下文允許的情況下，在提及多肽的某一特定部分或序列時(shí)佳月這些術(shù)語，用于表示接近的關(guān)系或相對位置。例如，位于多肽內(nèi)的一段參考序列的mi^端的某一M列指的是所ii^列接i^斤述參考序列的^^末端，但并不一^l:位于整個多肽的g末端。術(shù)語"表達(dá)"指的^因產(chǎn)物的生物合成。例如，對于結(jié)構(gòu)基因而言，表達(dá)包括將所i^構(gòu)基因轉(zhuǎn)錄為mRM并將所iimRNA旨為一個或多個多肽。本文中使用的術(shù)語"剪接變體"指的是從一個基因轉(zhuǎn)錄而得的RM的不同形式。剪接變體天然地是通過利用轉(zhuǎn)錄的RNA^內(nèi)的不同剪M點(diǎn)而產(chǎn)生的，或者也有少數(shù)時(shí)候是利用獨(dú)立轉(zhuǎn)錄的RNA分子之間的不同剪接位點(diǎn)產(chǎn)生，可能從一個相同基因會轉(zhuǎn)錄出贈mMA。剪接變體可能編碼具有不同#^斷列的多肽。本文中還^^I術(shù)語"剪接變體，，表示由基因轉(zhuǎn)錄而來的mRNA剪接變體所編碼的多肽。本文所^^的術(shù)語"免疫調(diào)節(jié)劑"包括細(xì)胞因子、干細(xì)胞生長因子、淋巴毒素、共刺激分子、造血因子等，還包括上迷分子的合成類似物。術(shù)語"互4H^/抗互4H^對"指的是在合適務(wù)降下形成非共價(jià)結(jié)合的穩(wěn)定配對的不相同的部分。例如，生物素和親和素(或鏈親和素)為互4傳/抗互補(bǔ)體對的典型成員。其他示例性的互4傳/抗互4(^對包括受體/配體對、抗體/抗原(或半抗原或表位)對、正義/反義多核苷酸對等等。在隨后需要互4傳/抗互補(bǔ)體對解離的情況下，互^H^/抗互凈H^對的結(jié)合親和力優(yōu)選地小于109NT1。":i^蟲特型抗體"為可與免疫球蛋白的可變區(qū)結(jié)構(gòu)域結(jié)合的抗體。在本文中，抗獨(dú)特型抗體可與抗IL-17RC抗體的可變區(qū)結(jié)合，因此抗獨(dú)特型抗體可以衞以IL-17RC的表位。"M片段"為M的"^15分，例如F(ab，)2、F(ab)2、Fab，、Fab等等。不論結(jié)構(gòu)如何，M片段^5T以與完整M所識別的同一抗原相結(jié)合。例如，抗IL-17RC單克隆抗體片段可以與IL-17RC的表^合。術(shù)語"M片段"還包括能結(jié)^#異性^^的合成多^基因工程生產(chǎn)的多肽，例如由輕鏈可變區(qū)組成的多肽、由重^^^可變區(qū)組成的"Fv"片段、輕鏈可變區(qū)和重鏈可變區(qū)通過肽連接物相連接的重組單鏈多肽分子("scFv蛋白")和由模擬高可變區(qū)的泰J^JJ且成的最小識別單位。"嵌合*"為il才^h-種重《且蛋白，它含有來源于^動物M的可變結(jié)構(gòu)^互^卜決定區(qū)，而^^^^的其^HP^^來源于A^類M。"人源>^/^"為這樣一種重組蛋白，其中將單克隆脅中的來源于鼠絲疫球蛋白的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)的鼠類互補(bǔ)決定區(qū)轉(zhuǎn)移到人類可變結(jié)構(gòu)域中。用于人類治療用途的來源于鼠類抗體(例如可以結(jié)合或中和人類蛋白的鼠類擬^)的人源4^/本的構(gòu)^^在4^頁^^支^v員的能力范圍之內(nèi)的。本文所使用的"治療劑"為與抗體部分綴合而產(chǎn)生可用于治療的綴合物的M或原子。治療劑的實(shí)例包括藥物、毒素、免疫調(diào)節(jié)劑、螯合劑、硼化合物、光活化劑或染料以^j^4t性同位素。"可檢測標(biāo)記"為與抗體部分綴合而產(chǎn)生可用于診斷的分子的分子或原子?？蓹z測標(biāo)記的實(shí)例包^^，J、光活化劑、iMt性同位素、熒光試劑、順磁性離子或其他標(biāo)記部分。本文^^I的術(shù)語"親和標(biāo)屋"指的是這樣一種多肽片段，它可以與另一多^i^接，從而使得可以純化或檢測所述另一多JiUsl者提^H吏所述另一多肽與底物結(jié)合的位點(diǎn)。原則上可以佳冗^^r具有可獲得的抗體或，特異性結(jié)合物的賊蛋白作為親和標(biāo)簽。親和標(biāo)善包括多組氨酸鏈、蛋白A(NilssonW^fit/^/.41075(1985);NilssonWa/"#e^o&A/lzts/o/."及3(1991))、谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶(SmithandJohnson,6fe/e31(1988))、Glu-Glu親和標(biāo)簽(GrussenmeyerWa/.，Jcad5W.〃"《27952(1985))、P物質(zhì)、FLAG肽(HoppWa/.,"iofecA/zo/o^r沃1204(1988))、鏈親和素結(jié)合肽或其他抗原性表位或結(jié)合結(jié)構(gòu)域?？傮w上可參見FordWa人，尸rWe//7Ai/e^/朋朋f//^r/Z7ca〃朋295(1991)。編碼親和標(biāo)簽的DM分子;^可從供應(yīng)商(例如PharmaciaBiotech,Piscataway，NJ)處購買的。"^^體"與抗體片段相對，表示未與治療劑綴合的完整抗體?？肕包括多克隆抗體和單克隆抗體，以及某些重組抗體例如嵌合抗體和人源化抗體。本文所^JJ的術(shù)語"抗體組分"包括完整抗體和脅片段。"免疫綴合物"為M組分與治療劑或可檢測標(biāo)記形成的綴合物。本文所使用的術(shù)語"抗體融合蛋白"指的是包括一種抗體組分和一種IL-17RC多肽組分的重組分子。抗體融M白的實(shí)例包括這樣一種蛋白，所述蛋白包括IL-17RC的胞外結(jié)構(gòu)域，還包括Fc結(jié)構(gòu)域或抗原結(jié)合區(qū)域。"目標(biāo)多肽"或"目標(biāo)肽"為包括至少一個表位、并且在目標(biāo)細(xì)胞(例如腫瘤細(xì)M攜帶傳染物抗原的細(xì)J!&)Ji4達(dá)的M酸序列。T細(xì)胞i只別由主要組織相容性復(fù)^襯呈遞的針對目標(biāo)多賊目標(biāo)肽的^4位，并通常賄目標(biāo)細(xì)胞，或?qū)⑵渌庖呒?xì)M集至目標(biāo)細(xì)胞的位置，由此殺死目標(biāo)細(xì)胞。"抗原性肽"為與主要組織相容性復(fù)合物分子結(jié)合而形成MHC-肽復(fù)合物的肽，所itMHC-肽復(fù)^可被T細(xì)胞識別并由此誘發(fā)針對T細(xì)胞ii行呈遞后的細(xì)1^^錄巴細(xì)胞應(yīng)答。因此，抗原性肽能夠結(jié)^^適的主要組織相容性復(fù)^^"并誘發(fā)細(xì)J^I"生T細(xì)胞應(yīng)答，例如針對結(jié)合或表達(dá)抗原的目標(biāo)細(xì)胞的細(xì)胞裂解或特異性細(xì)胞因子的釋放。抗原性肽可以結(jié)合抗原呈遞細(xì)胞或目標(biāo)細(xì)JifeJi的I類或11類主要組織相容性復(fù)*分子。在真核細(xì)胞中，RM聚合酶n催化結(jié)構(gòu)基因的轉(zhuǎn)^^而產(chǎn)生mRNA?？梢栽O(shè)計(jì)核酸分子以使其包括RNA聚合酶n模板，在所述模板中RM轉(zhuǎn)錄物具有與特定mRM互補(bǔ)的序列。所MNA轉(zhuǎn)錄物^皮稱為"反XRM"，編碼該反義RNA的核酸分子被稱為"反義基因"。反義RM分子能夠結(jié)^fflRM分子，導(dǎo)gNA翻譯的抑制。"特異性針對IL-17RC的反義寡核苷酸"或"IL-17RC反義寡核苷酸"為具有下述序列的寡核苷酸(a)所述序列能夠與/Z-77脫基因的-"^，成穩(wěn)定的三聚體，或(b)所*列能夠與7Z-J7脫基因的mRNA轉(zhuǎn)錄物的"^p，成穩(wěn)定的二聚體。"核酶"為具有催化中心的核^子。該術(shù)語包括RNA酶、自剪接RNA、自切割RM和^f亍上述催化功能的核酸分子。編碼核酶的核酸^i皮稱為"核酶基因"。"外部引導(dǎo)序列"為能引導(dǎo)內(nèi)源性核酶RM酶P結(jié)合特定種類胞內(nèi)mRNA并導(dǎo)致mRNA^RM酶P切割的核酸分子。編碼外部引導(dǎo)序列的核酸M被稱為"外部引導(dǎo)序列基因"。術(shù)語"變體IL-17RC基因，，指的;1編碼具有修飾形式的SEQIDN0:2氨基酸序列的多肽的核酸分子。這類變體包括天然存在的IL-17RC基因的多態(tài)性，以及含有SEQIDN0:2的絲齡列的保守性絲紅換的合錄因。IL-17RC基以通ii例如在嚴(yán)i^件下，測定一種^^^是否與具有SEQDNO:1或^EQIDNO:;的核苷酸序列的核*子或其互補(bǔ)核酸分子雜交，從而識別變體IL-17RC基因。或者，可以通it^列比較識別變體IL-17RC基因。如^比對最大相符性時(shí)兩個M^列的M酸^J^目同，，這兩個M^列具有"100%的氨基酸序列同一性"。類似地，如^4比對最大相符性時(shí)兩個核苷酸序列的核苷M^目同，就稱這兩個核苷酸序列具有"100%的核苷酸序列同一性"。序列比較可以使用標(biāo)準(zhǔn)軟件程序進(jìn)行，例如由DNASTAR(Madison,Wisconsin)生產(chǎn)的LASERGENE生物信息學(xué)軟件包中所含有的軟件。其他通過測定最優(yōu)比對而比較兩個核苷酸或氨基酸序列的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的(參見，例如，PeruskiandPeruski,Tie//^er加fa/dMe#e^/0/og7.'7bo/sZbr6te/7咖i'c犯f/We"arc力(ASMPress,Inc.1997)，Wu(編著)，"InformationSuperhighwayandComputerDatabasesofNucleicAcidsandProteins"見于VeMo必Ce/eA/o"c力/7o/o^7^123-151頁(CRCPress,Inc.1997)和Bishop(編著)，6Wflte#咖朋6fe"o邁e&邁;7"〃/^，第2版(AcademicPress,Inc.1998))。下文將描述用于測定序列同一性的M方法。無論使用什么具體方法來識別變體iZ-l7RC基因或變體IL-17RC多肽，都可以根據(jù)變體基因或由變體基因編碼的多肽與抗IL-17RC抗體特異性結(jié)合的能力，而從功能上表征所迷基因或多肽。還可以^^本文所述的生物學(xué)或生物化學(xué)測定方法，根據(jù)變體IL-17RC基因或變體IL-17RC多肽與配體例如IL-17A和/或IL-17F結(jié)合的能力，而從功能Ji^iE所述基因或多肽。本文中使用的術(shù)語"等位基因變體"指的是位于相同染色體基因座上的某一基因的任何兩種或多種變化形式。等位基因變體天然地通過突變產(chǎn)生，并可能導(dǎo)致群體中的表型多態(tài)性。基因突變可能是沉默的(編碼的多肽沒有改變)，或者可能所編碼的多肽的M酸序列有所改變。本文中^^的術(shù)語等位基因變^￡指的是由基因的等位基因變^碼的蛋白質(zhì)。術(shù)語"直系同源物"指的^L從一個物種獲得的多肽或蛋白另—從另一不同物種獲得的多肽或蛋白的功能類似物。直系同源物之間的序列差異是物種形成的結(jié)果。"旁系同源物，，是由一種生物產(chǎn)生的不同但結(jié)構(gòu)相關(guān)的蛋白質(zhì)。i人為旁系同源物是通過基因復(fù)制產(chǎn)生的。例如，ot-珠蛋白、p-珠蛋白和肌ir蛋白彼此之間互為旁系同源物。本發(fā)明包括IL-17RC基因的功能性片段。在本發(fā)明的上下文中，IL-17RC基因的"功能性片段"指的是編碼IL-17RC多肽的一部分的核酸分子，所述多肽的"-^分為本文所述的結(jié)構(gòu)域或至少能特異^i^結(jié)合抗IL-17RC抗體。由于標(biāo)準(zhǔn)分析方法的不準(zhǔn)確性，聚合物的分子量和長度都被理解為近似值。當(dāng)這類值^l4示為"大約"X或"近似"X時(shí)，應(yīng)理解的是汰示的值應(yīng)為實(shí)際值±10%。。7Z-77W弄7Z-77^:,^^茅J^^差厲^余/備^^1基于SEQIDN0:1、SEQIDNO:4的多核苷酸探針，通過篩i^/v類cDNA文庫或基因組文庫，可以獲得編碼人類IL-17RA或IL-17RC基因的核酸分子或編碼本發(fā)明的^HTT溶性多肽的多核苷酸。上述技術(shù)是公知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)，可以使用市售的克隆試劑盒完成。例如參見AusubelWa/.(編著)，幼o(hù)^7Woco/s//#o/ecw/arA/o/^7'第3版，JohnWiley&Sons1995;WuWa義，//6fe/7e》/o^5c/wo/<^CRCPress,Inc.1997;AvivandLeder，/JcacT,ftS45"義.1408(1972);Huynha/.，"ConstructingandScreeningcDNALibrariesin入gtlOand入gtll"見于細(xì)C7朋//^..J尸ra"/c"^!Aroac力Pb丄/，Glover(編著)，第49頁(IRLPress,1985);Wu(1997)，笫47-52頁。使用核苷酸序列基于IL-17RA或IL-17RC基因或cDM的核苷酸序列的寡核苷酸引物，通過聚合Sl^it^應(yīng)(PCR)，也可以獲得編碼人類IL-17RA或IL-17RC基因的核酸分子。在下述文獻(xiàn)中提供了用PCR篩選i^率的一般性方法例如，Yu"a7.，"UseofthePolymeraseChainReactiontoScreenPhageLibraries"見于//WecWa,i/o/0g7,阮/CT戶rofoco/^:6Vrre/f胞ZvMya/7"/7j^/》"/o/w"，White(編著)，Hu腿naPress,Inc.,1993。此外，在下述文獻(xiàn)中描述了使用PCR分離相關(guān)基因的技術(shù):例如,Preston,"UseofDegenerateOligonucleotidePrimersandthePolymeraseChainReactiontoCloneGeneFamilyMembers"見于#"力<%^//7Wo/e^z/ar》/0/0^7,Fo厶i_5>/CT尸rofoco/s..Ckrre/^餘f/o^y犯</J/7/7//ca〃o/w;White(編著)，HumanaPress,Inc.1993。或者，可通過4吏用互為引物(mutuallypriming)的長寡核苷酸和本文所述的核苷酸序列合成核酸分子，來獲得IL-17RA或IL-17RC基因(參見例如，Ausubel(1995))。偵JU聚合敏仏應(yīng)的已知技術(shù)能夠合成至少兩千個g長度的DM^"(Adanga/.，尸/az^M7ecA/》/.":1131(1993);Bambotefa/.，戶6#"力0^a/w/J/7/7//c"/o/w2266(1993)，DillonWs義，"UseofthePolymeraseChainReactionfortheRapidConstructionofSyntheticGenes"見于胞f力cv/5A/0/c^7，Ko六i乂'戶G尸rofoco25v6^/ve/fa/w/J/7/7_//cafio/w;White(編著)，第263-268頁(HumanaPress,Inc.1993)和Holo柳chuka/.,^7/7/.4299(1995))。關(guān)于多核苷酸合成的綜述可以參見例如，GlickandPasternak,胞/ecw/ar^/ofec力/70/0^7，/Wiic/p/esa/w/如/7/yca〃o/wo/"WecQffl6//za^(ASMPress1994);Itakurae"/.，io加.5/oc力e瓜Jit323(1984)和Climie"a/.,#"，/Sc丄〃5^M633(1990)。^7Z-77^4'iZ-77^:差^^傳^浙備本發(fā)明提供了多種編碼本文公開的IL-17RA或IL-17RC多肽的核酸分子，包括DM和RM^。本領(lǐng)域技^A員應(yīng)容易地認(rèn)識到，由于遺傳密碼子的簡并性，這些多核苷酸分子中可能有許多種序列變體。此外，本發(fā)明還提供了分離的可溶性單體、同二聚體、異二聚體和多聚體形式的受體多肽，它們包括與SEQIDN0:2的受體多tt^上同源的IL-17RC的至少一部分。因此，本發(fā)明考慮到了包括SEQIDN0:1或SEQIDNO:4的簡并核苷酸的編碼IL-17RA或IL-17RC多肽的核酸分子以及它們的RNA等價(jià)物。本領(lǐng)域技^A員應(yīng)容易地認(rèn)識到，由于遺傳密碼子的簡并性，這些多核苷酸分子中可能有許多種序列變體。SEQIDN0:7為涵蓋編碼SEQIDNO:2的IL-17RC多肽的所有核酸分子的簡并核苷酸序列。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識到，通過將SEQIDNO:7中的T替換為U，SEQIDNO:7的簡并序列還提供了編碼SEQIDN0:2的所有RNA序列。因此，本發(fā)明考慮到了包括SEQIDNO:1的核苷酸154至核普酸2229的編碼IL-17RC多肽的核酸分子，以及它們的RNA等價(jià)物。類4她，通過將SEQIDN0:6中的T替換為U，SEQIDNO:6的IL-17RC-l簡并序列論^^供了編碼SEQIDN0:5的所有RNA序列。表4示出了表示簡并核苷酸位置的單字母編碼。"分辨率"是用編碼字母表示的核苷酸。"互4傳"表示的是互補(bǔ)核苷酸的編碼。例如，編碼Y表示C或T，其互^H^昧示A或G，A與T互補(bǔ)，G與C互4卜。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>表5示出了對于某給定M酸而言涵蓋所有可能密碼子的簡并密碼子。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>本領(lǐng)域^it技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解的是，由于簡并密碼子^J^編碼某一氨基酸的所有可能的密碼子，在確定簡并密碼子的過程中會引入一定的不確定性。例如，絲氨酸的簡并密碼子(WSN)在有些情況下可能編;^"氨酸(AGR)，精氨酸的簡并密碼子(MGN)在有些情況下可能編碼絲氨酸(AGY)。編碼苯丙氨酸和亮氨酸的密碼子之間M在類似的關(guān)系。因此，簡并序列所涵蓋的一些多核苷酸可能編碼變^J^酸序列，但是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以參照SEQIDN0:6的M酸序列容易地識別這類變體序列?？梢匀绫疚乃?易^寸變體序列進(jìn)行功能性測試。不同的物種可育fe4現(xiàn)出"偏好密碼子^JT，?？傮w而言可參見Grantham"a/.，^wc/.Jci^A1893(1980);Haasefa/.Owr."A/.沃315(1996)、Wain-Hobsona/"Ce/e7i355(1981);GrosjeanandFiers，7及199(1982);Holm,vVi/c.^c/c^/心3075(1986);Ikemura，/.5/》/.，573(1982);SharpandMatassi，0///z.6te/eL紐4851(1994);Kane,^p/".A/o&c力"o/.6494(1995)和Makrides,#/croWo/.Wer.M(1996)。本文所^J)的術(shù)語"偏好密碼子^^l"或"偏好密碼子，，在本領(lǐng)域中是指在某一物種的細(xì)胞中最通常使用的蛋白質(zhì)翻譯密碼子，因此偏好編^^種氨基酸的可能密碼子(M5)中的一種或幾種密碼子。例如，ACA、ACC、ACG或ACT都可能編碼氨基酸蘇氨酸(Thr)，但是在哺乳動物細(xì)胞中ACC是最常用的密碼子；在其他物種例如昆蟲細(xì)胞、酵母、病毒或細(xì)菌中，可能M好使用不同的Thr密碼子。可以使用多種本領(lǐng)域已知的方法在本發(fā)明的多核苷酸中引入某一特定物種的偏好密碼子。，好密碼子序列引入重組DNA中可以例如通過使蛋白在特定細(xì)胞類型或物種中更有皿翻譯，從而提高蛋白質(zhì)的產(chǎn)量。因此，本文公開的筒并密碼子序列可以作為在本領(lǐng)域常用的和本文公開的各種細(xì)胞類型和物種中優(yōu)化多核苷酸表達(dá)的模板。可以測試和優(yōu)化含有偏好密碼子的序列在各種物種中的表達(dá)，^本文所公開iikii行功能測試?？梢酝ㄟ^多種方法分離編碼IL-17RA或IL-17RC的cDNA，例如可以佳月完整人類cDNA的或部分人類cDM或基于所公開序列的一組或多組簡并探針來進(jìn)行探測。還可以利用本文公開的4仏'^A類IL-17RA或IL-17RC序列設(shè)計(jì)引物，使用聚合H^i^JI來克隆cDNA。atb^卜，可以使用cDMil^轉(zhuǎn)化或轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，并用針對IL-17RA或IL-17RC多肽的抗體錄測目的cDNA的表達(dá)。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)認(rèn)識到，SEQIDN0:1所公開的序列代表的是人類IL-17RC的一個等位基因，預(yù)計(jì)也會存在等位基因變體和替代剪接?？梢酝ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)探測來自不同個體的cDNAi^或基因組狄，從而克隆這一序列的等位基因變體。本文公開的核苷*列的等位基因變體，包括含有沉默突變的等位基因變體和突變導(dǎo)致M酸序列改變的等位基因變體，以及作為本文公開的M,列的等位基因變體的蛋白質(zhì)，都在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。通過替代方式剪接的mRNA產(chǎn)生仍保留IL-17RC多肽性質(zhì)的cDNA分子，以及由這些cDNA和mRNA編碼的多肽，也包括在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。可以通過^^l本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)探測來自不同個體或組織的cDM狄或基因組iL^，從而克隆這些序列的等位基因變體和剪接變體。使用上述方法，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以制備多種編碼包括IL-17RC受體亞基的-^P分或其等位基因變體、并保留野生型IL-17RC受體的Si體結(jié)合M的可溶性受體的多肽，所述IL-17RC受體亞基的-^p分與SEQIDNO:1或SEQIDNO:4基本同源，或編碼SEQIDNO:2或SEQIDNO:5的全部序列或其片段或其等位基因變體。這類多*^￡可以包括本文總^/>開的雞多肽區(qū)段。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，分離的核酸分子可以在嚴(yán)旨fr下與包括本文7>開的核苷酸序列的核酸分子雜交。例如，所述核酸分子可以在嚴(yán)^Ht下與包括SEQIDN0:1或SEQIDNO:4的核苷酸序列的核酸分子雜交，或與包括與SEQIDN0:1或SEQIDNO:4互補(bǔ)的核苷酸序列的核酸分子雜交，或與它們的片段雜交。-"^:而言，嚴(yán)^Ht應(yīng)選擇為在確定的離子強(qiáng)度和pH值下比特定序列的熱解鏈溫度(Tm)低大約5"C。Tm為(在確定的離子強(qiáng)度和pH值下)50%的把序列與完全匹配的探針雜交時(shí)的溫度。在雜交后可以在嚴(yán)旨降下或在高^旨ff下洗滌核酸分子以除去未雜交的核酸分子。參見，例如，SambrookWa/.,胞/ec"/"^70/7/塔.爿Za60/^or7他"朋/，第2版(ColdSpringHarborPress1989);Ausubel(編著)，Cw/Te/7f,rc^oco/s//z胞/ecf/7a/"OohnWileyandSons,Inc.1987)5BergerandKi咖el(編著)，#o/ecw/arC/o"http://^7fec力/z/卿51，(AcademicPress,Inc.1987)5和Wetmur，CWLA'oc力e瓜M丄A/oA26227(1990))。序列分析軟件例如0LIG06.0(LSR;LongLake,MN)和尸i"/巡er尸re邁/er4"(PremierBiosoftInternational;PaloAlto,CA)以及一些因特網(wǎng)網(wǎng)站都^1可用的工具，可以用于分析給定序列并基于用戶確定的標(biāo)準(zhǔn)計(jì)算Tm。對于特定的多核苷酸雜交，本領(lǐng)域技權(quán)員完全能夠選擇合適的雜交糾和洗滌糾。本發(fā)明還^^"與SEQIDN0:2(IL—17RC)和SEQIDNO:21(IL-17RA)多賊它們的直系同源物多肽具有基本上相似的序列同一性的分離IL-17RA或IL-17RC多肽。本文所用的術(shù)語"J4Ui^目似的序列同一性"指的是與SEQIDN0:2所示序列或其直系同源物具有至少70。/。、至少80%、至少90%、至少95%，例如96%、97%、98°/?；虼笥?5%的序列同一性的多肽。例如，IL-17RA或IL-17RC受體變體和直系同源物可以用于產(chǎn)生針對人類IL-17RA或IL-17RC的免疫應(yīng)答和交X^應(yīng)的拔沐。這類抗體可如本文所述的^A源化和被修飾，并用于治療銀屑病、4^病關(guān)節(jié)炎、IBD、IBS、結(jié)腸炎、內(nèi)毒素血癥，以朋于本文所述的務(wù)他治療性應(yīng)用。本發(fā)明還考慮到了可以用以下兩種標(biāo)準(zhǔn)識別的IL-17RA或IL-17RC變,酸分子一種標(biāo)準(zhǔn)是測定所編碼的多肽與SEQIDN0:2(IL-17RC)或SEQIDNO:21(IL-17RA)的M酸序列的相似性，另一種標(biāo)準(zhǔn)是雜交測定。所述變體包括下述核酸分子(1)在嚴(yán)格洗滌條降下仍然能與具有IL-17RC的SEQIDNO:1或SEQIDN0:4的核苷酸序列的核酸^"(或其互^N^)雜交的核酸分子，其中所述洗滌嚴(yán)格度等同于含O.l"/。SDS的0.5x-2xSSC，溫度55-65C，和(2)所編碼的多肽與SEQIDN0:2的g酸序列具有至少70。/。、至少80%、至少90%、至少95%,或大于95°/，例如96%、97%、98%或99°/。的序列同一性的核#子。或者，IL-17RC變體可^L^征為下述核酸分子(1)在高度嚴(yán)格洗滌條件下仍然能與具有SEQIDN0:1或SEQIDNO:4的核苷酸序列的核酸分子(或其互#^)雜交的核酸分子，其中所述洗滌嚴(yán)格度等同于含O.ly。SDS的0.lx0.2xSSC,溫度50-65°C，和(2)所編碼的多肽與SEQIDN0:2的^J^酸序列具有至少70。/。、至少80%、至少90%、至少95%、或大于95%，例如96%、97%、98%或99%的序列同一性的核酸分子。序列同一性百分?jǐn)?shù)可通過常規(guī)方法測定。參見例如，AltschulWa/.,Aw"."/o.(1986)和HenikoffandHenikoff，jV"/.JcadiW."A《々10915(1992)。簡而言之，^J)空位開放罰分為10,空位延伸罰分為l，并4吏用表6所示的Henikoff和Henikoff(如上述文獻(xiàn))的"BL0S而62"評分矩陣，將兩個絲酸序列進(jìn)行比對以優(yōu)化比對分?jǐn)?shù)(用標(biāo)準(zhǔn)單字母編碼表示絲酌。同一性百分?jǐn)?shù)按下式計(jì)算([一致匹配的總剿/[較長序列的長度+為比對兩序列而在較M列中引入的空位lt])(100)。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>本領(lǐng)域技術(shù)人員了解有多種已知算法可以用于比對兩個M酸序列。Pearson和Lipman的"FASTA，，相似性搜索算法就是一種合適的蛋白質(zhì)比對方法，可用于儉測本文公開的M酸序列和一種推定的IL-17RC變體的^^f列之間的同一性水平。FASTA算法描述于PearsonandLipman，戶roc.yw/Jc^/.ttS4M2444(1988)和Pearson,f/7zj7z70/./《it63(1990)。簡而言之，F(xiàn)ASTA首先在不考慮保守性g^j:換、插入或缺失的條件下，識別查詢序列(例如SEQIDNO:2或SEQIDNO:3)和測試序列共有的、具有最高密度同一性(在kt卯變量-l時(shí))或同一^Jt(在kt卯變量-2時(shí))的區(qū)域，從而表征序列相似性。然后通過^J^絲紅換矩陣比^^斤有S^t的M酸的相似性，對具有最高密度同一性的十個區(qū)域進(jìn)行再評分，并將各區(qū)域的末端"修剪"為僅包括那些對最高評分有貢獻(xiàn)的殘基。如果有一些序列的得分高于"閾(cutoff)"值(通it^于序列長度和ktup^預(yù)定的公式計(jì)算得出)，則枱"測修剪后的初始區(qū)域以確定這些區(qū)域是否參與形成有空位的近似比對。最后，使用改進(jìn)的Needleman-Wunsch-Sellers算法(NeedlemanandWunsch，/A/o/.#444(1970);Sellers,5TM義^/7/.26787(1974))比對兩個氨基,列的得分最高的區(qū)域，該算法中考慮了M酸插入和缺失。FASTA分析的示例性^^t為ktup-l、空位開放罰^=10、空^l伸罰hl以及置換矩陣=BL0SUM62?？梢匀鏟earson，^7z^zk人J《Jt63(1990)的附錄2所述，通過修改評分矩陣文件("SMATRIX")，將上述錄引AFASTA程序中。也可以使用上述公開的比值，將FASTA用于測定核酸分子的序列同一性。對于核苷酸序列比對而言，ktuiHt可為l至6、優(yōu)選地為3至6、最優(yōu)i^i也為3，其他員的設(shè)置同上所述。本發(fā)明包^it樣的核酸^^:它所編碼的多肽與本文>^開的#^#列相比含有保守性的g酸改變。例如，可獲得如下變體所述變體包括SEQIDNO:2或21的一個或多個g酸的置換，其中用)^氨基酸置換IL-17RA或IL-17RC絲酸序列中的拔基^J^酸、用芳香族絲酸置換IL-17RA或IL-17RC絲斷列中的芳香族M酸、用含硫的M^X換IL-17RA或IL-17RC^齡列中的含碌utJ^酸、用含羥基的M紅換IL-17RA或IL-17RCg酸序列中的含鞋基絲酸、用酸性絲醒換IL-17RA或IL-17RC絲齡列中的酸性絲酸、用堿性M酸置換IL-17RA或IL-17RC^J^序列中的堿性^酸，或用二iL^^i^J^酸置換IL-17RA或IL-17RC^J^酸序列中的二iL^r^^氨基酸。在常見M酸中，例如，"保守性^^i:換"可用下列各組內(nèi)的J^酸W目置換來說明(l)甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸，(2)苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸，(3)絲氨酸和蘇氨酸，(4)天冬氨酸和谷氨酸，(5)谷氨纖和天冬皿，以及(6)賴氨酸、精氨酸和組氨酸。BL0SUM62表為來源于蛋白質(zhì)序列區(qū)段的約2，ooo次局部多重比對的M^j:換矩陣，代表了多于500M^目關(guān)蛋白質(zhì)的高y^保守區(qū)域(HenikoffandHenikoff,戶/v9c/Jcacr.5W.〃W<儀10915(1992))。因此，可以使用BL0SUM62置換頻率來確定可被引AJ'J本發(fā)明狄齡列中的保守性M紅換。雖然可以M于化學(xué)'M來設(shè)計(jì)M酸置換(如上所述的)，但是術(shù)語"保守性^J^^換"優(yōu)選地指的是在BLOSUM62表中數(shù)值大于-l的那些置換。例如，如果某一M^^換在BLOSUM62表中用數(shù)值為0、1、2或3表征，則該置換為保守性置換。根據(jù)這一系統(tǒng)，優(yōu)選的保守性M輕換在BL0SUM62表中的表征數(shù)值至少為1(例如1、2或3),而更優(yōu)選的保守性MM:換在BLOSUM62表中的表;^:值至少為2(例如2或3)。IL-17RC的具體變體可表征為與相應(yīng)M酸序列(例如SEQIDNO:2或21)具有至少70%、至少80%、至少90%、至少95%或大于95%例如96%、97%、98°/或99%或更高的序列同一性，其中所述絲齡列的變化來自于一個或多傳守性^j^j:換。例如可以通過用核苷酸代替SEQIDNO:1或SEQIDNO:4所示的核苷酸，在IL-17RA或IL-17RC基因中引入保守性^J^酸改變?？梢酝ㄟ^寡核苷^L向誘變、接頭分區(qū)誘變、使用聚^l^仏應(yīng)的誘變等方法(參見Ausubel(1995);和McPherson(編著)，/Vre"ed他,a併"es/^..j/^ac〃ca"/7iwacA(IRLPress1991))，獲得這類"保守性^酸"變體?？赏ㄟ^與抗IL-17RC抗,異性結(jié)合的能力來識別變體IL-17RC多肽。本發(fā)明的蛋白質(zhì)還可包括非天然存在的a^J^。非天然存在的M酸包括但不P艮于反式3-曱Ut氨酸、2，4-甲醇JJt氨酸、順式4-羥，氨酸、反式4-鞋細(xì)氨酸、^甲基甘氨酸、別蘇氨酸、曱基蘇氨酸、羥基乙基半縫酸、羥基乙基高半J^酸、硝^iJ^酰胺、同型谷氨酰胺(ho邁oglutamine)、六氬旅微酸、瘞^^羧酸、脫髓氨酸、3-和4-曱細(xì)氨酸，3，3-二曱細(xì)氨酸、擊L-亮氨酸、正纈氨酸、2-氮雜笨丙氨酸、3-氮雜苯丙氨酸、4-氮雜苯丙氨酸和4-氟苯丙氨酸。在本領(lǐng)域中，一些用于將非天然存在的llj^^引入蛋白質(zhì)的方法是已知的。例如，可以佳月這樣一種體夕卜系統(tǒng)，該系統(tǒng)中偵月化學(xué)M酰化抑制物tRM抑制了無義突變。合成^J^酸和^JJ^化tRM的方法是本領(lǐng)域中已知的。通常，在一種含有;U^桿菌(￡co//)S30提^L物和市售的酶類和^試劑的無細(xì)胞系統(tǒng)中，進(jìn)行含有無義突變的質(zhì)粒的轉(zhuǎn)錄,譯。通過色鐠法純化蛋白質(zhì)。參見例如，Robertsonefa/.,/ffle邁.5bc〃i2722(1991)、Ellman"a/"^027270/.301(1991);Chungefa/.，5We/ce25"義806(1993)和Chungefa/.，Afe〃/Sc/.鵬船0145(1993)。在第二種方法中，通過微注射突變mRM和化學(xué)^tJ^U匕抑制物tRNA，在非洲蟾繚(Xenopus)卵母細(xì)胞中進(jìn)^ft^譯(Turcatti"a/.,/5/o人Oe瓜n19991(1996))。在第三種方法中，在不含有所要取代的天然氨基酸(例如苯丙氨酸)而含所需的非天然存在的氨基酸(例如2-氮雜苯丙氨酸、3-氮雜苯丙氨酸、4-氮雜苯丙氨酸或4-氟苯丙氨酌的培養(yǎng)基中培養(yǎng);tM桿菌細(xì)胞。非天然存在的M酸影陂引入蛋白質(zhì)中而替代了其天然對應(yīng)物。參見Koide"a人，A'oc力e瓜"7470(1994)?？梢酝ㄟ^體外化學(xué)#^將天然存在的絲酸^轉(zhuǎn)化為非天然存在的種類?？梢詫⒒瘜W(xué)修飾與定點(diǎn)誘變相結(jié)合，以進(jìn)一步擴(kuò)M換的范圍(WynnandRichards,戶rWe//75W.2'395(1993))?？梢杂糜蠵緣量的非保守性Ji^酸、不是由遺傳密碼子編碼的M酸、非天然存在的M酸和非天然^^^換IL-17RA或IL-17RC的^J^^基?？梢愿鶕?jù)下述本領(lǐng)域已知的方法識別本發(fā)明多肽中的關(guān)鍵^J^酸，例如定,泉i秀變或丙氨酸掃描(alanine-scanning)i秀變(CunninghamandWells,5W朋ceiV41081(1989);Bassa/.,#"，/JcadflS4《及4498(1991);CoombsandCorey,"Site-DirectedMutagenesisandProteinEngineering,，，見于尸rofe/脫.y4/7a加/sa/w/2te57卵，Angeletti(編著)，第259-311頁(AcademicPress,Inc.1998))。在丙氨酸掃描資變技術(shù)中，對分子中的每個^J^位置都引入單個的丙氨酸突變，并測試所得的突變體分子的生物活性，從而識別襯活性的關(guān)鍵絲MJ^。還可參見，Hiltone〃/.，/."/o/.C力e瓜2714699(1996)。雖然可以<捐序列分析絲一步確定IL-17RA或IL-17RC配體結(jié)合區(qū)域，但是也可以通過結(jié)構(gòu)的物理分析來測定對于IL-17RA或IL-17RC結(jié)合活性(例如IL-17RC與I卜17A或IL-17F的結(jié)合，以及IL-17RA與IL-17A的結(jié)合)起作用的氨基酸的突變而測定核磁共振、晶體學(xué)、電子衍射或光親和力標(biāo)記。參見例如，deVosefa/.,Ar/e/zce25"Ji306(1992),Smithefa/.,/."4899(1992)和Wlodaver"a/,，尸iEfl^Ze".J狄59(1992)。M而言，識別了以下三個結(jié)構(gòu)域1)結(jié)構(gòu)域1(SEQIDNO:159和160)包括IL-17RC的外顯子8-10。iW應(yīng)于IL-17RCxl(SEQIDNO:2)的絲酸絲193-276和IL-17RCx4(SEQIDNO:166)的絲MJ^208-291。2)結(jié)構(gòu)域2(SEQIDN0:161和162)包括IL-17RC的外顯子11-13。i^f應(yīng)于IL-17RCxl(SEQIDNO:2)的^J^酸絲277-370和IL-17RCx4(SEQIDNO:166)的g^^292-385。3)結(jié)構(gòu)域3(SEQIDNO:163和164)包括IL-17RC的外顯子8-10。i^"應(yīng)于IL-17RCxl(SEQIDNO:2)的^J^酸絲371-447和IL-17RCx4(SEQIDNO:166)的MMj386-462?？梢杂靡阎恼T變方法和篩選方法制備多個a酸置換并進(jìn)行測試，所述方法例如Reidhaar-01son和Sauer(5W朋ceM53(1988))或Bowie和Sauer#W/Jc^f.^X4《^2152(1989))中/>開的方法。簡而言之，以上著者公開的方法包括同時(shí)隨機(jī)化多肽中的兩個或多個位置、篩選功能性多肽，并1^對誘變的多肽測序以確定在^~~位置上可以置換的圖語。其他可以^JI的方法包括嗟菌體展示(例如LowmanWa/.，A/oc力e瓜Jft10832(1991);Ladner等人的美國專利No.5,223,409;Huse的國際申諱vi^^W092/06204)和區(qū)域定向i秀變(Derbyshireefa人，C朋e46145(1986)和Nerefa/.,7,127，(1988))。此外，可以將帶有生物素或FITC標(biāo)記的IL-17RC或IL-17RA用于IL-17RC配體的表達(dá)克隆。還可以通過Ste咖er，A^^/reJ7ft389(1994);Ste咖er，/Jcad&2'.KX4刃:10747(1994)和國際申請7^布W097/20078中/^開的DNA^ti且技術(shù)，產(chǎn)生所公開的IL-17RC或IL-17RA核苷酸和多肽序列的變體。簡而言之，通過4f^體DNA的隨機(jī)片段化，然后^J^lPCR進(jìn)行重新組^Mi行體夕卜同源重組，從而產(chǎn)生隨機(jī)引入的點(diǎn)突變，以產(chǎn)生變體DM分子。這一技術(shù)可以通過使用母體DNA分子的家族(例如來自不同物種的等位基因變體或DNA分子)進(jìn)行改進(jìn)，以在過程中引入另外的可變性。對所需活性的選擇或篩選，以及接著進(jìn)行另外的誘變的重復(fù)和測定提供了序列的快速"進(jìn)化"，這種進(jìn)化是通iti^擇所需的突變并同時(shí)篩選掉有害的改變而實(shí)現(xiàn)的。本文公開的誘變方法可以與高通量自動篩選方法相結(jié)合，以檢測宿主細(xì)胞中克隆的誘變多肽的活性。可以使用現(xiàn)代化裝置從宿主細(xì)胞中回^碼生物活性多肽或與抗IL-17RC或IL-17RA抗體結(jié)合的多肽的誘變DM分子，并對其快速44測序。這些方法使得可以艦確定目的多肽中個別絲MJ^的重要Ii，并可以應(yīng)用于未知結(jié)構(gòu)的多肽。本發(fā)明還包括IL-17RC或IL-17RA多肽的"功能性片段"和編碼這類功能性片段的核酸分子。這些功能性片段可以單獨(dú)地或"^結(jié)合一個或多個配體(即IL-17A和IL-17F兩者)?？梢赃M(jìn)行核酸分子的常規(guī)缺失分析，以獲得編碼IL-17RC或IL-17RA多肽的核酸分子的功能性片段。例如，可以用勘/31核酶來消化具有SEQIDN0:1或SEQIDNO:4的核苷酸序列的DNA分子，以獲得一系列嵌#^失。然后將所述片段插^4達(dá)載體的合適的讀碼框中，分離所表達(dá)的多肽并測試其與抗IL-17RC抗體結(jié)合的能力。或者可以不佳月外切核酸酶消化而^JU寡核苷酸定向誘變，來引入缺失或者終止密碼子來限定所需片段的產(chǎn)生?；蛘呖梢証^I聚合il^iC^來合成IL-17RC或IL-17RA基因的特定片段。這一通用方法在HorisbergerandDiMarco,戶力ar邁ac.TXer.M507(1995)所總結(jié)的對于千擾素的一端或兩端截短的研究中有所示例。此外，用于蛋白質(zhì)功能性分析的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)在下述文獻(xiàn)中有所描述例如，Treutere"/.，6fe/7.toet113(1993);Contente"義，"Expressionandpreliminarydeletionanalysisofthe42kDa2_5Asynthetaseinducedbyhumaninterferon"見于"/o/og/ca///zfer/ls/YM分"e咖'/!roceei//"^so/*Z57^-7M#ee〃/7go/zZo^r尸ero/7S7We/zw，Cantell(編著)，第65-72頁(Nijhoff1987);Herschman，"TheEGFRec印tor，"見于Co/"o/。/^/7/咖76fe7/戶rWera〃cw,^人J,BoyntonWa/.，(編著)第169-199頁(AcademicPress1985);Coumailleauefa/.，義5/o人C力e瓜27ft29270(1995);Fukunagaa/.,/A/o/.C力e邁.27ft25291(1995);Yamaguchia/.，"/'oc力e瓜戶A2i7asco丄Jft1295(1995):fpMeisela/.，戶/a刀fMl(1996)。本發(fā)明還考慮到了與本文公開的氨基酸序列相比具有氨基酸改變的IL-17RC或IL-17RA基因的功能性片段?？梢匀缟纤鵡J4if過測定與所公開的核苷酸和M酸序列的同一性水平，基于結(jié)構(gòu)來識別變體IL-17RC或IL-17RA基因。另一種基于結(jié)構(gòu)識別變體基因的方法是測定一種編碼潛在變體IL-17RC或IL-17RA基因的核酸分子是否能夠與包括例如SEQIDNO:1或SEQIDNO:4的核苷酸序列的核酸分子雜交。本發(fā)明還包括使用IL-17RC或IL-17RA多肽的功能性片段、IL-17RC和/或IL-17RA多肽的抗原性表位、帶有表位的部分或配體結(jié)合部分，以及編碼IL-17RC和/或IL-17RA多肽的這類功能性片段、抗原^^位、帶有表位的部分或配體結(jié)合部分的核酸分子。^^這類片M產(chǎn)生多肽，以用于產(chǎn)生能夠結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17A和/或IL-17F的活性的可溶性受體或結(jié)合襯。本文定義的"功能性"IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多^iL其片段的特征是它們能夠通過其誘導(dǎo)或抑制M細(xì)胞功能的能力或與IL-17A和/或IL-17F特異性結(jié)合的能力，從而阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17A和/或IL-17F的炎癥活性、增殖活性或分化活性。如上文所述，IL-17RA和IL-17RC都是以本文所述的獨(dú)特細(xì)胞因子受體結(jié)構(gòu)和結(jié)構(gòu)域?yàn)樘卣鞯?。因此，本發(fā)明還考慮了使用包括下述肽的融合蛋白(a)包括一個或多個上述結(jié)構(gòu)域的多肽分子；以及(b)包括一個或多個上述結(jié)構(gòu)域的功能性片段。所述融合蛋白的其他多肽部分可以來自另一種細(xì)胞因子受體，例如IL-17樣受體、IL-17RA、IL-17RE、IL-17RD,或來自可以皿所述融^"白分泌的非天然和/或非相關(guān)的分泌信號肽。本發(fā)明還提供包括本文所述IL-17RC或IL-17RA多肽的配體結(jié)合部分的多肽片段或肽。這類片段或肽可包括IL-17RC或IL-17RA的與其各自配體(IL-17A和/或IL-17F)結(jié)合的部分。對于IL-17RC或IL-17RA多肽(包括變體和融^白)而言，本領(lǐng)域"fit技術(shù)人員4捐以Ji^l和表2所列出的信息，可以容易地產(chǎn)生編碼該變體的完全簡并多核苷酸序列。此外，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以使用標(biāo)準(zhǔn)軟件基于本文所述的核苷酸和M酸序列設(shè)計(jì)IL-17RC或IL-17RA變體。0/Z-J7WC、7Z-J7A^WZ-J7/農(nóng)的浙備本發(fā)明的多肽包括妙多肽；可溶性單體、同二聚體、異二聚體和多聚體形式的受體；全長受體；受體片段(例如配體結(jié)合片段和抗原'It^位)、功能性片段、和融M白，它們#^以#^常^4支#重組宿主細(xì)胞中產(chǎn)生。為了表達(dá)IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA基因，必須將編碼所述多肽的核齡子與控制表ii^體中的轉(zhuǎn)絲達(dá)的調(diào)辦列有^i^接，然后再引入宿主細(xì)胞中。除了篩選帶有表ii^體的細(xì)胞的才朽己基因。適于在真核細(xì)胞中產(chǎn)生外源蛋白質(zhì)的表達(dá)載體通常含有(1)編碼細(xì)菌復(fù)制起點(diǎn)的原核DNA元件，和編碼抗生素抗性標(biāo)記以便于表達(dá)載體在細(xì)菌宿主中生長和篩選的原核DM元件；(2)控制轉(zhuǎn)錄啟動的真核DNA元件，例如啟動子；和(3)控制轉(zhuǎn)錄物的加工的DNA元件，例如轉(zhuǎn)錄終止/多腺普酸化序列。如上所述，表ii^f^可以包括編碼指導(dǎo)異源多^m^宿主細(xì)胞的分泌途徑的分泌序列的核苷酸序列。例如，IL-17RC表達(dá)載體可包括IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA基因和來源于^^分泌基因的分泌序列。本發(fā)明的IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA蛋白可在哺乳動物細(xì)胞中表達(dá)。合適的哺乳動物宿主細(xì)胞的實(shí)例包括非洲綠猴腎細(xì)胞(Vero;ATCCCRL1587)、人類胚胎腎細(xì)胞(293-HEK;ATCCCRL1573)、幼倉鼠腎細(xì)胞(BHK-21，B服-570;ATCCCRL8544,ATCCCRL10314)、犬腎細(xì)胞(MDCK;ATCCCCL34)、中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CH0-K1;ATCCCCL61;CHODG44(ChasinWa/.，5b瓜6W/.6te/".72555，1986))、大鼠垂體細(xì)胞(GH1;ATCCCCL82)、HeLaS3細(xì)胞(ATCCCCL2.2)、大鼠肝癌細(xì)胞(H-4-II-E;ATCCCRL1548)、SV40轉(zhuǎn)化的猴腎細(xì)胞(COS-1;ATCCCRL1650)和鼠類胚胎細(xì)胞(NIH-3T3;ATCCCRL1658)。對于哺乳動物宿主而言，轉(zhuǎn)錄和翻譯調(diào)節(jié)性信號可以來源于哺乳動物病毒，例如，腺病毒、牛乳頭狀瘤病毒、猿猴病毒等等，其中的調(diào)節(jié)性信號與具有高表達(dá)水平的特定基因相關(guān)。合適的轉(zhuǎn)錄^，控序列還可來自哺乳動物基因，例如，肌動蛋白基因、J!^^基因、>蛋白基因和金屬硫蛋白基因。轉(zhuǎn)錄調(diào)控序列包括足以指導(dǎo)RNA合成的起始的啟動子區(qū)域。合適的真核細(xì)胞啟動子包括小鼠金屬硫蛋白I基因的啟動子(HamerWa/.，/.^/7/.A273(1982))、皰滲病毒的7T啟動子(McKnight，CW/處355(1982))、574^f期啟動子(BenoistWa/"Vfefwe2夕ft304(1981))、勞斯肉瘤病毒啟動子(Gormanefa丄，iVoc.#"〃^cadX47義6777(1982))、巨細(xì)胞病毒啟動子(FoeckingWa丄，6fe/e45101(1980))和小鼠乳腺瘤病毒啟動子(總體參見，Etcheverry，"ExpressionofEngineeredProteinsinMammalianCellCulture"見于戶ro/"e//7^0^7"eer/"f/V/"c//7/^犯d/Va"/ce，C1e1and"a/.(編著)，第163-181頁(JohnWi1ey&Sons,Inc.1996))。或者，如果原核啟動子受真核啟動子的調(diào)節(jié)，可以佳月該原核啟動子(例如噬菌體T3RNA聚合酶啟動子)來控制哺乳動物細(xì)胞中的基因表達(dá)(ZhouWa/"A/o/.7ft4529(1990)和KaufmanWa/.,Jc/c^7iM485(1991))。在某些實(shí)施方案中，將編碼IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA可溶性受體多肽的DNA序列，或編碼IL-17RC、IL-17RA或IL-17RC/IL-17RA多肽的片段的DNA序列與表達(dá)載體中的表達(dá)所需的其他遺傳元件有效連接，所述其他遺傳元件通常包括轉(zhuǎn)錄啟動子和終止子。載*通常含有一個或多個可篩選的標(biāo)記和一個或多個復(fù)制起泉，但是本領(lǐng)域技^A員應(yīng)認(rèn)識到，在某些系統(tǒng)中可篩選標(biāo)記可以在另一載體中提供，并且可通過^^至宿主細(xì)胞基因組中來提供外源DNA的復(fù)制。啟動子、終止子、可篩選標(biāo)記、載體和其他元件的選#^是本領(lǐng)域技術(shù)人員能力范圍之內(nèi)的常M/f亍為。許多這類元件都在文獻(xiàn)中有述并可從供應(yīng)商處商購?？扇躀"生受體復(fù)合物的多個組分可以用各自的表達(dá)載^"轉(zhuǎn)染，或者被包括在同一個表達(dá)載體中。表達(dá)蛋白質(zhì)復(fù)*中的多個組分的這類技林^U頁域中A^^p的。可以^^I各種標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)將表錄體引入宿主細(xì)胞中，所述標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)包括磷酸釣轉(zhuǎn)染、月旨質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、微注射介導(dǎo)的illit和電穿孑L等等?？梢院Y選和擴(kuò)增轉(zhuǎn)染的細(xì)胞，以提^^有被穩(wěn)定^^進(jìn)宿主細(xì)胞基因組的表ii^體的重組宿主細(xì)胞。用于將栽體-j入絲細(xì)胞的技術(shù)以賴顯性可篩選才朽5篩i^it類穩(wěn)定轉(zhuǎn)染體的技術(shù)在下列文獻(xiàn)中有述例如，Ausubel(1995)和Murray(ed.)，6fe加rra/w/"ei"s/k/^r//7^/Qfl/!ro^co/y(HumanaPress1991)。例如，一種合適的可篩選標(biāo)記為可提供新霉素抗生素抗性的基因。在這種情況下，要在存在新霉素類藥物的務(wù)降下進(jìn)行篩選，所述新霉素類藥物例如G-418等等。還可以^Jl篩選系統(tǒng)來提高目的基因的表i^K平，這一過程被稱為"擴(kuò)增"。擴(kuò)增按照下述步^ii行^#在低7^平篩選藥物的務(wù)降下培##染體，然后逐漸增加篩選藥物的量，以篩選能夠高水平表達(dá)所引入基因的產(chǎn)物的細(xì)胞。一種合適的可擴(kuò)增可篩選標(biāo)記為二氳葉酸還原酶(DHFR),它可提供對曱氨喋呤的抗性。也可以^J^其他藥物抗性基因(例如潮霉素抗性、多藥物抗性、噤呤霉素乙,移酶)?；蛘?，可以使用可引X^型變化的標(biāo)記，例如綠色熒光蛋白或細(xì)I&4面蛋白例如CD4、CD8、I類MHC和胎盤堿性磷酸酶，從而可通過例如FACS分選iU^K分離技術(shù)的方法將轉(zhuǎn)染細(xì)胞與未轉(zhuǎn)染細(xì)糾目分離。還可以通過使用病毒送遞系統(tǒng)由培養(yǎng)的哺乳動物細(xì)胞產(chǎn)生本發(fā)明的多肽。可用于這一目的的示例性病毒包括腺病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、皰滲病毒、牛痘病毒和腺伴隨病毒(AAV)。腺病毒為一種雙御NA病毒，它是目前研究最透徹的用于送遞異源核酸的基因轉(zhuǎn)運(yùn)栽體(綜述可參見BeckerWa/.,Ce//M161(1994)和DouglasandCuriel，5t/e/zce<f淑/c/"e4.44(1997))。腺病毒系統(tǒng)的優(yōu)勢包括可以容納相對較大的DM插入物、能夠生長至高滴度、能夠感染多種哺乳動物細(xì)胞類型和能夠與含有不同啟動子的多種現(xiàn)有載絲兼容。通過缺失部分腺病毒基因組，可以容納較大的異源DNA插入物(最高達(dá)7kb)。可以通過直接連接或通過^^共轉(zhuǎn)^粒的同源重組將這些插入物引入病毒DNA。一種方案是缺失病毒載體所必需的W基因，這使得病毒不能在宿主細(xì)胞未提供W基因的M下進(jìn)行復(fù)制。例如，腺病毒載M染的人類293細(xì)胞(ATCC編號CRL-1573，45504,45505)可以作為粘附細(xì)胞或在懸浮培養(yǎng)中以相對高的細(xì)胞密度生長，以產(chǎn)生顯著量的蛋白質(zhì)(參見，GamierWa人，C7/Wec力"0/.75145(1994))。本發(fā)明的多肽還可以在務(wù)他高等的真核細(xì)胞中表達(dá)，所述高等真核細(xì)胞例如鳥類細(xì)胞、真菌細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞、酵母細(xì)M植物細(xì)胞。桿狀病毒系^^供了將克隆的基因引入昆蟲細(xì)胞的有效手段。合適的表達(dá)載體基于苜蓿^^M(jw"^ra/7A3ca///b/7z/ca)多核型多角體病毒(AcMNPV)，并含有公知的啟動子，例如果蠅(Drosophila)熱休克蛋白(力《/7)70啟動子、苜蓿銀紋M核型多角體病毒立即早期基因啟動子(/e-力和延時(shí)早期J鬼啟動子、桿狀病毒/7M啟動子和果蠅金屬硫蛋白啟動子。另一種制備重組桿狀病毒的方法使用了Luckow所述的基于轉(zhuǎn)座子的系統(tǒng)(Luckow，efa/.,/.Wro/.fZ4566(1993))。這一使用轉(zhuǎn)運(yùn)載體的系統(tǒng)以BAC-to-BAC試劑盒(LifeTechnologies,Rockville，MD)的形式出售。這一系統(tǒng)中使用了含有Tn7轉(zhuǎn)座子的壽錄載體PFASTBAC(LifeTechnologies),從而以凈皮稱為"bacmid"的大質(zhì)粒的形式將編碼多肽的DNA送遞至大腸桿菌所含有的桿狀病毒基因組中。參見，Hill-PerkinsandPossee，/6te/z.f7ro/.Z/:971(1990)、Bonning,efa/.，/6te/7.廠/yo/.7^1551(1994)和Chazenbalk，andRapoport，乂"/o人C力e邁.27"1543(1995)。此外，^載體可包括在所表達(dá)多肽的C端或N端框內(nèi)融合的編碼表位標(biāo)簽的DM,所述表位標(biāo)簽例如Glu-Glu表位標(biāo)簽(GrussenmeyerWa/.，戶iYa/Jcad《27952(1985))。^JI本領(lǐng)域已知的技術(shù)，將含有編碼本發(fā)明多肽的基因的#^載#^#化至^桿菌中，并針對bacmid進(jìn)行篩選，含有被中斷的/ac逸因的即表明為重組桿狀病毒。然后佳JU常Mi支術(shù)分離^^有bacmidDM的重組桿狀病毒基因組。可以對示例性的PFASTBAC載體進(jìn)^t^目當(dāng)大程度的^^。例如，可以除去多角體蛋白啟動子并替換為桿狀病毒堿性蛋白啟動子GiU皮稱為Pco7"，p6.9或MP啟動子)，該啟動子在桿狀病毒感染的較早期表達(dá)，并被證實(shí)有利于表達(dá)分泌蛋白(參見例如，Hill—PerkinsandPossee，/.F/W.77:971(1990)、Bonning，a/.,乂6te/7.K/ro/.751551(1994)和ChazenbalkandRapoport，/.A/o義Ge瓜27ft1543(1995)。在這類絲載糾建體中可以^JI長形式或短形式的堿性蛋白啟動子。此外，可以用來源于昆蟲蛋白的分泌信號序列替代天然分泌信號序列，從而構(gòu)建#^載體。例如，可#建體中使用來自蛻皮素葡萄糖基轉(zhuǎn)移酶(EGT)、蜜轉(zhuǎn)^r毒肽(InvitrogenCorporation;Carlsbad,CA)或桿狀病毒gp67(PharMingen:SanDiego，CA)的分泌—言號序列來代替天然IL-17RC分^f言號序列。使用重組病毒或bacmid來轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞。合適的昆蟲宿主細(xì)胞包括來源于IPLB-57-21的細(xì)胞系、草地貪絲(&0^^"<2/y堪/》ei^)蛹卯巢細(xì)胞系例如S/9(ATCCCRL1711)、S/21AE和5y21(InvitrogenCorporation;SanDiego，CA)，以及果蠅施耐德(Schneider)-2細(xì)胞和來源于甘蘭尺蠖(7Wc力o//^/a/力的HIGHFIVE0細(xì)胞系(Invitrogen)(美國專利No.5,300，435)。可以使用市售的無血清培養(yǎng)基來培養(yǎng)和維持細(xì)胞。合適的培養(yǎng)基為用于Sf9細(xì)胞的Sf900n(LifeTechnologies)或ESF921(表達(dá)系統(tǒng))；以;SJU于甘蘭尺蠖細(xì)胞(Z/z/)的Ex-cel10405114(JRHBiosciences,Lenexa，KS)或ExpressFiveO(LifeTechnologies)。當(dāng)使用重組病毒時(shí)，接種密度大約為2-5x105個細(xì)胞，細(xì)胞由接種密度生長至l-2x106個細(xì)胞時(shí)加入重組病，液，感染復(fù)數(shù)(MOI)為O.l至lO,更通常J4^近3。用于在桿狀病毒系統(tǒng)中生產(chǎn)重組蛋白的成熟技術(shù)在下列文獻(xiàn)中給出#"力<9&//#o/ecw/a_r第7巻,'toe7a/w"/"er犯t/^"re^/o/z/^"co/aMurray(編著)，第147-168頁，Bailey等人的"ManipulationofBaculovirusVectors"(TheHumanaPress,Inc.1991);鵬2.^r/rew/朋i>^/e/zw，第2版，Glovera人(編著)，第205-244頁，Patel等人的"Thebaculovirusexpressionsystem"(OxfordUniversityPress1995);Ausubel(1995),第16-37至16-57頁；Richardson(編著)，勘cu/or/77wi^re^/o"戶ro/oco/s(TheHumanaPress,Inc.1995)和戶ro^3//7_fe^7"ear//^;尸r/'刀"》/es朋d/!rac〃ce，Clelanda/.(編著)，第183-218頁，Luck譜的"InsectCellExpressionTechnology"(JohnWiley&Sons,Inc.1996)。還可以使用真菌細(xì)胞(包^SI母細(xì)胞)il^Ji^文所述的基因。用于這一目的的特別受關(guān)注的酵母物種包括釀酒酵母Cfecc力arcsfl^cMcere^y/ae)、巴斯德畢赤酵母CWc力/a，"or/力和曱醇畢赤酵母(尸/c力/ayze^a/o//ca)。用于在酵母中的表達(dá)的合適啟動子包括來自WZ7(半享14奮)、凡f(磷酸甘油酸酯激酶)、JM(醇脫氬酶)、MZ/(醇氧化酶)、HIS4(組氨醇脫氫酶)等的啟動子。已經(jīng)設(shè)計(jì)出了許多酵母克隆載體并且它們都是容易獲得的。這類載體包括基于YIp的載體例如YIp5、YRp載體例如YRp17、YEp載體例如YEp13，以及YCp載體例如YCpl9。用外源DNA轉(zhuǎn)化釀酒酵母GS:細(xì)胞并由此生產(chǎn)重組多肽的方法7>開于下列文獻(xiàn)例如，Kawasaki的美國專利No.4,599,311、Kawasaki等人的美國專利No.4,931,373、Brake的美國專利No.4,870,008、Welch等人的美國專利No.5，037，743和Murray等人的美國專利No.4,845,075。通過由可篩選標(biāo)記確定的表型篩選轉(zhuǎn)化的細(xì)胞，所述可篩選標(biāo)記通常為藥物抗性或能夠在缺少特定營#^(例如亮氨酌的務(wù)降下生長的能力。一種合適的用于釀酒酵母的載體系統(tǒng)為由Kawasaki等人(美國專利No.4,931，373)^>開的^W77載體系統(tǒng)，該系統(tǒng)使得可以通#含葡萄糖的培養(yǎng)基上的生長來篩選轉(zhuǎn)化的細(xì)胞。其他可用于酵母的合適的啟動子和終止子包括來源于糖酵解酶基因(參見例如Kawasaki的美國專利No.4，599，311、Kingsman等人的美國專利No.4,615，974和Bitter的美國專利No.4，977，092)和醇脫氬酶基因的啟動子和終止子。還可參見美國專利No.4,990,446、5,063,154、5，139，936和4,661，454。用于其它酵母的轉(zhuǎn)化系統(tǒng)也是本領(lǐng)域已知的，所述M酵母包括多形漢森酵母(泡/we加/a/w/戸or/7力a)、粟酒裂殖酵母(it力/z靖cc/5wr咖7i[7e5";咖6e)、乳酸克魯維酵母(r/w/p^r湖7c"/acW;y)、脆壁克魯維酵母Q7ii7Fe/"o邁7ces/rag27/》、玉蜀黍黑粉菌(^yf/7財(cái)o邁a/^/s)、巴斯德畢赤酵母CP/c力/a，"oW》、曱醇畢赤酵母CP/c力/a邁e^a/o/ica)、季氏畢赤酵母CP/c力2'a^//7/er邁朋d//)和麥芽糖^^酵母(。/^/A鵬/^w)。參見例如，GleesonWa/,，/.6fe幾#/cro6/o/.3459(1986)和Cregg的美國專利No.4,882,279?？梢愿鶕?jù)McKnight等人的美國專利No.4，935，349的方'^^^J曲霉(^^"http:///"5)細(xì)胞。Sumino等人的美國專利No.5，162,228中乂>開了轉(zhuǎn)化產(chǎn)黃頂抱審"cre邁o/2/咖cAr7S0^3/7M^)的方法。Lambowitz的美國專利No.4，486,533中公開了轉(zhuǎn)化鏈孢霉OVfeww/wra)的方法。例如，下列文獻(xiàn)公開了使用甲醇畢赤酵母作為宿主生產(chǎn)重組蛋白的用途Raymond的美國專利No.5,716,808、Raymond的美國專利No.5,736,383、RaymondWa/.,/fea^W:11-23(1998)和國際申請公聊097/17450、W097/17451、W098/02536和W098/02565。用于轉(zhuǎn)化曱醇畢赤酵母的DNA分子通常應(yīng)制備為雙鏈環(huán)形質(zhì)粒形式，并^^i^ME轉(zhuǎn)化前進(jìn)行線性化。為了在曱醇畢赤酵母中生產(chǎn)多肽，質(zhì)粒中的啟動子和終止子可為曱醇畢赤酵母基因的啟動子和終止子，例如曱醇畢赤酵母的醇利用基因C^7i4'^^。其他可用的啟動子包括二羥基丙酮合酶(DHAS)、曱艦氬酶(FMD)和it^化氬酶(CAT)基因的啟動子。為幫助DNA整合iiX宿主染色體，優(yōu)i^將質(zhì)粒的整個表達(dá)區(qū)段加在宿主DM序列兩端的側(cè)翼。一種可用于甲醇畢赤酵母的^^適的可篩選標(biāo)記為曱醇畢赤酵母J"&，基因，該基因編碼磷酸核糖基-5-氨基咪唑羧化酶(AIRC;EC4.1.1.21),并且可以使得acfe2宿主細(xì)l^缺少腺噤呤的M下生長。對于需要盡量減少曱醇使用的;U^工業(yè)工藝而言，可以^JI缺失了兩種甲醇利用基因C4恥7和^/(^)的宿主細(xì)胞。為了產(chǎn)生分泌蛋白，宿主細(xì)胞可為空泡蛋白酶基因CP朋咖尸朋i)缺陷型細(xì)胞。使用電穿孔來幫助將含有編碼目的多肽的DNA的質(zhì)粒引入曱醇畢赤酵母細(xì)胞。^J^指數(shù)衰減脈沖電場，通過電穿孑L轉(zhuǎn)化曱醇畢赤酵母細(xì)胞，所述電場的場強(qiáng)為2.5至4.5kV/cm，優(yōu)i^fe為約3.75kV/cm，時(shí)間常數(shù)(t)為l至40毫秒，最優(yōu)逸地為約20毫秒。還可以將表達(dá)載體引入植物原生質(zhì)體、完整的植物組織或分離的植物細(xì)胞中。將表達(dá)載體引入植物組織的方法包括用根瘤土壤桿菌U^Y6a"er/咖f咖e/ac/e/5)直接感染植物組織或?qū)⒅参锝M織與根瘤土壤桿菌共培養(yǎng)、#^立介導(dǎo)的itit、DNA注躲電穿孑L等等。參見例如，Horsche"/.,5W朋ce"7:1229(1985)，Kleinefa丄，5/WecA/70/c5g77。268(1992)和//尸/aWA/o/ogjai^fA/c^ecAflo/c^7，Glicke"/.(編著),第67-88頁,Miki等人的"ProceduresforIntroducingForeignDNAintoPlants"(CRCPress,1993)?；蛘撸幋a本發(fā)明多肽的基因也可以在原核宿主細(xì)胞中表達(dá)。可用于在原核宿主中表達(dá)IL-17RC多肽的合適啟動子是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，包括能夠識別T4、T3、Sp6和T7聚合酶的啟動子、入噬菌體的PK和PL啟動子、；tM桿菌的^r/7啟動子、red啟動子、熱^K克啟動子、/ac"K啟動子、^c啟動子、//^-/ac^jw啟動子、/7力W啟動子和/acZ啟動子、枯草芽孢桿菌(B.subtilis)的啟動子、芽孢桿菌(Bacillus)的噬菌體的啟動子、鏈霉菌(Str印tomyces)的啟動子、入噬菌體的/W啟動子、pBR322的Wa啟動子和氯霉素乙,移酶基因的CAT啟動子。關(guān)于原核啟動子的綜述可參見Glick，///zd/:277(1987)，Watsonefa/.,胞/ecw/aro尸^力e6te/ze，W力紐(BenjaminCummins1987)，和Ausubel"a/.(1995人合適的原核宿主包括大腸桿菌和枯草芽孢桿菌(勘C27/M犯"27iAS).合適的^桿菌菌林包括BL21(DE3)、BL21(DE3)pLysS、BL21(DE3)pLysE、DH1、DH41、DH5、DH5I、DH5IP、DH5IMCR、DH10B、DH10B/p3、DH11S、C600、HBIOI、JMIOI、扁5、扁9、JMllO、K38、RR1、Y腦、Y腦、CSH18、ER1451和ER1647(參見例如，Brown(編著)，Za6尸ai(AcademicPress1991))。^^適的枯草芽柳菌菌林包括BR151、YB886、MI119、MI120和B170(參見例如，/WJ"朋//7&.J戶ra"/ca/J/7jwoac力，Glover(編著)中Hardy的"BacillusCloningMethods"(IRLPress1985))。當(dāng)在例如桿菌的細(xì)菌中表ii^發(fā)明的多肽時(shí)，多肽可能通常以可溶性顆粒的形式保留在細(xì)胞質(zhì)中，或者可能通過細(xì)菌分泌序列定向至周質(zhì)空間。對于前一種情況，可以裂解細(xì)胞、回^粒并且使用例如異硫氰^1或尿素使其變性。然后通過稀釋變性液(例如用含有尿素和i^f、型和氧化型谷胱甘肽的溶液進(jìn)行透析，然后再用緩沖鹽溶液進(jìn)行透析)使變性的多肽重新折疊并二聚化。對于后一種情況，可以通過破碎細(xì)胞(例如超聲破碎或滲妙破碎)使得周質(zhì)空間中的內(nèi)綠料并回收蛋白質(zhì)，從而以從周質(zhì)空間中回收可溶性和功能性形式的多肽，這樣就無需進(jìn)行變性和重新折疊。在原核宿主中表達(dá)蛋白質(zhì)的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的(參見例如，/WJWo/7//^2.^/7re^/o/zi^&咖，第2版，Gloverefa/.(編著)，第15頁,Williams等人的"Expressionofforeignproteinsin￡c<//usingplasmidvectorsandpurificationofspecificpolyclonalantibodies"(OxfordUniversityPress1995);M/70c/o加"/z〃6o力'w/W/7c/;7/e"/KfJ/7//7c"/o/w1，第137頁,Ward等人的"GeneticManipulationandExpressionofAntibodies"(Wiley-Liss，Inc.1995)和戶ro/e/"￡o^i/7ee_r//^..a/zc^i"a"2'ce，Clelande"/.(編著)，第IOI頁,Georgiou的"ExpressionofProteinsinBacteria"(JohnWiley&Sons,Inc.1996))。例如Ausubel(1995)中提供了用于將表達(dá)載體引入細(xì)菌細(xì)胞、酵母細(xì)胞、昆蟲細(xì)^p植物細(xì)胞的標(biāo)準(zhǔn)方法。在哺乳動物細(xì)胞系統(tǒng)中表^卜源蛋白質(zhì)和回收所產(chǎn)生的外源蛋白質(zhì)的通用方法在例如戶rofe//7勘^7/7eer/塔./W/zc/p/esa/w/戶ra"/ce，Clelandefa/.(編著)，第163頁，Etcheverry的"ExpressionofEngineeredProteinsinMammaUanCellCulture"(Wiley-Liss，Inc.1996)中給出。回收由細(xì)菌系統(tǒng)產(chǎn)生的蛋白質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)方法在例如"眉C/朋//7《么'^TjWe"/0/7i^&叫第2版，Glover"a人(編著)，第59—92頁，Grissha咖er的"Purificationofover-producedproteinsfrom五co//cells"(OxfordUniversityPress1995)中給出。從桿狀病毒系統(tǒng)中分離重組蛋白的成熟方法在Richardson(編著)，勘cw/o^7ri^^jwe^57'朋iWoco/s(TheHumanaPress,Inc.1995)中有所描述。或者，可以使用完全固相合成法、局部固相合成法、片段縮合法或經(jīng)典的溶如，Merrifield,/血C力e瓜ibc.2149(1963);Stewarte"厶，"SolidPhaseP印tideSynthesis"(第2紀(jì)，(PierceChemicalCo.1984);BayerandRapp，f力e邁.戶抓尸脫J:3(1986);Athertone"/"5W/d尸toe/tej!7〃cfe分/7f力e^.'^尸ra"/ca/J/jWoac力(IRLPress1989);FieldsandColowick,"Solid-PhasePeptideSynthesis,，，胞t力o^y//7iizz720/0^7第289巻(AcademicPress1997)和Lloyd-Williamsa/"C&e/zw'ca/4p/7roacMy^e分/^力es/so//fe|/7〃^a/w/戶rc^e/"s(CRCPress,Inc.1997))。完全化學(xué)合成策略的一些修^:略，例如"天然化學(xué)連接"和"表達(dá)的蛋白質(zhì)連接"也是本領(lǐng)域中的標(biāo)準(zhǔn)方法(參見例如，Dawsone"/.，5W朋ce2^f:776(1994);Hackenga/.，vVW，7A^sdttS^夕4:7845(1997);Dawson,f/7zj7z70/.34(1997);Muira/,iVoc./5W.tt^夕J":6705(1998)和SeverinovandMuir，/"/o丄C&e瓜"J:16205(1998))。本發(fā)明的肽和多肽包括SEQIDNO:2、SEQIDNO:5或SEQIDNO:21的至少6個、至少9個或至少15個連續(xù)M酸殘基。例如，多肽可包括SEQIDNO:2、SEQIDN0:5和/或SEQIDNO:21的至少6個、至少9個或至少15個連續(xù)^J^酸殘基。在本發(fā)明的某些實(shí)施方案中，所述多肽包括上述^J^酸序列的20、30、40、50、100或更多個連續(xù)殘基。編碼這類肽和多肽的核酸分子可用作聚合酶漣式^的引物和探針。此外，本發(fā)明的多皿其片段在高等真核細(xì)胞中可以以單體、同二聚體、異二聚體或多聚體的形式表達(dá)?？梢约袹這類細(xì)胞來產(chǎn)生至少含有IL-17RC多肽的一部分("含IL-17RC的受體，，或"含IL-17RC的受體多肽")或IL-17RC和IL-17RA兩者結(jié)合的-^分(以單體、同二聚體或異二聚體的形式)的IL-17RC單體、同二聚體、異二聚體和多聚體受體多肽，或者可以^J^這類細(xì)胞作為篩選系統(tǒng)中的測試細(xì)胞。在本發(fā)明的一個方面，由培養(yǎng)的細(xì)胞產(chǎn)生至少包括IL-17RC或IL-17RA的0卜結(jié)構(gòu)域的配體結(jié)合部分的本發(fā)明的多肽，并且所述細(xì)^^皮用于篩選所述受體的配體，所述S己體包括天然配體IL-17F以及IL-17A，或者甚至包括天然配體的激動劑和拮抗劑?？偠灾?，這一方法包括將編碼受體的cDM或基因與其表iii斤需的糾遺傳元件(例如轉(zhuǎn)錄啟動子)相結(jié)合，然后將所得的表達(dá)載入至宿主細(xì)胞中。選擇表達(dá)該DM并產(chǎn)生功能性受體的細(xì)胞并將其用于多種篩選系統(tǒng)中?？蒞目同的細(xì)胞中表達(dá)單體、同二聚體、異二聚體和多聚體受體復(fù)絲的^"組分。此外，單體、同二聚體、異二聚體和多聚體受體復(fù)合物的組^^可以與跨膜結(jié)構(gòu)域或^fe膜融^W目融合，以使得可以如上所^^^且裝復(fù)*并篩選轉(zhuǎn)染體。為測定本_發(fā)明的多肽，適用于表達(dá)IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA受體或已知能結(jié)合IL-17A或IL-17F的其他受體并轉(zhuǎn)導(dǎo)受體介導(dǎo)的信號的哺乳動物細(xì)胞(例如表達(dá)IL-17R的細(xì)胞)，包括^4達(dá)可與IL-17RC形成功能性復(fù)合物的其他受體亞基的細(xì)胞。還^i^使用與待表達(dá)的受體來自于同一物種的細(xì)胞。在一個優(yōu)選的實(shí)施方案中，細(xì)胞的增殖依賴于夕卜部提供的#生長因子。這一類型中優(yōu)選的細(xì)胞系為人類TF-1細(xì)胞系(ATCC保藏號CRL-2003)和AML-193細(xì)胞系(ATCC保藏號CRL-9589)，它們是GM-CSH^'l!iA類白血病細(xì)胞系，這一類型中優(yōu)選的細(xì)胞系還有BaF3(Palacios和Steinmetz，Ce//W:727-734，(1985))，它是IL-3,性鼠類前B細(xì)胞系(pre-Bcellline)。其他細(xì)胞系包括BHK細(xì)胞、C0S-1細(xì)胞和CH0細(xì)胞?？梢詫线m的宿主細(xì)胞進(jìn)行基因工程^it，以使其產(chǎn)生目的細(xì)胞應(yīng)答所需的必需受體亞M務(wù)他細(xì)胞紐分。這一方法的優(yōu)勢在于由于可對細(xì)胞系進(jìn)行基因工程^it使其表i^源于^^T物種的受體亞基，因此就克服可來源于物種特異性的潛在限制?？梢钥寺∪祟愂荏wcDM的物種直系同源物并用于來自相同物種的細(xì)胞系中，例如在BaF3細(xì)胞系中使用小鼠cDM。因此，可以對依賴于itj6L生長因子(例如GM-CSF或IL-3)的細(xì)胞系進(jìn)行基因工程^i菱，使其變4f^賴于另一種通過IL-17RC或IL-17RA受體起作用的細(xì)胞因子，例如IL-17F或IL-17A。在篩選測定中^^1表達(dá)功能性受體的細(xì)胞。本領(lǐng)域已知有多種合適的測定方法。這些測定方法基于對目標(biāo)細(xì)胞中的生物應(yīng)答的檢測。一種這類的測定方法為細(xì)胞增殖測定。分別在存在或不存在測試/f^物的M下培養(yǎng)細(xì)胞，并檢測細(xì)Jf&增殖，所述#"測細(xì)胞增殖的方法例如測量氖<，腺嘧咬的摻入，或者基于3-(4，5-二甲基瘞哇-2-基)-2，5-二^基四唑溴(MTT)的代謝降解的比色測定(Mosman，/./鵬wzo/.胞也.65:55-63，(1983))。另一種測定形式^JJ經(jīng)itii一步基因工程^it而表達(dá)報(bào)告基因的細(xì)胞。將報(bào)告基因與能響應(yīng)受糾目關(guān)途徑的啟動子元件相連接，所述測定檢測報(bào)告基因的轉(zhuǎn)錄的激活。這一方面的優(yōu)選的啟動子元件為血清應(yīng)答元件或SRE。參見例如ShawWa/.，6W/563-572，(1989)。一種優(yōu)選的這類報(bào)告基因?yàn)槲灩馑孛富?deWet"a/.，Ce//.A/o/.Z725,(1987))。使用本領(lǐng)域已知的方法(例如BaumgartnerWa/"義"2》/.C力e邁.^^29094—29101，(1994);SchenbornandGoiffin，戶ro邁e卵—"11，1993)通it^ibl^測螢光素酶基因的表達(dá)。螢光素酶活性測定試劑盒可從例如PromegaCorp.，Madison,WI商購。這一類型的目標(biāo)細(xì)胞系可以用來篩選化學(xué)物質(zhì)庫、限制M細(xì)M養(yǎng)基、真菌培養(yǎng)肉湯、土壤樣本、7M羊本等等。例如，可以用一系列P艮制M細(xì)I^養(yǎng)基樣本測定目標(biāo)細(xì)胞以識別產(chǎn)生配體的細(xì)胞。然后用陽性細(xì)胞產(chǎn)生哺乳動物表達(dá)載體中的cDNA文庫，將所iii^分為多個混M(po01)，轉(zhuǎn)染至宿主細(xì)胞中并進(jìn)行表達(dá)。然后測定來自轉(zhuǎn)染細(xì)胞的培養(yǎng)基樣本，再次分成多個混合份，再次轉(zhuǎn)染，傳代，并再次測定陽性細(xì)胞，以分離編碼配體的克隆的cDNA。本發(fā)明提供的另一種篩選方法包括^^雜合的受體多肽。這種*多肽分為兩大類。在第一類中，IL-17RC的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域連接另一受體的配體結(jié)合結(jié)構(gòu)域。第二類雜合受體多肽包括IL-17RC的胞外(配體結(jié)合)結(jié)構(gòu)域(SEQIDNO:3)和IL-17RA(SEQIDNO:X)以及第二受體(優(yōu)選為itik細(xì)胞因子受體)的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域和一個跨膜結(jié)構(gòu)域。所述第二類的本發(fā)明受體的雜合的單體、同二聚體、異二聚體和多聚體在已知能夠?qū)λ龅牧硪皇荏w轉(zhuǎn)導(dǎo)的信號進(jìn)行應(yīng)答的細(xì)胞中表達(dá)?？傊?，這兩類雜合受體使得可以識別用于開發(fā)檢測IL-17F或IL-17A的測定方法的應(yīng)答細(xì)胞類型。此外，這類細(xì)J^可以用于在存在IL-17F或IL-17A的條件下，在竟?fàn)幮蜏y定中測定本發(fā)明的可溶性受體拮抗劑。在這類測定中，存在本發(fā)明的可溶性受體時(shí)，增殖或IL-17F或IL-17A的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)活性的降^fe4明本發(fā)明的可溶性受體具有拮抗活性。jW^卜，il-17rc-可溶Ii受體結(jié)合測^A一種基于細(xì)胞的測定方法，它還可^JI于評估一種可溶性受體是否能夠結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17F或IL-17A的活性。"7Z-77iG7Z-77W;^7Z-77^7/ZZ-7;^凝^^#綴^#聰務(wù)IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA類似物的一個大類是具有本文公開的^J^酸序列的突變^J^酸序列的變體。IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA類似物的另一個大類由如下所述的皿特型抗體及其片段提供。此外，含有抗獨(dú)特型可變結(jié)構(gòu)域的重組抗體也可被用作類似物(參見例如，Monfardinia丄，尸roc.戶力7"'c/a/w7"及420(1996))。由于^te特型IL一17RC抗體的可變結(jié)構(gòu)域類似于IL-17RC，因》bit些結(jié)構(gòu)域可提供IL-17RC結(jié)合活性。生產(chǎn)抗獨(dú)特型催化抗體的方法是本領(lǐng)域技#員已知的(參見例如，JoronWa/.,lo/z.jVf^cadA/.f72216(1992)、Fribouletefa/.，J/7/7丄A/oc力e瓜A/Wec力/o/.(1994)和Avallea人，J/m,A/Jcsd》^！118(1998))。識別IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA類似物的另一種方法使用了組合文庫。構(gòu)建和篩選噬菌體展示文庫和其他組合文庫的方法在下列文獻(xiàn)中有述例如，Kaye"/.,戶力財(cái)eP/y/7/a7o尸戶e/7〃^sa/w/ZVc^e/zw(AcademicPress1996);Verdine的美國專利No.5,783,384、Kay等人的美國專利No.5，747，334和Kauffman等人的美國專利No.5，723，323.IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA多肽可用于體內(nèi)和體夕卜用途。例如，可將可溶形式的IL-17RC加入到細(xì)胞培養(yǎng)基中，以抑制由培養(yǎng)細(xì)胞產(chǎn)生的IL-17RC配體(即IL-17F和/或IL-17A)的作用?？梢?吏用IL-17RC、IL—17RA和IL一17RC/IL-17RA的融^"白^Ji^分離相應(yīng)的多肽。如下所述，特定的IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA融^"白還具有診斷用途和治療用途。一種類型的融M白包括能導(dǎo)向由重組宿主細(xì)胞產(chǎn)生的IL-17RC多肽的肽。為指導(dǎo)IL-17RC多肽iiX真核宿主細(xì)胞的分泌途徑，在IL-17RC表達(dá)載體中提供了分^Ht號序列GlM皮稱為信號肽、前導(dǎo)序列、前原序列或前序列)。雖然分泌信號序列可來源于IL-17RC，合適的信號序列也可以來源于另一種分泌蛋白或完全從頭合成。將分泌信號序列與IL-17RC編碼序列有效連接，以使得這兩個序列處于正確的讀碼框中，并且它們的位置使得可以指導(dǎo)新合成的多^A^宿主細(xì)胞的分泌途徑。分泌信號序列通常位于編碼目的多肽的核苷酸序列的5，端，但是某些分泌信號序列也可以位于目的核苷酸序列的其他位置(參見例如，Welch等人的美國專利No.5,037,743;Holland等人的美國專利No.5，143，830)。雖然由哺乳動物細(xì)胞產(chǎn)生的IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA的分泌信號序列(例如美國專利No.5，641，655所述的組織型纖溶酶原激活物信號序列)可用于相應(yīng)多肽在重組哺乳動物宿主中的表達(dá)，但是對于酵母細(xì)胞中的表達(dá)而言還^l優(yōu)選^f狄酵母的信號序列。合適的酵母信號序列的實(shí)例為來源于酵母交配外激素a-因子(由M&7基因編碼)、轉(zhuǎn)化酶(由^WO基因編碼)或酸I"生磷酸酶(由戶朋J基因編碼)的那些酵母信號序列。參見例如，Romanos"s/.，"ExpressionofClonedGenesinYeast"見于細(xì)2.J/Vac〃ca/^7/7ro3c力，第2版，GloverandHa邁es(編著)，第123—167頁(OxfordUniversityPress1995)?？梢酝╥t^Jii^碼l^卜結(jié)構(gòu)域(例如含有整個SEQIDNO:3或其"^分或非人類受體的相應(yīng)區(qū)域的多肽)的截短型DNA,來制備本發(fā)明的可溶性受體多肽。優(yōu)選地，所制備的l^卜結(jié)構(gòu)域多肽形iCJ^上不含有跨膜多肽區(qū)段和胞內(nèi)多肽區(qū)段。為了指導(dǎo)受體結(jié)構(gòu)*宿主細(xì)胞的輸出，將受體DNA與編碼分泌肽例如t-PA分泌肽的另一DNA區(qū)段相連接。為了便于純化分泌的受體結(jié)構(gòu)域，可以在受體多J!Lh融^""^aC端^l伸序列，例如多組氨酸標(biāo)簽、P物質(zhì)、Flag^^(Ho卯"a/.，A/o^c力/o/^7次1204-1210，(1988);可購自EastmanKodakCo.，NewHaven,CT)或其他具有可獲得的抗體或特異性結(jié)合物的多M蛋白。在另一種方法中，IL-17RC、IL-17RA或IL-17RC/IL-17RA的受體J^卜結(jié)構(gòu)域或其部分可以與免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)""^融合表達(dá)，所^i免^^^蛋白重鏈恒定區(qū)通常為Fc片段，它含有兩個恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域和一^^鏈區(qū)域，但是不含有可變區(qū)(參見，Sledziewski，AZ等人的美國專利No.6，018，026和5，750，375)。4^發(fā)明的可溶性多肽包4til類融M白。SEQIDN0:64顯示了一種這類融^"白。這類融M白通常以多聚體分子的形式分泌，其中所itFc的各部分彼此之間以二硫鍵連接，并且兩個受體多#排布_11#:此十分接近。這種類型的融合蛋白可用于M液中親和純化同源配體，可用作體外測定工具在體外通過特異性滴定配體而阻斷、抑制或減少信號，并且可作為體內(nèi)拮抗劑(通過腸胃外給藥以結(jié)合循環(huán)系統(tǒng)中的配體并將配^^c循環(huán)系統(tǒng)中清除)。為了純化配體，可在有利于受體-配體結(jié)合的糾下(通常接iii理糾的溫度、PH和離子強(qiáng)^)，向含有配體的樣本(例如限定條件的細(xì)胞培養(yǎng)基或組織提取物)中加入IL-17RC、IL-17RA和IL-17RC/IL-17RA-Ig嵌合沐。然后通過使用蛋白A的混合物分離嵌合配體復(fù)合物，蛋白A被固定于固相載體(例如不可溶性樹月旨1)上。然后使用常規(guī)化學(xué)技術(shù)(例如鹽梯度或pH梯JO'M^體。或者，可將嵌合體本身結(jié)合在固相栽體上，然后如上所i^ii行結(jié)合和'皿?？稍隗w內(nèi)4^嵌M來調(diào)節(jié)炎性應(yīng)答包括急性期應(yīng)答，例如血清淀粉才"W白A(SAA)、C^性蛋白(CRP)等等。通胃外途徑(例如通it^L內(nèi)、皮下或靜脈內(nèi)注射)給予具有高結(jié)合親和力的嵌合本。循環(huán)系統(tǒng)中的分子結(jié)合配體，并被通過正常生理過^^循環(huán)系統(tǒng)中清除。為了在測定中使用，可通itFc區(qū)域^^M與載糾目結(jié)合，并用于ELISA方法中。為輔助分離本發(fā)明的多肽，優(yōu)絲采用^^了配體結(jié)合受體(或抗體、互4H^/抗互4傳對中的一個)或其結(jié)合片段和市售的生物傳感器裝置(BIAcore，PharmaciaBiosensor,Piscataway,NJ)的測定系統(tǒng)。將這類受體、抗體、互4H^/抗互4H^對中的一個或其片段固定于受體芯片的表面。這種裝置的^JH公開于Karlsson，J.Immunol.Methods145:229-40，1991和CunninghamandWells，J.Mol.Biol.234:554—63，1993。使用胺或統(tǒng)u^化學(xué)方法，將受體、抗體、互#傳/抗互#傳對中的一個或其片段^^接至葡聚糖纖維上，所述葡聚糖纖,結(jié)至流通池中的金膜上。使測^f羊本流過該池。如^樣本中存在配體、表位或互^H^/抗互4h^對中的另一個，它們就會分別與固定化的受體、M或互4傳/抗互4H^對中的一個相結(jié)合，導(dǎo)致介質(zhì)的折射率發(fā)生改變，這可通過金膜的表面等離子共振(plasmonresonance)的變化而進(jìn)##"測。這一系統(tǒng)可以測定結(jié)M率和解離速率，由此可以計(jì)算親和力^if估結(jié)合的化學(xué)計(jì)量學(xué)?；蛘?，可以佳月SELDI(TM)技術(shù)(Ciphergen，Inc.,PaloAlto,CA)^^斤配體/受體的結(jié)合。配體結(jié)合受體多^iE可以用于本領(lǐng)域已知的，測定系統(tǒng)。這些系統(tǒng)包括用于測定結(jié)合親和力的Scatchard^^斤(參見Scatchard，Ann.NYAcad.Sci.^!:660-72,1949)和測熱法測定(Cunninghametal.，Science253:545-48,1991;Cunninghametal.，Science245:821-25，1991)。本發(fā)明還提供了多種其他的多肽融M和^^有一個或多個多肽融^^體的相關(guān)多聚體蛋白。例如，可以如美國專利No.5，155，027和5，567，584所乂>開的那樣，以與二聚化蛋白相融合的形式制備可溶性IL-17RC、IL-17RA或IL-17RC/IL-17RA受體多肽。在這方面優(yōu)選的二聚化蛋白包括免疫球蛋白恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域，例如IgGyl和人類K輕鏈?？梢栽诮?jīng)過基因工程M的細(xì)胞中表達(dá)本發(fā)明的免疫球蛋白可溶性融合本，以產(chǎn)生多種多聚體IL-17RC、IL-17RA或IL-17RC/IL-17RA受體類似物?？蓪⒈景l(fā)明的可溶性多肽與輔助結(jié)構(gòu)樹目融合，以使它們靶向于特定的細(xì)胞、組織或大M(例如膠原或表達(dá)IL-17F或IL-17A的細(xì)胞)。本發(fā)明的多肽可以與兩個或多個部分相融合，所述部分例如用于純化的親和標(biāo)各，以及把向結(jié)構(gòu)域。多肽融^ii可以包括一個或多個切割位點(diǎn)，特別是在結(jié)構(gòu)域之間的切割位點(diǎn)。參見，Tuanetal.，ConnectiveTissueResearch1-9，1996.在細(xì)菌細(xì)胞中，經(jīng)常需要以融妙白的形式表達(dá)異源蛋白以減弱毒性、增加穩(wěn)定性和增加所表達(dá)蛋白的回收率。例如，可以以包括谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶多肽的融M白的形式表達(dá)IL-17RC(或^^T本發(fā)明的多肽)。谷胱甘肽s-轉(zhuǎn)移酶融^"白通常為可溶I"生的，并且可以^^1固^^胱甘Jfc^易地將其從;^桿菌裂解物中純化。在類似的方法中，可以偵月直銜定粉樹脂柱分離含有麥芽糖結(jié)M白多肽的IL-17RC融合蛋白，可以使用IgG-S印harose柱純化含有截短型蛋白A基因的C末端的融^白。在細(xì)菌細(xì)胞中以融M白的形式表達(dá)異源多肽的成熟技^M^例如Williams"a/.，"ExpressionofForeignProteinsin￡co//UsingPlasmidVectorsandPurificationofSpecificPolyclonalAntibodies,"見于/W67朋//^2.J戶ra"/ca/y^/7roac力，第2版，GloverandHames(編著)，第15-58頁(OxfordUniversityPress1995)中有所描述。此外，也可以使用市售的表達(dá)系統(tǒng)。例如，PINPOINTXa蛋白質(zhì)純化系統(tǒng)(PromegaCorporation;Madison,WI)提供的方法^J^了包括親和素的樹脂來分離包括在表iiit程中被生物素化的多肽的融M白?？梢杂糜诜蛛x由原核細(xì)J^M細(xì)I^達(dá)的異源多肽的肽標(biāo)簽包括多組氨酸標(biāo)各(它對鎳^^樹脂具有親和力)、c-邁/d亍洛、鈣調(diào)蛋白結(jié)^白(可使用鈣調(diào)蛋白親和色鐠法分離)、P物質(zhì)、RYIRS標(biāo)K它可與抗RYIRS抗體結(jié)合)、Glu-Glu標(biāo)簽和FLAG標(biāo)簽(它可與抗FLAG抗體結(jié)合)。參見例如，LuoWa/.,爿rc力.A/oc力e瓜"/。M^."義215(1996);Morgan"e"/.,J;;/,5/oc/e瓜(1996)和Zhengefa/.,6fe/7e7《655(1997)。編碼這類肽才絡(luò)的核酸^^可從例如Sigma-AldrichCorporation(St.Louis,MO)商購。另一種形式的融妙白包括本發(fā)明的多J3i^p免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)，所述免疫球蛋白重鏈恒定區(qū)通常為Fc片段，它含有兩個或三個恒定區(qū)結(jié)構(gòu)域和一個鉸鏈區(qū)域，但是不含有可變區(qū)。例如，Chang等人的美國專利No.5,723,125描述了一種包括人類干擾素和人類免疫球蛋白Fc片段的融^白。干擾素的C端與Fc片段的N端通過一個Ri^接物部分相連接。li^接物的一個實(shí)例為主要含有T細(xì)胞隋性序列的肽，它狄免疫活性的。一種示例性的Ab^接物具有下述絲醋列GGSGGSGGGGSGGGGS(SEQIDNO:9)。在這種融M白中，一種示例性的Fc部分為人類y4鏈，該#溶液中穩(wěn)定并且沒有或幾乎沒有#琳激活活性。因此，本發(fā)明考慮到了包括IL-17RC部分或IL-17RC和IL-17RA部分以;^/v類Fc片段的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA融M白，其中所述IL-17RC部分的C端與Fc片段的N端通it^ii接物相連接，例如包括SEQIDN0:2、SEQIDN0:5或SEQIDN0:21的U酸序列的至少一部分的肽。IL-17RC和IL-17RA的部分均可為胞外結(jié)構(gòu)域或其任意片段。例如，融^白可包括SEQIDNO:3的M酸和一個Fc片段(例如人類Fc片衝(SEQIDNO:64)。這類融M白的另一實(shí)例為變體1454(SEQIDNO:157和158),所述變體包括與Fc5融合的人類IL-17RA的外顯子l-6和人類IL-17RCxl的外顯子8-16(SEQIDNO:179和180)。變體1454還具有來自人類IL-17RA的天然信號肽。也可以使用Fc10或本領(lǐng)域已知的^T等同物代替Fc5。在另一個變化方案中，本發(fā)明的融M白包括一個IgG序列、一個與所述IgG序列的^J^端^H^接的IL-17RC、IL-17RA或IL-17RC/IL—17RA部^p與所述IL-17RC或IL-17RA部分的氨基末端共價(jià)連接的信號肽，其中所述IgG序列由下列元件以下&頃序組成鉸鏈區(qū)域、CH2結(jié)構(gòu)域和CH3結(jié)構(gòu)域。因此，所述IgG序列不含有CH應(yīng)構(gòu)域。這些部分可以顯示本文所述的生物活性，例如能夠結(jié)合IL-17A和/或IL-17F。生產(chǎn)包括抗體部#非抗體部分的融^"白的通用才支賴述于LaRochelle等人的EP742830(W095/21258)。包括IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA部分和Fc部分的融合蛋白可被用作例如體外測定工具。例如，可以使用IL-17RC-免疫球蛋白融合蛋白來檢測生物樣本中是否存在IL-F,其中^^IIL-17RC部分結(jié)合配體，^J^大襯(例:H^I蛋白A或抗Fc抗體)將融合蛋白結(jié)合到固相載體上?？梢约言逻@類系統(tǒng)識別能夠干擾IL-17家族配體(例如IL-17F或IL-17A和IL-17F兩者)與其受體的結(jié)合的拮抗劑和、激動劑。本發(fā)明還提供多種其他的多肽融合體。例如，可以將能產(chǎn)生目的生物學(xué)功能(例如結(jié)合IL-17A)的整個結(jié)構(gòu)域或其一部分和來自細(xì)胞因子受體家族的另一成員(即IL-17RA)的等同功能性結(jié)構(gòu)域與IL-17RC的-"^分相融合，以產(chǎn)生不同的M(即IL-17RC/IL-17RA)?？梢栽谥亟M宿主細(xì)胞中表達(dá)多肽融合體，以產(chǎn)生多種這樣的融合類似物。IL-17RC、IL-17RA或IL-17RC/IL-17RA多肽可以與兩個或多^NP分或結(jié)構(gòu)樹目融合，例如與用于純化的親和標(biāo)簽和耙向結(jié)構(gòu)域相融合。多肽融^ii可以包括一個或多個切割位點(diǎn)，特別是在結(jié)構(gòu)域之間的士刀割位點(diǎn)。#>見例如，Tuanefa/.，6b/z/7e"/re7Y"weWe"arc力1(1996)?？梢岳帽绢I(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法，通過制備融^"白的每個組成部分并用化學(xué)方法將它們綴合在""^來制備融合蛋白。或者，可以使用已知技術(shù)產(chǎn)生位于合適讀碼框內(nèi)的編碼融M白的^H且成部分的多核苷酸，并用本文所述的方法表達(dá)該多核苷酸。對融合蛋白進(jìn)行S^割和化學(xué)切割的通用方法描述于例如Ausubel(1995)第16-19至16-25頁中。還可通過對結(jié)構(gòu)進(jìn)行物理分析ijt4征IL-17RC和/或IL-17RA結(jié)合結(jié)構(gòu)域，合例如下列的技術(shù)來測定核磁共振、晶體學(xué)、電子衍射或光親和標(biāo)記。參見例如，deVosefa/"5We"ce306(1992)，Smithefa/.，/'M/.A/o/."4899(1992)和WlodaverWa/.，J狄59(1992)。本發(fā)明還考慮到了經(jīng)化學(xué)修飾的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RAI且合物，其中所述多肽與聚#相連接。示例性的IL-17RC或IL-17RC/1L-l7RA多肽為不含有功能性跨膜結(jié)構(gòu)域的可溶性多肽，例如由SEQIDNO:3或SEQIDNO:X的氨基酸M組成的多肽。通常，所述聚合物為水溶性的，以^f吏得所述綴合物不4、在例如生理環(huán)境的水性環(huán)境中沉淀。合適的聚合物的實(shí)例為經(jīng)過修飾而具有單A^基團(tuán)的聚^合物，例如用于?；磻?yīng)的活性酯或用于娛基化反應(yīng)的醛。這樣就可以控制聚合的程度?；钚匀┑膶?shí)例為聚乙二醇丙醛或其單(C1-C10)烷ltj^芳氧基衍生物(參見例如，Harris等人的美國專利No.5,252,714)。聚合物可為直鏈聚合物或支鏈聚合物。此外，也可以橫JU聚合物的混合物生產(chǎn)IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA綴^;。用于治療的本發(fā)明綴合物可以包括可藥用的水溶性聚^部分。合適的水溶性聚絲包括聚乙二醇(PEG)、單曱MJEG、單(Cl"C10)烷llJJEG、芳氧JJEG、聚(N-乙烯基p比咯酮)PEG、三氟代乙絲醃基(tresyl)單甲ltJJEG、PEG丙醛、碳酸^賴酰亞胺酯PEG、丙二醇同聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙烯多元醇(例如丙三醇)、聚乙烯醇、葡彩瞎、纖維素或其他基于糖類的聚合物。合適的PEG的分子量為約600至約60，000，包括例如，5000、12000、20000和25000。IL-17RC綴^;還可以包^it類水溶性聚合物的混/^。IL-17RC綴合物的一個實(shí)例包括IL-17RC部分(或IL-17RC/IL-17RA部分)和連接到該IL-17RC部分的N端的聚j^^化物部分。PEG是一種合適的^J^化物。例如，IL-17RC(或IL-17RC/IL-17RA)可通過一個被稱為"聚乙二醇化"的過程而凈處E(H參飾?？赏╥t^領(lǐng)域已知的任何聚乙二醇化M^ii行IL-17RC的聚乙二Sf^匕(參見例如，EP0154316、Delgadoefa/.，Cr27/ca/Aer/e附/"7Xera/7ew〃c"r收分"e戯爻249(1992)、DuncanandSpreafico，戶力ar邁acoir/"e^290(1994)和Francise/a/.,7i7f/#<3邁"0/f及1(1998))。例如，可通過有^JI性的聚乙二醇^^的St^化^或^^化AJl來進(jìn)行聚乙二醇化。在另一種方法中，通過縮合活化的PEG而形成IL-17RC綴合物，在活化的PEG中，PEG的末端羥M^J^基團(tuán)被活化的連接物所取代(參見例如，Karasiewicz等人的美國專利No.5,382,657)。通過酰基化的聚乙二醇化通常需要使PEG的活化酯衍生物與IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多J!i^應(yīng)。活化的PEG酯的實(shí)例為酯化為N-羥絲珀酰亞胺的PEG。本文所^J^I的術(shù)語"mj^化，，包括在IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA和水溶性聚合物之間的下述類型的鍵酰胺、氨基曱酸酯和氨基曱酸乙酯等等。通過g化制備聚乙二醇化的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的方法通?？砂ㄏ率霾襟E(a)使IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽與PEG(例如PEG的醛衍生物的活化酯)反應(yīng)，反應(yīng)條件應(yīng)使得一個或多個PEG基團(tuán)連接到IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA上，和(b)獲得反應(yīng)產(chǎn)物。通常，應(yīng)根據(jù)已知參數(shù)和所需結(jié)果確定用于酰基化反應(yīng)的優(yōu)化的反應(yīng)條件。例如，PEG:IL-17RC(或PEG:IL-17RC/IL-17RA)的比值越大，則多聚乙二醇化的IL-17RC(或IL-17RC/IL-17RA)產(chǎn)物的百分比越高。通過gb^化產(chǎn)生的聚乙二醇化產(chǎn)物通常為多聚乙二醇化產(chǎn)物，其中的賴氨酸s-^J^基團(tuán)通itSti^接基團(tuán)而被聚乙二醇化。連接建的一個實(shí)例為,。通常，所得的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA應(yīng)為至少95。/。單聚乙二醇化、雙聚乙二醇化或三聚乙二醇化，但^1才艮據(jù)AJI條降可形成一些高^L乙二醇化的產(chǎn)物種類?？梢约言聵?biāo)準(zhǔn)純化方法將聚乙二醇化的產(chǎn)物種類與未綴合的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多糾目分離，所述標(biāo)準(zhǔn)方法例如透析、超濾、離子交換色譜和親和色語等等。通過M^化的聚乙二醇化通常包括使PEG的末端搭衍生物^在還原劑的條降下與IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA反應(yīng)。PEG基團(tuán)可通過"CH廠NH基團(tuán)連接到多肚。通過還原性烷基化產(chǎn)生單聚乙二醇化產(chǎn)物的衍生作用利用了可進(jìn)行衍生作用的不同類型的伯胺基團(tuán)的反應(yīng)活性的差異。通常，進(jìn)行反應(yīng)的pH值使得可以利用賴氨酸戎基的s-募基基團(tuán)與蛋白質(zhì)N端戎基的a^J^之間的pKa值的差異。通itil種選擇性衍生作用，可以控制含有活性基團(tuán)例如醛基的水溶I"生聚合物與蛋白質(zhì)的連接。與聚合物的綴合主要發(fā)生在蛋白質(zhì)的N末端，而對其他活性基團(tuán)(例如賴氨酸側(cè)鏈絲)則沒有顯著的修飾。本發(fā)明提供了IL-17RC或IL一17RC/IL—17RA單聚^;綴^b的J^均一的制劑。用于產(chǎn)生基本均一的單聚合物IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA綴合物分子群體的還原性^^化可包括下述步驟(a)在還原性^4化M和合適的pH值條件下，使IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽與活性聚乙二醇^JL，所述合適的pH值糾允許對IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA絲末端的a-募基基團(tuán)進(jìn)行選擇性修飾，和(b)獲得反應(yīng)產(chǎn)物。用于還原性^^化的還原劑應(yīng)在水溶液中穩(wěn)定，并且僅能i^f、在還原性烷基化的初始過程中產(chǎn)生的Schiff堿。示例性的還原劑包括硼氬化鈉、象基硼氬化鈉、二曱胺硼烷、三曱胺硼烷和p比咬硼烷。對于_14^均一的單聚合物1卜17RC或IL-17RC/IL-17RA偶聯(lián)物的幹沐而言，還原性烷基化^M應(yīng)使得水溶性聚合物部分能夠選擇性連接到IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的N端。這樣的^^^Hi^通常針對賴氨酸#J^基團(tuán)和N端的a-^t^基團(tuán)之間的pKa的差異。pH值還，響所^j^的聚^與蛋白質(zhì)的比例。通常，如果pH較低，則需要聚合物遠(yuǎn)多于蛋白質(zhì)的量，因?yàn)榇藭r(shí)N末端oL基團(tuán)的^活性^^氐，需要更多的聚合物以獲得最優(yōu)化的^JI條降。如果pH值較高，則聚^:IL-17RC(或聚絲IL-17RC/IL-17RA)的比例就不需要很大，因?yàn)榇藭r(shí)可以獲得反應(yīng)活性較高的基團(tuán)。通常，pH值應(yīng)在3至9之間或在3至6之間。這一方法可以用于制名^^有IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的同二聚體、異二聚體或多聚體可溶性受體綴楊。需要考慮的另一因素為水溶I"生聚^的襯量。通常，聚*的襯量越高，能連接到蛋白質(zhì)上的聚^^^tW少。對于聚乙二醇化反應(yīng)而言，典型的分子量為約2kDa至約100kDa、約5kDa至約50kDa、或約12kDa至約25kDa。7JC溶性聚合物與IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的摩爾比通常應(yīng)為1:1至100:1。通常，對于多聚乙二醇化，水溶性聚合物與IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的摩爾比應(yīng)為1:1至20:1;對于單聚乙二醇化，水溶性聚合物與IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的摩爾比應(yīng)為和1:l至5:1。用于生產(chǎn)包括多肽和水溶性聚合物部分的綴合物的通用方法是4^領(lǐng)域中已知的。參見例如，Karasiewicz等人的美國專利No.5,382,657;Gree腿ld等人的美國專利No.5,738，846;Nieforthefa/.，尸力ar邁aco/.J義636(1996);MonkarshWa/.,^a/.A'oc力e瓜434(1997))。這一方法可用于制名j有IL-17RC的同二聚、異二聚或多聚可溶性受體綴合物。本發(fā)明考慮了包括本文所述的肽或多肽，例如可溶性受體或抗體的組合物。這類組^還可包M體。所述載體可為常規(guī)的有機(jī)載體或i^幾栽體。栽體的實(shí)例包括水、緩沖液、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、麻油和玉米油等等。07Z-77iC^'iZ-77^7//Z-77W,庶對為、庠本發(fā)明的多肽可被純化J^目對于雜質(zhì)大分子(特別是其他蛋白質(zhì)和核酸)有至少約80%的純度、至少約90%的純度、至少約95%的純度、或大于95%，例如96%、97%、98%或大于99%的純度，并且不含有感染性物質(zhì)和熱原。本發(fā)明的多M可被純化至藥用級純度，即大于99.9%的純度。在某些制品中，純化的多tt^上不含有其他多肽，特別是不含有動物來源的其他多肽?？梢允褂梅旨壏蛛x方法和/或常規(guī)純化方法以獲得從天然來源(例如人類組織來源)純化出的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA制品、合成的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽和從重組宿主細(xì)胞中純化出的重組IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽和IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽融合體。通常，可以^J^硫酸銨沉淀法和酸或^^劑萃取法^M"樣^ii行分級分離。示例性的純化步驟可包括幾基磷灰石、分子篩、FPLC和反相高效斜目色譜。合適的色鐠介質(zhì)包括衍生化的葡聚糖、瓊脂糖、纖維素、聚丙烯,和特制^等等。PEI、DEAE、QAE和Qf廳生物也是合適的。示例性色譜介質(zhì)包括苯基、丁M辛基基團(tuán)矛汙生4匕的^"質(zhì)，例如^lJ^-S印haroseFF(Pharmacia)、Toyopearl丁基650(TosoHaas，Montgomeryville，PA)、辛基-Sepharose(Pharmacia)等等j或者聚丙烯酸樹脂例如AmberchromCG71(TosoHaas)等等。合適的固相栽體包括玻璃珠、基于皿的樹脂、基于纖維素的樹脂、瓊脂糖孩沐、交聯(lián)瓊脂糖微球、聚苯乙烯孩O求、交聯(lián)聚丙烯酰胺樹脂等等在其^JU條件下不可溶的載體?？梢杂胊性基團(tuán)對這些載體進(jìn)行修飾，所ii^性基因使M白質(zhì)可以通過^J-基團(tuán)、^J^基團(tuán)、錄基基團(tuán)、羥基基團(tuán)和/或糾分與載體連接。偶聯(lián)化學(xué)方法的實(shí)例包括溴化氰活化、N-羥M珀iStJE胺活化、環(huán)氧化物活化、tt活化、酰肼活化和用于碳二亞胺偶聯(lián)化學(xué)法的^^tj^衍生物。上^，固體^/h質(zhì)都是本領(lǐng)域公知并廣泛使用的，均可從>(^應(yīng)商處商購。用于多肽分離和純化的M方法的選擇是常規(guī)的設(shè)計(jì)問題，并且部分W^決于所i^^^體的性質(zhì)。>^見例如，J/yY/7/^CAraffl^o^Ta/7AF.'/￥//7"》/^《#^力0&(PharmaciaLKBBiotechnology1988)和Doonan，戶rofe//7戶"r277ca〃朋ro/oco/y(TheHumanaPress1996)。用于IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA分離和純化的其他變化方法可由本領(lǐng)域技#員設(shè)計(jì)得出。還可以利用特定的性質(zhì)分離本發(fā)明的多肽。例如，可以使用固定^^r屬離子吸附色鐠(IMAC)色i普來純化富^^且氨酸的蛋白質(zhì)，包括那些帶有組氨酸標(biāo)各的蛋白質(zhì)。簡而言之，首先使皿負(fù)載二價(jià)金屬離子以形成^物(Sulkowski，7>朋&/刀A/oc力e瓜Jtl(1985))。基于所^JI的金屬離子，富^^BL氨酸的蛋白質(zhì)將以不同的親和力吸附在這一基質(zhì)上，然后可用竟?fàn)幮韵疵?、降低pH或使用強(qiáng)螯合劑的方法將它們洗脫下來。M純化方法包括使用凝集素親和色鐠和離子交換色譜純化糖基化蛋白(M.Deutscher，(編著)，A/zz^^o/.(1990))。在本發(fā)明的另外的實(shí)施方案中，可以構(gòu)建目的多肽和親和標(biāo)各(例如麥芽糖結(jié)M白，免疫球蛋白結(jié)構(gòu)銜的融*以便于純化。此外，也可以利用本發(fā)明的可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽(例如含有IL-17RC的可溶I"生受體)的g&體結(jié)合'l!^t進(jìn)行純化，例如，可以使用親和色鐠方法，先將IL-17FS己體結(jié)合在柱上，含有IL-17RC的受體將與柱結(jié)合，然后^f吏用標(biāo)準(zhǔn)色譜方法進(jìn)行洗脫。也可以通過如上所述的化學(xué)合成方法制備IL-17RC、IL-17RA或IL-17RC/IL-17RA多絲其片段。這些多肽可為單體或多聚體形式；糖基化或非糖_^化形式；聚乙二醇化或非聚乙二醇化形式；并且可以含有或不含有起始的曱為i^酸t(yī)t。幼^^JZ-77^747n7i^/7Z-77W蛋冷^戎羋^錄備例如使用IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA表達(dá)載體的表達(dá)產(chǎn)物或從天然來源分離的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA作為抗原，可以獲得針對IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的抗體。特別有用的抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA脅可以與IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA"特異性結(jié)合"。當(dāng)抗體具有下述兩種性質(zhì)的至少一種時(shí)認(rèn)為抗體是特異性結(jié)合抗體(1)抗體以閾值水平的結(jié)合活性結(jié)合IL一17RC或IL-17RC/IL-17RA，和(2)抗體與IL-17RC或IL一17RC/IL-17RA的相關(guān)多A^殳有明顯的交XMi。對于第一種性質(zhì)而言，當(dāng)抗體與IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽、賊表位的結(jié)合親和力(Ka)為106^或更高、優(yōu)選地為10'M^或更高、更優(yōu)逸地為108^或更高、最優(yōu)選地為109ir或更高時(shí)，認(rèn)為抗體是特異性結(jié)合抗體?？贵w的結(jié)合親和力可以由本領(lǐng)域技術(shù)人員容易地測定，例如可通itScatchard分析測定(Scatchard，j/m.J7:660(1949))。對于第^t'M而言，例如，當(dāng)抗體可通過標(biāo)準(zhǔn)蛋白質(zhì)印跡分析檢測到IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA，但是檢測不到已知多肽時(shí)，認(rèn)為抗體與相關(guān)多肽w沒有明顯的交x^應(yīng)。已知相關(guān)多肽的實(shí)例包括已知的細(xì)胞因子受體?？梢允褂脭y帶抗原性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA^位的肽和多肽來產(chǎn)生抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗體。本發(fā)明的攜帶抗原'J^^位的J^多肽含有SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:5或本文7>開的另一^^酸序列中所含的至少9個或15至約30個M酸的序列。然而，含有本發(fā)明的#^*列的更大部分的肽或多肽，含有本發(fā)明的多肽的30至50個M酸或最多至含有本發(fā)明多肽的整個M酸序列的任何長度的肽或多肽，也可以用于誘導(dǎo)與IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA結(jié)合的抗體。優(yōu)選地，應(yīng)選擇攜帶表位的肽的^J^酸序列以通;應(yīng)絲含有疏^^性殘i)。:匕外，也可能需要舍有脯氨酸^基的#^斷列以用于產(chǎn)生拔體。例如，可使用Jameson-Wolf的方法(JamesonandWolf，C^7tty4181，(1988))，利用LASERGENE公司(DNASTAR;Madison,WI)的PROTEAN程序(3.14船，來識別IL-17RC中的潛在^f、性位點(diǎn)。在所述分析中^^默認(rèn)的^ILJameson-Wolf方法通it^合六個進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測的主要子程序，預(yù)測潛在的^^、決:^。簡而言之，首先^JUHopp-Woods方法(Ho卯a(chǎn)/.，戶roc#W，/JcW.5W.仍W7及3824(1981))來識別代耒最高的局部親水性的區(qū)域的M酸序列(平均七個殘基)。在第二步中，使用Emini方法(Emini"a人，/.Wro7^7^836(1985))來計(jì)算表面概率(錄表面決定閾值(0.6)=1)。第三步，使用Karplus-Schultz方法(KarplusandSchultz,#a^/r7'we/z;c/a/Ye/z72212(1985))來預(yù)測主鏈的柔性(參數(shù)柔性閾值(0.2)=1)。在所述分析的第四步和第五步中，對數(shù)據(jù)應(yīng)用Chou-Fasman方法CP_ref//"/o/7o尸戶rofe//7iS^rw"weMe/^/"c/p/eso尸/We//Co/7尸or邁a〃0/7，F(xiàn)asman(編著)，第549-586頁，Chou的"PredictionofProteinStructuralClassesfromAminoAcidComposition"(PlenumPress1990))和Garnier-Robson方法(Gamiera人，/A/o/./2ft97(1978))進(jìn)行二縫構(gòu)的預(yù)測(Chou-Fasman^lt:構(gòu)U^64種蛋白質(zhì)；a區(qū)域閾值=103;|3區(qū)域闊值=105;Garnier-Robson械a和P決定常數(shù)=0)。在第六個子程序中，結(jié)合了柔性W:和親水性/溶劑趨近性因子以確定表面輪廓值，#^名為"抗原性指數(shù)"。*^，對抗原性指M用峰擴(kuò)展函數(shù)，所述函數(shù)通過分別附加各自峰值的20%、40%、60°/?；?0%對主要表面峰值進(jìn)行擴(kuò)展以674M嘗因表面區(qū)樹目對于內(nèi)部區(qū)域的流動性所產(chǎn)生的附加自由能。然而，由于螺旋區(qū)域可能柔性較小，因此這種計(jì)算方法不適用于位于螺旋區(qū)域中的任何主要峰?？梢允褂肏opp/Woods親水性曲線來確定SEQIDNO:3中潛在抗原性最強(qiáng)的區(qū)域(Hoppetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.78:3824-3828，1981;Hopp，^I咖un.Meth.1-18，1986和Triquieretal.,ProteinEngineering11:153-169，1998)。所述曲線基于一個滑動的六g窗口。不考慮4皮掩蓋的G、S和T殘基以及暴露的H、Y和W殘基。此外，例如使用DNASTARProtean程序(醒STAR,Inc.,Madison，WI)，通過Jameson-Wolf曲線圖預(yù)測的SEQIDNO:3中的IL-17RC抗原'I^^位作為優(yōu)選的抗原'l!i4位，并JL^領(lǐng)域技術(shù)人員可以確定該抗原'f^^位。所述抗原'I^^位包括(1)SEQIDNO:3的#^酸^73至絲酸歹樣82;(2)SEQIDNO:3的絲^J^95至絲酸絲104;(3)SEQIDNO:3的氨基酸戎基111至氨基酸戎基119;(4)SEQIDNO:3的氨基酸gl79至M^J^86;(5)SEQIDNO:3的^^^^200至絲酸錄205;(6)SEQIDNO:3的絲^t^229至絲MJ^236;(7)SEQIDNO:3的絲^J^264至絲賊基268;和(8)SEQIDNO:3的絲i^JJ75至絲酸殘基281。本發(fā)明考慮了抗原性似至Y的任一種用于產(chǎn)生抗IL-17RC抗體的用途，或作為工具篩選或識別本發(fā)明的中和性單克隆抗體的用途。本發(fā)明財(cái)慮了包括^f、性船至Y的至少一種的多肽。本發(fā)明考慮了本文所述的^f可抗原性M表位用于產(chǎn)生針對IL-17RC的抗體的用途，以及用于識別和篩選中和性的抗IL-17RC單克隆抗體的用途，所述抗IL-17RC單克隆抗體可以結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17F和/或IL-17A的活性(單獨(dú)地或結(jié)^4屯)。此外，合適的抗原還包括如下所述的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽，所述IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽包括上文/>開的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的細(xì)胞因子結(jié)合結(jié)構(gòu)域或I^卜結(jié)構(gòu)域以及另一種細(xì)胞因子的胞外結(jié)構(gòu)域，例如I類或n類細(xì)胞因子受體結(jié)構(gòu)域，例如可形成可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA異二聚體或多聚體多肽等等的結(jié)構(gòu)域。可以佳月本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法制備如下所述的多克隆抗體，所述多克隆抗體針對重組IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA蛋白或者針對從天然來源分離的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA。；^見例如，/鵬咖oc力(az7/ca/戶rofoco"(Manson編著)，第1—5頁，Green等人的"ProductionofPolyclonalAntisera"(HumanaPress1992)和ZWC/咖7^2.第2版，Glovere"厶(編著),第15頁，Williams等人的"Expressionofforeignproteinsin五co//usingplasmidvectorsandpurificationofspecificpolyclonalantibodies"(OxfordUniversityPress1995)。可通過使用佐劑來增加IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽的免疫原性，所述佐劑例如alum(氫氧化鋁)或弗氏完全佐劑或弗氏不完全佐劑?？捎糜诿庖叩亩嚯囊舶ㄈ诤香宥嚯?，例如IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA或其一部分與免疫球蛋白多肽或與麥芽糖結(jié)合蛋白融合形成的融M。多肽免^^可為4^M或其-"^分。如果多肽部分為"半抗原類型"，則優(yōu)狄將該部分與大襯載體(例如鑰孑UW^藍(lán)素(KLH)、牛血清清蛋白(BSA)或破傷風(fēng)類毒素)相連接或結(jié)合以用于免疫。雖然多克隆抗體通常是在動物體內(nèi)產(chǎn)生，例如在馬、牛、狗、雞、大鼠、小鼠、兔、豚鼠、山羊或綿羊體內(nèi)產(chǎn)生，但是本發(fā)明的抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗體也可以來源于類人靈長類抗體。在狒狒體內(nèi)產(chǎn)生可用于i貪斷和治療的抗體的通用技術(shù)可參見例如，Goldenberg等人的國際專利申請公布W091/11465和Losman"a/"/,Ca/cer4《310(1990)?；蛘撸梢援a(chǎn)生抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的單克隆抗體。針對特定抗原的嚙齒類單克隆抗體可通#領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法獲得(參見例如，Kohlere"/"2分495(1975);Coligane"人(編著)，tore//戶rc^oco/51///鵬朋o/。^7，阮A(yù)第2.5.1-2.6.7頁(JohnWiley&Sons1991)["Coligan"];/WJt7o/7//^2.￡r/7re^/o/z5>v^zw，第2版，Glover"a厶(編著)，第93頁，Picksley等人的"Productionofmonoclonalantibodiesagainstproteinsexpressedin￡(OxfordUniversityPress1995))。簡而言之，單克隆抗體可通過下述步驟獲得用含有IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA基因表達(dá)產(chǎn)物的組合物注射小鼠，林清樣本以確認(rèn)抗體的產(chǎn)生，取出脾臟以獲得B-淋巴細(xì)胞，將B-淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合以產(chǎn)生雜交瘤細(xì)胞，克隆雜交瘤細(xì)胞，篩選產(chǎn)生針對抗原的抗體的陽性克隆，培養(yǎng)產(chǎn)生針對抗原的抗體的克隆，以M雜^ji細(xì)皿絲中分離抗體。此外，本發(fā)明的抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗體也可以來源于人類單克隆*。人類單克隆^^可由轉(zhuǎn)基因小鼠獲得，所述轉(zhuǎn)基因小鼠經(jīng)it^因工程改造而能夠針對^^'It^激進(jìn)行應(yīng)狄而產(chǎn)生特異性的人類抗體。在這種技術(shù)中，將人類重^^^因^it件引入小鼠品系中，所述小鼠品系來源于在內(nèi)源性重錄^M^因座中含有定向中斷的胚胎干細(xì)胞系。轉(zhuǎn)基因小鼠可以合成特異性針對人類抗原的人類M,所述小鼠可以用于產(chǎn)生分泌>^類4^的雜^|細(xì)胞。由轉(zhuǎn)基因小鼠獲得人類抗體的方法在例如GreenWa/.,^&re6fe/etZ13(1994)，Lonberge,a人，#a/we%856(1994)和Taylora/.,7/^.Tizazwa沃579(1994)中有所描述?？梢証^多種成熟技^雜^i細(xì)lfe^^中分離和純化單克隆M。這類分離技術(shù)包括使用蛋白AS印harose的親和色語、分子篩色i普和離子交換色鐠(參見例如，Coligan第2,7.1-2.7.12頁以及第2.9.1-2.9.3頁；M/ec"/ar"/oA^j，Pb厶M，第79-104頁，Baines等人的"PurificationofImmunoglobulinG(IgG)"(TheHumanaPress,Inc.1992))。對于特定用途可能需要制備抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA脅的片段。這類抗體片段可通過例如對抗體的蛋白Sl^7jC解而獲得?？赏ㄟ^^J^常規(guī)方法對完整抗^ii行胃蛋白酶消化或木瓜蛋白酶消化，而獲得抗體片段。例如，抗體片段的產(chǎn)生可通過使用胃蛋白酶對抗體進(jìn)行SI^切割以提供被稱為F(ab，)2的5S片段而實(shí)現(xiàn)。還可以使用5iiJE原試劑對這一片段進(jìn)一步切割，從而產(chǎn)生3.5S的Fab，單價(jià)片段。^fii^也，在切割^中可以^J)^l^封閉基團(tuán)，所述^^是由于_^1鍵斷裂而產(chǎn)生的?；蛘?，^^胃蛋白酶的H^切割可直接產(chǎn)生兩個單價(jià)的Fab片段和一個Fc片段。上述方法在例如下述的文獻(xiàn)中有所描述Goldenberg的美國專利No攀4,331,647，Nisonoffefa7.,^rc力歷》c力e瓜^'0/7力/&》義230(1960);Porter，A/oc力e瓜/7^119(1959)、Edelmanefa/.，//f/Lz^o/og/阮7，第422頁(AcademicPress1967)和Coligan,第2.8.1—2.8.10頁和第2.10.-2，10.4頁。也可以^JI其他切割抗體的方法，例如分離重鏈以形成單價(jià)的輕鏈-重鏈片段、對片段進(jìn)4tii一步切割，或者絲酶技術(shù)、化學(xué)技絲遺傳技術(shù)，只要所得的片段能夠與可被完整抗體識別的抗原相結(jié)合即可。例如，F(xiàn)v片段包括VH和Vt鏈的聯(lián)^^。這種聯(lián)合可能是非M的，例如在Inbar"a/"#"〃JcadfiX4f義2659(1972)中有所描述?；蛘撸勺冩溈梢砸苑肿娱g二硫鍵的形式連接，或通過例如戊二醛的化學(xué)試劑相交聯(lián)(參見例如，Sandhu,&訌A/o"c力.72437(1992))。Fv片段可包^itJiib^接物相連接的VH和VL鏈。可通過構(gòu)建包括由寡核苷酸連接的編碼VH和VL結(jié)構(gòu)域的DM序列的結(jié)構(gòu)基因，從而制備這種單鏈^f、結(jié)合蛋白(scFv)。將所麟構(gòu)基因插入到表達(dá)栽體中，然后將所錄達(dá)載體引入宿主細(xì)胞例如;U^桿菌中。重組宿主細(xì)J^成由肽連接物橋連兩個V結(jié)構(gòu)域的單鏈多肽。用于產(chǎn)生scFv的方法在例如WhitlowWa丄，J^邁，/7/0"/'/^^oto/^7297(1991)中有所描述(也可參見，Birda人，5c/e/7c(si72423(1988);Ladner等人的美國專利No.4,946,778;Pack"a/.,5/o/7fec/wo/o^r77:1271(1993)和Sandhu,見上幻。例如，可通#體外使淋巴細(xì)胞與IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多^bf目接觸并在噬菌體或類似載體中篩選抗體展示i^來獲得scFV(例如通過l吏用固定化或被標(biāo)記的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA蛋白質(zhì)或肽)?？赏ㄟ^篩i^示于例如;tM桿菌的細(xì)菌或展示于噬菌體(噬菌體展示)上的隨機(jī)l^庫，從而獲得編碼具有潛在IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多麟合結(jié)構(gòu)域的多肽的基因。編碼多肽的核苷酸序列可通過多種方法獲得，例如可通過隨才/U秀變和隨機(jī)多核苷酸合成來獲得?？梢允褂眠@些隨機(jī)Ab艮示i^對能與已知乾4示相互作用的肽進(jìn)行篩選，所述已知把標(biāo)可為蛋白質(zhì)或肽，例如配M受體、生物大W或^^成大分子或者有才幾物質(zhì)或無機(jī)物質(zhì)。創(chuàng)建和篩選這種隨機(jī)M示i^的技術(shù)是本領(lǐng)域已知的(Ladner等人的美國專利No.5,223,409、Ladner等人的美國專利No.4，946，778、Ladner等人的美國專利No.5，403，484、Ladner等人的美國專利No.5，571，698和Kaya/.，戶力財(cái)e"/^/7/a/o/"/te/7〃^ya/k//We//w(AcademicPress,Inc.1996))，并且隨機(jī)綠示i^和用于篩選這類iL隼的試劑盒可從例如下列的供應(yīng)商處商購，例如CLONTECHLaboratories,Inc.(PaloAlto,CA)，InvitrogenInc.(SanDiego，CA)，NewEnglandBiolabs，Inc.(Beverly,MA)，和PharmaciaUCBBiotechnologyInc*(Piscataway，NJ)?？梢约言卤疚?>開的IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA^列來篩選隨機(jī)Jit艮示尤隼，以識別可以結(jié)合IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA的蛋白質(zhì)。抗體片段的另一種形式為編碼單鏈互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的肽。CDR肽("最小識別單位")可通過構(gòu)建編碼目的抗體的CDR的基因而獲得?？赏ㄟ^例如佳月聚合il^iUj^從產(chǎn)生抗體的細(xì)胞的RNA來合成可變區(qū)，從而制名^這類基因(參見例如，Larrickefa,,胞f力o^y:j6b邁，刃/朋fo餘^^//z^l2"，o/o^72106(1991);胞/70c7o/7a7Ao〃6o^/w戶rc^c〃叫f/^"eeW/^a/wf^7i"7ea7^;7//c"/o/7，Rittere"/.(編著)，第166頁,Courtenay-Luck的"GeneticManipulationofMonoclonalAntibodies"(CambridgeUniversityPress1995)和M/70c7o加/1flmod/w/W/c/;to^/77/ca〃o叫Birch""(編著)，第137頁，Ward等人的"GeneticManipulationandExpressionofAntibodies"(Wiley-Liss,Inc.1995))。或者，抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA^/^可來源于"人源化"的單克隆抗體。人源化單克隆抗體是通過將來自小IJ^疫球蛋白重#輕鏈可變區(qū)的小鼠互補(bǔ)決定區(qū)轉(zhuǎn)移^A類可變區(qū)結(jié)構(gòu)域中而產(chǎn)生的。然后將人類抗體的典型g替換至鼠類相應(yīng)物的框架區(qū)中。使用來源于人源^4克隆抗體的M組^tit了可能與鼠類恒定區(qū)的免疫原'斜目關(guān)的潛在問題。用于克隆鼠類免疫球蛋白可變結(jié)構(gòu)域的通用技術(shù)在例如Orlandi"s/.，5fc/.仍W做3833(1989)中有所描述。用于產(chǎn)生人源化單克隆抗體的技術(shù)在例如下列的文獻(xiàn)中有所描述Jones"".，組we幼522(1986);Carter"a/,,Sci.KS4《iM285(1992);Sandhu，化k5iWec力.(1992);Singere"/.，/./咖朋.7i"ft2844(1993);Sudhir(編著)，^"6oc(r^/^/加<5_*/^/^0^^(HumanaPress,Inc.1995);戶/v^e/Vzf/^2'7zeer/'/^;/V/"c/p/esa/w/戶rac〃ce，Cleland"a/.(編著)，第399-434頁，Kelley的"EngineeringTherapeuticAntibodies"CfohnWiley&Sons,Inc.1996)和Queen等人的美國專利No.5,693,762(1997)。此外，可以4吏用本領(lǐng)域已知的方法和本文所述的方法對本發(fā)明的抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗體或抗體片段進(jìn)行聚乙二g^f匕?？赏ㄟ^標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)l狄抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA^i^抗體片狄疫動物，從而制備多克隆^fe特型^/^。參見例如VeZo#o/ec"/ar"/o/o^v/鵬朋oc力e邁/ca//!rofoco化Manson(編著)，第1-12頁，Green等人的"ProductionofPolyclonalAntisera，，(HumanaPress1992)。還可參見Coligan,第2.4.1-2.4.7頁?；蛘?，可通過上述技術(shù)使用抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗體或抗體片段作為免疫原來制備單克隆抗獨(dú)特型抗體。再^。制::^f蟲特型抗體的方法在^如下述的文獻(xiàn)中;所描述Irie,'美國專利No.5,208,146、Greene等人的美國專利No.5，637，677和VarthakaviandMinocha，/6fe/.P7ro/.(1996)?？蓪⒖笽L-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗體與可檢測標(biāo)"K^目綴合，以形成抗IL-17RC或IL一17RC/IL-17RA免疫綴楊。合適的可;^r測標(biāo)己包括例如絲性同位素、熒ibf射己、化學(xué)^b^i己、酶標(biāo)記、生物^Ubf^i6iU^體金。制備和^^測這類帶有可檢測#^的免疫綴*的方法是本領(lǐng)域技權(quán)員>^的，并且將在下可檢測才朽己可為育^tit^自顯影檢測的》i^性同位素。對本發(fā)明目的特別有用的同位素為3H、1251、"11、35S和"C?？笽L-17RC或IL-17RC/IL-17RA免疫綴"^還可以用熒光^^7進(jìn)行標(biāo)記。通過將免疫綴*暴露在合適波長的光下，并檢測產(chǎn)生的熒光，可以確定熒光標(biāo)"^^體的存在。焚ib^6fl^包括異硫氰酸焚光素、羅丹明、藻紅蛋白、絲蛋白、別藻藍(lán)蛋白、鄰&^^焚胺?；蛘?，可通過將抗體組分與化學(xué)發(fā)光化合物相偶聯(lián)，而使抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA免疫綴"^帶有可檢測的才朽己。通過檢測化學(xué)^過程中產(chǎn)生的光的存在來確定帶有化學(xué)iUbf示簽的免疫綴合物的存在?；瘜W(xué)^t^i2/ft^的實(shí)例包4^魯米i若、M米諾、芳香族吖咬酯、咪哇、吖#和草酸酯。類似地，可以使用生物發(fā)光^^物來標(biāo)記本發(fā)明的抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17M免疫綴合物。生物JUL^存在于生物系統(tǒng)中的一類化學(xué)J^L^應(yīng)，其中催化性蛋白提高了化學(xué)iUt^的效率。通過檢測itJM^確^i物iL^蛋白的存在。可用于標(biāo)記的生物JU^^^包括安光素、螢光素酶和水母ic^蛋白。或者，可通過將抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA^組分與酶連接，而使抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA免疫綴合物帶有可檢測的標(biāo)記。當(dāng)抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA酶綴合物與合適的底物-"^育時(shí)，,分與底物反應(yīng)產(chǎn)生可檢測的化學(xué)物質(zhì)，所述;j^測可通過例如分iWvl法、熒光法或目測法進(jìn)行?？捎糜谑苟嗵禺愋悦庖呔Y，帶有可檢測標(biāo)記的酶的實(shí)例包括p-半享UI苷酶、葡萄糖氧化酶、錄化物酶和堿性嫩酶。4^頁域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)知曉能夠才娥本發(fā)明使用的其#/^適的才朽己?？梢?賴本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)將標(biāo)記物部M合到抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA^上。用于這方面的-"^方法在下列文獻(xiàn)中有所描述Kennedyefa/.,C7mC力/瓜7ftl(1976);Schursefa/"C力/瓜《7:1(1977)，Shihefa/.,Zo〃//.C朋cer4《1101(1990);Steina/.,CancerJA-1330(1990)^Coligan，J2J:X。此外，可使用與親和素、鏈親和素和生物素綴合的抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗體來增加免疫化學(xué)檢測的便利性和通用性(參見例如，Wilchekefa丄(編著)，"Avidin-BiotinTechnology,"ZoA/7zjHK/01g7'阮7《4(AcademicPress1990)和胞f力o^yZo#o/ecw/ar歷'oA^7,7《Manson(編著)，第149-162頁，Bayer等人的"ImmunochemicalApplicationsofAvidin-BiotinTechnology"(TheHumanaPress,Inc.1992)。用于ii^f亍免疫測定的方法^l/^知的。>#^見例如，MwocAwa/^7"6c，力'er戶ro^/"/叫泡^7加"/恥朋cT^/^//c"/on,RitterandLadyman(編著)，第180-208頁，Cook和Self的"MonoclonalAntibodiesinDiagnosticImmunoassays"(CambridgeUniversityPress,1995);胞/oc/on3/J77mod/w/W/zc/^esa/K/^/7//ca〃o/w，BirchandLennox(編著)，第107-120頁，Perry的"TheRoleofMonoclonalAntibodiesintheAdvancementofImmunoassayTechnology"(Wiley-Liss，Inc.1995)和Diamandis，/鵬如0a5^a/(AcademicPress,Inc.1996)。4^發(fā)明財(cái)慮到了用于對IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA基因表iiii行免疫診斷測定的試劑盒。這類試劑盒包括至少一個含抗IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗體或抗體片段的容器。試劑盒還可包括裝有能指示IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗絲抗體片段的存在的一種或多種試劑的另一容器。這類指示試劑的實(shí)例包括可^"測標(biāo)記，例如it射性標(biāo)記、熒ibf朽己、化學(xué)^#記、酶才朽己、生物發(fā)光標(biāo)記和膠體金等等。試劑盒還可包括指導(dǎo)使用者使用IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA抗體或抗體片段檢測IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA蛋白的方法。例如，文字說明書可能^i兌明包裝內(nèi)的M或抗體片段可用于^"測IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA。文字f^可直接印在容器上，或者可以以包裝務(wù)fr的形式提供。"本發(fā)'效種/Z-J7^:4/Z-77)f//Z-77AJ,農(nóng)^浴^^途具有可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA活性的^J^酸序列可通過結(jié)合配體IL-17A和IL-17F(單獨(dú)地或共同地)，并因此阻止所述配體與內(nèi)源性IL-17RC和/或IL-17RA受體的結(jié)合，從而可用于調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)。這類拮抗劑例如可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA還可以通過抑制IL-17A和/或IL-17F與內(nèi)源性IL-17RC和/或IL-17RA受體的結(jié)合，從而可用于調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)。因此，本發(fā)明包括具有IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA活性的蛋白質(zhì)、多肽和肽(例如可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽、IL-17RC或IL-17RA多肽片段、IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA類似物以及IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA融合蛋白)用于受試者的用途，所述受試者缺少足夠量的所述多肽或產(chǎn)生了過量的IL-17A和/或IL-17F。本發(fā)明的多肽(例如可溶性IL-17RC和/或IL-17RC/IL-17RA)還可用于治療產(chǎn)生過量IL-17A、IL-17F、IL-17RA或IL-17RC的受試者。^^適的受^T包括哺乳動物，例如人類。例如，這類可溶It多肽可用于結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17A和IL-17F(單獨(dú)i械共同地)，可用于治療炎癥和炎性疾病，例如銀屑病、4艮屑病關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、內(nèi)毒素血癥、IBD、IBS、結(jié)腸炎、哞喘、同種異^^多植物排斥、免疫介導(dǎo)的腎臟疾病、肝膽管疾病、多發(fā)小W更化、動脈粥樣硬化、肺瘤生"^速或退行性關(guān)節(jié)病，以^^文公開的其他炎性病癥。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述可溶性受體包括IL-17RC(SEQIDNO:3)并可為單體、同二聚體、異二聚體或多聚體的形式，它們能夠在體內(nèi)結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17F和IL-17A(單獨(dú)地或共同地)。如本文所述，針對這類IL-17RC單體、同二聚體、異二聚體或多聚體的抗體和結(jié)合多肽也可以用作IL-17RC活性的拮抗劑和IL-17A和IL-17F的拮抗劑(單獨(dú)地或共同地)。在其他優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述可溶性受體同時(shí)包括IL-17RC和IL-17RA的一部分。一種這樣的優(yōu)選實(shí)施方案為變體1454(SEQIDNO:157和158)，它包括與Fc5(SEQIDN0:179和180)融合的人類IL-17RA的外顯子1-6和人類IL-17RCxl的外顯子8-16。變體1454還具有來源于人類IL-17RA的天然信號肽。也可以佳月FclO或本領(lǐng)域已知的任"f可等同物代替Fc5。此外，本文中還描述了多克H^單克隆的抗IL-17F中和抗體能夠在基于細(xì)胞的中和測定中結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮絲中和IL-UF和IL-17A的活性。針對對應(yīng)于IL-17RCcDNA的mRNA的組織分布分析顯示，/Z-J7?；虻膍RM在曱、腎上腺、前列^肝l^且織中有很強(qiáng)的表達(dá)，而在心臟、小腸、胃和氣管組織中表達(dá)較弱。特別地，IL-17RC在非T細(xì)胞外周血細(xì)胞系包括單核細(xì)胞、B-細(xì)胞和髓系細(xì)胞中穩(wěn)定地表達(dá)。而且，IL-17RC的mRNA^來源于皮膚的細(xì)胞系中有確信的表達(dá)。其^達(dá)IL-17RC的細(xì)胞系為陣列上存在的所有5個大腸細(xì)胞系。相反地，在腦、胎盤、肺、骨骼肌、腎臟、月緣、脾臟、胸腺、睪丸、卵巢、結(jié)腸、外周血白細(xì)胞、脊柱、淋巴結(jié)和骨髓中沒有表iiiL幾乎沒有表達(dá)。IL-17RC所結(jié)合的配體(IL-17F和/或IL-17A)參與誘導(dǎo)炎性應(yīng)答^Hl進(jìn)炎性疾病，這是憑借它們能夠增加炎性介質(zhì)包括IL-lb、IL-6和TNF-a的產(chǎn)生，以及能夠增加與嗜中性粒細(xì)胞的增殖、成熟和趨>(^目關(guān)的介質(zhì)的產(chǎn)生的能力實(shí)現(xiàn)的(綜述于Witowskietal.Cell.Mol.LifeSci.61:567-579[2004])。因此，本發(fā)明的一個具體實(shí)施方案涉及可溶性IL-17RC多肽和可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽用作炎性疾病和免疫疾病或例如下述的疾病的拮抗劑的用途，所述疾病例如銀屑病、4艮屑病關(guān)節(jié)炎、特應(yīng)性皮炎、炎性M病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、IBD、IBS、克隆病、憩室病、哞喘、旨炎、I型糖尿病(IDDM)、W^癌、鵬炎、格雷夫斯病、結(jié)腸癌和腸癌、自身免疫性疾病、膿扭、器官或骨髓移植；由于內(nèi)毒素血癥、創(chuàng)傷、手M感染引起的炎癥；淀粉樣變；脾大；移植物抗宿主疾病；和炎癥的抑制，免疫抑制，iti6L細(xì)胞、免疫細(xì)胞、炎性細(xì)M淋巴樣細(xì)胞、巨嗟細(xì)胞、T細(xì)胞(包括Thl和Th2細(xì)胞)的增殖的抑制，對病原體或抗原的免疫應(yīng)答的抑制，或其他需要抑制IL-l7F和/或IL-l7A的疾病o此外，可溶性IL-17RC和可溶性IL-17RC/IL—17RA多肽可用于(1)阻斷、抑制、減少、拮抗或中和通過IL-17RA或IL-17RC進(jìn)行的信號傳導(dǎo)，以用于治療急性炎癥，即由創(chuàng)傷、組織損傷、手術(shù)、J3^^或感染導(dǎo)致的炎癥，以及慢性炎性疾病例如哞喘、炎性腸病(IBD)、IBS、慢性結(jié)腸炎、脾大、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、復(fù)發(fā)性急性炎癥發(fā)作(例如結(jié)核病)，以M于治療淀粉樣變和動脈粥樣>^化、卡斯特爾曼氏病(Castleman，sdisease)、哮喘，以及其他與急性期應(yīng)答的誘導(dǎo)相關(guān)的疾病。(2)阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17RA或IL-17RC的信號傳導(dǎo)，以阻斷或抑制免疫細(xì)胞(例如淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、白細(xì)胞)中的信號傳導(dǎo)，用于治療自身免疫性疾病，例如IDDM、多發(fā)'I^更化(MS)、系統(tǒng)性紅斑狼疳(SLE)、重癥肌無力、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、IBS和IBD。佳JU本發(fā)明的多肽阻斷、抑制、減少或拮抗通過IL-17RC和/或IL-17RA進(jìn)行的信號傳導(dǎo)，還可有益于旨、腎臟、腦垂體和神經(jīng)細(xì)胞的疾病?？捎幸嬗贗DDM、NIDDM、J^炎和J3^癌。IL-17RC和/或IL-17RA可以作為癌癥的治療把標(biāo)，其中本發(fā)明的拮抗劑可抑制癌細(xì)胞生長并實(shí)現(xiàn)免疫介導(dǎo)的殺傷(HolligerP，andHoogenboom，H:NatureBiotech.W:1015-1016,1998)。本發(fā)明的可溶性多M可用于治療腎病，例如腎小球硬化癥、膜性腎病、淀粉樣變(該疾病也^^響除腎臟W卜的^i且織)、腎動J3^f更化癥、各種起源的腎小球腎炎、腎臟的纖維增生性疾病以及與SLE、IDDM、II型糖尿病(NIDDM)、腎臟腫瘤和，疾病相關(guān)的腎功能障礙。(3)激動、增強(qiáng)、增加或啟動通過IL-17RA或IL-17RC進(jìn)行的信號傳導(dǎo)，用于治療自身免疫性疾病，例如IDDM、MS、SLE、重癥肌無力、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、IBS和IBD。本發(fā)明的可溶性多肽可向淋巴細(xì)J^^fe免疫細(xì)胞傳導(dǎo)信號，以使得它們分化、改變它們的增殖或改變細(xì)胞因子或細(xì)J^4面蛋白的產(chǎn)生，從而改善自身免疫。特別地，將T輔助細(xì)胞應(yīng)答調(diào)制為另一種細(xì)胞因子分泌模式可能改變自身免疫性應(yīng)答，從而緩解疾病(SmithJAetal.，J.Immunol.雄4841-4849，1998)。類似地，可以^JU激動性可溶性多肽4ff言號傳導(dǎo)至免疫細(xì)胞、消耗免疫細(xì)胞和改變免疫細(xì)胞，所述免疫細(xì)胞與哮喘、過敏性疾病和特應(yīng)性疾病有關(guān)。通過IL-17RC和/或IL-17RA進(jìn)行的信號傳導(dǎo)可有益于旨、腎臟、腦垂體和神經(jīng)細(xì)胞的疾病。可有益于IDDM、NIDDM、fl^炎和g癌。本文所述的可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA多肽可用于結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17F或IL-17A的活性(單獨(dú)地或共同地)，可用于治療如上所述的自身免疫性疾病、特應(yīng)性疾病、NIDDM、胰腺炎和腎臟功能障礙?？扇苄问降腎L-17RC或IL-17RC/IL-17RA也可用于M由Th細(xì)胞介導(dǎo)的抗體應(yīng)答和/或M林巴細(xì)l^其他免疫細(xì)胞產(chǎn)生IL-4或^fe細(xì)胞因子。本發(fā)明的可溶性多肽可用作IL-17A和/或IL-17F的拮抗劑。這種拮抗效果可通過直接中和或通過與IL-17A或IL-17F的結(jié)合實(shí)現(xiàn)。除了拮抗用途"卜，本發(fā)明的可溶性受體可以結(jié)合IL-17F或IL-17A，^Ht為配體的運(yùn)載蛋白將配,運(yùn)至體內(nèi)不同的組織、器官和細(xì)胞中。這樣，本發(fā)明的可溶性受體可以與能指導(dǎo)可溶性受體-配體復(fù)合物到達(dá)特異性位置(例如組織、特異性免疫細(xì)胞或腫瘤)的分子、多肽或化學(xué)部分相融合或相偶聯(lián)。例如，可以通過IL-17F的作用誘導(dǎo)炎癥和局部急性期應(yīng)答蛋白，從而有益于急性感染或某些癌癥。因此，本發(fā)明的可溶性受體可用于特異性指導(dǎo)IL-17A或IL-17F的作用。參見，Cosman，D.Cytokine5:95—106，1993;andFernandez-Botran,R.Exp.Opin.Invest.Drugs9:497-513，2000。炎癥^是生物體防^H^A物質(zhì)的一種保護(hù)性應(yīng)答。炎癥M是一種涉及多種細(xì)胞介質(zhì)和體液介質(zhì)的,事件。一方面，炎性應(yīng)答的抑制可使宿主成為免疫妥協(xié)宿主；然而如果不i^f亍檢查，炎癥可導(dǎo)致一些嚴(yán)重的并發(fā)癥，包括Il性炎性疾病(例如銀屑病、關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)'^^f匕、炎性腸病等等)、感染性休克和多器官功能衰竭。重要的是，這些不同的疾病狀態(tài)都涉;M目同的炎性介質(zhì)。這些具有炎癥特征的疾病對于人類的發(fā)病率和致死率有很大的影響。因itbf艮顯然的是，抗炎性蛋白質(zhì)例如本發(fā)明的可溶性多l(xiāng)iW于多種人類和動物疾病有著重要的治療前景，所述疾病包括從哞喘和變態(tài)反應(yīng)到自身免疫和感染性休克。1.關(guān)節(jié)炎關(guān)節(jié)炎一一包括骨關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和由損傷引起的關(guān)節(jié)炎等等一一是很常見的炎性疾病，并且可以用抗炎性蛋白質(zhì)例如本發(fā)明的可溶性多M行治療。例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種影響整個身體的全身性疾病，它是最常見的一類關(guān)節(jié)炎。該疾病以關(guān)節(jié)滑膜的炎癥為特征，會導(dǎo)致疼痛、僵硬、溫?zé)?、發(fā)紅和肺脹。炎癥細(xì)胞釋改能夠消化骨和軟骨的酶類。作為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的后果，發(fā)炎的關(guān)節(jié)膜(滑膨^^曼蝕并損壞骨和軟骨，導(dǎo)致關(guān)節(jié)的退化、劇痛和，生理反應(yīng)。所涉及的關(guān)節(jié)將變形和彎曲，導(dǎo)致和運(yùn)動能力喪失。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種免疫介導(dǎo)疾病，其特征尤其在于炎癥和隨后的組織損傷，導(dǎo)致嚴(yán)重的失能和致死率上升。在風(fēng)濕性關(guān)節(jié)的局部會產(chǎn)生多種細(xì)胞因子。許多研究證實(shí)IL-1和TNF-oc這兩種原型促炎細(xì)胞因子在滑液炎癥和進(jìn)行性關(guān)節(jié)損壞的機(jī)理中起了重要作用。事實(shí)上，對患有RA的患者給予TNF-a和IL-l的抑制劑可使得炎癥的臨床指標(biāo)和生理指橋彈到顯著改善，并減少骨侵蝕和軟骨損壞的,性指標(biāo)。然而，雖然具有上述有益效果，但是有相當(dāng)百分比的患者對于這些藥物沒有反應(yīng)，ii^明在關(guān)節(jié)炎的病理生理學(xué)中還涉及務(wù)他的^h質(zhì)(Gabay，Expert.Opin.Biol.Ther.2(2):135-149，2002)。其中一種介質(zhì)可能為IL-17A或IL-17F,這樣看來，能結(jié)合IL-17F或IL-17A或抑制IL-17F或IL-17A活性的一類M,例如可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA,就可能作為有價(jià)值的療法以減輕類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和其他關(guān)節(jié)炎疾病中的炎癥。本領(lǐng)域中已知有一些類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的動物模型。例如，在J^f、誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)模型中，小鼠會發(fā)生與人類類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎十分類似的慢性炎性關(guān)節(jié)炎。由于CIA的免疫學(xué)特征和病理學(xué)特征都與R"目似，因此可將這一;J^型作為篩選潛在的^^類炎癥的化^^的理想模型。CIA模型是一種乂^^的小E^型，它，于依:^生的免C^答和炎性應(yīng)答。免疫應(yīng)答包括B-細(xì)胞和CD4+T-細(xì)胞的相互作用，所勤目互作用響應(yīng)于作為抗原給予的膠原，并導(dǎo)致產(chǎn)生皿原抗體。某些上述抗體與小鼠的天然M^發(fā)生交X^并激活4H^M^作用，導(dǎo)致產(chǎn)生炎癥的介質(zhì)，對于該介質(zhì)的組織應(yīng)答就導(dǎo)致了炎癥期。偵^ICIA模型的一個優(yōu)勢在于已經(jīng)知道了其發(fā)病機(jī)制的差4^幾理。已經(jīng)識別了n型膠原上的相關(guān)T-細(xì)胞和B-細(xì)胞表位，也已經(jīng)確定了與免疫介導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎相關(guān)的多個免疫因子和M降解酶類)，因此就可將^:些"l^i;評估待測^^在ciA^型中的效力(Wooley，Curr.Opin.Rh頃.2:407-20，1999;Williamsetal.，Immunol.9784-788，1992;Myersetal.，LifeSci.1861-78，1997;和Wangetal.,Immunol.^:8955-959，1995)。一組研究顯示抗小鼠IL-17抗體在小鼠CIA模型中相對于對照小鼠緩解了癥狀，錄明^^Ma念上看本發(fā)明的可溶性多肽可以用于治療人類疾病。無論是預(yù)防性給藥還是在模型動物已經(jīng)出現(xiàn)關(guān)節(jié)炎癥^給藥，單次給予特異性抗小鼠IL-17的大鼠抗血清均能減輕動物體內(nèi)的關(guān)節(jié)炎癥狀(Lubbertsetal，ArthritisRheum.650-9，2004)。因此，可以使用IL-17RC-Fc或IL-17RC/IL-17RA-Fc來中和IL-17A和/或IL-17F,用于治療特定的人^類疾病，例如關(guān)節(jié)炎、銀屑病、銀屑病關(guān)節(jié)炎、內(nèi)毒素血癥、炎'^J^病(IBD)、IBS、結(jié)腸炎和本文公開的其他炎性疾病。將本發(fā)明的可溶性多肽(例如IL-17RC-Fc或其他IL-17RC/IL-17RA可溶性蛋白和融錯白)給予上述CI條型小鼠，以評估它們作為IL-17F和IL-17A的拮抗劑以銜醉疾病癥狀和改變疾病進(jìn)程的用途。此外，結(jié)果顯示本發(fā)明的可溶性多肽對IL-17F和/或IL-17A的抑制或中和作用為以下推論提供了證據(jù)即^的IL-17A或I1-17F拮抗劑也可以用于緩解疾病癥狀和改變疾病進(jìn)程。而且，由于IL-17A和/或IL-17F誘導(dǎo)IL-lb和TNF-oc的產(chǎn)生，而IL-lb和TNF-a又都參與類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的發(fā)病機(jī)制和疾病進(jìn)程，那么全身性或局部給予上述的可溶1±多肽絲可能抑制RA中的炎性應(yīng)答。出于示例而非限制的意圖，以每只小鼠IO-200jag的量注射IL-17RC-Fc(每周l至7次，注射最多持續(xù)但不限于4周，通過皮下、靜脈內(nèi)或肌內(nèi)給藥途徑)可以顯著減少疾病評分C^足評分、炎癥或疾病的發(fā)生)。才M&IL-17RC-Fc給藥的開始時(shí)間(例如在M^免疫之前給藥或在M^、免疫時(shí)給藥，或在第二次膠原免疫之后的任何時(shí)間點(diǎn)給藥，包括在已經(jīng);^疾病的時(shí)間點(diǎn)給藥)，IL-17RC可以有效地預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和阻止疾病的進(jìn)程。其他可能的療法包括IL-17RC/IL-17RA多肽等等。2.內(nèi)毒素血癥內(nèi)毒素血癥是一種嚴(yán)重的疾病，它通常由傳染物(例如細(xì)菌和，傳染性疾病致病物)、膿扭、中桊性休克綜合減免疫妥協(xié)患者所經(jīng)受的機(jī)會性感染等等所導(dǎo)致?？捎糜谥委煹目寡仔缘鞍踪|(zhì)(例如本發(fā)明的可溶I"生多肽)可幫助預(yù)防和治療人類和動物的內(nèi)毒素血癥。這些可溶性多肽可作為有價(jià)值的療法，以減輕內(nèi)毒素血癥中的炎癥和病理作用。脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的內(nèi)毒素血癥涉及許多在傳染性疾病中產(chǎn)生病理作用的促炎性介質(zhì)，LPS誘導(dǎo)的嚙齒動物內(nèi)毒素血癥是一種被廣泛4狄和接受的用于研究促炎性藥物或免疫調(diào)節(jié)劑的藥理作用的模型，。LPS由革蘭氏陰性細(xì)菌產(chǎn)生，是感染性休克的發(fā)病機(jī)制中的一種主要的致病因子(Glausneretal.，Lancet338:732，1991)。在實(shí)驗(yàn)中通過向動物單次注射LPS就可以有效地誘導(dǎo)類似休克的狀態(tài)。由細(xì)胞響應(yīng)于LPS所產(chǎn)生的分子可直接或間接地乾向于病原體。雖然上述生物應(yīng)答可以保護(hù)宿主不受病原體的侵害，但是它們也會產(chǎn)生有害的作用。因此，由嚴(yán)重的革蘭氏陰性細(xì)菌感染所導(dǎo)致的先天免疫的大^^刺激會導(dǎo)致細(xì)胞因子和其他襯過量產(chǎn)生，并會導(dǎo)tt生致命綜合征即感染性休克綜合征，該綜合征的特征為狄、^!&L壓、彌散f仏管內(nèi)凝集和多器官功能衰竭(Dumitruetal.103:1071—1083，2000)。LPS的這些毒性作用大多與巨噬細(xì)胞激活導(dǎo)致的多種炎性介質(zhì)的釋放有關(guān)。給予中和性抗TNF抗體可以預(yù)防LPS的務(wù)性，錄明在這些介質(zhì)中TNF似乎起了關(guān)^^性作用(Beutleretal.，Science229:869，1985)。已經(jīng)證實(shí)，對C57B1/6小鼠注射lpg的;^桿菌LPS，在注射后約2小時(shí)就可以導(dǎo)致循環(huán)系統(tǒng)中IL-6、TNF-a、IL-1和急性期蛋白(例如SAA)的絲增加。LPS的毒性似乎是由上述細(xì)胞因子介導(dǎo)的，因?yàn)獒槍ι鲜鼋橘|(zhì)的被動免疫可使致死率降低(Beutleretal.，Science229:869，1985)。用于預(yù)防和/或治療感染性休克的潛在的免疫干預(yù)策略包括抗TNFmAb、IL-1受##抗劑、LIF、IL-10和G-CSF?？梢詫ι虾鏟S誘導(dǎo)的模型給予本發(fā)明的可溶性多肽，以評估IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA用于^^癥狀和改變LPS誘導(dǎo)的疾病的進(jìn)程的用途。jtb^卜，結(jié)果顯示這些可溶I"生多JM"IL-17F或IL-17A的抑制作用為以下推論提供了證據(jù)即其他的這類拮抗劑也可以用于,LPS誘導(dǎo)的模型的癥狀和改變疾病進(jìn)程。所述才莫型顯示出LPS注^i秀導(dǎo)了IL-17F的產(chǎn)生，而所述可溶性多肽可用于治療疾病。由于LPS誘導(dǎo)了可能與內(nèi)毒素血癥的病理學(xué)有關(guān)的促炎因子的產(chǎn)生，因此可以^^J拮抗劑可溶性多肽中和IL-17F活性或中和其他促炎性因子，以減輕內(nèi)毒素血癥的癥狀，例如在內(nèi)毒素性休克中所見的癥狀。3.炎性腸病(IBD)在美國大約有500，OOO人患有炎性腸病(IBD),該疾病影響結(jié)腸和/或JJ^(潰瘍性結(jié)腸il)，小腸和^OL隆病)。這些疾病的發(fā)病機(jī)制還不清楚，但是都與受影響組織的慢性炎斜目關(guān)。本發(fā)明的可溶性多肽可作為有價(jià)值的療法，以減輕IBD、UC和相關(guān)疾病的炎癥和病理作用。潰瘍性結(jié)腸炎(UC)是一種;^(通常被稱為結(jié)腸)的炎性疾病，^#征在于結(jié)腸的粘膜或最內(nèi)層襯膜的炎癥和潰瘍。這種炎癥使得結(jié)腸經(jīng)常排空從而導(dǎo)致腹瀉。癥狀包括大便松散以;^目關(guān)的腹部絞痛、；0&和體重減輕。雖然還不知道uc的確切病因，但是最近的研究表明才脈的天然防御系統(tǒng)4^體內(nèi)的被才;i^認(rèn)為是外來的蛋白質(zhì)(一種"自身免疫性M")。也許由于這些蛋白質(zhì)類似于腸道內(nèi)的細(xì)菌蛋白質(zhì)，所以它們可能會啟動或刺激炎性過程，而所述炎性過程會開始破壞結(jié)腸襯膜。由于結(jié)腸的襯膜4皮^c壞，因而會形成潰瘍并#^文粘液、#血液。這一疾病通常從，部分開始，可能最*蔓^^整個大旸。炎癥的^1發(fā)作^^導(dǎo)致腸壁增厚#^±腸部分產(chǎn)生瘢痕組織。在疾病嚴(yán)重時(shí)可能發(fā)生結(jié)腸組織壞死或膿毒癥。潰瘍性結(jié)腸炎的癥狀在嚴(yán)重禾呈度上^^有所不同，其發(fā)病可為漸發(fā)性或究t性的。許多因素(包括呼吸系統(tǒng)感染或應(yīng)激)都可能引起&病。雖然目前沒有有效的治療uc的療法，但是已有的治療方法都主要關(guān)注于抑制結(jié)腸襯膜的異常炎性過程。目前可用于治療該疾病的治療方法包括^t類固醇免疫抑制劑(例如硫唾噤呤、巰噤棘曱氨喋呤)和^J^歸離。然而，長期使用免疫抑制劑例如皮質(zhì)類固醇和硫喳噤^^導(dǎo)致嚴(yán)重的副作用，包括骨骼變細(xì)、白內(nèi)障、感染和對肝臟和骨髓的影響。對于現(xiàn)有療法無效的患者而言，手術(shù)也是一種選擇。手術(shù)包^除整個結(jié)腸和直腸。已經(jīng)有幾種可部分模擬潰瘍性結(jié)腸炎的動物模型。最廣泛使用的模型為2，4，6-三硝^i^璜酸(TNBS)/乙醇誘導(dǎo)的結(jié)腸炎模型，該模型是在結(jié)腸中誘導(dǎo)'艮性炎癥和潰瘍。當(dāng)通過直腸內(nèi)滴注將TNBS注入易感小鼠的結(jié)腸時(shí)，它可以在結(jié)腸粘膜上誘導(dǎo)T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答，在這種情況下可導(dǎo)致以整個大腸壁上的T細(xì)胞和巨噬細(xì)胞的稠密浸潤為特征的大面積粘膜炎癥。除了這種組織病理學(xué)特征^t還伴隨有以下臨床特征進(jìn)行性體重減輕(消耗)、血性腹瀉、細(xì)脫^^L^壁增厚(Neurathetal.Intern.Rev.Immunol.旦51-62，2000)。另一種結(jié)腸炎模型使用右;^糖酐為t酸酯鈉(DSS)來誘導(dǎo)急性結(jié)腸炎，該疾病的表現(xiàn)為血性腹瑪、體重減輕、結(jié)腸變短和伴有嗜中'f封立細(xì)極潤的粘膜潰瘍。DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎的組織學(xué)特征為炎性細(xì)胞浸潤至固有層中，并伴有淋巴樣增生、灶性隱窩損傷和上皮潰瘍。這些改變被認(rèn)為是由于DSS對上皮的辜性作用和借助于固有層細(xì)胞的吞喧作用、以及產(chǎn)生TNF-ot和IFN-Y而形成。雖然這一模型已被廣泛使用，但是DSS的M在人類疾病的相關(guān)度方面還有一些問題沒有解決。DSS模型被認(rèn)為是一種不依賴T細(xì)胞的模型，因?yàn)樵赥細(xì)胞缺陷型動物例如SCID小鼠中也XC^到了相似癥狀?？梢詫NBS或DSS模型給予本發(fā)明的可溶性多肽，以評估它們用于自癥狀和改變胃腸道疾病進(jìn)程的用途。此外，結(jié)果顯示這些可溶性多肽對IL-17F和/或IL-17A的抑制或中和作用為以下推論提供了證據(jù)即它們(或類似W)也可以用于銜醉結(jié)腸炎/IBD模型的癥狀和改變疾病進(jìn)程。4.銀屑病銀屑病是一種超過七百萬美國人都患有的慢性皮膚疾病。銀屑病在新生皮膚細(xì)胞生長異常時(shí)發(fā)生，導(dǎo)致發(fā)炎、肺脹和因舊M未負(fù)^L夠快的脫落而產(chǎn)生的鱗片狀皿。斑塊狀銀屑病U常見的類型，其特M于表面帶有4艮白色的鱗片的發(fā)炎的M塊("損傷")。銀屑病可肯^限于少塊或者也可能涉及中度至較大面積的皮膚，最常出現(xiàn)的部位為頭皮、膝部、肘部和軀干部。雖然看^M艮明顯，^a是4艮屑病并不是一種^^觸傳染的疾病。該疾病的發(fā)病積4，J包括受影響組織的慢性炎癥。本發(fā)明的可溶性多肽可作為有價(jià)值的療法，以減輕銀屑病、，炎性力映疾病、iu^和粘膜變態(tài)^^和相關(guān)疾病的炎癥和病理作用。銀屑病是一種T-細(xì)胞介導(dǎo)的組炎性疾病，可引起相當(dāng)程度的不適。這是一種目前無法治愈的疾病，并且可侵害所有年齡的A^。在歐洲和北美洲，有大約2%的4患有#^病。雖然患有輕度銀屑病的個體通?？梢约言戮植克幬锟刂萍膊。?^"tfr界仍有超過一百萬的患者需要紫外線治療或全身性免疫抑制治療。不幸的是，紫外線輻照治療的不便和危險(xiǎn)性以及許多療法的毒性P艮制了這些療法的長期使用。jH^卜，患者通常會在停止免疫抑制療法后的很短時(shí)間內(nèi)_1^銀屑病，有些時(shí)候還會由反彈。本發(fā)明的可溶性多肽可用于診斷系統(tǒng)中，以檢測循環(huán)系統(tǒng)中的IL-17F或IL-17A水平，和檢測與急性期炎性應(yīng)答相關(guān)的IL-17F或IL-17A。斜目關(guān)實(shí)施方案中，可以使用本發(fā)明的可溶性多測循環(huán)系統(tǒng)中或局部作用的IL-17F或IL-17A多肽。配體或受體多肽水平的升高或降低可指示病理性疾病，包括炎癥或癌癥。已知IL-17F^i秀導(dǎo)相關(guān)的急性期炎性應(yīng)答。此外，對急性期蛋白質(zhì)或^(例如IL-17A或IL-17F)的檢測可以作為某些疾病狀態(tài)(例如哮喘、銀屑病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、結(jié)腸炎、IBD和IBS)的慢性炎性病癥的指標(biāo)。這類病癥的檢測可以有助于疾病的診斷，并可幫助醫(yī)生選擇合適的療法。除了本文所述的其他疾病模型"卜，還可以^^重度聯(lián)合免疫缺陷(SCID)'J、IU莫型，在體內(nèi)測量本發(fā)明的可溶性多財(cái)來源于人類銀屑病損傷的炎'lil且織的活性。已經(jīng)開發(fā)了一些人類細(xì)Jf&^^tA^疫缺陷型小鼠的小I^型(統(tǒng)稱為異種移植物模型)；參見例如，CattanAR，DouglasE，Leuk,Res.18:513-22，1994和Flave11，DJ，HematologicalOncology14:67-82，1996。作為一種4艮屑病的體內(nèi)異種移植物模型，將人類銀屑病M組織^LASCID小I^型中，并用^^適的拮抗劑攻擊。此外，也可以使用本領(lǐng)域中的其他銀屑病動物模型來評估IL-17A和IL-17F拮抗劑，例如將人類4^病皮膚移植物^^AGR129小鼠模型中，并用合適的拮抗劑攻擊(例如參見，Boyman，0.etal.，J.Exp.Med.Onlinepublication#20031482，2004，該文獻(xiàn)以援引的方式納A^幻。本發(fā)明的能夠結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17F或IL-17A和IL-17F兩者的活性的可溶性多肽是優(yōu)選的拮抗劑，務(wù)他的IL-17A和IL-17F拮抗劑也可以用于該模型中。類似地，可將來源于人類結(jié)腸炎、IBD、IBS、關(guān)節(jié)炎或務(wù)池炎性損傷的組織或細(xì)胞用于該SCID模型，以評估本文所述的IL-17A和IL-17F拮抗劑的抗炎，M。等等);SCID小鼠或本文^述的其^^型，對設(shè)計(jì)用于偵冗本發(fā)明的可溶性多肽來消除、g或減輕炎癥的療法進(jìn)行測試。佳冗^^領(lǐng)域公知的方法測量凈皮治療A^中抗炎效果隨時(shí)間的增加，從而測量療法的效果并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)評估。一些示例性方法包括但不限于例如在銀屑病;^型中測量W^度、真皮上層中炎性細(xì)胞的數(shù)量和角化不全的胞，J。這類方法是本領(lǐng)域已知的，并在本文有記栽例如參見，Zeigler,M.etal.LabInvest81:1253，2001;Zollner，T.M.etal.J.Clin.Invest.109:671，2002;Yamanaka，N.etal.Microbio.1Immunol.^:507，2001;Raychaudhuri，S.P.etal.Br.J.Dermatol,144:931，2001;Boehncke，W.Hetal.Arch.Dermatol.Res.291:104，1999;Boehncke，W.Hetal..J.Invest.Dermatol.116:596，2001;Nickoloff，B.J.etal.Am.J.Pathol,j^:580，1995;Boehncke,W.Hetal.J.Cutan.Pathol.M:l，1997;Sugai,L，M.etal.J.Dermatol.Sci.jj:85，l"8;和VilladsenL.S.etal.了.Clin.Invest.也1571，2003。還可以4捐例如流式細(xì)胞術(shù)(或PCR)的^^p方法，測量樣本中炎性細(xì)^JU員傷細(xì)胞的數(shù)量、83IB辦分(體重減輕、腹瀉、，出血、結(jié)腸長^)以及CIA和RA^型的足疾病評#炎癥評分，從而隨時(shí)間監(jiān)測炎癥。例如，適用于在這類模型中檢測的治療策略包括使用下述藥物基于阻斷IL-17RC和/或IL-17RA與其相應(yīng)g己體的相互作用而進(jìn)行的直接治療，所述藥物為可溶性IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA，或^feIL-17A和IL-17F拮抗劑(單獨(dú)城共同:^)，或相關(guān)綴#或拮抗劑。銀屑病為一種慢性炎性M疾病，該疾病與增生性上皮角質(zhì)形成細(xì)胞和浸潤性單核細(xì)胞(包括CD4+記憶T細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞)相關(guān)(Christophers,Int.Arch.AllergyImmunol.,11^:199，1996)。目lti人為環(huán)境中的抗原對于該疾病的發(fā)生和該疾病的病理學(xué)有重要的作用。然而，認(rèn)為對自身抗原的耐受度下降介導(dǎo)了銀屑病的病理學(xué)。樹突細(xì)胞和004+T細(xì)^t認(rèn)為在下述的抗原呈遞和識別過程中起重要作用，所述抗原呈遞和識別過程介導(dǎo)了導(dǎo)致所述病理的免疫應(yīng)答。我們最近基于CD4+CD45RB轉(zhuǎn)移模型開發(fā)了一種銀屑病模型(Davenportetal.，Internat,Immunopharmacol,,2:653-672)。將本發(fā)明的可溶性多M予小鼠。對疾病評分汰膚損傷和炎性細(xì)胞因子)的抑制表明所述可溶性多財(cái)于銀屑病的效力。5.特應(yīng)性皮炎.AD是一種常見的慢性炎性疾病，其特征在于輔助T細(xì)胞亞類2(Th2)的M活躍的細(xì)胞因子。雖然尚不知itAD的確切病因?qū)W，但是已知有多種因素與其相關(guān)，包括itl活躍的Th2免疫應(yīng)答、自身免疫、感染、變應(yīng)原和遺傳傾向。該疾病的關(guān)鍵特征包M燥病(^干衝、瘙癢癥C^i"癢)、結(jié)膜炎、炎性皮膚損傷、^"色葡萄球菌(5^/7Ar/ococc^犯reiw)感染、血液嗜酸粒細(xì)Jf^f多、血清IgE和IgGl7jC平升高和伴有T細(xì)胞、肥大細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、和嗜酸性粒細(xì)股潤的慢性皮炎。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)妙色葡萄球菌的^J直或感染會加劇AD^H吏這種皮膚疾病轉(zhuǎn)為永久性慢性疾病。AD常見于患有哞喘和變應(yīng)性鼻炎的患者中，并且通常為變應(yīng)性疾病的初始表現(xiàn)。在西方國家中約有20%的4患有這類變應(yīng)性疾病，在發(fā)達(dá)國家的AD發(fā)病率因?yàn)槲粗脑騣^i^^斤上升。AD通常起始于童年期，并經(jīng)常可A^青春期一直持續(xù)直至成年。目前針對AD的療法包括局部^6t激素治療、口服環(huán)孢菌素A、非皮質(zhì)類固醇免疫抑制劑例如他克莫司(油膏形式的FK506)和干擾素Y。雖然有多種針對AD的療法，但是許多患者的癥狀并沒有得到改善，或者他們對藥物有不1^應(yīng)，這就需要尋找，更有效的治療劑。本發(fā)明的可溶I"生多肽可用于中和IL-17F和IL-17A,用于治療特定的人類疾病，例如特應(yīng)性皮炎、炎性皮膚疾病和本文公開的M炎性疾病。6.哮喘IL-17對于氣道中的變應(yīng)原誘導(dǎo)的T細(xì)胞激活和嗜中性粒細(xì)胞內(nèi)流具有重辨用。IL-17的受體在氣道中表達(dá)(Yao，etal.Immunity3:811(1995))，在過敏性津喘中，化學(xué)引誘物IL-8、GR0-口和由IL-17刺激的人類支氣管上皮細(xì)胞(HBEC)和人類支氣管成纖維細(xì)胞產(chǎn)生的巨噬細(xì)胞炎性蛋白-2(MIP-2)可以極大地誘導(dǎo)IL-17介導(dǎo)的嗜中'l!^立細(xì)胞募集(Yao，etal.//鵬朋o/7M,"《J(1995));Molet，etal./J7/er^767///鵬朋o/J傲U0C。。")。IL-17還刺激HBEC釋放嗜中性粒細(xì)胞激活因子IL-6(Fossiez，etal，/A"餘cT旭'25"""卿科inden，etal.Zof々c力"/erw汲，(2001))，并且已在體外證實(shí)IL-17可以與TNF-口協(xié)同作用而延"^A類嗜中性粒細(xì)胞的存活時(shí)間(Laan，etal.Aw化^/r/W,J《7(2003))。此外，IL-17能夠通過增強(qiáng)涉及氣道重塑的細(xì)胞因子的分泌，從而增強(qiáng)哮喘中的炎性應(yīng)答，所述細(xì)胞因子例如促纖維變性(profibrotic)細(xì)胞因子IL-6和IL-11和炎性介質(zhì)粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)和粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)歸et，etal./j//e"7雄柳歸力)。臨床證據(jù)顯示，哞喘的急性重度惡化與氣道中嗜中性粒細(xì)胞的募集和激活相關(guān)，這樣看來IL-17可能在哞喘中起了重要作用。患有輕度哞喘的患者表現(xiàn)出游離的可溶性IL-17A蛋白局部濃度的可檢測的升高(Molet，etal.JAllergyClinImmunol108:430(2001))，另夕卜，通過使絲的人類志愿者暴露于封閉豬舍中以誘導(dǎo)發(fā)生嚴(yán)重的氣道炎癥時(shí)，該志愿者的支氣管肺泡間隙中的游離的可溶性IL-17A蛋白濃度的表現(xiàn)出明顯升高(Fossiez，etal，JExpMed183:2593(1996)和Linden，etal.IntArchAllergyImmunol126:179(2001))。此外，痰中的IL-17水平與個體氣道高M(jìn)性的提高相關(guān)(Barczyk,etal.RespirMed97:726(2003)。在氣道高反應(yīng)性的動物模型中，使致敏化的小鼠慢性PA^卵清蛋白可導(dǎo)致支氣管嗜酸'^^細(xì)胞炎癥，并可在發(fā)炎的肺組織和支氣管嗜中'l^細(xì)胞中早期i秀導(dǎo)IL-17mRNA的表達(dá)(Hellings，etal.AmJRespirCellMolBiol28:42(2003)。抗IL-17單克隆抗體顯著降低了支氣管嗜中1封立細(xì)胞內(nèi)流，但也顯著提高了支氣管肺泡灌洗液和血清中的IL-5水平，并iLi^重了變應(yīng)原誘導(dǎo)的支氣管嗜酸1±*立細(xì)胞內(nèi)流，ii^明IL-17A可能^決定在如上所述的抗原攻擊后的嗜中#^立細(xì)#嗜酸4封立細(xì)胞累積的平衡。在IL-17家M員中，IL-17F與IL-17A的關(guān)系最近。由IL-17A介導(dǎo)的生物活性與由IL-17F介導(dǎo)的生物活性類似，其中IL-17F刺激IL-6、IL-8和G"CSF的產(chǎn)生(Hurst，etal.JImmunol169:443(2002))。IL一17Fi^E內(nèi)皮細(xì)胞中誘導(dǎo)IL-2、轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)-口和單核細(xì)胞趨化蛋白(MCP)的產(chǎn)生(Starnes，etal.JImmunol167:4137(2001))。類似地，變應(yīng)原攻擊可以增加it^t性哮喘患者的局部IL-17F水平(Kawaguchi，etal攀JImmunol167:4430(2001))。將IL-17F基因i^it至鼠類肺部可提高支氣管肺泡間隙中的嗜中性粒細(xì)胞7jc平，而IL-17F基因的粘膜轉(zhuǎn)移會增強(qiáng)Ag誘導(dǎo)的肺部嗜中性粒細(xì)胞水平和氣it^t乙酰甲膽喊的應(yīng)答(0da,etal.AmJRespirCritCareMed171:12(2005))。除嗜喘O卜，還有一些慢性炎性氣道疾病也以氣道中的嗜中'I^立細(xì)胞募集為特征，已有^Jil稱IL-17在一些呼吸系統(tǒng)疾病的發(fā)病機(jī)制中起重要作用，所述呼吸系統(tǒng)疾病例如慢性阻塞性肺病(COPD)、細(xì)菌性肺炎和嚢性纖維化病(Linden,etal.EurRespirJ15:973(2000)，Ye，etal.AmJRespirCellMolBiol25:335(2001)，Rahman,etal.ClinImmunol115:268(2005))。在體外炎#型中，已顯示抗IL-17A和/或抗IL-17F治療性^對慢性炎性氣道疾病有治療g。IL-UF和/或IL-17A活性的拮抗劑，例如IL-17RC可溶性受體和其抗體(包括本發(fā)明的抗人類IL-17RC單克隆抗體和中和抗體)，抑制IL-17A和/或IL-17F誘導(dǎo)培養(yǎng)的HBEC或支氣管成纖維細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子和趨化因子的能力可以被用于度量這類拮抗劑防止因IL-17A和/或F刺激所直接導(dǎo)致的炎性^/h質(zhì)的產(chǎn)生的效力。如果加入IL-17F和/或IL-17A活性的拮抗劑(例如本發(fā)明的可溶性多肽)可以顯著降低炎性介質(zhì)的產(chǎn)生和表達(dá)，那么就可以預(yù)計(jì)所述拮抗劑能夠有艦治療與慢性氣道炎斜目關(guān)的炎性癥狀。7.腸易激綜合征("IBS")腸易激綜合征表示以腹部疼痛或不適和異常朝M更習(xí)慣為特征的疾病?？梢曰贗BS患者的排便習(xí)'lfT以將IBD患者分為三種主要的類群主要為經(jīng)常#<更或大便術(shù)碌的患者；主要為不經(jīng)常氺M更或大便千硬的患者；以及氺M更習(xí)慣不定或大^更正常的患者(Talleyetal.，2002)。腸運(yùn)動性的改變、上皮功能的異常、糞便和空氣通過的異常以;s^激都可能與癥擬目關(guān)，而內(nèi)臟的超lt^應(yīng)是大多數(shù)患者的重要特征。推測影響疼痛信號傳導(dǎo)的遺傳因素和傳入信號的中樞處理的失調(diào)可能^f吏個體易于在接觸特定環(huán)境后患上IBS。研究還證實(shí)，結(jié)腸中的炎性應(yīng)答會增加平滑旨腸道神經(jīng)的敏感性，由此擾亂腸的感覺-運(yùn)動功能(Collinsetal.，2001)。IBS和IBD在臨床上有交叉，在患者被確診為IBD之前經(jīng)常被報(bào)告表現(xiàn)出IBS樣癥狀，而且已經(jīng)確診為IBD的患者在恢復(fù)期時(shí)出現(xiàn)IBS癥狀的情況比預(yù)計(jì)的要多。因此，這些疾病可能以高于預(yù)計(jì)的頻率共存，或者可能IBS和IBD是存在與一個連續(xù)語中不同端點(diǎn)的疾病。然而應(yīng)該注意到的是，大多數(shù)IBS患者的結(jié)腸活檢標(biāo)本看^^是正常的。盡管如此，IBS還M著地影響了相當(dāng)多的個體(2000年在美國的患病個體大約有1600萬)，導(dǎo)致的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)一共為17億美元(2000年)。因此，在各種高發(fā)病率和造成高經(jīng)濟(jì)花費(fèi)的腸胃疾病和病癥中，IBS僅次于胃食管返流疾病(GERD)而排在第二位。但是與GERD不同的是，IBS的治療現(xiàn)狀并不令人滿意(Talleyetal.，2002;Farhadietal.，21001;Collinsetal.，2001)，i兌明治療IBS的需求顯然并未得到滿足。目前已提出的疾病模型都基于下述假設(shè)中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)或消化道的神經(jīng)回路、免疫回路或神經(jīng)免疫回路對中樞(精神上的)或外周(組織刺激、炎癥、感染)系統(tǒng)中正常穩(wěn)態(tài)的波動的^Jl性增強(qiáng)(Talleyetal.，2002)。這種增強(qiáng)的反應(yīng)性導(dǎo)致消化道運(yùn)動性的失調(diào)、上皮功能晚疫和通透性)失調(diào)和內(nèi)臟的超^LgJl，這些^I又導(dǎo)致了IBS癥狀?？赡苡卸喾N不同分子在IBS的發(fā)病機(jī)制中起作用，包括刺激神經(jīng)元的^的作用和參與啟動炎性過程的分子的作用。發(fā)明人掌握的多種的分子都已知與神經(jīng)元的可能的活'斜目關(guān)，因?yàn)樗鼈冎苯佑缮窠?jīng);^達(dá)或者它們的受體擬申經(jīng)元上表達(dá)，所述內(nèi)部分子包括IL-17D、IL-17B和IL-31。此外，有多個IL-17家絲員和相關(guān)襯與消化道炎斜目關(guān)，所狄員包括IL-17A、IL-17F、IL-23和IL-31?？梢栽诩膊〉膭游锬Ｐ椭袦y試這些M的體內(nèi)抑制劑效力。已經(jīng)提出了一些^^以IBS的關(guān)鍵特征的動物模型，這些模型中涉及乾向中樞的刺激設(shè)^)和靶向外周的刺激(感染，炎癥)?？梢杂糜跍y定抑制劑治療IBS的效力的體內(nèi)動物模型的兩個實(shí)例為(i)主要^^以原發(fā)性CNS定向的IBS發(fā)病機(jī)制的模型(^激模型)，和(ii)主要模擬消化道定向的應(yīng)激(即消化道炎癥、感染或物理應(yīng)、劇的誘導(dǎo)物的模型。然而應(yīng)當(dāng)注意的是，在CNS或在胃腸(GI)道中發(fā)生的事件并不是相互獨(dú)立的，IBS的癥狀;f艮可能應(yīng)歸因于從CNS向GI的信號傳導(dǎo)或從GI向CNS的信號傳導(dǎo)之間的復(fù)雜的相互作用。J)藥物學(xué)制劑為了用于藥物用途，可^JI常M^r法將本發(fā)明的可溶性多肽配制為用于腸胃外iHit特別是靜脈內(nèi)iliill或皮下^ill的制劑。靜脈內(nèi)給藥可以通過以下方式進(jìn)行快速濃注、控釋(例如使用微Ml其^f&^適技術(shù))或通常為一小時(shí)至幾小時(shí)內(nèi)的輸注。通常，藥物制劑應(yīng)包括itiL蛋白以及可藥用的載體，例如生理鹽水、緩沖鹽溶液或5%葡萄糖水溶液等等。制劑還可包括一種或多種賦形劑、防腐劑、助溶劑、緩沖劑或者防止容器表面的蛋白質(zhì)損失的清蛋白等等。當(dāng)<^1這類結(jié)合療法時(shí)，可將各細(xì)胞因子混合為單一的制劑或者各細(xì)胞因子可以以各獨(dú)立的制劑形式給藥。配制的方法是本領(lǐng)域公知的，并且公開于例如Remington'sPharmaceuticalSciences,Gennaro，ed.，MackPublishingCo.,EastonPA,1990中，該文獻(xiàn)通過援引納A^文。治療劑量通常應(yīng)為O.1至IOOmg/kg患者體重/天，優(yōu)選地為0.5-20mg/kg/天，精確的劑量可由臨床醫(yī)生根據(jù)現(xiàn)有的標(biāo)準(zhǔn)，并考慮游治療疾病的'1^和嚴(yán)重程度以及患者個^#征等等因素來確定。劑量的確定是在本領(lǐng)域普通技^A員能力范圍之內(nèi)的。通常應(yīng)在化療或骨髓移#^給予蛋白質(zhì)，可給予最多達(dá)28天的時(shí)間段或給予Jjfe小板計(jì)數(shù)達(dá)到>20，000/咖3，優(yōu)逸地>50,000/咖3為止。更通常地，蛋白質(zhì)可凈皮給予一周或更短時(shí)間，通常被給予一至三天。通常，本發(fā)明的可溶It多肽治療有效量為足以使淋巴樣細(xì)胞或骨髓祖細(xì)胞的增殖和/或分化在臨床上產(chǎn)生顯著增加的量，所述的增加表現(xiàn)為循環(huán)系統(tǒng)中成熟細(xì)胞(例如血小板或嗜中性粒細(xì)胞)水平的增加。因此，對血小板疾病的治療可持續(xù)至血小板計(jì)數(shù)達(dá)到至少20，000/咖3、優(yōu)選地為50，000/咖3為止。本發(fā)明的可溶性多Jlbi可以與務(wù)他細(xì)胞因子聯(lián)^"給藥，所述細(xì)胞因子例如IL-3、IL-6和IL-11;干細(xì)胞因子；紅細(xì)胞生成素；G-CSF和GM-CSF。在聯(lián)合治療方案中，其他細(xì)胞因子的日劑量通常為EPO,150U/kg;GM-CSF,5-15lg/kg;IL-3，1-5lg/kg;和G"CSF,1-25lg/kg。與EPO聯(lián)合的療法例如可用于EPO水平較低的貧血患者。通常，可溶性多肽的給藥劑量會根據(jù)下列因素而變化例如患者的年齡、體重、身高、性別、總體醫(yī)學(xué)狀況和病史。通常需要向受者提供的這類可溶性多肽的劑量范圍為約lpg/kg至10mg/kg(藥物量/患者體重)，但是根據(jù)情況也可以給予更低或更高的劑量。將本發(fā)明的可溶性多賂予受錄的給藥途徑可為靜脈內(nèi)給藥、動脈內(nèi)給藥、內(nèi)給藥、肌內(nèi)給藥、皮下給藥、胸膜內(nèi)給藥、鞘內(nèi)給藥、通賴部導(dǎo)管的輸注給藥或者在損傷區(qū)直接注射給藥。當(dāng)通過注射給予治療性蛋白質(zhì)時(shí)，給藥可以通過連續(xù)輸注或單次或多次濃注的方式進(jìn)行。其^藥途徑包括口JIM^藥、粘膜給藥、肺部給藥和經(jīng)皮給藥?？诜!Ut適用于聚酯孩&求、玉米蛋白M，類蛋白質(zhì)、^fr基丙烯酸酯W^基于月旨類的系統(tǒng)(參見例如，/Vo/e///fe/2>e77:戶Ar"'ca/^j^azw，Sanders和Hendren(編著)，第255-288頁，DiBase和Morrel的"OralDeliveryofMicroencapsulatedProteins"(PlenumPress1997))。例如胰島素鼻內(nèi)給藥的方式說明了鼻內(nèi)送遞的可行性(參見例如，HinchcliffeandIlium,處收"ehY^199(1999))?？梢灾苽浒扇苄訧L-17RC或抗IL-17RC抗體的干顆?；蛞后w顆粒，并在干粉^Ht器、液體溶MJ^生器或噴霧器的幫助下用于^V給藥(例如，PettitandGombotz，77"75^#7沃343(1998);Pattonefa/.,"/"收Zte/iYve7.1^235(1999))。這一方法可通itAERX^t尿病控制系統(tǒng)得到說明，該系統(tǒng)為一種可以將氣溶皿島素iHit至肺內(nèi)的手控電子吸入器。研究顯示，分子量大到48，000kDa的蛋白質(zhì)可以在^M超聲波的輔助下以治療濃度穿過皮膚送遞，這證明了經(jīng)皮給藥的可行性(MitragotriWa/.,5We/ce2^850(1995))。電穿孔的經(jīng)皮iHit提供了用于給予本發(fā)明的可溶性多肽的另一種方式(Pottsefa/.,戶力ar瓜A/Wec力/zo厶7ft213(1997))?？梢愿鶕?jù)已知方法配制含有本發(fā)明的可溶性多肽的藥物組合物，以制備其中治療性蛋白和可藥用栽體組合形成混^的可藥用組#。當(dāng)一種組^的的給藥可被接受該組絲的患者耐受時(shí)，就將該組^稱為"可藥用栽體"。可藥用載體的一個實(shí)例為無菌磷皿緩沖液。其^/^適的載體^^本領(lǐng)域4支^pv員^"^p的。參見例如，Gennaro(編著)，^//^o/z's/^ariz/acewf/ca/5W朋ce51,第19版(MackPublishingCompany1995)。出于治療目的，可以給予患者治療有效量的本發(fā)明的可溶勝多#可藥用載體。當(dāng)所給予的本發(fā)明的治療性分子和可藥用載體的組合的量產(chǎn)生顯著的生理學(xué)作用時(shí)，就稱該量為"治療有效量"。如果一種藥物的存在導(dǎo)致當(dāng)接受給藥的患者的生理狀況發(fā)生可檢測的改變時(shí)，就稱該藥物產(chǎn)生了顯著的生理學(xué)作用。例如，如果一種用于治療炎癥的藥物的存在減輕了炎性應(yīng)答，就稱該藥物產(chǎn)生了顯著的生理學(xué)作用。含有本發(fā)明的可溶性多肽的藥物組合物可以以液體形式、氣溶膠形式或固體形式提供。液體形式的實(shí)例為可注射溶液和口服懸液。示例性的固體形式包括膠嚢、片劑和控釋形式。控釋形式的實(shí)例為微量滲透^^物(Bre邁er"a/"他/"瓜if/ofec/wo/./ft239(1997);/^收/^//「6/7分"湖5，RanadeandHollinger(編著)，第95-123頁，Ranade的"ImplantsinDrugDelivery"(CRCPress1995)',尸rofe/"ZtehVar/:尸力7s2.ca/分5^eaw，SandersandHendren(編著)，第239—254頁，Bremer等人的"ProteinDeliverywithInfusionPumps"(PlenumPress1997);/We//z/te/2>eiy..戶力/s/ca/i^&孤，Sanders和Hendren(編著)，第93-117頁，Yewey等人的"DeliveryofProteinsfromaControlledReleaseInjectableImplant"(PlenumPress1997))。脂質(zhì)^^供了一種通過以下給藥途徑將治療性多^L遞至受試者的方法靜脈內(nèi)、內(nèi)、鞘內(nèi)、肌內(nèi)、皮下，或口月峰藥、pAA^藥或鼻內(nèi)給藥。脂質(zhì)體是由被脂質(zhì)雙層包圍的一個或多個水性區(qū)室組成的微嚢(總體參見，Bakker—Woudenbergefa/.，/t7//z.#/c_rc0/.o/.Zo/"ecLZVs.X":S61(1993);Kim，Zn/^y^^618(1993)和/^收/^//%/^5>^"邁;，Ranade和Hollinger(編著)，第3-24頁，Ranade的"Site—SpecificDrugDeliveryUsingLiposomesasCarriers"(CRCPress1995))。月旨質(zhì)體在纟且成上與細(xì)皿類似，因此脂質(zhì)體可以用于^4H4^藥并且是可生物降解的。根據(jù)制備方法的不同，脂質(zhì)體可為單層的或多層的，脂質(zhì)體的直徑大小可為0.02pm至10jum以上。月旨質(zhì)體中可包封多種藥物分配于脂雙層中的疏^K性藥物和分配于內(nèi)部水性空間中的親水性藥物(參見例如，Machyefa/.,Z2'/oso邁esCe//戶A2r鵬co/0^7(JohnLibbey1987)和0stro3/"^zzer/ca/7/化^a戶力"瓜4《1576(1989))。此外，還可以通過改變脂質(zhì)體的大小、脂雙層的數(shù)目、液體組分以及改變脂質(zhì)體的荷電特#表面特性，從而控制^皮包封藥物的治療利用度。脂質(zhì)體可吸附在M所有類型的細(xì)胞上，并緩慢#^^斤包封的藥劑?；蛘?，吸附的脂質(zhì)體可被吞喧性細(xì)胞內(nèi)吞。內(nèi)吞作用^脂質(zhì)體脂質(zhì)會在;^11^內(nèi)被降解而#^^斤包封的藥物(8^6。110!"Wa/.，v4/m.5W.368(1985))。在靜脈內(nèi)給藥^，小脂質(zhì)體(0.1至1.0nm)通常凈iLA^于肝J^脾的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)^t聶取，而大于3.OMm的月旨質(zhì)體會^^部^^?？梢岳眠@種網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)胞優(yōu)先攝小脂質(zhì)體的特性來將化學(xué)治療劑送遞到巨噬細(xì)l&^肝臟腫瘤中?？梢酝ㄟ^一些方法來繞過所述網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，所述方法包括用大劑量的脂質(zhì)體顆粒飽和或用藥物手段選擇性地使巨噬細(xì)胞失活(ClaassenWa/.,A/oc力/瓜"/o/勿w.卵2428(1984))。此外，已顯示在月旨質(zhì)體膜中摻入糖脂衍生磷脂或聚乙二醇衍生磷脂可以顯著地降低網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的攝取(Allenefa7.，"/oc力/瓜A/o/A^.7。d"及133(1991);Allenefa/.,肌c力/瓜W，(1993))。還可以通過改變磷脂組分或在脂質(zhì)體中插入受體或配體，從而制名^耙向于特定細(xì)胞或器官的脂質(zhì)體。例如，已有人使用用高含量的非離子型表面活性劑制備的脂質(zhì)體來把向于肝臟(HayakawaWa/.，日本專利04-244，018;KatoWa/.,歷'o/.戶力ar瓜A"http://.76960(1993))。這些制劑通過下述過程制備將;^磷脂gya堿、a-生育酚和乙^氬化M^油(HCO-60)在曱醇中混合；將混^在真空中濃縮；然后將混合物在水中重溶。已顯示^^H櫚J^^脂St^堿(DPPC)與大豆衍生化甾醇葡萄糖苷混合物(SG)和膽固醇(Ch)制備的脂質(zhì)體制劑可以耙向于肝臟(ShimizuWa/.，戶力"邁.2ft881(1997))?；蛘?，可以在月旨質(zhì)體表面結(jié)合各種耙向配體，例如抗體、M片段、糖類、維生素類和#^蛋白。例如，可以用支鏈型半ll4t脂類衍生物修飾脂質(zhì)體，以使其靶向于脫唾液酸糖蛋白(半專源)受體，該受體專一iiME肝臟細(xì)胞的表面表達(dá)(KatoandSugiyama，Cr/L紐7er.Zr收Carr/er加LM287(1997);Murahashiefa/.，"/o/.7%3/"瓜Aw//.2ft259(1997))。類4以地，Wueta/.,ife;7a"A^7^^772(1998)中已證明，^J^脫唾液^J臺球蛋白標(biāo)記脂質(zhì)體可以減短脂質(zhì)體的血漿半衰期，并顯著提高肝細(xì)Ji^脫唾液^J臺球蛋白標(biāo)記的脂質(zhì)體的攝取。另一方面，可以通過預(yù)先注射脫唾液^J臺球蛋白來抑制含有支鏈型半專'UI月旨類衍生物的脂質(zhì)體在肝臟中的累積(MurahashiWa/.，A/o/.""".^1259(1997))。聚烏頭酸化(polyaconitylated)人類血清清蛋白脂質(zhì)體提供了^^旨質(zhì)體耙向于肝細(xì)胞的另一種手段(KampsWa/.，#W/Jc^f.5W.ttS^夕411681(1997))。此外，Geho等人的美國專利No.4,603,044描述了一種定向于肝細(xì)胞的脂質(zhì)體嚢泡送遞系統(tǒng)，該系統(tǒng)特異性針對與肝臟的特化代謝細(xì)船目關(guān)的肝膽管受體。在一種更常用的組織靼向手段中，用特異性針對目標(biāo)細(xì)^Ji4達(dá)的配體的生物素化^^對目標(biāo)細(xì)l&ii^^標(biāo)記(Harasyma/.,^/k"r收"e/2V.化k^99(1998))。在游離抗/f^皮從血漿中清除之后，給予鏈親和素綴合的脂質(zhì)體。在另一種方法中，直糾耙向抗體連接到脂質(zhì)體上(HarasymJc^.^99(1998))。可以使用標(biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)微包封技術(shù)將多#抗體包封在脂質(zhì)體內(nèi)(參見例如，Andersone"7"/"/e"./鵬肌J7:1099(1981);Andersone"/.,Ca/7carJft1853(1990)和Cohena人，"/oc力/瓜A/o/力".95(1991);Z/;(Wo邁e7fec力/7o/o《7,第2版，Vol.III，Gregoriadis(編著)，第317頁，Alving等人的"PreparationandUseofLiposomesinImmunologicalStudies"(CRCPress1993);Wassefe"/,,f/zz拜o/.7^124(1987))。如上所述，可用于治療的脂質(zhì)體可^^有多種組分。例如，脂質(zhì)體可含有聚乙二醇的脂類衍生物(AllenWa/.,A/oc力/瓜"/o/勿w.女&/趟9(1993))。可以設(shè)計(jì)可降解的聚絲來##治療性蛋白較高的全身水平。^JJ例如下述的可降解聚合物來制備，所述聚合物例如聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLG)、聚酸酐、聚原酸酯、不可生物降解的乙酸乙基乙烯酯聚合物，其中蛋白質(zhì)4皮捕獲在聚合物中(Go邁botzandPettit，^/oc朋y"卵"C&e瓜沃332(1995);Zte7/VeryS7"e邁s，RanadeandHoilinger(編著)，第51-93頁，Ranade的"RoleofPolymersinDrugDelivery"(CRCPress1995);戶iY^e//7Zte//p^T7..分"e邁s，Sanders和Hendren(編著)，第45-92頁,Roskos和Maskiewicz的"DegradableControlledReleaseSystemsUsefulforProteinDelivery"(PlenumPress1997)5Bartusa/"5W朋ce2《/:1161(1998);PutneyandBurke，#a^/reA/o/ecA/zo/o^r7沃153(1998);Putney,Cwr.C力e邁.2548(1998))。聚乙二醇(PEG)包被的納米顆豐iii可以作為用于靜脈內(nèi)iliit治療性蛋白的載體(參見例如，Gref/%織肌&c/M70/.船67(1997))。本發(fā)明還考慮到了具有IL-17A和/或IL-17F結(jié)合活性的經(jīng)化學(xué)修飾的多肽，例如IL-17RC或IL-17RC/IL-17RA單體、同二聚體、異二聚體或多l(xiāng)^體形式的可溶性受體，其中所述所述受體為一種如上所itJ4與聚^/相連接的多肽。本領(lǐng)域技^A員也可以如下iii^^斤iiiiki殳計(jì)M劑型，所U獻(xiàn)例如，AnselandPopovich，/56ar鵬cew〃ca/Zfc^y財(cái)e尸o/hwa/w/"r堪Zte/2>e_T7分"e邁A第5版(Lea&Febiger1990)，Gennaro(ed.)，ie邁/z^o/z戶A2i"鵬cew〃ca/5We"ces，第19版他ckPublishingCompany1995),和RanadeandHoilinger,Zr"g分Wezoy(CRCPress1996)。例如，藥物組合物可以以試劑盒的形式提供，所述試劑盒包括裝有一種本發(fā)明的可溶性多肽的容器。治療性多肽可以以用于單次或多次劑量的可注射溶液的形式提供，或者以可在注射前重溶的無菌i^末形iy^供。或者，這類試劑盒可包括一個用于給予治療性多肽的干粉噴射器、液體氣溶40C生器或噴霧器。這類試劑盒還可包括關(guān)于所述藥物組合物的適應(yīng)癥和使用方法的文字信息。此外，這類信息可以包括如下聲明，聲明已知對il-17rc或il-17ra過敏的患者禁用所i^i且^。含有本發(fā)明的可溶性多肽的藥物組^詠可以以液體形式、氣溶膠形式或固體形式提供。液體形式的實(shí)例為可注射溶液、氣溶膠、滴劑、局部用溶液和口月良懸液。示例性的固體形式包括膠嚢、片劑和控釋形式。控釋形式的實(shí)例為微量滲透泵和;tt^物(Bremere"/"Pharm.Biotechnol.1^:239(1997);"r塔ife//^ry^咖，Ranade和Ho11inger(編著)，第95-123頁，Ranade的"ImplantsinDrugDelivery"(CRCPress1995);to^s//5ywe邁;y，Sanders和Hendren(編著)，第239-254頁，Bremer等人的"ProteinDeliverywithInfusionPumps"(PlenumPress1997)j_rofe//z2te/7i^i7;戶力/^.ca/分We啦，Sanders和Hendren(編著)，pages93-117頁，Yewey等人的"DeliveryofProteinsfromaControlledReleaseInjectableImplant"(PlenumPress1997))。其他固體形式包括乳劑、糊劑和其他局部應(yīng)用形式等等。脂質(zhì)體^供了一種通過以下給藥途徑將治療性多^jt至受試者的方法靜脈內(nèi)、艦內(nèi)、鞘內(nèi)、肌內(nèi)、皮下，或口月峰藥、PAA^藥或鼻內(nèi)給藥。脂質(zhì)體是由被脂質(zhì)雙層包圍的一個或多個水性區(qū)室組成的微嚢(總體參見，Bakker-Woudenbergefa/.,fwr./.t7//7.Zo/"ec厶72"w/7//.":S61(1993);Kim，"i7/^y46618(1993)和"r收Zfe7/re/yi^"e邁ARanade和Hollinger(編著)，第3-24頁，Ranade的"Site-SpecificDrugDeliveryUsingLiposomesasCarriers"(CRCPress1995))。月旨質(zhì)^L在組成上與細(xì)類似，因此脂質(zhì)體可以用于^^*藥并且是可生物降解的。根據(jù)制備方法的不同，脂質(zhì)體可為單層的或多層的，脂質(zhì)體的直徑大小可為O.02lim至10jim以上。脂質(zhì)體中可包封多種藥物分配于脂雙層中的疏^C性藥物和分配于內(nèi)部水性空間中的親7JC性藥物(參見例如，Machyefa/.，Z/;705"咖es//CW/"/o/o^g7力ar邁aco/c^(JohnLibbey1987)和0stroefa/"vtoer/ca//.化m.7%"瓜461576(1989))。此外，還可以通過改變脂質(zhì)體的大小、脂雙層的數(shù)目、液體組分以及改變脂質(zhì)體的荷電特妙表面棒性，從而控制4皮包封藥物的治療利用度。脂質(zhì)體可吸附在J^所有類型的細(xì)胞上，并緩慢#^^斤包封的藥劑?；蛘撸降闹|(zhì)體可被吞嗟性細(xì)胞內(nèi)吞。內(nèi)吞作用^^脂質(zhì)體脂質(zhì)會在^H^內(nèi)被降解而^^i^斤包封的藥物(ScherphofWa/.,^/w.〃F.業(yè)ad5c/.368(1985))。在靜脈內(nèi)給藥^，小脂質(zhì)體(O.l至l.Oum)通常^^絲于肝峰脾的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)l^聶取，而大于3.Ojim的月旨質(zhì)體會^y^部^^。可以利用這種網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的細(xì)胞優(yōu)先攝和艮小脂質(zhì)體的特性來將化學(xué)治療劑送遞到巨噬細(xì)#肝臟腫瘤中。可以通過一些方法來繞過所述網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)，所述方法包括用大劑量的脂質(zhì)體顆粒飽和或用藥物手段選擇性地使巨噬細(xì)胞失活(ClaassenWa人，A/oc力/瓜A/o;A^.^"a428(1984))。此外，已顯示在脂質(zhì)體膜中摻入糖脂衍生磷脂或聚乙二醇衍生磷脂可以顯著地降低網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的攝取(Allen"a/.,"/oc力/瓜藩A133(1991);Allenefa/""/oc力/瓜7，9(1993))。還可以通過改變磷脂組分或在脂質(zhì)體中插入受體或配體，從而制^^耙向于特定細(xì)胞或器官的脂質(zhì)體。例如，已有人使用用高含量的非離子型表面活性劑制備的脂質(zhì)體來耙向于肝臟(HayakawaWa丄，日本專利04-244,018;Katoef"io/.戶力ar瓜A/".M960(1993))。這些制劑通過下述過程制備將大豆磷脂酰M、a-生育,乙lL^氫化蓖麻油(HCO-60)在曱醇中混合；將混合物在真空中濃縮；然后將混合物在水中重溶。已顯示4吏用二棕櫚,脂酰M(DPPC)與大豆衍生化甾醇葡萄糖苷混合物(SG)和膽固醇(Ch)制備的脂質(zhì)體制劑可以耙向于肝臟(Shimizuefa/.,A/o/.戶力ar邁.^ft///.M(1997))?；蛘?，可以在脂質(zhì)體表面結(jié)合各種靶向配體，例如抗體、抗體片段、糖類、維生素類和轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白。例如，可以用支鏈型半乳糖脂類矛汙生物修_飾脂質(zhì)體，以使其靶向于脫唾液酸糖蛋白(半乳糖)受體，該受體專一地在肝臟細(xì)胞的表面表達(dá)(KatoandSugiyama，Crit,Rev.Ther.DrugCarrierSyst.1^:287(1997);Murahashia/"Biol.Pharm.Bull.^:259(1997))。類似地，Wu"a/.，H印atology772(1998)中已證明，使用脫唾液咖臺球蛋白標(biāo)記脂質(zhì)體可以減短脂質(zhì)體的血漿半衰期，并顯著提高肝細(xì)JM"脫唾液自臺球蛋白標(biāo)記的脂質(zhì)體的攝取。另一方面，可以通過預(yù)先注射脫唾液^J臺球蛋白來抑制含有支鏈型半乳糖脂類衍生物的脂質(zhì)體在肝臟中的累積(MurahashiWa/.,Biol.Pharm.Bull.259(1997))。聚烏頭酸4t/v類血清清蛋白脂質(zhì)體提供了^^旨質(zhì)體耙向于肝細(xì)胞的另一種手段(Kamps"a/.,Proc.Nat'1Acad.Sci.USA94:11681(1997))。此外，Geho等人的美國專利No.4，603，044描述了一種定向于肝細(xì)胞的脂質(zhì)體嚢泡送遞系統(tǒng)，該系統(tǒng)特異性針對與肝臟的特化代謝細(xì)船目關(guān)的肝膽管受體。在一種更常用的組織耙向手段中，用特異性針對目標(biāo)細(xì)l&Ji^達(dá)的配體的生物素化抗體對目標(biāo)細(xì)J!&ii^ft^標(biāo)記(Harasyma/.，Adv.DrugDeliv.Rev.^:99(1998))。在游離^^皮M漿中清除^,給予鏈親和素綴合的脂質(zhì)體。在另一種方法中，直接將靶向抗體連接到脂質(zhì)體上(HarasymWa/.,Adv.DrugDeliv.Rev.^:99(1998))?？梢允褂脴?biāo)準(zhǔn)的蛋白質(zhì)微包封技術(shù)將本發(fā)明的可溶性多肽包封在脂質(zhì)體內(nèi)(參見例如，Andersone"/"Infect.I隨n.31:1099(1981);Andersone"/"CancerRes.1853(1990)和Cohene"/"Biochim.Biophys.Acta1063:95(1991);Z/;^o邁e7fec力加/0^7，第2版，第III巻，Gregoriadis(編著)，第317頁，Alving等人的"PreparationandUseofLiposomesinImmunologicalStudies"(CRCPress1993);Wassefe"/"餘汰_&zthk/.W義124(1987))。如上所述，可用于治療的脂質(zhì)體可^^有多種組分。例如，脂質(zhì)體可含有聚乙二醇的脂類衍生物(AllenBiochim.Biophys.Acta1150:9(1993))?？梢栽O(shè)計(jì)可降解的聚##^來絲治療性蛋白較高的全身水平。4捐例如下述的可降解聚合物來制備孩，所述聚合物例如聚(丙交酯-共-乙交酯)(PLG)、聚酸酐、聚原酸酯、不可生物降解的乙酸乙基乙烯酯聚合物，其中蛋白質(zhì)凈皮捕獲在聚合物中(GombotzandPettit，BioconjugateChem.互332(1995);"r收"e//rer7《Mfe孤，Ranade和Ho11inger(編著)，第51-93頁，Ranade的"RoleofPolymersinDrugDelivery"(CRCPress1995)5尸i^e//2Zte//Fe_r,-戶力757ca/分"e邁s，Sanders和Hendren(編著)，第45-92頁,Roskos和Maskiewicz的"DegradableControlledReleaseSystemsUsefulforProteinDelivery"(PlenumPress1997);BartusScience281:1161(1998);PutneyandBurke，NatureBiotechnology16:153(1998);Putney,Curr.Opin.Chem.Biol.2:548(1998))。聚乙二醇(PEG)包被的納米顆豐線可以作為用于靜脈內(nèi)iHit治療性蛋白的載體(參見例如，GrefWa/.，PharnuBiotechnol.!^:167(1997))。本領(lǐng)域技術(shù)人員也可以如下述文獻(xiàn)所述地設(shè)計(jì)其他劑型，所述文獻(xiàn)例如,AnselandPopovich，/ftar鵬cei/〃caJ尸omsa/w/"r堪Zfeh>e/y5y"e邁^第5版(Lea&Febiger1990);Gennaro(編著)，We邁//7^0/7、戶力ar鵬cew〃ca75W朋ce《，第19版(MackPublishingCompany1995)和RanadeandHoilinger,",收"e//p^r/加r郷(CRCPress1996)。本發(fā)明考慮了本發(fā)明的可溶性多肽組合物，以及包括本文所述的相同多肽的方法和治療用途。這類組^還可包^體。所述載體可為常規(guī)的有機(jī)載體或無機(jī)載體。載體的實(shí)例包括水、緩沖溶液、乙醇、丙二醇、聚乙二醇、麻油和玉米油等等?？蓪D(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行基因工程絲，以使其在所有組織中錄達(dá)IL-17F、IL-17A、IL-17RA或IL-17RC基因，或在組織特異性或組織優(yōu)先性調(diào)控元件的控制下狄達(dá)IL-17F、IL-17A、IL-17RA或IL-17RC基因?？梢约言逻@些it^達(dá)產(chǎn)物來表征由it^達(dá)導(dǎo)致的表型，并且該轉(zhuǎn)基因動物可以作為因過量的IL-17F、IL-17A、IL-17RA或IL-17RC導(dǎo)致的人類疾病的模型。it^iiJi述^-"產(chǎn)物的轉(zhuǎn)基因小鼠也可以作為模型生物反應(yīng)器，用于生產(chǎn)IL-17RA或IL-17RC，例如在較大動物的乳或血液中生產(chǎn)任一種本發(fā)明的可溶性多肽。制備轉(zhuǎn)基因小鼠的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的(參見例如,0verexpressionandKnockoutofCytokinesinTransgenicMice,Jacob(編著)，第111-124頁，Jacob的"ExpressionandKnockoutofInterferonsinTransgenicMice"(AcademicPress,Ltd.1994);MonasterskyandRobl(編著)，StrategiesinTransgenicAnimalScience(ASMPress1995)和GeneExpressionSystems:UsingNaturefortheArtofExpression,Fernandez和Hoeffler(編著)，第367-397頁，Abbud和Nilson的"RecombinantProteinExpressioninTransgenicMice"(AcademicPress,Inc.1999))。例如，一種制備表達(dá)IL-17RC基因的轉(zhuǎn)基因小鼠的方法可以使用有生育能力的成年雄鼠(種鼠)(B6C3fl，2-8月齡(TaconicFarms,Germantown,NY))、切除輸精管的雄鼠(絕育鼠)(B6D2fl，2-8月齡(TaconicFarms))、青春期前的有生育能力的雌鼠(側(cè)種(B6C3fl，4-5周齡(TaconicFarms))和成年的有生育96能力的雌鼠(受體)(B6D2fl，2-4月齡(TaconicFarms))。將糾適應(yīng)培養(yǎng)一周，然后以大約8IU/小鼠的量jM內(nèi)注射孕馬血清促性腺激素(SigmaChemicalCompany;St.Louis,MO)，然后在46-47小時(shí)后以8IU/小鼠的量J^內(nèi)注射人類絨4^促性^L素(hCG)(Sigma)以誘導(dǎo)超排卵。在激素注射^使娜與種鼠交配。通常在hCG注射后13小時(shí)內(nèi)發(fā)生排卵。通過在交配次日早上觀察陰道塞的存在以確認(rèn)交配完成。在外#術(shù)鏡(surgicalscope)下收集受精卵。收集輸卵管并將其中的卵放在含有透明質(zhì)酸酶(Sigma)的尿分析載玻片上。將卵用透明質(zhì)酸酶洗滌一次并用Whitten，sW640培養(yǎng)基洗滌兩次(如例如Meninoand0，Claray，Biol.R印rod.77:159(1986)和Dienhart和Downs,Zygote4:129(1996)中所述)，所述培養(yǎng)基已在5%C02、5%02和90%N2且37"C的條件下孵育過。然后將卵儲存于37。C/5"/。C02培養(yǎng)箱中直至用于微注射。將含有IL-17RC編碼序列的10至20微克的質(zhì)粒DNA線性化、艦純化并重懸于10mMTris-HCl(pH7.4)、0.25mMEDTA(pH8.O)中，4吏其終濃度為5-10納克/微升，以用于樣支注射。例如，IL-17RC編碼序列可編碼含有SEQIDN0:2的MM^21至452的多肽。將質(zhì)粒DNA微注射至收集的卵中，所述卯被置于一滴W640培養(yǎng)基中并用溫?zé)岬慕?jīng)C02平衡的礦物油覆蓋。將DM^注射針頭中(從O.75mmID、l咖OD的硼^C璃毛細(xì)管中拉出)，并注射至每個卵中。用注射針頭穿透每個卵，ii^一個或兩個單倍體原核中。將皮升量級的DNA注射至原核中，在不接觸核仁的情況下將注射針頭抽出。重復(fù)這一步驟直至對所有的卵進(jìn)行注射。將微注射成功的卵轉(zhuǎn)移至含有預(yù)充氣的W640培養(yǎng)基的器官組織培養(yǎng)皿中，在37匸/5%C02培養(yǎng)箱中培養(yǎng)過夜。第二天，將雙細(xì)艦胎##至假懷孕的受體中。在與切除輸精管的絕育鼠交配后存在交St塞的小鼠被識別為受體。麻醉受體并刮去其后背左側(cè)的毛，將其置于外科顯微鏡下。在M上切一小口，^H刀開位于膝部和^間的腹部中間區(qū)域的肌肉壁，所述區(qū)域^架、后背(saddle)和后M^斤限定。將生殖器官外置于一個小的外利+術(shù)布上。^J3旨肪墊在手^W上捧故，并將一個嬰JLjk管鑷(Roboz，Rockville，MD)與脂肪墊相連街并掛在小鼠的后背上，以防止器官滑回體腔。^JJ含有礦物油并在^交^^有W640和氣泡的細(xì)移液管，將l2-17>Ht康的來自于前一天注射的雙細(xì)l^胎轉(zhuǎn)移至受體體內(nèi)。在受體體內(nèi)固定一個膨脹的安瓿(ampulla)，使輸卵管保持在，和粘液嚢之間，并用28g針頭在輸卵管接近粘液嚢的地方劃一劃口，注意不要劃破^L或粘液嚢將移液管插入輸卵管的劃口中并吹入胚胎，允許第一個氣泡^4多液管中逸出。將脂肪墊輕^y侏AjM，^H組殖器官滑回體腔。用^^縫合JM壁并用縫合夾夾住^J夫。將小鼠置于37iC的載物片加溫器上至少加熱四個小時(shí)使其統(tǒng)將受體^W地放回籠中，使其妊娠19-21天。在出生后，M后19-21天時(shí)斷奶，將斷奶后的小鼠掩性別分別飼養(yǎng)在不同的籠中，用干凈的剪刀剪下小鼠尾部O.5cm^為活檢樣本(用于基因分型)。例如使用QiagenDneasy試劑盒，按照廠商的說明用斷尾中制名、基因組DNA。佳月PCR^^斤基因組DNA,所處CR的引物被設(shè)計(jì)為可擴(kuò)增IL-17RC基因或^N同質(zhì)粒中引入的可篩選標(biāo)記基因。在確認(rèn)動物為轉(zhuǎn)基因動物之后，通過將轉(zhuǎn)基因雌鼠與野生型雄鼠一起飼養(yǎng)或?qū)⑥D(zhuǎn)基因雄鼠與一只或兩只野生型雌鼠""fe飼養(yǎng)，使其與近親品系回交。在幼鼠出生和斷奶后，按I"生別分離并斷M行基因分型。為檢驗(yàn)轉(zhuǎn)基因在活體動物中的表達(dá)，進(jìn)行了部分肝切除術(shù)。在上腹部緊挨著劍狀軟骨(zyphoidprocess)下方進(jìn)行外科準(zhǔn)備。使用無菌技術(shù)在胸骨下切一個1.5-2cm的小切口，將肝臟左側(cè)葉外置。佳月4-0絲線在下葉處打結(jié)，使下葉露在體腔外。佳月無創(chuàng)鉗夾住絲線結(jié)，并在第一個結(jié)附a置另一個可吸收的Dexon(AmericanCyanamid;Wayne，N.J.)的環(huán)。MJ)exon結(jié)處進(jìn)行遠(yuǎn)端切除，并將大約100mg的切下的肝組織置于無菌培^m中。#^刀下的肝臟部分轉(zhuǎn)移至一個14ml聚丙烯圓底試管中，并在液氮中i5^冷凍，在干冰上保存。用縫線和縫合夾縫合外M術(shù)部位，在手術(shù)后將動物籠置于37'C加熱墊上24小時(shí)。在手術(shù)后每天檢查動物并在手術(shù)后7-10天移去縫合夾。^^IRNA溶液雜交測定法或聚合Sl^iC^^r測每只轉(zhuǎn)基因小鼠的IL-17RCmRNA^Jt7jc平。除了制備it^達(dá)IL-17F、IL-17A、IL-17RA或IL-17RC的轉(zhuǎn)基因小鼠《Jf，也可以對不表iiJi述^^r基因或表達(dá)異常低的轉(zhuǎn)基因小鼠進(jìn)行基因工程改造。這種轉(zhuǎn)基因小鼠提供了與缺少IL-17F、IL-17A、IL-17RA或IL-17RC相關(guān)的疾病的有用模型。如上所述，可以偵月反義基因、核酶基因或外部引導(dǎo)序列基因來抑制IL-17RC基因的表達(dá)。例如，為制名—錄達(dá)IL-17RC基因的轉(zhuǎn)基因小鼠，可m述抑制序列靶向IL-17RCmRM。制^#^因表達(dá)異常低的轉(zhuǎn)基因小鼠的方法是^^領(lǐng)域4支術(shù)人員已知的(參見例如，MethodsinGeneBiotechnology,第205—224頁，Wu等人的"GeneUnderexpressioninCulturedCellsandAnimalsbyAntisense腿andRMStrategies"(CRCPress1997))。另一種制備^不表達(dá)或完全不表達(dá)IL-17RC基因的轉(zhuǎn)基因小鼠的方法是產(chǎn)生這樣一種小鼠，該小鼠體內(nèi)的至少一個正常的IL-17RC等位基因被無功能的IL-17RC基因所替換。設(shè)計(jì)無功能IL-17RC基因的一種方法是將另一基因(例如一種可篩選標(biāo)記基因)插入至編碼IL-17RC的核酸分子中。制備這種被稱為"基因敲除小鼠，，的標(biāo)準(zhǔn)方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的(參見例如，OverexpressionandKnockoutofCytokinesinTransgenicMice,Jacob(編著)，第lll-124頁，Jacob的"ExpressionandKnockoutofInterferonsinTransgenicMice"(AcademicPress,Ltd.1994)和MethodsinGeneBiotechnology,第339-365頁，Wu等人的"NewStrategiesforGeneKnockout"(CRCPress1997))。通過下面的非限制性實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。實(shí)施例實(shí)施例lIL-17RC基因的表達(dá)使用HumanMultipleTissueBlots試劑盒(ClontechLaboratories,Inc.,PaloAlto，CA)進(jìn)行RNA印跡分析。用皿純化的PCR產(chǎn)物中產(chǎn)生了兩個^4十。4吏用ZC21798(5'CGGCGTGGTGGTCTTGCTCTT3，；SEQIDNO:8)和ZC21808(5，TCCCGTCCCCCGCCCCAGGTC3，;SEQIDNO:31)作為引物制備第一個探針。使用購自Amersham(ArlingtonHeights,IL)的Multiprime標(biāo)記試劑盒，根據(jù)廠商的說明對該探針進(jìn)行放射性標(biāo)記。使用NucTrappush柱(Stratagene，LaJolla，CA)純化該探針。^UUExpressHyb(Clontech)溶液作為RM印跡的預(yù)雜交和雜交溶液。在65t:下雜交過夜。在雜^^ft^l含有0.1%SDS和SSC的下idi^液洗滌印跡，每次30分鐘在室溫下用2xSSC洗滌兩次，在50。C下用0.1xSSC洗滌三次，在55匸下用0.1xSSC洗滌一次，以瓦在65匸下用0.1xSSC洗'^"次。結(jié)a明IL-17RC基因在曱^W、腎上腺、前列#肝臟組織中有很強(qiáng)的表達(dá)，在心臟、小腸、胃和氣管組織中表達(dá)較弱。與此不同的是，在腦部、胎盤、肺部、骨骼肌、腎臟、、脾臟、胸腺、睪丸、卵巢、結(jié)腸、夕卜周血白細(xì)胞、脊柱、淋巴結(jié)和骨髓中沒有表ii^幾乎沒有表達(dá)。實(shí)施例2^ft^JPCR測定mRNA^E細(xì)胞系;felJi的分布從自培養(yǎng)的靜息細(xì)胞系和經(jīng)刺激的細(xì)胞系中純化總RNA,并根據(jù)廠商的說明使用Qiagen(Valencia,CA)的RNeasy試劑盒，或者使用酸-苯酚純化方法(ChomczynskiandSacchi，AnalyticalBiochemistry,162:156-9，1987)純化。使用AgilentBioanalyzer測定一份樣本來評估RNA的質(zhì)量。如點(diǎn)NA被顯著降解，則不能被用于l^的第一鏈cDNA的制備。通it^t一份RM進(jìn)行PCR測定來評估是否存在污染的基因組DNA，所述PCR的引物為zc41011(5，CTCTCCATCCTTATCTTTCATCAAC3，；SEQIDNO:32)和zc41012(5，CTCTCTGCTGGCTAAACAAAACAC3，；SEQIDNO:33)，該引物擴(kuò)增基因間的基因組DM的單位點(diǎn)。用于測定污染的基因組DNA的PCR條件如下2.5|iI的IOx緩沖液和O.5|i1Advantage2cDM聚合酶〉'^^(BDBiosciencesClontech，PaloAlto，CA)、2ul的2.5mMdNTP"給物(A卯liedBiosystems，F(xiàn)osterCity,CA)、2.5yI的IOxRediload(Invitrogen，Carlsbad,CA)和0.5pl的20pMzc41011和zc41012,^^P、為25jul。循環(huán)^L如下941C20秒，(94。C20秒+601C1分20秒)的40個循環(huán)和721C7分鐘的一個循環(huán)。取每種反應(yīng)的產(chǎn)物各IOnl進(jìn)行瓊脂糖皿電泳，并檢測^Ji是否存在來自污染的基因組DM的PCR產(chǎn)物。如果-見察到污染的基因組DM，則使用無DM試劑(Ambion，Inc，Austin,TX)根據(jù)廠商的說明對總RNA進(jìn)行DNA酶降解，然后再如上所i^進(jìn)#^測。只有看M不含有污染的基因組DNA的RNA才可以用于隨后的第-"^cDNA的制備。將20jig來自82種A^類細(xì)胞系的總RM用7jc溶至98n1,然后分為兩份49p1的等份，^-"份含有10iig總RNA，然后將它們置于兩塊96孔PCR^上。向^~~等份中加入用于第一鏈cDNA合成的試劑(InvitrogenFirstStrandcDNASynthesisSystem,Carlsbad,CA):20|al的25mMMgC12、10ul的10xRT緩沖液、lOml的O.1MDTT、2yl的寡dT、2ul的RNAseOut。然后向來自^細(xì)胞系的一個等份中加入2jLil的Superscriptn反轉(zhuǎn)錄酶，向相應(yīng)的細(xì)胞系等份中加入2nl的H20作為無反轉(zhuǎn)錄酶的陰性對照。將所有的樣本按下述條件孵育25。C10分鐘，42X:50^4中，70。C15分鐘。將樣本分置于深孑Ul中并用H20稀釋至1.7ml。使用Multipette(Saigan)城手分多次向96孑LPCR板的每一孔中分裝16.5n1的等^#，產(chǎn)生多個細(xì)胞系一次性PC敗，然后密封該板并儲存于-20°C。這些板中的^—孔^A來自大約100ng總RNA的第"^cDNA。將82種細(xì)胞系a于兩個板上，稱為陣列^18A和M18B。使用多重PCR測定法在一系列的板上評估板上的第-^cDNA的質(zhì)量，PCR中使用的引物為針對兩個表達(dá)廣泛但是豐度中等的基因0^(網(wǎng)絲白)和11^(#4失蛋白受體0的引物。將網(wǎng)絲白引物zc42901(5，CTCATATTGCTCAACTGTGTGAAAAG3，；SEQIDNO:34)和zc42902(5'TAGAAGCCACCTGAACACAAATCTG3，；SEQIDNO:35)，以^JFRC引物zc42599(5，ATCTTGCGTTGTATGTTGAAAATCAAm，；SEQIDNO:36)和zc42600(5'TTCTCCACCAGGTAAACAAGTCTAC3，；SEQIDNO:37)各O.5/i1,與下列試劑^^:2.5juI的IOx緩沖液和O.5yl的Advantage2cDNA聚合酶》'^^(BDBiosciencesClontech，PaloAlto，CA)、2pl的2.5mMdNTP混合物(AppliedBiosystems，，F(xiàn)osterCity,CA)和2.5ju1的10xRediload(Invitrogen，Carlsbad,CA),然后加入到陣列fll8A和陣列弁118B的每一孔中。循環(huán);f^t如下94匸20秒，(94匸20分鐘+67匸80秒)的35個循環(huán)，以及72TC7分鐘的一個循環(huán)。取每種反應(yīng)的產(chǎn)物各10yl進(jìn)行瓊脂糖皿電泳，并通過皿對每種細(xì)胞系的+RT孔的每種特異性基因的穩(wěn)定PCR產(chǎn)物的存在進(jìn)通itPCR分析IL-l7RC的人類第"^cDNA^Ji的mRNA的表達(dá)，所赴CR^^1的正義寡聚引物為ZC42756(5'ctctccaggcccaagtcgtgctct3，;SEQIDNO:38)、反義寡聚引物為ZC42757(5'ttgtcctgggggcctcgtgtctcc3，；SEQIDNO:39)，每一樣本的PCR反應(yīng)條件為2.5ja1的10x緩沖液和O.5p1的Advantage2cDNA聚合酶';^^(BDBiosciencesClontech,PaloAlto，CA)、2jLi1的2.5mMdNTP混合物(AppliedBiosystems)、2.5ju1的10xRediload(Invitrogen,Carlsbad,CA)和O.5p1的20pMjE義和反義引物。循環(huán)糾如下94X:2^4中，(94X:i分鐘+66X:30秒+72X:i分30秒)的35個循環(huán)，以及72。C7分鐘的一個循環(huán)。取每種反應(yīng)的產(chǎn)物各10jul進(jìn)行瓊脂糖皿電泳，并通過^WIL-l7RC的陽'錄#陰'錄iii^f恃分。IL-17RCniRNA在代表廣泛的組織和細(xì)胞類型的多種細(xì)胞系中都有廣泛的表達(dá)。特別地，IL-17RC在非T細(xì)胞夕卜周血細(xì)胞系(包括單核細(xì)胞、B-細(xì)胞和髓系細(xì)胞)中有持續(xù)的表達(dá)。而且，IL-17RCmRNA^來源于^:的細(xì)胞系中M確信的表達(dá)。表達(dá)IL-17RC的其他細(xì)胞系為陣列上存在的4^5種;U^細(xì)胞系。實(shí)施例3使用RTPCR測定mRNA在小鼠細(xì)胞系板上的分布從自培養(yǎng)的60種靜息細(xì)胞系和經(jīng)刺激的細(xì)胞系中純化總RNA，并#^廠商的說明使用Qiagen(Valencia，CA)RNeasy試劑盒，或者使用酸-#純化方法(Chomczynski和Sacchi，AnalyticalBiochemistry,162:156-9，1987)，或^J^)Trizol試劑的方法(Invitrogen，Carlsbad，CA)純4匕。將來自各細(xì)胞系的5ng總RNA分置于深孔96孑UUi，向每孔中加入125y1的3MNaOAc和100/il的;J^定染料(PelletPaint)(Novagen，Madison，WI)，然后用1120將終體積調(diào)至1.25ml。使用Multipette(Saigan)初堿手分多次向96孔PC販的每一孔中分裝25jil的RNA混合物的等^i^洋，然后再向每孔中加入75iL4l乙醇，產(chǎn)生多個細(xì)胞系一次性RT然后密封該板并儲存于-20匸。首先將絲Qiagen(Valencia,CA)96孔離心機(jī)上以6000RPM離心10^4中，以進(jìn)行RTPCR篩選。將板倒扣在吸水紙上以除去上清液。用100nl的70。/。EtOH洗滌RNA沉淀，再以6000RPM離心5分鐘。再次除去上清液，并將;^X干直至剩余的乙醇完全揮發(fā)。然后將RM沉淀重懸于15|i1的1120中。通itRTPCR來評估IL-17RCmRNA^小鼠細(xì)胞系RN缺上的表達(dá)，所MTPCR中4吏用的引物為zc38910(5，acgaagcccaggtaccagaaagag3，；SEQIDNO:40)和zc38679(5，aaaagcgccgcagccaagagtagg3，；SEQIDNO:41),每個才羊本的RTPCR條件同^f吏用PlatinumTaq試劑盒(Invitrogen，Carlsbad,CA)的SuperscriptOne-St印PCR。循環(huán)糾為48X:30辨的一個循環(huán)，94t)2分鐘，然后是(94X:i5秒+55。C30秒+72lCl分30秒)的35個循環(huán)，然后是72C7分鐘的一個循環(huán)。取每種反應(yīng)的產(chǎn)物各10nl進(jìn)行瓊脂糖皿電泳，過:^對IL-17RC的陽4i4狄陰'錄iii^f恃分。鼠類IL-17RCniRM在一些小鼠細(xì)胞系中表達(dá)，特別是在來源于骨髓的細(xì)胞系(包括成骨細(xì)胞系、脂肪細(xì)胞系和前脂肪細(xì)胞系)中表達(dá)。此外，小鼠IL-17RCmRNA^來自內(nèi)分泌系統(tǒng)的一些樣本中表達(dá)，例如在旨間質(zhì)細(xì)胞系、胰島細(xì)胞系和下丘腦細(xì)胞系、唾^細(xì)胞系和睪丸細(xì)胞系的樣本中表達(dá)。實(shí)施例4;U^桿菌中產(chǎn)生的pIL-17F的重折疊和純化A)包含體分離和pIL-17F的提取在批^JL酵物或m^養(yǎng)物中誘導(dǎo)蛋白質(zhì)的表達(dá)，在誘導(dǎo)后將;tM桿菌培養(yǎng)肉湯置于l升的瓶中，^^ISorvall浮桶式轉(zhuǎn)頭離心機(jī)以3000RPM離心。<捐含200mMNaCl和5mMEDTA的50mMTris緩沖液(pH8.O)洗滌細(xì)胞沉淀以除去所有的肉湯污染物，直至上清M清為止。然后將細(xì)胞沉淀懸浮于水冷的裂解緩沖液(50慮TrispH8.0;5mMEDTA;200mMNaCl;10。/。蔗糖(w/v);5mMDTT;5mM苯甲脒)中，使其在600nm^h的光密度為10-20光密度^。然后將該懸液在冰冷條降下用APV2000實(shí)驗(yàn)室勻漿器以8500-9000psi勻漿3次，產(chǎn)生>^碎的細(xì)胞裂解物。在4匸下，以20000xG離心細(xì)胞裂解物l小時(shí)，以回收不可溶的部分(包含體)。將20000xG離心所得的包含體;W定稱重后重懸于洗滌緩沖液(50mMTrispH8，含有200mMNaCl、5idMEDTA、5mMDTT、5mM^曱脒)中，每亳克包含體使用IOml洗滌緩沖液。通過使用OMNI國際通用轉(zhuǎn)子定子式發(fā)動器(internationalrotorstatorgenerator)進(jìn)j亍勻漿得到均勻的^lt系。然后將該懸液在4匸下以20000xG離心30分鐘。重復(fù)洗滌3-5次直至上清液澄清為止。將經(jīng)過洗滌的最終^;定溶解于含7M鹽酸胍的40mMTris緩沖液(pH8,含有O.1M亞硫酸鈉和0.02M連四硫酸鈉)中。在4匸下緩慢攪拌過夜，進(jìn)行提#亞硫^^^。將所得的粉紅色溶液在4。C下以35000xG離心l小時(shí)，然后:^清的含有可溶l"生pIL-17F的上清液以0.45jum過濾。B)pIL-17F的重4斤疊it禾呈將溶解的亞硫酸解的pIL-17F逐滴加入水冷的重折疊緩沖液中稀釋以進(jìn)行重折疊，所述重折疊緩沖液含有55mMMES、10.56mMNaCl、0.44mMKC1、0.055%PEG(3400K)、1.1mMEDTA、20%甘油、0.5M鹽艦、0.75M的精氨酸以及比例為l:l的谷胱甘肽的氧/f說原對(l慮GSH:lmMGSSG)。用HC1將重折疊緩沖液的pH調(diào)節(jié)至6.5,并加入pIL-17F至終濃度為100ng/ml。在稀釋后，將混合物在冷室中緩慢攪拌72小時(shí)。C)產(chǎn)物回收和純化^JU實(shí)驗(yàn)室M^的TFF系統(tǒng)和10kDa截留膜，將重折疊的pIL-17F,10倍。然后4吏用0.45樣沐的膜過濾，通過加入乙酸將pH調(diào)節(jié)至5.1。然后使用經(jīng)過50mMpH5.l的乙酸緩沖液平衡的Phar咖ciaSPFastFlow柱，通過陽離子交換色謙捕獲經(jīng)pH調(diào)節(jié)的物質(zhì)。通過將pIL-17F用5倍體積的平l^沖液以流速為190cm/小時(shí)在線(inline)稀#^行上柱。上述稀釋降低了離子強(qiáng)度，使得目標(biāo)蛋白與M可以有皿結(jié)合。在上樣完g,用平,沖液將柱洗滌至基線吸收。然后用含0.4MNaCl的50mM乙酸緩沖液(pH5.l)洗滌柱，然后再用含O.4M-1.5MNaCl的50mM乙酸緩沖液(pH5.1)以5CV的梯度'^yt結(jié)合的蛋白。通it^"、皿級分的SDSPAGE分析表明，用約lMNaCl洗脫的蛋白質(zhì)中有大約850/0為二聚體?；靆^有pIL-17F的級分，并在Amicon攪拌池中用lOkDa截留超濾膜濃縮所述級分，制備的級^后通過分子篩色譜進(jìn)行純化并更換緩沖液。D)分子篩緩沖液更換和制劑配制將濃縮的陽離子混合物(體積為CV的3-4%)以30cm/小時(shí)的流速注射到PharmaciaS叩erdex75分子篩柱上，所述柱已用含有109mMNaCl的50mM磷酸鈉緩沖液(pH7.2)平衡。將含有所述產(chǎn)物的對稱洗旨用含有109mMNaCl的50mM磷酸鈉緩沖液(pH7.2)稀釋至濃度為1mg/ml。最后將pIL-17F以0.2/am過濾除菌，分成等份^f^存于-80X:下。最終的加工產(chǎn)量為20%。實(shí)施例5哺乳動物可溶性IL-17RC表輛建體的構(gòu)建使用編碼IL-17RC多肽(SEQIDNO:43)的DNA片段(SEQIDNO:42)、編碼mFcl(SEQIDNO:44)的DNA片段和表達(dá)栽體pZMP20,通it重疊PCR和同源重組構(gòu)建了含有人類IL一17RC[L21-K451]"mFcl(小鼠BALB/cji2aFc)的表輛建體。通itPCR擴(kuò)增產(chǎn)生上述片段。編碼IL-17RC[L21-K451]的PCR片段包括5'端的與pZMP20載體序列的優(yōu)化的組織纖溶酶原激活物前原分泌前導(dǎo)序列編碼區(qū)域重疊的部分、編碼[L21-K451]的IL-17RCI^卜結(jié)構(gòu)域，以及3，端的與mFcl編碼區(qū)域重疊的部分。TTCCGTAGACTGGAGAGGCTTGTGGGGCCT;SEQIDNO:46]、3，絲苦酸[TGTGGGCCCTCTGGGCTCCTTGTGGATGTATTTGTC;SEQIDNO:47]和一個在之前產(chǎn)生作為;j^板的IL-17RC的DNA克隆。編碼mFcl的PCR片段包括5，端的與IL-17RC序列重疊的部分、mFcl編碼區(qū)域以及3，端的與pZMP20載體的脊MA質(zhì)炎病毒內(nèi)核糖體ii^位點(diǎn)區(qū)域重疊的部分。擴(kuò)增反應(yīng)4吏用了5，寡核苷酸[GACAAATACATCCACAAGGAGCCCAGAGGGCCCACA;SEQIDNO:48]、3，寡核苷酸和一個在^:前產(chǎn)生作為;^的mFcl的DNA克隆。PCR擴(kuò)增^Jl^如下94。C5分鐘的一個循環(huán)，(94TC1分鐘+551C2分鐘十72。C3分鐘)的35個循環(huán)，以及72。C10分鐘的一個循環(huán)。將PCR反應(yīng)產(chǎn)物混^用W的瓊脂糖凝膠進(jìn)行分離，并使用QIAquicl^GelExtraction試劑盒(Qiagen，Cat.No.28704)從WUi提取與預(yù)期大小相符的DNA片段。通過重疊PCR將兩個PCR片段連接在-^。兩個片段的^R提取物各取大約liul，通過PCR擴(kuò)增反應(yīng)連接，所述PCR擴(kuò)增反應(yīng)中使用了5，寡核苷酸[GTTTCGCTCAGCCAGGAAATCCATGCCGAGTTGAGACGCTTCCGTAGACTGGAGAGGCTTGTGGGGTTTACCCGGAGTCCGGGA;SEQIDN0:49]。^JI的PCR糾如下94。C5辨的一個循環(huán)，(94X:i^4中+55。C2^^+721C3^^中)的35個循環(huán)，以及72匸10^4中的一個循環(huán)。將PCR反應(yīng)產(chǎn)物混合物用l。/。的瓊脂糖凝膠進(jìn)行分離，并使用QIAquickGelExtraction試劑盒(Qiagen，Cat.No.28704)y^^Ji^^取與插入物大小相符的DNA片段。質(zhì)粒pZMP20為一種哺乳動物表達(dá)載體，該載體中含有一個表達(dá)盒、來自脊M質(zhì)炎病毒的內(nèi)核糖體i^^L件、在跨膜結(jié)構(gòu)域的C端截短的CD8胞外結(jié)構(gòu)域、；tM桿菌復(fù)制起點(diǎn)、哺乳動物可篩選標(biāo)^^達(dá)^Ni(包括SV40啟動子、增強(qiáng)子和復(fù)制起點(diǎn)，DHFR基因和SV40終止子)；以;Mt釀酒酵母中進(jìn)行篩選和復(fù)制所需的URA3和CEN-ARS序列，所ii4達(dá)盒中具有下i^列MPSV啟動子、用于在酵母重組之前進(jìn)行線性化的BglII位點(diǎn)、otPA信號肽序列。在將質(zhì)粒pZMP20與凝膠提取的IL-17RC[L21-K451]"DiFcl的PCR片絲酵母中進(jìn)行同源重組^^前，使用Bgin消化該質(zhì)粒。將100jil的感受態(tài)酵母(釀酒酵母)細(xì)胞與IOu1的IL-17RC[L21-K451]-mFcl插入物DNA和100ng的經(jīng)Bgln消化的pZMPM載體相混合，然后將該混#轉(zhuǎn)移至0.2cm電穿孑Uf中。對酵母/DNA^給物進(jìn)行電脈沖，^f^)的電源(BioRadLaboratories,Hercules,CA)設(shè)置為O.75kV(5kV/cm)、>ohm^25pF。向杯中加入600jul的l.2M山梨醇,然后分別將IOOjli1和300jli1等^^樣的酵母鋪于兩塊URA-D板上，并在301C下培養(yǎng)。在約72小時(shí)后，將來自一塊;fclJi的Ura+酵母轉(zhuǎn)化體重懸于lml1120中，短暫離心以沉淀酵母細(xì)胞。將細(xì)胞沉淀重懸于0.5ml的,緩沖液(2。0ritonX-100、1%SDS、100mMNaCl、10mMTris、pH8.0、1mMEDTA)中。向裝有250/al經(jīng)酸洗滌的玻璃珠和300p1苯酚-氯仿的E卯endorf管中加入500jal裂解';^^,旋渦振蕩3分鐘，在Eppendorf離心機(jī)上以最大^it離心5^^中。取300lil水相轉(zhuǎn)移至新管中，加入600ju1乙醇以沉淀DNA，然后以最大M離心30分鐘。倒出上清液并用lml的70。/。乙醇洗滌沉淀。倒出上清液并將DNA沉淀重懸于30m1含1mMEDTA的10mMTris(pH8.O)中。使用5y1酵母DNA制品和50ja1大腸桿菌細(xì)胞進(jìn)行電擊感受態(tài);^M桿菌宿主細(xì)胞(DH12S)的轉(zhuǎn)化。以2.0kV、25yF和400ohmXt細(xì)l&ii行電脈沖。在電穿孑L^，加入lmlS0C(2仰acto頂胰蛋白胨(Difco，Detroit,MI)、0.5%酵母提取物(Difco)、10mMNaCl、2.5mMKC1、10mMMgC12、10慮MgS04和20mM葡萄糖)，然后分別將50nl和200iul等^^羊的細(xì)胞鋪于兩塊LBAMP板(LB肉湯(Lennox)、1.8。/。Bacto頂瓊脂(Difco)、100邁g/L氨千青霉素)上。對用于構(gòu)建體的三種DM克隆的插入物進(jìn)行序列分析并選擇含有正確序列的一個克隆。使用市售的試劑盒(QIAGENPlasmidMega試劑盒，Qiagen，Valencia,CA)，才娥廠商的說明進(jìn)行;U!MM粒DNA的分離。實(shí)施例6表達(dá)IL-17RC-CEE、IL-17RC-CHIS和IL-17RC-CFLAG的哺乳動物可溶性IL-17RC表#建體的構(gòu)建使用編碼IL-17RC[L21-K451]的DNA片段(SEQIDNO:42)和表達(dá)載體pZMP20，通itPCR和同源重組構(gòu)建了含有人類IL-17RC[L21-K451]和C末端標(biāo)各的表^I^t體，所述C末端標(biāo)答為Glu-Glu(CEE)標(biāo)簽、六組氨酸(CHIS)標(biāo)簽或FLAG(CFLAG)絡(luò)。編碼IL-17RCCEE的PCR片段包括5，端的與pZMP20栽體序列的優(yōu)化的組織纖溶酶原激活物前原分泌前導(dǎo)序列編碼區(qū)域重疊的部分、編碼[L21-K451]的IL-17RCJ^卜結(jié)構(gòu)域，Glu-Glu標(biāo)^^序列(GluGluTyrMetProMetGlu;SEQIDNO:53),以及3，端的與pZMP20載體的^^炎病毒內(nèi)核糖^7v位點(diǎn)區(qū)域重疊的部分。PCR擴(kuò)增反應(yīng)^f吏用了5，寡核苷酸[GTTTCGCTCAGCCAGGAAATCCATGCCGAGTTGAGACGCTTCCGTAGACTGGAGAGGCTTGTGGGGCCT;SE(JIDNO:46]、3，寡TGTGGATGTATTTGTC;SEQIDNO:50]和一個在之前產(chǎn)生作為才莫板的IL-17RC的DNA克隆。PCR擴(kuò)增^JlM如下94匸5分鐘的一個循環(huán)，(94匸1分鐘+55X:2分鐘十72。C3^I中)的35個循環(huán)，以及72ri0分紳的一個循環(huán)。將PCR反應(yīng)產(chǎn)物混^^用1%的瓊脂糖凝膠進(jìn)行分離，并使用QIAquick，GelExtraction試劑盒(Qiagen，Cat.No.28704)從^MJi提取與預(yù)期大小相符的DNA片段。在將質(zhì)粒pZMP20與凝膠提取的IL-17RCCEE的PCR片段進(jìn)行酵母中的同源重組之前，使用Bgin消化該質(zhì)粒。將100nl的感受態(tài)酵母(釀酒酵母)細(xì)胞與10|a1的IL-17RCCEE插入物DM和100ng的經(jīng)Bgln消化的pZMP20載體相^給，然后將該混^轉(zhuǎn)移至0.2cm電穿；沐中。對酵母/DNA混^進(jìn)行電脈沖，使用的電源(BioRadLaboratories,Hercules,CA)的i殳置為O.75kV(5kV/cm)、coohm和25juF。向杯中加入600pl的1.2M山梨醇，然后分別將IOOn1和300p1等M樣的酵母鋪于兩塊URA-D板上，并在30。C下培養(yǎng)。在約72小時(shí)后，將來自一塊;^Ji的Ura+酵母轉(zhuǎn)化體重懸于l邁l1120中，短暫離心以沉淀酵母細(xì)胞。細(xì)胞沉淀重懸于O.5ml的fj^緩沖液(2。0ritonX-100、1%SDS、100mMNaCl、lOmMTris、pH8.0、lmMEDTA)中。向裝有250ju1經(jīng)酸洗滌的玻璃#300y1苯酚-氯仿的Eppendorf管中加入500jil裂解混合物，璇渦振蕩3分鐘，在E卯endorf離心機(jī)上以最大艦離心5^l中。取300/i17^目##至新管中，加入600pl乙醇以沉淀DNA，然后以最大轉(zhuǎn)速離心30分鐘。倒出上清液并用lml的70%乙醇洗滌沉淀。倒出上清液并將DNA沉淀重懸于30pl含lmMEDTA的IOmMTris(pH8.O)中。使用5ju1酵母DM制品和50jil大腸桿菌細(xì)胞進(jìn)行電擊感受態(tài)大腸桿菌宿主細(xì)胞(DH12S)的轉(zhuǎn)化。以2.0kV、25jaF和400ohm^細(xì)l&ii行電脈沖。在電穿孑L^，加入lmlS0C(2WBacto頂胰蛋白胨(Difco，Detroit,MI)、0.5%酵母提取物(Difco)、10mMNaCl、2.5慮KC1、10mMMgC12、10mMMgS04和20mM葡萄糖)，然后分別將50iil和200pl等M樣的細(xì)胞鋪于兩塊LBAMP板(LB肉湯(Lennox)、1.8。ydBactc^瓊脂(Difco)、100mg/L氨千青霉素)上。對用于構(gòu)建體的三種DNA克隆的插入物進(jìn)行序列分析并選擇含有正確序列的一個克隆。使用市售的試劑盒(QIAGENPlasmidMega試劑盒，Qiagen，Valencia,CA),根據(jù)廠商的說明進(jìn)行;^J^t粒DM的分離。使用與上述過程相同的過程制備帶有C末端組氨酸標(biāo)簽(組成為GlySerGlyGlyHisHisHisHisHisHis(IL-17RCCHIS;SEQIDNO:51))或C末端FLAG標(biāo)洛(組成為GlySerAspTyrLysAspAspAspAspLys(IL-17RCCFLAG;SEQIDNO:52))的IL-17RC。為制^^這些構(gòu)^體，3，寡核苷酸不4H吏用SEQIDNO:50，而是4吏用3，寡核苷酸[CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTAGTGATGGTGATGGTGATGTCCACCAGATCCCTTGTGGATGTATTTGTC;SEQIDNO:54]來產(chǎn)生IL-17RCCHIS，或4狄3，寡核苦酸[CAACCCCAGAGCTGTTTTAAGGCGCGCCTCTAGATTACTTATCATCATCATCCTTATAATCGGATCCCTTGTGGATGTATTTGTC;SEQIDNO:55]來產(chǎn)生IL-17RCCFLAG。實(shí)施例7表達(dá)IL-17RC-mFcl融合蛋白和IL-17RC-CEE、IL-17RC-CHIS和IL-17RC-CFLAGC末端標(biāo)記的蛋白的可溶性IL-17RC受體表ii^J建體的轉(zhuǎn)染和表達(dá)將三個系列的每種可溶性IL-17RC融合表達(dá)構(gòu)建體或具有標(biāo)簽的可溶性IL-17RC表糊建體^200jug分別用200單位的PvuI在37X:下消化3小時(shí)，用異丙醇沉淀并在l.5mL的Microfuge管中離心。棄去上清液得到沉淀，將沉淀用lmL的70。/。乙醇洗滌并在室溫下放置5分鐘。用Microfuge離心;l^將管以14000RPM離心10分鐘，棄去上清液得到沉淀。然后在無菌環(huán)境下將沉淀重懸于750jul的CHO細(xì)胞組織培養(yǎng)基中，在601C下培養(yǎng)30分鐘，然后冷卻至室溫。三個管中每管離心得到大約5xl(f個CH0細(xì)胞，然后將細(xì)胞用DM培養(yǎng)基溶液重懸。將DM/細(xì)胞混合物置于0.4cm內(nèi)徑(gap)的杯中，使用下列參lt進(jìn)行電穿孔950juF、高電容、300V。取出杯中物質(zhì)，〉1^,并用CHO細(xì)jf^且織培養(yǎng)基稀釋至25mL，置于125mL^fe中。然后將皿置于振蕩器上的培養(yǎng)箱中，以120RPM在37n、6。/。C02條件下培養(yǎng)。通iti^增量加入曱氨喋呤(MTX)至200nM，然后至lpM，以對CHO細(xì)胞進(jìn)行營養(yǎng)篩選。通過蛋白質(zhì)印跡確認(rèn)融合蛋白或具有標(biāo)簽的蛋白的表達(dá)，然后將CHO細(xì)l&^擴(kuò)大培養(yǎng)并)jt^于蛋白純化。實(shí)施例8可溶性IL-17RC的表達(dá)使用IL-17RC一Tbx的DNA片段和表達(dá)載體pZMP40,通過同源重組構(gòu)建含有IL-17RC-Tbx-C(Fc9)(SEQIDNO:64)的表贈粒。^JI引物zc44531和zc44545通itPCR擴(kuò)增產(chǎn)生所述片段。PCR片段IL-17RC—Tbx含有部分IL-17RC胞夕卜結(jié)構(gòu)域編碼區(qū)域，使用之前產(chǎn)生的IL-17RC克隆作為模板制備所述區(qū)域。所述片段包括5'端的與pZMP40載體序列的otPA編碼區(qū)域重疊的部分、IL-17RC區(qū)段(SEQIDNO:2的^J^酸g21至451)、連接物序列、B酶切割位點(diǎn)，以及3，端的與pZMP40栽體的Fc9編碼區(qū)重疊的部分。所用PCR擴(kuò)增^^條件如下94'C5分鐘的一個循環(huán)，(94°C1^4中+55。C2分鐘+72"C3辨)的35個循環(huán)，以及72匸10分紳的一個循環(huán)。將PCR反應(yīng)產(chǎn)物混合物用1%的瓊脂糖^^進(jìn)行分離，并使用QIAquickGelExtraction試劑盒(Qiagen，Cat.No.28704)從^MJl提取與插入物大小相符的條帶。質(zhì)粒pZMP40為一種哺乳動物表達(dá)載體，該栽體中含有一個表達(dá)盒、來自脊M質(zhì)炎病毒的內(nèi)核糖體i4^位點(diǎn)(IRES)元件和在跨膜結(jié)構(gòu)域的C端截短的CD8胞夕卜結(jié)構(gòu)域、；U^桿菌復(fù)制起泉、哺乳動物可篩選標(biāo)i汰達(dá)^i(包括SV40啟動子、增強(qiáng)子和復(fù)制起泉，DHFR基因和SV40終止子)；以及在釀酒酵母中進(jìn)行篩選和復(fù)制所需的URA3和CEN-ARS序列，所^4達(dá)盒具有MPSV啟動子、用于插入編碼序列的多個限制性酶切位點(diǎn)、otPA信號肽序列和Fc9序列。該質(zhì)粒^pZMP21質(zhì)粒(美國專利公布No.US2003/0232414Al;保藏于美國典型培#保藏中心，保藏號為ATCC并PTA-5266)構(gòu)建的。在將質(zhì)粒pZMP40與PCR片段進(jìn)^S^母中的同源重組之前，使用Bgln切割該質(zhì)粒。將100pl的感受態(tài)酵母(釀酒酵母)細(xì)胞與10pl的插入物DNA(SEQIDNO:66)和IOOng經(jīng)切割的pZMP40栽體獨(dú)立i^目混合，然后將該^^物轉(zhuǎn)移至0.2cm電穿孔杯中。對酵母/DNA混合物進(jìn)行電脈沖，使用的電源(BioRadLaboratories,Hercules,CA)的i殳置為O.75kV(5kV/cm)、《>ohm^25jaF。向杯中加入600nl的1.2M山梨醇，然后分別將100jul和300jal等^^樣的酵母鋪于兩塊URA-D板上，并在30"C下培養(yǎng)。在約72小時(shí)后，將來自一塊板上的Ura+酵母轉(zhuǎn)化體重懸于1ml1120中，短暫離心以i^定酵母細(xì)胞。將細(xì)胞沉淀重懸于0.5ml的萌緩沖液(2。/。TritonX-100、1%SDS、100mMNaCl、10mMTris、pH8.0、1mMEDTA)中。向裝有250ju1經(jīng)酸洗滌的玻璃#300p1^~氯仿的E卯endorf管中加入500yl^J^'^^,旋渦振蕩3^4中，在Eppendorf離心機(jī)上以最大轉(zhuǎn)速離心5分鐘。取300iil水相轉(zhuǎn)移至新管中，加入600pl乙醇(EtOH)以沉J定DNA,然后以最大彬t離心30分鐘。倒出上清液并用l血1的70%乙醇洗滌沉淀。倒出上清液并將DNA沉淀重懸于30jil的TE中。使用5p1酵母DM制品和50jil大腸桿菌細(xì)胞進(jìn)行電擊感受態(tài)大腸桿菌宿主細(xì)胞(DH12S)的轉(zhuǎn)化。以2.0kV、25mF和400ohm對細(xì)胞J^行電脈沖。在電穿孑L之后，加入lmlS0C(2仰acto頂胰蛋白胨(Difco，Detroit,MI)、0，5%酵母提取物(Difco)、10nMNaCl、2.5mMKC1、10nMMgC12、10nMMgS04和20mM葡萄糖)，然后分別將50jil和200Ml等^^樣的細(xì)胞鋪于兩塊LBAMP板(LB肉湯(Lennox)、1.8仰act(^瓊脂(Difco)、100mg/L氨千青霉素)上。對用于構(gòu)建體的三種DM克隆的插入物進(jìn)行序列分析，并JDt于每個構(gòu)建體選4^含有正確序列的一個克隆。使用市售的試劑盒(QIAGENPlasmidMega試劑盒，Qiagen，Valencia,CA)，根據(jù)廠商的說明進(jìn)行;t^L^t粒DNA的分離。將三個系列的IL-17RC[L21-K451]-Tbx-C(Fc9)構(gòu)建^^200Mg分別用200單位的PvuI在37lC下消化3小時(shí)，用IPA沉淀并在l.5mL的Mcrofuge管中離心。棄去上清液得到沉淀，將沉淀用lmL的70y。乙醇洗滌并在室溫下放置5分沖。在Microfuge離心機(jī)上將管以14000RPM離心10分鐘，棄去上清液得到沉淀。然后在無菌環(huán)境下將沉淀重懸于750p1的PF"CH0培養(yǎng)基中，在601C下培養(yǎng)30分鐘，然后冷卻至室溫。三個管中每管離心得到大約5xl(f個APFDXBll細(xì)胞，然后將細(xì)胞用DNA培養(yǎng)，液重懸。將DNA/細(xì)胞^^置于0.4cm內(nèi)徑的杯中，4t^1下列#|^進(jìn)行電穿孔950|aF、高電容和300V。取出杯中物質(zhì)，〉V給，并用PF-CHO培養(yǎng)基稀釋至25mL，置于125mL衞fe中。然后將,置于振蕩器上的培養(yǎng)箱中，以120RPM在37。C、6%0)2條件下培養(yǎng)。通iti^f增量加入曱氨喋呤(MTX)至200nM，然后至lmMMTX,以對細(xì)胞系進(jìn)行營養(yǎng)篩選。通過蛋白質(zhì)印跡確i^達(dá)，然后將細(xì)胞系擴(kuò)大培養(yǎng)并進(jìn)行蛋白純化。實(shí)施例9從CH0細(xì)胞純化可溶性IL-17RC使用Pel1icon-n切線流過濾系統(tǒng)，通過兩個Biomax0.1m230kD分子量截留膜盒(Millipore，Bedford,MA)，將來源于表達(dá)IL-17RC-TbX-Fc9(SEQIDNO:64)的CHO細(xì)胞的M培養(yǎng)基濃縮大約10倍。用冰乙酸將濃縮后的培養(yǎng)基的pH調(diào)節(jié)到5.5，0.2nm過濾除菌，然后通過批色鐠(batchchromatography)上樣到蛋白Gsepharosefastflow樹月旨柱上(Pharmacia,Piscataway，NJ)上，4X:下過夜。在調(diào)節(jié)好pH的糾培養(yǎng)基上樣之前，該蛋白G樹脂柱應(yīng)先用5倍柱體積(大約150ml)的平衡緩沖液(25mM乙酸鈉、150nMNaCl，pH5.5)進(jìn)^預(yù)平衡。經(jīng)i^慮且調(diào)節(jié)好pH的糾培養(yǎng)基與樹脂的比例為33:1(v/v)。在室溫條件下(大約211C)進(jìn)行批色鐠處理。將分批的經(jīng)過pH調(diào)節(jié)和0.22jam過濾的條件培養(yǎng)基倒在一個空的5.5x20.5cm的玻璃柱(BioRad，Hercules，CA)上并利用重力壓緊。將柱用10倍柱體積(大約300ml)的平M沖液(25mM乙酸鈉、150mMNaCl，pH5.5)洗滌。然后用100mM甘氨酸，pH2.7的溶糾結(jié)合的蛋白進(jìn)4tpH-aW。收集9.Oml級分并立即用l.0ml的2，OMTris，pH8.O溶液進(jìn)行中和。通itSDS-PAGE考馬斯亮藍(lán)染色對所收集的級^^行分析。將含有IL-17RC-Tbx-Fc9的級分^^,并使用5kD^^量截留Biomax膜旋轉(zhuǎn)^iil器(MUlipore，Bedford,MA)，才娥廠商的說明將混合的級分濃縮大約6倍。在4"C下，^J^7kD襯量截留膜Slide-A-Lyzer(Pierce,Rockford，IL),將^Jlt的;;^^級分用lx磷醋緩沖鹽溶液(pH7.3)(Sigma，St.Louis，M0)廣泛透析。將所得的含有IL-17RC-TbX-Fc9的lx磷酸鹽緩沖鹽溶液(pH7.3)經(jīng)過0.22jam過濾除菌，然后分裝并務(wù)賭于-80匸。實(shí)施例10IL-17A和IL-l7F與A^類IL-17RC的結(jié)合A)生物素化細(xì)胞因子與轉(zhuǎn)染細(xì)胞的結(jié)合用編碼人類IL-17受體(SEQIDNO:21)、人類IL-17RC(SEQIDN0:2)或編碼上述兩種受體的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染幼倉鼠腎(BHK)細(xì)胞，以評估它們結(jié)合生物素^A類IL-17A和人類IL-17F的能力。使用乙二胺四乙酸鈉條細(xì)胞、計(jì)數(shù)并在染色培養(yǎng)基(SM)中稀釋至10'細(xì)胞/ml，所述染色培養(yǎng)基(SM)為加入了lmg/ml牛血清清蛋白(BSA)、10mMHepes和O.1。/4疊氮鈉(w/v)的HBSS。用不同濃度的生物素化1^類11^17厶(3￡(^IDNO:14)和人類IL-17F(SEQIDNO:16)在冰上與細(xì)胞-"^培養(yǎng)30^1中。在30分鐘后，使用SM洗去過量的細(xì)胞因子，并用1:100稀釋度的鏈親和素綴合的藻紅蛋白(SA-PE),在水上與細(xì)胞-"^培養(yǎng)30^4中。洗去過量的SA-PE，使用流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞。由細(xì)胞因子染色的平均熒光強(qiáng)JL計(jì)算細(xì)胞因子結(jié)合的量。我們由上述分析發(fā)現(xiàn)，人類IL-17A以相似的程度與人類IL-17R和IL-17RC兩者結(jié)合。此外，人類IL-17F與IL-17RC結(jié)合的程度與IL-17A相似，與IL-17R結(jié)合的程度可^"測但是^i^于IL-17A。B)生物素化細(xì)胞因子與人類外周血單核細(xì)胞的結(jié)合人類外周血單核細(xì)胞(PBMC)通過聚蔗糖密度梯度離心從全血中制備。將PBMC以l(^細(xì)胞/ml的密度與ljug/ml的生物素化IL-17A或IL-17F以及針對特定細(xì)J!^面蛋白的熒光染料綴合的抗體-"^培養(yǎng)，所述抗^^皮設(shè)計(jì)用于區(qū)分不同的白細(xì)胞r潛系。這些標(biāo)記物包揪D4、CD8、CD19、CDllb、CD56和CD16。洗去過量的抗體和細(xì)胞因子，如上所iiit過與SA-PE—^^培養(yǎng)ilM^測特異性的細(xì)胞因子結(jié)合。使用流式細(xì)胞術(shù)分析樣本，我們由上述分析發(fā)現(xiàn)，人類IL-17A幾乎與所檢測的所有的PBMC類群都有結(jié)合，但是人類IL-17F不能以可檢測的程度結(jié)^f封可細(xì)胞類群。C)生物素化人類IL-17A和IL-17F與未標(biāo)記的細(xì)胞因子的特異性結(jié)合的抑制如上所述Akii行結(jié)合研究，不同的只是在結(jié)合反應(yīng)中包括了過量的未才朽己的人類IL-17A和IL-17F。在針對朋K細(xì)胞的研究中，未標(biāo)記細(xì)胞因子的量在一定濃度范圍內(nèi)變化，我們發(fā)^o入未標(biāo)記的IL-17A可以與IL-17A和IL-17F竟?fàn)幮缘亟Y(jié)合IL-17RC和IL-17R。然而，未標(biāo)記的IL-17F可以與IL-17A和IL-17F竟?fàn)幮越Y(jié)合IL-17RC,但是不能有效地與IL-17A和IL-17F竟?fàn)幮越Y(jié)合IL-17R。這說明IL-17A和IL-17F都可以與IL-17RC特異性結(jié)合，而且由于它們可以相互竟?fàn)幗Y(jié)合，因此說明它們的結(jié)合位點(diǎn)相同或者相重疊。此外，IL-17F結(jié)合IL-17R的竟?fàn)幠芰Ρ菼L-17A要弱，這說明這兩種細(xì)胞因子也是結(jié)合IL-17R的相似區(qū)域，但是IL-17F結(jié)合IL-17R的親和力要比IL-17F結(jié)合IL-17RC的親和力弱得多。D)生物素化人類IL-17A和IL-17F與可溶性IL-17RC和IL-17R的特異性結(jié)合的抑制如上所ii^進(jìn)行結(jié)合研究，不同的只是在結(jié)合反應(yīng)中包括了可溶形式的IL-17RC或IL-17R。這些可溶性受體為來源于每種受體的胞外結(jié)構(gòu)域與人類IgGl恒定(Fc)區(qū)相融合的融合蛋白。我們發(fā)現(xiàn)，可溶性IL-17RC可抑制人類IL-17A和IL-17F兩者與IL-17R和IL-17RC轉(zhuǎn)染的BHK細(xì)胞的結(jié)合。然而，可溶性IL-17R抑制IL-17A與任一種受體的結(jié)合，但并不能有效地阻斷IL-17F與IL-17RC的結(jié)合，這一結(jié)果與IL-17F對IL-17R的結(jié)合力較弱的事實(shí)相一致。實(shí)施例llIL-17A和IL-17F與IL-17RC的結(jié)合A)寸M冷配體(ColdLigand)抑制結(jié)合用hlL-17RC(SEQIDN0:2)和IL-17R(SEQIDN0:21)轉(zhuǎn)染BHK細(xì)胞，然后以40,000細(xì)胞/孔的密度將細(xì)胞在24孑L板(Costar3527)上培養(yǎng)兩天后進(jìn)行測定。分別向各孔中加入10ng/ml的通過缺珠(iodobead)法被放射性標(biāo)記的IL-17A(SEQIDN0:14)和IL-17F(SEQIDNO:16)，以及糾積至250ji1/孔的結(jié)合緩沖液(RPMI1640培養(yǎng)基(JRH51502-500M)和10mg/ml牛血清清蛋白(Gibcol5260-037))，實(shí)^i史三個平行樣。以100倍過量的摩爾量加入冷竟?fàn)幬?。檢測的竟?fàn)幬锇↖L-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E、IL—17F和IL一21。各孑ME冰上培養(yǎng)1小時(shí)，然后用PBS(Invitrogen20012-027)洗滌兩次，用高鹽溶液(l.5MNaCl、50mMHEPES，pH7.4)洗滌一次。用500/al的O.8MNa0H在室溫下4^取孔30^4中，并通過yi十?dāng)?shù)器(PackardCobraIIA5005)測量每分鐘的計(jì)數(shù)。結(jié)果表明，IOO倍摩爾量的冷IL-17A和IL-17F可以使"I標(biāo)記的IL-17A與朋KhlL-17RC的結(jié)合降低大約7倍，而IL-17B、C、D、E和IL-21對結(jié)合沒有影響。100倍摩爾量的冷IL-17A可以使^I標(biāo)記的IL-17A與B服IL-17R的結(jié)合減少大約4倍，而IL-17B、C、D、E、F和IL-21對結(jié)合沒有影響。IOO倍摩爾量的冷IL-17A和IL-17F可以使^I標(biāo)記的IL-17F與朋KhIL-l7RC的結(jié)^^^^'j降欣大約4倍和5倍，而IL-17B、C、D、E和IL-21對結(jié)合沒有影響。B)^^1可溶性受轉(zhuǎn)制結(jié)合如上部分所iiii行hzytorl4(SEQIDN0:2)和IL-17R(SEQIDN0:21)轉(zhuǎn)染的BHK細(xì)胞的結(jié)合研究，不同的是使用IOO倍過量摩爾量的可溶性hIL-17RCxl/Fc9(實(shí)施例8)和可溶性IL-17R/Fc(獲自R&D;Ref.177-IR)代替冷配體進(jìn)行竟?fàn)幗Y(jié)合。細(xì)胞的洗滌、提#計(jì)數(shù)步驟如上部分所述?？扇苄詇IL-17RC/Fc可抑制"I標(biāo)記的IL-17F與BHKhIL-17RC的結(jié)合，其IC50約為10倍過量的摩爾量(三次微的平均銜?？扇苄詇lL-17RC/Fc可抑1251標(biāo)記的IL-17A與相同細(xì)胞系的結(jié)合，其平均IC50約為20倍過量的摩爾量，可溶性IL-17R/Fc可抑制"I標(biāo)記的IL-17A,其平均IC50約為20倍過量的摩爾量。如上文中所述將轉(zhuǎn)染的B服細(xì)I&4甫于24孑U1中。加Xit射性標(biāo)記的IL-17A和IL-17F，將初始濃度為4nM的放射性標(biāo)記的IL-17A和IL-17F用結(jié)合緩沖液以1:3的比例梯度稀釋8份至濃度為1.83pM，每孑Uf^P、為250ja1,詔三個平行樣。然后分別在每個稀釋度的樣本中點(diǎn)加入lOO倍過量摩爾量的冷配體。細(xì)胞的洗滌、提^計(jì)數(shù)步驟如上文所述。通it^I^稀釋度的非竟?fàn)帬顟B(tài)的計(jì)數(shù)減去1OO倍過量時(shí)的計(jì)數(shù)，可#^分鐘的特異性結(jié)合計(jì)數(shù)相對于加入的放射性標(biāo)記配體的濃度作圖。將上ii^過標(biāo)準(zhǔn)化的數(shù)據(jù)作圖，以產(chǎn)生針對放射性標(biāo)記配體和轉(zhuǎn)染的B服細(xì)胞的^—種組合的飽和結(jié)合曲線。表7顯示了由上述全部三組實(shí)^B十，出的親和力值。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage113</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage114</column></row><table>單位點(diǎn)結(jié)合曲線擬合與IL-17A和IL-17F與IL-17R結(jié)合的特征最為接近。雙位點(diǎn)結(jié)合曲線擬合與IL-17A和IL-17F與hlL-17RC結(jié)合的特征最為接近。高親和力結(jié)合位點(diǎn)為Ji^所示的值。低親和力結(jié)合位點(diǎn)具有的親和力極低，并M三個實(shí)驗(yàn)中還有所不同。實(shí)施例12鼠類Nih3t3細(xì)胞對人類IL-17A和IL-17F的應(yīng)答A)細(xì)J^4煮^l和kzl42腺病射艮告物感染。將來源于小鼠成纖維細(xì)胞(由ATCC記載)Nih3t3的Nih3t3細(xì)胞以5000細(xì)胞/孔的密度鋪于細(xì)鵬頻包被的白色固體96孑UUi(Cat.#3917.Costar)，使用含有^J^和添加了丙酮g的DMEM/10y。FBS鋪板，并在37匸、5?；?2的條件下培養(yǎng)過夜。在第二天，移去鋪板培養(yǎng)基并且用含有谷氨,和添加了丙酮酸鹽的DMEM/l。/。FBS培養(yǎng)基制備感染復(fù)數(shù)為5000顆粒/細(xì)胞的Kzl42腺病毒顆粒，并在37'C、5。/。C02的M下培養(yǎng)過夜。B)螢光素酶測定，以測量kzl42腺病4^艮告物感染的nih3t3細(xì)胞中IL-17A和F的激活作用。在與腺病輛粒報(bào)告物培養(yǎng)過夜后，用iLjk清培養(yǎng)基(添加有0.28WBSA)準(zhǔn)備人類IL-17A和IL-17F配體的處理物。移去腺病，粒和培養(yǎng)基，并加入合適劑量的配體，設(shè)三個平行樣。然后繼續(xù)在37'C和5W:02條降下繼續(xù)培養(yǎng)4小時(shí)，之后移去培養(yǎng)基并使細(xì)胞裂解15分鐘，使用螢光素酶測定系統(tǒng)和試劑(Cat.#el531Promega.Madison，WI.)以及微量;fegL^光計(jì)測量平均熒光強(qiáng)度(MFI)。檢測濃度范圍為O.l-1000ng/ml的人類IL-17A和IL-17F的活性，得出兩種配體的EC50值約為50ng/ml。上述數(shù)據(jù)表明nih3t3細(xì)胞攜帶有上述配體的受體，并且IL-17A和IL-17F可激活NfKb/Ap-l轉(zhuǎn)錄因子。實(shí)施例13鼠類Nih3t3細(xì)Jf^達(dá)IL-17RA和IL-17RC兩者對nih3t3RNA進(jìn)行的RTPCR分析表明，這些細(xì)胞均為IL-17RA和IL-17RC陽性，這與這些細(xì)胞對人類IL-17A和IL-17F介導(dǎo)作用有nfkb/apl應(yīng)答相一致，所iiA類IL-17A和IL-17F介導(dǎo)作用是通iUi述一種或兩種受體介導(dǎo)實(shí)現(xiàn)的。RTPCRM的脅過程A)鼠類IL-17RC的PCR使用標(biāo)準(zhǔn)方法從分離自nih3t3細(xì)胞的總RNA制備第一鏈cDNA。使用hotstar聚合酶(Qiagen，Valencia,CA)根據(jù)廠商的說明進(jìn)行PCR,使用的正義引物為zc38910,5，ACGAAGCCCAGGTACCAGAAAGAG3，(SEQIDNO:56)，反義引物為zc38679，5，AAAAGCGCCGCAGCCAAGAGTAGG3,(SEQIDNO:57)，i^f亍35個循環(huán)的擴(kuò)增。瓊脂糖皿電泳顯示出預(yù)期的850bp大小的單個明顯擴(kuò)增子。B)鼠類IL-17RA的PCR使用標(biāo)準(zhǔn)方法從分離自nih3t3細(xì)胞的總RNA制備第一鏈cDNA。使用hotstar聚合酶(Qiagen，Valencia,CA)根據(jù)廠商的說明進(jìn)行PCR，^fM的正義引物為zc38520，5，CGTAAGCGGTGGCGGTTTTC3，(SEQIDNO:58),反義引物為zc38521，5，TGGGCAGGGCACAGTCACAG3，(SEQIDNO:59)，i^f亍35個循環(huán)的擴(kuò)增。瓊脂糖皿電泳顯示出預(yù)期的498bp大小的單個明顯擴(kuò)增子。實(shí)施例14表iiapl/nfkb轉(zhuǎn)錄因子的穩(wěn)定的Nih3t3測試克隆的制備4吏用含有新霉素可篩選標(biāo)記的kz142apl/nfkb才艮告物構(gòu)建體穩(wěn)定轉(zhuǎn)染如上所述的鼠類nih3t3細(xì)胞系。以克隆密度將新霉素抗性的轉(zhuǎn)染混^鋪板。使用克隆環(huán)分離克隆，^H^I人類IL-17A配體作為誘導(dǎo)物通過螢光素酶測定篩選克隆。選擇具有最高平均熒光強(qiáng)度(MFI)(通過apl/NfkB螢光素酶)和最低背景信號的克隆。篩選出了一個穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系并將其命名為nih3t3/kz142.8。實(shí)施例15使用可溶性IL-17RC和IL-17RA/FC嵌^^抑制鼠類Nih3t3細(xì)胞中的人類IL-17A和IL-17F的激活作用在螢光素酶測定中，僅^I可溶形式的IL-17RC或IL-17RA作為apl/nfkb元件^X類IL-17A和IL-17F激活的拮抗劑。這些可溶性受體是來源于每種受體的胞外結(jié)構(gòu)域與人類IgGl恒定(Fc)區(qū)相融合的融M白?？扇躀:iA類IL-17RFC融合蛋白是商購的(重組人類IL-17R/FC嵌合物，目錄號177-IR-100，R&DSystems,Inc.,Minneapolis,Mn.)。如上所i^itM^建可溶ItAJI:IL-17RCFC嵌合物(IL-17RCsR/FC9)。我們發(fā)現(xiàn)過量的IL-17RCsR/FC9和人類IL17RsR/FC嵌合物抑制人類IL-17A和IL-17F兩者介導(dǎo)的鼠類nih3t3/kzl42.8測試細(xì)胞系中的apl/nfkb激活的EC50水平。IL-17RCsR/FC9蛋白顯示出最高的拮抗IL-17F激活的效力，IL17RsR/FC嵌*顯示出最高的拮抗IL-17A激活的效力。實(shí)施例16在哞喘的鼠類;^型中IL-17FmRM上調(diào)偵月小鼠的致^氣ii^激模型來測量IL-17FmRNA7jC平。通過在第O天和第7天對各組小鼠(8至10周齡)腹膜內(nèi)注射含10pg重組屋塵螨(dermatophagoidespteronyssinus)變應(yīng)原1(DerPl)(Indoorbiotechnologies,Cardiff,UK)的50°/。ImjectAlum(Pierce)，j吏得動物凈級敏。在七天后，使用含20微克DerPl的50jilPBS對小鼠進(jìn)行連續(xù)三天(第14、15和16幻的刺激。該組為4只小鼠。陰性對照組為5只小鼠(使用磷酸緩沖鹽溶液(PBS)致敏，^H^)PBS刺'^)。還有3只小鼠是用DerPl致敏和用PBS刺激的組。在用變應(yīng)原或?qū)φ瘴锎碳ず?8小時(shí)，收集整個肺組織并分離總RNA。使用來自每一受試者的相同量的總RNA來制備第一鏈cDM。使用Qiagenhotstar聚合酶(Qiagen，Valencia,CA)才艮據(jù)廠商的i兌明進(jìn)行IL-17F的PCR。IL-17F的PCR進(jìn)行35個擴(kuò)增循環(huán)，使用的正義引物為zc46098,5，ACTTGCCATTCTGAGGGAGGTAGC3，(SEQIDNO:60)，^J)的反義引物為46099，5，CACAGGTGCAGCCAACTTTTAGGA3，(SEQIDNO:61)。為了確iL^所有受^T中模絲量都是均一的，^J1與IL-17F擴(kuò)增中相同的每種模板的量進(jìn)行P肌動蛋白的PCR。P肌動蛋白的PCR包括25個PCR循環(huán)，使用的正義引物為zc44779，5，GTGGGCCGCTCTAGGCACCA3，(SEQIDNO:62),l吏用的反義引物為zcc44776，5，CGGTTGGCCTTAGGGTTCAGGGGGG3，(SEQIDNO:63)。來自DerPl致^LBLDerpl刺激(哮喘刺劇的處ig^且中的^4只小鼠均扇^現(xiàn)出明顯的IL-17F擴(kuò)增。與此不同的是，陰性對照組中^^見察到微弱的IL-17F擴(kuò)增，所述陰性對照包括^JJ)erPl致敏/PBS刺激處理組的全部3個受^和代勤BS致敏/PBS刺激處理組的全部5個受試者。對于哞喘刺激受試者而言，P肌動蛋白擴(kuò)增的強(qiáng)度至少與陰性對照相同，i^明陰性對照中IL-17F擴(kuò)增微弱不是因?yàn)椴拍宓膯栴}。實(shí)施例17COS細(xì)胞轉(zhuǎn)染和分泌捕獲A)Cos細(xì)胞轉(zhuǎn)染和分泌捕獲測定顯示，IL-17RCsR/Fc9和IL-17F為受體/配體對使用分泌捕獲測定將人類IL-17RC(SEQIDNO:2)與人類IL-17F(SEQIDNO:16)相匹配。使用可溶性IL-17RCsR/Fc9融M白(實(shí)施例8)作為分泌測定中的結(jié)合試劑。^^有人類IL-17B、C、D、E和F的cDNA并帶有SV40復(fù)制起泉的表達(dá)載體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至COS細(xì)胞中。使用下文所述的分泌捕獲測定分析IL-17RCsR/Fc9與轉(zhuǎn)染的COS細(xì)胞的結(jié)合。僅觀察到IL-17RCsR/Fc9與人類IL-17F的陽性結(jié)合。上iiit果證實(shí)了人類IL-17RC和IL-17F為受體/配體對的這""^發(fā)現(xiàn)。B)C0S細(xì)胞的轉(zhuǎn)染按下述步驟進(jìn)行COS細(xì)胞的轉(zhuǎn)染將3p1混合的DNA和5jil的LipofectamineTM在92p1itjfc清DMEM培養(yǎng)基(500mlDMEM中含5mg丙酮酸鈉、146mgL-谷氨酰胺、5mg4^:蛋白、2.5mg胰島素、1yg脈5mg胎球蛋白)中混合，在室溫下培養(yǎng)30^4中，然后再加入400pl的iLjk清DMEM培養(yǎng)基。將500pl的上述混合物加入到每孑L鋪有l(wèi).5x1()S個C0S細(xì)胞的12孔組織培養(yǎng)板上，在37。C下培養(yǎng)5小時(shí)。加入500jal的20。/dFBSDMEM培養(yǎng)基(500mlDMEM中含100mlFBS、55mg丙酮酸鈉和146mgL-谷氨^b^)并培養(yǎng)過夜。C)分泌捕獲測定按下述步^i^行分泌捕獲測定用PBS洗去細(xì)胞上的培養(yǎng)基，然后用含l.8%甲醛的PBS固定細(xì)胞15分鐘。然后將細(xì)胞用TNT(0.1MTris-HCL、0.15MNaCl和O.05%Tween-20，溶于H20)洗滌，用含O.l%Triton-X的PBS透化15辨，再次用TNT洗滌。用TNB(0.1MTris-HCL、0.15MNaCl和0.5%封閉試劑(NENRenaissanceTSA-Direct試劑盒)，溶于H20)封閉細(xì)胞1小時(shí)，并再用TNT洗滌細(xì)胞。將細(xì)胞與ling/ml的人類IL-17RCxlsR/FC9可溶性受體融合蛋白一起培養(yǎng)l小時(shí)，然后用TNT洗滌細(xì)胞。再將細(xì)胞與l:200稀釋度的山羊抗人類Ig-服P(Fc特異性的)^-"^培養(yǎng)l小時(shí)。然后再次用TNT洗滌細(xì)胞。將熒光素酪胺(fluoresceintyramide)試劑以1:50稀釋于稀釋緩沖液(NEN試劑盒)中并與細(xì)胞-"^培養(yǎng)4-6分鐘，再用TNT洗滌，從而檢測陽性結(jié)合。將細(xì)胞用TNT以1:5稀釋并保存于VectashieldMounting培養(yǎng)基(VectorLabsBurlingame,CA)中。使用FITC濾光片在熒itE微鏡下觀察細(xì)胞。實(shí)施例18鼠類抗人類IL-17RC單克隆抗體的制備A.用于制備抗IL-17RC抗體的免疫1.可溶性IL-17RCiuFc使用25-50jug的可溶性人類IL-17RCiuFc蛋白(實(shí)施例23)與Ribi佐劑(Sigma)以l:l(v:v)混合，以隔周免疫方案對六周齡至十二周齡的正常小鼠或IL-17RC基因敲除小鼠進(jìn)行腹膜內(nèi)注射免疫。在第三M疫后七至十天，取眶后血的血樣并收集血清，用中和測定(例如，如本文所述)評估其抑制IL-17或IL-17F與IL-17RC結(jié)合的能力，并且用FACS染色測定評估其對IL-17RC轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞和未轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞的染色能力。繼續(xù)如上所i^對小鼠進(jìn)行免疫、取j6M^^估，直至中和效價(jià)達(dá)到平臺為止。此時(shí)，向具有最高中和效價(jià)的小鼠血管內(nèi)注射含25-50jug可溶ltlL-17RC-Fc蛋白的PBS。三A^，M些小鼠的脾臟和淋巴結(jié)以用于產(chǎn)生雜交瘤，雜交瘤的產(chǎn)生可以例如使用小鼠骨髓瘤(P3-X63-Ag8.653.3.12.11)細(xì)絲其^M^領(lǐng)域適合的細(xì)胞系，^HM本領(lǐng)域已知的才示準(zhǔn)方法(例如參見Kearney,J.F.etal.，JImmunol.123:1548-50，1979;和Lane，R.D.JImmunolMethods81:223-8，1985)。2.可溶性的IL-17RC:IL-17RC-CEE、IL-17RC-CHIS、IL-17RC~CFLAG^J125-50jig的可溶ltA^類IL-17RC-CEE、IL-17RC-CHIS或IL-17RC"CFLAG與Ribi佐劑(Sigma)以l:l(v:v)混合，以隔周免疫方案對六周齡至十二周齡的正常小鼠或IL-17RC基因敲除小鼠進(jìn)行,內(nèi)注射免疫。在第三次免疫后七至十天，提取眶后血的血樣并收集血清，用中和測定(例如，如本文所必評估其抑制IL-17或IL-17F與IL-17RC結(jié)合的能力，并且用FACS染色測定評估其對IL-17RC轉(zhuǎn)染的293細(xì)J^未轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞的染色能力。繼續(xù)如上所iiJ4對小鼠進(jìn)行免疫、承j6^羊^H古，直至中和效價(jià)達(dá)到平臺為止。此時(shí)，向具有最高中和效價(jià)的小鼠血管內(nèi)注射含25-50yg可溶性IL-17RC即IL-17RC"CEE、zcytor-CHIS或IL-17RC-CFLAG抗原蛋白的PBS。三天后，M些小鼠的脾臟和淋巴結(jié)以用于產(chǎn)生雜交瘤，雜交瘤的產(chǎn)生可以例如使用小鼠骨髓瘤118(P3-X63-Ag8.653.3.12.11)細(xì)絲其他本領(lǐng)域適合的細(xì)胞系，^H^I本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法(例如參見Kearney,J.F.etal.，JImmunol.123:1548-50，1979;和Lane，R.D.JImmunolMethods81:223—8，1985)。3.表達(dá)IL-17RC的P815轉(zhuǎn)染體對六周齡至十周齡的雌性DBA/2小鼠進(jìn)行皿內(nèi)注射免疫，注射lx105轉(zhuǎn)染的P815活細(xì)胞，例如P815/IL-17RC細(xì)胞(例如注射0.5ml,細(xì)胞密度為2xl()5細(xì)胞/ml)。注射前應(yīng)使細(xì)胞維持于指M長期。為用于注射，收集細(xì)胞并用PBS洗滌三次，然后以2xl()S細(xì)胞/inl的密度重懸于PBS中。在這一模型中，小鼠會在2-3周內(nèi)發(fā)生腹水瘤，如果沒有產(chǎn)生針對轉(zhuǎn)染的乾抗原的免a答，小鼠將在4-6周內(nèi)死亡。在三周內(nèi)，對于腹部沒有明顯腫脹腹水的標(biāo)志)的小鼠按照上述方法以2-3周的間隔再次免疫。在第二次免疫后七至十天，取眶后血的血樣并收集血清，用中和測定(例如，如本文所述)評估其抑制IL-17或IL-17F與IL-17或IL-17RC結(jié)合的能力，并且用FACS染色測定評估其對IL-17RC轉(zhuǎn)染的293細(xì)#未轉(zhuǎn)染的293細(xì)胞的染色能力。繼續(xù)如上所iii^小鼠進(jìn)行免疫、^#襯估，直至中和效價(jià)ii^平臺為止。此時(shí)，向具有最高中和效價(jià)的小鼠J^內(nèi)注射lxl()S轉(zhuǎn)染的P815活細(xì)胞。四A^，M些小鼠的脾臟^r淋巴結(jié)以用于產(chǎn)生雜交瘤，雜交瘤的產(chǎn)生可以例如使用小鼠骨髓瘤(P3-X63-Ag8.653.3.12.11)細(xì)絲雞本領(lǐng)^it合的細(xì)胞系，^H^I本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法(例如參見Kearney,J.F.etal.，見上文；和Lane，R.D.見上幻。另一種代替對轉(zhuǎn)染的P815活細(xì)胞進(jìn)行免疫的方法包括以每2-3周的頻率腹膜內(nèi)注射l-5xi(f經(jīng)輻照的轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在這種方法中，動物不^^發(fā)生并死于腹7K瘤。那么就要如上所述地監(jiān)測動物血清以監(jiān)測其針對IL-17RC的中和性免疫應(yīng)答，從第二次免疫后開始^j6t^進(jìn)行監(jiān)測。一旦中和效價(jià)達(dá)到最高水平，則對具有最高效價(jià)的小鼠內(nèi)注射5x106經(jīng)輻照的細(xì)胞，進(jìn)#^融合，四^,M些小鼠的脾li^淋巴結(jié)以用于產(chǎn)生雜交瘤，雜交瘤的產(chǎn)生可以例如使用小鼠骨髓瘤(P3-X63-Ag8.653.3.12.11)細(xì)l^其^ffc^領(lǐng)域適合的細(xì)胞系，本領(lǐng)域已知的標(biāo)準(zhǔn)方法(例如參見Kearney,J.F.etal.，見上文；和Lane，R.D.見上幻。B.篩選雜交瘤融合沐以獲得結(jié)合IL-17RC并抑制IL-17或IL-17F與IL-17RC結(jié)合的抗體在融合后8-10天，對雜交瘤上清液進(jìn)行三種不同的原代篩選。對于第一種測定，佳月HRP-綴合的山羊抗小鼠k和抗入輕^^二抗(secondst印reagent),通過ELISA方法，檢測上清液中抗體與結(jié)合在板上的可溶性人類IL-17RC(IL-17RC"muFc、IL-17RC-CEE、IL-17RC-CHIS或IL-17RC-CFLAG)蛋白結(jié)合的能力，以識別結(jié)合的小鼠抗體。為證實(shí)IL-17RC融M白的IL-17RC部分的特異性，就與相同的鼠類Fc區(qū)域(mG2a)、EE序列、HIS序列或FLAG序列融合的非相關(guān)蛋白，對初始測定中呈陽性的上清液進(jìn)行評估。這些上清液中與IL-17RC-融合蛋白結(jié)^a是不與含有muFc或其他蛋白的非相關(guān)融^白序列結(jié)合的抗^^皮認(rèn)為是特異性針對IL-17RC的抗體。對于第二種測定，通逝LISA對所有雜交瘤上清液中的抗體都進(jìn)#*測定，評估它們抑制生物素化人類IL-17或生物素化人類IL-17F與結(jié)合在板上的IL-17RC"muFc或IL-17RC-融合蛋白結(jié)合的能力。繼續(xù)檢測所有上清液——無論它們在ELISA測定中是否能抑制IL-17或IL-17F與IL-17RC的結(jié)合——以測試它們抑制IL-17或IL-17F與IL-17RC轉(zhuǎn)染的Baf3細(xì)胞或BHK細(xì)胞或正常人類支氣管上皮細(xì)胞的結(jié)合能力，所述上清液中含有特異性針對IL-17RC的抗體。繼續(xù)通過FACS分析評估所有在IL-17和/或IL-17F抑制測定中呈中和陽性的上清液，以評估它們對IL-17RC轉(zhuǎn)染的Baf3細(xì)胞或BHK細(xì)胞以;Sjft未轉(zhuǎn)染的Baf3細(xì)胞或BHK細(xì)胞的染色能力。設(shè)計(jì)這一分析的目的是證實(shí)對IL-17或IL-17F與IL-17RC的結(jié)合的抑制作用確實(shí)是由特異性結(jié)合IL-17RC受體的抗體產(chǎn)生的。此外，由于FACS分析中^JI抗IgG抗體作為J^,因此特異性的FACS陽性結(jié)a明該中和抗糾艮可能屬于IgG類抗體。通過上述手段識別了一個原始孔(masterwell)，該孑l^E板結(jié)合ELISA測定中可結(jié)合IL-17RC、在基于ELISA的抑制測定中可抑制IL-17或IL-17F與IL-17RC的結(jié)合、可分別阻斷IL-17和IL-17F與IL-17RC轉(zhuǎn)染Baf3細(xì)MBHK細(xì)胞的相互作用，并且在使用抗小鼠IgG二抗的IL-17RC轉(zhuǎn)染的Baf3或BHK細(xì)胞染色測定中呈強(qiáng)陽性。第三種分析中使用了表達(dá)IL-17RC并可響應(yīng)于IL-17F處理而被誘導(dǎo)分泌IL-8或IL-6的原代人類支氣管上皮細(xì)胞。測定了特異性單克隆抗體抑制IL-17或IL-17F刺'激這些細(xì)胞產(chǎn)生IL-8或IL-6的能力。如本文所述地測定了對IL-17或IL-17F應(yīng)答而產(chǎn)生的IL-8和IL-6?；蛘撸梢约言聠慰寺】贵w；抗IL-17RC介導(dǎo)的對IL-17或IL-17F誘導(dǎo)NIH3T3細(xì)M其他含有IL-17RC的細(xì)胞產(chǎn)生螢光素酶的抑制作用測定，來代替上述生物活性中和測定的一種或與上述生物活性中和測定的一種-"^使用。在NIH3T3細(xì)胞中的NFkB介導(dǎo)的螢光素酶測定在本文中^所描述。C)產(chǎn)生抗IL-17RC特異性M的雜交瘤細(xì)胞的克隆使用標(biāo)準(zhǔn)的低密度稀釋(通常少于l細(xì)胞/孔)方法來克隆產(chǎn)生特異性抗IL-17RCmAb的雜交瘤細(xì)胞系，所述特異性抗IL-17RCmAb可交叉中和IL-17和IL-17F與適當(dāng)轉(zhuǎn)染的BaF3細(xì)胞或BHK細(xì)胞的結(jié)合。在鋪板后約5-7天，通逝LISA篩選克隆，例如可以利用結(jié)合有人類IL-17R(HnuFc的板，然后再如上所ii^itELISA^t含有咖Fc的非相關(guān)融合蛋白進(jìn)行陽性孑L再測試。篩選其上清液能結(jié)合IL-17RC"muFc但是不結(jié)合含有muFc的非相關(guān)融^白的克隆，并通過重復(fù)進(jìn)行中和測定以及FACS分析進(jìn)一步確認(rèn)特異性抗體活性。將所有篩選出的IL-17RC抗體陽性克隆至少克隆兩次以確保其品系純度(clonality),并評估抗體產(chǎn)生的穩(wěn)定性。繼續(xù)如上所述J4ii行;L^克隆和篩選，直至優(yōu)g至少95。/。的所得克隆都能夠中和抗IL-17RC抗體的生產(chǎn)。D)被抗IL-17RCmAb識別的分子的生物化學(xué)表征通過標(biāo)準(zhǔn)的免疫沉淀技術(shù)以;SJSDS-PAGE分析或蛋白質(zhì)印跡方法，以生物化學(xué)手段確認(rèn)被推定的抗IL-17RCmAb識別的耙分子IL-17RC確實(shí)是IL-17RC，在上述分析中均使用了來自于IL-17RC轉(zhuǎn)染的和未轉(zhuǎn)染的Baf3細(xì)胞或BHK細(xì)胞的可溶性膜制品。此外，^JU表達(dá)IL-17RC的未轉(zhuǎn)染細(xì)胞系的可溶Iii膜制品，以顯示mAb可識別天然受體鏈以及轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。或者，測試mAb與可溶性IL-17RC"muFc蛋白進(jìn)行特異性免疫^J定或進(jìn)行蛋白質(zhì)印跡的能力。實(shí)施例19^/v類IL-17RC轉(zhuǎn)染的P815細(xì)胞注射小鼠，并使用來源于該小鼠的血清中和人類IL-17RC使用基于細(xì)胞的中和測定，將來自經(jīng)人類IL-17RC轉(zhuǎn)染的活P815細(xì)胞(實(shí)施例17)注射的小鼠的血清進(jìn)行系列稀釋，稀釋后的濃度為1。/。、0.5%、0.25%、0.13%、0.06%、0.03%、0.02%和0%。將測定絲371C、5。/。C02糾下培養(yǎng)4天，然后以20|i1/孔加A^AlamarBlue(Accumed,Chicago,IL)試劑。將測定^1再在37X:、5。/。C02務(wù)降下培養(yǎng)16小時(shí)。結(jié)果顯示，來自四只動物的血清可通it^類IL-17RC中和人類IL-17和人類IL-17F的信號傳導(dǎo)。上述的結(jié)果提供了進(jìn)一步的證拾汪明，例如通it^發(fā)明的抗IL-17RC中和性單克隆抗體，通過結(jié)合、阻斷、抑制、減少、拮抗或中和IL-17或IL-17F活性(單獨(dú)M共同地)，可以有^i也阻斷IL-17RC，這樣可有利地l^f氐體內(nèi)IL-17和IL-17F的作用(單獨(dú)地或共同地)，并可以減輕由IL-17和/或IL-17F誘導(dǎo)的炎癥，例如，在例如下述的疾病中觀察到的炎癥銀屑病、IBD、結(jié)腸炎、慢性阻塞'M病、嚢性纖維化病，或者務(wù)他由IL-17和/或IL-17F誘導(dǎo)的炎性疾病，包括IBD、關(guān)節(jié)炎、哞喘、#^病關(guān)節(jié)炎、結(jié)腸炎、炎性皮膚病和特應(yīng)性皮炎。實(shí)施例20M類IL-l7RC單克隆抗體的藥物代謝動力學(xué)將待測的單克隆抗體一^A類IL-17RCmAb分裝為例如3x3mL的等^^樣，濃度為大約lmg/mL(通過280nM處的UV吸收測幻^^存于-801C直至使用。載體為lxPBS(50mMNaP04、109mMNaCl)，pH7.3。在用前將mAb在室溫下融化，并將試樣l和2分別用于100yg的IV和SC劑量組。將試樣3的一半用1XPBS以l:2稀釋以用于50jig的SC劑量組，將逸f羊3的另一半用lXPBS以l:IO稀釋以用于10jag的SC劑量組。雌性SCID小鼠(n-96)獲自CharlesRiverLabs。在^'J動物后確認(rèn)其M狀況，并^M飼養(yǎng)(每籠中3只動物)。開始研究時(shí)，小鼠達(dá)到12周齡，平均體重為大約22g。A)給藥方案將雌性SCID小鼠隨機(jī)分為四個劑量組(^iJ量^Li^24)(表8)。第1組通#尾靜脈IV注射約93p1給予^A類IL-17RCmAb，第2、3和4組通錄頸背SC注射約93iil給予^A類IL-17RCmAb。B)樣本采集在^jk前將小鼠用1^或異lL^充分^"。在各時(shí)間點(diǎn)(除168小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)"卜)通過心臟穿刺采集血樣，在168小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)通過眼部^bfe采血(同一只動物在504小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)通過心臟穿刺再次^b6L)。將血樣收集于血清分離管中并》15^1中使絲結(jié)。然后將樣本以14000rpm離心3^4中。在離心后，將樣本分為125-150juL的等份分裝在標(biāo)記好的印pendorf管中，并立即儲存于-80X:直至^^斤時(shí)。表8<table>tableseeoriginaldocumentpage122</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage123</column></row><table>*在168小時(shí)和504小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)^吏用相同的動物。C)通itELIS塒血清中^A類IL-17RCmAb的濃度進(jìn)4亍定量在藥物代i綠力學(xué)研究中使用酶M疫吸附測定(ELISA)，以定量分析來自給予過抗IL-17RCmAb的動物的小鼠血清樣本。這一測定的設(shè)計(jì)利用了市售的二抗和TMB比色檢測。對用于標(biāo)準(zhǔn)曲線的稀釋度進(jìn)行了改變，以改進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性部分的清晰度。佳月濃度范圍為IOOng/mL至0.231ng/mL的二倍稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線，可以對小鼠血清樣^ii行定量測定。將Q沐本用10。/。的SCID小lUk'}^#釋100倍、1000倍和10000倍，并根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行回復(fù)計(jì)算。D)藥物^il^力學(xué)分沖斤將血清濃度對時(shí)間的數(shù)據(jù)下載至WinNonlinProfessional4.0軟件(Pharsight,Inc.;Cary，NC)中以進(jìn)行藥物代謝動力學(xué)分析。使用無房室分析，基于每一時(shí)間點(diǎn)的平均數(shù)據(jù)確定藥物代謝動力學(xué)^L實(shí)施例21用抗人類IL-17RC單克隆抗體中和IL-17A和IL-17F的活性使用基于細(xì)胞的中和測定，將純化的小鼠M類IL-17RC單克隆抗體進(jìn)行連續(xù)稀釋后加入，例如稀釋后的濃度為10pg/ml、5|ig/ml、2.5jng/ml、1.25pg/ml、625ng/ml、313ng/ml、56ng/ml和78ng/ml。將測定絲37。C、5%C02^f^下培養(yǎng)4天，然后以20p1/孑L加入AlamarBlue(Accumed，Chicago,IL)試劑。將測定板再在37t:、5y。C02條件下培養(yǎng)16小時(shí)。這一測定的結(jié)果可以證明，純化的抗A^類IL-17RC單克隆抗體可通itA類IL-17RC中和人類IL-17和人類IL-17F的信號傳導(dǎo)。對于高效抗體而言，在以約10pg/ml的濃度使用時(shí)，抗體可以完全中和由人類IL-17或人類IL-17F誘導(dǎo)的增殖，而JL^^^氐濃度時(shí)增殖的抑制以劑量依賴性方式下降。以上述濃度對同種型匹配的陰性對照小鼠mAb進(jìn)行了測試，如預(yù)期的一樣沒有產(chǎn)生對^^種細(xì)胞因子誘導(dǎo)的增殖的抑制。上述結(jié)果可以進(jìn)一步證實(shí)，針對IL-17RC的單克隆抗體在低濃度時(shí)就確實(shí)可以拮抗促炎性配體IL-17和IL-17F的活性。實(shí)施例22IL-17A誘導(dǎo)IFN-y和TNF-a在人類外周#核細(xì)胞中7JC平的升高通過聚蔗糖密度梯度離心純4^A類外周血單核細(xì)胞(PBMC)，并在371c下將它們單純用培養(yǎng)M養(yǎng)、或與50ng/ml^A類CD3抗體-"^培養(yǎng)或與50ng/ml:feA^類CD3抗體加上l□g/ml抗人類CD28抗體的組^^"^培養(yǎng)。建立了用于上述每種培養(yǎng)條件的復(fù)制培養(yǎng)物并且在培養(yǎng)物中加入細(xì)胞因子、加入25ng/ml人類IL-17A或加入25ng/ml人類IL-17F的糾。在培養(yǎng)24小時(shí)后，收集每種培養(yǎng)物的上清液，并^J^JB-DBioscience，s人類Thl/Th2細(xì)胞計(jì)數(shù)孩姊陣列(CBA)測定細(xì)胞因子含量。我們發(fā)現(xiàn)培^;可被抗CD3抗體或抗CD3抗體+抗CD28抗體刺激，并且添加IL-17A的培養(yǎng)物與不加入細(xì)胞因子或加入IL-17F的培養(yǎng)物相比，IFN-y和TNF-oc的水平顯著提高(每種提高3-5倍)。^入抗CD3抗體刺激的培^;沒有顯示出細(xì)胞因子水平的明顯改變。此外，使用CBA測定iL現(xiàn)，加入IL-17A并未誘導(dǎo)其他細(xì)胞因子(包括IL-2、IL-4、IL-5和IL-10)7jC平明顯改變。上述結(jié)果表明IL-17A而非IL-17F能夠增加抗CD3抗體或抗CD3抗體+抗CD28抗體刺激的PBMCJt養(yǎng)物中IFN-y和TNF-oc的產(chǎn)生。實(shí)施例23IL-17RC-Fc在小鼠IL^誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)模型中降低疾病的發(fā)病率并減緩疾病進(jìn)程A)小鼠M^、誘導(dǎo)的關(guān)節(jié)炎(CIA)模型將十周齡的雄性DBA/1J小鼠(JacksonLabs)分為3組，每組13只小鼠。在第21天，在動物yC部皮內(nèi)注射50-100pl用弗氏完全佐劑配制的lmg/ml雞n型^^、(由Chondrex，Redmond,WA生產(chǎn))，三周后(第0天)再次進(jìn)行注射，只是這一次4吏用弗氏不完全佐劑。從第0天開始在不同的時(shí)間點(diǎn)通1±內(nèi)注射給予IL-17RC-Fc，每周3次，共給予4周，直至大部分小鼠表現(xiàn)出中等程度的疾病癥狀。對每只動物給予每次劑量為10或100jag的IL-17RC-Fc，對對照組動物給予載體對照物PBS(LifeTechnologies,Rockville，MD)。在第二:^^f注射后動物開始表現(xiàn)出關(guān)節(jié)炎癥狀，大多數(shù)動物在1.5周至3周內(nèi)發(fā)生炎癥。疾病的程度按下述方式評估使用測徑器測量足爪厚度，并對每只足爪進(jìn)行臨床評分(0-3):0=正常、0.5-足尖發(fā)炎、l-輕H爪炎癥、2-中^t爪炎癥、3=重度足爪炎癥，詳見下文。B)監(jiān)測疾病在第二^M^注射后不久動物就可能開始表現(xiàn)出足爪炎癥的指征，甚至一些動物在第二次M^、注射之前^J見出足尖炎癥的指征。大多數(shù)動物在加強(qiáng)注射后1.5周至3周內(nèi)發(fā)生關(guān)節(jié)炎，但也有些動物可能需要更長的時(shí)間才發(fā)病。這一模型中疾病的發(fā)病率通常為95-100%,也就是ij^使用40只動物的研究中，通常有0-2只動物沒有A^(通過6周的觀蕃后確幻。注意到在炎癥開始時(shí)，通常會出現(xiàn)短期的低等M^爪炎癥或足尖炎癥的現(xiàn)象。因此，在發(fā)生明顯的持續(xù)的后足腫脹之前并不認(rèn)為動物確實(shí)具有疾病。每^t所有動物進(jìn)行觀察，并通it^"每只足爪進(jìn)行定性臨床評分來評估它們足爪疾病的狀態(tài)。每天根據(jù)其臨床疾病狀態(tài)對每只動物的4只足;lU^iSf分。為確定臨床評分，可將足爪分為3個區(qū)域足尖、足;f^身(前足(manus)或后足(pes))和腕關(guān)節(jié)或踝關(guān)節(jié)。觀察相對于上述區(qū)域的炎癥范圍和嚴(yán)重程度，包括觀察每只足尖的肺脹；趾曱撕M足尖發(fā)紅；注意任一足爪中7jc腫或發(fā)紅的^^f表現(xiàn)；注意肌^^或骨的良好解剖學(xué)分界的任何缺失；評估腕關(guān)節(jié)或踝關(guān)節(jié)的^f可水腫或發(fā)紅；以及注意炎癥是否向Ji^伸到附近的腿部。1、2或3的足爪評分首先是基于嚴(yán)重程度的總體印象，其次U于炎癥涉及了多少區(qū)域。臨床評分的標(biāo)準(zhǔn)示于下文。C)臨床評分0=正常0.5=炎癥涉及一個或多個足尖，但是只有足尖發(fā)炎1=輕度炎癥，涉狀爪(1個區(qū)^)，并可能包括一個或多個足尖2=足爪中度炎癥，并可包括4分足尖和/或腕/踝關(guān)節(jié)(2個區(qū)銜3=足爪、腕/踝關(guān)節(jié)和部分或全部足尖重度炎癥(3個區(qū)銜。當(dāng)足爪炎癥的定性評分為2分或更高并在持續(xù)存在兩天時(shí)，就被定義為確實(shí)患有疾病。一旦確認(rèn)患有疾病，則記錄當(dāng)天的日期并將其4^名為該動物"確實(shí)患有疾病，，的第一天。在實(shí)驗(yàn)全程中采集血液以監(jiān)測抗^^抗體的血清水平和免疫球蛋白和細(xì)胞因子的血清水平。血清抗^^、抗體與疾病的嚴(yán)重程度有明顯的相關(guān)性。在第21天處死動物并采集血液以:^得血清和CBC。對于每只動物，取^一只患病的足爪置于10。/。NBF用于組織學(xué)研究，再取一只足爪置于液氮中冷凍M存于-801C用于mRNA分析。另夕卜，取l/2的脾臟、1/2的胸腺、1/2的腸系膜淋巴結(jié)、一片肝葉和左腎置于RNAlater中用于RNA分析，將另外的l/2的脾臟、1/2的胸腺、1/2的腸系膜淋巴結(jié)、剩余肝部^右腎置于10。yiNBF中用于組織學(xué)研究。收集血清并凍存于-80t:用于免疫球蛋白和細(xì)胞因子測定。在所有時(shí)間點(diǎn)接受了IL-17RC-Fc的小鼠組具有足爪炎癥發(fā)病晚和/或進(jìn)程慢的特征。這些結(jié)a明，IL-17RC可以,與這一模型相關(guān)的炎癥以及降低疾病發(fā)病率并緩解疾病進(jìn)程。IL-17RC-Fc使血清中TNFoc、IL-lb和抗^^M的水平下降的觀察結(jié)果進(jìn)一步支持了上述結(jié)論。實(shí)施例24IL-17RC在表iiapl/nfkb轉(zhuǎn)錄因子的鼠類測定細(xì)胞系Nih3t3/kz142.8中的穩(wěn)定狄達(dá)使用含有人類IL-17RCxl(SEQIDNO:2)和曱氨喋呤抗性基因(二氬葉酸還原酶，DHFR)的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染鼠類nih3t3/kzl42.8測定細(xì)胞系。佳月市售的試劑盒(Mirus，Madison，WI.Cat.湖IR218)并根據(jù)廠商的說明進(jìn)行上述轉(zhuǎn)染。將細(xì)胞置于添加有l(wèi)yMmtx的生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以針對含有A^類IL-17RCxl轉(zhuǎn)基因的表達(dá)載體進(jìn)行篩選。在篩i^得到人類IL-17RCxl轉(zhuǎn)染^^,并將其^^名為nih3t3/kz142.8/hcytorl4xl。A)佳月nih3t3/kz142.8測定細(xì)胞系ij^亍螢光素酶測定由于nih3t3/kz142.8具有穩(wěn)定的kzl42凈艮告物，因此無需使用腺病毒感染^入這一報(bào)告物。這樣就簡化了螢光素酶的測定步驟，具體的測定步^如下1.細(xì)麵板將nih3t3/kz142.8細(xì)胞以5000細(xì)胞/孔的密度鋪于細(xì)|^#^包被的白色固體96孑UUi(Cat.#3917.Costar)，^^l含有錄縱和添加了丙酮醋的DMEM/10y。FBS鋪板，在37"C、5%0)2的條件下培養(yǎng)過夜。在第二天，移去鋪板培養(yǎng)基，更換為含有谷氨,和添加了丙酮酸鹽的DMEM/l"XiFBS培養(yǎng)基，并在37*C、5。/。C02的M下培養(yǎng)it夜。2.螢光素酶測定，以測量IL-17A和F對穩(wěn)定的kzl42報(bào)告物的激活在用D腿/:WFBS培養(yǎng)躲養(yǎng)過絲，用無血清培養(yǎng)基(添加有0.28%BSA)稀^v^類IL-17A和IL-17F配體。在加入配^#釋液后將細(xì)胞在37匸和5。/。C02條件下培養(yǎng)4小時(shí)，然后移去培養(yǎng)基^H吏細(xì)胞裂解15分鐘，佳月螢光素酶測定系統(tǒng)和試劑(CatJe1531Promega.Madison,WI.)和微量;fegLl^計(jì)測量平均熒光強(qiáng)度(MFI)。檢測濃度范圍為0.1-1000ng/ml的兩種配體的活性。nih3t3/kz142.8/hcytorl4xl轉(zhuǎn)染混^表現(xiàn)出的對于鼠類IL-17A配體的活性與母細(xì)胞系相似(實(shí)施例14)。然而，cytorl4xl轉(zhuǎn)染體^^表現(xiàn)出增高的對于人類IL-17A和F處理的應(yīng)答性，甚至即使在上述配體濃度低至20飛克時(shí)狄上述作用。mlL-17A的信號傳導(dǎo)與母細(xì)胞系(實(shí)施例14)相似這一事實(shí)表明，表iiA類IL-17RC的細(xì)胞并沒有常見的非特異性問題，而且鼠類IL-17A很可能是通過內(nèi)源性鼠類nih3t3細(xì)胞的IL-17R或IL-17RC受體進(jìn)行信號傳導(dǎo)的。因此，人類IL-17A和IL-17F在如此低的配體濃度下導(dǎo)致MFI提高的這一事實(shí)可能表明，細(xì)m于那些配體具有特異性的高應(yīng)答性，這是通過狄達(dá)的人類IL-17RC受體介導(dǎo)的。這一結(jié)果具有重要的臨床和生物學(xué)方面的意義和應(yīng)用。例如，生理環(huán)境可能導(dǎo)致IL-17RC受體局部上調(diào)，而這^^吏得該區(qū)域?qū)τ贗L-17A和IL-17F有高應(yīng)答性，從而導(dǎo)致在配體濃度非常低時(shí)產(chǎn)生生物激活，該配體濃度比沒有IL-17RCit^達(dá)時(shí)所推測的配體濃度低得多。因此，僅需要極低的可溶性受體水平:tm以拮抗上述假設(shè)的較低的配體濃度，這種極低的可溶I"生受體7jc平比本領(lǐng)域技術(shù)人員以前i人為的或/》4人的水平^f^f多。實(shí)施例25IL-17F和IL-17A活性的拮抗劑降低炎'l!iJ^病(IBD)模型的疾病發(fā)病率并減緩疾病進(jìn)程這一模型被設(shè)計(jì)為顯示來自患有IBD的患者的培養(yǎng)的腸組織所產(chǎn)生的炎性介質(zhì)的7K平要高于與來自tt對照者的組織。這種升高的炎性介質(zhì)(包括但不限于IL-lb、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17A和F、IL-18、IL-23、TNF-a、IFN-g、MIP家;^員、MCP-1、G-和GM-CSF等等)水平通過它們激活炎性途徑和下游效應(yīng)細(xì)胞的作用加重了與IBD例如克隆病(CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(UC)相關(guān)的癥狀和病理。上iiit徑和組分則可導(dǎo)致在體內(nèi)觀瘵到的組織和細(xì)l^員傷/破壞。因此，這一模型可銜以IBD的炎性介質(zhì)升高的特征。而且，M在上述炎性組分的條件下培養(yǎng)來自At對照者或來自人類腸上皮細(xì)胞(IEC)細(xì)胞系的腸組織時(shí)，可以觀察炎性途徑的信號傳導(dǎo)以及組織和細(xì)胞損傷的跡象?？赡茉隗w內(nèi)對人類IBD有效的療法也應(yīng)該能通過抑制和/或中和炎性介質(zhì)的產(chǎn)生和/或存在而在上述的離體或IEC^莫型中起作用。在該模型中，從經(jīng)歷腸組織活^再切片的tt對照者或IBD患者身上，或從死后的尸體組織中采集人類腸組織并使用改進(jìn)的Alexakisetal(Gut53:85-90;2004)的方法對采集的組織進(jìn)行處理。在無菌M下^^1大量的PBS小心地清潔樣本，然后^^J完全組織培養(yǎng)基(加入抗生素以抑制細(xì)菌it^長)培養(yǎng)組織碎片。對來自相同的組織碎片^^的樣本分別用下述物質(zhì)處理載體(PBS);重纟^aA類(rh)IL-17A;rhlL-17F;或rhlL-17A+rhlL-17F。jtt^卜，還對上述樣本分別佳月或不佳^JIL-17A或IL-17F的拮抗劑進(jìn)行處理，所述拮抗劑為單一拮抗劑或聯(lián)合抬抗劑(例如可溶性IL-17RC)。同樣按照這一實(shí)驗(yàn)過絲行人類iEc細(xì)胞系的研究，只是^^m^r的細(xì)胞儲液直接進(jìn)行細(xì)胞傳代。在不同的培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)(從l小時(shí)至幾力，分別收集上清液并分析其中炎性介質(zhì)(包括上述的炎性介質(zhì))的7JC平。來自IBD患者的樣M使用rhlL-17A和/或F處理的樣本與^Mt理的M對照組織樣^目比，其中的炎性細(xì)胞因子和趨化因子7JC平升高。加入IL-17F和/或IL-17A活性拮抗劑(例如IL-17RC的可溶性受體和抗IL-17RC抗體，包括本發(fā)明的^A類IL-17RC單克隆和中和抗體)顯著降低了炎性介質(zhì)的產(chǎn)生，因此，可預(yù)期它們能有效治療人類IBD。實(shí)施例26IL-17F和IL-17A活性的拮抗劑降低多發(fā)'1^更化(MS)模型的疾病發(fā)病率并減緩疾病進(jìn)程多發(fā)'W更化(MS)是一種被認(rèn)為由多種因素介導(dǎo)的復(fù)雜的疾病，所述因素包括存在淋巴細(xì)^p單核細(xì)胞的炎性浸潤和整個CNS的脫髓鞘作用。小M細(xì)胞是存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的巨喧細(xì)胞樣細(xì)胞，它在損傷或感染時(shí)^^活。小M細(xì)I^各種CNS疾病包:^MS中起重要作用，并可，于研究疾病的發(fā)生、;^^和治療機(jī)制(Nagaietal.NeurobiolDis8:1057-1068;2001;Olsonetal.JNeurosciMethods128:33-43;2003)。因此，可以4吏用永生4認(rèn)類小細(xì)胞系和/或已有的人類星形膠質(zhì)細(xì)胞系來研究炎性介質(zhì)對這些細(xì)胞類型的一些作用以及它們的中和能力。炎性介質(zhì)(包括但不限于IL-lb、IL-6、IL-8、IL-12、IL—13、IL-15、IL—17A和F、IL-18、IL—23、TNF-a、IFN-g、MIP家族成員、RANTES、IP-IO、MCP-1、G-和GM-CSF等等)可通過它們激活炎性途徑和下游效應(yīng)細(xì)胞的作用iM口重與MS相關(guān)的癥狀和病理。為評估IL-17A和IL-17F的促炎作用和IL-17F和/或IL-17A活性拮抗劑(例如IL-17RC的可溶性受體和抗IL-17RC抗體，包括本發(fā)明的^A類IL-17RC單克隆和中和抗體)中和或減輕這些作用的能力，分別用下述一種物質(zhì)處理培養(yǎng)的膠質(zhì)細(xì)胞載體；rhlL-17A;rhIL-17F;rhlL-17A+rhlL-17F。此外，還對上述培養(yǎng)細(xì)胞^^I或不^^IL-17A或IL-17F的拮抗劑進(jìn)行處理，所述拮抗劑為單一拮抗劑或聯(lián)合拮抗劑(例如可溶性IL-17RC)。在不同的培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)(從l小時(shí)至幾天)，分別收集上清液和細(xì)胞并分析其中炎性介質(zhì)(包括上述的炎性介質(zhì))的水平和/或表達(dá)。存在rhlL-17A和/或IL-17F的培養(yǎng)物與僅用載體處理的培養(yǎng)物相比，炎性細(xì)胞因子和趨化因子的7JC平升高。加入IL-17F和/或IL-17A活性拮抗劑(例如IL-17RC的可溶性受體和抗IL-17RC抗體，包括本發(fā)明的^A類IL-17RC單克隆和中和抗體)顯著降低了炎性介質(zhì)的產(chǎn)生和表達(dá)，因此，可預(yù)期它們能有效治療人類MS相關(guān)的炎性癥狀。實(shí)施例27IL-17F和IL-17A活性的拮抗劑降低類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)和骨關(guān)節(jié)炎(0A)模型的疾病發(fā)病率并減緩疾病進(jìn)程這一模型被設(shè)計(jì)為顯示來自患有RA和OA的患者的人類滑液培養(yǎng)物(包括滑液巨噬細(xì)胞、滑液成纖維細(xì)胞和關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞)和外植物所產(chǎn)生的炎性^h質(zhì)的水平要高于與來自M對照者的培養(yǎng)物/外植物。這種升高的炎性介質(zhì)(包括但不限于制瘤素M、IL-lb、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17A和F、IL-18、IL-23、TNF-a、IFN-g、IP-IO、RANTES、RANKL、MIP家;^員、MCP-1、G-和GM-CSF、一氧化氮等等)7jc平通過它們激活炎性途徑和下游效應(yīng)細(xì)胞的作用加重了與RA和OM目關(guān)的癥狀和病理。這些途徑和組分則可導(dǎo)致炎性浸潤、軟骨和基質(zhì)丟失/破壞、骨丟失以及前列腺素和環(huán)氧化酶的上調(diào)。因此，這一模型可在體外或離體實(shí)驗(yàn)中模擬RA和OA的破壞性炎性特征。而且，^在上述一些炎性組分(例如制瘤素M、TNF-a、IL-lb、IL-6、IL-17A和F、IL-15等等)的糾下培養(yǎng)來自對照者的夕卜植物和滑液培養(yǎng)物時(shí)，可以觀察炎性途徑的信號傳導(dǎo)?？赡茉隗w內(nèi)對人類M有效的療法也應(yīng)該能通過抑制和/或中和炎性介質(zhì)的產(chǎn)生和/或存在而在上述的體外或離體模型中起作用。在該模型中，從經(jīng)歷關(guān)節(jié)置換的W^照者或RA或OA患者身上，或;^EJ^的尸體組織中采集人類滑液外植物，并使用改進(jìn)的WooleyandTetlow(ArthritisRes2:65-70;2000)和van'tHof等(Rheumatology39:1004-1008;2000)的方法對夕卜植物進(jìn)行處理。還研究了滑M纖維細(xì)胞、滑液巨噬細(xì)胞和關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)物。對復(fù)制樣本分別用下述一種物質(zhì)處理載體(PBS);重纟^RA類(rh)IL-17A;rhIL-17F;或rhlL-17A+rhlL-17F，還有一些樣本中含有了制瘤素M、TNF-a、IL-lb、IL-6、IL-17A、IL-17F和IL-15的不同組合。此外，還對上述樣本分別^^1或不使用IL-17A和/或IL-17F活性的拮抗劑(例如IL-17RC的可溶性受體和抗IL-17RC抗體，包括本發(fā)明的^A類IL-17RC單克隆和中和抗體)進(jìn)行處理。在不同的培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)(從1小時(shí)至幾A)，分別收集上清液并分析其中炎性介質(zhì)(包括上述的炎性介質(zhì))的水平。來自RA或OA患者的樣本或使用rhlL-17A和/或F處理(單獨(dú)處理或與其他炎性細(xì)胞因子一起處理)的樣本中，與未處理的^JJ葉照夕卜植物或^M:理的細(xì)皿絲相比，其中的炎性細(xì)胞因子和趨化因子水平升高。加入IL-17F和/或IL-17A活性拮抗劑(例如IL-17RC的可溶性受體和抗IL-17RC抗體，包括本發(fā)明的狀類IL-17RC單克隆和中和抗體)顯著降低了炎性介質(zhì)的產(chǎn)生，因此，可預(yù)期它們能有效治療人類RA和0A。實(shí)施例28IL-17A和IL-17F的功能性應(yīng)答^J^I人類IL-17RCxl(SEQIDNO:1)和小鼠IL-17RCxl(SEQIDN0:25)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染NIH-3T3/KZ142細(xì)胞。如上所述，佳月IL-17A、IL-17F、鼠類IL-17F和合適地對照對每種細(xì)胞系進(jìn)行劑量應(yīng)答處理，處理7分鐘和15分鐘。當(dāng)使用IL-17RCxl(SEQIDNO:l)轉(zhuǎn)染時(shí)，IL-17A和IL-17F對磷酸化IkB-oc和p38MAPK轉(zhuǎn)錄因子產(chǎn)生劑量性應(yīng)答，這比對照細(xì)胞系中固有信號傳導(dǎo)高大約30%。當(dāng)使用鼠類IL-17RCxl(SEQIDN0:25)轉(zhuǎn)染時(shí)，IL-17A和IL-17F不能使信號傳導(dǎo)增強(qiáng)。鼠類IL-17F不能4t^類或鼠類IL-17RCxl的信號傳導(dǎo)增強(qiáng).實(shí)施例29鼠類疾病模型中IL-17A、IL-17F、IL-17RA和IL-17RC的表達(dá)4吏用4十對IL-17A、IL-17F、IL-17R和IL-17RC表達(dá)的已知技術(shù)，分析了四種疾病(哮喘、DSS結(jié)腸炎、特應(yīng)性皮炎和實(shí)驗(yàn)Iii變應(yīng)性腦WJO的鼠類模型。在哮喘模型中，IL-17A和IL-17F在患病和未患病小鼠的肺、脾臟、肺引流淋巴結(jié)和肺浸潤細(xì)胞中的表達(dá)均低到了不負(fù)嫩測的水平。發(fā)現(xiàn)IL-17RC信使RNA在肺中的表達(dá)比在脾臟和淋巴結(jié)中高，但該表達(dá)水平并不受疾病的調(diào)節(jié)。IL-17R在脾J3i^肺引流淋巴結(jié)中的表達(dá)比在肺中高，但j亥表i^7jc平也不受疾病的調(diào)節(jié)。與哮喘才莫型不同，在DSS結(jié)腸炎模型中，患病小鼠的近端和遠(yuǎn)端結(jié)腸中IL-17A和IL-17F的水平均上調(diào)，但在正常小鼠中并沒有這種上調(diào)。在腸系膜淋巴結(jié)中這兩種細(xì)胞因子均未明顯上調(diào)。jtwh還發(fā)現(xiàn)這兩種細(xì)胞因子在急性的DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎環(huán)境中上調(diào)，而在慢性的DSS誘導(dǎo)結(jié)腸炎中則沒有上調(diào)。發(fā)現(xiàn)IL-17球腸系膜淋巴結(jié)中的表達(dá)比在近端和遠(yuǎn)端結(jié)腸中的表達(dá)高，但該表ii7JC平并不受疾病的調(diào)節(jié)。相反地，IL-17RC在近端和遠(yuǎn)端結(jié)腸組織中的表達(dá)比在腸系膜淋巴結(jié)中的表達(dá)高。IL-17RC的表ii^K平也不受疾病的調(diào)節(jié)。在特應(yīng)性皮炎中，不能檢測到IL-17AmRNA。發(fā)現(xiàn)IL-17F在皮J^和皮膚引流淋巴結(jié)中表達(dá)，但是表i^7K平似乎并不明顯受疾病的調(diào)節(jié)。IL-17RmRNA^E皮膚引流淋巴結(jié)中的表達(dá)比在皮膚中高，但該表達(dá)水平并不受疾病的調(diào)節(jié)。IL-17RC在皮膚中的表達(dá)比在皮膚引流淋巴結(jié)中高，但該表ii7JC平也不受疾病的調(diào)節(jié)。在實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性腦械炎模型中，患病小鼠的械中IL-17A和IL-17F的水平似乎均上調(diào)，但在他泉小鼠中并沒有這種上調(diào)。IL-17F在淋巴結(jié)中的表達(dá)比在，中高，但是淋巴結(jié)中的表ii7K平并不受疾病的調(diào)節(jié)。然而，在這些組織中總體的表ii7K平都是非常低的。IL-17R在淋巴結(jié)組織中的表達(dá)比在腦和，中高。未測試IL-17RC。簡而言之，在DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎環(huán)境中和實(shí)驗(yàn)性變應(yīng)性腦脊髓炎模型中，IL-17A和IL-17F的表達(dá)似乎受疾病的調(diào)節(jié)，但是在哮喘或特應(yīng)性皮炎中IL-17A和IL-17F的表達(dá)并不明顯受疾病的調(diào)節(jié)。IL-17R和IL-17RC的表達(dá)并不明顯受疾病的調(diào)節(jié)，但是IL-17R似乎在淋巴樣組織中表達(dá)較高，而IL-17RC似乎在非淋巴樣組織中表達(dá)較高。實(shí)施例30IL-17RC是IL-17A和IL-17F二者的激活作用的介質(zhì)使用含有人類IL-17RCxl(SEQIDNO:2)和曱氨喋呤抗性基因(二氬葉酸還原酶，DHFR)的表達(dá)載體轉(zhuǎn)染鼠類nih3t3/kzl42.8測定細(xì)胞系。類似地，還使用人類IL-17RA(SEQIDNO:21)轉(zhuǎn)染該細(xì)胞系。使用市售的試劑盒(Mirus，Madison，WI.Cat.#MIR218)并根據(jù)廠商的說明進(jìn)行上述轉(zhuǎn)染。將細(xì)胞置于添加有l(wèi)pMmtx的生長培養(yǎng)基中培養(yǎng)，以針對含有表麵建體的表達(dá)載^^ii行篩選。在篩選后得到轉(zhuǎn)染混合物，并將其命^為nih3t3/kz142.8/hcytorl4Xl和nih3t3/kz142.8/IL-17R。A)佳月基于nih3t3/kz142.8的細(xì)胞系進(jìn)行螢光素酶測定由于基于nih3t3/kz142.8的細(xì)胞系具有穩(wěn)定的apl/nfkM艮告物(kzl42),因此無需使用腺病毒感染^入這一報(bào)告物。這樣就簡化了螢光素酶的測定步驟，具體的測定步驟如下1.細(xì)戯板將細(xì)胞以5000細(xì)胞/孔的密度鋪于細(xì)胞培養(yǎng)物包被的白色固體96孔板上(Cat.#3917.Costar)，^J^含有谷氨i^和添加了丙酮酸鹽的DMEM/10。yiFBS鋪板，在37t:、5"/。C02的條件下培養(yǎng)過夜。在第二天，移去鋪板培養(yǎng)基，更換為含有谷氨,和添加了丙酮酸鹽的DMEM/iy。FBS培養(yǎng)基，并4f培稀在37匸、5。/oC02的務(wù)降下培養(yǎng)過夜。2.螢光素酶測定，以測量IL-17A和F對穩(wěn)定的kzl42報(bào)告物的激活在用DMEM/1。/。FBS培養(yǎng)1J^養(yǎng)過夜后，用無血清培養(yǎng)基(添加有O.28%BSA)稀釋人類IL-17A和IL-17F配體。在加入配^#釋液后將細(xì)胞在37匸和5%0)2條件下培養(yǎng)4小時(shí)，移去培養(yǎng)基^f吏細(xì)胞裂解15分鐘，使用安光素酶測定系統(tǒng)和試劑(CatJe1531Promega.Madison，WI.)和微量;fcl^計(jì)測量平均焚光強(qiáng)度(MFI)。檢測濃度范圍為O.l-100ng/ml的兩種配體的活性。下文所述的EC50為至少4次實(shí)驗(yàn)的平均值。nih3t3/kz142.8/hcytorl4xl轉(zhuǎn)染^^/表現(xiàn)出的對于鼠類IL-17A配體的活性與母細(xì)胞系相似，其EC50約為4ng/ml(實(shí)施例14)。hcytorl4xl重組細(xì)胞系中mlL-17A的信號傳導(dǎo)與母細(xì)胞系(實(shí)施例14)相似這一事實(shí)表明，鼠類IL-17A很可能是通過內(nèi)源性鼠類nih3t3細(xì)胞的IL-17RA或IL-17RC受體進(jìn)行信號傳導(dǎo)的，而且并不通ithcytorl4Xl激活細(xì)胞。然而，hlL-17RCXl的轉(zhuǎn)染混合物對于人類IL-17A的處理表現(xiàn)出更高的應(yīng)答I"生，平均4次實(shí)驗(yàn)的EC50為0.41ng/ml，而母細(xì)胞系為2.8ng/ml(重組細(xì)胞系中的EC50增強(qiáng)6.8倍)。而且，hlL-17RCXl重組細(xì)胞系對于人類IL-17F^4現(xiàn)出更高的應(yīng)答性，其EC50為0.61ng/ml，而母細(xì)胞系為IOng/ml(重組細(xì)胞系中的EC50增強(qiáng)17倍)。hlL-17RCXl細(xì)胞系中hlL-17A和F的效力增加與人類IL-17RCX1為人類IL-17A和IL-17F二者的高親和力受體這一事實(shí)相一致。相反地，hlL-17RA重組細(xì)胞系^mthlL-17A有高敏感性，其EC50為0.6ng/ml，而母細(xì)胞系為2.8ng/ml。hlL-17RA重組細(xì)胞系對于hlL-17F的EC50沒有增強(qiáng)，重組細(xì)胞系的IL-17FEC50為12.4ng/ml，而母細(xì)胞系為8.9ng/ml。這一結(jié)果;f賄意義，因?yàn)樗貏e錄明了hlL-17RCXl是hlL-17A和hlL-17F二者的激活作用的介質(zhì)，而JUE表明hlL-17RA僅介導(dǎo)hlL-17A激活的信號傳導(dǎo)，但不介導(dǎo)hlL-17F激活的信號傳導(dǎo)。實(shí)施例31IL-17A和IL-17F的^^內(nèi)給藥本實(shí)施例使用BALB/c小鼠測定了鼠類或人類IL-17A或IL-17F的靜脈內(nèi)送遞在不同時(shí)間點(diǎn)對于全血細(xì)胞計(jì)數(shù)(CBC)和血清細(xì)胞因子/趨化因子的影響。I.V.給予llUg的mlL-17A可導(dǎo)致在給藥后l-2小時(shí)循環(huán)系統(tǒng)中的嗜中性粒細(xì)胞增加約2倍(通過CBC測幻、血清中KC和MCP-l增加約10倍(通itLuminex測定)；給予5pg的hlL-17A^Jf見察到了對于上述趨化因子的相似的影響。在用1/igmlL-17A、5jighIL-17A或5yghlL-17F處理后2小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)，小鼠體內(nèi)jfaJ^核細(xì)胞水平錯明顯的增加，其中給予ljugmlL-17A時(shí)表現(xiàn)出的增加程度最高。I.V.給予鼠類和人類IL-17F在1小時(shí)和2小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)導(dǎo)致血清IL-15明顯增加(通itLuminex測定)，血清KC和MCP-1在上勤目同的時(shí)間點(diǎn)有少量增加。實(shí)施例32靜脈內(nèi)給藥IL-17A和IL-17F的中和為中和靜脈內(nèi)給予IL-17A和IL-17F所介導(dǎo)的細(xì)胞因子和趨化因子的增加，通過i.p.給予可溶性受體(針對鼠類配,予mlL-17RA:Fc;針對人類配*予可溶性人類IL-17RC)。對于雌性BALB/c小鼠i.p.注射給予PBS、100pgmlL-17RA:Fc或lOOpg可溶'I^A類IL-17RC，在三小時(shí)后通it^靜脈i.v.注射下列物質(zhì)PBS;2jag的mIL-17A或mlL-17F或2pg的mlL—17A+mlL-17F(對于接受mlL-17RA:Fc的小鼠)；或2pig的hlL-17A或hlL-17F或2p8的11化-17人+hlL-17F(對于接受可溶IiiA類IL-17RC的小鼠)。在gi體給藥后l小時(shí)采集血清，分析少數(shù)血清細(xì)胞因子和趨化因子。通過i.p.給予可溶性受體進(jìn)行預(yù)處理的小鼠與用PBS+IL-17A處理的小鼠相比，由IL-17A介導(dǎo)的IL-17A和KC的血清濃度的增加量明顯下降。實(shí)施例33可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽的基于板的蛋白結(jié)合測定按照下述步^ii行捕獲EIA:用ljag/ml的山羊^UgG抗體包凈處LIS傲，并在41C下培養(yǎng)過夜。洗^Hl并用200jul/孔的lWBSA^室溫下封閉板l小時(shí)。洗滌，然后向板上加入可溶性受體變體(A1586F，A1587F)或IL17RCxl(A1034F)的系列稀釋液(100jug/ml直至0.10jug/ml)，在室溫下培養(yǎng)l小時(shí)。洗滌，以10:1(IL17A)或6:1(IL17F)的比例加入生物素標(biāo)記的配體，并在室溫下培養(yǎng)l小時(shí)。洗滌，加入0.5ng/mL的鏈親和素-^^itlL化物酶，在室溫下培養(yǎng)l小時(shí)。洗滌，加入TMB底物反應(yīng)4^t通#入終止溶液終止反應(yīng)。(注除非特別指明，否則上述所有試劑的體積均為50nl/孔)。陽性結(jié)果是指較高的OD值，通常應(yīng)高于0.5。結(jié)果顯示，在這一測定中，構(gòu)建體1342(SEQIDNO:74)不與IL-17A結(jié)合，與IL-17F微弱結(jié)合。構(gòu)建體1341(SEQIDNO:72)與IL-17A和IL-17F二者都有很強(qiáng)的結(jié)合。IL-17RCxl與IL-17A和IL-17F結(jié)合。按照下述步^ii行中和EIA:用ljug/ml的可溶性受體(A1034F)包被板，并在4。C下培養(yǎng)過夜。洗j^l并用200yl/孔的WBSA^室溫下封閉板l小時(shí)。在封閉的同時(shí)，在另一塊紅將相同^P、的可溶I"生受體變體(A1586F，A1587F)的系列稀釋液(50ing/ml直至0.05pg/ml)與生物素標(biāo)記的配體以10:1(IL17A)或6:1(IL17F)的比例培養(yǎng)，在室溫下培養(yǎng)l小時(shí)。洗滌封閉好的板，然后向封閉好的;tUi加入受體-配體復(fù)合物，在室溫下培養(yǎng)l小時(shí)。洗滌，加入0.5ng/mL的鏈親和素"^^Jt!U匕物酶，在室溫下培養(yǎng)l小時(shí)。洗滌，加入TMB底物反應(yīng)7分l中。通it^p入終止溶液終止反應(yīng)(注除非特別指明，否則上述所有試劑的體積均為50jul/孔)。陽性結(jié)果是指較低的O她，通常應(yīng)低于0.5。結(jié)果顯示，構(gòu)建體1342(SEQIDNO:74)微弱地中和IL-17A與IL17RCxl的結(jié)合，但負(fù)M艮強(qiáng)地中和IL-17F與IL17RCxl的結(jié)合。構(gòu)建體1341(SEQIDNO:72)微弱地中和IL-17A與IL17RCxl的結(jié)合以及微弱地中和IL-17F與IL17RCxl的結(jié)合。中和表明變體蛋白與生物素化配糾目結(jié)合。實(shí)施例34FACS結(jié)合測定方法為評估本發(fā)明的可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽與配體IL-17A和IL-17F結(jié)合的能力，應(yīng)用了基于流式細(xì)胞術(shù)的竟?fàn)幗Y(jié)合測定。在存在配體IL-17A或IL-17F的條件下培養(yǎng)經(jīng)全長IL17RCx4穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的BHK細(xì)胞系，佳月靶向結(jié)合配體的可溶性受體可以檢測和相對定量^"測結(jié)合在細(xì)絲面(因此未被可溶性受體結(jié)合)的S己體。對S己體生物素化使得可以佳J^鏈親和素綴合的熒光團(tuán)作為二:^it行FACS檢測。隨著可溶性受體的滴定，細(xì)胞結(jié)合配體的減少可通過細(xì)胞的平均熒光的減少來記錄。在染色培養(yǎng)基(HBSS+l。/。BSA+0.1%疊氮鈉+10mMHEPES)中將lug/ml的各種生物素化配體分別與滴定量的可溶性受體預(yù)先混合，使其g積為100nl，在室溫下培養(yǎng)15^4中。通過下述步驟處理經(jīng)全長IL17RCx4穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的BHK細(xì)胞系以用于配體染色用乙二胺四乙酸鈉(Invitrogencat.15040-066)重懸細(xì)胞，平衡至2x105細(xì)胞/100p1，沉淀細(xì)胞并重懸于配體/可溶性受體的預(yù)混合物中。將染色的細(xì)胞在4匸下培養(yǎng)30分鐘，用染色培養(yǎng)基洗滌l次，然后用1:100的鏈親和素-PE(BDPharmingencat554061)進(jìn)行染色。將細(xì)胞在4C下避光培養(yǎng)30分鐘，用染色培養(yǎng)基洗滌2次，并重懸于l:l的染色培養(yǎng)狄Cytofix(BDBioscience554655)的〉'^^中。使用BDLSRII流式細(xì)胞儀或類似的儀器進(jìn)行數(shù)據(jù)采集和分析。圖5顯示的是一張標(biāo)準(zhǔn)圖。該圖是^^lPrizm軟件^^產(chǎn)生的。Y軸的數(shù)值^FC4標(biāo)準(zhǔn)化的MFI值(該標(biāo)準(zhǔn)化是4f^有配體時(shí)的MFIi殳為100y。，沒有配體/沒有可溶性受體的對照孔的MFI設(shè)為0W,并由此表示配體與細(xì)胞結(jié)合的百分比。該軟件可針對每條曲線計(jì)算IC50。實(shí)施例35生物素化A^類IL-17A和IL17F與可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽的特異性結(jié)合的抑制使用本文所述的結(jié)合測定法來測定可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽與IL-17A和IL17F結(jié)合的能力。如上所述itkit行結(jié)合研究，只是在結(jié)合^JI中增加了另外的可溶性多肽，例如SEQIDNO:157和158。這些可溶I4多肽抑制人類IL-17A和IL-17F二者與IL-17RC轉(zhuǎn)染的BHK細(xì)胞的結(jié)合，其押制程度與可溶'hiA^類IL-17RCxlFc融合蛋白(SEQIDNO:64)相同。其余的可溶性多肽包括SEQIDNO:157和158的可溶性多肽，它們都包括在下表9中。表9*可溶性多狀變體IC50-IL17A可溶性多狀變體IC50-IL17FIL17RA/RC14077IL17RC13909IL17RA/RC14079IL17RA/RC145418IL17RA/RC14544IL17RA/RC145431IL17RA/RC145417IL17RA/RC145495IL17RA/RC145420IL17RA/RC140733IL17RC139012IL17RA/RC140742IL17RA/RC134130IL17RC121031135<table>tableseeoriginaldocumentpage136</column></row><table>*基于細(xì)胞的竟?fàn)幗Y(jié)合IC50(ng/nU;構(gòu)建體的排序是按照對每種配體的IC50,從最強(qiáng)的結(jié)合物至最弱的結(jié)合物。實(shí)施例36IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA可溶性多財(cái)IL-17A和IL-17F的結(jié)合親和力按照下述步驟，檢測IL-17RCxl、IL-17RA和可溶性IL-17RC/IL-17RA可溶性多肽(SEQIDN0:157和158)對IL-17A和IL-17F二者的結(jié)合親和力用pH5.0的乙酸鈉將山羊抗人IgG-Fc特異性抗體(Jackson#109-005-008)稀釋至50jig/ml，并固定在CM5Biacore芯片上。在將一系列濃度的每種配體注入以觀察結(jié)合和解離之前，按照理論上的結(jié)合最大值來優(yōu)化捕獲受體的實(shí)驗(yàn)方案。測試了可溶性受體和IL-17RC/IL-17RA多肽與一系列濃度的每種配體的結(jié)合。在各輪之間通過2x30秒的注射pH1.75的甘氨酸使表面再生。使用BiacoreEvaluation軟件評估數(shù)據(jù)以確定動力學(xué)數(shù)值，并示于下表IO。表10*人類IL17RCxl對人類IL-17A的親和力05-2005ka(1/Ms)kd(1/s)KD(M)Rmax(RU)Chi2(RU2)1.05E+064.90E-044.69E—109.020.4241.24E+064.38E-043.52E-108.860.324人類IL17RCxl對人類IL-17F的親和力05-2005ka(1/Ms)kd(1/s)KD(M)Rmax(RU)Chi2(RU2)9.91E+054.31E-044.35E-107.220.3781.11E+063.84E-043.46E-107.570.549可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽對人類IL-17A的親和力04-2006ka(1/Ms)kd(1/s)KD(M)Rmax(RU)Chi'(RU2)1.42E+066.22E-054.39E-1120.50.460、2.61E+069.95E-053.82E-1118.30.888可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽對人類IL-17F的親和力04-2006ka(1/Ms)kd(1/s)KD(M3Rmax則)Chi'(RU2)1.82E+062.61E-041.43E-1010.20.4952.49E+063.15E-041.26E-1011.20.544人類IL-17RA^]"人類IL-17A的親和力06-2006ka(1/Ms)kd(1/s)KD說)Umax則)Chi2(RU2)3.70E+058.65E-052.34E-1029.50.2492.89E+058.57E-052.96E-1035.10.197人類IL-17RA^f人類IL-17F的親和力07-2006ka(1/Ms)kd(1/s)KI)(M)Himix則)Chi2(RU2)2.09E+045.56E-042.66E-0820.30.0712.55E+044.40E—041.72E-089.90.076*顯示了平#^數(shù)和^速率常數(shù)，這些值都在機(jī)器的限度范圍內(nèi)。Chi2指的是結(jié)合曲線^n古擬合曲線之間的殘差的平方和。該^t^接近o，則說明數(shù)據(jù)的置信M高。顯示的這些數(shù)據(jù)置信度銅艮高。上述數(shù)據(jù)證實(shí)了人類IL-17A和人類IL-17F與人類IL-17RA和人類IL-17RC的結(jié)合。特別地，人類IL-17RC對人類IL-17A和人類IL-17F表現(xiàn)出相似的結(jié)合親和力，解離平鄉(xiāng)數(shù)(KD)約為400錄(pM)。可溶性IL-17RC/IL-17RA多^合人類IL-17A的親和力(KD約為40pM)比其結(jié)合人類IL-17F的親和力(KD約為140pM)略高。人類IL-17R樹于人類IL-17A和人類IL-17F的配體結(jié)合親和力差異最大，它對人類IL-17A的KD約為300pM而對人類IL-17F的KD約為30納摩(nM),相差了100倍之多。實(shí)施例37重纟iLA類IL-17RA/NIH3T3/KZ142.8和IL-17RCx4/NIH3T3/KZ142.財(cái)艮告物測定細(xì)胞系的產(chǎn)生使用本文所述的鼠類NIH3T3/KZ142，8才艮告物細(xì)胞系來產(chǎn)生新的測定細(xì)胞系，即人類IL-17RA(SEQIDNO:21)或IL-17RCx4(SEQIDNO:166)的重組體。這可通過用含有每種上iiDNA的表i^J建體轉(zhuǎn)染上述細(xì)胞而實(shí)現(xiàn)。所ii4達(dá)載體利用了pzmpll，它含有二氫葉酸ii^酶基因。因此，^^l添加有l(wèi)pM甲氨喋呤的生長培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)染體以產(chǎn)生穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染混合物。得到的測定細(xì)胞系被稱為hlL-17RA/NIH3T3/KZ142.8和hlL-17RCX4/NIH3T3/KZ142.8。實(shí)施例38可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽拮4^A類IL-17AJ寸重細(xì)LA類IL-17RA/NIH3T3/KZ142.8細(xì)胞的激活使用下述步驟測定可溶性IL-17RC/IL-RA可溶性多肽(SEQIDNO:157和158)對人類IL-17A激活重組hlL-17RA/NIH3T3/KZ142.8細(xì)胞的竟?fàn)幮Яτ糜谖灩馑孛笢y定的細(xì)l^煮板和制備與本文所述的相同。在測定當(dāng)天，首先對細(xì)胞給予一系列2倍劑量的可溶性受體(設(shè)三個平行樣)，所述可溶性受體的體積為1倍體積，濃度為終濃度的2倍，包括上文所述可溶性多肽即IL-17RA和IL-17RC起始濃度為2iag/ml(將在加入配體后成為lpg/ml的終濃^)。然后再加入l倍體積的lng/ml的IL-17A，這一濃度也是終濃度O.5ng/ml的2倍，在受體一配體;^^在-~^就成為0.5ng/ml的終濃度。對接受了O.5ng/ml的IL-17A而未接受受體的三個平行樣的系列測定激活的最大值。對只接受了既不含配體也不含可溶性受體的測，養(yǎng)基的三個平行樣的系列測定激活的M值。數(shù)據(jù)分析顯示，上述可溶性多肽抑制IL-17A激活上述細(xì)胞系的IC50值為7ng/ml?？扇苄訧L-17RA或IL-17RC即使在最高劑量(1mg/ml)時(shí)，也不負(fù)^夠有^#抗O.5ng/ml的hlL-17A對該細(xì)胞系的激活。實(shí)施例39可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽拮^/v類IL-l7F對重纟JLA類IL-17RA/NIH3T3/KZ142.8細(xì)胞的激活使用下述步驟測定可溶性IL-17RC/IL-RA可溶性多肽(SEQIDNO:157和158)對人類IL-17F激活重組hlL-17RA/NIH3T3/KZ142.8細(xì)胞(如上所述)的竟?fàn)幮Яτ糜谖灩馑孛笢y定的細(xì)^4甫板和制備與本文所述的相同。在測定當(dāng)天，首先對細(xì)胞給予一系列2倍劑量可溶性受體(設(shè)三個平行樣)，所述可溶性受體的體積為1倍^"濃度為終濃度的2倍，包括上文所述可溶性多肽即IL-17RA和IL-17RC起始濃度為4yg/ml(將在加入配體后成為2ng/ml的終濃^)。然后再加入l倍^P、的40ng/ml的IL-17F，這一濃度也是終濃度20ng/ml的2倍，在受體-配體^^在-"^就成為20ng/ml的終濃度。對接受20ng/ml的IL-17F而無未接受受體的三個平行樣的系列測定激活的最大值。對接受既不含配體也不含可溶I"生受體的測，養(yǎng)基的三個平行樣的系列測定激活的M值。數(shù)據(jù)分析顯示，IL-17RC/IL-17RA可溶性多肽抑制IL-17F激活上述細(xì)胞系的IC50值為0.48|ug/ml?？扇苄訧L-17RA或IL-17RC即使在最高劑量(2jig/ml)時(shí)，也不足以^JKL出對20ng/ml的IL-17F對該細(xì)胞系的'激活的^"f^拮:^作用。實(shí)施例40可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽拮:^A類IL-17F對重組人類IL—17RCx4/NIH3T3/KZ142.8細(xì)胞的激活使用下述步驟測定可溶性IL-17RC/IL-RA可溶性多肽(SEQIDNO:157和158)對IL-17F激活重組hlL-17RCX4/NIH3T3/KZ142.8細(xì)胞(如上所述)的竟?fàn)幮Яτ糜谖灩馑孛笢y定的細(xì)胞鋪板和制備與本文所述的相同。在測定當(dāng)天，首先對細(xì)*予5倍系列劑量的可溶性受體(設(shè)三個平行樣)，所述可溶性受體的體積為l倍體積，濃度為終濃度的2倍，包括上文所述可溶性多肽即IL-17RA和IL-17RC起始濃度為4jag/ml。然后再加入1倍體積的2ng/ml的IL-17F批次A1275F,這一濃度也是終濃度lng/ml的2倍，在受體-配體^^在"-^減為lng/ml的終濃度。對接受lng/ml的IL-17F而未接受受體的三個平行樣的系列測定激活的最大值。對接受既不含配體也不含可溶性受體的測，養(yǎng)基的三個平行樣的系列測定激活的基線值。數(shù)據(jù)分析顯示，IL-17RC/IL-17RA可溶性多肽抑制IL-17F激活上述細(xì)胞系的IC5唯為0.8pg/ml?？扇苄訧L-17RC的IC50為6iig/ml，而IL-17RA^^f沐劑量時(shí)都沒有拮抗作用。實(shí)施例41可溶性IL一17RC/IL-17RA多肽中和人類IL-17A和IL-17F二者諸導(dǎo)G"CSF、IL一6和IL-8的活性^JU人類IL-17A或使用人類IL-17F處理人類小氣itJi皮細(xì)胞(SAEC),在48小時(shí)后收集上清液。對這些上清液的測定顯示出G-CSF、IL-6和IL-8的劑量依賴性i秀導(dǎo)，結(jié)果示于下表ll。表ll<table>tableseeoriginaldocumentpage139</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage140</formula>對于用IOng/ml人類IL-17A或50ng/mlA^類IL-17F處理的SAEC,還^JI了0.01-10/ig/ml劑量的可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQIDNO:157和158)進(jìn)行處理(在加入到細(xì)胞之前先將配體和可溶性多肽在37°C下一起培養(yǎng)30分鐘)，在48小時(shí)后收集上清液。如下表12所示，所述上清液中的G-CSF、IL-6和IL-8的含量下降，表明可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽能夠有效地中和人類IL-17A和人類IL-17F誘導(dǎo)這些細(xì)胞因子的活性。應(yīng)該注意的是，不能測定IL-6中和的IC50值，因?yàn)樵谒鶞y試的可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽的最低劑量(0.01)ig/ml)時(shí)，中和才下降到最大值的大約50%)。表12<table>tableseeoriginaldocumentpage140</column></row><table>實(shí)施例42可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽對人類多發(fā)'I^^H^羊本的效力多發(fā)'I^更化(MS)是一種被認(rèn)為由多種因素介導(dǎo)的復(fù)雜的疾病，所述因素包括存在、淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞的炎性浸潤和整個CNS的脫髓鞘作用。小l資細(xì)胞是存在于中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)中的巨噬細(xì)胞樣細(xì)胞，它在損傷或感染時(shí)^L^L活。小膠質(zhì)細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)自在各種CNS疾病包^MS中起重要作用，并可^J^于研究疾病的^Li、^^和治療才幾制(Nagaietal.NeurobiolDis8:1057-1068;2001;Olsonetal.JNeurosciMethods128:33-43;2003;Giulianietal.JNeuroimmunol165:83-91;2005)。因此，可以使用原4W申經(jīng)細(xì)I^養(yǎng)物、永生^A類小M細(xì)胞系和/或已有的人類星形M細(xì)胞系來研究炎性介質(zhì)對這些細(xì)胞類型的一些作用以及它們的中和能力。炎性介質(zhì)(包括但不限于IL-lb、IL-6、IL-8、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17A和F、IL-18、IL-23、TNF-a、IFN-g、MIP家絲員、RANTES、IP-IO、MCP-1、G-和GM-CSF等等)可通過它們激活炎性途徑和下游效應(yīng)細(xì)胞的作用^P重MS相關(guān)的癥狀和病理。為評估IL-17A和IL-17F對上述細(xì)胞類型的促炎作用和本發(fā)明的可溶性多肽例如可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQIDNO:158)中和或減輕這些作用的能力，分別用下述一種物質(zhì)處理培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)M膠質(zhì)細(xì)胞載體；rhlL-17A;rhIL-17F;rhIL-17A+rhIL-17F。此外，還對上述培養(yǎng)細(xì)胞分別佳用或不佳月本發(fā)明的可溶性多肽例如可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQIDNO:158)i^f亍處理。在不同系列的培養(yǎng)物中，在不存在外源性IL-17A或IL17-F的條降下，將分和M細(xì)胞中，藉此提供研究激活的T細(xì)fet這些細(xì)胞類型的破壞作用的共培養(yǎng)方法。對T細(xì)胞分別使用或不使用本發(fā)明的可溶性多肽例如可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQIDNO:158)進(jìn)行處理。在不同的培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)(從l小時(shí)至幾幻，分別收集上清液和細(xì)胞并分析其中炎性介質(zhì)(包括上述的炎性介質(zhì))的水平和/或表達(dá)，還分析細(xì)胞的存活水平。用rhlL-17A和/或IL-17F處理的細(xì)胞與僅用栽體處理的細(xì)船目比，炎性細(xì)胞因子和趨化因子的水平和神經(jīng)細(xì)胞的死亡率升高。加/v^發(fā)明的可溶性多肽例如可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQIDNO:158)顯著降低了炎性介質(zhì)的產(chǎn)生和表達(dá)并提高了神經(jīng)細(xì)胞的存活水平。綜上所述，由于這些離體實(shí)驗(yàn)證實(shí)了本發(fā)明的可溶性多肽例如可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQIDNO:158)能夠減輕與人類MS的病刻目關(guān)的破壞作用和炎性作用，因此可預(yù)期^JI這類可溶性多肽進(jìn)行治療能夠有皿減輕與人類MS相關(guān)的炎性癥狀、神經(jīng)細(xì)胞死亡和/或脫髓鞘作用。實(shí)施例43可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多J^^v類類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎("RA")和骨關(guān)節(jié)炎("OA")樣本的效力這些才莫型被設(shè)計(jì)為顯示來自患有RA和OA的患者的/v類滑液培養(yǎng)物(包括滑液巨噬細(xì)胞、滑液成纖維細(xì)胞和關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞)和夕卜植物所產(chǎn)生的炎性介質(zhì)的水平要高于與來自^照者的培稀/外植物，這可^i^卜M組分(例如骨和軟骨等)的降解，而這種降解正是上述疾病的標(biāo)志。此外還設(shè)計(jì)了下文所述的共培養(yǎng)模型，以顯示RA/OA滑液和/或激活的T細(xì)胞中存在的炎性介質(zhì)還可能導(dǎo)致P重的炎癥和M降解。這種升高的炎性介質(zhì)(包括但不限于制瘤素M、IL-lb、IL-6、IL-8、IL-12、IL-15、IL-17A和F、IL-18、IL-23、TNF-a、IFN-g、IP-10、RANTES、RANKL、MIP家絲員、MCP-1、,-9、G-和GM"CSF、一氧化氮等等)7jc平通過它們'激活炎性途徑和下游效應(yīng)細(xì)胞的作用加重了與RA和OM目關(guān)的癥狀和病理。這些途徑和組分可導(dǎo)致炎性浸潤、軟骨和基質(zhì)丟失/破壞、骨丟失以;sAt金屬蛋白酶、前列腺素和環(huán)氧化酶的上調(diào)。因此，這一模型可在體外或離體實(shí)驗(yàn)中模擬RA和OA的破壞性炎性特征。而且，M在上必卜源加入的炎性組分(例如制瘤素M、TNF-a、IL-lb、IL-6、IL-17A和F、IL-15等等)的M下，或在存在來自RA患者的滑液(^含有內(nèi)源性炎'魁且分)的M下，培養(yǎng)來自^fe]"照者的夕卜植物和滑液培養(yǎng)物時(shí)可以觀察炎性和降解性途徑的信號傳導(dǎo)?？赡茉隗w內(nèi)對人類RA有效的療法也應(yīng)該能通過抑制和/或中和炎性介質(zhì)的產(chǎn)生和/或存在而在上述的體外或離^^型中起作用。在上述^^型中，從經(jīng)歷關(guān)節(jié)置換的^^照者或RA或OA患者身上，或M后的尸體組織中采集人類滑液外植物，，并使用改進(jìn)的WooleyandTetlow(ArthritisRes2:65-70;2000)和van'tHof等(Rheumatology39:1004-1008;2000)的方法對外植物進(jìn)行處理。還研究了滑液成纖維細(xì)胞、滑液巨噬細(xì)胞和關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)物。對復(fù)制樣本分別用下述一種物質(zhì)處理栽體(PBS);重纟JLA類(rh)IL-17A;rhlL-17F;或rhlL-17A+rhlL-17F,還有一些樣本中含有制瘤素M、TNF-a、IL-lb、IL-6、IL-17A、IL-17F和IL-15的不同組合。的樣本:jh^卜，狄上i^斤^樣;分別^jii或不^^i本發(fā)明的可溶性多、:例如可溶性IL-17RC多肽或可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQIDNO:158)進(jìn)4亍處理。在不同的培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)(從l小時(shí)至幾力，分別收集上清液和細(xì)胞并分析其中炎性介質(zhì)和軟骨/骨/基質(zhì)生物標(biāo)記(包括上述的那些)的7jc平。來自RA或0A患者的樣M佳J^RA/0A滑液、激活的T細(xì)胞、rhIL-17A和/或rhlL-17F處理(單獨(dú)處理或與其他炎性細(xì)胞因子-"^t理)的樣本中，與未處理的i^Jj寸照外植物或未處理的細(xì)|^#相比，其中的炎性細(xì)胞因子和趨化因子和軟骨/骨/M降解性生物標(biāo)記的水平升高。加入^發(fā)明的可溶性多歸著降低了炎性介質(zhì)和軟骨/骨/M降解性介質(zhì)的產(chǎn)生，因此，可預(yù)期它們能有效治療人類RA和OA。實(shí)施例44通it^占膜活絲頻測定可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多財(cái)人類炎性腸病("IBD")樣本的效力這一模型被設(shè)計(jì)為顯示來自患有IBD的患者的培養(yǎng)的腸組織所產(chǎn)生的炎性介質(zhì)的水平要高于與來自皿對照者的組織。這種升高的炎性介質(zhì)(包括但不限于IL-lb、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17A和F、IL-18、IL-23、TNF-a、IFN-g、MIP家絲員、MCP-1、G-和GM-CSF等等)水平通過它們激活炎性途徑和下游效應(yīng)細(xì)胞的作用加重了與IBD例如克隆病(CD)和潰瘍性結(jié)腸炎(UC)相關(guān)的癥狀和病理。上述途徑和組分可導(dǎo)致在體內(nèi)觀J^到的組織和細(xì)J3^員傷/破壞。因此，這一模型可^^以IBD的炎性介質(zhì)升高的特征。而(IEC)細(xì)胞系的腸組織時(shí)，可以觀察炎性途徑的信號傳導(dǎo)以及組織和細(xì)胞損傷的跡象?？赡茉隗w內(nèi)對人類IBD有效的療法也應(yīng)該能通過抑制和/或中和炎性介質(zhì)的產(chǎn)生和/或存在而在上述的離體或IEC模型中起作用。在該模型中，從經(jīng)歷腸組織活#再切片的^對照者或IBD患者身上，或從死后的尸體組織中采集人類腸組織，并使用改進(jìn)的Alexakis等(Gut53:85-90;2004)的方法對組織進(jìn)行處理。在無菌M下^JI大量的PBS小心地清潔樣本，然后4M完全組織培養(yǎng)基咖入抗生素以抑制細(xì)菌ii^生長)培養(yǎng)組織碎片。對來自相同的組織碎片^^的樣本分別用下述一種物質(zhì)處理載體(PBS);重纟JLA^類(rh)IL-17A;rhIL-17F;或rhIL-17A+rhIL-17F?！穐^卜，狄上述樣本分別^J1或不^JI本發(fā)明的可溶性多肽例如可溶性IL-17RC多絲可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQIDNO:158)進(jìn)行處理。同樣按照這一實(shí)驗(yàn)過程進(jìn)行人類IEC細(xì)胞系的研究，只是^JI現(xiàn)有的細(xì)胞儲液進(jìn)行細(xì)胞傳代。在不同的培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)(從1小時(shí)至幾A)，分別收集上清液并分析其中炎性介質(zhì)(包括上述的炎性介質(zhì))的水平。來自IBD患者的樣^佳月rhlL-17A和/或F處理的樣本與未處理的皿對照組織樣;^目比，其中的炎性細(xì)胞因子和趨化因子水平升高。加X^發(fā)明的可溶性多皿著降低了炎性介質(zhì)的產(chǎn)生，因此，可預(yù)期它們能有效治療人類IBD。^9f究的另一方面可包括對來自接受有效治療的IBD患者、目前未接受治療的患者或^皮認(rèn)為是對治療無反應(yīng)的患者的活枱ia織中的炎性^h質(zhì)的產(chǎn)生進(jìn)行比較。實(shí)施例45通m陣障功能測定可溶I"生IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽對人類IBD樣本的效力維持上皮屏障的完整性是保持胃腸道健康的一個關(guān)鍵因素。實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明，腸上皮屏障的滲漏可能會導(dǎo)致IBD的發(fā)生。位于腸固有層中的免疫細(xì)lfeif以;持免^i并有助于維"上狄障;完整性。然:，長時(shí)間的或失調(diào)的免疫介導(dǎo)的炎癥可能導(dǎo)致上皮屏障細(xì)胞完塾性和功能的缺陷。設(shè)計(jì)了下述研究以測量T細(xì)胞產(chǎn)生的IL-17A和/或IL-17F對于上M障完整性的直接影響。在本實(shí)施例中，使腸上皮細(xì)胞系例如Caco-2細(xì)胞在半上分化，并在通過評估跨上皮電F賦細(xì)胞單層對染料擴(kuò)散的抗性，隨時(shí)間監(jiān)測上皮細(xì)齡層的完整性。在共培養(yǎng)物中細(xì)胞單層的跨上皮電阻的降歉良明在共培養(yǎng)物中的T細(xì)M單核細(xì)胞的活性誘導(dǎo)了細(xì)胞單層的破壞?？梢詡稍翴L-17A和IL-17F的抑制劑，例如本發(fā)明的可溶性多肽、例如可溶性IL-17RC多肽或可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQIDNO:158)，來測定IL-17A和IL-17F對上皮細(xì)JJ^層的破壞的相對作用，并檢測IL-17A和IL-17F的抑制劑是否能夠有皿維持上皮屏障的完整性。如奴類襯能夠防止激活的T細(xì)胞誘導(dǎo)的上皮細(xì)胞單層的破壞，則說明本發(fā)明的可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽可有艦用于人類IBD的治療。統(tǒng)，以測定這些細(xì)胞與來源于健康個體的上皮細(xì)胞相比是否對于IL-17A和IL-17F^P^t感。如果是這樣，那么這些數(shù)據(jù):^明抑制IL-17A和IL-17F是一種治療IBD的適當(dāng)策略。實(shí)施例46IL-17A和IL-17F對來自正常樣^p人類IBD樣本的固有層T細(xì)胞和單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞的效力失調(diào)的或持續(xù)的免疫介導(dǎo)的炎癥可能通itM織損傷或永久地偏向不適當(dāng)?shù)幕蜓娱L的免疫應(yīng)答的方式加重與IBD相關(guān)的癥狀和病理學(xué)。這一模型可以測定疾病相關(guān)的T細(xì)胞和單核細(xì)胞與IL-17A和IL-17F相接觸的潛在下游后果，所述IL-17A和IL-17F可能存在于腸組織緊靠的環(huán)境性細(xì)胞因子環(huán)境中。可能在體內(nèi)對人類IBD有效的療法也應(yīng)該能通過抑制和/或中和炎性介質(zhì)(包括但不限于IL-lb、IL-4、IL-5、IL-6、IL-8、IL—12、IL—13、IL-15、IL-17A和F、IL-18、IL-23、TNF-a、IFN-g、MIP家;^員、MCP-1、G+GM-CSF等等)的產(chǎn)生和/或存在，而在上述的離，型中起作用。在該模型中，通過下述步m^活檢樣本中分離T細(xì)胞和單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞在HBSS中小心地使用剪子4子細(xì)剪碎活;^r樣本，用膠原酶和^Wn處理并在搖床上于37。C培養(yǎng)l小時(shí)。用尼龍篩過濾細(xì)胞懸液以除去細(xì)胞碎片和細(xì)胞團(tuán)，并用HBSS洗滌多次?？梢詸M月直接細(xì)胞M或微球消耗/富集方法分離T細(xì)jJ&^巨噬細(xì)胞/單核細(xì)胞。將分離的細(xì)胞與IL-17A和IL-17F—起培養(yǎng)。這可誘導(dǎo)T細(xì)胞和單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞產(chǎn)生炎性介質(zhì)或使得后續(xù)的T細(xì)胞應(yīng)答偏向?yàn)楦叽傺讘?yīng)答?？梢詫碜訧BD患者和來自正常個體的細(xì)胞產(chǎn)生的炎性介質(zhì)的類型進(jìn)行比較，并可育汰明^在IL-17A和IL-17F的條件下來自IBD患者的T細(xì)胞和單核細(xì)胞/巨噬細(xì)胞會具有更強(qiáng)的促炎性特征。加A^^發(fā)明的可溶性多肽(例如可溶性IL-17RC多JlUl可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQIDNO:158))可以中和IL-17A和IL-17F誘導(dǎo)的下游炎性介質(zhì)的產(chǎn)生，it4明這類可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽可有皿治療患有IBD的患者。實(shí)施例47可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多肽對腸易激綜合征("IBS")的效力CNS定向的發(fā)病才幾制該模型主要研究IBS的原始CNS定向發(fā)病機(jī)制，該模型使用應(yīng)激刺激誘導(dǎo)IBS的癥狀特征。新生幼崽的心S^土?xí)?yīng)激模型模擬了一些與IBS患者相關(guān)的臨床特征，包括內(nèi)臟痛覺過敏、腹瀉和應(yīng)激過敏。在幼崽出生后4-18天，每天將它們與母親分隔180^t可導(dǎo)致母方行為的改變，并顯著減少舔舐/理^f亍為的時(shí)間。對于新生幼崽的應(yīng)激導(dǎo)致CNS的永久性改變，并導(dǎo)致應(yīng)激^^導(dǎo)的內(nèi)JI^軀體痛覺敏感性發(fā)生變化。在這些動物中結(jié)腸運(yùn)動功肖樹于應(yīng)激的應(yīng)答增強(qiáng)，初步的數(shù)椐顯示有結(jié)腸通透性增加的跡象(Mayeretal.,2002)。使用本發(fā)明的可溶性多肽(例如可溶性IL-17RC多肽或可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQIDNO:158))進(jìn)行治療，并隨后對結(jié)腸運(yùn)動功能、上皮通透性和對應(yīng)激的應(yīng)答進(jìn)行分析，可以測定對這種IBS動物模型的有效性。在用上述抑制劑治療后癥狄病率的降低可表明IBS療法的潛在有效性。實(shí)施例48可溶性IL-17RC和IL-17RC/IL-17RA多^t腸易激綜合征("IBS")的效力應(yīng)激的原始腸定向i秀導(dǎo)物該模型主要研究應(yīng)激(即腸道炎癥，感染或物理應(yīng)'劇的原始腸定向誘-導(dǎo)物。動物研究表明，禾呈y^^^氐的炎癥或免疫'激活可能，的運(yùn)動性和/或傳入功能和上皮功負(fù)汰生改變的，(Mayeretal，.2002)。在該模型中，每天通iW新生動物(8-21日齡)結(jié)腸內(nèi)注射芥子油產(chǎn)生每天的結(jié)腸刺激。芥子油是一種神經(jīng)刺激物，已表明通*腸內(nèi)給予芥子油可誘導(dǎo)內(nèi)臟痛覺過敏。這一模型才對以了IBS的關(guān)鍵特征，包括內(nèi)臟痛覺過#排便習(xí)慣改變。動物i^^現(xiàn)出腹瀉或便秘，這也是IBS患者的關(guān)鍵特征(Mayeretal.,2002;Kimballeta1.，2005)?？梢运瓦f本發(fā)明的可溶性多肽(例如可溶性IL-17RC多肽或可溶性IL-17RC/IL-17RA多肽(SEQIDNO:158))，以測定與該模型相關(guān)的癥^G艮的變化。在^JI本發(fā)明的抑制劑治療后，內(nèi)臟痛覺過敏的發(fā)病率^#呈度的降低以冊道運(yùn)動性的變化可表明這些襯用于治療IBS的潛在有效性。實(shí)施例49設(shè)計(jì)用于生產(chǎn)可溶性IL-17A和IL-17F拮抗劑的可放;tM^的蛋白生產(chǎn)工藝在設(shè)計(jì)主要用于開發(fā)可溶形式的IL-17RC的可放;U!^的蛋白生產(chǎn)工藝的策略時(shí)，在識別可在糾培養(yǎng)基中產(chǎn)生高水平蛋白濃度的表達(dá)系統(tǒng)時(shí)彩"了許多困難。蛋白質(zhì)印跡分析表明絲蛋白在細(xì)胞中it^斤累積，蛋白分泌的水平降低。在發(fā)S(L^發(fā)明的可溶性多肽的過程中，我們設(shè)計(jì)和制備了七十多種不同的表ii^建體并測試了它們在B服細(xì)胞、CHO細(xì)胞或HEK293細(xì)胞中的表達(dá)。有些表#建體在一種以上的宿主細(xì)胞系中進(jìn)行了測試。所測試的可溶性IL-17RC表達(dá)盒的變體包括1)各種信號序列，例如a)天然；b)otPA;c)小狄疫球蛋白重鏈可變區(qū)；d)人類生長^t素；e)小鼠IL17RA。2)兩種不同的天然存在的剪接變體(IL-17RCxl，SEQIDNO:2;和IL-17RCx4，SEQIDNO:166)。3)在IL-17RC胞夕卜結(jié)構(gòu)域(ECD)和Fc部分之間增加連接物序列，例如a)沒有連接物；b)—種基于GlyGlyGlySer的9氨基酸連接物；和c)一種基于GlyGlyGlySer的20絲酸連接物。4)帶His標(biāo)簽的單體形式。5)^J^端和^J^末端Fc融^^白。6)去除N-連接的糖連M點(diǎn)。7)用Gln置換Asn的M酸置換。8)IL-17RA和IL-17RC的雜合融^"白所有的可溶性IL-17RC變體表^建體都通過瞬時(shí)轉(zhuǎn)染至HEK293細(xì)胞中進(jìn)行了蛋白表達(dá)的檢測。^JI了蛋白質(zhì)印跡分析iM^測分泌至M培養(yǎng)基中的蛋白，并與通*集細(xì)胞裂解物測定的細(xì)胞中保留的蛋白的量進(jìn)行比較。大多數(shù)構(gòu)建體表達(dá)的分泌至條件培養(yǎng)基中的蛋白都幾乎不能用蛋白質(zhì)印跡方法檢出。此外，細(xì)胞,物樣本中的信號比糾培養(yǎng)基樣本中的信號強(qiáng)，&明蛋白不能凈皮有*分泌。使用那些在M培養(yǎng)基中產(chǎn)生最強(qiáng)信號的表i^J建體來轉(zhuǎn)染穩(wěn)定的CHO細(xì)胞系。測量來自穩(wěn)定的CHO細(xì)胞系的蛋白效價(jià)，并且如果可能ii^基于細(xì)胞的竟?fàn)幗Y(jié)合測定中分析了純化蛋白與IL-17A和IL-17F的結(jié)合。下表顯示了用最高表達(dá)的構(gòu)建體轉(zhuǎn)染穩(wěn)定的CHO細(xì)胞系所得到的蛋白表達(dá)結(jié)果。當(dāng)糾蛋白濃度的測量值低于檢測水平時(shí)，就將蛋白效^h表示為〈0.5mg/mL。下表中包括IL-17RC和IL-17RC/RA蛋白表輛建體的命名號、所含有的外顯子簡述、來自轉(zhuǎn)染穩(wěn)定的CH0細(xì)胞系的蛋白效^與IL17A和IL17F的結(jié)合能力。此處未包括表13中所包括的變體的全序列。<table>tableseeoriginaldocumentpage147</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage148</column></row><table>從上文的描述可以認(rèn)識到，雖然本文出于說明的目的描述了本發(fā)明的M實(shí)施方案，但是在不偏離本發(fā)明精神和范圍的前提下可以進(jìn)行各種改變。權(quán)利要求1.一種分離的可溶性多肽，包括至少一個來自IL-17RA(SEQIDNO21)的外顯子和至少一個來自IL-17RC的外顯子。2.權(quán)利要求l的分離的可溶性多肽，其中所述IL-17RC的多肽序列選自SEQIDNO:2、SEQIDNO:166、SEQIDNO:4和SEQIDNO:24。3.權(quán)利要求l的分離的可溶性多肽，其中所述可溶性受體能與IL-17F結(jié)合。4，權(quán)利要求3的分離的可溶性多肽，其中所述可溶性多肽還能與IL-17A結(jié)合。5.權(quán)利要求l的分離的可溶性多肽，其中所述可溶性多肽能特異性地與IL-17F和IL-17A結(jié)合。6.權(quán)利要求l的分離的可溶性多肽，其中所述可溶性多肽還包括選自SEQIDN0:175和SEQIDN0:180的多肽。7.權(quán)利要求l的分離的多肽，其中所述多肽還包括聚乙二醇化。8.—種分離的可溶性多肽，包括IL-17RC的外顯子8-16(SEQIDN0:2的氨基酸殘基193-447)，其中所述可溶性多肽能特異性地與IL-17A和IL-17F結(jié)合。9.權(quán)利要求8的分離的可溶性多肽，其中所述多肽還至少包括IL-17RA的外顯子l。10.權(quán)利要求8的分離的可溶性多肽，其中所述可溶性多肽包括IL-17RA的外顯子1-6。11.權(quán)利要求8的分離的可溶性多肽，其中所迷多肽包括圖l所示的多肽。12.權(quán)利要求8的分離的可溶性多肽，其中所述可溶性多肽還包括選自SEQIDNO:175和SEQIDN0:180的多肽。13.權(quán)利要求8的分離的多肽，其中所述多肽還包括聚乙二醇化。14.一種分離的可溶性多肽，包括SEQIDNO:158的氨基酸殘基l-458。15.權(quán)利要求14的分離的可溶性多肽，其中所述多肽包括SEQIDN0:158。16.權(quán)利要求14的分離的可溶性多肽，其中所述多肽由SEQIDNO:158的氨基酸殘基l-458組成。17.權(quán)利要求15的分離的可溶性多肽，其中所述多肽由SEQIDNO:158組成o18.權(quán)利要求14的分離的可溶性多肽，其中所述多肽還包括聚乙二醇化。19.權(quán)利要求15的分離的可溶性多肽，其中所述多肽還包括聚乙二醇化。20.—種分離的多肽，包括選自下列的M酸序列SEQIDN0:2的氮基酸殘基193-276、SEQIDNO:166的氬基酸殘基208-291、SEQIDNO:2的絲酸絲277-370、SEQIDNO:166的絲酸絲292-385、SEQIDNO:2的氨基酸g371-447和SEQIDNO:166的氨基酸戎基386-462。21.權(quán)利要求20的分離的多肽，其中所述多肽包括選自下列的M^f列SEQIDNO:160、SEQIDNO:162和SEQIDNO:164。22.—種分離的多肽，包括選自下列的Jl^酸序列SEQIDNO:68、SEQIDNO:70、SEQIDNO:72、SEQIDNO:74、SEQIDNO:78、SEQIDNO:82、SEQIDNO:86、SEQIDNO:90、SEQIDNO:94、SEQIDNO:98、SEQIDNO:102、SEQIDNO:106、SEQIDNO:110、SEQIDNO:114、SEQIDNO:118、SEQIDNO:122、SEQIDNO:140和SEQIDNO:152。23.權(quán)利要求22的分離的多肽，其中所述多肽還包括聚乙二醇化。24.—種產(chǎn)生針對一種多肽的抗體的方法，所述方法包括用選自SEQIDNO:160、SEQIDNO:162和SEQIDNO:164的多肽接種動物；其中所述多肽引發(fā)動物體內(nèi)的免疫應(yīng)答從而產(chǎn)生抗體;從所述動物體內(nèi)分離所述抗體；其中所述抗體能特異性結(jié)合IL-17RC多肽；并能減少IL-17A和/或IL-17F的活性。25.權(quán)利要求24的方法，其中由所述方法產(chǎn)生的所述抗體能減少IL-17A和/或IL-17F的促炎活性。26.權(quán)利要求24的方法，其中由所述方法產(chǎn)生的所述抗體能中和IL-17A和/或IL-17F與IL-17RC或IL-17RA的相互作用。27.權(quán)利要求26的方法，其中所述抗體的所述中和作用是在體外基于細(xì)胞的中和測定中通過顯示對IL-17A和/或IL-17F的中和作用而測量的。28.權(quán)利要求24的方法，其中由所述方法產(chǎn)生的所述抗體能減少IL-17A和IL-17F二者的促炎活性。29.權(quán)利要求24的方法，其中由所述方法產(chǎn)生的所述抗體能中和IL-17A和IL-17F與IL-17RC的相互作用。30.權(quán)利要求26的方法，其中所述抗體的所述中和作用是在體外基于細(xì)胞的中和測定中通過顯示對IL-17A和IL-17F二者的中和作用而測量的。31.—種減輕或抑制由IL-17A誘導(dǎo)的或IL-17F誘導(dǎo)的炎癥的方法，包括給予患有炎癥的哺乳動物足以減輕炎癥的量的根據(jù)權(quán)利要求l、8、14或15中任一項(xiàng)的可溶性多肽。32.—種減輕由IL-17A誘導(dǎo)的和IL-17F誘導(dǎo)的炎癥的方法，包括給予患有炎癥的哺乳動物足以減輕炎癥的量的根據(jù)權(quán)利要求l、8、14或15中任一項(xiàng)的可溶性多肽。33.—種治療患有炎性疾病的哺乳動物的方法，所述炎性疾病與IL-17A或IL-17F有關(guān)，所述方法包括a)給予所述哺乳動物IL-17A或IL-17F的拮抗劑，以使得炎癥被減輕，其中所述拮抗劑包括根據(jù)權(quán)利要求l的可溶性多肽，并且其中所述IL-17A或IL-17F的炎癥活性^皮減弱。34.權(quán)利要求33的方法，其中所述疾病為哮喘。35.權(quán)利要求33的方法，其中所述疾病為'隄性炎性疾病。36.權(quán)利要求35的方法，其中所述疾病為慢性炎性疾病，包括炎性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、克隆病、關(guān)節(jié)炎、特應(yīng)性皮炎或4艮屑病。37.權(quán)利要求33的方法，其中所述疾病為IBS。38.權(quán)利要求33的方法，其中所述疾病為急性炎性疾病。39.權(quán)利要求38的方法，其中所述疾病為急性炎性疾病，包括內(nèi)毒素血癥、敗血癥、中毒性休克綜合征或傳染性疾病。40.—種治療患有炎性疾病的哺乳動物的方法，所述炎性疾病與IL-17A和IL-17F有關(guān)，所述方法包括a)給予所述哺乳動物IL-17A和IL-17F的拮抗劑，以使得炎癥被減輕，其中所述拮抗劑包括根據(jù)權(quán)利要求l的可溶性多肽，并且其中所述IL-17A和IL-17F之一的炎癥活性被減弱。41.權(quán)利要求40的方法，其中所述疾病為哮喘。42.權(quán)利要求40的方法，其中所述疾病為慢性炎性疾病。43.權(quán)利要求42的方法，其中所述疾病為慢性炎性疾病，包括炎性腸病、潰瘍性結(jié)腸炎、克隆病、關(guān)節(jié)炎、特應(yīng)性皮炎或4艮屑病。44.權(quán)利要求40的方法，其中所述疾病為IBS。45.權(quán)利要求40的方法，其中所述疾病為急性炎性疾病。46.權(quán)利要求45的方法，其中所述疾病為急性炎性疾病，包括內(nèi)毒素血癥、敗血癥、中毒性休克綜合征或傳染性疾病。47.權(quán)利要求33的方法，其中所述疾病為多發(fā)性硬化。48.權(quán)利要求40的方法，其中所述疾病為多發(fā)性硬化。49.權(quán)利要求33的方法，其中所述疾病為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。50.權(quán)利要求40的方法，其中所述疾病為類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。51.權(quán)利要求33的方法，其中所述疾病為骨關(guān)節(jié)炎。52.權(quán)利要求40的方法，其中所述疾病為骨關(guān)節(jié)炎。全文摘要本發(fā)明涉及IL-17A和IL-17F的拮抗劑。本發(fā)明的拮抗劑僅基于IL-17RC或基于IL-17RC和IL-17RA(“IL-17RC/IL-17RA”)。這類拮抗劑可用于阻斷、抑制減少、拮抗或中和IL-17F和/或IL-17A的活性。IL-17A和IL-17F是與炎性過程和人類疾病有關(guān)的細(xì)胞因子。IL-17RA是IL-17A的受體，IL-17RC是IL-17A和IL-17F的共同受體。本發(fā)明包括可溶性的IL-17A和IL-17F拮抗劑，以及使用這類拮抗劑的方法。文檔編號C07K14/00GK101316861SQ200680044249公開日2008年12月3日申請日期2006年9月28日優(yōu)先權(quán)日2005年9月28日發(fā)明者D·W·塔夫特,J·比爾斯伯勒,K·E·劉易斯,M·W·里克森,S·D·萊文,Z·高申請人:津莫吉尼蒂克斯公司