專利名稱：一種鼠尾草酸的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種化學(xué)提取方法,特別涉及迷迭香抗氧化劑有效成分鼠尾草酸(英文名Camosicacid，分子式C2。H2804，結(jié)構(gòu)式式(a))的提取方法。迷迭香(RosmarinusoffoconalisL.)別名艾菊，屬于唇形科亞灌木或多年 生草本植物。含有單萜類、倍半萜類、二萜酚和二萜琨類、黃酮類、三萜類、 脂肪酸、多支鏈垸烴、鞣質(zhì)及氨基酸等化學(xué)成分。其中二萜酚類主要包括鼠尾 草酸、鼠尾草酚、迷迭香酚、異迷迭香酚、7—乙氧基迷迭香酚、7—甲氧基迷 迭香酚等，具有明顯的抗氧化性能，對人體無公害，逐漸取代人工合成的2 — 或3 —叔丁基一4一羥基茴香醚(BHA)、 2—叔丁基對苯二酚(TBHQ)、 2， 6 一二叔丁基對甲酚(BHT)等抗氧化劑被應(yīng)用于魚類、油炸食品和食物油的長 期儲存中。除此之外還大量用于醫(yī)藥，化妝品領(lǐng)域(屠鵬飛，徐占輝，等.新 型資源植物迷迭香的化學(xué)成分及其應(yīng)用[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，1997， 10(3): 62)。而鼠尾草酸又是二萜酚類的典型代表，可有效的抑制油脂的過氧化物形 成和多烯脂肪酸的分解。另外，在抑制HIV—1蛋白酶的活性試驗(yàn)中，鼠尾草 酸的活性最強(qiáng)(Inhibitory effect of carnosic acid on HIV-l protease in cell-free assays. Journal of Natural Products. 1993(56): 1426-1430)。CN1600303A報(bào)道了鼠尾草酸能夠抑制柯薩奇病毒的活性，特別是柯薩奇 B3型病毒活性，是制備治療柯薩奇病毒感染疾病的藥物。目前，鼠尾草酸的背景技術(shù)用途主要用其含量來評價(jià)迷迭香抗氧化劑抗氧化性能的高低和藥理5開究兩大 方面。在鼠尾草酸的提純上，U.S.Pat.No.5，859，293利用調(diào)節(jié)溶液PH值來提取鼠 尾草酸，堿化PH值范圍是7 10，最優(yōu)為8.6 9.0，酸化最佳范圍PH為2.0 2.5，但是該專利申請規(guī)定的堿化范圍太大，會引起大量其他物質(zhì)參與反應(yīng)； 酸化時(shí)，在其規(guī)定的最佳酸化范圍PH二2.0時(shí)會有大量其他成分出現(xiàn)，鼠尾草 酸的含量低；而超過PH-2.5時(shí)仍會有大量鼠尾草酸被提取。所以該專利申請 得到的是鼠尾草酸粗品，需結(jié)晶后才能得到高純度的產(chǎn)品。U.S. Pat.No.5，256,700采用非極性溶劑提取迷迭香干葉，蒸干溶劑得到提 取物，再用少量極性溶劑溶解過濾，濾液經(jīng)吸附劑吸附使鼠尾草酸與其他非極 性提取物分離，接著用大量極性溶劑解吸附，最后蒸干溶劑得到鼠尾草酸。但 是迷迭香中除了鼠尾草酸還含有其他極性化合物例如迷迭香酸、迷迭香二醛 等，導(dǎo)致得到的鼠尾草酸平均含量為73%左右。CN1600303A報(bào)道了迷迭香干葉用乙醇提取，氯仿萃取后進(jìn)行硅膠柱層析 分離，經(jīng)薄層檢測，將其中含有鼠尾草酸的流份進(jìn)行葡聚糖柱的分離，最后得 到鼠尾草酸部分。此法雖然能得到純的鼠尾草酸，但是需要兩次過柱分離，程 序復(fù)雜，操作煩瑣。除此之外，還有利用化學(xué)反應(yīng)合成鼠尾草酸的方^^。例如W. L. Meyer, J. Org. Chem., 1976(41): 1005.及A Concise Approach to the Synthesis of Carnosic Acid Type Diterpenes. Yu Xin Cui, Qiang Xiao， ect. Chinese Chemical Letters. 2001,12:203-204等。但是不僅化學(xué)合成步驟多，而且反應(yīng)復(fù)雜，副產(chǎn)物多， 不易工業(yè)化。發(fā)明內(nèi)容為了解決上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，本發(fā)明的目的在于提供一種鼠尾草酸 的提取方法。該方法無需結(jié)晶，最高可達(dá)純度為99.42%,且提取程序簡單易 操作，耗時(shí)短。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn) 一種鼠尾草酸的提取方法，包括如 下步驟將迷迭香干葉浸泡在有機(jī)溶劑中，在20 55。C超聲提取10 60min，過濾 得到迷迭香干葉提取液；在迷迭香干葉提取液中加入活性炭，所述活性炭迷 迭香干葉提取液的質(zhì)量比是1 : 15 1 :25，在25 45r超聲脫色5 20min， 過濾1 2次得到提取液，將提取液蒸干有機(jī)溶劑，得到固體；在上述固體中 加入乙二胺四乙酸二鈉鹽(EDTA)水溶液，使固體分散，再加入堿調(diào)節(jié)PH 值范圍為8.0 9.5使鼠尾草酸成鹽進(jìn)入溶液，過濾得到濾液，然后滴加酸調(diào)節(jié) PH值為2.3 3.0至濾液中有沉淀生成，過濾得到沉淀，沉淀干燥即得到鼠尾 草酸；所述有機(jī)溶劑可以是丙酮或者乙醇等。為了更好地實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，所述迷迭香干葉質(zhì)量有機(jī)溶劑體積的比為1 :6。所述的超聲提取優(yōu)選條件是溫度30 4(TC下超聲提取30 45min，如果溫 度太高、時(shí)間太長，大量植物纖維也會被提取，給之后的脫色操作帶來麻煩。所述的活性炭迷迭香干葉提取液的質(zhì)量比優(yōu)選是1 : 20，如果活性炭使 用量太少，脫葉綠素不完全；太多，造成浪費(fèi)且給之后的過濾工作帶來不便。所述的超聲脫色條件優(yōu)選是溫度30 4(TC下超聲脫色10 15min。若脫色 時(shí)間太長，活性炭粉碎太細(xì)給過濾工作帶來麻煩；脫色時(shí)間太短，葉綠素脫色 不完全。所述的乙二胺四乙酸二鈉鹽(EDTA)水溶液的濃度為90g/L，黃褐色固 體質(zhì)量乙二胺四乙酸二鈉鹽(EDTA)水溶液體積的比為1 : 20。所述的堿可以是NaHC03或者無水Na2C03。所述堿的物質(zhì)的量約是鼠尾 草酸的物質(zhì)的量的2.5倍(鼠尾草酸的質(zhì)量含量按迷迭香干葉的3.32%計(jì)算)。所述的酸可以是磷酸或者鹽酸。所述加入堿調(diào)節(jié)PH值范圍優(yōu)選是8.3 8.5，最大選擇性的只讓鼠尾草酸 成為鹽進(jìn)入溶液。若PH值過大，會導(dǎo)致迷迭香中的部分酸性成分和二萜酚類 化合物成鹽與鼠尾草酸鹽同時(shí)進(jìn)入水溶液；PH值過小，會使鼠尾草酸反應(yīng)不 完全，降低轉(zhuǎn)化率。所述滴加酸調(diào)節(jié)PH值范圍優(yōu)選是2.4 2.6，只使溶液中的鼠尾草酸鹽轉(zhuǎn) 化成鼠尾草酸。若PH值過大，導(dǎo)致部分鼠尾草酸鹽未能反應(yīng)生成鼠尾草酸， 降低產(chǎn)率；PH值過小，會造成進(jìn)入溶液中的極少量其他鹽類也成為相應(yīng)的酸 或酚類化合物與鼠尾草酸同時(shí)成為沉淀析出，影響純度。鼠尾草酸的表征見圖l、圖2、圖3、圖4和圖5。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下優(yōu)點(diǎn)和有益效果本發(fā)明通過兩歩控制溶液PH值，選擇性的先使鼠尾草酸成鹽進(jìn)入水溶液
與迷迭香中的其他有機(jī)成分分離，再酸化只讓鼠尾草酸成為有機(jī)相從水溶液中提取出來，從而達(dá)到提純目的；該方法無需結(jié)晶，最高可達(dá)純度為99.42。％， 而且提取程序簡單易操作，耗時(shí)短。 '


圖l(a)是鼠尾草酸的^-NMR (CDCl3溶劑)譜圖。圖l(b)為圖1(a)0.2ppm 3.5ppm"H-NMR (CDCl3溶齊U)譜圖的放大圖。圖2為鼠尾草酸的13C-NMR (CDCl3溶劑)譜圖。圖3為鼠尾草酸的紅外光譜。圖4為鼠尾草酸的質(zhì)譜。圖5為鼠尾草酸的高效液相色譜圖。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方 式不限于此。試劑與儀器試驗(yàn)中所用試劑為分析純試劑。水為蒸餾水或相當(dāng)純度的水。甲醇，液相 色譜級。乙腈，液相色譜級。乙酸，液相色譜級。高效液相色譜儀，配有紫外檢測器，C18B060904型色譜柱，Kromasil ODS， 5um的色譜柱填料。操作條件為a.柱溫室溫，b.檢測波長216nm， c.流動相乙腈0.5%乙酸水溶液=75:25， d.流速1.00ml/min， e.進(jìn)樣量20ul。PHS-3C精密PH計(jì)；RE—51旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀；KQ3200DB型數(shù)控超聲波清洗 器；磁子攪拌器。實(shí)施例1稱取30克迷迭香干葉(市售，下同)，浸泡在180ml丙酮(迷迭香干葉質(zhì) 量有機(jī)溶劑體積為1 6)中，35'C下超聲提取40min，過濾得到草綠色迷迭 香干葉提取液。向草綠色迷迭香干葉提取液中加入9克活性炭(活性炭迷迭 香干葉提取液的質(zhì)量比為1 : 20)，在40。C超聲脫色10min。過濾2次得到棕 紅色透明提取液。棕紅色透明提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干丙酮，得到黃褐色固體。 黃褐色固體中加入EDTA水溶液(EDTA水溶液濃度為90g/L;黃褐色固體質(zhì) 量EDTA水溶液的體積-1 : 20)，使固體分散，加入無水Na2C03 (90g/L)調(diào)節(jié)PH值為8.5(NaC03的物質(zhì)的量約是鼠尾草酸的物質(zhì)的量的2.5倍，鼠尾 草酸的質(zhì)量含量按迷迭香干葉的3.32%計(jì)算)過濾得到透明棕紅色濾液。滴加 濃磷酸(H3P04含量不低于85X)至透明棕紅色濾液中，調(diào)節(jié)PH值為2.5有 沉淀生成，過濾沉淀，干燥，即為鼠尾草酸。經(jīng)高效液相色譜分析純度為99.42 %，產(chǎn)率為98.53%。實(shí)施例2稱取30克迷迭香干葉，浸泡在180ml丙酮(迷迭香干葉質(zhì)量丙酮體積 為1 : 6)中，4(TC超聲提取30min，過濾得到草綠色迷迭香干葉提取液。向草 綠色迷迭香干葉提取液中加入9克活性炭(活性炭迷迭香干葉提取液的質(zhì)量 比為1 : 20)，在45r超聲脫色5min。過濾2次得到棕紅色透明提取液。棕紅 色透明提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干丙酮，得到黃褐色固體。黃褐色固體中加入 EDTA水溶液(EDTA水溶液濃度為90g/L;黃褐色固體質(zhì)量EDTA水溶液 的體積二l :20)，使固體分散，加入無水Na2CCb (90g/L)調(diào)節(jié)PH值為 8.3(NaC03的物質(zhì)的量約是鼠尾草酸的物質(zhì)的量的2.5倍，鼠尾草酸的質(zhì)量含 量按迷迭香干葉的3.32%計(jì)算)過濾得到透明棕紅色濾液。滴加濃磷酸(H3P04 含量不低于85。X)至透明棕紅色濾液中調(diào)節(jié)PH值為3.0，有沉淀生成，過濾 沉淀，晾干，即為鼠尾草酸。經(jīng)高效液相色譜分析純度為93.93%,產(chǎn)率為98.36實(shí)施例3稱取30克迷迭香干葉，浸泡在180ml乙醇(迷迭香干葉質(zhì)量乙醇體積 的比為1 : 6)中，3(TC下超聲提取45min，過濾得到草綠色迷迭香干葉提取液。 向草綠色迷迭香干葉提取液中加入9克活性炭(活性炭迷迭香干葉提取液的 質(zhì)量比為l :20),在3(TC超聲脫色15min。過濾2次得到棕紅色透明提取液。 棕紅色透明提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干乙醇，得到黃褐色固體。黃褐色固休中加 入EDTA水溶液(EDTA水溶液濃度為90g/L;黃褐色固體質(zhì)量EDTA水溶 液的體積二l :20)，使固體分散，加入無水Na2C03 (90g/L)調(diào)節(jié)PH值為 8.5(NaC03的物質(zhì)的量約是鼠尾草酸的物質(zhì)的量的2.5倍，鼠尾草酸的質(zhì)量含 量按迷迭香干葉的3.32%計(jì)算)過濾得到透明棕紅色濾液。滴加鹽酸至透明棕 紅色濾液中調(diào)節(jié)PH值為2.3，有沉淀生成，過濾沉淀，晾干，即為鼠尾草酸。
經(jīng)高效液相色譜分析純度為94.13%，產(chǎn)率為96.20%。 實(shí)施例4稱取30克迷迭香干葉，浸泡在180ml丙酮(迷迭香干葉質(zhì)量有機(jī)溶劑 體積為1:6)中，55t:超聲提取10min，過濾得到草綠色迷迭香干葉提取液。 向草綠色迷迭香干葉提取液中加入6克活性炭(活性炭迷迭香干葉提取液的 質(zhì)量比為l : 15)，在25r超聲脫色20min。過濾1次得到棕紅色透明提取液。 棕紅色透明提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干丙酮，得到黃褐色固體。黃褐色固體中加 入EDTA水溶液(EDTA水溶液濃度為90g/L;黃褐色固體質(zhì)量EDTA水溶 液的體積二1:20)，使固體分散，滴加NaHC03堿化，調(diào)節(jié)PH值到8.0，過 濾得到透明棕紅色濾液。再滴加濃磷酸(H3P04含量不低于85%)至透明棕紅 色濾液中調(diào)節(jié)PH值為2.4，有沉淀生成，過濾沉淀，晾干，即為鼠尾草酸。 經(jīng)高效液相色譜分析純度為89.96%，產(chǎn)率為90.32%。實(shí)施例5稱取30克迷迭香干葉，浸泡在180ml丙酮(迷迭香干葉質(zhì)量有機(jī)溶劑 體積為1 : 6)中，2(TC下超聲提取60min，過濾得到草綠色迷迭香干葉提取液。 向草綠色迷迭香干葉提取液中加入12克活性炭(活性炭迷迭香干葉提取液 的質(zhì)量比為1:25)，在35r超聲脫色12min。過濾2次得到棕紅色透明提取 液。棕紅色透明提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干丙酮，得到黃褐色固體。黃褐色固體 中加入EDTA水溶液(EDTA水溶液濃度為90g/L;黃褐色固體質(zhì)量EDTA 水溶液的體積二l :20)，使固體分散，滴加NaHC03堿化，調(diào)節(jié)PH值為9.5， 過濾得到透明棕紅色濾液。再滴加鹽酸至透明棕紅色濾液中調(diào)節(jié)PH值為2.9， 有沉淀生成，過濾沉淀，晾干，得到大量不溶于甲醇的白色粉末和極少量鼠尾 草酸。上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí) 施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、 替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1、一種鼠尾草酸的提取方法，其特征在于包括如下步驟將迷迭香干葉浸泡在有機(jī)溶劑中，在20～55℃超聲提取10～60min，過濾得到迷迭香干葉提取液；在迷迭香干葉提取液中加入活性炭，所述活性炭∶迷迭香干葉提取液的質(zhì)量比是1∶15～1∶25，在25～45℃超聲脫色5～20min，過濾1～2次得到提取液，將提取液蒸干有機(jī)溶劑，得到固體；在上述固體中加入乙二胺四乙酸二鈉鹽水溶液，使固體分散，再加入堿調(diào)節(jié)PH值范圍為8.0～9.5，過濾得到濾液，然后滴加酸調(diào)節(jié)PH值為2.3～3.0至濾液中有沉淀生成，過濾得到沉淀，沉淀干燥得到鼠尾草酸；所述有機(jī)溶劑是丙酮或者乙醇。
2、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種鼠尾草酸的提取方法，其特征在于'所述迷 迭香干葉質(zhì)量有機(jī)溶劑體積的比為1 : 6。
3、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種鼠尾草酸的提取方法，其特征在于所述超 聲提取條件是溫度30 4(TC下超聲提取30 45min。
4、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種鼠尾草酸的提取方法，其特征在于所述活 性炭迷迭香干葉提取液的質(zhì)量比是1 : 20。
5、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種鼠尾草酸的提取方法，其特征在于所述超聲脫色條件是溫度30 40。C下超聲脫色10 15min。
6、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種鼠尾草酸的提取方法， 二胺四乙酸二鈉鹽水溶液的濃度為90g/L，黃褐色固體質(zhì)〗 鹽水溶液的體積的比為1 : 20。
7、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種鼠尾草酸的提取方法，其特征在于所述的 堿是NaHC03或者無水Na2C03。
8、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種鼠尾草酸的提取方法，其特征在于所述的酸是磷酸或者鹽酸。
9、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種鼠尾草酸的提取方法，其特征在于所述加入堿調(diào)節(jié)PH值范圍是8.3 8.5。
10、 根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種鼠尾草酸的提取方法，其特征在于所述 滴加酸調(diào)節(jié)PH值范圍是2.4 2.6。其特征在于所述乙 ::乙二胺四乙酸二鈉
全文摘要
本發(fā)明公開了一種鼠尾草酸的提取方法，該方法如下將迷迭香干葉浸泡在有機(jī)溶劑中，在20～55℃超聲提取10～60min，過濾得到迷迭香干葉提取液；在迷迭香干葉提取液中加入活性炭，所述活性炭∶迷迭香干葉提取液的質(zhì)量比是1∶15～1∶25，在25～45℃超聲脫色5～20min，過濾1～2次得到提取液，將提取液蒸干有機(jī)溶劑，得到固體；在上述固體中加入乙二胺四乙酸二鈉鹽水溶液，使固體分散，再加入堿調(diào)節(jié)pH值范圍為8.0～9.5，過濾得到濾液，然后滴加酸調(diào)節(jié)pH值為2.3～3.0至濾液中有沉淀生成，過濾得到沉淀，沉淀干燥即得到鼠尾草酸；本發(fā)明無需結(jié)晶，最高可達(dá)純度為99.42％，而且提取程序簡單易操作，耗時(shí)短。
文檔編號C07C62/00GK101113133SQ20071002752
公開日2008年1月30日 申請日期2007年4月12日 優(yōu)先權(quán)日2007年4月12日
發(fā)明者哈成勇, 沈丹丹, 沈敏敏 申請人:中國科學(xué)院廣州化學(xué)研究所