專利名稱：溶桿菌素酰胺的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及下式的化合物
其中 R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基，芐基，2-吡啶基甲基，3-吡啶基甲基，2-噻吩基甲基，3-噻吩基甲基或1，3-噻唑-4-基甲基， 其中芐基，2-吡啶基甲基，3-吡啶基甲基，2-噻吩基甲基，3-噻吩基甲基和1，3-噻唑-4-基甲基可以被1或2個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，三氟甲基，甲基和甲氧基， R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基，芐基，2-吡啶基甲基，3-吡啶基甲基，2-噻吩基甲基，3-噻吩基甲基或1，3-噻唑-4-基甲基， 其中芐基，2-吡啶基甲基，3-吡啶基甲基，2-噻吩基甲基，3-噻吩基甲基和1，3-噻唑-4-基甲基可以被1或2個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，三氟甲基，甲基和甲氧基， R3表示氫，C1-C4-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基或5-或6-元雜芳基甲基， 其中環(huán)烷基，環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，雜芳基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基，C1-C4-烷基氨基羰基和通過(guò)氮結(jié)合的5-或6-元雜環(huán)基， R4表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基，5-或6-元雜芳基甲基，三甲基甲硅烷基甲基或2-氨基-2-氧代乙基， 其中烷基可以被1-3個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基， 且 其中環(huán)烷基，環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，雜芳基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基， R5表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基，5-或6-元雜芳基甲基，三甲基甲硅烷基甲基或2-氨基-2-氧代乙基， 其中烷基可以被1-3個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基， 且 其中環(huán)烷基，環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，雜芳基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基， R6表示C1-C6-烷基， 其中烷基被選自由下列組成的組的取代基取代氨基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基，[氨基-(亞氨基)甲基]氨基，2-吡啶基，3-吡啶基和4-吡啶基， R7表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基，5-或6-元雜芳基甲基或三甲基甲硅烷基甲基， 其中烷基可以被1-3個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基， 并且 其中環(huán)烷基，環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，雜芳基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基， R8表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基，5-或6-元雜芳基甲基，三甲基甲硅烷基甲基或2-氨基-2-氧代乙基， 其中烷基可以被1-3個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基， 并且 其中環(huán)烷基，環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，雜芳基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基， R9表示氫，C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基，5-或6-元雜芳基甲基，三甲基甲硅烷基甲基或2-氨基-2-氧代乙基， 其中烷基可以被1-3個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基， 并且 其中環(huán)烷基，環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，雜芳基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基， R10表示氫，C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基，5-或6-元雜芳基甲基，三甲基甲硅烷基甲基，2-氨基-2-氧代乙基，2-氨基-1-羥基-2-氧代乙基，(氨基磺?；?(羥基)甲基，2-(C1-C4-烷基氨基)-2-氧代乙基或2-(C1-C4-烷基氨基)-1-羥基-2-氧代乙基， 其中烷基可以被選自由下列組成的組的取代基取代鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基， 并且 其中環(huán)烷基，環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，雜芳基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基， R11表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基，5-或6-元雜芳基甲基，三甲基甲硅烷基甲基，2-氨基-2-氧代乙基，2-氨基-1-羥基-2-氧代乙基，(氨基磺?；?(羥基)甲基，2-(C1-C4-烷基氨基)-2-氧代乙基或2-(C1-C4-烷基氨基)-1-羥基-2-氧代乙基， 其中烷基可以被選自由下列組成的組的取代基取代鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基， 并且 其中環(huán)烷基，環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，雜芳基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基， 和它的鹽、它的溶劑合物或它的鹽的溶劑合物， 除了下式的化合物以外，
其中 R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基，芐基，2-吡啶基甲基，3-吡啶基甲基，2-噻吩基甲基，3-噻吩基甲基或1，3-噻唑-4-基甲基， 其中芐基，2-吡啶基甲基，3-吡啶基甲基，2-噻吩基甲基，3-噻吩基甲基和1，3-噻唑-4-基甲基可以被1或2個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，三氟甲基，甲基和甲氧基， R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基，芐基，2-吡啶基甲基，3-吡啶基甲基，2-噻吩基甲基，3-噻吩基甲基或1，3-噻唑-4-基甲基， 其中芐基，2-吡啶基甲基，3-吡啶基甲基，2-噻吩基甲基，3-噻吩基甲基和1，3-噻唑-4-基甲基可以被1或2個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，三氟甲基，甲基和甲氧基， 并且 R12表示氫或甲基， 及其鹽，其溶劑合物及其鹽的溶劑合物。
本發(fā)明的化合物是式(I)的化合物及其鹽、溶劑合物及其鹽的溶劑合物和前藥，由式(I)包括的和以下提及的式的化合物和它們的鹽、溶劑合物、所述鹽的溶劑合物和前藥，以及由式(I)包括的并且在下文提及的作為示例性實(shí)施方案的化合物和它們的鹽、溶劑合物、所述鹽的溶劑合物和前藥，就由式(I)所涵蓋并且在后來(lái)提及的化合物而言，它們還不是鹽、溶劑合物、所述鹽的溶劑合物和前藥。
取決于它們的結(jié)構(gòu)，本發(fā)明的化合物可以以立體異構(gòu)型(對(duì)映異構(gòu)體，非對(duì)映異構(gòu)體)形式存在。因此，本發(fā)明涉及對(duì)映異構(gòu)體或非對(duì)映異構(gòu)體及其各自的混合物。從對(duì)映異構(gòu)體和/或非對(duì)映異構(gòu)體的這些混合物中，立體異構(gòu)純的組分可以以已知方式分離出來(lái)。
如果本發(fā)明的化合物可以以互變異構(gòu)形式存在，本發(fā)明包括所有的互變異構(gòu)形式。
優(yōu)選用于本發(fā)明的目的鹽是本發(fā)明的化合物的生理可接受的鹽。然而，本身不適合于藥物應(yīng)用但是可以用于例如分離或純化本發(fā)明的化合物的鹽或混合鹽也被包括在內(nèi)。對(duì)于本發(fā)明的目的而言，混合鹽是指含有兩種或多種不同酸或堿的加成鹽，例如三氟乙酸鹽甲磺酸鹽。
本發(fā)明化合物的生理可接受的鹽包括無(wú)機(jī)酸、羧酸和磺酸的酸加成鹽，例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、三氟乙酸、丙酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、富馬酸、馬來(lái)酸和苯甲酸的鹽。
本發(fā)明的化合物的生理可接受的鹽還包括常用的堿的鹽，諸如，作為實(shí)例，并且優(yōu)選地堿金屬鹽(例如，鈉和鉀鹽)，堿土金屬鹽(例如鈣和鎂鹽)和衍生自氨或具有1-16個(gè)碳原子的有機(jī)胺的銨鹽，所述有機(jī)胺諸如作為實(shí)例，并且優(yōu)選地，乙胺、二乙胺、三乙胺、乙基二異丙胺、單乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二環(huán)已胺、二甲基氨基乙醇、普魯卡因、二芐胺、N-甲基嗎啉、精氨酸、賴氨酸、乙二胺和N-甲基哌啶。
對(duì)于本發(fā)明的目的而言，溶劑合物指通過(guò)與溶劑分子的配位作用形成固體或液體狀態(tài)的復(fù)合物的本發(fā)明的化合物的那些形式。水合物是溶劑合物的特殊形式，其中與水發(fā)生配位作用。
對(duì)于本發(fā)明的目的而言，除非另外指出，取代基具有下列含義 烷基本身以及烷氧基，烷基氨基，烷基羰基，烷氧基羰基和烷基羰基氨基中的“alk(烷基)”和“alkyl(烷基)”表示通常具有1至6個(gè)、優(yōu)選1至4個(gè)、特別優(yōu)選1至3個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烷基基團(tuán)，作為實(shí)例并且優(yōu)選甲基、乙基、正丙基、異丙基、叔丁基、2，2-二甲基丙-1-基、2，2-二甲基丁-1-基、正戊基和正己基。
烷氧基，作為實(shí)例并且優(yōu)選表示甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙氧基、叔丁氧、正戊氧基和正己氧基。
烷氧基羰基作為實(shí)例并優(yōu)選表示甲氧基羰基，乙氧基羰基，正-丙氧基羰基，異丙氧基羰基，叔-丁氧羰基，正-戊氧基羰基和正-己氧基羰基。
烷基氨基表示具有一個(gè)或兩個(gè)(彼此獨(dú)立地選擇的)烷基取代基的烷基氨基，作為實(shí)例并且優(yōu)選甲基氨基，乙基氨基，正-丙基氨基，異丙基氨基，叔-丁基氨基，正-戊基氨基，正-己基氨基，N，N-二甲基氨基，N，N-二乙基氨基，N-乙基-N-甲基氨基，N-甲基-N-正-丙基氨基，N-異丙基-N-正-丙基氨基，N-叔-丁基-N-甲基氨基，N-乙基-N-正-戊基氨基和N-正-己基-N-甲基氨基。C1-C3-烷基氨基，例如，表示具有1至3個(gè)碳原子的單烷基氨基基團(tuán)或每個(gè)烷基取代基具有1至3個(gè)碳原子的二烷基氨基基團(tuán)。
烷基氨基羰基表示具有一個(gè)或兩個(gè)烷基取代基(彼此獨(dú)立地選擇)的烷基氨基羰基，作為實(shí)例并且優(yōu)選地甲基氨基羰基，乙基氨基羰基，正丙基氨基羰基，異丙基氨基羰基，叔丁基氨基羰基，正戊基氨基羰基，正已基-氨基羰基，N，N-二甲基氨基羰基，N，N-二乙基氨基羰基，N-乙基-N-甲基氨基羰基，N-甲基-N-正丙基氨基羰基，N-異丙基-N-正丙基氨基羰基，N-叔丁基-N-甲基氨基羰基，N-乙基-N-正戊基氨基羰基和N-正已基-N-甲基氨基羰基。C1-C3-烷基氨基羰基表示例如具有1-3個(gè)碳原子的單烷基氨基羰基原子團(tuán)或每個(gè)烷基取代基具有1-3個(gè)碳原子的二烷基氨基羰基。
環(huán)烷基表示通常具有3至7個(gè)碳原子的環(huán)烷基基團(tuán)，作為實(shí)例并優(yōu)選為環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基和環(huán)庚基。
雜環(huán)基表示具有5或6個(gè)環(huán)原子和最多3個(gè)選自N，O，S，SO，SO2系列的雜原子和/或雜基團(tuán)的單環(huán)，雜環(huán)基團(tuán)，其中氮原子也可以形成N-氧化物。雜環(huán)基基團(tuán)可以是飽和的或部分飽和的，作為實(shí)例并優(yōu)選為吡咯烷-2-基，吡咯烷-3-基，吡咯啉基，四氫呋喃基，四氫噻吩基，吡喃基，哌啶-1-基，哌啶-2-基，哌啶-3-基，哌啶-4-基，噻喃基，嗎啉-1-基，嗎啉-2-基，嗎啉-3-基。
雜芳基表示具有5或6個(gè)環(huán)原子和最多4個(gè)選自S，O和N的雜原子的芳香族單環(huán)基團(tuán)，作為實(shí)例并且優(yōu)選地噻吩基，呋喃基，吡咯基，噻唑基，噁唑基，咪唑基，吡啶基，嘧啶基和噠嗪基。
鹵素表示氟，氯，溴和碘，優(yōu)選氟和氯。
優(yōu)選式(I)的化合物，其中 R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基，芐基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基， 其中芐基，2-吡啶基甲基和3-吡啶基甲基可以被1或2個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，三氟甲基和甲基， R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基，芐基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基， 其中芐基，2-吡啶基甲基和3-吡啶基甲基可以被1或2個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，三氟甲基和甲基， R3表示C1-C4-烷基，苯基，芐基，2-吡啶基，3-吡啶基或4-吡啶基， 其中苯基，芐基，2-吡啶基，3-吡啶基和4-吡啶基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-烷基氨基， R4表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，芐基，5-或6-元雜芳基甲基或三甲基甲硅烷基甲基， 其中烷基可以被羥基取代基取代， 并且 其中環(huán)烷基甲基，芐基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基， R5表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基甲基或三甲基甲硅烷基甲基， 其中烷基可以被選自由下列組成的組的取代基取代鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基， 并且 其中環(huán)烷基甲基，苯基，芐基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-烷基氨基， R6表示C1-C6-烷基， 其中烷基被選自由下列組成的組的取代基取代氨基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基，[氨基-(亞氨基)甲基]氨基，2-吡啶基，3-吡啶基和4-吡啶基， R7表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基甲基或三甲基甲硅烷基甲基， 其中烷基可以被選自由下列組成的組的取代基取代鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基， 并且 其中環(huán)烷基甲基，苯基，芐基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-烷基氨基， R8表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，芐基，5-或6-元雜芳基甲基或三甲基甲硅烷基甲基， 其中烷基可以被羥基取代基取代， 并且 其中環(huán)烷基甲基，芐基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基， R9表示氫，C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，苯基，三甲基甲硅烷基甲基或2-氨基-2-氧代乙基， 其中甲基可以被選自由下列組成的組的取代基取代羥基，氨基和巰基， 并且 其中環(huán)烷基和苯基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-烷基氨基， R10表示氫，C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，苯基，三甲基甲硅烷基甲基，2-氨基-2-氧代乙基，2-氨基-1-羥基-2-氧代乙基，(氨基磺?；?(羥基)甲基，2-(C1-C4-烷基氨基)-2-氧代乙基或2-(C1-C4-烷基氨基)-1-羥基-2-氧代乙基， 其中烷基可以被選自由下列組成的組的取代基取代鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基， 并且 其中環(huán)烷基和苯基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-烷基氨基， R11表示甲基或乙基， 其中甲基和乙基可以被選自由下列組成的組的取代基取代羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基， 及其鹽，其溶劑合物及其鹽的溶劑合物， 除了式(Ia)的化合物以外，所述式(Ia)中 R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基，芐基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基， 其中芐基，2-吡啶基甲基和3-吡啶基甲基可以被1或2個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，三氟甲基和甲基， R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基，芐基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基， 其中芐基，2-吡啶基甲基和3-吡啶基甲基可以被1或2個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，三氟甲基和甲基， 并且 R12表示氫或甲基， 及其鹽，其溶劑合物及其鹽的溶劑合物。
還優(yōu)選式(I)的化合物，其中 R1表示2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基， R2表示2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基， R3表示C1-C4-烷基，3-吡啶基或苯基， 其中3-吡啶基或苯基可以被選自由下列組成的組的取代基取代鹵素，氰基，甲基，甲氧基，二甲基氨基和二乙基氨基， R4表示-CH(OH)-C1-C5-烷基或-CH(OH)苯基， 其中-CH(OH)苯基可以被1-3個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-二烷基氨基， R5表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，芐基或三甲基甲硅烷基甲基， R6表示直鏈C2-C4-烷基， 其中烷基被選自由下列組成的組的取代基取代氨基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基， R7表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，芐基或三甲基甲硅烷基甲基， R8表示C1-C4-烷基，-CH2-OH，-CH(OH)-C1-C5-烷基或-CH(OH)苯基， 其中-CH(OH)苯基可以被1-3個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-二烷基氨基， R9表示氫，C1-C6-烷基，羥基甲基或2-氨基-2-氧代乙基， R10表示氫，C1-C4-烷基，2-氨基-2-氧代乙基或2-氨基-1-羥基-2-氧代乙基， 其中C1-C4-烷基可以被選自由下列組成的組的取代基取代氨基和羥基，除了R10不是4-氨基丁-1-基以外， R11表示甲基， 其中甲基被選自由下列組成的組的取代基取代羥基和氨基， 及其鹽，其溶劑合物及其鹽的溶劑合物， 除了式(Ia)的化合物以外，所述式(Ia)中 R1表示2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基， R2表示2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基， 并且 R12表示氫或甲基， 及其鹽，其溶劑合物及其鹽的溶劑合物。
還優(yōu)選式(I)的化合物，其中 R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基或芐基， 其中芐基可以被1或2個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，三氟甲基和甲基， 或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
還優(yōu)選式(I)的化合物，其中 R1表示2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基或三甲基甲硅烷基甲基， 或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
優(yōu)選式(I)的化合物，其中 R2表示2，2-二甲基丙-1-基或3-吡啶基甲基， 或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
還優(yōu)選式(I)的化合物，其中 R3表示苯基，芐基，2-吡啶基，3-吡啶基或4-吡啶基， 其中苯基，芐基，2-吡啶基，3-吡啶基和4-吡啶基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-烷基氨基， 或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
還優(yōu)選式(I)的化合物，其中 R3表示苯基， 其中苯基可以被選自由下列組成的組的取代基取代鹵素，氰基，甲基，甲氧基，二甲基氨基和二乙基氨基， 或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
還優(yōu)選式(I)的化合物，其中 R8表示-CH(OH)-C1-C5-烷基或-CH(OH)苯基， 其中-CH(OH)苯基可以被1-3個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-二烷基氨基，和 或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
還優(yōu)選式(I)的化合物，其中 R10表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基，5-或6-元雜芳基甲基，三甲基甲硅烷基甲基，2-氨基-2-氧代乙基，2-氨基-1-羥基-2-氧代乙基，(氨基磺?；?(羥基)甲基，2-(C1-C4-烷基氨基)-2-氧代乙基或2-(C1-C4-烷基氨基)-1-羥基-2-氧代乙基， 其中烷基可以被選自由下列組成的組的取代基取代鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基， 并且 其中環(huán)烷基，環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，雜芳基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基， 或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
優(yōu)選式(I)的化合物，其中 R10表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，苯基，三甲基甲硅烷基甲基，2-氨基-2-氧代乙基，2-氨基-1-羥基-2-氧代乙基，(氨基磺?；?(羥基)-甲基，2-(C1-C4-烷基氨基)-2-氧代乙基或2-(C1-C4-烷基氨基)-1-羥基-2-氧代乙基， 其中烷基可以被選自由下列組成的組的取代基取代鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基， 并且 其中環(huán)烷基和苯基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-烷基氨基， 或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
還優(yōu)選式(I)的化合物，其中 R10表示甲基，乙基，2-氨基-2-氧代乙基或2-氨基-1-羥基-2-氧代乙基， 其中甲基和乙基可以被羥基取代基取代， 或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
本發(fā)明還涉及制備式(I)的化合物的方法，其中 [A]式(II)的化合物
其中 R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9，R10和R11具有上述含義， 首先與式(III)的化合物反應(yīng)，
其中 R1和R2具有上述含義， Y1表示叔丁氧羰基或芐氧基羰基，并且 X1表示鹵素，優(yōu)選地溴，氯或氟，或羥基， 并然后與酸和/或通過(guò)氫解反應(yīng)， 或 [B]式(IV)的化合物
其中 R4，R5，R6，R7，R8，R9，R10和R11具有上述含義， 首先與式(V)的化合物反應(yīng)，
其中 R1，R2和R3具有上述含義，并且 Y1表示叔丁氧羰基或芐氧基羰基， 并且然后，在4-步合成中， a)與氟化物試劑如氟化四丁基銨反應(yīng)， b)與酸反應(yīng)， c)當(dāng)適合時(shí)在堿的存在下與脫水劑反應(yīng)，和 d)通過(guò)氫解反應(yīng)。
方法[A] 如果X1是鹵素，第一步的反應(yīng)通常在惰性溶劑中，當(dāng)合適時(shí)在存在堿的情況下，優(yōu)選在大氣壓下在-30℃至50℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。
惰性溶劑的實(shí)例是四氫呋喃、二氯甲烷、吡啶、二噁烷、二甲基乙酰胺、N-甲基吡咯烷或二甲基甲酰胺；優(yōu)選吡啶或二甲基甲酰胺。
堿的實(shí)例是三乙胺、二異丙基乙胺或N-甲基嗎啉；優(yōu)選二異丙基乙胺。
如果X1是羥基，第一步的反應(yīng)一般在脫水劑存在下、在惰性溶劑中，當(dāng)合適時(shí)在堿存在下，優(yōu)選在大氣壓下在-30℃至50℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。
惰性溶劑的實(shí)例是鹵代烴諸如二氯甲烷或三氯甲烷，烴諸如苯、硝基甲烷、二噁烷、二甲基甲酰胺或乙腈。同樣可以采用這些溶劑的混合物。特別優(yōu)選二氯甲烷或二甲基甲酰胺。
適合的脫水劑的實(shí)例有碳二亞胺，諸如N，N′-二乙基-，N，N′-二丙基-，N，N′-二異丙基-，N，N′-二環(huán)已基碳二亞胺，N-(3-二甲基氨基異丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，N-環(huán)已基碳二亞胺-N’-丙氧基甲基聚苯乙烯(PS-碳二亞胺)或羰基化合物，諸如羰二咪唑，或1，2-噁唑鎓(oxazolium)化合物諸如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓-3-硫酸鹽或2-叔-丁基-5-甲基異噁唑鎓高氯酸鹽，或?；被衔铮T如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氫喹啉，或丙膦酸酐，或氯甲酸異丁酯，或二(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯，或苯并三唑基氧基三-(二甲基氨基)鏻六氟磷酸鹽，或O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HBTU)，2-(2-氧代-1-(2H)-吡啶基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TPTU)，O-(1H-6-氯苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TCTU)或O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HATU)，或1-羥基苯并三唑(HOBt)，或苯并三唑-1-基氧基三-(二甲基氨基)鏻六氟磷酸鹽(BOP)，或苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸鹽(PyBOP)或N-羥基琥珀酰亞胺，或這些與堿的混合物。
堿是，例如，堿金屬碳酸鹽，諸如，例如，碳酸鈉或碳酸鉀，或碳酸氫鹽，或有機(jī)堿諸如三烷基胺，例如，三乙胺、N-甲基嗎啉、N-甲基哌啶、4-二甲基氨基吡啶或二異丙基乙胺。
優(yōu)選利用HATU或利用EDC在HOBt存在下進(jìn)行所述縮合。
該方法第二步中與酸的反應(yīng)優(yōu)選在0℃至40℃的溫度范圍內(nèi)在大氣壓下發(fā)生。
因此適當(dāng)?shù)乃崾嵌f烷中的氯化氫，乙酸中的溴化氫或二氯甲烷中的三氟乙酸。
該方法第二步中的氫解通常在溶劑中在氫和披鈀活性碳的存在下、優(yōu)選在0℃至40℃的溫度范圍內(nèi)在大氣壓下進(jìn)行。
溶劑例如有醇，如甲醇，乙醇，正丙醇或異丙醇，混合以水和乙酸或鹽酸水溶液；乙醇、水和乙酸的混合物，或異丙醇和鹽酸水溶液的混合物是優(yōu)選的。
方法[B] 式(IV)的化合物與式(V)的化合物的反應(yīng)通常在惰性溶劑中、在脫水劑的存在下，當(dāng)合適時(shí)存在堿，優(yōu)選在大氣壓下在-30℃至50℃的溫度范圍內(nèi)進(jìn)行。
惰性溶劑是，例如，鹵代烴諸如二氯甲烷或三氯甲烷，烴諸如苯、硝基甲烷、二噁烷、二甲基甲酰胺或乙腈。同樣可以采用這些溶劑的混合物。特別優(yōu)選二氯甲烷或二甲基甲酰胺。
適合的脫水劑的實(shí)例有碳二亞胺諸如N，N′-二乙基-，N，N′-二丙基-，N，N′-二異丙基-，N，N′-二環(huán)已基碳二亞胺，N-(3-二甲基氨基異丙基)-N′-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)，N-環(huán)已基碳二亞胺-N’-丙氧基甲基聚苯乙烯(PS-碳二亞胺)或羰基化合物諸如羰二咪唑，或1，2-噁唑鎓(oxazolium)化合物諸如2-乙基-5-苯基-1，2-噁唑鎓-3-硫酸鹽或2-叔-丁基-5-甲基異噁唑鎓高氯酸鹽，或?；被衔镏T如2-乙氧基-1-乙氧基羰基-1，2-二氫喹啉，或丙膦酸酐，或氯甲酸異丁酯，或二(2-氧代-3-噁唑烷基)磷酰氯，或苯并三唑基氧基-三-(二甲基氨基)鏻六氟磷酸鹽，或O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HBTU)，2-(2-氧代-1-(2H)-吡啶基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TPTU)，O-(1H-6-氯苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲鎓四氟硼酸鹽(TCTU)或O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓六氟磷酸鹽(HATU)，或1-羥基苯并三唑(HOBt)，或苯并三唑-1-基氧基三-(二甲基氨基)鏻六氟磷酸鹽(BOP)，或苯并三唑-1-基氧基三(吡咯烷子基)鏻六氟磷酸鹽(PyBOP)或N-羥基琥珀酰亞胺，或這些與堿的混合物。
堿是，例如，堿金屬碳酸鹽，諸如，例如，碳酸鈉或碳酸鉀，或碳酸氫鹽，或有機(jī)堿諸如三烷基胺，例如，三乙胺、N-甲基嗎啉、N-甲基哌啶、4-二甲基氨基吡啶或二異丙基乙胺。
優(yōu)選利用HATU或利用EDC和HOBt的混合物進(jìn)行所述縮合。
該另外的方法的第一步(a)中與氟化四丁基銨的反應(yīng)通常在惰性溶劑中、優(yōu)選在0℃至40℃的溫度范圍內(nèi)在大氣壓下發(fā)生。
惰性溶劑是，例如，鹵代烴諸如二氯甲烷或三氯甲烷，或醚如四氫呋喃或二噁烷。特別優(yōu)選四氫呋喃。
該方法第二步(b)中與酸的反應(yīng)優(yōu)選在0℃至40℃的溫度范圍內(nèi)在大氣壓下發(fā)生。
其中適當(dāng)?shù)乃崾嵌f烷中的氯化氫，乙酸中的溴化氫或二氯甲烷中的三氟乙酸。
該方法第三步(c)中的反應(yīng)的發(fā)生類似于式(IV)化合物與式(V)化合物的反應(yīng)。
該方法第四步(d)中的氫解通常在溶劑中在氫和披鈀活性碳的存在下、優(yōu)選在0℃至40℃的溫度范圍內(nèi)在大氣壓下發(fā)生。
溶劑例如有醇，如甲醇，乙醇，正丙醇或異丙醇，混合以水和乙酸或鹽酸水溶液；乙醇、水和乙酸的混合物，或異丙醇和鹽酸水溶液的混合物是優(yōu)選的。
式(II)的化合物是已知的或可以通過(guò)使式(VI)的化合物
其中 R4，R5，R6，R7，R8，R9，R10和R11具有上述含義， 首先與下式的化合物反應(yīng)
其中 R3具有上述含義，并且 R13表示氰基甲基，對(duì)硝基苯基，鄰硝基苯基，2，4-二硝基苯基，2，4，5-三氯苯基，五氯苯基，五氟苯基(Pfp)，N-羥基苯鄰二甲酰亞胺基，N-羥基琥珀酰亞胺基(O-Su)，1-羥基哌啶基或5-氯-8-羥基喹啉基， 隨后在3步合成中 a)與酸反應(yīng)， b)與脫水劑反應(yīng)，如果適合時(shí)在堿存在下進(jìn)行，和 c)通過(guò)氫解反應(yīng) 進(jìn)行制備。
式(VI)的化合物與式(VII)的化合物的反應(yīng)通常在惰性溶劑中、如果合適在堿存在下，優(yōu)選在-30℃到50℃的溫度范圍內(nèi)在大氣壓下發(fā)生。
惰性溶劑的實(shí)例是四氫呋喃，二氯甲烷，吡啶，二噁烷，二甲基乙酰胺，N-甲基吡咯烷或二甲基甲酰胺，優(yōu)選吡啶或二甲基甲酰胺。
該方法第一步(a)中與酸的反應(yīng)優(yōu)選在0℃至40℃的溫度范圍內(nèi)在大氣壓下發(fā)生。
其中適當(dāng)?shù)乃崾嵌f烷中的氯化氫，乙酸中的溴化氫或二氯甲烷中的三氟乙酸。
該方法第二步(b)中的反應(yīng)的發(fā)生類似于式(IV)化合物與式(V)化合物的反應(yīng)。
該方法第三步(c)中的氫解通常在溶劑中在氫和披鈀活性碳的存在下、優(yōu)選在0℃至40℃的溫度范圍內(nèi)在大氣壓下發(fā)生。
溶劑的實(shí)例是醇，如甲醇，乙醇，正丙醇或異丙醇，混合以水和乙酸或鹽酸水溶液；優(yōu)選乙醇、水和乙酸的混合物，或異丙醇和鹽酸水溶液的混合物。
式(III)，(V)和(VII)的化合物是已知的或者可以從相應(yīng)的原材料通過(guò)已知方法或通過(guò)以下所述方法合成。
式(IV)和(VI)的化合物是已知的或可以從相應(yīng)的原材料，在溶液中使用適合的保護(hù)基或在固相上通過(guò)已知的肽合成方法，或通過(guò)下述的方法進(jìn)行合成。
本發(fā)明化合物的制備可以通過(guò)下列合成反應(yīng)路線舉例說(shuō)明。
合成方案1
合成方案2
合成方案3
本發(fā)明的化合物顯示不能預(yù)測(cè)的有價(jià)值的藥理學(xué)作用范圍。它們顯示抗菌活性。
它們因此適用于用作治療和/或預(yù)防人和動(dòng)物疾病的藥物。
本發(fā)明的化合物特征在于與溶桿菌素相比更低的腎毒性。
本發(fā)明化合物的特征在于在中性至堿性水性介質(zhì)中改善的穩(wěn)定性。該性質(zhì)改善了本發(fā)明化合物的貯存和作為藥物的給藥。
所述九酯肽類作為細(xì)菌細(xì)胞壁生物合成的抑制劑起作用。
本發(fā)明的制劑針對(duì)細(xì)菌和類細(xì)菌的微生物是特別有效的。它們因此特別適于在人和獸醫(yī)學(xué)中由這些病原體所引起的局部和全身感染的預(yù)防和化學(xué)療法。
原則上，可以將本發(fā)明的制劑用于針對(duì)具有細(xì)菌細(xì)胞壁(胞壁質(zhì)球囊)和相應(yīng)酶系統(tǒng)的全部細(xì)菌和類細(xì)菌的微生物，例如下列病原體或下列病原體的混合物 革蘭氏陰性球菌(淋病奈瑟氏菌(Neisseria gonorrhoeae))還有革蘭氏陰性桿菌諸如腸桿菌科(Enterobacteriaceae)，例如大腸桿菌(Escherichia coli)、流感嗜血桿菌(Haemophilus influenzae)、假單胞菌屬(Pseudomonas)、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)、檸檬酸桿菌屬(Citrobacter)(弗氏檸檬酸桿菌(C.freundii)、C.divernis)、沙門氏菌屬(Salmonella)和志賀氏桿菌屬(Shigella)；此外還有腸桿菌屬(Enterobacter)(產(chǎn)氣腸桿菌(E.aerogenes)、成團(tuán)腸桿菌(E.agglomerans))、哈夫尼菌屬(Hafnia)、沙雷氏菌屬(Serratia)(粘質(zhì)沙雷氏菌(S.marcescens)、普羅威登斯菌屬(Providencia)、耶爾森氏菌屬(Yersinia)，還有不動(dòng)桿菌屬(Acinetobacter)、布蘭漢氏球菌屬(Branhamella)和衣原體(Chlamydia)。而且，所述抗菌譜包括嚴(yán)格厭氧菌諸如，例如，脆弱擬桿菌(Bacteroides fragilis)，消化球菌屬(Peptococcus)、消化鏈球菌屬(Peptostreptococcus)、以及梭狀芽胞桿菌屬(Clostridium)的代表；此外還有分枝桿菌屬(Mycobacteria)，例如結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosus)。本發(fā)明的化合物對(duì)于革蘭氏陽(yáng)性球菌顯示特別顯著的效果，所述革蘭氏陽(yáng)性球菌例如葡萄球菌(Staphylococci)(金黃色葡萄球菌(S.aureus)、表皮葡萄球菌(S.epidermidis)、溶血葡萄球菌(S.haemolyticus)、肉葡萄球菌(S.carnosus))、腸球菌屬(enterococci)(糞腸球菌(E.faecalis)、屎腸球菌(E.faecium))和鏈球菌屬(streptococci)(無(wú)乳鏈球菌(S.agalactiae)、肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)、化膿鏈球菌(S.pyogenes))。
上述病原體列表僅應(yīng)被解釋為是例舉性的而絕非限制性的?？梢蕴岬降挠伤霾≡w或混合感染所引起并且可以通過(guò)本發(fā)明的制劑預(yù)防、改善或治愈的疾病例如有 在人中的感染性疾病，例如，無(wú)并發(fā)癥的和并發(fā)的尿路感染，無(wú)并發(fā)癥的皮膚和表皮感染，并發(fā)的皮膚和軟組織感染，醫(yī)院-和社區(qū)獲得性肺炎，醫(yī)院肺炎，慢性支氣管炎的急性惡化和繼發(fā)細(xì)菌感染，急性中耳炎，急性鼻竇炎，鏈球菌咽炎，細(xì)菌性腦膜炎，無(wú)并發(fā)癥的淋球菌和非-淋球菌尿道炎/宮頸炎，急性前列腺炎，心內(nèi)膜炎，無(wú)并發(fā)癥的和并發(fā)的腹內(nèi)感染，婦科感染，盆腔炎疾病，細(xì)菌性陰道病，急性和慢性骨髓炎，急性細(xì)菌性關(guān)節(jié)炎，發(fā)熱性中性白細(xì)胞減少患者(febrile neutropenic patients)中的經(jīng)驗(yàn)療法，還有菌血癥，MRSA感染，急性傳染性腹瀉，幽門螺桿菌(Helicobacterpylori)感染，手術(shù)后的感染，牙原性感染(odontogenic infections)，眼科感染，手術(shù)后的感染(包括門靜脈周膿腫、創(chuàng)傷感染、膽道感染，乳腺炎和急性闌尾炎)，囊性纖維化病和支氣管擴(kuò)張癥。
除人之外，還可以在其它物種中治療細(xì)菌感染?？梢蕴岬降膶?shí)例是 豬腹瀉、腸源性毒血癥(enterotoxemia)、敗血癥、痢疾、沙門氏菌病、子宮炎-乳腺炎-乳泌缺乏綜合征(agalactiae syndrome)、乳腺炎； 反芻動(dòng)物(牛、綿羊、山羊)腹瀉、敗血癥、支氣管性肺炎、沙門氏菌病、巴斯德菌病、生殖器感染； 馬支氣管性肺炎、關(guān)節(jié)病、分娩的和分娩后感染、沙門氏菌??； 狗和貓支氣管肺炎、腹瀉、皮炎、耳炎、尿路感染、前列腺炎； 家禽(小雞、火雞、鵪鶉、鴿子、觀賞鳥(niǎo)類及其它)大腸桿菌感染、慢性呼吸道疾病、沙門氏菌病、巴斯德菌病、鸚鵡熱。
它同樣可以在飼養(yǎng)和撫養(yǎng)生產(chǎn)性和觀賞用魚(yú)類中治療細(xì)菌病，所述抗菌譜從而在上述病原體上還延伸到其它病原體諸如，例如，巴斯德菌屬(Pasteurella)、布魯氏菌屬(Brucella)、彎曲桿菌屬(Campylobacter)、李斯特菌屬(Listeria)、丹毒絲菌屬(Erysipelothris)、棒狀桿菌(Corynebacteria)、疏螺旋體屬(Borellia)、密螺旋體(Treponema)、諾卡氏菌屬(Nocardia)、立克次氏體(Rickettsia)、耶爾森氏菌屬(Yersinia)。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防疾病，特別是細(xì)菌感染性疾病的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明的化合物用于治療和/或預(yù)防疾病，特別是上述疾病的應(yīng)用。
本發(fā)明還涉及本發(fā)明的化合物用于制備治療和/或預(yù)防疾病、特別是上述疾病的藥物的應(yīng)用。
優(yōu)選將本發(fā)明的化合物用于制備適于預(yù)防和/或治療細(xì)菌疾病的藥物。
本發(fā)明還涉及利用抗菌有效量的本發(fā)明化合物治療和/或預(yù)防疾病的方法，所述疾病特別是上述疾病。
本發(fā)明還涉及包含至少一種本發(fā)明化合物和至少一種或多種另外的活性成分的藥物，特別是用于治療和/或預(yù)防上述疾病。組合用的優(yōu)選活性成分是具有抗菌活性的化合物，其具有不同的作用范圍，特別是補(bǔ)充的作用范圍，和/或?qū)Ρ景l(fā)明的化合物是有協(xié)同作用的。
本發(fā)明的化合物可以全身和/或局部起作用。為此目的，它們可以以適合的方式進(jìn)行施用，所述方式諸如，例如通過(guò)口服的、腸胃外的、經(jīng)肺的、經(jīng)鼻的、舌下的、舌的、頰的、直腸的、皮膚的、透皮的、結(jié)膜的或耳的途徑，或作為植入物或支架。
本發(fā)明的化合物可以以適合于這些給藥途徑的給藥形式進(jìn)行施用。
適合于口服給藥的是這樣的給藥形式，其按照現(xiàn)有技術(shù)發(fā)揮功能并且快速地和/或以改進(jìn)的方式遞送本發(fā)明的化合物，并且其包括晶體形式和/或非晶形形式和/或溶解形式的本發(fā)明的化合物，諸如，例如片劑(未包衣的或包衣片劑，例如具有延遲溶解或者是不可溶的并且控制本發(fā)明化合物釋放的腸溶衣或包衣)，快速在口腔中崩解的片劑或薄膜/糯米紙囊劑，薄膜/凍干物，膠囊(例如硬或軟明膠膠囊)，糖衣片劑，顆粒劑，丸劑，粉末，乳劑，混懸劑，氣溶膠或溶液。
腸胃外給藥的發(fā)生可以避免吸收步驟(例如，靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、心臟內(nèi)、脊髓內(nèi)或腰椎內(nèi))，或包含吸收(例如，肌內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、經(jīng)皮或腹膜內(nèi))。適合于腸胃外給藥的給藥形式特別是，用于注射和輸注的，以溶液、混懸液、乳劑、凍干物或無(wú)菌粉末形式存在的制劑。
適合于其它給藥途徑的實(shí)例是用于吸入的藥物形式(特別是粉末吸氣器，噴霧器)，滴鼻劑，溶液，噴霧劑；可以通過(guò)舌、舌下或頰施用的片劑，薄膜/糯米紙囊劑或膠囊；栓劑，用于耳或眼的制劑，陰道膠囊，水性混懸液(洗劑，振搖混合物)，親脂性混懸液，軟膏劑，乳膏劑，透皮治療系統(tǒng)(如，例如貼片)，乳，糊劑，泡沫，撲粉，植入物或支架。
可以將本發(fā)明的化合物轉(zhuǎn)化成為所述的給藥形式。這可以以本身已知的方式通過(guò)混合以惰性、非毒性的藥用的賦形劑來(lái)進(jìn)行。這些賦形劑包括，特別是，載體(例如微晶纖維素，乳糖，甘露醇)，溶劑(例如液體聚乙二醇)，乳化劑和分散劑或濕潤(rùn)劑(例如十二烷基硫酸鈉，聚氧基失水山梨糖醇油酸酯)，粘合劑(例如聚乙烯吡咯烷酮)，合成的和天然的聚合物(例如白蛋白)，穩(wěn)定劑(例如抗氧化劑諸如抗壞血酸)，顏料(例如無(wú)機(jī)顏料諸如氧化鐵)和味道和/或氣味矯正劑。
本發(fā)明還涉及這樣的藥物和將其用于前述目的的應(yīng)用，所述藥物包括至少一種本發(fā)明的化合物，以及通常地一種或多種惰性、非毒性藥用的賦形劑。
通常，以約0.001到100mg/kg，優(yōu)選地約0.1到10mg/kg體重的靜脈內(nèi)給藥量施用從而獲得有效效果被證明有利的，并且口服給藥所用的劑量是約0.01到50mg/kg，優(yōu)選地0.5到10mg/kg體重。
然而，可能需要的是，當(dāng)需要時(shí)偏離提及的量，其具體地作為體重、給藥途徑、對(duì)活性成分的個(gè)體行為、制劑類型和在施用發(fā)生過(guò)程中的時(shí)間或間隔的函數(shù)。因此，在某些情形中以少于前述最小量進(jìn)行的施用可以是充分的，而在其它情形中，必須超過(guò)提及的上限。在更大量的施用的情形中，可以推薦將這些分成一天內(nèi)的多個(gè)單獨(dú)劑量。
除非另外指出，在下述測(cè)試和實(shí)施例中的百分比是重量百分比；份是重量份。液體/液體溶液的溶劑比率、稀釋比率和濃度數(shù)據(jù)在每種情形中都是基于體積。
后附的圖顯示選擇的示例性化合物和作為比較例的溶血桿素的穩(wěn)定性圖。這些顯示

圖1在略堿性的水溶液中，溶桿菌素和溶桿菌素的降解產(chǎn)物的濃度隨時(shí)間變化的圖。
圖2在略堿性的水溶液中，實(shí)施例19的化合物的濃度隨時(shí)間變化的圖。
圖3在略堿性的水溶液中，實(shí)施例23的化合物的濃度隨時(shí)間變化的圖。
圖4在略堿性的水溶液中，實(shí)施例25的化合物的濃度隨時(shí)間變化的圖。
圖5在略堿性的水溶液中，實(shí)施例40的化合物的濃度隨時(shí)間變化的圖。
A.實(shí)施例 縮寫 abs.無(wú)水 aq. 水性 BHI 腦心浸液 Boc 叔丁氧羰基 conc. 濃縮的 DCC 二環(huán)己基碳二亞胺 DCI 直接化學(xué)電離(在MS中) DCM 二氯甲烷 DIEAN，N-二異丙基乙胺 DMAP4-N，N-二甲基氨基吡啶 DMSO二甲亞砜 DMF N，N-二甲基甲酰胺 EA 乙酸乙酯 EDC 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺(也 為EDCI) EDCxHCl 1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸 鹽 EDTA 乙二胺四乙酸 EI電子碰撞電離(MS中) eq. 當(dāng)量 ESI 電噴霧電離(MS中) Ex. 實(shí)施例 h 小時(shí) HATU O-(7-氮雜苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基 脲鎓六氟磷酸鹽 HOBt1-羥基苯并三唑 HPLC高壓，高效液相色譜法 LC-MS 液相色譜-偶聯(lián)質(zhì)譜法 LDA 二異丙基氨基化鋰 LHMDS 六甲基二硅基胺基鋰 LLA D-Leu-Leu-(3-環(huán)已基)Ala (3-環(huán)已基) LLF D-Leu-Leu-Phe MALDI 基體-輔助的激光脫附/電離 MIC 最低抑制濃度 Min 分鐘(單數(shù))/分鐘(復(fù)數(shù)) MRSA耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌 MS 質(zhì)譜法 MTBE甲基叔丁醚 NCCLS 國(guó)家臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì) (National Committee for Clinical Laboratory Standards) neg.負(fù)的 NMM N-甲基嗎啉 NMR 核磁共振光譜法 org.有機(jī)的 p.a.分析級(jí)(pro analysi) Pd 鈀 Pd-C披鈀碳 pos.正的 PTFE聚四氟乙烯 quant. 定量 RP-HPLC 反相HPLC RT 室溫 Rf 保留因子(在薄層色譜中) Rt 保留時(shí)間(在HPLC中) sat.飽和的 TBAF氟化四丁基銨 TBTU O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N′，N′-四甲基脲鎓四 氟硼酸鹽 TCTU O-(1H-6-氯苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲 鎓四氟硼酸鹽 TFA三氟乙酸 TFE2，2，2-三氟乙醇 THF四氫呋喃 TMGN，N，N，N-四甲基胍 TMSE 2-(三甲基甲硅烷基)乙基 TOF飛行時(shí)間 UV 紫外線 VRSA 耐萬(wàn)古霉素的金黃色葡萄球菌 XPHOS 二環(huán)已基(2’，4’，6’-三異丙基二苯基-2-基)膦 Z，Cbz 芐氧基羰基 參考文獻(xiàn) 對(duì)于肽和環(huán)酯肽(cyclodepsipeptides)的命名法，參考 1.A Guide to IUPAC Nomenclature of Organic Compounds(有機(jī)化合物的IUPAC命名委員會(huì)的指導(dǎo))(推薦1993)，1993，Blackwell科學(xué)出版社。
2.Nomenclature and symbolism for amino acids and peptides.(氨基酸和肽的命名和符號(hào))推薦1983.IUPAC-IUB Joint Commission on BiochemicalNomenclature(IUPAC-IUB關(guān)于生物化學(xué)命名法的聯(lián)合委員會(huì))，UK.Biochemical Journal(英國(guó)生物化學(xué)雜志)1984，219，345-373，和引用的參考文獻(xiàn)。
材料和方法 分析方法 方法1HPLC儀器類型HP 1100系列；UV DAD；柱PhenomenexSynergi 2μ Hydro-RP Mercury 20mm x 4mm；洗脫劑A11的水+0.5ml的50％甲酸，洗脫劑B11的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度0.0分鐘90％A→2.5分鐘30％A→3.0分鐘5％A→4.5分鐘5％A；流速0.0分鐘1ml/分鐘，2.5分鐘/3.0分鐘/4.5分鐘。2ml/分鐘；烘箱50℃；UV檢測(cè)210nm. 方法2HPLC儀器類型HP 1050系列；UV DAD；柱PhenomenexSynergi 2μ Max-RPMercury 20mm x 4mm；洗脫劑A11的水+0.05％TFA，洗脫劑B11的乙腈；梯度0.0分鐘90％A→2.5分鐘30％A→3.0分鐘5％A→4.5分鐘5％A；流速0.0分鐘1ml/分鐘，2.5分鐘/3.0分鐘/4.5分鐘。2ml/分鐘；烘箱50℃；UV檢測(cè)210nm. 方法3HPLC儀器類型HP 1050/1100系列；UV DAD 1100系列；柱Kromasil C18，60 x 2.1mm，3.5μm；洗脫劑A水/0.5％高氯酸，洗脫劑B乙腈；梯度0-0.5分鐘2％B，0.5-4.5分鐘2-90％B，4.5-6.5分鐘90％B，6.5-6.7分鐘90-2％B，6.7-7.5分鐘2％B；流速0.75ml/分鐘，烘箱30℃，UV檢測(cè)210nm. 方法4儀器具有DAD檢測(cè)的HP1100；柱Kromasil 100 RP-18，60mm x 2.1mm，3.5μm；洗脫劑A5ml的高氯酸(70％)/l的水，洗脫劑B乙腈；梯度0分鐘2％B，0.5分鐘2％B，4.5分鐘90％B，9分鐘90％B，9.2分鐘。2％B，10分鐘2％B；流速0.75ml/分鐘；柱溫.30℃；檢測(cè)UV210nm. 方法5儀器具有DAD的安捷倫(Agilent)1100(G1315B)，雙泵(G1312A)，自動(dòng)取樣器(G1313A)，溶劑脫氣裝置(G1379A)和柱自動(dòng)調(diào)溫器(G1316A)；柱安捷倫Zorbax Eclipse XDB-C8 4.6 x 150 x 5mm；柱溫30℃；洗脫劑A0.05％ 70％在水中的高氯酸；洗脫劑B乙腈；流速2.00ml/分鐘；梯度0-1分鐘10％B，斜度，4-5分鐘90％B，斜度，5.5分鐘10％B. 方法6儀器具有DAD的安捷倫1100(G1315B)，雙泵(G1312A)，自動(dòng)取樣器(G1313A)，溶劑脫氣裝置(G1379A)和柱自動(dòng)調(diào)溫器(G1316A)；柱安捷倫Zorbax Eclipse XDB-C8 4.6 x 150 x 5mm；柱溫30℃；洗脫劑A0.01％在水中的TFA；洗脫劑B0.01％在乙腈中的TFA；流速2.00ml/分鐘；梯度0-1分鐘10％ B，斜度，4-5分鐘90％ B，斜度，5.5分鐘10％ B. 方法7具有DAD的安捷倫1100(G1315B)，雙泵(G1312A)，自動(dòng)取樣器(G1313A)，脫氣裝置(G1379A)和柱自動(dòng)調(diào)溫器(G1316A)；柱Synergi4 Hydro-RP 80A，4.6 x 150 x 5mm；烘箱溫度30℃；洗脫劑A水+0.05％ 70％高氯酸；洗脫劑B乙腈；流速2.00ml/分鐘；梯度0-1分鐘10％ B，斜度，4-5分鐘90％ B，斜度，5.5分鐘10％ B. 方法8儀器具有DAD的安捷倫1100(G1315B)，雙泵(G1312A)，自動(dòng)取樣器(G1313A)，溶劑脫氣裝置(G1379A)和柱自動(dòng)調(diào)溫器(G1316A)；柱安捷倫Eclipse XDB-C8 4.6 x 150 x 5mm；柱溫40℃；洗脫劑A0.05％ 70％在水中的高氯酸；洗脫劑B甲醇；流速2.00ml/分鐘；等度0-7分鐘55％ B. 方法9HPLC儀器類型HP 1050系列；UV DAD；柱Zorbax 300mSB-C18 3.5μ，4.6mm x 150mm；洗脫劑A11的水+0.1％ TFA，洗脫劑B400ml的乙腈/600ml的水+0.1％ TFA；梯度0.0分鐘100％A，1.3分鐘10％B，18.0分鐘80％B，20.0分鐘80％B，21.0分鐘100％B，25.0分鐘100％B，26.0分鐘0％B，30.0分鐘0％B.流速1ml/分鐘；烘箱40℃；UV檢測(cè)210nm. 方法10HPLC儀器類型HP 1050系列；UV DAD；柱Zorbax 300mSB-C1 83.5μ，4.6mm x 150mm；洗脫劑A11的水+0.1％TFA，洗脫劑B乙腈；梯度0.0分鐘100％A，15.0分鐘100％B，17.0分鐘100％B，18.0分鐘100％A.流速1ml/分鐘；烘箱40℃；UV檢測(cè)210nm. 方法11HPLC儀器類型HP 1050系列；UV DAD；柱Zorbax 300mSB-C18 3.5μ，4.6mm x 150mm；洗脫劑A11的水+0.1％TFA，洗脫劑B400ml的乙腈/600ml的水+0.1％TFA；梯度0.0分鐘100％A，2.0分鐘10％B，50.0分鐘80％B，52.0分鐘100％B，55.0分鐘100％A，60.0分鐘100％A.流速1ml/分鐘；烘箱40℃；UV檢測(cè)210nm. 方法12HPLC儀器類型HP 1050系列；柱SymmetryPrepTMC18，Waters，50 x 2.1mm，3.5μm；洗脫劑A水/0.1％TFA，洗脫劑B乙腈；梯度0-3分鐘0％B，3.01-9分鐘100％B，9.01-11分鐘100％B，11.01-12分鐘0-100％A；烘箱40℃；流速0.4ml/分鐘；UV檢測(cè)210nm. 方法13HPLC儀器類型HP 1100系列；UV DAD；柱ChromolithSpeed ROD RP18；洗脫劑A11的水+0.05％TFA，洗脫劑B11的乙腈；梯度0.0-0.5分鐘95％A，0.51-3.0分鐘5-95％B，3.01-3.80分鐘95％A；流速5ml/分鐘；烘箱40℃；UV檢測(cè)210nm. 方法14柱(不銹鋼柱，尺寸250 x 4.6mm)；靜止相(手性硅膠/聚酰胺復(fù)合材料KBD 5326，基于選擇劑聚(N-異丁烯酰基-L-亮氨酸二環(huán)丙基甲基酰胺)；洗脫劑乙酸乙酯，等度；流速1ml/分鐘；溫度25℃；UV檢測(cè)220nm；樣品注射10μl. 方法15靜止相(Chiralcel OD)；洗脫劑異已烷/i-PrOH9/1，等度；流速2ml/分鐘；溫度25℃；UV檢測(cè)254nm. 方法16HPLC儀器類型HP 1100系列；柱Chiralpack AD-H 250mm x 4.6mm；洗脫劑A異已烷，洗脫劑B乙醇+0.2％TFA+1％H2O；等度；流速1ml/分鐘；烘箱40℃；UV檢測(cè)230nm. 方法17Daicel Chiralpak AD-H 5μm 250mm x 4.6mm，已烷/2-丙醇/甲醇85/6/9，流速2.0ml/分鐘，UV檢測(cè)254nm. 方法18MS儀器類型Micromass ZQ；HPLC儀器類型WatersAlliance 2795/HP 1100；柱Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury20mm x 4mm；洗脫劑A11的水+0.5ml的50％甲酸，洗脫劑B11的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度0.0分鐘90％A→2.5分鐘30％A→3.0分鐘5％A→4.5分鐘5％A；流速0.0分鐘1ml/分鐘，2.5分鐘/3.0分鐘/4.5分鐘2ml/分鐘；烘箱50℃；UV檢測(cè)210nm. 方法19MS儀器類型Micromass ZQ；HPLC儀器類型WatersAlliance 2795/HP 1100；柱Phenomenex Gemini 3μ C-18 100

，30mm x3mm；洗脫劑A11的水+0.5ml的50％甲酸，洗脫劑B11的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度0.0分鐘90％A→2.5分鐘30％A→3.0分鐘5％A→4.5分鐘5％A；流速0.0分鐘1ml/分鐘，2.5分鐘/3.0分鐘/4.5分鐘2ml/分鐘；烘箱50℃；UV檢測(cè)210nm. 方法20UV檢測(cè)210nm.MS儀器類型Micromass ZQ；HPLC儀器類型Waters Alliance 2795；柱Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury20mm x 4mm；洗脫劑A11的水+0.5ml 50％的甲酸，洗脫劑B11的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度0.0分鐘90％A→2.5分鐘30％A→3.0分鐘5％A→4.5分鐘5％A；流速0.0分鐘1ml/分鐘，2.5分鐘/3.0分鐘/4.5分鐘2ml/分鐘；烘箱50℃；UV檢測(cè)210nm. 方法21儀器具有HPLC安捷倫系列1100的Micromass QuattroLCZ；柱Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20mm x 4mm；洗脫劑A11的水+0.5ml的50％甲酸，洗脫劑B11的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度0.0分鐘90％A→2.5分鐘30％A→3.0分鐘5％A→4.5分鐘5％A；流速0.0分鐘1ml/分鐘，2.5分鐘/3.0分鐘/4.5分鐘2ml/分鐘；烘箱50℃；UV檢測(cè)208-400nm. 方法22儀器具有HPLC安捷倫系列1100的Micromass平臺(tái)LCZ；柱Thermo Hypersil GOLD 3μ 20mm x 4mm；洗脫劑A11的水+0.5ml的50％甲酸，洗脫劑B11的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度0.0分鐘100％A→0.2分鐘100％A→2.9分鐘30％A→3.1分鐘10％A→5.5分鐘10％A；烘箱50℃；流速0.8ml/分鐘；UV檢測(cè)210nm. 方法23MS儀器類型Micromass LCT(ESI pos./neg.)；HPLC儀器類型HP 1100系列；UV DAD 1100系列；柱SymmetryPrepTMC18，Waters，50 x 2.1mm，3.5μm；洗脫劑A水/0.1％甲酸，洗脫劑B乙腈/0.1％甲酸；梯度0-1分鐘0％B，1-6分鐘0-90％B，6-8分鐘90-100％B，8-10分鐘100％B，10-10.1分鐘100-0％B，10.1-12分鐘0％B，然后將色譜柱再生.烘箱40℃，流速0.5ml/分鐘(在10.1分鐘簡(jiǎn)短地至1ml/分鐘)，UV檢測(cè)210nm. 方法24TOF-HR-MS-ESI+光譜用Micromass LCT儀器記錄(毛細(xì)管電壓3.2KV，錐電壓42V，源溫度120℃，去溶劑化溫度280℃)。A注射器泵(哈弗裝置(Harvard Apparatus))用于為此目的的樣品遞送。將亮氨酸-腦磷脂(Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu)用作標(biāo)準(zhǔn)。
方法25MALDI-MS/MS研究在4700蛋白質(zhì)組(Proteomics)分析儀(Applied Biosystems(應(yīng)用生物系統(tǒng))，弗雷明漢，馬薩諸塞，美國(guó))上進(jìn)行，所述分析儀裝備有TOF/TOF離子光學(xué)系統(tǒng)和200Hz NdYAG激光器(355nm)。準(zhǔn)分子離子在離子源中使用8kV加速，使用電子偏轉(zhuǎn)器(MS1)選擇，并在布置在MS1和MS2之間的沖擊室中與氬原子撞擊。獲得的碎片離子使用15kV再加速，并使用第二次飛行質(zhì)量分析儀(MS2)進(jìn)行表征。
制備色譜法 方法26儀器Gilson Abimed HPLC；雙泵系統(tǒng)；柱Nucleodur C18Gravity，Macherey-Nagel，5μm；250 x 21mm；洗脫劑A水/0.05％-0.1％TFA，洗脫劑B乙腈；梯度0-8分鐘5％B，8-40分鐘5-60％B，40-60分鐘60％B，60-75分鐘60-100％B，75-80分鐘100％B，然后將色譜柱再生；流速7-15ml/分鐘；UV檢測(cè)器210nm. 方法27儀器Gilson Abimed HPLC；雙泵系統(tǒng)；柱Nucleodur C18Gravity，Macherey-Nagel，5μm；250 x 21mm；洗脫劑A水/0.05％-0.1％TFA，洗脫劑B乙腈；梯度0-8分鐘 5％B，8-40分鐘 5-60％B，40-60分鐘60％B，60-75分鐘 60-100％B，75-80分鐘 100％B，然后將色譜柱再生；流速7-15ml/分鐘；UV檢測(cè)器210nm. 方法28儀器Gilson Abimed HPLC；雙泵系統(tǒng)；柱Nucleodur C18Gravity，Macherey-Nagel，5μm；250×40mm；洗脫劑A水/0.05-0.1％TFA，洗脫劑B乙腈/0.05-0.1％ TFA；梯度0-10分鐘10％B，10-24分鐘10-30％B，24-28分鐘30-50％B，28-35分鐘50％B，35-45分鐘50-60％B，45-53分鐘60-70％B，53-60分鐘60-90％B，60-70分鐘100％B，然后將色譜柱再生；流速15-45ml/分鐘；UV檢測(cè)器210nm. 方法29儀器Gilson AbimedHPLC；雙泵系統(tǒng)；柱Nucleodur C18Gravity，Macherey-Nagel，5μm；250 x 21mm；洗脫劑A水/0.2％乙酸，洗脫劑B乙腈/0.2％乙酸；梯度0-10分鐘10％B，10-24分鐘10-30％B，24-28分鐘30-50％B，28-35分鐘50％B，35-45分鐘50-60％B，45-53分鐘60-70％B，53-60分鐘60-90％B，60-70分鐘100％B，然后將色譜柱再生；流速7-15ml/分鐘；UV檢測(cè)器210nm. 方法30儀器Gilson Abimed HPLC；雙泵系統(tǒng)；柱Nucleodur C18Gravity，Macherey-Nagel，5μm；250×40mm；洗脫劑A水/0.2％乙酸，洗脫劑B乙腈/0.2％乙酸；梯度0-10分鐘 10％B，10-24分鐘 10-30％B，24-28分鐘 30-50％B，28-35分鐘 50％B，35-45分鐘 50-60％B，45-53分鐘 60-70％B，53-60分鐘 60-90％B，60-70分鐘 100％B，然后將色譜柱再生；流速15-45ml/分鐘；UV檢測(cè)器210nm. 方法31儀器Gilson Abimed HPLC；雙泵系統(tǒng)；柱Kromasil-100AC18，5μm；250 x 30mm；洗脫劑A水/0.25％乙酸，洗脫劑B乙腈；梯度0-3分鐘 5％B，3-30分鐘 5-100％B，30-38分鐘 100％B，然后將色譜柱再生；流速25ml/分鐘；UV檢測(cè)器210nm. 方法32儀器Gilson Abimed HPLC；雙泵系統(tǒng)；柱Kromasil-100AC18，5μm；250 x 30mm；洗脫劑A水/0.05-0.5％ TFA，洗脫劑B乙腈；梯度0-5分鐘 5％B，5.01-10分鐘 10％B，10.01-20分鐘 40％B，20.01-27分鐘50％B，27.01-40分鐘 60％B，40.01-45分鐘 90％B，45.01-60分鐘 100％B；流速15-60ml/分鐘；UV檢測(cè)器210nm. 方法33Gilson Abimed HPLC；UV檢測(cè)器210nm；柱KromasilRP-18 5μm，

250 x 20mm；洗脫劑A水+0.05％ TFA，洗脫劑B乙腈+0.05％ TFA流速10ml/分鐘；0-3分鐘 10％ B，斜度，30-38分鐘90％B，38-45分鐘 10％ B. 方法34Gilson Abimed HPLC；UV檢測(cè)器210nm；柱GromsilODS-4HE 10μm，250 x 40mm；洗脫劑A水+0.05％ TFA，洗脫劑B乙腈+0.05％ TFA流速20ml/分鐘；0-3分鐘 10％ B，斜度，30-35分鐘90％ B，35-40分鐘 90％ B. 方法35儀器Gilson Abimed HPLC；雙泵系統(tǒng)；柱WatersSymmetry-PrepTMC18，7μm，300 x 19mm；洗脫劑A水/0.2％冰醋酸，洗脫劑B乙腈；梯度0-8分鐘 5％B，8-25分鐘 5-100％B，25.01-40分鐘100％B，然后將色譜柱再生；流速15ml/分鐘；UV檢測(cè)器210nm. 方法36儀器Gilson Abimed HPLC；雙泵系統(tǒng)；柱WatersSymmetry-PrepTMC18，7μm，300 x 19mm；洗脫劑A水/0.1％ TFA，洗脫劑B乙腈；梯度0-5分鐘 5％B，5.01-32分鐘 5-100％B，32.01-35分鐘100％B，然后將色譜柱再生；流速15ml/分鐘；UV檢測(cè)器210nm. 方法37柱Kromasil-100 C18，5μm；250 x 20mm；洗脫劑25％水+0.2TFA/75％乙腈；等度；0-8.5分鐘；流速25ml/分鐘；UV檢測(cè)器220nm；溫度30℃. 方法38柱(不銹鋼柱，尺寸250 x 30mm)；靜止相(手性硅膠/聚酰胺復(fù)合材料KBD 5326，基于選擇劑聚(N-異丁酰基-L-亮氨酸二環(huán)丙基甲基酰胺)；洗脫劑乙酸乙酯，等度；流速25ml/分鐘；溫度24℃；UV檢測(cè)225nm；樣品重復(fù)注射2000μl. 方法39柱(不銹鋼柱，尺寸430 x 75mm)；靜止相(手性硅膠/聚酰胺，基于選擇劑聚(N-異丁?；?D-亮氨酸二環(huán)丙基甲基酰胺)；洗脫劑異已烷(80％)/THF(20％)，等度；流速200ml/分鐘；溫度24℃；UV檢測(cè)254nm；樣品重復(fù)注射10000μl. 方法40柱(不銹鋼柱，尺寸250 x 20mm)；靜止相(DaicelChiralpak AD-H，5μm)；洗脫劑異已烷(70％)/2-丙醇+0.2％乙酸+1％水(30％)，等度；流速15ml/分鐘；溫度29℃；UV檢測(cè)220nm；樣品重復(fù)注射750μl. 方法41Gilson Abimed HPLC；柱Daicel Chiralpak AD-H 5μm；250 x20mm；洗脫劑A異已烷，洗脫劑B0.2％乙酸/1％水/2-丙醇；等度；流速15ml/分鐘；UV-檢測(cè)器212nm 方法42柱(不銹鋼柱，尺寸500 x 40mm)；靜止相(DaicelChiralpak AD 20μm)，異已烷/異丙醇/甲醇95/2/3，流速100ml/分鐘，UV檢測(cè)230nm. 方法43儀器Gilson Abimed HPLC；UV檢測(cè)器210nm；雙泵系統(tǒng)；柱SymmetryPrepTMC18，Waters，7μm；300mm x 19mm；流速25ml/分鐘；洗脫劑A水/0.2％ TFA，洗脫劑B乙腈；梯度0-10分鐘 15-65％B，然后將色譜柱再生。
方法44Gilson Abimed HPLC；UV檢測(cè)器210nm；柱WatersSymmetry-PrepTM C-18，7μm，300 x 19mm；洗脫劑A水+0.05％ TFA，洗脫劑B乙腈+0.05％ TFA流速10ml/分鐘；0-3分鐘 10％B，斜度，30-38分鐘 90％B，38-45分鐘 10％B. 方法45在不加壓下在Sephadex LH-20(法瑪西亞(Pharmacia))上進(jìn)行凝膠色譜分離。根據(jù)UV活性(UV檢測(cè)器，254nm，Knauer)進(jìn)行分級(jí)(ISCO Foxy 200級(jí)分收集器)，柱尺寸32×7cm(1000-100μmol規(guī)模)；30×4cm(100-10μmol規(guī)模)；25×2cm(10-1μmol規(guī)模)。將甲醇用作洗脫劑。
方法46Gilson Abimed HPLC；UV檢測(cè)器210nm；柱BiotageFlash40 RP-18或相容的模塊Varian Metaflash C18 40M，35μm，150 x40mm；洗脫劑A水+0.05％ TFA，洗脫劑B乙腈+0.05％ TFA流速40ml/分鐘；0-3分鐘 10％B，斜度，30-38分鐘 90％B，38-45分鐘10％B. 方法47通過(guò)反相色譜法制備分離二氫溶桿菌素的片段1-3和4-11的胰凝乳蛋白酶裂解。柱源15-RPC(GE-HealthCare(GE-健康護(hù)理))，直徑5cm，長(zhǎng)度12cm，體積235ml.洗脫劑A0.1％在水中的乙酸。洗脫劑B0.1％在甲醇中的乙酸.流速30ml/分鐘。UV檢測(cè)215nm，280nm.上樣約6-7mg總蛋白/ml樹(shù)脂。樣品上樣將柱用洗脫劑A平衡，將0.2μm-過(guò)濾的裂解混合物溶液置于其上并且將所述柱用洗脫劑A洗滌。洗脫0-45％在約18柱體積內(nèi)，隨后用約1.3柱體積的100％B洗滌。分級(jí)50ml的級(jí)分從洗脫開(kāi)始收集。CIP柱以減少的流速(5ml/分鐘)用2柱體積的1N氫氧化鈉溶液洗滌。
分析氨基酸和肽的具體方法 方法48使用來(lái)自Eppendorf/Biotronik的LC 3000氨基酸分析儀進(jìn)行氨基酸分析。使用稍作修改的標(biāo)準(zhǔn)Eppendorf/Biotronik分離操作方法。分離操作方法和分析儀的功能詳細(xì)描述在儀器手冊(cè)中(Handbuch des

LC 3000，Wissenschaftliche

GmbH Biotronik，Maintal，1996)。
方法49毛細(xì)管電泳容許肽和蛋白在電場(chǎng)中基于它們的電荷分離。分離的質(zhì)量由此取決于所用的緩沖液，pH，溫度和添加劑。使用的毛細(xì)管是所謂的融合的硅膠柱，其內(nèi)徑是50-100μm。該方法是評(píng)估肽的純度和監(jiān)測(cè)酶促裂解產(chǎn)物形成的良好標(biāo)準(zhǔn)。從毛細(xì)管柱上，肽二氫溶桿菌素和八氫溶桿菌素在約21分鐘洗脫，片段4-11在約18分鐘洗脫，1-3(LLF)在約24分鐘洗脫，1-3(LLA(3-環(huán)已基))在約22分鐘洗脫，脫酰胺的形式以雙峰的形式在約30分鐘(1-11)和24分鐘(4-11)洗脫。在24小時(shí)后，在緩沖液中觀察到脫酰胺產(chǎn)物的較大增加。通過(guò)在玻璃柱(長(zhǎng)度72cm，內(nèi)徑50μm)上的毛細(xì)管電泳研究起始化合物二氫溶桿菌素和八氫溶桿菌素或混合物的4ng的酶促裂解產(chǎn)物。條件電流90μA，柱溫25℃，100mM磷酸鹽緩沖液，pH 3.0，UV檢測(cè)210nm，在3秒內(nèi)在壓力下上樣。
方法50將溶解在60％乙腈/0.1％ TFA中的3nmol的片段上樣到用

預(yù)溫育的測(cè)序儀的薄層上。使用正常的測(cè)序儀循環(huán)對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行測(cè)序。通過(guò)在線HPLC，輔以40pmol PTH標(biāo)準(zhǔn)物的方式鑒定PTH-氨基酸。通過(guò)它們相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)氨基酸的位置鑒定非蛋白生成的氨基酸。通過(guò)第一PTH循環(huán)的氨基酸估計(jì)肽的純度。在4-12階段對(duì)各種肽進(jìn)行測(cè)序。
另外的分析和制備方法 方法51儀器具有HPLC安捷倫系列1100的Micromass QuattroLCZ；柱Phenomenex Onyx Monolithic C18，100mm x 3mm.洗脫劑A11的水+0.5ml的50％甲酸，洗脫劑B11的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度0.0分鐘 90％A→2分鐘 65％A→4.5分鐘 5％A→6分鐘 5％A；流速2ml/分鐘；烘箱40℃；UV檢測(cè)208-400nm. 方法52MS儀器類型Micromass ZQ；HPLC儀器類型WatersAlliance 2795；柱Phenomenex Synergi 2.5μ MAX-RP 100A Mercury 20mm x 4mm；洗脫劑A11的水+0.5ml的50％甲酸，洗脫劑B11的乙腈+0.5ml的50％甲酸；梯度0.0分鐘 90％A→0.1分鐘 90％A→3.0分鐘 5％A→4.0分鐘 5％A→4.01分鐘 90％A；流速2ml/分鐘；烘箱50℃；UV檢測(cè)210nm. 方法53儀器安捷倫1100，具有DAD(G1315B)，雙泵(G1312A)，自動(dòng)取樣器(G1313A)，溶劑脫氣裝置(G1379A)和柱自動(dòng)調(diào)溫器(G1316A)；柱安捷倫Zorbax Eclipse XDB-C8 4.6 x 150 x 5mm；柱溫30℃；洗脫劑A0.01％在水中的TFA；洗脫劑B0.01％在乙腈中的TFA；流速2.00ml/分鐘；梯度0-1分鐘10％B，斜度，10-14分鐘90％，再調(diào)節(jié)。
方法54儀器安捷倫1100，具有DAD(G1315B)，雙泵(G1312A)，自動(dòng)取樣器(G1313A)，溶劑脫氣裝置(G1379A)和柱自動(dòng)調(diào)溫器(G1316A)；柱安捷倫Zorbax Eclipse XDB-C8 4.6 x 150 x 5mm；柱溫30℃；洗脫劑A0.01％在水中的TFA；洗脫劑B0.01％在乙腈中的TFA；流速1.40ml/分鐘；梯度0分鐘10％ B，斜度，2.5-5分鐘90％，再調(diào)節(jié). 方法55柱(不銹鋼柱，尺寸250 x 20mm)；靜止相(DaicelChiralpak AD-H，5μm)；洗脫劑異已烷(90％)/乙醇+0.2％ AcOH+1％H2O(10％)，等度；流速15ml/分鐘；溫度30℃；UV檢測(cè)220nm；樣品重復(fù)注射500μl. 方法56柱(不銹鋼柱，尺寸250 x 4.6mm)；靜止相(Daicel ChiralpakAD-H，5μm)；洗脫劑異已烷(90％)/乙醇+0.2％ AcOH+1％ H2O(10％)，等度；流速1.0ml/分鐘；溫度30℃；UV檢測(cè)220nm；樣品注射10μl. 方法57柱柱Kromasil 100 C18，60 x 2.1mm 3.5μm，柱烘箱30℃，流速0.75ml/分鐘，檢測(cè)器210nm，運(yùn)行時(shí)間15分鐘；洗脫劑A具有5ml的HClO4/升水的水)，洗脫劑B乙腈；梯度0-1分鐘 2％B，斜度，9-13分鐘，98％ B，再調(diào)節(jié). 方法58(手性制備HPLC，Chiralpak AD-H 40-60)；柱(不銹鋼柱，尺寸250 x 20mm)；靜止相(Daicel Chiralpak AD-H，5μm)；洗脫劑異已烷(40％)/乙醇+0.2％ AcOH+1％ H2O(60％)，等度；流速15ml/分鐘；溫度30℃；UV檢測(cè)220nm；樣品重復(fù)注射500μl. 方法59(手性分析HPLC，Chiralpak AD-H 40-60)；柱(不銹鋼柱，尺寸250 x 4.6mm)；靜止相(Daicel Chiralpak AD-H，5μm)；洗脫劑異已烷(40％)/乙醇+0.2％ AcOH+1％ H2O(60％)，等度；流速1.0ml/分鐘；溫度30℃；UV檢測(cè)220nm；樣品注射10μl. 一般操作方法 操作方法1(用TFA去除Boc保護(hù)基) 將Boc-保護(hù)的化合物懸浮在二氯甲烷(1/5-1/10的反應(yīng)溶液)中，然后在氬氣保護(hù)氣氛下加入二氯甲烷中的30％的TFA(在100-1毫摩爾的級(jí)別上約1ml/10mg的原材料，在100-1微摩爾的級(jí)別上約1ml/1mg)，將混合物在室溫下攪拌直至HPLC色譜圖顯示完全轉(zhuǎn)化(例如方法1)。然后真空蒸餾掉溶劑，其中浴溫不應(yīng)當(dāng)超過(guò)30℃。將粗產(chǎn)物懸浮在甲苯中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上再次濃縮并在高真空下干燥。重復(fù)該步驟數(shù)次(2-5次)。如果產(chǎn)物的純度不足，在適當(dāng)時(shí)通過(guò)色譜法，例如通過(guò)制備HPLC或通過(guò)凝膠色譜法進(jìn)行純化。
操作方法2(用30％在二氯甲烷中的TFA去除Boc保護(hù)基)將原材料吸收在30％ TFA(在二氯甲烷中的溶液)中并在室溫?cái)嚢?0分鐘。接著將所述溶劑在真空中蒸餾除去，其中浴溫不應(yīng)該超過(guò)30℃。接著在油泵真空下將所述產(chǎn)物干燥到恒重。
操作方法3(用在二噁烷中的4N鹽酸去除Boc保護(hù)基)在氬氣保護(hù)氣氛下，提供在二噁烷(2-3ml)中的N-(叔丁氧羰基)-保護(hù)的化合物(1mmol)。在室溫或當(dāng)在冰中冷卻并劇烈攪拌時(shí)，逐滴加入在二噁烷(30ml)中的4N鹽酸。持續(xù)攪拌直到分析HPLC(方法1)顯示完全轉(zhuǎn)化(約30分鐘到2小時(shí))。將所述反應(yīng)混合物在真空中在室溫蒸發(fā)。將粗制產(chǎn)物吸收在少量二氯甲烷中并再次在真空中去除溶劑。用甲苯(2次)和用二氯甲烷(2次)重復(fù)該步驟數(shù)次。最終，將粗制產(chǎn)物冷凍干燥或在高真空干燥后立即進(jìn)一步反應(yīng)。如果產(chǎn)物的純度不足，適當(dāng)時(shí)通過(guò)色譜法，例如通過(guò)制備HPLC或凝膠色譜法進(jìn)行純化。
操作方法4(氫化酯裂解1)將肽芐酯溶解于甲醇或二噁烷(約3·10-4-2·10-3mol/l)中，隨后加入0.1％TFA或0.1N鹽酸(6-10當(dāng)量)水溶液，在氬氣保護(hù)氣氛下，加入10％披鈀碳(10mol％)。在室溫，在大氣壓下進(jìn)行氫化直到分析HPLC(例如方法1)顯示完全的轉(zhuǎn)化。過(guò)濾反應(yīng)混合物(例如通過(guò)硅藻土，

)，在真空中濃縮并在高真空下干燥。如果產(chǎn)物的純度不足，如果適當(dāng)時(shí)通過(guò)色譜法，例如通過(guò)制備HPLC或凝膠色譜法進(jìn)行純化。
操作方法5(氫化酯裂解2)將肽芐酯溶解于甲醇(約3·10-4-2·10-3mol/l)中，隨后在氬氣保護(hù)氣氛下，加入10％披鈀碳(2-10mol％)。在室溫，在大氣壓下進(jìn)行氫化直到分析HPLC(例如方法1)顯示完全的轉(zhuǎn)化。過(guò)濾反應(yīng)混合物(例如通過(guò)硅藻土，

)，在真空中濃縮并在高真空下干燥。如果產(chǎn)物的純度不足，適當(dāng)時(shí)通過(guò)色譜法，例如通過(guò)制備HPLC或凝膠色譜法進(jìn)行純化。
操作方法6(水解性酯裂解，水解)在氬氣保護(hù)氣氛下將羧酸酯(3mmol)提供到THF/水/DMF 200/100/2.5(20ml)中。在嚴(yán)格溫度控制0℃下，將粉末氫氧化鋰(3.6mmol，1.2當(dāng)量)分份加入劇烈攪拌的溶液中。當(dāng)在2h后通過(guò)分析HPLC(方法13)觀察到?jīng)]有完全轉(zhuǎn)化時(shí)，再次加入固體氫氧化鋰(3.3mmol，1.1當(dāng)量)。重復(fù)該操作直至完全轉(zhuǎn)化，隨后將反應(yīng)混合物在0℃下用0.1N鹽酸水溶液調(diào)整到pH 3-4，真空濃縮并隨后冷凍干燥。然后將粗產(chǎn)物凝膠-色譜分離(例如方法45)和/或通過(guò)制備HPLC(例如方法31)精制。
操作方法7(在樹(shù)脂上的肽偶聯(lián))將結(jié)合于氯三苯甲基樹(shù)脂的Fmoc-保護(hù)的氨基酸與20％的在DMF中的哌啶溶液混合并振搖30分鐘。接著用通過(guò)玻璃料抽吸濾去溶液，再加入哌啶溶液，并再持續(xù)振搖30分鐘。用抽吸濾去溶液，并將所述樹(shù)脂用DMF，甲醇，THF和二氯甲烷洗滌。
將去保護(hù)的聚合物懸浮在DMF(1ml溶劑/100mg樹(shù)脂)中并加入溶解在DMF中的Fmoc-保護(hù)的氨基酸(1.3-2.0當(dāng)量)，DIEA(2.0-3.0當(dāng)量)和TBTU(1.5-2.0當(dāng)量)。將樹(shù)脂在室溫振搖過(guò)夜。對(duì)于后處理，將所述聚合物在玻璃料上通過(guò)吸濾收集并隨后用DMF，THF和二氯甲烷洗滌。
在樣品在乙酸/三氟乙醇/二氯甲烷1:1:3中去除后，可以通過(guò)分析證實(shí)獲得的肽。
操作方法8(在Chemspeed機(jī)器人上進(jìn)行自動(dòng)固相合成) 儀器 Chemspeed ASW 2000，配有75ml反應(yīng)器并用抽吸直接過(guò)濾到溶劑廢棄物中。通過(guò)渦旋混合。
試劑 使用在N2位置上具有N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]保護(hù)基(Fmoc基團(tuán))的氨基酸。
除了在N2位置的Fmoc保護(hù)基外，在下列氨基酸的側(cè)鏈中使用另外的保護(hù)基精氨酸和D-精氨酸在胍官能團(tuán)上分別攜帶[(2，2，5，7，8-五甲基-3，4-二氫-2H-色烯-6-基)磺?；?PMC基團(tuán))；絲氨酸和蘇氨酸分別作為O3-叔丁基絲氨酸和蘇氨酸進(jìn)行側(cè)鏈保護(hù)。在賴氨酸，鳥(niǎo)氨酸，2，4-二氨基丁酸和2，3-二氨基丁酸的側(cè)鏈中的氨基是用芐氧基羰基(Cbz基團(tuán))保護(hù)的。
方法 將1.7g的2-氯三苯甲基氯樹(shù)脂(Iris Biotech，CAS No 42074-68-0)(用α-Fmoc-保護(hù)的氨基酸預(yù)上樣的，0.85mmol/g)無(wú)水提供在每個(gè)反應(yīng)器中，加入17ml的DMF，并將所述混合物振搖30分鐘。通過(guò)吸濾去除DMF。
為了合成所述的八肽，進(jìn)行7個(gè)去保護(hù)-偶聯(lián)循環(huán)，其每個(gè)由下列步驟組成 1.)Fmoc去除 -加入12.75ml的DMF和4.25ml的哌啶。
-將所述混合物振搖30分鐘。
-通過(guò)吸濾去除DMF/哌啶混合物。
-加入12.75ml的DMF和4.25ml的哌啶。
-將所述混合物振搖10分鐘。
-通過(guò)吸濾去除DMF/哌啶混合物。
2.)洗滌步驟(重復(fù)5次) -加入17ml的DMF。
-將所述混合物振搖30分鐘。
-通過(guò)吸濾去除DMF。
3.)氨基酸偶聯(lián) -加入溶解于DMF的10.2ml的相應(yīng)的Fmoc-氨基酸(1.5當(dāng)量)。
-加入6.8ml的溶解于DMF的TBTU(2當(dāng)量)。
-加入二異丙基乙胺(3當(dāng)量)。
-將所述反應(yīng)混合物振搖2小時(shí)，接著通過(guò)吸濾除去。
4.)洗滌步驟(重復(fù)3次) -加入17ml的DMF。
-將所述混合物振搖30分鐘。
-通過(guò)吸濾去除DMF。
在最后一個(gè)反應(yīng)步驟后，將已經(jīng)通過(guò)吸濾收集的產(chǎn)物樹(shù)脂用10ml的二氯甲烷轉(zhuǎn)移到濾器中，通過(guò)過(guò)濾收集并洗滌兩次，每次用5ml的二氯甲烷。
操作方法9(以完全去保護(hù)去除)將具有肽的樹(shù)脂在反應(yīng)器中與具有在DCM中50％ TFA(對(duì)于在操作方法8中所述大小的混合物20ml溶液)的玻璃料基質(zhì)混合，加入三異丙基硅烷(100μl)和水(100μl)，并將所述混合物在室溫振搖過(guò)夜。接著通過(guò)吸濾去除深色溶液，用4份DCM洗滌樹(shù)脂，每次振搖2分鐘，并再次通過(guò)吸濾收集。合并濾液并將溶劑蒸餾除去。殘余物用MTBE攪拌，通過(guò)吸濾收集并吸收在甲醇中。最終，將甲醇在真空中蒸餾除去。
操作方法10(與橋頭活性酯偶聯(lián))將八肽和活性酯(化合物17A或化合物277A(1.1當(dāng)量)在0℃溶解于DMF(20-40μl/μmol的八肽)并加入DIEA(4-5當(dāng)量)。將所述反應(yīng)混合物在室溫再攪拌90分鐘到2小時(shí)。將所述混合物吸收在乙腈中并通過(guò)色譜法純化。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并冷凍干燥。
操作方法11(環(huán)化)將起始化合物溶解于DMF(約50μl/μmol)并將所述溶液冷卻到0℃。加入4-甲基嗎啉(6當(dāng)量)和HATU(3當(dāng)量)并將所述混合物在0℃攪拌2小時(shí)。直接通過(guò)上樣完全的反應(yīng)混合物和根據(jù)方法45或提及的HPLC方法之一分離進(jìn)行后處理。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并冷凍干燥或在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上濃縮。
操作方法12(使用哌啶去除Fmoc基團(tuán))在0℃將肽與THF和哌啶的混合物(4+1，約20μl/μmol)混合。隨后，將所述混合物在該溫度攪拌1小時(shí)。將反應(yīng)混合物直接通過(guò)方法45純化并合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并濃縮。
操作方法13(在液相階段使用HATU進(jìn)行肽偶聯(lián))將具有未保護(hù)的N端的環(huán)狀肽(例如，示例性化合物407，408，409，等)和二肽(例如化合物8A，10A，等)(1.5當(dāng)量)溶解于DMF(約30-80μl/μmol的環(huán)肽)并將所述溶液冷卻到0℃。加入4-甲基嗎啉(4當(dāng)量)和HATU(1.6當(dāng)量)并將所述混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。接著用3ml的甲醇終止反應(yīng)并根據(jù)方法45通過(guò)色譜法純化。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并濃縮。
起始化合物 實(shí)施例1A D-亮氨酰-L-亮氨酰-L-苯基丙氨酰-[(3R)-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰—L-異亮氨酰-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-天冬酰胺酰]-絲氨酸三氟乙酸鹽(二氫溶桿菌素) 和 實(shí)施例2A D-亮氨酰-L-亮氨酰-[3-環(huán)已基-L-丙氨酰]-[(3R)-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨?！狶-異亮氨酰-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-天冬酰胺酰]-絲氨酸三氟乙酸鹽(八氫溶桿菌素) 二氫溶桿菌素

通過(guò)在WO 2004/099239中所述的發(fā)酵及其分離來(lái)制備溶桿菌素雙三氟乙酸鹽。將溶桿菌素雙三氟乙酸鹽(20g，13.29mmol)溶解于兩份異丙醇/水9:2(每份110ml)中。在氬氣保護(hù)氣氛下，加入披鈀碳(10％；每種情況中5g)。將反應(yīng)混合物(在脫氣后)在80-70巴的氫壓下在40℃于加壓的壓熱器中攪拌12小時(shí)。再次將披鈀碳(10％；5g)加入反應(yīng)中。將反應(yīng)混合物(在脫氣后)再在80-70巴的氫壓下在40℃于加壓的壓熱器中攪拌12小時(shí)。將反應(yīng)混合物再次(在脫氣后)在80-70巴的氫壓下在40℃于加壓的壓熱器中攪拌12小時(shí)。現(xiàn)在通過(guò)分析HPLC(方法10)不再能檢測(cè)到溶桿菌素。通過(guò)硅藻土過(guò)濾反應(yīng)混合物，在真空中濃縮并在高真空下干燥。獲得20.10g(理論值的99％)的產(chǎn)物(60％二氫溶桿菌素，40％八氫溶桿菌素)。
實(shí)施例3A [(3R)-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨?！狶-異亮氨酰-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-天冬酰胺酰]-絲氨酸三氟乙酸鹽
二氫/八氫溶桿菌素混合物的制備胰凝乳蛋白酶裂解 底物濃度為5mg/ml 將20g的二氫-(約40％)和八氫溶桿菌素(約60％)溶解于400ml的甲醇并接著加入3400ml的裂解緩沖液(0.1M碳酸氫銨/0.5M尿素pH 8)。在加入酶之前，將所述溶液在干燥烘箱中升溫到37℃。加入800mg的胰凝乳蛋白酶(100ml的胰凝乳蛋白酶溶液水/乙二醇1:1，4mg/ml；1:25；預(yù)溫到37℃)并在37℃進(jìn)行反應(yīng)。在0.5，1小時(shí)后取200μl的等分試樣，用200μl的30％乙腈/0.1％ TFA終止酶裂解。在15分鐘內(nèi)在進(jìn)行酶裂解的同時(shí)通過(guò)HPLC分析樣品(保留時(shí)間片段4-11約3.6分鐘，片段1-3(LLF)約9.6分鐘，片段1-3(LLA(3-環(huán)已基))約11.3分鐘)(溶劑A0.1％TFA，溶劑B 60％乙腈/0.1％ TFA，梯度0分鐘30％ B，10分鐘80％ B，11分鐘100％ B，12分鐘30％ B，15分鐘30％ B；流速0.7ml/分鐘，溫度40℃，UV檢測(cè)210nm)。在60分鐘后用150ml的乙腈和約30ml的TFA終止酶反應(yīng)。溶液的pH應(yīng)該在1和2之間?？梢詫⑷芤捍尜A在-20℃直到進(jìn)行制備分離。
用蛋白白介素-4雙突變蛋白Arg(121)→Asp(121)/Tyr(124)→Asp(124)(拜耳健康護(hù)理(Bayer Healthcare)AG，D-Wuppertal)通過(guò)對(duì)照裂解，測(cè)試所用的胰凝乳蛋白酶批次的活性(70U/mg)。
制備純化首先將上述的裂解混合物的500ml份的溶液在真空下通過(guò)硅藻土層，接著通過(guò)壓力過(guò)濾漏斗(450μm，具有預(yù)先過(guò)濾器)過(guò)濾。將濾液上樣到Varian Metaflash C-18 40M柱體中。用下列操作方法進(jìn)行洗脫溶劑A0.05％在水中的TFA，溶劑B0.05％在乙腈中的TFA。流速50ml/分鐘；0-3分鐘5％ B；斜度；30分鐘90％ B，33分鐘。90％ B。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并進(jìn)行冷凍干燥。從合并的包含產(chǎn)物的級(jí)分獲得11.8g(理論值的87％)的標(biāo)題化合物。
實(shí)施例4A (Z)-2-[(叔丁氧羰基)氨基]-4，4-二甲基戊-2-烯酸甲酯
將新戊醛(303.2g，3.41mol，10當(dāng)量)和{[(叔丁氧)羰基]氨基}(二甲氧基磷?；?乙酸甲酯(101.5g，0.341mol，1.0當(dāng)量)溶解于THF(800ml)并冷卻到-70℃。在-70℃，將TMG(78.7g，0.683mmol，6.95ml，2.0當(dāng)量)緩慢逐滴加入并接著將所述混合物在-70℃攪拌4小時(shí)，隨后在室溫?cái)嚢?天。濃縮反應(yīng)混合物并接著通過(guò)用乙酸乙酯(兩次500ml)和水振搖提取，用飽和的氯化鈉溶液(100ml)洗滌合并的有機(jī)相并通過(guò)硫酸鈉干燥。在濃縮后，將粗產(chǎn)物進(jìn)行色譜分離(1.5kg的硅膠，洗脫劑環(huán)已烷/乙酸乙酯5:1)。獲得67g(理論值的76％)的標(biāo)題化合物。
備選地，在水性后處理后，粗制產(chǎn)物可以通過(guò)從環(huán)已烷/乙酸乙酯進(jìn)行結(jié)晶而純化。
Rf(硅膠，環(huán)已烷/乙酸乙酯 4:1)＝0.5 LC-MS(方法18)Rt＝2.5分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝158(100)[M-C4H8-CO2+H]+，280(5)[M+Na]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ 1.08(s，9H，C(CH3)3)，1.38(s，9H，OC(CH3)3)，3.61(s，3H，CO2CH3)，6.40(s，1H，Hβ)，8.14(s，1H，NH)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ 28.46(3C)，29.53(3C)，33.28，52.22，78.89，125.62，147.05，154.67，166.25. HR-TOF-MS(方法24)C13H23NO4[M+H]+實(shí)測(cè)值258.1696，計(jì)算值.258.1700. 實(shí)施例5A N2-(叔丁氧羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酸甲酯
將(2Z)-2-[(叔丁氧羰基)氨基]-4，4-二甲基戊-2-烯酸甲酯(實(shí)施例4A，60g，233.2mmol)溶解于乙醇p.a./二噁烷3:1(1000ml)。用針(needle)使氬氣保護(hù)氣氛通過(guò)(～10分鐘)。將溶液置于超聲波浴中(約5分鐘)并加入(+)-1，2-雙[(2R，5R)-二乙基phospholano]苯(環(huán)辛二烯)銠(I)三氟甲磺酸鹽(600mg，1重量％)。在3.5巴的氫壓和在室溫將所述混合物氫化3天。通過(guò)硅藻土過(guò)濾反應(yīng)混合物，并濃縮洗脫物。將所述粗產(chǎn)物進(jìn)行色譜分離(硅膠，洗脫劑環(huán)已烷/乙酸乙酯 4:1)。獲得60g(理論值的99％)的標(biāo)題化合物。
[α]20Na＝+5°(c＝0.33，在CHCl3中)。
DCI-MS(NH3)m/z(％)＝221(100)，260(40)[M+H]+，277(100)[M+NH4]+. 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ 0.93(s，9H，C(CH3)3)，1.40(m，10H，OC(CH3)3)，1.68(“d”，J＝14.5Hz，2H，Hβ)，3.68(s，3H，OCH3)，4.30(t，J＝7.9Hz，1H，Hα)，4.81(d，br，J＝7.7Hz，1H，NH)。
13C NMR(126MHz，CDCl3)δ 28.30(3C，CH2C(CH3)3)，29.52(3C，OC(CH3)3)，30.61(CH2C(CH3)3)，46.27(CβH2)，51.19(Hα)，52.17(OCH3)，79.79(OC(CH3)3)，155.11(NHCO2)，174.39(CO2CH3)。
HR-TOF-MS(方法24)C26H51N2O8計(jì)算值519.3640，實(shí)測(cè)值519.3634[M+H]+. 實(shí)施例6A N2-(叔丁氧羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酸
將N-叔丁氧羰基-3-叔丁基-D-丙氨酸甲酯(實(shí)施例5A，60g，231mmol)溶解于THF p.a.(463ml)。在室溫，緩慢逐滴加入一水合氫氧化鋰(19.4g，462.7mmol)在水(463ml)中的溶液。當(dāng)HPLC色譜(方法1)顯示完全的轉(zhuǎn)化(約20小時(shí))時(shí)，使用1N鹽酸水溶液將反應(yīng)混合物小心調(diào)節(jié)到pH 3-4，同時(shí)在冰中冷卻。將固體氯化鈉(150g)加入反應(yīng)混合物，接著將其用乙酸乙酯(500ml)提取兩次。用飽和的氯化鈉溶液洗滌合并的有機(jī)相，接著用硫酸鈉干燥并過(guò)濾。將濾液在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上濃縮并在高真空下干燥。獲得55.4g(理論值的98％)的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法3)Rt＝4.2分鐘。
DCI-MS(NH3)m/z(％)＝263(100)[M+NH4]+，280(5)[M+N2H7]+. 1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.96(s，9H，C(CH3)3)，1.42(m，10H，OC(CH3)3，Hβ)，1.79(，，d“，J＝14.4Hz，2H，Hβ)，4.31(t，J＝8.0Hz，1H，Hα)，4.82(d，J＝8.4Hz，1H，NH)。
13C NMR(126MHz，CDCl3)δ＝28.32(3C)，29.54(3C)，30.74，45.92，51.24，80.19，155.41，178.93. HR-TOF-MS(方法24)C24H47N2O8計(jì)算值491.3327，實(shí)測(cè)值491.3328[2M+H]+. 實(shí)施例7A [N2-(叔丁氧羰基)-(3-叔丁基-D-丙氨酰)]-(3-叔丁基-L-丙氨酸)甲酯
在-20℃，將HOBt(3當(dāng)量，39.4g，292mmol)，NMM(3當(dāng)量，32.1ml，291.8mmol)，N-叔丁氧羰基-3-叔丁基-D-丙氨酸(實(shí)施例6A，1.0當(dāng)量，97.3mmol)，EDC(2當(dāng)量，37.3g，194.6mmol)和另外的NMM(2當(dāng)量，21.4ml，194.5mmol)連續(xù)加入3-叔丁基-L-丙氨酸甲酯鹽酸鹽(1.1當(dāng)量，21g，107mmol)在二氯甲烷p.a.(1.41)中的溶液。將反應(yīng)混合物緩慢升溫到室溫(約12h)，其中通過(guò)HPLC觀察到胺成分完全的轉(zhuǎn)化。接著用飽和的碳酸氫鈉水溶液(300ml)，5％檸檬酸水溶液(500ml)，飽和碳酸氫鈉水溶液(500ml)和飽和的氯化鈉溶液將反應(yīng)混合物洗滌。將反應(yīng)混合物通過(guò)硫酸鈉干燥并過(guò)濾。將反應(yīng)混合物在真空中蒸發(fā)到干燥并接著在高真空下干燥。獲得36g(理論值的96％)的標(biāo)題化合物，其不經(jīng)過(guò)純化而進(jìn)行反應(yīng)。
[α]20Na＝+24°(c＝0.10，在CH2Cl2中)。
DCI-MS(NH3)m/z(％)＝387(40)[M+H]+，404(100)[M+NH4]+. LC-MS(方法20)Rt＝2.6分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝287(100)[M-C5O2H8+H]+，387(60)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ 0.95(s，br，18H，tBu)，1.35(dd，1H)，1.45(s，9H，OtBu)，1.50(dd，1H)，1.65(dd，1H)，1.95(dd，br，1H)，3.70(s，3H，OCH3)，4.15(，，t“，br，1H)，4.55(，，t“，br，1H)，4.80(d，1H)，6.65(d，br，1H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ 28.39(3C，C(CH3)3)，29.49(3C，C(CH3)3)，29.67(3C，C(CH3)3)，30.40(C(CH3)3)，30.44(C(CH3)3)，44.25，45.12，49.56，52.06，52.21，78.17，154.93，173.00，173.35. HR-TOF-MS(方法24)C20H39N2O5[M+H]+實(shí)測(cè)值387.2860，計(jì)算值387.2859. 實(shí)施例8A [N2-(叔丁氧羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-3-叔丁基-L-丙氨酸
將實(shí)施例7A(36g，93.1mmol)的化合物溶解于THF p.a.(279ml)。在約10℃，緩慢逐滴加入一水合氫氧化鋰(7.82g，186.3mmol，2當(dāng)量)在水(187ml)中的溶液。當(dāng)HPLC色譜圖(方法1)顯示完全的轉(zhuǎn)化(約20小時(shí))，在200m巴下去除反應(yīng)混合物中的THF，并接著用MTBE(200ml)提取。將有機(jī)相用乙酸乙酯(500ml)稀釋，接著與水混合并用1N鹽酸水溶液小心調(diào)節(jié)到pH 3-4。將合并的有機(jī)相用飽和的鹽水洗滌，通過(guò)硫酸鈉干燥，過(guò)濾，在真空中蒸發(fā)并在高真空下干燥。獲得97.4g(理論值的97％)的標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法18)Rt＝2.26分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝373(100)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ 0.83(s，br，18H，tBu)，1.31(s，9H，OtBu)，1.40(m，2H，β-CH2)，1.48(dd，J＝14.1，9.4Hz，1H，β-CH)，1.59(dd，J＝14.1，2.7Hz，1H，β-CH′)，3.98(m，1H，α-CH)，4.12(m，1H，α-CH)，6.73(d，J＝9.1Hz，1H，NH)，7.72(d，J＝7.9Hz，1H，NH)，12.42(s，br，1H，CO2H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ 28.49(3C)，29.66(3C)，29.78(3C)，30.52，30.58，44.63(β-CH2)，45.24(β-CH2)，49.67(α-CH)，52.40(α-CH)，78.29，155.05，172.97，174.61. HR-TOF-MS(方法24)C19H37N2O5計(jì)算值373.2702，實(shí)測(cè)值373.2717[M+H]+. 實(shí)施例9A (3-叔丁基-D-丙氨酰)-3-叔丁基-L-丙氨酸鹽酸鹽
將實(shí)施例8A的化合物(4.5g，12.1mmol)預(yù)先溶解在二噁烷(3ml)中。在室溫，逐滴加入鹽酸在二噁烷(30.2mmol，120mmol，10當(dāng)量)中的4N溶液。將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘，在真空中蒸發(fā)并在高真空下干燥。獲得標(biāo)題化合物，其為無(wú)色的固體(3.5g，99％理論值)。
LC-MS(方法18)Rt＝1.52分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝273.6(100)[M+H]+；ESInegm/z＝271.5(100)[M-H]-. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ 0.85(s，9H，tBu)，0.86(s，9H，tBu)，1.49(dd，J＝14.3，1.6Hz，1H，β-CH)，1.50(d，J＝13.8Hz，1H，β-CH)，1.64(dd，J＝14.3，4.0Hz，1H，β-CH)，1.71(dd，J＝14.3，6.9Hz，1H，β-CH)，3.77(，，t“，J＝6.5Hz，1H，α-CH)，4.14(m，1H，α-CH)，8.27(s，br，3H)，8.94(d，J＝8.2Hz，1H，NH)，12.58(s，br，1H，CO2H)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ 28.41(3C)，29.50(3C)，30.08，30.38，44.46，44.80，50.03，50.30，169.10，173.98. HR-TOF-MS(方法24)C14H29N2O3計(jì)算值273.2173，實(shí)測(cè)值273.2167[M+H]+. 實(shí)施例10A [N2-(芐氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-3-叔丁基-L-丙氨酸
在氬氣保護(hù)氣氛下，將二肽(實(shí)施例9A，3.73g，12.1mmol)溶解于THF(170ml)中。在0℃加入水(170ml)，芐氧基羰基氧基琥珀酰亞胺酯(4.52g，18.1mmol，1.5當(dāng)量)和NMM(4.28g，4.23mmol，3.5當(dāng)量)，隨后在室溫劇烈攪拌直到所有的原材料反應(yīng)(數(shù)小時(shí)，HPLC監(jiān)測(cè)，方法1)。用冰醋酸猝滅混合物。THF在真空中去除。用乙酸乙酯層覆蓋剩余的水相，使用4N鹽酸酸化到pH<3，接著用乙酸乙酯提取數(shù)次。將有機(jī)相用飽和的氯化鈉溶液洗滌，通過(guò)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。將得到的泡沫用乙腈攪拌，由此形成無(wú)色的固體，其通過(guò)過(guò)濾收集并且用少量乙腈洗滌。在將其濃縮后，該方法可以用濾液再重復(fù)數(shù)次。將合并的固體在高真空下干燥，由此獲得標(biāo)題化合物，其為固體。將剩余的母液濃縮并通過(guò)制備HPLC(方法26)純化。獲得標(biāo)題化合物(合并的固體和來(lái)自HPLC分離的純化產(chǎn)物)，其為無(wú)色的固體(3.49g，71％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法1)Rt＝2.6分鐘。
LC-MS(方法21)Rt＝2.46分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝363(60)，407(100)[M+H]+.ESInegm/z＝297(100)，405.5(40)[M-H]-. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ 0.81(s，9H，tBu)，0.83(s，9H，tBu)，1.40-1.44(m，2H，β-CH2)，1.49(dd，J＝14.3，9.7Hz，1H，β-CH)，1.58(dd，J＝13.5，1.4Hz，1H，β-CH)，4.07(m，1H，α-CH)，4.13(m，1H，α-CH)，4.94(d，J＝12.3Hz，1H，CHHPh)，4.99(d，J＝12.5Hz，1H，CHHPh)，7.25-7.32(m，5H，ArH)，7.92(d，J＝8.5Hz，1H，NH)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ 29.49(3C)，29.75(3C)，30.41，30.46，44.52，45.11，49.55，52.73，65.49，127.70(2C)，127.91，128.48(2C)，137.31，155.59，172.52，174.50. HR-TOF-MS(方法24)C22H34N2O5計(jì)算值407.2541，實(shí)測(cè)值407.2531[M+H]+. 實(shí)施例11A 甲基-(2R*，3R*)-N2-[(芐氧基)羰基]-N2-[(芐氧基)羰基氨基]-3-[(叔丁氧-羰基)氨基]苯丙氨酸酯
在氬氣保護(hù)氣氛下，在反應(yīng)溶劑THF(300ml)中提供六甲基二硅基胺基鋰(157.5mmol，157.5ml，2.2當(dāng)量)在THF中的1N溶液。在-78℃，緩慢逐滴加入(rac)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-3-苯基丙酸甲酯(A.V.Rao Rama，A.K.Singh，Ch.V.N.S.Varaprasad，Tetrahedron Lett.，1991，32，4393-4396)(20g，71.2mmol)的溶液。將所述混合物在-25℃攪拌10分鐘，并接著再次冷卻到-78℃。以一份將氮雜二羧酸二芐酯(34.2g，114.6mmol，1.6當(dāng)量)加入反應(yīng)混合物中。將所述混合物在-60到-45℃攪拌3小時(shí)。為了終止反應(yīng)，將所述混合物再次冷卻到-78℃，加入乙酸(20.5ml，358mmol，5當(dāng)量)并接著將所述混合物升溫到0℃，最終加到室溫。將反應(yīng)混合物在真空中蒸發(fā)并吸收在乙酸乙酯(1000ml)中。將混懸液用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌2次，用水洗滌1次，用5％檸檬酸水溶液洗滌1次并用飽和氯化鈉水溶液洗滌1次。所有的水相用乙酸乙酯單獨(dú)反提取。所有的有機(jī)相在真空中蒸發(fā)并再次吸收在二氯甲烷(2000ml)中，過(guò)濾，通過(guò)硫酸鈉干燥，再次過(guò)濾，在真空中蒸發(fā)并在高真空下干燥。獲得7.2g(理論值的18％)的標(biāo)題化合物，其為固體。濃縮二氯甲烷相的濾液(見(jiàn)上)，接著再次從甲醇中進(jìn)行結(jié)晶，由此獲得13.2g(理論值的26％)的標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法23)Rt＝6.8分鐘； MS(ESIpos.)m/z(％)＝578(40)[M+H]+，1156(100)[2M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝576(100)[M-H]-. 實(shí)施例12A (2S*，3R*)-N2-[(芐氧基)羰基]-N2-[(芐氧基)羰基氨基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯
在氬氣保護(hù)氣氛下，在0℃，將TMG(50ml，399mmol)加入甲基-(2R*，3R*)-N2-[(芐氧基)羰基]-N2-[(芐氧基)羰基氨基]-3-[(叔丁氧羰基)-氨基]苯丙氨酸酯(實(shí)施例11A，20.5g，35.5mmol)在無(wú)水DMF p.a.(750ml)中的溶液。使反應(yīng)混合物融化并且攪拌直到HPLC色譜法(方法1)顯示完全的轉(zhuǎn)化(約60％產(chǎn)物)(約12小時(shí))，從而接著通過(guò)加入乙酸(pH 4-6)終止反應(yīng)。反應(yīng)混合物在室溫在真空中蒸發(fā)并吸收在乙酸乙酯中。有機(jī)相用水洗滌2次，用5％檸檬酸洗滌2次，用水洗滌1次，用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌兩次，用飽和的氯化鈉水溶液洗滌1次，通過(guò)硫酸鈉干燥，過(guò)濾，在真空中蒸發(fā)并在高真空下干燥。將粗制產(chǎn)物通過(guò)制備HPLC(方法30)或急驟色譜法(硅膠，環(huán)已烷/乙酸乙酯3:1)純化。獲得7.7g(理論值的37％)的標(biāo)題化合物和5g的起始化合物(理論值的25％)。
HPLC/UV-Vis(方法1)Rt＝3.0分鐘。
LC-MS(方法10)Rt＝3.0分鐘； MS(ESIpos.)m/z(％)＝478(100)[M-Boc+H]+，578(30)[M+H]+. LC-MS(方法23)Rt＝7.0分鐘； MS(ESIpos.)m/z(％)＝578(40)[M+H]+，1156(100)[2M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝576(100)[M-H]-. 實(shí)施例13A 甲基-(2S*，3R*)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸酯
在氬氣保護(hù)氣氛下，將阮內(nèi)鎳(61mg，約10mol％)加入(2S*，3R*)-N2-[(芐氧基)羰基]-N2-[(芐氧基)羰基氨基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸甲酯(實(shí)施例12A，705mg，1.22mmol)在甲醇/二氯甲烷1:1(42ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物在80巴的氫壓下和在室溫在加壓的壓熱器中氫化(40小時(shí))。HPLC色譜圖顯示完全的轉(zhuǎn)化。在氬氣保護(hù)氣氛下，通過(guò)玻璃料過(guò)濾反應(yīng)混合物并將所述玻璃料用甲醇/水/0.2％乙酸洗滌數(shù)次。將所述濾液在真空中蒸發(fā)并在高真空下干燥。獲得固體(約3g)，接著將其懸浮在超聲波浴的乙酸乙酯中。將所述混懸液與EDTA(400mg)在7％碳酸氫鈉水溶液(400ml)中的EDTA(400mg)的溶液混合。將水相用乙酸乙酯(100ml，三次)提取。接著，將合并的有機(jī)相用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌1次，并用飽和的氯化鈉水溶液洗滌兩次。用乙酸乙酯分別反提取所有的水相。接著，將合并的有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在高真空下干燥。獲得的產(chǎn)物是固體(1.26g，定量的)，其無(wú)需精制而進(jìn)一步反應(yīng)。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝1.7分鐘。
LC-MS(方法23)Rt＝4.1分鐘； MS(ESIpos.)m/z(％)＝239(100)，295(80)[M+H]+. 實(shí)施例14A 甲基(2S*，3R*)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸酯
在0℃，在氬氣保護(hù)氣氛下，將NMM(260mg，2.6mmol，2.1當(dāng)量)加入甲基(2S*，3R*)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸酯(實(shí)施例13A，360mg，1.2mmol)和N-芐氧基羰基氧基琥珀酰亞胺酯(610mg，2.44mmol，2當(dāng)量)在THF(25ml)中的溶液。將所述反應(yīng)混合物緩慢升溫(12小時(shí))，由此通過(guò)HPLC(方法2)觀察到完全的轉(zhuǎn)化。加入乙酸(0.7ml)，并將所述混合物隨后在真空中濃縮和通過(guò)制備HPLC(方法31)純化。獲得396mg(理論值的76％)的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝2.7分鐘。
LC-MS(方法23)Rt＝6.4分鐘； MS(ESIpos.)m/z(％)＝329(100)[M-C4H8-CO2+H]+，429(80)[M+H]+，858(60)[2M+H]+. 實(shí)施例15A (2S*，3R*)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸
在氬氣保護(hù)氣氛下，提供甲基(2S*，3R*)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸酯(實(shí)施例15A，755mg，1.76mmol)在THF/水 2:1(30ml)中的溶液。在0℃，在劇烈攪拌的同時(shí)，緩慢逐滴加入脫氣的1％的一水合氫氧化鋰(86.5mg，3.6mmol，2當(dāng)量)的水溶液。將所述混合物在室溫?cái)嚢柚钡紿PLC色譜圖(方法1)顯示完全的轉(zhuǎn)化(約1小時(shí))。隨后加入乙酸(0.5ml)，并將反應(yīng)混合物在真空中濃縮并用乙酸乙酯(100ml)層覆蓋。接著，將所述水相用5％檸檬酸(pH 2-3)酸化并接著用乙酸乙酯(50ml)提取三次。將合并的有機(jī)相用飽和的氯化鈉水溶液(20ml)洗滌2次，通過(guò)硫酸鈉干燥，過(guò)濾，在真空中濃縮并在高真空下干燥。獲得750mg(定量)的標(biāo)題化合物的粗制產(chǎn)物，其通過(guò)制備HPLC(方法31)進(jìn)行精制。
HPLC/UV-Vis(方法1)Rt＝2.4分鐘。
LC-MS(方法23)Rt＝6.1分鐘； MS(ESIpos.)m/z(％)＝359(100)，415(60)[M+H]+，829(60)[2M+H]+. MS(ESIneg.)m/z(％)＝413(100)[M-H]-. 實(shí)施例16A (3R)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸
將(2S*，3R*)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸(實(shí)施例15A，750mg，1.8mmol)的對(duì)映異構(gòu)體的混合物通過(guò)制備HPLC(方法38)分離。獲得334mg(98％ee，45％理論值)的(2S，3R)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸(標(biāo)題化合物)和275mg(98％ee，37％理論值)(2R，3S)-N-[(芐氧基)-羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]苯丙氨酸(另外的對(duì)映異構(gòu)體)。
通過(guò)方法14確定對(duì)映異構(gòu)體。
[α]20Na＝+22°(c＝0.50在氯仿中)(標(biāo)題化合物)。
[α]20Na＝-20°(c＝0.49在氯仿中)(另外的對(duì)映異構(gòu)體)。
實(shí)施例17A 五氟苯基(3R)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸酯
在二氯甲烷(30ml)中提供實(shí)施例16A的化合物(2.0g，4.83mmol)并在0℃加入五氟苯酚(4.4g，24.13mmol，5當(dāng)量)和EDC(1.4g，7.24mmol，1.5當(dāng)量)。將所述反應(yīng)緩慢到達(dá)室溫并在該溫度攪拌過(guò)夜。對(duì)于后處理，在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上在30℃的最大水浴溫度下將溶劑完全去除，并在通過(guò)制備HPLC(方法28)精制殘余物后，分離2.3g(83.3％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法1)Rt＝3.44分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝3.23分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝581(13)[M+H]+，525(100)[M-C4H8+H]+. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝1.36(s，9H，3CH3)，4.97(d，J＝7.1Hz，2H，PhCH2O)，5.15(dd，J＝9.7，4.8Hz，1H)，5.49(dd，J＝10.2，4.6Hz，1H)，7.18(d，J＝10.4Hz，1H，ArH)，7.25-7.42(m，8H，ArH)，7.68(d，J＝10.4Hz，1H，NH)，7.90(d，J＝9.8Hz，1H，NH)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝27.97，54.33，58.72，65.75，78.65，124.10，126.48，127.37127.46，127.82，128.23(2C)，136.40/138.36(C-F)，136.54，138.49/140.27(C-F)，139.34/141.40(C-F)，154.72，156.04，167.10. HR-TOF-MS(方法24)C28H26N2O6[M+H]+實(shí)測(cè)值581.1719，計(jì)算值581.1706. 實(shí)施例18A 2，5-二氧代吡咯烷-1-基(3R)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸酯
在氬氣保護(hù)氣氛下，在二氯甲烷(10ml)中提供(3R)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸(實(shí)施例16A，100.0mg，241.28μmol)，并將所述溶液冷卻到0℃，加入N-羥基琥珀酰亞胺(33.3mg，289.53μmol，1.2當(dāng)量)和EDC(55.5mg，289.53μmol，1.2當(dāng)量)并將所述混合物在0℃攪拌過(guò)夜。對(duì)于后處理，在30℃的水浴溫度，將溶劑在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上完全去除，并在通過(guò)制備HPLC(方法32)精制后，分離96.0mg(77.8％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法1)Rt＝2.53分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.58分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝529(28)[M+NH4]+，412(100)。
實(shí)施例19A 甲基[N2-[(芐氧基)羰基]-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸酯]
在氬氣保護(hù)氣氛下，在二氯甲烷(5ml)中提供N-芐氧基羰基-保護(hù)的二肽(實(shí)施例10A，58.4mg，0.14mmol)，將所述溶液隨后冷卻到-10℃，并將HOBt(77.7mg，0.57mmol，4當(dāng)量)，NMM(47μl，43.7mg，0.43mmol，3當(dāng)量)和EDC(55.1mg，0.29mmol，2當(dāng)量)連續(xù)加入，最終加入示例性化合物13A(94.0mg，0.14mmol，1當(dāng)量)，和NMM 32μl，29.1mg，0.29mmol，2當(dāng)量)。將所述反應(yīng)緩慢升溫到室溫并在該溫度過(guò)夜攪拌。對(duì)于后處理，將沉淀物濾去，在30℃的水浴溫度將濾液在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上濃縮，和在通過(guò)制備HPLC(方法31)精制殘余物后，獲得77.9mg(79.4％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法1)Rt＝3.12分鐘。
LC-MS(方法23)Rt＝7.05分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝683(100)[M+H]+，1366(75)[2M+2H]2+. 1H NMR(300MHz，CDCl3)δ＝0.89(d，J＝4.6，9H，CH2C(CH3)3)，0.96(d，J＝2.9，9H，CH2C(CH3)3)，1.23-1.49(m，11H包括1.39(s，9H，OC(CH3)3)，1.85(m，2H，CH2C(CH3)3)，3.59/3.68(2s，3H，OCH3)，4.04(m，1H，αCH)，4.41(m，1H，αCH)，4.88-5.42(m，6H)，5.99(m，1H，NH)，6.22(m，1H，NH)，7.13-7.42(m，10H，ArH)。
HR-TOF-MS(方法24)C37H55N4O8計(jì)算值683.4015，實(shí)測(cè)值683.4033[M+H]+. 實(shí)施例20A [N2-(芐氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-{(叔丁氧羰基)氨基}-L-苯丙氨酸]
在0℃，將所述酯(實(shí)施例19A，1.0g，1.46mmol)提供在THF(100ml)和水(50ml)的混合物中，并逐滴加入0.5％的氫氧化鋰溶液(12ml，59.6mg，2.49mmol，1.7當(dāng)量)。將所述溶液在0℃攪拌4小時(shí)直到完全轉(zhuǎn)化。對(duì)于后處理，將反應(yīng)物與磷酸二氫鉀(996.4mg，7.32mmol)混合，在30℃的水浴溫度將所述溶劑在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上完全去除，并將所述殘余物通過(guò)制備HPLC(方法28)純化。獲得737.0mg(75.3％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法1)Rt＝2.86分鐘。
LC-MS(方法21)Rt＝2.89分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝669(20)[M+H]+，569(100)[M-C4H8-CO2+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C36H53N4O8[M+H]+實(shí)測(cè)值669.3881，計(jì)算值669.3858. 實(shí)施例21A 2，5-二氧代吡咯烷-1-基[N2-(芐氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-{(叔丁氧羰基)氨基}-L-苯丙氨酸酯]
在氬氣保護(hù)氣氛下，將示例性化合物20A(30.0mg，44.85μmol)溶解于二氯甲烷(6ml)，并將所述溶液冷卻到0℃，加入N-羥基琥珀酰亞胺(6.2mg，53.83μmmol，1.2當(dāng)量)，EDC(10.3mg，53.83μmol，1.2當(dāng)量)和

分子篩，將所述混合物0℃攪拌過(guò)夜。將溶劑在30℃的最大水浴溫度在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上去除，將殘余物吸收在乙酸乙酯中并用5％檸檬酸溶液(2次)和飽和的氯化鈉溶液(2次)連續(xù)洗滌，將有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥并過(guò)濾，在30℃的水浴溫度將所述溶劑在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上濃縮，并在RP柱體(洗脫劑乙酸乙酯)上精制后，從殘余物分離34.0mg(98.7％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法1)Rt＝2.99分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝2.88分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝766(57)[M+H]+，666(100)[M+H-C4H8-CO2]+. 實(shí)施例22A N2-(叔丁氧羰基)-L-別蘇氨酸
將L-別-蘇氨酸(3.15g，26.44mmol)溶解于水-二噁烷(1+2，75ml)，加入二碳酸二叔丁酯(6.35g，29.09mmol，1.1當(dāng)量)和三乙胺(4.79ml，34.38mmol，1.3當(dāng)量)并將所述混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。接著，將溶劑在真空中去除。將殘余物吸收在乙酸乙酯中并用1M檸檬酸提取。將水相再用乙酸乙酯提取數(shù)次，直到在其中不再能檢測(cè)到任何產(chǎn)物(HPLC，方法5)。接著，將合并的有機(jī)提取物通過(guò)硫酸鈉干燥，濃縮并在油泵真空下干燥直到恒重。將所述產(chǎn)物進(jìn)一步反應(yīng)，不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化。產(chǎn)率6.5g的粗制產(chǎn)物。
HPLC(方法5)Rt＝3.23分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.51分鐘，MS(ESIneg)m/z(％)＝217.8(100)[M-H]-. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝1.08(d，J＝5.4Hz，3H)，1.38(s，9H)，3.72-3.84(m，2H)，6.77(d，J＝7.4Hz，1H)。
實(shí)施例23A N2-(叔丁氧羰基)-L-別蘇氨酸芐酯
所述方法以與下列文獻(xiàn)類似的方式進(jìn)行；S.B.Cohen，R.Halcomb，J.Am.Chem.Soc 2004，124，2534-25M 43.W.Jiang，J.Wanner，R.J.Lee，P.-Y.Bounaud，D.L.Boger，J.Am.Chem.Soc 2003，125，1877-1887。
將實(shí)施例22A的化合物(6.8g的粗制產(chǎn)物，26.44mmol)置入甲醇(177ml)中，加入碳酸銫(5.56g，17.06mmol，0.63當(dāng)量)，攪拌所述混合物直到完全溶解。接著通過(guò)蒸餾除去溶劑，加入DMF(42ml)和接著加入芐基溴(4.06ml，34.12mmol，1.26當(dāng)量)。將所述混合物攪拌16小時(shí)，接著將所述DMF在真空中基本除去。將所述殘余物置入水中并用3份二氯甲烷提取。將合并的有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在真空中濃縮。將所述粗制產(chǎn)物在Biotage RP18-Flash(水-乙腈梯度0-5分鐘。10％乙腈，3-30分鐘。10-90％乙腈，30-35分鐘。90％乙腈；流速20ml/分鐘。)上進(jìn)行純化。產(chǎn)率5.00g(16.16mmol，52％理論值)。
HPLC(方法5)Rt＝4.36分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.39分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝332.6(25)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝1.09(d，J＝6.4，3H)，1.37(s，9H)，3.82(m，1H)，3.95(dd，J＝6.4，J＝8.1Hz)，4.98(d，J＝5.4Hz，1H)，5.09(d，J＝12.7Hz，1H)，5.16(d，J＝12.7Hz，1H)，7.10(d，J＝8.1Hz，1H)，7.31-7.37(m，5H)。
實(shí)施例24A L-別蘇氨酸芐酯三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法2，將來(lái)自實(shí)施例23A的530mg的化合物與8.0ml的TFA溶液反應(yīng)。將所述粗制產(chǎn)物(589mg，定量)進(jìn)行進(jìn)一步的反應(yīng)，而無(wú)需進(jìn)一步純化。
HPLC(方法5)Rt＝3.18分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.24分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝210.0(100)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝1.15(d，J＝6.6Hz，3H)，4.09-4.10(m，2H)，5.26(s，2H)，7.36-7.44(m，5H)，8.34(br.S，2H)。
實(shí)施例25A [N2-(叔丁氧羰基)-L-異亮氨酰]-L-別蘇氨酸芐酯
將實(shí)施例24A的化合物(2.30g 7.12mmol)和N-(叔丁氧羰基)-L-異亮氨酸(2.14g，9.25mmol，1.3當(dāng)量)溶解于DMF(21.0ml)。加入4-甲基嗎啉(1.3ml，12.02mmol，1.7當(dāng)量)和HATU(3.52g，9.25mmol，1.3當(dāng)量)，并將所述混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)。接著，首先按照方法45隨后根據(jù)方法46，通過(guò)色譜法純化完全的混合物。產(chǎn)率1.75g(4.14mmol，58％理論值)，其為淺米色無(wú)定形固體。
HPLC(方法5)Rt＝4.59分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.56分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝423.8(70)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝0.74-0.78(m，6H)，1.01-1.07(m，2H)，1.10(d，J＝6.3Hz，3H)，1.37(s，9H)，1.64-1.66(m，1H)，3.86-3.94(m，1H)，4.28(dd，J＝7.3，J＝7.3Hz，1H)，5.05(d，J＝5.6Hz)，5.09(d，J＝12.7Hz，1H)，5.13(d，J＝12.7Hz1H)，6.70(d，J＝9.0Hz，1H)，7.31-7.36(m，5H)，8.11(d，J＝8.1Hz)。
HR-TOF-MS(方法24)C22H35N2O6計(jì)算值423.2490，實(shí)測(cè)值423.2489[M+H]+. 實(shí)施例26A L-異亮氨酰-L-別蘇氨酸芐酯三氟乙酸鹽
根據(jù)方法2，將實(shí)施例25A的化合物(224mg，0.53mmol)用8.0ml的TFA溶液處理。獲得253mg的實(shí)施例26A的粗制產(chǎn)物(約91％純，0.53mmol，定量)并在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下反應(yīng)。
HPLC(方法5)Rt＝3.51分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.58分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝323.6(100)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝0.77-0.86(m，6H)，1.02(m，1H)，1.15(d，J＝6.4Hz，3H)，1.45(m，1H)，1.77(m，1H)，3.97(m，1H)，4.34(m，1H)，5.11(d，J＝12.5Hz，1H)，5.16(d，J＝12.5Hz，1H)，7.37-7.39(m，5H)，7.47(m，1H)，8.07-8.08(m，3H)，8.69(d，J＝7.3Hz，1H)。
實(shí)施例27A [N2-(叔丁氧羰基)-D-精氨酰]-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酸芐酯
將實(shí)施例26A的化合物(253mg91％純度，0.53mmol)和N2-(叔丁氧羰基)-D-精氨酸(145mg，0.53mmol，1當(dāng)量)溶解于DMF(3.0ml)。加入4-甲基嗎啉(76μl，0.70mmol，1.3當(dāng)量)和HATU(221mg，0.58mmol，1.1當(dāng)量)，并將所述混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)。接著，將完全的混合物置于HPLC柱上并通過(guò)色譜法(方法34)純化。產(chǎn)率364mg(0.53mmol，99％理論值)。
HPLC(方法5)Rt＝3.91分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.04分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝579.9(100)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝0.72-1.16(m，8H)，1.37(s，9H)，1.46(m，2H)，1.60(m，1H)，1.69(m，1H)，3.06(m，2H)，3.93-4.01(m，2H)，4.25(m，1H)，4.33(m，1H)，5.07-5.14(m，2H)，6.96(d，J＝7.8，1H)，7.35(m，5H)，7.45(m，1H)，7.66(d，J＝8.8)，8.33(m，1H)。
實(shí)施例28A D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酸芐酯雙三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法2，將實(shí)施例27A的化合物(237mg，0.34mmol)用2.0ml的TFA溶液處理。獲得255mg的實(shí)施例28A的粗制產(chǎn)物(94％純度，0.34mmol，定量)，并將其在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下反應(yīng)。
HPLC(方法5)Rt＝3.42分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.42分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝479.3(50)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝0.73-0.81(m，5H)，1.11-1.19(m，5H)，1.33-1.49(m，3H)，1.74(m，3H)，3.10(m，2H)，3.88-3.95(m，2H)，4.25(dd，J＝6.8，J＝7.1Hz，1H)，4.46(dd，J＝7.3，J＝8.8Hz，1H)，5.09(d，J＝12.5Hz，1H)，5.15(dd，J＝12.5Hz)，7.36(m，5H)，7.61(m，1H)，8.10(m，2H)，8.51(d，J＝7.6Hz，1H)，8.57(d，J＝9.0Hz，1H)。
實(shí)施例29A [N2-(叔丁氧羰基)-L-亮氨酰]-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例28A的化合物(240mg，0.34mmol)和N-(叔丁氧羰基)-L-亮氨酸(79mg，0.34mmol，1當(dāng)量)溶解于二氯甲烷-DMF(5+1，6ml)中。加入二異丙基乙胺(296μl，1.70mmol，5當(dāng)量)和HATU(194mg，0.51mmol，1.5當(dāng)量)并將所述混合物在室溫?cái)嚢?4小時(shí)。接著，將完全的混合物置于凝膠色譜柱上并通過(guò)色譜法純化(方法45，洗脫劑是甲醇)。產(chǎn)率146mg(0.18mmol，53％理論值)。
HPLC(方法5)Rt＝4.15分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.92分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝692.8(100)，[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝0.72-1.23(m，22H)，1.37(s，9H)，1.38-1.71(m，3H)，3.08(m，2H)，3.91-4.00(m，2H)，4.26(m，1H)，4.33-4.42(m，2H)，5.07-5.15(m，2H)，6.92(d，J＝7.8Hz，1H)，7.35(m，5H)，7.47(m，1H)，7.88(d，J＝8.1Hz，1H)，7.93(d，J＝9.0Hz，1H)，8.35(d，J＝7.3Hz，1H)。
實(shí)施例30A L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酸芐酯雙三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法2，將實(shí)施例29A的化合物(220mg，0.27mmol)用2.0ml的TFA溶液處理。獲得223mg的實(shí)施例28A的粗制產(chǎn)物(0.27mmol，定量.)并在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下反應(yīng)。
HPLC(方法4)Rt＝3.80. LC-MS(方法22)Rt＝2.54分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝592.4(2)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝0.73-1.11(m，13H)，1.22-1.74(m，12H)，3.11(m，4H)，3.60(m，2H)，3.87(m，1H)，3.95(m，1H)，4.25(m，1H)，4.38(dd，J＝7.8，J＝8.6Hz，1H)，4.64(dd，J＝7.8，J＝13.7Hz，1H)，5.09(d，J＝12.7Hz，1H)，5.13(d，J＝12.7Hz，1H)，7.35(m，5H)，7.58(m，1H)，8.07(m，2H)，8.25(d，J＝8.8Hz，1H)，8.39(d，J＝7.6Hz，1H)，8.77(d，J＝8.3Hz，1H)。
實(shí)施例31A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例30A的化合物(223mg，0.27mmol)和N-(叔丁氧羰基)-(3R)-3-羥基-L-亮氨酸(89mg，0.33mmol，1.22當(dāng)量)溶解于DMF(6ml)并將所述溶液冷卻到-20℃。加入4-甲基嗎啉(150μl，1.36mmol，5當(dāng)量)和HATU(165mg，0.44mmol，1.6當(dāng)量)，并將所述混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)。接著，將完全的混合物置于凝膠色譜柱上并通過(guò)色譜法純化(方法45，洗脫劑是甲醇)。產(chǎn)率188mg(0.20mmol，74％理論值)。
HPLC(方法5)Rt＝4.24分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.99分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝821.9(100)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝0.71-0.90(m，15H)，1.00(m，1H)，1.10(d，J＝6.4Hz，3H)，1.24-1.26(m，3H)，1.38(s，9H)，1.42-1.71(m，6H)，3.06-3.17(m，3H)，3.45(m，1H)，3.61(m，1H)，3.93(m，1H)，4.05(m，1H)，4.26(m，1H)，4.35(m，2H)，4.54(d，J＝7.8Hz，1H)，5.07-5.15(m，2H)，5.45(d，J＝9.0Hz，1H)，7.35(m，5H)，7.46(m，1H)，7.85(d，J＝7.8Hz，1H)，7.89(d，J＝8.8Hz，1H)，7.97(d，J＝8.1Hz，1H)，8.35(d，J＝7.6Hz，1H)。
實(shí)施例32A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酸三氟乙酸鹽
將實(shí)施例31A的化合物(100mg，0.11mmol)溶解于冰醋酸(4.3ml)，加入10％披鈀活性碳(22mg)，并將所述混合物在室溫在大氣壓下氫化2小時(shí)。將所述催化劑通過(guò)過(guò)濾去除，并將所述濾液冷凍干燥。將所述粗制產(chǎn)物通過(guò)色譜法純化(方法33)。獲得58mg(60μmol，55％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.75分鐘。
LC-MS(方法1方法19)Rt＝1.80分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝731.8(100)[M+H]+. 實(shí)施例33A O4-甲基[N2-(叔丁氧羰基)甘氨酰]-(3S)-3-羥基-L-天冬氨酸酯
將(3S)-3-羥基天冬氨酸通過(guò)G.Cardillo，L.Gentilucci，A.Tolomelli，C.Tomasini，Synlett 1999，1727-1730的方法制備并且以類似于P.G.Mattingly，M.J.Miller，J.Org.Chem.(有機(jī)化學(xué)雜志)1983，48，3556-3559的方法，使用微波輻射，在密閉的反應(yīng)器中，轉(zhuǎn)化為(2S，3S)-2-氨基-3-羥基-4-甲氧基-4-氧代丁酸鹽酸鹽。將(2S，3S)-2-氨基-3-羥基-4-甲氧基-4-氧代丁酸鹽酸鹽(447mg，2.24mmol)溶解于DMF(9ml)。將所述溶液冷卻到0℃，加入Boc-甘氨酸-N-羥基琥珀酰亞胺酯(763mg，2.91mmol，1.3當(dāng)量)，DMAP(14mg，0.11mmol，0.05當(dāng)量)并最終加入DIPEA(1170μl，6.72mmol，3當(dāng)量)。使所述混合物緩慢升溫到室溫并接著攪拌2小時(shí)。將所述混合物用冰醋酸酸化，與乙腈混合并在Sephadex LH 20(方法45)上進(jìn)行色譜法。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分，濃縮并再次進(jìn)行色譜分離(方法46)。將獲得的產(chǎn)物(761mg，定量)進(jìn)行進(jìn)一步的反應(yīng)，而無(wú)需進(jìn)一步純化。對(duì)于分析目的，通過(guò)HPLC(方法44)獲得純的樣品。
HPLC(方法5)Rt＝3.15分鐘 LC-MS(方法1)Rt＝1.17分鐘，MS(ESIpos)＝321.2[M+H]+. [α]20Na＝+39°(c＝0.55，MeOH)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝1.40(s，9H)，3.49-3.60(m，2H)，3.61(s，3H)，4.29(m，1H)，4.73(d，J＝6.6Hz，1H)，7.01(m，1H)，7.49(d，J＝6.99Hz，1H)。
13C-NMR(d6-丙酮，126MHz，DEPT)δ(ppm)＝28.5(CH3)，42.2(CH2)，51.8(CH3)，53.7(CH)，56.0(CH)，79.2(四重峰(quat))，169.6(四重峰)，169.7(四重峰)，172.8(四重峰)，173.8(四重峰)。
HR-TOF-MS(方法24)C12H22N2O8[M+H]+計(jì)算值321.1298，實(shí)測(cè)值321.1299. 實(shí)施例34A [N2-(叔丁氧羰基)甘氨酰]-[(3S)-3-羥基-O4-甲基-L-天冬氨酰]-O3-(叔丁基)-L-絲氨酸芐酯
將實(shí)施例33A的化合物(390mg，1.22mmol)和O-(叔丁基)-L-絲氨酸芐酯(445.14mg，1.22mmol，1當(dāng)量)溶解于DMF(9ml)。將所述溶液冷卻到0℃，接著加入2.44ml(2當(dāng)量)的4-甲基嗎啉在DMF中的1M溶液，隨后加入HATU(925mg，2.44mmol，2當(dāng)量)。將所述混合物在0℃攪拌約15分鐘，再加入2.44ml(2當(dāng)量)的4-甲基嗎啉溶液，并將所述混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。接著，加入水并用2份乙酸乙酯提取混合物，用1M檸檬酸，濃碳酸氫鈉和濃鹽水洗滌合并的有機(jī)提取物。接著，將有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥，將所述溶劑蒸餾除去，并將所述殘余物進(jìn)行色譜分離(方法46)。產(chǎn)率413mg(61％理論值)其為固體。
HPLCRt＝4.46分鐘。
LC-MSRt＝2.37分鐘。MS(ESIpos)554.4[M+H]+. [α]20Na＝-1.7(c＝0.57，CH3CN)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝1.09(s，9H)，1.45(s，9H)，3.17(br s，1H)，3.50-3.56(dd，J＝2.85Hz，J＝8.8Hz，1H)，3.59(s，3H)，3.61-3.67(m，3H)，4.66(s，1H)，4.70-4.72(m，1H)，4.97(dd，J＝2.7Hz，J＝8.65Hz，1H)，5.14(d，J＝12.3Hz，1H)，5.19(br s，1H)，5.23(d，J＝12.3Hz，1H)，7.11(d，J＝7.45Hz，1H)，7.19(d，J＝8.5Hz，1H)，7.46(m，5H)。
13C-NMR-DEPT(126MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝28.5(CH3)，29.6(CH3)，45.5(CH2)，54.4(CH3)，54.5(CH)，55.9(CH)，62.8(CH2)，68.6(CH2)，71.7(CH)，75.0(四重峰)，81.8(四重峰)，129.6(CH)，129.7(CH)，129.9(CH)，136.7(四重峰)，157.3(四重峰)，169.9(四重峰)，171.2(四重峰)，173.4(四重峰)。
HR-TOF-MSC26H40N3O10[M+H]+計(jì)算值554.2714，實(shí)測(cè)值554.2707. 實(shí)施例35A [N2-(叔丁氧羰基)甘氨酰]-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-O3-(叔丁基)-L-絲氨酸芐酯
將化合物34A(430mg，0.78mmol)溶解于乙腈(30ml)并冷卻到0℃。加入濃氨水(15ml)并將所述混合物攪拌約15分鐘。只要反應(yīng)一結(jié)束(通過(guò)HPLC檢測(cè)，方法5)，就加入乙酸酸化，并用水稀釋混合物。將所述混合物用2份乙酸乙酯提取。用濃鹽水洗滌合并的有機(jī)提取物，通過(guò)硫酸鈉干燥，濃縮并通過(guò)HPLC純化。產(chǎn)率158mg(38％理論值)，其為固體。
[α]20Na＝-16°(c＝0.53，MeOH)。
HPLCRt＝4.18分鐘。LC-MSRt＝2.14分鐘，MS(ESIpos)m/z＝539.4[M+H]+. HR-TOF-MSC25H39N4O9[M+H]+計(jì)算值539.2717，實(shí)測(cè)值539.2709. 1H NMR(300MHz，d6DMSO)δ(ppm)＝1.05(s，9H)，1.38(s，9H)，3.50-3.56(m，2H)，3.61-3.67(m，2H)，4.33(s，1H)，4.48(m，1H)，4.71(m，1H，5.10(d，J＝12.7Hz，1H)，5.19(d，J＝12.7Hz，1H)，7.07(m，1H)，7.17(br s，1H)，7.33-7.46(m，6H)，7.65(d，J＝8.8Hz，1H)，7.83(d，J＝7.7Hz，1H)。
13C-NMR-DEPT(126MHz，d6-丙酮)δ(ppm)＝27.54(CH3)，28.58(CH3)，44.73(CH2)，54.06(CH)，55.67(CH)，62.61(CH2)，67.08(CH2)，71.64(CH)，73.90(四重峰)，79.70(四重峰)，128.75(CH)，128.82(CH)，129.25(四重峰)，137.20(四重峰)，157.04(四重峰)，170.56，170.62(四重峰)，170.72(四重峰)，174.13(四重峰)。
實(shí)施例36A 芐基甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-O3-(叔丁基)-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法2，使55mg(100μmol)的示例性化合物35A在2ml的試劑溶液中反應(yīng)。使所述產(chǎn)物反應(yīng)，而不需經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化。產(chǎn)率50mg(定量)。
HPLC(方法3)Rt＝3.05分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.22分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝383.0(100)[M+H]+. 實(shí)施例37A {(3R)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-L-苯基丙氨酰}-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
在DMF(70ml)中提供來(lái)自實(shí)施例3A的降解產(chǎn)物(2.8g，2.53mmol)和來(lái)自實(shí)施例17A的化合物(1.5g，2.53mmol，1當(dāng)量)。將所述溶液冷卻到0℃，加入DIEA(2.64ml，2.0g，15.14mmol，6當(dāng)量)并將反應(yīng)混合物緩慢升溫到室溫，在該溫度攪拌其3小時(shí)。將所述溶劑在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上部分去除，在此過(guò)程中，浴溫不應(yīng)該超過(guò)30℃。在通過(guò)制備HPLC精制后(方法28)，分離2.2g(61.4％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法9)Rt＝17.03分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.79分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1301(28)[M+H]+，601(100)[M-C4H8-CO2+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1300(100)[M-H]-. 實(shí)施例38A {(3R)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-氨基-L-苯基丙氨酰}-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法1，從實(shí)施例37A的化合物(2.2g，1.55mmol)去除Boc保護(hù)基。在色譜法(方法28)后，獲得1.8g(87.1％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法9)Rt＝12.37分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.17分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1201(8)[M+H]+，601(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1199(100)[M-H]-. 實(shí)施例39A {(3R)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-氨基-L-苯基丙氨酰}-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
在氬氣保護(hù)氣氛中，在DMF(700ml)中提供實(shí)施例38A的化合物(1.3g，0.89mmol)，將所述溶液冷卻到0℃，接著隨后加入HATU(1.0g，2.68mmol，3當(dāng)量)和NMM(0.8ml，0.7g，7.14mmol，8當(dāng)量)。在0℃，在溫和的氬氣氣流下攪拌3小時(shí)后，轉(zhuǎn)化完全。對(duì)于后處理，將反應(yīng)與甲醇(30ml)混合，將溶劑在30℃的水浴溫度在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上去除，將所述殘余物懸浮在超聲波浴中的甲醇(30ml)中，將已經(jīng)分離的沉淀物通過(guò)過(guò)濾去除。將濾液在30℃的最大水浴溫度在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上濃縮，并在通過(guò)制備HPLC精制(方法28)后，獲得905.6mg(78.3％理論值)的目標(biāo)化合物。
HPLC(方法9)Rt＝15.09分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.75分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1183(100)[M+H]+. 實(shí)施例40A 五氟苯基{N2-[(芐氧基)羰基]-3-叔丁基-D-丙氨酰}-{3-叔丁基-L-丙氨酰}-[(3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸酯]
在氬氣保護(hù)氣氛下，在二氯甲烷(5ml)中提供酸(實(shí)施例20A，170.0mg，0.25mmol)并將其冷卻到0℃，隨后加入二苯基亞膦酸五氟苯酯(146，5mg，0.38mmol，1.5當(dāng)量)和NMM(140μl，128.5mg，1.27mmol，5當(dāng)量)。將所述反應(yīng)緩慢升溫到室溫并在該溫度攪拌過(guò)夜。對(duì)于后處理，將所述溶劑在30℃的水浴溫度在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上去除，將殘余物通過(guò)制備HPLC(方法32)純化，再將濃縮的產(chǎn)物級(jí)分與甲苯和二氯甲烷混合，隨后再在30℃的水浴溫度在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上徹底去除溶劑，將所述殘余物冷凍干燥2小時(shí)，并將所述產(chǎn)物存貯在-25℃。獲得130.8mg(61.6％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法1)Rt＝3.30分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝3.42分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝835(100)[M+H]+，735(54)[M-C4H8-CO2+H]+，MS(ESIneg.)m/z(％)＝833(60)[M-H]-，183(100)。
實(shí)施例41A 氯三苯甲基-樹(shù)脂-結(jié)合的O3-(叔丁基)-N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-絲氨酸
在二氯甲烷(40ml)中提供氯三苯甲基氯-樹(shù)脂(4.0g，5.96mmol)，并隨后加入O-(叔丁基)-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-絲氨酸(8.0g，20.86mmol，3.5當(dāng)量)和DIEA(10.3ml，7.7g，59.60mol，10當(dāng)量)。在室溫振搖20小時(shí)后，通過(guò)在玻璃料上吸濾收集聚合物，并隨后用二氯甲烷/甲醇/DIEA17/2/1(3次)，二氯甲烷(三次)，DMF(2次)和二氯甲烷(3次)連續(xù)洗滌。
去除了乙酸/三氟乙醇/二氯甲烷1:1:3的樣品提供相應(yīng)的fmoc-保護(hù)的氨基酸。
HPLC(方法13)Rt＝1.95分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝2.38分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝384(35)[M+H]+，767(10)[2M+H]+，105(100)；MS(ESIpos)m/z(％)＝382(25)[M-H]-，765(10)[2M-H]-，160(100)。
實(shí)施例42A 氯三苯甲基-樹(shù)脂-結(jié)合的{N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N4-三苯甲基-L-天冬酰胺酰}-[O3-(叔丁基)-L-絲氨酸]
如在操作方法7中所述，從聚合物(實(shí)施例41A，2.0g，2.98mmol)去除Fmoc保護(hù)基。使結(jié)合到樹(shù)脂的去保護(hù)的氨基酸隨后與N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N-三苯甲基-L-天冬酰胺(3.6g，5.96mmol，2當(dāng)量)，DIEA(1.5ml，1.2g，8.94mmol，3當(dāng)量)和TBTU(1.9g，5.96mmol)反應(yīng)過(guò)夜以得到Fmoc-保護(hù)的二肽。聚合物的后處理以類似于操作方法7的方式進(jìn)行。在樣品移去后，證實(shí)相應(yīng)的側(cè)鏈保護(hù)的二肽。
HPLC(方法13)Rt＝2.43分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝3.10分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝740(5)[M+H]+，243(100)；MS(ESIpos)m/z(％)＝738(40)[M-H]-，516(85)[M-Fmoc-H]-，542(100)。
HR-TOF-MS(方法24)C45H46N3O7[M+H]+實(shí)測(cè)值740.3342，計(jì)算值740.3331. 實(shí)施例43A 氯三苯甲基-樹(shù)脂-結(jié)合的{N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]甘氨酰}-(N4-三苯甲基-L-天冬酰胺酰)-[O3-(叔丁基)-L-絲氨酸]
如操作方法7中所述，F(xiàn)moc保護(hù)基從聚合物中去除(實(shí)施例42A，2.0g，2.98mmol)。使結(jié)合于樹(shù)脂的去保護(hù)的二肽隨后與N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]甘氨酸(1.8g，5.96mmol，2當(dāng)量)，DIEA(1.5ml，1.2g，8.94mmol，3當(dāng)量)和TBTU(1.9g，5.96mmol，2當(dāng)量)反應(yīng)過(guò)夜以得到Fmoc-保護(hù)的三肽。聚合物的后處理以類似于操作方法7的方式進(jìn)行。在樣品去除后證實(shí)相應(yīng)的側(cè)鏈保護(hù)的三肽。
HPLC(方法13)Rt＝2.33分鐘。
LC-MS(方法21)Rt＝2.99分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝797(5)[M+H]+，243(100)；MS(ESIpos)m/z(％)＝795(40)[M-H]-，573(100)[M-Fmoc-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C47H49N4O8[M+H]+實(shí)測(cè)值797.3556，計(jì)算值797.3545. 實(shí)施例44A 氯三苯甲基-樹(shù)脂-結(jié)合的{O3-(叔丁基)-N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-別蘇氨酰}-甘氨酰-(N4-三苯甲基-L-天冬酰胺酰)-[O3-(叔丁基)-L-絲氨酸]
如操作方法7中所述，將Fmoc保護(hù)基從聚合物中去除(實(shí)施例43A，1000.0mg，1.49mmol)。與樹(shù)脂結(jié)合的去保護(hù)的三肽隨后與O-(叔丁基)-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]別蘇氨酸(1184.5mg，2.98mmol，2當(dāng)量)，DIEA(772μl，577.7mg，3當(dāng)量)和TBTU(956.6mg，2.98mmol，2當(dāng)量)反應(yīng)過(guò)夜以得到Fmoc-保護(hù)的四肽。聚合物的后處理以類似于操作方法7的方式進(jìn)行。在樣品去除后證實(shí)相應(yīng)的側(cè)鏈-保護(hù)的四肽。
HPLC(方法13)Rt＝2.48分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝3.02分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝954(100)[M+H]+；MS(ESIpos)m/z(％)＝752(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C55H64N5O10[M+H]+實(shí)測(cè)值954.4663，計(jì)算值954.4648. 實(shí)施例45A 氯三苯甲基-樹(shù)脂-結(jié)合的{N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]}-L-異亮氨酰-[O3-(叔丁基)]-L-別蘇氨酰-甘氨酰-(N3-三苯甲基-L-天冬酰胺酰)-[O3-(叔丁基)-L-絲氨酸]
如操作方法7中所述，將Fmoc保護(hù)基從聚合物中去除(實(shí)施例44A，1000.0mg，1.49mmol)。結(jié)合于樹(shù)脂的去保護(hù)的四肽隨后與N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-異亮氨酸(1053.2mg，2.98mmol，2當(dāng)量)，DIEA(772μl，577.7mg，4.47mmol，3當(dāng)量)和TBTU(956.6mg，2.98mmol，2當(dāng)量)反應(yīng)過(guò)夜以得到F-moc-保護(hù)的五肽。聚合物的后處理以類似于操作方法7的方式進(jìn)行。在樣品去除后證實(shí)相應(yīng)的側(cè)鏈-保護(hù)的五肽。
HPLC(方法13)Rt＝2.57分鐘。
LC-MS(方法21)Rt＝3.23分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1067(13)[M+H]+，243(100)。
HR-TOF-MS(方法24)C61H75N6O11[M+H]+實(shí)測(cè)值1067.5488，計(jì)算值1067.5489. 實(shí)施例46A N5-[(芐氧基)羰基]-{N5-[{[(芐氧基)羰基]氨基}(亞氨基)甲基]-N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-D-鳥(niǎo)氨酸}
將N5-[(芐氧基)羰基]-N5-[{[(芐氧基)羰基]氨基}(亞氨基)甲基]-N2-(叔丁氧羰基)-D-鳥(niǎo)氨酸(4.90g，9.03mmol)[M.Jetten等，Tetrahedron Lett.(四面體通訊)1991，32，6025-6028]在4M的在二噁烷(150ml)中的鹽酸和二氯甲烷(150ml)中，在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將溶劑完全蒸發(fā)并將所述殘余物在真空中干燥。隨后在二氯甲烷(180ml)中提供去保護(hù)的胺(180ml)并加入DIEA(4.5ml，3.5g，27.09mmol，3當(dāng)量)和氯三甲基硅烷(2.3ml，2.0g，18.061mmol，2當(dāng)量)，將混合物在回流下攪拌過(guò)夜。冷卻溶液(0℃)，并加入DIEA(3.0ml，2.3g，18.06mmol，2當(dāng)量)和(9-芴基甲基)氯甲酸酯(2.3g，9.03mmol，1當(dāng)量)，將所述混合物升溫到室溫并在該溫度攪拌過(guò)夜。對(duì)于后處理，將所述反應(yīng)物用二氯甲烷稀釋并用10％檸檬酸水溶液洗滌，將有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥，將所述溶劑在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上去除并將所述殘余物在真空中干燥。在將粗制產(chǎn)物精制后(方法37)，分離2.0g(32.4％理論值)的標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法21)Rt＝2.99分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝665(100)[M+H]+； MS(ESIneg)m/z(％)＝663(30)[M-H]-，333(100)。
實(shí)施例47A 氯三苯甲基-樹(shù)脂-結(jié)合的[N5-(芐氧基羰基)-N5-({[芐氧基羰基]氨基}-{亞氨基}甲基)-N2-({9H-芴-9-基甲氧基}羰基)-D-鳥(niǎo)氨酰]-L-異亮氨酰-[O3-(叔丁基)-L-別蘇氨酰]-甘氨酰-(N3-三苯甲基-L-天冬酰胺酰)-[O3-(叔丁基)-L-絲氨酸]
如操作方法7中所述，將Fmoc保護(hù)基從聚合物(實(shí)施例45A，1000.0mg，1.49mmol)中去除。使結(jié)合于樹(shù)脂的去保護(hù)的五肽隨后與Fmoc-保護(hù)的氨基酸(實(shí)施例46A，1980.9mg，2.98mmol，2當(dāng)量)，DIEA(772μl，577.7mg，4.47mmol，3當(dāng)量)和TBTU(956.6mg，2.98mmol，2當(dāng)量)反應(yīng)過(guò)夜以得到F-moc-保護(hù)的六肽。聚合物的后處理以類似于操作方法7的方式進(jìn)行。將聚合物結(jié)合的六肽立即進(jìn)行進(jìn)一步處理，而沒(méi)有經(jīng)過(guò)分析證實(shí)。
實(shí)施例48A 氯三苯甲基-樹(shù)脂-結(jié)合的{N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-亮氨酰}-[N5-(芐氧基羰基)-N5-({[芐氧基羰基]氨基}{亞氨基}甲基)-D-鳥(niǎo)氨酰]-L-異亮氨酰-[O3-(叔丁基)-L-別蘇氨酰]-甘氨酰-(N3-三苯甲基-L-天冬酰胺酰)-[O3-(叔丁基)-L-絲氨酸]
如操作方法7中所述，將Fmoc保護(hù)基從聚合物(實(shí)施例47A，1000.0mg，1.49mmol)中去除。將結(jié)合于樹(shù)脂的去保護(hù)的六肽隨后與N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-亮氨酸(1053.2mg，2.98mmol，2當(dāng)量)，DIEA(779μl，577.7mg，4.47mmol，3當(dāng)量)和TBTU(956.7mg，2.98mmol，2當(dāng)量)反應(yīng)過(guò)夜以得到F-moc-保護(hù)的七肽。聚合物的后處理以類似于操作方法7的方式進(jìn)行。在樣品去除后，證實(shí)相應(yīng)的側(cè)鏈-保護(hù)的七肽。
LC-MS(方法18)Rt＝3.51分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1605(100)[M+H]+. 實(shí)施例49A {N2-[叔丁氧羰基]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]}-L-亮氨酰}-[N5-(芐氧基羰基)-N5-({[芐氧基羰基]氨基}{亞氨基}甲基)-D-鳥(niǎo)氨酰]-L-異亮氨酰-[O3-(叔丁基)-L-別蘇氨酰]-甘氨酰-(N3-三苯甲基-L-天冬酰胺酰)-[O3-(叔丁基)-L-絲氨酸]
如操作方法7中所述，將Fmoc保護(hù)基從聚合物(實(shí)施例48A，1000.0mg，1.49mmol)中去除。使結(jié)合于樹(shù)脂的去保護(hù)的七肽隨后與(3R)-3-羥基-N-(叔丁氧羰基)-L-亮氨酸(552.7mg，2.24mmol，1.5當(dāng)量)，DIEA(597μl，442.9mg，3.43mmol，2.3當(dāng)量)和TBTU(717.6mg，2.24mmol，1.5當(dāng)量)反應(yīng)過(guò)夜以得到F-moc-保護(hù)的八肽。聚合物的后處理以類似于操作方法7的方式進(jìn)行。
在乙酸，三氟乙醇和二氯甲烷(1:1:3)的溶液中將八肽完全從聚合物中去除。對(duì)于后處理，通過(guò)在玻璃料上過(guò)濾去除樹(shù)脂，將濾液在真空中濃縮并最終通過(guò)色譜法純化(方法32)。獲得56mg(16％理論值)的標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法18)Rt＝3.48分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1613(15)[M+H]+，806(60)[M+2H]2+，243(100)；MS(ESIneg)m/z(％)＝1611(100)[M+H]+. 實(shí)施例50A [(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-{N5-[芐氧基羰基]-N5-[{[芐氧基羰基]氨基}(亞氨基)甲基]-D-鳥(niǎo)氨酰}-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸
將肽(實(shí)施例49A，22.0mg，13.65μmol)在TFA(5.25ml)和水(0.25ml)中提供，隨后加入對(duì)甲酚(10.0mg，92.48μmol)，并將所述溶液在室溫?cái)嚢?小時(shí)。對(duì)于后處理，將溶劑在30℃的水浴溫度在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上去除。在通過(guò)制備HPLC精制殘余物后(方法26)，獲得4.4mg(27.9％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法1)Rt＝2.07分鐘 LC-MS(方法18)Rt＝2.12分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1158(5)[M+H]+，579(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1156(100)[M-H]-. 實(shí)施例51A [N2-(芐氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-{(3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-L-苯基丙氨酰}-{(3R)-3-羥基-L-亮氨酰}-L-亮氨酰-{N5-[芐氧基羰基]-N5-[{[芐氧基羰基]氨基}(亞氨基)甲基]-D-鳥(niǎo)氨酰}-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸
將胺(實(shí)施例50A，4.0mg，3.46μmol)和活化的酸(實(shí)施例40A，3.2mg，3.82μmol，1.1當(dāng)量)在DMF(500μl)中提供，將所述溶液冷卻到0℃，隨后加入DIEA(4μl，2.7mg，20.74mmol，6當(dāng)量)，將所述反應(yīng)物升溫到室溫并在該溫度過(guò)夜攪拌。對(duì)于后處理，將所述溶劑在30℃的水浴溫度在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上去除，通過(guò)凝膠色譜法(方法45，洗脫劑甲醇)純化殘余物，在通過(guò)制備HPLC精制后(方法26)，獲得3.0mg(24.0％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法10)Rt＝11.37分鐘 LC-MS(方法18)Rt＝3.37分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝904(100)[M+2H]2+. 實(shí)施例52A [N2-(芐氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-{(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰}-{(3R)-3-羥基-L-亮氨酰}-L-亮氨酰-{N5-[芐氧基羰基]-N5-[{[芐氧基羰基]氨基}(亞氨基)甲基]-D-鳥(niǎo)氨酰}-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
根據(jù)一般操作方法1，將Boc保護(hù)基從示例性化合物51A(2.5mg，1.38μmol)去除。在通過(guò)制備HPLC精制后(方法26)，獲得2.2mg(87.3％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法9)Rt＝24.14分鐘 LC-MS(方法18)Rt＝2.63分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝854(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1706(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C84H123N16O22[M+H]+實(shí)測(cè)值1707.8989，計(jì)算值1707.8993. 實(shí)施例53A [N2-(芐氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-{(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰}-{(3R)-3-羥基-L-亮氨酰}-L-亮氨酰-{N5-[芐氧基羰基]-N5-[{[芐氧基羰基]氨基}(亞氨基)甲基]-D-鳥(niǎo)氨酰}-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸三氟乙酸鹽C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺
在氬氣保護(hù)氣氛下，將去保護(hù)的胺(實(shí)施例52A，2.0mg，1.10μmol)在DMF(1ml)中提供，將所述溶液冷卻到0℃，加入HATU(1.3mg，3.29μmol，3當(dāng)量)和NMM(0.7μl，0.7mg，6.58μmol，6當(dāng)量)，并使反應(yīng)物緩慢到室溫并在該溫度攪拌過(guò)夜。對(duì)于后處理，將所述溶液通過(guò)制備HPLC純化(方法26)。獲得1.9mg(90.1％理論值)的目標(biāo)化合物。
HPLC(方法10)Rt＝10.70分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝3.25分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1691(53)[M+H]+，846(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1688(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C84H121N16O21[M+H]+實(shí)測(cè)值1689.8929，計(jì)算值1689.8887. 實(shí)施例54A {(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰}-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-{O3-(叔丁基)-L-別蘇氨酰}-甘氨酰-{N4-三苯甲基-L-天冬酰胺酰}-[O3-(叔丁基)-L-絲氨酸]
通過(guò)在甲醇(20ml)中的氫解作用1小時(shí)，將芐基酯-保護(hù)的化合物(實(shí)施例49A，62.0mg，38.46μmol)轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物。
在通過(guò)制備HPLC進(jìn)行色譜分離(方法26)后，獲得目標(biāo)化合物(34.3mg，61.2％理論值)。
HPLC(方法1)Rt＝2.51分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝2.36分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1343(38)[M+H]+，243(100)；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1341(100)[M-H]-. 實(shí)施例55A [(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
將示例性化合物54A(32.0mg，21.95μmol)在TFA(7.3ml)，水(250μl)和三異丙基硅烷(323μl)的溶液中在室溫?cái)嚢?小時(shí)。對(duì)于后處理，將所述溶劑在30℃的水浴溫度在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上去除，并將所述殘余物在真空中在30℃的水浴溫度用甲苯濃縮1次，用二氯甲烷濃縮1次。在高真空下干燥后，將所述粗制產(chǎn)物溶解于0.1％TFA水溶液中并用MTBE提取，將分離的水相在真空中濃縮，隨后通過(guò)制備HPLC(方法27)精制。獲得22.5mg(91.8％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法9)Rt＝8.38分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.30分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝889(12)[M+H]+，445(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝887(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C37H69N12O13[M+H]+實(shí)測(cè)值889.5102，計(jì)算值889.5102. 實(shí)施例56A [N2-(芐氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-{(3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-L-苯基丙氨酰}-{(3R)-3-羥基-L-亮氨酰}-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
將示例性化合物55A(19.0mg，17.00μmol)和40A(15.6mg，18.70μmol)在DMF(1ml)中提供，在0℃加入N，N-二異丙基胺(18μl，13.2mg，102.00mmol，6當(dāng)量)，并將所述混合物在該溫度攪拌2小時(shí)。將所述反應(yīng)物升溫到室溫，并接著攪拌過(guò)夜。對(duì)于后處理，將所述溶液在真空中濃縮并最終通過(guò)制備HPLC(方法26)精制。獲得24.4mg(86.7％理論值)的目標(biāo)化合物。
HPLC(方法9)Rt＝23.17分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.37分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝720(100)[M-C4H8-CO2+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1438(100)[M-C4H8-CO2-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C73H119N16O20[M+H]+實(shí)測(cè)值1539.8772，計(jì)算值1539.8782. 實(shí)施例57A [N2-(芐氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-{(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰}-{(3R)-3-羥基-L-亮氨酰}-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法1，將示例性化合物56A(23.0mg，13.91μmol)轉(zhuǎn)化為去保護(hù)的胺。在精制后(方法26)，獲得19.9mg(85.8％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法9)Rt＝17.05分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.98分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1441(3)[M+H]+，720(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1438(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C68H111N16O18[M+H]+實(shí)測(cè)值1439.8271，計(jì)算值1439.8257. 實(shí)施例58A [N2-(芐氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-{(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰}-{(3R)-3-羥基-L-亮氨酰}-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
在氬氣保護(hù)氣氛下，將去保護(hù)的胺(實(shí)施例57A，19.0mg，11.39μmol)在DMF(10ml)中提供，將所述溶液冷卻到0℃，加入HATU(13.0mg，34.18μmol，3當(dāng)量)和NMM(8μl，6.9mg，68.35μmol)并將所述反應(yīng)物在4℃靜置3天。對(duì)于后處理，在0℃將甲醇加入混合物，并將所述混合物在30℃的最大水浴溫度在真空中濃縮，最終通過(guò)制備HPLC(方法26)精制。獲得14.0mg(80.0％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法9)Rt＝22.44分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.30分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1422(12)[M+H]+，711(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1420(28)[M-H]-，710(100)[M-2H]2-. HR-TOF-MS(方法24)C68H109N16O17[M+H]+實(shí)測(cè)值1421.8165，計(jì)算值1421.8152. 實(shí)施例59A (3R)-3-[(叔丁基氧基羰基)氨基]-L-苯丙氨酸
根據(jù)操作方法5，在1小時(shí)內(nèi)，將示例性化合物16A(1000.0mg，2.41mmol)用在甲醇(100ml)中的10％鈀/碳(100mg，93.98μmol，4mol％)轉(zhuǎn)化成標(biāo)題化合物。在通過(guò)硅藻土過(guò)濾去除催化劑并濃縮后，獲得624.0mg(92.3％)的粗制產(chǎn)物。
HPLC(方法9)Rt＝10.27分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.52分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝281(82)[M+H]+，561(10)[2M+H]+，225(100)；MS(ESIneg.)m/z(％)＝279(70)[M-H]-，559(5)[2M-H]-，205(100)。
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝1.34(s，9H，OC(CH3)3)，3.51(d，J＝4.8Hz，1H，Hα)，4.88(dd，J＝8.6Hz，4.8Hz，1H，Hβ)，7.21-7.35(m，7H，ArH，NH2)，8.04(d，J＝8.6Hz，NH)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝28.04(3C)，53.81，56.27，78.06，127.24，127.42(2C)，128.07(2C)，138.99，154.12，167.93. HR-TOF-MS(方法24)C14H21N2O4[M+H]+實(shí)測(cè)值281.1506，計(jì)算值281.1496. 實(shí)施例60A [N2-(芐氧基羰基)-D-亮氨酰]-L-亮氨酸甲酯
在0℃，將N2-(芐氧基羰基)-D-亮氨酸(BACHEM目錄號(hào)z13351.)(6.37g，24mmol))和L-亮氨酸甲酯(3.49g，24mmol，1當(dāng)量)溶解于DMF(75ml)，并接著加入NMM(5.28ml，48mmol，2當(dāng)量)和HATU(13.69g，36mmol，1.5當(dāng)量)。將所述混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入MTBE和飽和的碳酸氫鈉水溶液，并進(jìn)行提取。用第二份的MTBE反萃取水相，并接著用1M檸檬酸并且再次用飽和的碳酸氫鈉溶液洗滌合并的有機(jī)相，通過(guò)硫酸鈉干燥并在真空中濃縮。將所述殘余物通過(guò)色譜法以兩份進(jìn)行純化(Biotage 40M，環(huán)已烷/乙酸乙酯3+1)。產(chǎn)率7.85g(80％理論值)。
HPLC(方法5)Rt＝4.82分鐘。
LCMS(方法18)Rt＝2.65分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝393(100)[M+H]+. [α]20Na＝-5.2°(c＝0.52，MeOH)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝0.77-0.92(m，12H)，1.31-1.66(m，6H)，3.60(s，3H)，4.10(m，1H)，4.28(m，1H)，5.02(s，2H)，7.25-7.38(m，6H)，8.23(d，1H)。
13C-NMR(126MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝21.1(CH3)，21.5(CH3)，22.8(CH3)，22.9(CH3)，24.2(CH)，41.0(CH2)，50.0(CH)，51.8(CH3，OCH3)，52.9(CH)，65.3(CH2，OCH2Ph)，127.6(CH，芳族-C)，127.7(CH，芳族-C)，128.3(CH，芳族-C)，137.1((C四重峰，芳族-C)，155.8(C四重峰，NCOC(CH3)3)，172.4(C四重峰，C＝O)，172.9(C四重峰，C＝O)。
實(shí)施例61A [N2-(芐氧基羰基)-D-亮氨酰]-L-亮氨酸
將化合物60A(7.70g，19.62mmol)置入200ml的THF/水(3+1)中，冷卻到0℃并加入一水合氫氧化鋰(1.65g，39.24mmol，2當(dāng)量)。將所述混合物在0℃攪拌直到根據(jù)HPLC監(jiān)測(cè)，反應(yīng)已經(jīng)結(jié)束(約45分鐘)。將大部分的THF在真空中蒸餾除去，接著通過(guò)加入檸檬酸將pH調(diào)節(jié)到約4，并將所述混合物用2份乙酸乙酯提取。通過(guò)硫酸鈉干燥合并的有機(jī)相，過(guò)濾并濃縮。獲得的產(chǎn)物是無(wú)定形物質(zhì)，其產(chǎn)率為6.87g(89％理論值)。
HPLC(方法5)Rt＝4.45分鐘。
LCMS(方法18)Rt＝2.39分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝379(100)[M+H]+，757(40)[2M+H]+. [α]20Na＝+4.7°(c＝0.50，MeOH)。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝0.77-0.92(m，12H)，1.34-1.68(m，6H)，4.04-4.26(m，2H)，5.02(s，2H)，7.25-7.38(m，6H)，8.12(d，1H)，12.50(br.s，1H)。
HR-TOF-MS(方法24)C20H31N2O5[M+H]+計(jì)算值379.2228，實(shí)測(cè)值379.2216. 實(shí)施例62A 五氟苯基N-[芐氧基羰基]-D-亮氨酰-L-亮氨酸酯
根據(jù)制備方法(實(shí)施例17A)，將示例性化合物61A(1000.0mg，2.64mmol)，五氟苯酚(2431.7mg，13.21mmol，5當(dāng)量)和EDC(759.8mg，3.96mmol，1.5當(dāng)量)轉(zhuǎn)化為標(biāo)題化合物。在精制后(方法28)，獲得1.3g(93.0％理論值)的產(chǎn)物，其貯存于-25℃直到進(jìn)一步使用。
HPLC(方法1)Rt＝3.08分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝3.26分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝545(100)[M+H]+，1089(43)[2M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝0.78-0.99(m，12H，2[CH(CH3)2])，1.30-1.88(m，6H)，4.16(m，1H，Hα)，4.38-4.55(2m，1H，Hα)，4.95-5.11(m，2H，PhCH2)，7.21-7.38(m，5H，ArH)，7.41(d，J＝7.4Hz，1H，NH)，8.69(d，J＝7.0Hz，1H，NH)。
實(shí)施例63A {N2-(芐氧基羰基)-D-亮氨酰}-L-亮氨酰-[(3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸]
在氬氣保護(hù)氣氛下，將氨基酸(實(shí)施例59A，493.0mg，1.76mmol和羧酸-活化的二肽(實(shí)施例62A，1197.0mg，1.76mmol)在DMF(50ml)中提供，并隨后在0℃將DIEA(2.4ml，1818.4mg，14.07mmol，8當(dāng)量)加入溶液。在加入堿后，使反應(yīng)物緩慢達(dá)到室溫并在該溫度攪拌直到完全轉(zhuǎn)化(3小時(shí))。對(duì)于后處理，將磷酸二氫鉀(2.4g，17.59mmol，10當(dāng)量)加入反應(yīng)物中并將所述混合物攪拌10分鐘，將所述固體濾去，并在30℃的水浴溫度在真空中濃縮濾液。在精制后(方法28)，分離750.0mg(66.6％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法1)Rt＝2.72分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.86分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝641(100)[M+H]+，541(76)[M-C4H8-CO2+H]+，1281(42)[2M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝639(100)[M-H]-，1280(92)[2M-H]-. 實(shí)施例64A 五氟苯基N-[(芐氧基)羰基]-D-亮氨酰-L-亮氨酰-[(3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸酯]
根據(jù)實(shí)施例方法(實(shí)施例17A)，在二氯甲烷(10ml)中使用EDC(89.8mg，0.49mmol，1.5當(dāng)量)從三肽(實(shí)施例63A，200mg，0.31mmol)和五氟苯酚(287.3mg，1.56mmol，5當(dāng)量)制備標(biāo)題化合物。通過(guò)在0℃將反應(yīng)物攪拌2小時(shí)獲得完全的轉(zhuǎn)化并將其在冰箱中在4℃靜置過(guò)夜。在精制后(方法32)，獲得211.0mg(83.8％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法1)Rt＝3.23分鐘。
LC-MS(方法21)Rt＝3.22分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝807(30)[M+H]+，707(100)[M-C4H8-CO2+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝805(10)[M-H]-，183(100)。
實(shí)施例65A 氯三苯甲基-樹(shù)脂-結(jié)合的{O3-[叔丁基]-N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-蘇氨酰-甘氨酰-(N3-三苯甲基-L-天冬酰胺酰)-[O3-(叔丁基)-L-絲氨酸]
如操作方法7中所述，將Fmoc保護(hù)基從聚合物中去除(實(shí)施例43A，1000.0mg，1.49mmol)。隨后使與樹(shù)脂結(jié)合的去保護(hù)的三肽與O-(叔丁基)-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-蘇氨酸[Echner，Hartmut；Voelter，Wolfgang；Liebigs Ann.Chem.；GE；1988；1095-1098](1184.5mg，2.98mmol，2當(dāng)量)，DIEA(779μl，577.7mg，4.47mmol，3當(dāng)量)和TBTU(956.6mg，2.98mmol，2當(dāng)量)反應(yīng)過(guò)夜以得到F-moc-保護(hù)的四肽。聚合物的后處理以類似于操作方法7的方式進(jìn)行。在樣品去除后，證實(shí)了相應(yīng)的側(cè)鏈-保護(hù)的肽。
LC-MS(方法20)Rt＝3.07分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝955(80)[M+H]+，243(100)；MS(ESIneg)m/z(％)＝953(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C55H64N5O10[M+H]+實(shí)測(cè)值954.4636，計(jì)算值954.4648. 實(shí)施例66A 氯三苯甲基-樹(shù)脂-結(jié)合的{N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-異亮氨酰}-{[O3-(叔丁基)]-L-蘇氨酰}-甘氨酰-(N3-三苯甲基-L-天冬酰胺酰)-[O3-(叔丁基)-L-絲氨酸]
如操作方法7中所述，使Fmoc保護(hù)基從聚合物中去除(實(shí)施例65A，1000.0mg，1.49mmol)。使結(jié)合于樹(shù)脂的去保護(hù)的四肽隨后與N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-異亮氨酸(1053.2mg，2.98mmol，2當(dāng)量)(H.Echner等，Liebigs Ann.Chem.1988，1095-1098)，DIEA(779μl，577.7mg，4.47mmol，3當(dāng)量)和TBTU(956.6mg，2.98mmol，2當(dāng)量)反應(yīng)過(guò)夜以得到F-moc-保護(hù)的五肽。聚合物的后處理以類似于操作方法7的方式進(jìn)行。在樣品去除后，證實(shí)相應(yīng)的側(cè)鏈-保護(hù)的肽。
HPLC(方法13)Rt＝2.61分鐘。
LC-MS(方法21)Rt＝3.26分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1068(15)[M+H]+，243(100)；MS(ESIneg)m/z(％)＝1066(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C61H75N6O11[M+H]+實(shí)測(cè)值1067.5503，計(jì)算值1067.5489. 實(shí)施例67A 氯三苯甲基-樹(shù)脂-結(jié)合的{N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-[N5-(亞氨基-{[(2，2，5，7，8-五甲基-3，4-二氫-2H-色烯-6-基)磺?；鵠氨基}甲基)-D-鳥(niǎo)氨酰]}-L-異亮氨酰-[O3-(叔丁基)-L-蘇氨酰]-甘氨酰-(N3-三苯甲基-L-天冬酰胺酰)-[O3-(叔丁基)-L-絲氨酸]
如操作方法7中所述，將Fmoc保護(hù)基從聚合物中去除(實(shí)施例66A，1000.0mg，1.49mmol)。使結(jié)合于樹(shù)脂的去保護(hù)的五肽隨后與N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N5-(亞氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基-3，4-二氫-2H-色烯-6-基)磺?；鵠氨基}甲基)-L-鳥(niǎo)氨酸(1283.9mg，1.94mmol，1.3當(dāng)量)，DIEA(779μl，577.7mg，4.47mmol，3當(dāng)量)和TBTU(956.6mg，2.98mmol，2當(dāng)量)反應(yīng)過(guò)夜以得到Fmoc-保護(hù)的六肽。聚合物的后處理以類似于操作方法7的方式進(jìn)行。在樣品去除后證實(shí)相應(yīng)的側(cè)鏈-保護(hù)的肽。
LC-MS(方法20)Rt＝3.24分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1490(85)[M+H]+，282(100)；MS(ESIpos)m/z(％)＝1488(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C81H105N10O15S[M+H]+實(shí)測(cè)值1489.7456，計(jì)算值1489.7477. 實(shí)施例68A 氯三苯甲基-樹(shù)脂-結(jié)合的{N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-亮氨酰}-[N5-(亞氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基-3，4-二氫-2H-色烯-6-基)磺?；鵠氨基}甲基)-D-鳥(niǎo)氨酰]-L-異亮氨酰-[O3-(叔丁基)-L-蘇氨酰]-甘氨酰-(N3-三苯甲基-L-天冬酰胺酰)-[O3-(叔丁基)-L-絲氨酸]
如操作方法7中所述，F(xiàn)moc保護(hù)基從聚合物中去除(實(shí)施例67A，1000.0mg，1.49mmol)。使結(jié)合于樹(shù)脂的去保護(hù)的六肽隨后與N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-亮氨酸(1053.2mg，2.98mmol，2當(dāng)量)，DIEA(779μl，577.7mg，4.47mmol，3當(dāng)量)和TBTU(956.6mg，2.98mmol，2當(dāng)量)反應(yīng)過(guò)夜以得到F-moc-保護(hù)的七肽。聚合物的后處理以類似于操作方法7的方式進(jìn)行。在樣品去除后證實(shí)相應(yīng)的側(cè)鏈-保護(hù)的肽。
LC-MS(方法18)Rt＝3.54分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1602(100)[M+H]+；MS(ESIpos)m/z(％)＝1600(100)[M-H]-. 實(shí)施例69A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-[N5-(亞氨基-{[(2，2，5，7，8-五甲基-3，4-二氫-2H-色烯-6-基)磺?；鵠氨基}甲基)-D-鳥(niǎo)氨酰]-L-異亮氨酰-[O3-(叔丁基)-L-蘇氨酰]-甘氨酰-(N3-三苯甲基-L-天冬酰胺酰)-[O3-(叔丁基)-L-絲氨酸]
如操作方法7中所述，使Fmoc保護(hù)基從聚合物中去除(實(shí)施例68A，1000.0mg，1.49mmol)。使結(jié)合于樹(shù)脂的去保護(hù)的七肽隨后與(3R)-3-羥基-N-(叔丁氧羰基)-L-亮氨酸(552.7mg，2.24mmol，1.5當(dāng)量)，DIEA(597μl，442.9mg，3.43mmol，2.3當(dāng)量)和TBTU(717.6mg，2.24mmol，1.5當(dāng)量)反應(yīng)過(guò)夜以得到Fmoc-保護(hù)的八肽。聚合物的后處理以類似于操作方法7的方式進(jìn)行。
將結(jié)合于樹(shù)脂的八肽在乙酸，三氟乙醇和二氯甲烷(1:1:3)的溶液中從聚合物中完全去除。對(duì)于后處理，將樹(shù)脂通過(guò)玻璃料過(guò)濾，并將所述濾液在真空中濃縮并最終通過(guò)色譜法(方法28)進(jìn)行純化。獲得418.0mg(17.4％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法13)Rt＝2.85分鐘。
HPLC(方法1)Rt＝3.32分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝3.39分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝1610(40)[M+H]+，806(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1608(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C83H125N12O18S[M+H]+實(shí)測(cè)值1609.8971，計(jì)算值1609.8951. 實(shí)施例70A [(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
在氬氣保護(hù)氣氛下，將示例性化合物69A(200.0mg，0.12mmol)在TFA(25.3ml)，水(667μl)和三異丙基硅烷(667μl)的溶液中在室溫?cái)嚢?小時(shí)。對(duì)于后處理，將所述溶劑在30℃的水浴溫度在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上去除，并將所述殘余物在30℃的水浴溫度在真空中用甲苯濃縮一次，用二氯甲烷濃縮一次。將所述殘余物溶解于0.1％TFA水溶液中，并用MTBE提取一次，將分離的水相在真空中濃縮并隨后通過(guò)制備HPLC(方法26)精制。獲得138.0mg(99.5％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法9)Rt＝8.60分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.43分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝889(15)[M+H]+，445(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝887(100)[M-H]-. 實(shí)施例71A [N2-(芐氧基羰基)-D-亮氨酰]-L-亮氨酰-[(3R)-N3-(叔丁氧羰基)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-{(3R)-3-羥基-L-亮氨酰}-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
如關(guān)于示例性化合物56A的制備方法所述，使用N，N-二異丙胺(65μl，48.6mg，375.96μmol，6當(dāng)量)從八肽(實(shí)施例70A，70.0mg，62.66μmol)，羧酸-活化的三肽(實(shí)施例64A，60.7mg，75.19μmol，1.2當(dāng)量)制備標(biāo)題化合物。將所述反應(yīng)物在室溫過(guò)夜幾乎完全轉(zhuǎn)化。在色譜法(方法26)后，獲得73.9mg(72.5％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法9)Rt＝22.16分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝2.07分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1512(25)[M+H]+，706(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1510(18)[M-H]-，700(100)。
HR-TOF-MS(方法24)C71H115N16O20[M+H]+實(shí)測(cè)值1511.8474，計(jì)算值1511.8469. 實(shí)施例72A [N2-(芐氧基羰基)-D-亮氨酰]-L-亮氨酰-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法1，將示例性化合物71A(70.0mg，43.06μmol)轉(zhuǎn)化為去保護(hù)的胺。在精制后(方法26)，獲得45.0mg(63.7％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法9)Rt＝16.77分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.85分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1412(10)[M+H]+，706(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1410(90)[M-H]-，650(100)。
HR-TOF-MS(方法24)C66H107N16O18[M+H]+實(shí)測(cè)值1411.7958，計(jì)算值1411.7944. 實(shí)施例73A [N2-(芐氧基羰基)-D-亮氨酰]-L-亮氨酰-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
根據(jù)制備方法(實(shí)施例58A)，從示例性化合物73A(42.0mg，25.61μmol)，HATU(29.2mg，76.83μmol，3當(dāng)量)和NMM(17μl，15.5mg，153.66μmol)制備標(biāo)題化合物。通過(guò)在室溫?cái)嚢?小時(shí)獲得完全的轉(zhuǎn)化。在精制后(方法26)，分離34.1mg(88.3％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法9)Rt＝20.29分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.06分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1393(32)[M+H]+，797(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1391(100)[M-H]-，695(32)[M-2H]2-. HR-TOF-MS(方法24)C66H105N16O17[M+H]+實(shí)測(cè)值1393.7848，計(jì)算值1393.7839. 實(shí)施例74A N5-[芐氧基羰基]-N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-D-鳥(niǎo)氨酸
將N5-[(芐氧基)羰基]-D-鳥(niǎo)氨酸(3.8g，14.27mmol)[Ulhaq，Saraj等；Bioorg.Med.Chem.(生物有機(jī)醫(yī)學(xué)化學(xué))；EN；7；9；1999；1787-1796]在二氯甲烷(190ml)中提供，加入DIEA(2.4ml，1.8g，17.27mmol，1當(dāng)量)和氯三甲基硅烷(3.6ml，3.1g，28.53mmol，2當(dāng)量)并將混合物在回流下攪拌過(guò)夜。再次冷卻反應(yīng)物(0℃)并加入DIEA(4.7ml，3.7g，28.54mmol，2當(dāng)量)和(9-芴基甲基)氯甲酸酯(3.7g，14.27mmol，1當(dāng)量)，將所述混合物升溫到室溫并在該溫度攪拌過(guò)夜。對(duì)于后處理，將所述反應(yīng)物用二氯甲烷稀釋并用10％檸檬酸水溶液洗滌，將有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥，在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上去除所述溶劑并將所述混合物在真空中干燥。獲得6.5g(93.2％理論值)的標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法18)Rt＝2.57分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝489(100)[M+H]+，977(100)[2M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝487(80)[M-H]-，975(100)[2M-H]-. 實(shí)施例75A 氯三苯甲基-樹(shù)脂-結(jié)合的{N5-[芐氧基羰基]-N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)-羰基]-D-鳥(niǎo)氨酰}-L-異亮氨酰-[O3-(叔丁基)-L-別蘇氨酰]-甘氨酰-(N4-三苯甲基-L-天冬酰胺酰)-[O3-(叔丁基)-L-絲氨酸]
如操作方法7中所述，將Fmoc保護(hù)基從聚合物中去除(實(shí)施例45A，1000.0mg，1.49mmol)，使結(jié)合于樹(shù)脂的去保護(hù)的五肽隨后與Fmoc-保護(hù)的氨基酸(實(shí)施例74A，1455.9mg，2.98mmol，2當(dāng)量)，DIEA(779μl，577.7mg，4.47mmol，3當(dāng)量)和TBTU(956.8mg，2.98mmol，2當(dāng)量)反應(yīng)過(guò)夜以得到F-moc-保護(hù)的六肽。聚合物的后處理以類似于操作方法7的方式進(jìn)行。在樣品去除后證實(shí)相應(yīng)的側(cè)鏈-保護(hù)的肽。
HPLC(方法13)Rt＝2.73分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝3.27分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1316(100)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝1314(100)[M+H]+. 實(shí)施例76A 氯三苯甲基-樹(shù)脂-結(jié)合的{N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-亮氨酰}-{N5-[(芐氧基)羰基]-D-鳥(niǎo)氨酰}-L-異亮氨酰-[O3-(叔丁基)-L-別蘇氨酰]-甘氨酰-(N4-三苯甲基-L-天冬酰胺酰)-[O3-(叔丁基)-L-絲氨酸]
如操作方法7中所述，將Fmoc保護(hù)基從聚合物(實(shí)施例75A，1000.0mg，1.49mmol)中去除。使結(jié)合于樹(shù)脂的去保護(hù)的六肽隨后與N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-亮氨酸(1053.2mg，2.98mmol，2當(dāng)量)，DIEA(779μl，577.7mg，4.47mmol，3當(dāng)量)和TBTU(956.8mg，2.98mmol，2當(dāng)量)反應(yīng)過(guò)夜以得到F-moc-保護(hù)的七肽。聚合物的后處理以類似于操作方法7的方式進(jìn)行。在樣品去除后證實(shí)相應(yīng)的側(cè)鏈-保護(hù)的肽。
HPLC(方法13)Rt＝2.84分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝3.36分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1429(95)[M+H]+，1430(100)；MS(ESIpos)m/z(％)＝1427(80)[M-H]-，1428(100)。
HR-TOF-MS(方法24)C61H75N6O11[M+H]+實(shí)測(cè)值1067.5488，計(jì)算值1067.5489. 實(shí)施例77A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-[N5-(芐氧基羰基)-D-鳥(niǎo)氨酰]-L-異亮氨酰-[O3-(叔丁基)-L-別蘇氨酰]-甘氨酰-[N4-三苯甲基-L-天冬酰胺酰]-[O3-(叔丁基)-L-絲氨酸]
如操作方法7中所述，將Fmoc保護(hù)基從聚合物中去除(實(shí)施例76A，1000.0mg，1.49mmol)。接著，使結(jié)合于樹(shù)脂的去保護(hù)的七肽與(3R)-3-羥基-N-(叔丁氧羰基)-L-亮氨酸[Oliyai，Reza，Siahaan，Teruna J.，Stella，Valentino J.；Pharm.Res.；EN；12；3；1995；323-328](552.7mg，2.24mmol，1.5當(dāng)量)，DIEA(597μl，442.9mg，3.43mmol，2.3當(dāng)量)和TBTU(717.6mg，2.24mmol，1.5當(dāng)量)反應(yīng)過(guò)夜以得到Fmoc-保護(hù)的八肽。聚合物的后處理以類似于操作方法7的方式進(jìn)行。
將結(jié)合于樹(shù)脂的八肽在乙酸，三氟乙醇和二氯甲烷(1:1:3)的溶液中從聚合物中完全去除。對(duì)于后處理，將樹(shù)脂通過(guò)玻璃料過(guò)濾，并將所述濾液在真空中濃縮并最終通過(guò)色譜法(方法28)進(jìn)行純化。獲得604.0mg(28.3％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法13)Rt＝2.68分鐘。
HPLC(方法1)Rt＝3.15分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝3.26分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝1437(100)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1435(100)[M-H]-. 實(shí)施例78A [(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-[N5-(芐氧基羰基)-D-鳥(niǎo)氨酰]-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
如在示例性方法(實(shí)施例70A)中所述，標(biāo)題化合物制備自示例性化合物77A(200.0mg，0.14mmol)。在室溫(1小時(shí))完全轉(zhuǎn)化后，將溶液在30℃的水浴溫度在真空中濃縮，在30℃的水浴溫度，用甲苯濃縮一次，用二氯甲烷濃縮一次，并最終通過(guò)制備RP-HPLC(方法26)精制。獲得121.0mg(79.3％理論值)。
HPLC(方法9)Rt＝13.26分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝3.04分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝981(100)[M+H]+，491(10)[M+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝979(100)[M-H]-. 實(shí)施例79A [N2-(芐氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-{(3R)-N3-(叔丁氧羰基)-3-氨基-L-苯基丙氨酰}-{(3R)-3-羥基-L-亮氨酰}-L-亮氨酰-[N5-芐氧基羰基-D-鳥(niǎo)氨酰(ornityl)]-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸
使用N，N-二異丙基胺(57μl，42.2mg，326.7μmol，6當(dāng)量)，如在示例性方法56A)中所述，標(biāo)題化合物制備自八肽(實(shí)施例78A，59.6mg，54.44μmol)，羧酸-活化的三肽(實(shí)施例40A，50.0mg，59.89μmol，1.1當(dāng)量)。使反應(yīng)物在室溫過(guò)夜完全轉(zhuǎn)化。在精制后(方法26)，獲得52.9mg(59.5％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法10)Rt＝10.32分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝3.07分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1633(40)[M+H]+，817(90)[M+2H]2+，767(100)；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1631(65)[M-H]-，761(100)。
HR-TOF-MS(方法24)C80H123N14O22[M+H]+實(shí)測(cè)值1631.8898，計(jì)算值1631.8931. 實(shí)施例80A [N2-(芐氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-{(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰}-{(3R)-3-羥基-L-亮氨酰}-L-亮氨酰-[N5-(芐氧基羰基)-D-鳥(niǎo)氨酰]-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法1，將示例性化合物79A(50.0mg，30.64μmol)轉(zhuǎn)化為去保護(hù)的胺。在精制后(方法26)，獲得27.5mg(54.5％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法9)Rt＝21.85分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝2.18分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1533(20)[M+H]+，766(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1531(58)[M-H]-，764(12)[M-2H]2-，710(100)。
HR-TOF-MS(方法24)C75H114N14O20[M+H]+實(shí)測(cè)值1531.8385，計(jì)算值1531.8407. 實(shí)施例81A [N2-(芐氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-{(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰}-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-[N5-(芐氧基羰基)-D-鳥(niǎo)氨酰]-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺
根據(jù)制備方法(實(shí)施例58A)，從示例性化合物80A(25.0mg，15.19μmol)，HATU(17.3mg，45.57μmol，3當(dāng)量)和NMM(10μl，9.2mg，91.14μmol)制備標(biāo)題化合物。在4℃，在3天后獲得完全的轉(zhuǎn)化。在精制(方法26)后，分離21.0mg(91.3％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法9)Rt＝26.28分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.98分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1514(20)[M+H]+，758(100)[M+2H]2+. HR-TOF-MS(方法24)C75H113N14O19[M+H]+實(shí)測(cè)值1513.8298，計(jì)算值1513.8301. 實(shí)施例82A (2R*，3R*)-N2-[(芐氧基)羰基]-N2-[(芐氧基)羰基氨基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-O-甲基酪氨酸甲酯
在氬氣保護(hù)氣氛下，將在THF中的1M LHMDS溶液(213.3mmol，213.3ml，2.2當(dāng)量)提供在反應(yīng)溶劑THF(1.351)中。在-78℃，緩慢逐滴加入(rac)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-3-(4-甲氧基苯基)丙酸甲酯(D.M.Kalvin，R.W.Woodard，J.Org.Chem(有機(jī)化學(xué)雜志)，50，13，1985，2259-2263)(30g，96.9mmol)的溶液。將所述混合物在-25℃攪拌10分鐘，接著再次冷卻到-78℃。將一份的氮雜二羧酸二芐酯(46.3g，155.2mmol，1.6當(dāng)量)加入反應(yīng)混合物中。將所述混合物在-60到-45℃攪拌2小時(shí)。為了終止反應(yīng)，將所述混合物再次冷卻到-78℃并加入乙酸(29.1ml，484.9mmol，5當(dāng)量)，接著將所述混合物升溫到0℃并最終升溫到室溫。反應(yīng)混合物在真空中蒸發(fā)并置入乙酸乙酯中(1000ml)。將所述混懸液用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌2次，用水洗滌2次，用5％檸檬酸水溶液洗滌2次，用飽和的氯化鈉水溶液洗滌1次。將所有的水相用乙酸乙酯單獨(dú)地反提取。在真空中蒸發(fā)所有的有機(jī)相并再次置入二氯甲烷(2000ml)中，過(guò)濾，通過(guò)硫酸鎂干燥，再次過(guò)濾并在真空中蒸發(fā)。將所述殘余物用環(huán)已烷攪拌，通過(guò)過(guò)濾收集并在高真空下干燥。獲得25.7g(44％理論值)的標(biāo)題化合物，其為固體。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝4.97分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法3)Rt＝5.00分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.87分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝508(100)，608(20)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝532(50)，606(100)[M-H]-. 實(shí)施例83A (2S*，3R*)-N2-[芐氧基羰基]-N2-[(芐氧基羰基)氨基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-O-甲基酪氨酸甲酯
在0℃，在氬氣保護(hù)氣氛下，將TMG(5.78ml，46.1mmol，11.2當(dāng)量)加入實(shí)施例82A(2.5g，4.1mmol)在無(wú)水DMF p.a.(87ml)中的溶液。使反應(yīng)混合物融化并且攪拌直到HPLC色譜圖(方法5)顯示完全的轉(zhuǎn)化(約70％產(chǎn)物)(約24小時(shí))，從而接著通過(guò)加入乙酸(pH 4-6)終止反應(yīng)。使反應(yīng)混合物在真空中蒸發(fā)，并在室溫置入乙酸乙酯中。將有機(jī)相用水洗滌2次，用5％檸檬酸洗滌2次，用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌1次，用飽和的氯化鈉水溶液洗滌1次，通過(guò)硫酸鎂干燥，過(guò)濾，在真空中蒸發(fā)并在高真空下干燥。通過(guò)急驟色譜法(硅膠，甲苯/乙酸乙酯 20:1)純化粗制產(chǎn)物。獲得1.89g(73％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝5.11分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝5.37分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝3.07分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝508(100)，608(20)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝532(100)，606(30)[M-H]-. IR νmax(NaCl，cm-1)3281，2974，1755，1740，1686，1508，1457，1416，1323，1288，1267，1208，1168，1137，1043，1027. 1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ＝1.29(s，9H，tBu)，3.29(s，3H，OCH3)，3.72(s，3H，COOCH3)，4.80-5.20(m，6H)，6.84(d，J＝8.5Hz，1H)，7.20-7.40(m，12H，ArH)，7.50-7.65(m，1H，NH)。
HR-TOF-MS(方法24)C32H38N3O9[M+H]+計(jì)算值608.2603，實(shí)測(cè)值608.2588. 實(shí)施例84A (+)-(2R，3S)-N2-[芐氧基羰基]-N2-[(芐氧基羰基)氨基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-O-甲基酪氨酸甲酯
將實(shí)施例83A的對(duì)映異構(gòu)體的混合物(10.6g，17.44mmol)通過(guò)制備HPLC(方法39)分離。獲得4.18g(99.5％ee，79％理論值)的標(biāo)題化合物和5.2g(99.5％ee，98％理論值)的(-)對(duì)映異構(gòu)體(實(shí)施例85A)。
通過(guò)方法15測(cè)定對(duì)映異構(gòu)體。
HPLC/UV-Vis(方法15)Rt＝3.86分鐘。
[α]20Na＝+54°(c＝0.24，在MeOH中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝5.11分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝5.23分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝3.07分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝508(100)，608(20)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝532(100)，606(30)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C32H38N3O9[M+H]+計(jì)算值608.2603，實(shí)測(cè)值608.2592. 實(shí)施例85A (-)-(2S，3R)-N2-[芐氧基羰基]-N2-[(芐氧基羰基)氨基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-O-甲基酪氨酸甲酯
制備以類似于實(shí)施例84A的方式進(jìn)行。
通過(guò)方法15確定對(duì)映異構(gòu)體。
HPLC/UV-Vis(方法15)Rt＝7.20分鐘。
[α]20Na＝-34°(c＝0.27，在MeOH中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝5.11分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝5.21分鐘。
LC-MS(方法23)Rt＝2.87分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝508(100)，608(90)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝532(60)，606(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C32H38N3O9[M+H]+計(jì)算值608.2603，實(shí)測(cè)值608.2594. 實(shí)施例86A (2S*，3R*)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-O-甲基酪氨酸甲酯
在氬氣保護(hù)氣氛下，將阮內(nèi)鎳(約1g)加入實(shí)施例83A(2.81g，4.62mmol)在甲醇/二氯甲烷 1:1(100ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物在80巴的氫壓和在室溫下，在加壓的壓熱器中氫化(12小時(shí))。HPLC色譜圖(方法8)顯示完全的轉(zhuǎn)化。在氬氣保護(hù)氣氛下，通過(guò)玻璃料/硅藻土層過(guò)濾反應(yīng)混合物并將玻璃料用甲醇洗滌數(shù)次。將所述濾液在真空中蒸發(fā)并在高真空下干燥。獲得的產(chǎn)物是固體(1.50g，定量)，將其進(jìn)一步反應(yīng)，而不需要精制。
HPLC/UV-Vis(方法8)Rt＝3.66分鐘。
實(shí)施例87A (+)-(2R，3S)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-O-甲基酪氨酸甲酯
在氬氣保護(hù)氣氛下，將阮內(nèi)鎳(約0.8g)加入實(shí)施例84A(4.00g，6.58mmol)在甲醇/二氯甲烷 1:1(100ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物在80巴的氫壓下和在室溫在加壓的壓熱器中氫化(72小時(shí))。在氬氣保護(hù)氣氛下，通過(guò)玻璃料/硅藻土層過(guò)濾反應(yīng)混合物，并將玻璃料用甲醇洗滌數(shù)次。將濾液在真空中蒸發(fā)并置入乙酸乙酯中。將EDTA(2g)在50％飽和碳酸氫鈉水溶液(700ml)中的溶液加入所述溶液中。用乙酸乙酯(100ml)提取水相5次。接著，將合并的有機(jī)相用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌2次并用飽和的氯化鈉水溶液洗滌2次。將所有的水相用乙酸乙酯單獨(dú)反提取。接著，將合并的有機(jī)相通過(guò)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并在高真空下干燥。獲得的產(chǎn)物是固體(1.04g，49％理論值，96％ee)。
HPLC/UV-Vis(方法16)Rt＝7.8分鐘。
[α]20Na＝+7.7°(c＝0.34，在MeOH中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝3.69分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝3.87分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.17分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝208(90)，269(100)，325(40)[M+H]+. IR νmax(NaCl，cm-1)2933，1737，1709，1611，1511，1365，1243，1164，1030. 實(shí)施例88A (-)-(2S，3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-O-甲基酪氨酸甲酯
在氬氣保護(hù)氣氛下，將阮內(nèi)鎳(約0.7g)加入實(shí)施例85A(5.20g，8.56mmol)在甲醇/二氯甲烷 1:1(140ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物在80巴的氫壓下和在室溫在加壓的壓熱器中氫化(72小時(shí))。在氬氣保護(hù)氣氛下，通過(guò)玻璃料/硅藻土層過(guò)濾反應(yīng)混合物并將所述玻璃料用甲醇洗滌數(shù)次。將濾液在真空中蒸發(fā)并置入乙酸乙酯中。將所述混合物通過(guò)硅膠色譜法(環(huán)已烷/乙酸乙酯 3:1→1:3)純化并通過(guò)制備HPLC(方法31)進(jìn)行分離。獲得標(biāo)題化合物(324mg，91％ee，8％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法16)Rt＝9.3分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝3.69分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝3.84分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.17分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝208(90)，269(100)，325(40)[M+H]+. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝1.37(s，9H，C(CH3)3)，3.53(s，3H，OCH3)，3.74(s，3H，OCH3)，4.26(m，1H，β-CH)，5.00(t，J＝9.0Hz，1H，β-CH)，6.93(d，J＝8.0Hz，2H，ArH)，7.23(d，J＝8.0Hz，2H，ArH)，7.52(d，J＝10.0Hz，1H，NH)，8.45(br.s，2H，NH2)。
實(shí)施例89A (2S*，3R*)-N2-[芐氧基羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-O-甲基酪氨酸甲酯
在氬氣保護(hù)氣氛下，在0℃，將NaHCO3(0.58g，6.94mmol，1.5當(dāng)量)和碘化四-N-丁銨(0.17g，0.47mmol，0.1當(dāng)量)加入實(shí)施例86A(1.5g，4.62mmol)和N-芐氧基羰基氧基琥珀酰亞胺酯(1268mg，5.09mmol，1.1當(dāng)量)在二氯甲烷/水(1:2，150ml)中的溶液中。將反應(yīng)混合物緩慢升溫(12小時(shí))，由此通過(guò)HPLC觀察到完全的轉(zhuǎn)化(方法1)。將檸檬酸的溶液(5％)加入所述溶液。用二氯甲烷(100ml)提取水相三次。接著，將合并的有機(jī)相用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌2次，并用飽和的氯化鈉水溶液洗滌2次。接著，將合并的有機(jī)相通過(guò)硫酸鎂干燥，過(guò)濾并在高真空下干燥。獲得的產(chǎn)物是標(biāo)題化合物，其為固體(2.1g，99％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝4.73分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝4.68分鐘。
IR νmax(NaCl，cm-1)3356，1737，1680，1514，1242，1161，1026，1004. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝1.36(s，9H，C(CH3)3)，3.61(s，3H，OCH3)，3.73(s，3H，OCH3)，4.51(dd，J＝9.5，4.0Hz，1H，α-H/β-H)，4.94(m，2H，PhCH2O)，5.20(dd，J＝10.0，4.0Hz，1H，α-H/β-H)，6.87(d，J＝8.5Hz，2H，ArH)，7.15-7.22(m，4H，ArH)，7.29-7.37(m，3H，ArH)，7.50(d，J＝10.0Hz，1H，NH)，7.57(d，J＝10.0Hz，1H，NH)。
13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝27.9，51.9，53.8，54.9，58.9，65.4，78.3，113.5，126.8，127.3，127.5，127.7，128.2，130.9，136.6，154.6，155.9，158.2，170.6. HR-TOF-MS(方法24)C25H30N2O7[M+H]+實(shí)測(cè)值459.2140，計(jì)算值459.2126. 實(shí)施例90A (+)-(2R，3S)-N2-[芐氧基羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-O-甲基酪氨酸甲酯
實(shí)施例87A(1.0g，3.08mmol)以類似于例如89A的制備方法反應(yīng)(反應(yīng)時(shí)間12小時(shí))。將粗制產(chǎn)物通過(guò)制備HPLC(方法32)進(jìn)行純化。獲得1.4g(61％理論值，96％ee)的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法16)Rt＝7.3分鐘。
[α]20Na＝+4.0°(c＝0.17，在MeOH中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝4.73分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝4.81分鐘。
IR νmax(NaCl，cm-1)3346，1741，1707，1680，1517，1270，1248，1160，1028，1007. LC-MS(方法23)Rt＝2.63分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝298(100)，459(30)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝383(100)，457(10)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C25H30N2O7[M+H]+實(shí)測(cè)值459.2128，計(jì)算值459.2126. 實(shí)施例91A (-)-(2S，3R)-N2-[芐氧基羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-O-甲基酪氨酸甲酯
實(shí)施例88A(0.32g，0.98mmol)以類似于例如89A的制備方法進(jìn)行反應(yīng)(反應(yīng)時(shí)間12h)。獲得的產(chǎn)物是標(biāo)題產(chǎn)物，其為固體(0.38g，85％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法16)Rt＝6.3分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝4.73分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝4.81分鐘。
LC-MS(方法23)Rt＝2.60分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝298(100)，459(70)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝383(100)，457(10)[M-H]-. 實(shí)施例92A (2S*，3R*)-N2-[芐氧基羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-O-甲基酪氨酸
在氬氣保護(hù)氣氛下，將實(shí)施例89A(759mg，1.69mmol)的溶液提供在THF/水 2:1(12ml)中。在0℃，在劇烈攪拌的同時(shí)，緩慢逐滴加入一水合氫氧化鋰(81mg，3.39mmol，2.05當(dāng)量)的水溶液。將所述混合物在室溫?cái)嚢柚钡紿PLC色譜圖(方法5)顯示完全的轉(zhuǎn)化(約3小時(shí))。隨后加入磷酸氫鉀(225mg)，將反應(yīng)混合物在真空中濃縮，并用乙酸乙酯(100ml)層覆蓋。接著，用5％檸檬酸(pH 2-3)酸化水相，接著用乙酸乙酯(50ml)提取三次。將合并的有機(jī)相用飽和的氯化鈉水溶液(20ml)洗滌2次，通過(guò)硫酸鈉干燥，過(guò)濾，在真空中濃縮并在高真空下干燥。獲得標(biāo)題化合物(735mg定量)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝4.45分鐘。
LC-MS(方法21)Rt＝2.33分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝389(100)，445(90)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝335(60)，443(100)[M-H]-. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.35(s，9H，C(CH3)3)，3.72(s，3H，OMe)，4.35-4.40(m，1H，α-H)，4.94(s，2H，PhCH2O)，5.19(dd，J＝10.0，4.0Hz，1H，β-H)，6.86(d，J＝9.0Hz，2H)，7.17-7.34(m，7H，ArH)，7.44-7.48(m，2H，2NH)，12.9(s，br，1H，CO2H)。
實(shí)施例93A (+)-(3S)-N2-[芐氧基羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-O-甲基-D-酪氨酸
方法A通過(guò)制備HPLC(方法40)分離實(shí)施例92A的對(duì)映異構(gòu)體的混合物(735mg，2.83mmol)。獲得319mg(99.5％ee，43％理論值)的標(biāo)題化合物和307mg(99.5％ee，42％理論值)的另一種對(duì)映異構(gòu)體(實(shí)施例94A)。
通過(guò)方法16確定對(duì)映異構(gòu)體。
HPLC/UV-Vis(方法16)Rt＝10.9分鐘。
[α]20Na＝+8°(c＝0.04，在MeOH中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝4.45分鐘。
LC-MS(方法21)Rt＝2.33分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝389(100)，445(90)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝335(60)，443(100)[M-H]-. IR νmax(NaCl，cm-1)3358，2978，1705，1683，1615，1515，1245，1167，1027. HR-TOF-MS(方法24)C23H29N2O7[M+H]+實(shí)測(cè)值445.1976，計(jì)算值445.1970. 方法B實(shí)施例93A(1.30g，2.83mmol)以類似于實(shí)施例92A(反應(yīng)時(shí)間2小時(shí))的制備方法的方式反應(yīng)。作為產(chǎn)物，獲得作為固體產(chǎn)物的標(biāo)題化合物(0.61g，48％理論值，95％ee)。
HPLC/UV-Vis(方法16)Rt＝10.9分鐘。
[α]20Na＝+15°(c＝0.23，在MeOH中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝4.41分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝4.54分鐘。
HR-TOF-MS(方法24)C23H28N2O7Na[M+Na]+實(shí)測(cè)值467.1788，計(jì)算值467.1794. 實(shí)施例94A (-)-(3R)-N2-[芐氧基羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-O-甲基-L-酪氨酸
方法A根據(jù)實(shí)施例93A(方法A)的制備方法 HPLC/UV-Vis(方法16)Rt＝13.3分鐘。
[α]20Na＝-10°(c＝0.12，在MeOH中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝4.45分鐘。
LC-MS(方法21)Rt＝2.33分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝389(100)，445(90)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝335(60)，443(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C23H29N2O7[M+H]+實(shí)測(cè)值445.1976，計(jì)算值445.1970. 方法B實(shí)施例90A(0.38g，0.84mmol)以類似于實(shí)施例92A的方法的方式反應(yīng)(反應(yīng)時(shí)間2h)。作為產(chǎn)物，獲得作為固體的標(biāo)題化合物(0.132g，35％理論值，94％ee)。
HPLC/UV-Vis(方法16)Rt＝13.3分鐘。
[α]20Na＝-5°(c＝0.1，在MeOH中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝4.41分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝4.49分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.38分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝389(100)，445(100)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝335(60)，443(100)[M-H]-. 13C NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝28.0，53.9，54.9，58.8，65.2，78.2，113.4，127.2，127.3，127.6，128.1，128.2，131.7，136.8，154.7，156.0，158.1，171.4. HR-TOF-MS(方法24)C23H29N2O7[M+H]+實(shí)測(cè)值445.1966，計(jì)算值445.1970. 實(shí)施例95A 2-異丙基-5-甲基環(huán)已基(1S，2R，5R)-[(3S)-N2-[芐氧基羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]]-O-甲基-D-酪氨酸酯
在氬氣保護(hù)氣氛下，提供實(shí)施例93A(34mg，76μmol，1當(dāng)量)和(1S，2R，5S)-(+)-薄荷醇(12mg，76μmol，1當(dāng)量)在二氯甲烷中的溶液。在0℃，加入DMAP(17.3mg，84μmol，1.1當(dāng)量)并將DCC(17.3mg，84μmol，1.1當(dāng)量)在二氯甲烷(0.5ml)中的溶液緩慢逐滴加入。將所述混合物在室溫?cái)嚢柚钡紿PLC色譜圖(方法5)顯示完全的轉(zhuǎn)化(約2小時(shí))。將反應(yīng)混合物隨后通過(guò)硅藻土過(guò)濾并在真空中濃縮，加入乙酸乙酯/石油醚 3:1。白色固體沉淀并通過(guò)過(guò)濾去除。將濾液濃縮并通過(guò)硅膠色譜法進(jìn)行預(yù)純化(石油醚/乙酸乙酯 3:1)。通過(guò)制備HPLC(方法43)純化。獲得標(biāo)題化合物(17mg，38％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝5.74分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝5.72分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝3.46分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝483(100)，527(80)，583(40)[M+H]+. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝0.71(d，3H，J＝7Hz，CH3)，0.81(d，3H，J＝7Hz，CH3)，0.81-0.84(m，3H)，0.87(d，3H，J＝7Hz，CH3)，1.00-1.06(m，1H)，1.22-1.28(m，1H)，1.35(s，9H，C(CH3)3)，1.61-1.70(m，3H)，1.89-1.92(m，1H)，3.72(s，3H，OMe)，4.49(dd，1H，J＝4.5，9.5Hz，β-H)，4.59(dt，J＝4.0，11.0Hz，1H，O-CH)，4.91(d，J＝12.0Hz，1H，PhCH2O)，4.97(d，J＝12.0Hz，1H，PhCH2O)，5.17(dd，J＝4.5，9.5Hz，1H，β-H)，6.86(d，2H，J＝9.0Hz，ArH)，7.16-7.24(m，4H，ArH)，7.28-7.34(m，3H，ArH)，7.46(d，1H，J＝8.0Hz，NH)，7.55(d，1H，J＝8.0Hz，NH)。
實(shí)施例96A 2-(三甲基甲硅烷基)乙基(+)-(3S)-N2-[芐氧基羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-O-甲基-D-酪氨酸酯
將實(shí)施例93A(261mg，0.59mmol)，2-(三甲基甲硅烷基)乙醇(694mg，5.87mmol，10當(dāng)量)和

分子篩(約20mg)在無(wú)水二氯甲烷p.a.(10ml)中的混合物在氬氣保護(hù)氣氛下，在室溫?cái)嚢?0分鐘。隨后，在-30℃，加入DCC(244mg，1.17mmol，2當(dāng)量)和DMAP(71mg，0.59mmol，1當(dāng)量)。使反應(yīng)混合物融化(約12小時(shí))并在室溫?cái)嚢柚钡紿PLC色譜圖(方法5)顯示完全的轉(zhuǎn)化(12小時(shí))。在室溫，反應(yīng)混合物在真空中蒸發(fā)并通過(guò)硅膠色譜法(石油醚/乙酸乙酯 3:1)純化。獲得244mg(76％理論值，99％ee)的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法16)Rt＝8.2分鐘。
[α]20Na＝+10°(c＝0.1，在MeOH中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝5.34分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝5.42分鐘。
IR νmax(NaCl，cm-1)3361，2931，2118，1735，1706，1681，1515，1247，1165，1019. LC-MS(方法21)Rt＝3.16分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝166(100)，545(15)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C28H41N2O7Si[M+H]+實(shí)測(cè)值545.2678，計(jì)算值545.2678. 實(shí)施例97A 2-(三甲基甲硅烷基)乙基(-)-(3R)-N2-[芐氧基羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-O-甲基-L-酪氨酸酯
實(shí)施例94A(130mg，0.29mmol)以類似于實(shí)施例96A的方式反應(yīng)(反應(yīng)時(shí)間12小時(shí))。作為產(chǎn)物，獲得作為固體的標(biāo)題化合物(149mg，94％理論值，>99.5％ee)。
HPLC/UV-Vis(方法16)Rt＝7.2分鐘。
[α]20Na＝-9°(c＝0.1，在MeOH中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝5.34分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝5.32分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝3.24分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝545(100)[M+H]+. 實(shí)施例98A 2-(三甲基甲硅烷基)乙基(+)-(3S)-3-氨基-N2-[芐氧基羰基]-O-甲基-D-酪氨酸酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例96A(222mg，0.41mmol，1當(dāng)量)懸浮在二氯甲烷(3ml)中，并且隨后，在氬氣保護(hù)氣氛下，加入三氟乙酸(9ml)，將所述混合物在室溫?cái)嚢?5分鐘直到HPLC色譜圖顯示完全的轉(zhuǎn)化(方法5)。接著將所述溶劑在真空中蒸餾除去，在該過(guò)程中浴溫不應(yīng)該超過(guò)30℃。將所述粗制產(chǎn)物通過(guò)制備HPLC(方法43)純化。獲得179mg(79％理論值，>99.5％ee)的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法16)Rt＝8.66分鐘。
[α]20Na＝+20°(c＝0.22，在MeOH中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝4.33分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝4.55分鐘。
IR νmax(NaCl，cm-1)2956，1672，1613，1518，1251，1181，1138，1029. LC-MS(方法18)Rt＝2.18分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝225(100)，549(100)[M+H]+. 1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝-0.07(s，9H，Si(CH3)3)，0.43-0.52(m，2H，CH2Si)，3.75(s，3H，OMe)，3.74-3.78(m，1H，CH2CH2Si)，3.82-3.88(m，1H，CH2CH2Si)，4.38-4.42(m，1H，β-H)，4.58(tapp，J＝約9.0Hz，1H，α-H)，5.08(s，2H，PhCH2O)，6.98(d，2H，J＝8.5Hz，ArH)，7.34-7.40(m，8H，ArH)，8.07(d，1H，J＝8.0Hz，NH)，8.49(s，br，2H，2NH)。
13C NMR(125MHz，d6-DMSO)δ＝-1.8(3C，(Si(CH3)3))，16.3(CH2Si)，54.5(Cβ)，55.1(Cα)，57.7(OMe)，62.9(CH2CH2Si)，66.0(PhCH2O)，113.9(2C)，125.3，127.8(2C)，127.9，128.3(2C)，129.4(2C)，136.4，155.8(CO2Bn)，159.9，168.9(CO2TMSE)。
HR-TOF-MS(方法24)C23H33N2O5Si[M+H]+實(shí)測(cè)值445.2168，計(jì)算值445.2154. 實(shí)施例99A 2-(三甲基甲硅烷基)乙基(-)-(3R)-3-氨基-N2-[芐氧基羰基]-O-甲基-L-酪氨酸酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例96A(120mg，0.22mmol)以類似于實(shí)施例98A(反應(yīng)時(shí)間50分鐘)的方式反應(yīng)。作為產(chǎn)物，獲得作為固體的標(biāo)題化合物(71mg，56％理論值，>99.5％ee)。
HPLC/UV-Vis(方法16)Rt＝7.49分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝4.33分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝4.50分鐘。
IR νmax(NaCl，cm-1)2956，1672，1613，1518，1251，1181，1138，1029. HR-TOF-MS(方法24)C23H33N2O5Si[M+H]+實(shí)測(cè)值445.2151，計(jì)算值445.2154. 實(shí)施例100A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
方法A在氬氣保護(hù)氣氛下，將二碳酸二叔丁酯(369mg，1.69mmol，2.5當(dāng)量)和N-甲基嗎啉(68mg，680μmol，1當(dāng)量)加入來(lái)自實(shí)施例3A的降解產(chǎn)物(690mg，680μmol)在水-二噁烷 1:2(30ml)中的溶液。攪拌反應(yīng)混合物直到HPLC色譜圖(方法1)顯示完全的轉(zhuǎn)化(約48小時(shí))。將磷酸二氫鉀(5當(dāng)量)加入反應(yīng)混合物并將所述混合物在真空中濃縮，通過(guò)制備HPLC純化(方法43或方法30，隨后是通過(guò)加入TFA(2000μmol，作為在乙腈-水 1:1中的0.05％溶液))進(jìn)行色譜產(chǎn)物的鹽的復(fù)分解作用。獲得531mg(70％理論值)的標(biāo)題化合物。
方法B將Edman3.0前體三氟乙酸鹽(100mg，0.1mmol，1當(dāng)量)首先進(jìn)行凝膠色譜法(方法45，MeOH，0.2％ TFA)。將二碳酸二叔丁酯(43mg，0.2mmol，2當(dāng)量)在室溫加入該物質(zhì)在水(1ml)和二噁烷(2ml)中的溶液，并逐滴加入NMM(21.6μL，0.2mmol，2當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柚钡?約12小時(shí))分析HPLC監(jiān)測(cè)(方法8)顯示足夠的轉(zhuǎn)化(>99％)。加入磷酸二氫鉀(67mg，0.49mmol，5當(dāng)量)，在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上濃縮反應(yīng)混合物并接著通過(guò)制備HPLC(方法26)進(jìn)行精制。獲得83mg(76％理論值)的標(biāo)題化合物。
[α]20Na＝-18.0°(c＝0.19，在甲醇中)。
HPLC/UV-Vis(方法2)Rt＝1.7分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝3.57分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝3.79分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.70分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝453(100)，1005(80)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1003(100)[M-H]-. LC-MS(方法23)Rt＝4.6分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝453.5(60)[M-C4H8-CO2+2H]2+，1006(100)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1004(100)[M-H]-. IR νmax(NaCl，cm-1)3288，2966，2359，2341，1645，1520，1368，1160，1137，1054. 1H NMR(500MHz，d5-吡啶)δ＝9.72(br.s，1H，NH-Glu6)，9.31(br d，J＝約7.0Hz，1H，NH-Arg3)，9.23(d，J＝6.0Hz，1H，NH-Leu2)，9.19(br.s，1H，εNH-Arg3)，9.00(d，J＝9.0Hz，1H，NH-βOH-Asn7)，8.88(d，J＝7.0Hz，1H，NH-Thr5)，8.78(d，J＝7.0Hz，1H，NH-Ile4)，8.64(d，J＝7.5Hz，1H，NH-Ser8)，8.40(br.s，1H，NH2-βOH-Asn7)，8.34(br.s，1H，NH2-βOH-Asn7)，5.96(d，J＝8.0Hz，1H，αCH-βOH-Asn7)，5.51(s，1H，βCH-βOH-Asn7)，5.11-5.09(m，1H，αCH-Ser8)，5.04(t，J＝7.5Hz，1H，αCH-Thr5)，4.95-4.91(m，3H，αCH-Arg3和αCH-βOH-Leu1和αCH-Leu2)，4.82(t，J＝7.0Hz，1H，αCH-Ile4)，4.71-4.66(m，1H，βCH-Thr5)，4.44(dd，J＝4.5和10.5Hz，1H，βCH-Ser8)，4.31-4.26(m，3H，βCH-Ser8和βCH-βOH-Leu1和αCH-Gly6)，4.20(dd，J＝6.0和16.5Hz，1H，αCH-Gly6)，3.43(br d，J＝約6.0Hz，2H，δCH-Arg3)，2.39-2.36(m，2H，βCH-Arg3和βCH-Ile4)，2.27-2.20(m，1H，βCH-Arg3)，2.10-2.05(m，2H，γCH-βOH-Leu1和γCH-Arg3)，1.93-1.79(m，4H，βCH-Leu2，γCH-Leu2，γCH-Arg3和γCH-Ile4)，1.55(d，J＝6.0Hz，3H，γCH3-Thr5)，1.45(s，9H，O-tBu)，約1.47(隱藏的，1H，γCH-Ile4)，1.17-1.15(m，4H，δCH3-βOH-Leu1和γCH-Ile4)，1.05(d，J＝6.0Hz，3H，δCH3-βOH-Leu1)，1.05(t，J＝7.0Hz，3H，δCH3-Ile4)，0.80(d，J＝6.0Hz，3H，δCH3-Leu2)，0.78(d，J＝6.0Hz，3H，δCH3-Leu2)。
13C NMR(125MHz，d5-吡啶)δ＝175.58(γCO-βOH-Asn7)，174.23(CO-βOH-Leu1)，173.97(CO-Arg3)，173.89(CO-Ser8或CO-Leu2)，173.69(CO-Thr5)，173.55(CO-Ser8或CO-Leu2)，172.48(CO-Ile4)，170.90(CO-βOH-Asn7)，170.50(CO-Gly6)，158.67(ζC-Arg3)，157.06(CO-Boc)，79.13(C-Boc)，77.09(βCH-βOH-Leu1)，72.29(βCH-βOH-Asn7)，68.32(βCH-Thr5)，63.24(βCH-Ser8)，59.79(αCH-Ile4)，59.60(αCH-Thr5)，58.35(αCH-βOH-Leu1)，57.11(αCH-βOH-Asn7)，56.94(αCH-Ser8)，54.06(αCH-Arg3)，53.60(αCH-Leu2)，44.32(αCH2-Gly6)，41.75(δCH2-Arg3)，40.41(βCH2-Leu2)，36.70(βCH-Ile4)，31.56(γCH-βOH-Leu1)，29.47(βCH2-Arg3)，28.48(Me3-Boc)，26.11(γCH-Arg3)，25.74(γCH2-Ile4)，24.93(γCH-Leu2)，22.94(δCH3-Leu2)，21.71(δCH3-Leu2)，21.20(γCH-Thr5)，19.48(δCH3-βOH-Leu1)，19.43(δCH3-βOH-Leu1)，16.02(γCH-Ile4)，11.20(δCH3-Ile4)。
HR-TOF-MS(方法24)C42H77N12O16[M+H]+實(shí)測(cè)值1005.5560，計(jì)算值1005.5576. 實(shí)施例101A N2-(芐氧基羰基)-N3-{N2.1-叔丁氧羰基[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3S)-3-氨基-O-甲基-D-酪氨酸(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯三氟乙酸鹽
在氬氣保護(hù)氣氛下，在0℃，首先將HATU(2.5當(dāng)量，71mg，186μmol)加入實(shí)施例98A(1.2當(dāng)量，50mg，89μmol)，八肽酸(實(shí)施例100A，1.0當(dāng)量，83mg，75μmol)和N-甲基嗎啉(3.5當(dāng)量，29μmol)在無(wú)水二甲基甲酰胺(0.5ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌(約3小時(shí))。反應(yīng)混合物接著顯示胺成分的完全的轉(zhuǎn)化(HPLC監(jiān)測(cè)，方法5)。將固體磷酸二氫鉀(101mg，746μmol，10當(dāng)量)加入反應(yīng)混合物并過(guò)濾混合物，接著在高真空下蒸發(fā)并通過(guò)色譜法純化(方法43)。獲得96.5mg(84％理論值)的產(chǎn)物。
[α]20Na＝-6°(c＝0.04，在甲醇中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝4.47分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝4.88分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.26分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝652(100)，1432(50)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1430(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C65H107N14O20Si[M+H]+實(shí)測(cè)值1431.7570，計(jì)算值1431.7550. 實(shí)施例102A N2-(芐氧基羰基)-N3-{N2.1-叔丁氧羰基[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3R)-3-氨基-O-甲基-L-酪氨酸(2-(三甲基甲硅烷基)乙基)酯三氟乙酸鹽
實(shí)施例99A(65mg，0.116mmol)以類似于實(shí)施例101A的方式反應(yīng)(反應(yīng)時(shí)間150分鐘)。作為產(chǎn)物，獲得作為固體的標(biāo)題化合物(111mg，74％理論值)。
[α]20Na＝-17°(c＝0.09，在甲醇中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝4.47分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝4.87分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.16分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝652(100)，1432(60)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1430(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C65H107N14O20Si[M+H]+實(shí)測(cè)值1431.7509，計(jì)算值1431.7550. 實(shí)施例103A N2-(芐氧基羰基)-N3-{N2.1-叔丁氧羰基[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3S)-3-氨基-O-甲基-D-酪氨酸三氟乙酸鹽
在氬氣保護(hù)氣氛下，在無(wú)水THF(4ml)中提供實(shí)施例101A(96mg，62μmol)。在室溫劇烈攪拌的同時(shí)，逐滴加入1N TBAF-THF溶液(310μl，5當(dāng)量)。以30分鐘的規(guī)則間隔加入另外多份的TBAF(每份5當(dāng)量)。在約45當(dāng)量后，HPLC色譜圖(方法5)顯示完全的轉(zhuǎn)化。反應(yīng)混合物接著用磷酸二氫鉀(253mg，約30當(dāng)量)中和。過(guò)濾反應(yīng)混合物，在真空中蒸發(fā)并通過(guò)制備HPLC純化(方法43)。獲得83mg(93％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝3.93分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝4.27分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.00分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝616(100)，1332(20)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1330(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C60H95N14O20[M+H]+實(shí)測(cè)值1331.6844，計(jì)算值1331.6842. 實(shí)施例104A N2-(芐氧基羰基)-N3-{N2.1-叔丁氧羰基[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3R)-3-氨基-O-甲基-L-酪氨酸三氟乙酸鹽
實(shí)施例102A(105mg，0.068mmol)以類似于實(shí)施例103A(共45當(dāng)量的TBAF)的方式反應(yīng)。作為產(chǎn)物，獲得作為固體的標(biāo)題化合物(90mg，99％理論值)。
[α]20Na＝-9°(c＝0.135，在甲醇中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝3.93分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝4.15分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.80分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝616(100)，1332(40)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝664(60)，1330(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C60H95N14O20[M+H]+實(shí)測(cè)值1331.6840，計(jì)算值1331.6842. 實(shí)施例105A N2-(芐氧基羰基)-N3-{[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3S)-3-氨基-O-甲基-D-酪氨酸三氟乙酸鹽
根據(jù)方法1，實(shí)施例103A(10mg，7μmol)在氬氣保護(hù)氣氛下反應(yīng)。在冷凍干燥后，獲得9.3mg(99.9％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝3.47分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.50分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝616(100)，1232(5)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1230(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C55H87N14O18[M+H]+實(shí)測(cè)值1231.6300，計(jì)算值1231.6318. 實(shí)施例106A N2-(芐氧基羰基)-N3-{N2.1-叔丁氧羰基[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3R)-3-氨基-O-甲基-L-酪氨酸
根據(jù)操作方法1，實(shí)施例104A(240mg，166μmol)在氬氣保護(hù)氣氛下反應(yīng)。在冷凍干燥后獲得116mg(57％理論值)的標(biāo)題化合物。
[α]20Na＝-24°(c＝0.07，在甲醇中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝3.47分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝3.83分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.51分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝616(100)，1232(5)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1230(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C55H87N14O18[M+H]+實(shí)測(cè)值1231.6361，計(jì)算值1231.6318. 實(shí)施例107A N2.1-(芐氧基羰基)-[(3S)-3-氨基-O-甲基-D-酪氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
在氬氣保護(hù)氣氛下，在0℃，首先將HATU(1.5mg，8μmol，5當(dāng)量)加入實(shí)施例105A(1.9mg，2μmol，1當(dāng)量)和NMM(1.7μL，15μmol，10當(dāng)量)在無(wú)水DMF(200μl)的溶液中。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌(約90分鐘)。接著，反應(yīng)混合物顯示胺成分的完全的轉(zhuǎn)化(HPLC監(jiān)測(cè)，方法5)。加入固體磷酸二氫鉀(20當(dāng)量，4.2mg，31μmol)，并過(guò)濾反應(yīng)混合物，接著在高真空下蒸發(fā)并通過(guò)色譜法純化(方法45)。獲得1.8mg(96％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝3.65分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝3.91分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.67分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝1214(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C55H85N14O17[M+H]+實(shí)測(cè)值1213.6232，計(jì)算值1213.6312. 實(shí)施例108A N2.1-(芐氧基羰基)-[(3R)-3-氨基-O-甲基-L-酪氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
實(shí)施例106A(120mg，0.097mmol)以類似于實(shí)施例107A的方式反應(yīng)(反應(yīng)時(shí)間1h)。獲得標(biāo)題化合物，其為固體(39mg，33％理論值)。
[α]20Na＝-58°(c＝0.07，在甲醇中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝3.71分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝3.98分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.74分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝1214(100)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1212(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C55H85N14O17[M+H]+實(shí)測(cè)值1213.6227，計(jì)算值1213.6312. 實(shí)施例109A [(3S)-3-氨基-O-甲基-D-酪氨酰]]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
在氬氣保護(hù)氣氛下，將實(shí)施例107A(65mg，49μmol)溶解于甲醇(5ml)并加入10％的披鈀碳(10mg)以及1N鹽酸水溶液(250μl)。在室溫和在大氣壓下進(jìn)行氫化直到(約90分鐘)分析HPLC(方法5)顯示完全轉(zhuǎn)化。過(guò)濾反應(yīng)混合物(通過(guò)硅藻土，

或注射器濾器，Biotage，PTFE)，在真空中濃縮并通過(guò)色譜法純化(方法43)。獲得40.6mg(63％理論值)的標(biāo)題化合物。
[α]20Na＝-21°(c＝0.06，在甲醇中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝3.28分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝3.55分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.20分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝540(100)，1079(20)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1077(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C47H78N14O15[M+H]+實(shí)測(cè)值1079.5835，計(jì)算值1079.5844. 實(shí)施例110A [(3R)-3-氨基-O-甲基-L-酪氨酰]]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
使實(shí)施例108A(12mg，9μmol)以類似于實(shí)施例109A的制備方法的方式反應(yīng)(反應(yīng)時(shí)間90分鐘)。作為產(chǎn)物，獲得作為固體的標(biāo)題化合物(10.3mg，87％理論值)。
[α]20Na＝-52°(c＝0.03，在甲醇中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝3.18分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝3.52分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.25分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝540(100)，1079(5)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1077(100)[M-H]-. 實(shí)施例111A [N2-(芐氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3S)-3-氨基-O-甲基-D-酪氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
在-30℃，在氬氣保護(hù)氣氛下，首先將HATU(2.2mg，6μmol，2.5當(dāng)量)加入實(shí)施例109A(3.0mg，2μmol，1.0當(dāng)量)，二肽酸(實(shí)施例10A，2.3mg，6μmol，2.5當(dāng)量)和NMM(11μmol，5當(dāng)量)在無(wú)水DMF(1ml)中的溶液。攪拌反應(yīng)混合物并緩慢升溫(約1小時(shí))到0℃。將NMM(6μmol，每次2.5當(dāng)量)和HATU(6μmol，每次2.5當(dāng)量)以定時(shí)間隔(30分鐘)加入反應(yīng)混合物中，直到HPLC監(jiān)測(cè)(方法5)顯示胺成分的完全的轉(zhuǎn)化。總共，對(duì)此需要約20當(dāng)量的NMM和HATU。加入固體磷酸二氫鉀(9.4mg，69μmol，30當(dāng)量)并過(guò)濾反應(yīng)混合物，接著在高真空下蒸發(fā)并通過(guò)色譜法純化(方法43)。獲得2mg(55％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝4.2分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝4.49分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.07分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝734(100)[M+2H]2+，1468(20)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝678(100)，732(5)[M-2H]2-，1466(10)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C69H111N16O19[M+H]+實(shí)測(cè)值1467.8228，計(jì)算值1467.8206. 實(shí)施例112A [N2-(芐氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-O-甲基-L-酪氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
制備以類似于實(shí)施例111A的方式從實(shí)施例109A的化合物(30mg，23μmol)和示例性化合物10A(23.3mg，57μmol，2.5當(dāng)量)進(jìn)行。將所述粗制產(chǎn)物通過(guò)色譜法純化(方法43)，由此在冷凍干燥后，獲得25mg(69％理論值)的產(chǎn)物，其為固體。
[α]20Na＝-62°(c＝0.06，在甲醇中)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝4.4分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.31分鐘。
MS(ESIpos.)m/z(％)＝734(100)[M+2H]2+，1468(20)[M+H]+； MS(ESIneg.)m/z(％)＝678(70)，733(100)[M-2H]2-，1466(10)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C69H111N16O19[M+H]+實(shí)測(cè)值1467.8206，計(jì)算值1467.8206. 實(shí)施例113A 3-氨基-3-(4-溴苯基)丙酸
將4-溴苯甲醛(50.0g，270mmol)，丙二酸(28.1g，270mmol)和乙酸銨(27.7g，359mmol，1.3當(dāng)量)溶解于乙醇(400ml)。將所述混合物在回流下加熱16小時(shí)。在玻璃濾器漏斗上收集得到的固體，通過(guò)吸濾收集并用乙醇洗滌。接著，將所述殘余物從甲醇(80ml)收集。隨后其用乙酸乙酯研磨并通過(guò)吸濾收集。獲得41.0g(0.16mmol，62％理論值)的標(biāo)題化合物，其為無(wú)色結(jié)晶固體。
HPLC(方法5)Rt＝3.13分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝0.97分鐘，MS(ESIneg.)m/z(％)＝242.0(100)和244.0(80)[M-H]-. 1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ＝2.36-2.38(m，2H，2-H)，4.25(“t”，J＝6.8，7.6Hz，2H，3-H)，6.56(d，J＝16.1Hz，1H，N-H)，7.38(d，J＝8.5Hz，1H，N-H)，7.52-7.71(m，4H，芳族(arom)。H)。
13C-NMR(126MHz，DCOOD)δ＝36.5(CH2，C-2)，51.9(CH，C-3)，123.7(C四重峰)，129.2(CH)，132.4(CH)，133.5(C四重峰)，174，0(C四重峰，C-1)。
HR-TOF-MS(方法24)C9H11NO2Br[M+H]+計(jì)算值243.9968，實(shí)測(cè)值243.9980. 實(shí)施例114A 3-氨基-3-(4-溴苯基)丙酸甲酯鹽酸鹽
在氬氣保護(hù)氣氛下，將41.0g(157mmol)的化合物113A懸浮在甲醇(1000ml)中。加入102ml(410mmol，2.6當(dāng)量)的在1，4-二噁烷中的4M鹽酸。在加入鹽酸后，原材料自發(fā)溶解，并將所述混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。接著，將所述混合物在真空中濃縮到干燥。獲得了產(chǎn)物(51.8g，純度約69％，產(chǎn)率77％理論值)，其為固體并在沒(méi)有進(jìn)一步純化的情況下應(yīng)用于下一個(gè)步驟。
HPLC(方法5)Rt＝3.35分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.24分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝240.9(20)和242.8(20)[M-NH2+H]+. 1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ＝2.99(dd，J2，3＝8.7Hz，J2，2＝16.4Hz，1H，2-HA)，3.16(dd，J2，3＝4.0Hz，J2，2＝16.4Hz，1H，2-HB)，3.56(s，3H，OCH3)，4.62(br.s，1H，3-H)，7.49(d，J＝8.5Hz，2H，2‘-H)，7.65(d，J＝8.5Hz，2H，2‘-H)，8.64(br.s，2H，NH2)。
13C-NMR(126MHz，CDCl3)δ＝43.8(CH2，C-2)，51.8(CH3，OCH3)，52.1(CH，C-3)，121.2(C四重峰，C-4‘)，128.0(CH，C-芳族.)，131.7(CH，C-芳族.)，143.6(C四重峰，C-1‘)，172.2(C四重峰，C-1)。
HR-TOF-MS(方法24)C10H13NO2Br[M+H]+計(jì)算值258.0125，實(shí)測(cè)值258.0119. 實(shí)施例115A N-丁氧基羰基-3-氨基-3-(4-溴苯基)丙酸甲酯
將化合物114A(51.8g，121mmol，69％純度)溶解于1，4-二噁烷/水(2:1，540ml)。加入二碳酸二叔丁酯(29.1g，133mmol，1.1當(dāng)量)和三乙胺(38.8ml，28.22g，2.3當(dāng)量)，并將所述混合物在室溫?cái)嚢?50分鐘。將二噁烷在真空中濾去，并加入150ml的乙酸乙酯和200ml飽和碳酸氫鈉水溶液。部分產(chǎn)物115A自發(fā)沉淀并且通過(guò)過(guò)濾分離。分離濾液的相，并將有機(jī)相用0.5M檸檬酸洗滌，通過(guò)硫酸鈉干燥并濃縮。通過(guò)用甲醇研磨從殘余物獲得另外的級(jí)分115A?？偖a(chǎn)率32.9g(92mmol，76％理論值)的標(biāo)題化合物，其為固體。
HPLC(方法5)Rt＝4.80分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝2.37分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝358.0(15)和360.0(15)[M+H]+. 1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ＝1.34(s，9H，COC(CH3)3)，2.62-2.79(m，2H，2-H)，3.55(s，3H，OCH3)，4.87(dd，J1＝7.9Hz，J2＝15.1Hz，1H，3-H)，7.26(d，J2‘，3‘＝8.3Hz，2H，2‘-H)，7.51(d，J2‘，3‘＝8.3Hz，2H，3‘-H)。
13C-NMR(126MHz，CDCl3)δ＝28.3(CH3，COC(CH3)3)，40.4(CH2，C-2)，50.6(CH，C-3)，51.9(CH3，OCH3)，79.9(C四重峰，COC(CH3)3)，121.4(C四重峰，C-4‘)，127.9(CH，C-芳族.)，131.7(CH，C-芳族.)，140.3(C四重峰，C-1‘)，155.0(C四重峰，COC(CH3)3，171.2(C四重峰，C-1)。
HR-TOF-MS(方法24)C15H21NO4Br[M+H]+計(jì)算值358.0649，實(shí)測(cè)值358.0659. 實(shí)施例116A (S)-N-丁氧基羰基-3-氨基-3-(4-溴苯基)丙酸甲酯
通過(guò)手性HPLC(方法42)將外消旋化合物115A分離為標(biāo)題化合物(96％ee)及另一種對(duì)映異構(gòu)體(>99％ee)。在每輪上樣750mg的115A。在每種情形中，定量分離50％理論值的(S)對(duì)映異構(gòu)體(實(shí)施例116A)和(R)對(duì)映異構(gòu)體。
通過(guò)方法17確定對(duì)映異構(gòu)體。
HPLC/UV-VIS(方法17)Rt＝4.31分鐘。(標(biāo)題化合物) [α]20Na＝-38.6(c＝1.0，MeOH)。(標(biāo)題化合物) HPLC/UV-VIS(方法17)Rt＝3.82分鐘。(另外的對(duì)映異構(gòu)體) [α]20Na＝+36.8(c＝1.0，MeOH)。(另外的對(duì)映異構(gòu)體) 實(shí)施例117A (S)-N-丁氧基羰基-3-氨基-3-(4-二甲基氨基苯基)丙酸甲酯
當(dāng)進(jìn)行該反應(yīng)時(shí)，必需小心嚴(yán)格排除氧和水分并且在干燥氬氣保護(hù)氣氛下保持試劑，因?yàn)榉駝t只有不充足的轉(zhuǎn)化發(fā)生。因?yàn)槲⒉ǖ拇笮∠拗婆蔚囊?guī)模，將更大量分成多份約7mmol的實(shí)施例116A，并順序處理。
將實(shí)施例116A(2.5g，6.98mmol)，二甲基胺(1M，在THF中，16ml，32mmol，4.6當(dāng)量)，XPHOS(0.4g，0.84mmol，0.12當(dāng)量)，碳酸銫(3.2g，9.75mmol，1.4當(dāng)量)和雙(二亞芐基丙酮)鈀(0)(0.20g，0.35mmol，0.05當(dāng)量)在20ml的微波反應(yīng)器中在氬氣保護(hù)氣氛下混合并卷曲密封。將所述混合物在微波反應(yīng)器(Emrys Optimizer單模式實(shí)驗(yàn)室微波反應(yīng)器)中，在170℃加熱1小時(shí)。在冷卻后，用水和乙酸乙酯進(jìn)行提取，并將有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥。將所述溶劑去除，并將殘余物溶解于甲醇，過(guò)濾溶液并濃縮濾液。獲得產(chǎn)率2.0g(6.19mmol，89％理論值)的117A，其純度足以用于進(jìn)一步的反應(yīng)。
對(duì)于分析目的，通過(guò)制備HPLC(方法33)精制實(shí)施例117A的樣品。
HPLC(方法5)Rt＝3.60分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.84分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝323.3(100)[M+H]+. [α]20Na＝-31.0(c＝1.0，MeOH)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.35(s，9H，COC(CH3)3)，2.63(dd，J2，3＝6.6Hz，Jgem＝15.5Hz，1H，2-HA)，2.72(dd，J2，3＝8.8Hz，Jgem＝15.5Hz，1H，2-HB)，2.93(s，6H，N(CH3)2)，3.54(s，3H，OCH3)，4.84(m，1H，3-H)，6.88(br.s，2H，2‘-H)，7.20(d，J2‘，3‘＝8.3Hz，2H，3‘-H)，7.36(d，J＝8.8Hz，1H，N-H)。
13C-NMR(126MHz，CDCl3)δ＝28.3(CH3，COC(CH3)3)，40.3(CH2，C-2)，44.9(CH3，N(CH3)2)，50.3(CH，C-3)，52.0(CH3，OCH3)，80.1(COC(CH3)3)，119.1(CH，C-3‘)，128.0(CH，C-2‘)，140.3(C四重峰，C-1‘)，144.1(C四重峰，C-4‘)，155.1(C四重峰，COC(CH3)3)，171.2(C四重峰，C-1)。
HR-TOF-MS(方法24)C17H27N2O4[M+H]+計(jì)算值322.1893，實(shí)測(cè)值322.1890. 實(shí)施例118A (3R)-N2-[(芐氧基)羰基]-N2-[(芐氧基)羰基氨基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-3-(4-二甲基氨基苯基)-D-丙氨酸酯混合以甲基(3R)-N2-[(芐氧基)羰基]-N2-[(芐氧基)羰基氨基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-3-(4-二甲基氨基苯基)-L-丙氨酸甲酯
在氬氣保護(hù)氣氛下，將在THF中的1M LHMDS溶液(21.3ml，21.29mmol，2.2當(dāng)量)加入70ml的無(wú)水THF中，并冷卻到-78℃。加入化合物117A(3.1g，9.68mmol)在THF(35ml)中的溶液，并將所述溶液升溫到-25℃，在所述溫度其接著再攪拌10分鐘。接著，再次將混合物冷卻到-78℃，立刻加入氮雜二羧酸二芐酯(3.2g，10.65mmol，1.1當(dāng)量)，并將所述混合物攪拌3小時(shí)。結(jié)束時(shí)，用乙酸(2.8ml，48.39mmol，5當(dāng)量)在-78℃終止反應(yīng)并在該溫度再攪拌15分鐘。在升溫到室溫后，加入濃碳酸氫鈉水溶液并用數(shù)份乙酸乙酯進(jìn)行提取。用飽和的氯化鈉水溶液洗滌合并的有機(jī)提取物，通過(guò)硫酸鈉干燥并濃縮。用二乙醚層覆蓋無(wú)定形橙棕色殘余物并靜置數(shù)小時(shí)。在該時(shí)間內(nèi)，分離部分晶體形式的實(shí)施例118A的產(chǎn)物?？梢詮臑V液中通過(guò)急驟色譜法(Biotage 40M硅膠，環(huán)已烷/乙酸乙酯3:1)分離剩余的實(shí)施例118A的產(chǎn)物并在存在二乙醚的情況下重新結(jié)晶，產(chǎn)物混合以實(shí)施例119A的非對(duì)映異構(gòu)體，所有的立體異構(gòu)體和混合物的總產(chǎn)率1.5g(2.48mmol，18％理論值)。
對(duì)于分析目的，通過(guò)制備HPLC(方法33)精制實(shí)施例118A的純的非對(duì)映異構(gòu)體的樣品。
HPLC(方法5)Rt＝4.52分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝2.87分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝621.5(50)[M+H]+. [α]20Na＝-22.8(c＝1.0，MeOH)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.30(s，9H，COC(CH3)3)，2.86(s，6H，N(CH3)2)，3.30(s，3H，OCH3)，4.74-5.11(m，6H)，6.62(d，J＝8.8Hz，2H)，7.15-7.51(m，12H，芳族.H)。
實(shí)施例119A (3R)-N2-[(芐氧基)羰基]-N2-[(芐氧基)羰基氨基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-3-(4-二甲基氨基苯基)-L-丙氨酸甲酯
將實(shí)施例118A的化合物(1.6g，1.90mmol)溶解于二氯甲烷(60ml)。在0℃，加入TMG(2.6ml，20.93mmol，11當(dāng)量)并將反應(yīng)物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。為了終止反應(yīng)，首先將混合物冷卻到0℃并接著加入乙酸(1.3ml，22.83mmol，12當(dāng)量)。將所述混合物用水稀釋并用3份二氯甲烷提取，濃縮合并的有機(jī)提取物。將所述殘余物用乙酸乙酯/二乙醚混合物研磨。結(jié)晶實(shí)施例119A的化合物，實(shí)施例118A的化合物主要?dú)堄嘣谏锨逡褐小⒑笳邼饪s并再次用2ml的TMG和二氯甲烷(40ml)異構(gòu)化。由此獲得第二份的實(shí)施例119A的標(biāo)題化合物。將結(jié)晶的上清液進(jìn)行色譜分離(方法33)和再異構(gòu)化，獲得第三份的實(shí)施例119A?？偖a(chǎn)率1.1g(1.72mmol，90％理論值)的實(shí)施例119A，其為晶體形式。
HPLC(方法5)Rt＝4.76分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝3.12分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝621.5(90)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝619.5(60)[M-H]-. [α]20Na＝-118°(c＝1.0，CHCl3)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.30(s，9H，COC(CH3)3)，2.86(s，6H，N(CH3)2)，3.30(s，3H，OCH3)，4.75-5.23(m，4H)，6.62(d，J＝8.8Hz，2H)，7.15-7.61(m，12H)，8.29(br.s，1H，N-H)，8.72(br.s，1H，N-H)。
13C-NMR(126MHz，)δ＝27.94和28.07(CH3，C(CH3)3)，51.31(CH3)，51.62(CH3)，51.98(CH，C-7)，61.81(CH，C-6)，66.18和66.32和66.50(CH2，OCH2Ph)，67.49和67.65(CH2，OCH2Ph)，78.68和78.90(C四重峰，C-11)，111.74(CH，C-3‘)，123.54(CH)，124.06(CH)，126.76(CH)，127.18(CH)，127.30(CH)，127.55(CH)，127.76(CH)，127.83(CH)，127.98(CH)，128.24(CH)，128.30(CH)，128.79(CH)，135.59(C四重峰)，135.77(C四重峰)，135.99(C四重峰)，136.11(C四重峰)，149.74(C四重峰)，154.21(C四重峰)，154.68(C四重峰)，154.92(C四重峰)，155.03(C四重峰)，155.14(C四重峰)，156.09(C四重峰)，156.24(C四重峰)，166.97(C四重峰，C＝O)。
HR-TOF-MS(方法24)C33H41N4O8[M+H]+計(jì)算值621.2919，實(shí)測(cè)值621.2922. 實(shí)施例120A (3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-4-(二甲基氨基苯基)-L-丙氨酸甲酯
將實(shí)施例119A的化合物(938mg，1.51mmol)溶解于二氯甲烷-甲醇1:1(30ml)。在氬氣保護(hù)氣氛下，加入阮內(nèi)鎳(約200mg)，在80巴下氫化所述混合物4天。當(dāng)原材料通過(guò)HPLC不再能檢測(cè)到時(shí)(方法5)，將所述催化劑通過(guò)過(guò)濾去除。濃縮所述濾液，獲得0.6g的粗制產(chǎn)物(純度約70％)，并在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下將其用在下一個(gè)步驟中。對(duì)于分析目的，將來(lái)自實(shí)施例120A的純的化合物的樣品通過(guò)制備HPLC(方法27)精制。
HPLC(方法5)Rt＝3.25分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.34分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝338.2(30)[M+H]+. [α]20Na＝-11.5°(c＝1.0，MeOH)。
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝1.37(s，9H，COC(CH3)3)，2.90(s，6H，N(CH3)2)，3.54(s，3H，OCH3)，4.24(d，J＝5.4Hz，1H，β-H)，4.96(dd，J＝8.4Hz，J＝8.0Hz，1H，α-H)，6.73(d，J2‘，3‘＝8.0Hz，2H，3‘-H)，7.13(d，J2‘，3‘＝8.0Hz，2H，2‘-H)，7.46(d，J＝9.6Hz，1H，NH)，8.470(br.s，2H，NH2)。
13C-NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝28.07(CH3，COC(CH3)3)，40.19(CH3，N(CH3)2)，52.68(CH3，OCH3)，54.11(CH，C-β)，56.79(CH，C-α)，78.87(C四重峰，COC(CH3)3)，112.53(CH，C-3‘)，127.65(CH，C-2‘)，149.87(C四重峰)，154.61(C四重峰，COC(CH3)3)，167.96(C四重峰，CO2CH3)。
HR-TOF-MS(方法24)C17H28N3O4[M+H]+計(jì)算值338.2075，實(shí)測(cè)值338.2064. 實(shí)施例121A (3R)-N2-(芐氧基)羰基)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-4-(二甲基氨基苯基)-L-丙氨酸甲酯
將550mg(1.14mmol，70％純度)的實(shí)施例120A的化合物溶解于二噁烷/水 8:2.8，加入碳酸氫鈉(479mg，5.71mmol，5當(dāng)量)和氯甲酸芐酯(212μl，1.48mmol，1.3當(dāng)量)，接著將所述混合物在室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。接著，用水和乙酸乙酯提取混合物，并將有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥并濃縮?？梢酝ㄟ^(guò)用二乙醚研磨從所述殘余物獲得實(shí)施例121A的標(biāo)題化合物，其為晶體。產(chǎn)率490mg(1.04mmol，91％理論值)。
HPLC(方法5)Rt＝4.14分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝2.52分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝472.3(100)[M+H]+. [α]20Na＝-13.4°(c＝1.0，MeOH)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.36(s，9H，COC(CH3)3)，2.86(s，6H，N(CH3)2)，3.30(s，3H，OCH3)，4.45(dd，Jα，ββ＝4.2Hz，J＝9.3Hz，1H，β-H)，4.94(d，Jgem＝12.5Hz，1H，OCH2Ph)，4.99(d，Jgem＝12.5Hz，1H，OCH2Ph)，5.15(dd，Jα，ββ＝4.2Hz，J＝10.3Hz，1H，α-H)，6.65(d，J2‘，3‘＝8.8Hz，2H，3‘-H)，7.10(d，J2‘，3‘＝8.8Hz，2H，2‘-H)，7.23-7.37(m，5H)，7.54(d，J＝9.3Hz，1H，NH)。
13C-NMR-(126MHz，d6-DMSO)δ＝28.0(CH3，COC(CH3)3)，41.1(CH3，N(CH3)2)，52.0(CH3，OCH3)，53.8(CH，C-β)，59.0(CH，C-α)，65.4(CH2，OCH2Ph)，78.3(C四重峰，COC(CH3)3)，113.7(CH)，126.9(C四重峰)，127.3(CH)，127.5(CH)，127.8(CH)，128.2(C四重峰)，128.3(CH)，136.6(C四重峰)，154.6(C四重峰，NCO2)，156.0(NCO2)，170.7(CO2CH3)。
HR-TOF-MSC25H34N3O6[M+H]+計(jì)算值472.2443，實(shí)測(cè)值472.2460. 實(shí)施例122A (3R)-N2-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-4-(二甲基氨基苯基)-L-丙氨酸
將化合物121A(444mg，0.94mmol)溶解于5ml的THF和830μl的水。在0℃，加入99mg(2.35mmol，2.5當(dāng)量)的一水合氫氧化鋰。在0℃進(jìn)行反應(yīng)約2小時(shí)直到不再能檢測(cè)到原材料121A(HPLC，方法5)。接著，用乙酸(620μl，2.83mmol，3當(dāng)量)終止反應(yīng)。將混合物用水稀釋并用乙酸乙酯提取。將有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥并將所述溶劑蒸餾除去。產(chǎn)率430mg(定量)。
HPLC(方法5)Rt＝3.80分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝2.21分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝458.2(100)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝456.3(100)[M-H]-. [α]20Na＝-16.5(c＝1.0，MeOH)。
1H NMR(500MHz，d6-DMSO)δ＝4.39(dd，Jα，β＝3.5Hz，J＝9.6Hz，1H，β-H)，4.92(d，Jgem＝12.8Hz，1H，OCH2Ph)，4.97(d，Jgem＝12.8Hz，1H，OCH2Ph)，5.19(dd，Jα，β＝3.5Hz，J＝10.0Hz，1H，α-H)，6.86(br.s，2H)，7.17(d，J＝8.1Hz，2H)，7.24(d，J＝7.0Hz，2H)，7.23-7.29(m，2H)，7.41(d，J＝10.1Hz，1H，NH)，7.48(d，J＝1Hz，1H，NH)，13.0(br.s，1H，COOH)。
13C-NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝28.0(CH3，COC(CH3)3)，41.2(CH3，N(CH3)2)，53.9(CH，C-β)，58.8(CH，C-α)，65.3(CH2，OCH2Ph)，78.1(C四重峰，COC(CH3)3)，113.7(CH)，126.7(C四重峰)，127.1(CH)，127.3(CH)，127.6(CH)，128.1(C四重峰)，128.2(CH)，136.9(C四重峰)，154.7(C四重峰，NCO2)，156.1(NCO2)，171.4(CO2H)。
HR-TOF-MS(方法24)C24H32N3O6[M+H]+計(jì)算值458.2286，實(shí)測(cè)值458.2277. 實(shí)施例123A (3R)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-4-(二甲基氨基苯基)-L-丙氨酸五氟苯基酯
在0℃，在氬氣保護(hù)氣氛下，將化合物122A(408mg，0.89mmol)溶解于無(wú)水THF(11ml)。加入二苯基亞膦酸五氟苯酯(514mg，1.34mmol，1.5當(dāng)量)和NMM(360mg，3.57mmol，4當(dāng)量)，并將所述反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)。接著，去除所述溶劑并將所述殘余物通過(guò)色譜法純化(方法33改變的梯度0-10分鐘10％B，斜度，30分鐘65％B，36-38分鐘10％B)。除了123A(250mg，0.40mmol，45％理論值)之外，分離未反應(yīng)的原材料(實(shí)施例122A，41mg，9μmol，10％理論值)。
HPLC(方法5)Rt＝3.66分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝3.23分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝624.4(100)[M+H]+. [α]20Na＝-19.8°(c＝0.5，CH2Cl2)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.36(s，9H，COC(CH3)3，2.90(s，6H，N(CH3)2)，4.96-5.04(m，3H，β-H和OCH2Ph)，5.39(dd，Jα，β＝4.4Hz，J＝10.2Hz，1H，α-H)，6.75(br.s，2H)，7.21-7.33(m，7H)，7.57(d，J＝10.3Hz，1H，NH)，7.89(d，J＝9.3Hz，1H，NH)。
13C-NMR(126MHz，d6-DMSO)δ＝28.2(CH3，COC(CH3)3)，43.8.(CH3，N(CH3)2)，55.6(CH，C-β)，59.1(CH，C-α)，67.5(CH2，OCH2Ph)，80.9(C四重峰，COC(CH3)3)，117.8(CH)，124.4(C四重峰，m)，128.1(CH)，128.4(CH)，128.6(CH)，128.7(CH)，132.9(C四重峰，m)，136.8(C四重峰，m)，138.9(C四重峰，m)，139.9(C四重峰，m)，141.9(C四重峰，m)，155.7(C四重峰，NCO2)，156.2(NCO2)，166.2(CO2H)。
實(shí)施例124A {(3R)-N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-4-(二甲基氨基苯基)-L-丙氨酰}-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
將化合物123A(237mg，0.38mmol)和化合物Edman3.0(示例性化合物3，465mg，0.46mmol，1.2當(dāng)量)在0℃溶解于DMF(40ml)并加入DIEA(0.40ml，2.28mmol，6當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物進(jìn)一步攪拌過(guò)夜，在其中將其緩慢升溫到室溫。接著，將DMF在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上去除，并將所述殘余物通過(guò)色譜法純化(方法44)。產(chǎn)率550mg(92％理論值)。
HPLC(方法5)Rt＝3.62分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝2.01分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝673.3(100)[M+2H]2+，MS(ESIneg)m/z(％)＝1343[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C61H98N15O19[M+H]+計(jì)算值1344.7158，實(shí)測(cè)值1344.7155. 實(shí)施例125A {(3R)-3-氨基-N-[(芐氧基)羰基]-4-(二甲基氨基苯基)-L-丙氨酰}-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽三(三氟乙酸鹽)
將550mg(0.35mmol)的實(shí)施例124A的化合物溶解于二氯甲烷(2ml)并接著加入14ml的30％在二氯甲烷中的TFA。將所述混合物在室溫?cái)嚢?5分鐘，接著濃縮并在油泵真空下干燥。將粗制產(chǎn)物(644mg，約70％純度，0.28mmol，80％理論值)進(jìn)行反應(yīng)，而不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的純化。
HPLC(方法7)Rt＝3.46分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.56分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝622.9(100)，[M+2H]2+，MS(ESIneg.)m/z(％)＝1242.6[M-H]-. 實(shí)施例126A N2.1-(芐氧基羰基)-[(3R)-3-氨基-4-(二甲基氨基)-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-氫-xy-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
將來(lái)自實(shí)施例125A的粗制產(chǎn)物(644mg，0.28mmol)溶解于DMF(30ml)并冷卻到0℃。加入HATU(349mg，0.92mmol，3當(dāng)量)，隨后加入NMM(200μl，1.84mmol，6當(dāng)量)。5分鐘后，移去冰浴并將所述混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。通過(guò)加入甲醇終止反應(yīng)并將所述混合物開(kāi)始通過(guò)凝膠色譜法(方法45，洗脫劑甲醇)進(jìn)行預(yù)先純化。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并通過(guò)制備HPLC(方法33)進(jìn)行精制。產(chǎn)率211mg(52％理論值)。
HPLC(方法5)Rt＝3.64分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.70分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝614(100)[M+2H]2+，1226.8(20)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1224.9(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C56H88N15O16[M+H]+計(jì)算值1226.6528，實(shí)測(cè)值1226.6534. 實(shí)施例127A [(3R)-3-氨基-4-(二甲基氨基苯基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺三鹽酸鹽
將實(shí)施例126A的化合物(209mg，0.14mmol)溶解于甲醇(50ml)，并加入1M鹽酸水溶液(860μl，6當(dāng)量)以及10％披鈀碳。在環(huán)境壓力下和在室溫進(jìn)行氫化90分鐘。接著，過(guò)濾混合物以去除催化劑并濃縮。將所述殘余物置入水中并冷凍干燥。獲得170mg(98％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法7)Rt＝3.19分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.26分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝547.1(100)[M+2H]2+，1092.8(5)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C48H82N15O14[M+H]+計(jì)算值1092.6161，實(shí)測(cè)值1092.6133. 實(shí)施例128A N2.1-(叔丁氧羰基)-[3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-4-(二甲基氨基苯基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙鹽酸鹽
將實(shí)施例127A的化合物(85mg，71μmol)和二肽(實(shí)施例9A，40mg，106μmol，1.5當(dāng)量)溶解于DMF(4ml)并冷卻到0℃。接著加入NMM(31μl，281μmol，4當(dāng)量)和HATU(43mg，113μmol，1.6當(dāng)量)，并接著去除冰浴。將所述混合物緩慢升溫到環(huán)境溫度。1小時(shí)后，通過(guò)加入甲醇終止反應(yīng)并使用甲醇作為流動(dòng)相進(jìn)行色譜分離(方法45)。通過(guò)HPLC(方法7)檢查洗脫物，合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并濃縮。獲得約66％純的(65％理論值)的105mg的標(biāo)題化合物。在下一階段中使用該物質(zhì)，而不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化。
HPLC(方法7)Rt＝4.47分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝2.24分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝724.3(100)[M+2H]2+，1448.3(5)[M+H]+. 實(shí)施例129A (2S)-N-(叔丁氧羰基)-3-(三甲基甲硅烷基)丙氨酸 和 實(shí)施例130A (2R)-N-(叔丁氧羰基)-3-(三甲基甲硅烷基)丙氨酸 根據(jù)M.Merget，K.Günther，M.Bernd，E.Günther，R.Tacke，J.Organomet.Chem.2001 628，183-194制備目標(biāo)化合物。通過(guò)在手性相上的制備HPLC(方法41)實(shí)現(xiàn)對(duì)映異構(gòu)體的分離并通過(guò)與N-(叔丁氧羰基)-L-3-三甲基甲硅烷基丙氨酸(2R異構(gòu)體，Mercachem AMR 39.260)真實(shí)樣品的HPLC比較指定異構(gòu)體。
實(shí)施例129A N-(叔丁氧羰基)-3-(三甲基甲硅烷基)-D-丙氨酸
手性HPLC(方法41)Rt＝4.16分鐘，e.e.>99％. [α]D20＝+1.1(c＝0.83，甲醇) 實(shí)施例130A N-(叔丁氧羰基)-3-(三甲基甲硅烷基)-L-丙氨酸
手性HPLC(方法41)Rt＝9.27分鐘，e.e.>99％ [α]D20＝-1.6(c＝0.66，甲醇) 實(shí)施例131A [N2-(叔丁氧羰基)-3-(三甲基甲硅烷基)-D-丙氨酰]-2-叔丁基-L-丙氨酸甲酯
在0℃，將2-叔丁基-L-丙氨酸甲酯三氟乙酸鹽(215mg，0.82mmol)[S.D.Bull，S.G.Davies，A.C.Garner，M.D.O‘Shea，J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，2001，3281-3287]和實(shí)施例129A(225mg，0.82mmol，1當(dāng)量)溶解于DMF(5ml)。接著加入NMM(360μl，3.29mmol，4當(dāng)量)和HATU(470mg，1.24mmol，1.5當(dāng)量)并將所述混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。用MTBE和飽和的碳酸氫鈉水溶液進(jìn)行提取，并用1M檸檬酸洗滌合并的有機(jī)相，再次用飽和的碳酸氫鈉水溶液洗滌，通過(guò)硫酸鈉干燥并濃縮。在通過(guò)色譜法純化后(方法33)，獲得290mg(0.72mmol，88％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法7)Rt＝5.37分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝3.02分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝403.5(100)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝0.01(s，9H，Si(CH3)3)，0.89(m，11H)，1.37(s，9H，COC(CH3)3)，1.55(dd，J＝8.8Hz，14.2Hz，1H)，1.63(dd，J＝3.4Hz，14.2Hz，1H)，3.62(s，3H，OCH3)，4.04(m，1H)，4.27(m，1H)，6.70(d，J＝9.0Hz，1H，NH)，7.96(d，J＝8.1Hz，1H，NH)。
實(shí)施例132A [N2-(叔丁氧羰基)-3-(三甲基甲硅烷基)-D-丙氨酰]-2-叔丁基-L-丙氨酸
將實(shí)施例131A(274mg，0.68mmol)置入THF/水(3:1，21ml)中并冷卻到0℃。加入一水合氫氧化鋰(57mg，1.36mmol，2當(dāng)量)并將所述混合物0℃攪拌1小時(shí)。在真空中去除大部分的THF，通過(guò)加入1M檸檬酸將pH調(diào)節(jié)到4，并將所述混合物用乙酸乙酯提取2次。將合并的有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥并濃縮。在通過(guò)色譜法純化后(方法33，具有改變的梯度0-2分鐘30％ B，斜度，30-35分鐘-90％ B)，獲得237mg(0.61mmol，90％理論值)的標(biāo)題化合物，其為無(wú)色的固體。
HPLC(方法7)Rt＝4.93分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.76分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝389.4(100)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝0.00(s，9H，Si(CH3)3)，0.88(m，11H)，1.36(s，9H，COC(CH3)3)，1.51(dd，J＝9.3Hz，14.2Hz，1H)，1.64(dd，J＝3.0Hz，14.2Hz，1H)，4.02(m，1H)，4.20(m，1H)，6.71(d，J＝9.3Hz，1H，NH)，7.80(d，J＝8.1，1H，NH)，12.49(br s，1H，COOH)。
實(shí)施例133A N2.1-(叔丁氧羰基)-[3-三甲基甲硅烷基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-4-(二甲基氨基苯基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙鹽酸鹽
將實(shí)施例127A的化合物(102mg，85μmol)和二肽(實(shí)施例132A，50mg，127μmol，1.5當(dāng)量)溶解于DMF(4ml)并冷卻到0℃。接著加入NMM(37μl，340μmol，4當(dāng)量)和HATU(65mg，170μmol，2.0當(dāng)量)并接著去除冰浴。將所述混合物緩慢升溫到環(huán)境溫度。1小時(shí)后，通過(guò)加入甲醇終止反應(yīng)，并在Sephadex LH20上，使用甲醇作為流動(dòng)相進(jìn)行色譜分離(方法45)。通過(guò)HPLC(方法7)檢查洗脫物，合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并濃縮。獲得126mg(82μmol，96％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法7)Rt＝4.55分鐘。
實(shí)施例134A N2-(叔丁氧羰基)-D-苯基丙氨酰-L-苯丙氨酸芐酯
在-10℃，將HOBt(2.0g，15.08mmol，4當(dāng)量)，NMM(1.2ml，1.1g，11.31mmol，3當(dāng)量)，N-(叔丁氧羰基)-D-苯丙氨酸(1.0g，3.77mmol，1當(dāng)量)[Anderson，McGregor；J.Am.Chem.Soc.；79；1957；6180，6181]，EDC(1.4g，7.54mmol，2當(dāng)量)和另外的NMM(0.8ml，0.8g，7.54mmol，2當(dāng)量)連續(xù)加入L-苯丙氨酸芐酯鹽酸鹽(1.1g，4.15mmol，1.1當(dāng)量)在二氯甲烷p.a.(365ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物緩慢升溫到室溫并在該溫度攪拌過(guò)夜。將所述溶劑徹底去除，并將所述殘余物與乙酸乙酯混合并隨后用飽和的碳酸氫鈉水溶液，5％檸檬酸水溶液，飽和的碳酸氫鈉水溶液(500ml)和飽和的氯化鈉水溶液洗滌混合物。將所述混合物通過(guò)硫酸鈉干燥并過(guò)濾。將所述混合物在真空中蒸發(fā)到干燥，并接著在高真空下干燥。獲得1.8g(96％理論值)的標(biāo)題化合物，并在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下反應(yīng)。
HPLC(方法12)Rt＝9.16分鐘。
HPLC(方法4)Rt＝5.16分鐘。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.18/1.27(2s，9H，OtBu)，2.47-2.57(m在H-DMSO-信號(hào)下，1H，β-H)，2.66(dd，J＝13.8，3.7Hz，1H，β-CH)，2.91(dd，J＝13.8，9.4Hz，1H，β-CH)，3.09(dd，J＝13.8，3.1Hz，1H，β-CH)，4.19(td，J＝9.3，4.2Hz，1H，α-CH)，4.57(td，J＝8.8，5.9Hz，1H，α-CH)，5.12(s，2H，OCH2Ph)，6.76(d，J＝9.2Hz，1H，NH)，7.08-7.43(m，15H，Aryl-H)，8.48(d，J＝8.1Hz，1H，NH)。
HR-TOF-MS(方法24)C30H36N2O5[M+H]+實(shí)測(cè)值503.2566，計(jì)算值503.2546. 實(shí)施例135A N2-(叔丁氧羰基)-D-苯基丙氨酰-L-苯丙氨酸
根據(jù)操作方法5，標(biāo)題化合物制備自實(shí)施例134A的化合物(563.0mg，1.12mmol)。在大氣壓下，在氫氣氛下和在室溫下攪拌3小時(shí)后，根據(jù)反應(yīng)監(jiān)測(cè)(方法12)獲得完全的轉(zhuǎn)化。獲得452.2mg(97.9％理論值)的產(chǎn)物。
[α]20Na＝+33.2°(c＝0.57，在CH2Cl2中)。
HPLC(方法12)Rt＝7.64分鐘。
HPLC(方法4)Rt＝4.45分鐘。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ＝1.19/1.26(2s，9H，OtBu)，2.44-2.56(m在H-DMSO-信號(hào)下，1H，β-H)，2.69(dd，J＝14.0，3.8Hz，1H，β-CH)，2.86(dd，J＝14.0，9.5Hz，1H，β-CH)，3.08(dd，J＝14.0，4.6Hz，1H，β-CH)，4.18(td，J＝9.7，3.57Hz，1H，α-CH)，4.48(td，J＝9.3，4.5Hz，1H，α-CH)，6.71(d，J＝8.7Hz，1H，NH)，7.08-7.32(m，10H，Aryl-H)，8.27(d，J＝8.0Hz，1H，NH)，12.77(s br.，1H，COOH)。
HR-TOF-MS(方法24)C23H30N2O5[M+H]+實(shí)測(cè)值413.2082，計(jì)算值413.2076. 實(shí)施例136A 2-(三甲基甲硅烷基)乙基N2-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-L-丙氨酸酯
將N-[(芐氧基)羰基]-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-L-丙氨酸(1000.0mg，2.96mmol)[Rane，F(xiàn).Dinanath等；Tetrahedron Lett.(四面體通訊)；EN；34；20；1993；3201-3204]溶解于二氯甲烷(20ml)，并在-20℃將三甲基甲硅烷基-乙醇(4.2ml，3.5g，29.55mmol，10當(dāng)量)，DCC(1.22g，5.91mmol，2當(dāng)量)和DMAP(361.1mg，2.96mmol，1當(dāng)量)連續(xù)加入所述溶液。將所述反應(yīng)物升溫到室溫，在該溫度攪拌過(guò)夜并得到完全的轉(zhuǎn)化。對(duì)于后處理，濃縮混合物并將所述殘余物置入二乙醚中，隨后用水提取兩次，用飽和的氯化鈉水溶液提取一次。將醚相通過(guò)硫酸鈉干燥，通過(guò)硅膠過(guò)濾去除干燥劑并在旋轉(zhuǎn)式蒸發(fā)儀上從濾液中去除大部分的所述溶劑。如果沉淀物在濃縮過(guò)程中分離出來(lái)，如果合適，其可以通過(guò)硅膠再次去除。接著，通過(guò)色譜法(方法31)將獲得的殘余物精制(方法31)并獲得1.1g(86.4％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法12)Rt＝9.31分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.97分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝439(100)[M+H]+. 實(shí)施例137A 2-(三甲基甲硅烷基)乙基3-氨基-N2-(芐氧基羰基)-L-丙氨酸酯三氟乙酸鹽
如在操作方法1中所述，標(biāo)題化合物制備自實(shí)施例136A的化合物(100.0mg，0.23mmol)。在精制(方法35)后將41mg(39.7％理論值)的產(chǎn)物分離自粗制產(chǎn)物。
HPLC(方法12)Rt＝6.33分鐘。
LC-MS(方法23)Rt＝4.83分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝339(15)[M+H]+，311(100)。
實(shí)施例138A N2-(芐氧基羰基)-N3-{N2.1-叔丁氧羰基[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3R)-3-氨基-L-丙氨酸2-(三甲基甲硅烷基)乙基酯三氟乙酸鹽
在氬氣保護(hù)氣氛下，在0℃將八肽(實(shí)施例100A，9.0mg，8.04μmol)和示例性化合物137A(17.0mg，39.95μmol，5當(dāng)量)提供在DMF(900μl)中。隨后，將來(lái)自NMM存貯溶液(0.91mmol/ml，在DMF中)的堿(9μl，0.8mg，8.04μmol，1當(dāng)量)，HATU(6.1mg，16.08μmol，2當(dāng)量)和另外的NMM-溶液(9μl，0.8mg，8.04μmol，1當(dāng)量)連續(xù)加入混合物中。在攪拌15分鐘后，最終加入NMM存貯溶液(22μl，2mg，20.10μmol，2.5當(dāng)量)，將所述混合物緩慢升溫到室溫并在該溫度攪拌過(guò)夜。將所述溶液通過(guò)制備HPLC預(yù)純化(方法36)并通過(guò)凝膠色譜法(方法45，洗脫劑甲醇以及0.25％冰醋酸)精制。獲得8.0mg(69.1％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法12)Rt＝7.21分鐘。
LC-MS(方法23)Rt＝5.30分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝1325(75)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1323(100)[M-H]-. 實(shí)施例139A N2-(芐氧基羰基)-N3-{N2.1-叔丁氧羰基[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3R)-3-氨基-L-丙氨酸三氟乙酸鹽
在900μl的THF中提供實(shí)施例138A的化合物(7.5mg，5.21μmol)并加入4份在THF中的1M TBAF溶液(26μl，6.8mg，26.05μmol，5當(dāng)量)，在加入15當(dāng)量的堿以后，還加入分子篩(

)。將所述反應(yīng)物在室溫?cái)嚢?小時(shí)，并通過(guò)HPLC監(jiān)測(cè)(方法12)確定完全的轉(zhuǎn)化。對(duì)于后處理，將所述混合物用冰醋酸中和，隨后在真空中濃縮并通過(guò)制備HPLC(方法29)進(jìn)行色譜法。獲得6.2mg(88.9％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法12)Rt＝6.24分鐘。
LC-MS(方法23)Rt＝4.88分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝1224(80)[M+H]+，242(100)；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1223(100)[M-H]-. 實(shí)施例140A N2-(芐氧基羰基)-N3-{N2.1-叔丁氧羰基[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3R)-3-氨基-L-丙氨酸五氟苯基酯三氟乙酸鹽
在氬氣保護(hù)氣氛下，將實(shí)施例139A的化合物(3.1mg，2.31μmol)提供在二氯甲烷(1ml)中，并加入五氟苯酚(4.3mg，23.14μmol，10當(dāng)量)。將所述反應(yīng)物冷卻到-20℃并最終加入EDC(1.0mg，5.32μmol，2.3當(dāng)量)，將所述混合物升溫到室溫并在該溫度攪拌過(guò)夜。對(duì)于后處理，將所述溶劑完全去除并將所述殘余物冷凍干燥。將所述標(biāo)題化合物進(jìn)一步作為粗制產(chǎn)物反應(yīng)，并假定定量產(chǎn)率。
HPLC(方法12)Rt＝7.18分鐘。
LC-MS(方法23)Rt＝5.56分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝1392(80)[M+H]+. 實(shí)施例141A N2-(芐氧基羰基)-N3-{[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酰}-(3R)-3-氨基-L-丙氨酸五氟苯基酯雙鹽酸鹽
根據(jù)操作方法3，標(biāo)題化合物制備自實(shí)施例140A(3.0mg，1.99μmol)的化合物。在0℃，加入鹽酸后，在30分鐘后通過(guò)HPLC監(jiān)測(cè)(方法12)確定完全的轉(zhuǎn)化。獲得標(biāo)題化合物，其為粗制產(chǎn)物，假定其定量產(chǎn)率。
LC-MS(方法23)Rt＝4.47分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝1292(3)[M+H]+，646(100)[M+2H]2+，MS(ESIneg.)m/z(％)＝1290(40)[M-H]-，1106(100)。
實(shí)施例142A N2.1-(芐氧基羰基)-[(3R)-3-氨基-L-丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺鹽酸鹽
在氬氣保護(hù)氣氛下，將實(shí)施例141A的化合物(3.0mg，2.20μmol)提供在氯仿(20ml)中。將三乙胺(22μl，15.8mg，131.94μmol)溶解于氯仿(25ml)并在1小時(shí)過(guò)程中逐滴加入溶液。在添加結(jié)束后，將所述反應(yīng)物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。對(duì)于后處理，將所述混合物用TFA中和，隨后在真空中濃縮并通過(guò)凝膠色譜法(方法45，洗脫劑甲醇以及0.25％冰醋酸)進(jìn)行預(yù)先純化。在通過(guò)制備HPLC精制后(分離相Xterra 10mm，洗脫劑0.1％TFA，乙腈-水梯度)分離0.4mg(15.9％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法12)Rt＝5.96分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.72分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝1108(48)[M+H]+，132(100)；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1106(100)[M-H]-. 實(shí)施例143A [(3R)-3-氨基-L-丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺雙鹽酸鹽
如在操作方法4中所述，標(biāo)題化合物(0.4mg，0.35μmol)制備自實(shí)施例142A的化合物。在大氣壓和在室溫進(jìn)行氫化6小時(shí)后，獲得完全的轉(zhuǎn)化。獲得0.3mg(81.9％理論值)的標(biāo)題化合物，其為粗制產(chǎn)物，將其進(jìn)一步反應(yīng)。
實(shí)施例144A N2.1-(叔丁氧羰基)-[D-苯基丙氨酰]-[L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-丙氨酰)]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
在氬氣保護(hù)氣氛下，將去保護(hù)的胺(實(shí)施例143A，0.3mg，0.29μmol)和二肽(1.2mg，2.86μmol，10當(dāng)量)在DMF(100μl)中提供，并將所述溶液冷卻到0℃。加入來(lái)自NMM貯存溶液(90.9μmol/ml，在DMF中)的堿(16μl，147μg，1.43μmol，5當(dāng)量)，HATU(1.1mg，2.95μmol，10.3當(dāng)量)和另外的NMM存貯溶液(16μl，147μg，1.43μmol，5當(dāng)量)，并將所述反應(yīng)物攪拌15分鐘。最終，再次將堿(40μl，367μg，3.62μmol，12.5當(dāng)量)加入到混合物中，將其置于室溫并同時(shí)攪拌。在該溫度持續(xù)攪拌過(guò)夜。對(duì)于后處理，將所述混合物在真空中濃縮并通過(guò)凝膠色譜法(方法45，洗脫劑甲醇)進(jìn)行精制。獲得0.3mg(70.6％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法12)Rt＝7.80分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝2.17分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1368(5)[M+H]+，634(100)；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1367(30)[M-H]-，683(100)[M-2H]2-. 實(shí)施例145A 聚合物結(jié)合的[N2-芴基甲氧基羰基-L-異亮氨酰]-O3-(叔丁基)-L-絲氨酸
如操作方法7中所述將Fmoc保護(hù)基從聚合物(實(shí)施例41A，500mg，0.75mmol)中去除。將結(jié)合于樹(shù)脂的去保護(hù)的氨基酸隨后與N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-異亮氨酸(1.05g，2.98mmol，4當(dāng)量)，DIEA(0.78ml，577mg，4.47mmol，6當(dāng)量)和TBTU(957mg，2.98mmol，4當(dāng)量)反應(yīng)過(guò)夜以得到Fmoc-保護(hù)的二肽。聚合物的后處理以類似于操作方法7的方式進(jìn)行。在樣品去除后證實(shí)相應(yīng)的側(cè)鏈-保護(hù)的二肽。
LC-MS(方法21)Rt＝2.68分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝497.5(60)[M+H]+，441.4(100)；MS(ESIneg)m/z(％)＝495.5(5)[M-H]-，273.4(100)。
實(shí)施例146A 聚合物結(jié)合的[(N2-(9H-芴-9-基甲氧基)羰基)-N5-(亞氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基-3，4-二氫-2H-色烯-6-基)磺酰基]氨基}甲基)-D-鳥(niǎo)氨酰]-L-異亮氨酰-O3-(叔丁基)-L-絲氨酸
如操作方法7中所述，將Fmoc保護(hù)基從聚合物(實(shí)施例145A，500mg，0.75mmol)中去除。將結(jié)合于樹(shù)脂的去保護(hù)的氨基酸隨后與(N2-(9H-芴-9-基甲氧基)羰基)-N5-(亞氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基-3，4-二氫-2H-色烯-6-基)磺?；鵠氨基}甲基)-D-鳥(niǎo)氨酸(740mg，1.12mmol，1.5當(dāng)量)，DIEA(0.39ml，289mg，2.24mmol，3當(dāng)量)和TBTU(318mg，0.99mmol，2當(dāng)量)反應(yīng)過(guò)夜以得到Fmoc-保護(hù)的三肽。聚合物的后處理以類似于操作方法7的方式進(jìn)行。在樣品去除后，證實(shí)相應(yīng)的側(cè)鏈-保護(hù)的二肽。
LC-MS(方法21)Rt＝2.89分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝919.5(100)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝917.7(100)[M-H]-. 實(shí)施例147A 聚合物結(jié)合的[(N2-(9H-芴-9-基甲氧基)羰基)-L-亮氨酰]-[N5-(亞氨基-{[(2，2，5，7，8-五甲基-3，4-二氫-2H-色烯-6-基)磺?；鵠氨基}甲基)-D-鳥(niǎo)氨酰]-L-異亮氨酰-O3-(叔丁基)-L-絲氨酸
如操作方法7中所述，將Fmoc保護(hù)基從聚合物中去除(實(shí)施例146A，500mg，0.75mmol)。將結(jié)合于樹(shù)脂的去保護(hù)的氨基酸隨后與N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-亮氨酸(1.05g，2.98mmol，4當(dāng)量)，DIEA(0.78ml，577mg，4.47mmol，6當(dāng)量)和TBTU(956mg，2.98mmol，4當(dāng)量)反應(yīng)過(guò)夜以得到Fmoc-保護(hù)的四肽。聚合物的后處理以類似于操作方法7的方式進(jìn)行。在樣品去除后證實(shí)相應(yīng)的側(cè)鏈-保護(hù)的二肽。
LC-MS(方法21)Rt＝3.27分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1033.3(100)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝1032.2(100)[M-H]-. 實(shí)施例148A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-[N5-(亞氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基-3，4-二氫-2H-色烯-6-基)磺?；鵠氨基}甲基)-D-鳥(niǎo)氨酰]}-L-異亮氨酰-O3-(叔丁基)-L-絲氨酸
如在操作方法7中所述，將Fmoc保護(hù)基從聚合物(實(shí)施例147A，500mg，0.75mmol)中去除。將結(jié)合于樹(shù)脂的去保護(hù)的氨基酸隨后與(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酸(276mg，1.12mmol，1.5當(dāng)量)，DIEA(0.26ml，193mg，1.49mmol，2當(dāng)量)和TBTU(359mg，1.12mmol，1.5當(dāng)量)反應(yīng)過(guò)夜以得到Boc-保護(hù)的五肽。接著，將其用DMF，THF并最終用二氯甲烷洗滌，并用冰醋酸，三氟乙醇和二氯甲烷(1+1+3)的混合物從樹(shù)脂中去除。通過(guò)色譜法純化粗制反應(yīng)產(chǎn)物。以145mg(19％理論值)的產(chǎn)率分離標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法21)Rt＝3.17分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1040.0(100)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝1038.0(100)[M-H]-. 實(shí)施例149A L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法2，將500mg(1.69mmol)的N-叔丁氧羰基-L-絲氨酸芐酯在5.50ml的試劑溶液中反應(yīng)。將所述產(chǎn)物進(jìn)一步反應(yīng)，不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化。產(chǎn)率505mg(1.63mmol，96％理論值)。
HPLC(方法3)Rt＝3.10分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝1.94分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝196.0(100)[M+H]+. 實(shí)施例150A [N2-(叔丁氧羰基)-L-絲氨酰]-L-絲氨酸芐酯
將實(shí)施例149A的化合物(500mg，1.62mmol)和N-叔丁氧羰基-L-絲氨酸(332mg，1.62mmol，1當(dāng)量)溶解于二氯甲烷(8.2ml)并冷卻到0℃。加入HATU(922mg，2.43mmol，1.5當(dāng)量)并接著在15分鐘的過(guò)程中，逐滴加入N，N-二異丙基乙基胺(1.41ml，8.08mmol，5當(dāng)量)在二氯甲烷(5ml)中的溶液。接著，將所述混合物在室溫?cái)嚢?2小時(shí)，隨后用碳酸氫鈉洗滌。將有機(jī)相干燥并濃縮。將所述粗制產(chǎn)物通過(guò)色譜法純化(方法34)。獲得包含產(chǎn)物的級(jí)分并進(jìn)行冷凍干燥。產(chǎn)率308mg(0.81mmol，50％理論值)，其為無(wú)色的固體。
HPLC(方法4)Rt＝3.81分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.98分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝283.5(100)[M-Boc+H]+；383.6(30)[M+H]+. 實(shí)施例151A [N2-(叔丁氧羰基)-3-(3-吡啶基)-L-丙氨酰]-L-絲氨酸芐酯
根據(jù)實(shí)施例150A的化合物的制備方法，從實(shí)施例149A的化合物(780mg，2.52mmol)和N2-叔丁氧羰基-3-(3-吡啶基)-L-丙氨酸(707mg，2.52mmol)，獲得780mg(69％理論值)產(chǎn)率的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.61分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.82分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝444.2(100)，[M+H]+. 實(shí)施例152A [N2-(叔丁氧羰基)-L-苯基丙氨酰]-L-絲氨酸芐酯
根據(jù)實(shí)施例150A的化合物的制備方法，從實(shí)施例149A的化合物(350mg，1.13mmol)和N2-叔丁氧羰基-L-苯丙氨酸(300mg，1.13mmol)獲得275mg(55％理論值)產(chǎn)率的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝4.50分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝2.23分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝443.2(100)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝441(50)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C24H31N2O6計(jì)算值443.2177，實(shí)測(cè)值443.2180[M+H]+. 實(shí)施例153A [N2-(叔丁氧羰基)-L-蘇氨酰]-O3-叔丁基-L-絲氨酸芐酯
根據(jù)實(shí)施例150A的化合物的制備方法，從O3-(叔丁基)-L-絲氨酸芐酯(320mg，0.88mmol)和N2-叔丁氧羰基蘇氨酸(192mg，0.88mmol)獲得196mg(49％理論值)的產(chǎn)率的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝4.73分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝2.56分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝453.0(100)[M+H]+. 實(shí)施例154A [N2-(叔丁氧羰基)-L-別蘇氨酰]-L-絲氨酸芐酯
在0℃，將L-絲氨酸芐酯(314mg，1.02mmol)和NMM(335μl，3.05mmol，3當(dāng)量)提供在DNF中。接著，加入(N2-叔丁氧羰基)別蘇氨酸(223mg，1.02mmol，1當(dāng)量)，隨后加入TCTU(506mg，1.42mmol，1.4當(dāng)量)。將所述混合物攪拌過(guò)夜，并接著通過(guò)色譜法根據(jù)方法45進(jìn)行后處理。獲得298mg(73％理論值)的產(chǎn)率的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.89分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.91分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝397.0(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C19H29N2O7計(jì)算值397.1970，實(shí)測(cè)值397.1971[M+H]+. 實(shí)施例155A [N2-(叔丁氧羰基)-L-丙氨酰]-L-絲氨酸芐酯
根據(jù)實(shí)施例150A的化合物的制備方法，從L-絲氨酸芐酯(300mg，0.97mmol)和N2-叔丁氧羰基丙氨酸(220mg，1.16mmol)獲得277mg(78％理論值)的產(chǎn)率的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝4.05分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.81分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝367.2(50)[M+H]+. 實(shí)施例156A [N2-(叔丁氧羰基)-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸芐酯
根據(jù)實(shí)施例150A的化合物的制備方法，從L-絲氨酸芐酯(610mg，1.97mmol)和N2-叔丁氧羰基天冬酰胺(458mg，1.97mmol，1當(dāng)量)以313mg(39％理論值)的產(chǎn)率獲得標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.70分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.78分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝410.1(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C19H27N3O7計(jì)算值410.1922，實(shí)測(cè)值410.1914[M+H]+. 實(shí)施例157A L-絲氨酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法2，將實(shí)施例150A的化合物(290mg，0.76mmol)進(jìn)行反應(yīng)。獲得451mg(定量)的粗制標(biāo)題化合物，并在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下進(jìn)一步反應(yīng)。
LC-MS(方法22)Rt＝2.16分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝283.0(100)[M+H]+. 實(shí)施例158A [3-(3-吡啶基)-L-丙氨酰]-L-絲氨酸芐酯雙三氟乙酸鹽
將實(shí)施例151A的化合物(460mg，0.99mmol)，根據(jù)操作方法2進(jìn)行反應(yīng)。獲得565mg(定量)的粗制標(biāo)題化合物，并在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下反應(yīng)。
HPLC(方法5)Rt＝3.03分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.23分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝344.2(30)[M+H]+. 實(shí)施例159A L-苯基丙氨酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例152A的化合物(275mg，0.62mmol)，根據(jù)操作方法2反應(yīng)。獲得285mg(93％理論值)的粗制標(biāo)題化合物并在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下進(jìn)一步反應(yīng)。
HPLC(方法6)Rt＝3.33分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.14分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝343.3(100)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝341.3(100)[M-H]-. 實(shí)施例160A L-蘇氨酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例153A的化合物(195mg，0.43mmol)，根據(jù)操作方法2反應(yīng)。獲得235mg(定量)的粗制標(biāo)題化合物，并在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下反應(yīng)。
HPLC(方法5)Rt＝3.20分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.32分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝297(100)[M+H]+. 實(shí)施例161A L-別蘇氨酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法2，使實(shí)施例154A的化合物(286mg，0.72mmol)反應(yīng)。獲得326mg(定量)的粗制標(biāo)題化合物，并在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況進(jìn)一步反應(yīng)。
HPLC(方法5)Rt＝3.16分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.38分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝297(15)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C14H21N2O5計(jì)算值297.1445，實(shí)測(cè)值297.1436[M+H]+. 實(shí)施例162A L-丙氨酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例155A的化合物(277mg，0.76mmol)，根據(jù)操作方法2反應(yīng)。獲得285mg(定量)的粗制標(biāo)題化合物并在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況進(jìn)一步反應(yīng)。
HPLC(方法5)Rt＝3.20分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.35分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝267(100)[M+H]+. 實(shí)施例163A L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例156A的化合物(313mg，0.76mmol)，根據(jù)操作方法2反應(yīng)。獲得428mg(定量)的粗制標(biāo)題化合物并在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況進(jìn)一步反應(yīng)。
HPLC(方法6)Rt＝2.96分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.07分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝310(100)[M+H]+. 實(shí)施例164A [N2-(叔丁氧羰基)甘氨酰]-L-絲氨酰-L-絲氨酸芐酯
將實(shí)施例157A的化合物(360mg，0.85mmol)和N-叔丁氧羰基甘氨酸(149mg，0.85mmol，1當(dāng)量)溶解于二氯甲烷(4.4ml)并冷卻到0℃。加入HATU(485mg，1.28mmol，1.5當(dāng)量)并接著在15分鐘的過(guò)程中，逐滴加入N，N-二異丙基乙基胺(0.74ml，4.26mmol，5當(dāng)量)在二氯甲烷(3ml)中的溶液。接著，將所述混合物在室溫?cái)嚢?4小時(shí)，隨后用碳酸氫鈉洗滌，干燥有機(jī)相(硫酸鈉)并濃縮。將所述粗制產(chǎn)物通過(guò)色譜法純化(方法34)。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并進(jìn)行冷凍干燥。產(chǎn)率220mg(0.50mmol，59％理論值)，其為無(wú)色的固體。
HPLC(方法3)Rt＝3.70分鐘。
LC-MS(方法1)Rt＝1.93分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝440.7(100)。
實(shí)施例165A [N2-(叔丁氧羰基)甘氨酰]-[3-(3-吡啶基)-L-丙氨酰]-L-絲氨酸芐酯
根據(jù)實(shí)施例164A的化合物的制備方法，用DMF(1.8ml)替代二氯甲烷作為溶劑，從實(shí)施例158A的化合物(565mg，0.95mmol)和N-叔丁氧羰基甘氨酸(166mg，0.95mmol，1當(dāng)量)獲得405mg(85％理論值)產(chǎn)率的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.52分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.49分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝501.4(100)[M+H]+. 實(shí)施例166A [N2-(叔丁氧羰基)甘氨酰]-L-苯基丙氨酰-L-絲氨酸芐酯
根據(jù)實(shí)施例164A的化合物的制備方法，用DMF(2.0ml)替代二氯甲烷作為溶劑，從實(shí)施例159A(285mg，0.58mmol)和N-叔丁氧羰基甘氨酸(122mg，0.70mmol，1當(dāng)量)獲得237mg(82％理論值)產(chǎn)率的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝4.28分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝2.29分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝500.2(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C26H34N3O7計(jì)算值500.2392，實(shí)測(cè)值500.2399[M+H]+. 實(shí)施例167A [N2-叔丁氧羰基-甘氨酰]-L-蘇氨酰-L-絲氨酸芐酯
根據(jù)實(shí)施例164A的化合物的制備方法，用DMF(1.8ml)替代二氯甲烷作為溶劑從實(shí)施例160A的化合物(173mg，0.49mmol)和N2-叔丁氧羰基甘氨酸(103mg，0.59mmol，1.2當(dāng)量)獲得84mg(34％理論值)產(chǎn)率的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝4.45分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝2.38分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝510.2(100)[M+H]+. 實(shí)施例168A [N2-叔丁氧羰基-甘氨酰]-L-別蘇氨酰-L-絲氨酸芐酯
在0℃，將實(shí)施例161A的化合物(295mg，0.72mmol)和N2-叔丁氧羰基甘氨酸(126mg，0.72mmol，1.0當(dāng)量)提供在DMF中。接著，加入TCTU(329mg，0.87mmol，1.2當(dāng)量)和NMM(238μl，2.16mmol，3當(dāng)量)。將所述混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜并接著通過(guò)根據(jù)方法45的色譜法進(jìn)行后處理。根據(jù)改進(jìn)的方法32(梯度0-5分鐘10％B，5.01-35分鐘斜度85％B，35.01-40分鐘85％B)，合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并通過(guò)色譜法純化。獲得170mg(52％理論值)的產(chǎn)率的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.73分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.82分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝454.1(80)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C21H32N3O8計(jì)算值454.2184，實(shí)測(cè)值454.2177[M+H]+. 實(shí)施例169A [N2-叔丁氧羰基-甘氨酰]-L-丙氨酰-L-絲氨酸芐酯
根據(jù)實(shí)施例164A的化合物的制備方法，用DMF(1.8ml)替代二氯甲烷作為溶劑，從實(shí)施例162A(285mg，0.75mmol)的化合物和N2-叔丁氧羰基甘氨酸(157mg，0.90mmol，1.2當(dāng)量)獲得產(chǎn)率172mg(43％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.83分鐘。
LC-MS(方法21)Rt＝1.85分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝424.4(100)[M+H]+. 實(shí)施例170A [N2-(叔丁氧羰基)-甘氨酰]-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸芐酯
根據(jù)實(shí)施例164A的化合物的制備方法，用DMF(2.0ml)替代二氯甲烷作為溶劑，從實(shí)施例163A的化合物(428mg，0.80mmol)和N2-叔丁氧羰基甘氨酸(167mg，0.96mmol，1.2當(dāng)量)獲得208mg(56％理論值)產(chǎn)率的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝3.60分鐘。
LC-MS(方法21)Rt＝1.75分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝467.0(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C21H31N4O8計(jì)算值467.2137，實(shí)測(cè)值467.2142[M+H]+. 實(shí)施例171A 甘氨酰-L-絲氨酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
實(shí)施例164A的化合物(88mg，0.20mmol)在1.5ml的試劑溶液中，根據(jù)操作方法2反應(yīng)。將粗制產(chǎn)物進(jìn)行進(jìn)一步的反應(yīng)，而無(wú)需進(jìn)一步純化。產(chǎn)率118mg(定量)。
HPLC(方法3)Rt＝3.08分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.56分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝340.0(100)[M+H]+. 實(shí)施例172A [甘氨酰]-[3-(3-吡啶基)-L-丙氨酰]-L-絲氨酸芐酯雙三氟乙酸鹽
將實(shí)施例165A的化合物(60mg，0.12mmol)在1.5ml的試劑溶液中根據(jù)操作方法2反應(yīng)。將所述粗制產(chǎn)物進(jìn)行進(jìn)一步的反應(yīng)，而無(wú)需進(jìn)一步純化。產(chǎn)率81mg(定量) HPLC(方法5)Rt＝3.05分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.36分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝401.0(40)[M+H]+. 實(shí)施例173A 甘氨酰-L-苯基丙氨酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例166A的化合物(63mg，0.13mmol)在1.0ml的試劑溶液中根據(jù)操作方法2反應(yīng)。將粗制產(chǎn)物進(jìn)行進(jìn)一步的反應(yīng)，而無(wú)需進(jìn)一步純化。產(chǎn)率65mg(96％理論值)。
HPLC(方法6)Rt＝3.35分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝1.26分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝400.1(90)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝398.1(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C21H26N3O5計(jì)算值400.1867，實(shí)測(cè)值400.1869[M+H]+. 實(shí)施例174A 甘氨酰-L-蘇氨酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例167A的化合物(82mg，0.16mmol)在1.5ml的試劑溶液中根據(jù)操作方法2反應(yīng)。將所述粗制產(chǎn)物通過(guò)色譜法純化(方法44)。產(chǎn)率43mg(76％理論值)。
HPLC(方法5)Rt＝3.16分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.35分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝354(50)[M+H]+. 實(shí)施例175A 甘氨酰-L-別蘇氨酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例168A的化合物(169mg，0.37mmol)在1.5ml的試劑溶液中根據(jù)操作方法2反應(yīng)。將所述粗制產(chǎn)物(194mg，約定量)進(jìn)行進(jìn)一步的反應(yīng)，而無(wú)需進(jìn)一步純化。
HPLC(方法5)Rt＝3.16分鐘。
LC-MS(方法21)Rt＝0.78分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝354.3(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C16H24N4O6計(jì)算值354.1660，實(shí)測(cè)值354.1648[M+H]+. 實(shí)施例176A 甘氨酰-L-丙氨酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例169A的化合物(172mg，0.32mmol)在3.0ml的試劑溶液中根據(jù)操作方法2反應(yīng)。將所述粗制產(chǎn)物進(jìn)行反應(yīng)而不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的純化。產(chǎn)率175mg(99％理論值)。
HPLC(方法5)Rt＝3.20分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.41分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝324(40)[M+H]+. 實(shí)施例177A 甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例170A的化合物(60mg，0.13mmol)在1.0ml的試劑溶液中根據(jù)操作方法2反應(yīng)。將所述粗制產(chǎn)物進(jìn)行反應(yīng)，而不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的純化。產(chǎn)率62mg(定量)。
HPLC(方法6)Rt＝2.89分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.14分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝367(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C16H23N4O6計(jì)算值367.1613，實(shí)測(cè)值367.1609[M+H]+. 實(shí)施例178A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-絲氨酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例32A的化合物(75mg，38μmol)和171A(26mg，45μmol，1.2當(dāng)量)溶解于DMF(950μl)，并將所述溶液冷卻到-20℃。加入4-甲基嗎啉(29μl，263μmol，7當(dāng)量)和HATU(23mg，60μmol，1.6當(dāng)量)并將所述混合物在室溫?cái)嚢?6小時(shí)。接著將所述完全的混合物置于HPLC柱上并根據(jù)方法33通過(guò)色譜法純化。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并進(jìn)行冷凍干燥。獲得15mg(34％理論值)的標(biāo)題化合物，其為無(wú)色的固體。
HPLC(方法5)Rt＝3.89分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.81分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1053(90)[M+H]+. 實(shí)施例179A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[3-(3-吡啶基)-L-丙氨酰]-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例178A的化合物的制備方法，從實(shí)施例32A的化合物(80mg，83μmol)和實(shí)施例172A的化合物(79mg，125μmol，1.5當(dāng)量)獲得標(biāo)題化合物，其產(chǎn)率為34mg(33％理論值)。
HPLC(方法5)Rt＝3.75分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.52分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝557.6(100)[M+2H]2+；1113.8(10)[M+H]+. 實(shí)施例180A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-苯基丙氨酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例178A的化合物的制備方法，從實(shí)施例32A的化合物(82mg，97μmol)和實(shí)施例173A的化合物(65mg，126μmol，1.3當(dāng)量)獲得產(chǎn)率為39mg(33％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝3.96分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.87分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝506.8(90)[M+2H]2+；1112.5(100)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝1110.5(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C54H86N11O14計(jì)算值1112.6351，實(shí)測(cè)值1112.6343[M+H]+. 實(shí)施例181A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-蘇氨酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例178A的化合物的制備方法，從實(shí)施例32A的化合物(67mg，80μmol)和實(shí)施例174A的化合物(31mg，88μmol，1.1當(dāng)量)獲得產(chǎn)率為21mg(20％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.89分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.71分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1066.7(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C49H84N11O15計(jì)算值1066.6143，實(shí)測(cè)值1066.6130[M+H]+. 實(shí)施例182A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-別蘇氨酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例32A的化合物(57mg，59μmol)和實(shí)施例175A的化合物(48mg，71μmol，1.2當(dāng)量)，根據(jù)實(shí)施例178A的化合物的制備方法反應(yīng)。在Sephadex LH20(方法45)上進(jìn)行后處理，隨后根據(jù)改進(jìn)的方法44(梯度0-5分鐘5％ B，斜度，30-35分鐘75％ B，35.01-40分鐘75％ B)進(jìn)行色譜法。獲得產(chǎn)率為65mg(93％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝3.70分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.70分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝483.9(100)[M-Boc+2H]2+，1066.6(70)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C49H84N11O15計(jì)算值1066.6143，實(shí)測(cè)值1066.6134[M+H]+. 實(shí)施例183A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-丙氨酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例178A的化合物的制備方法，并在通過(guò)色譜法進(jìn)行另外的純化后(Kromasil RP-185μm，

250 x 20mm；洗脫劑A水+0.05％TFA，洗脫劑B乙腈+0.05％ TFA流速10ml/分鐘；60％ A，40％B等度)，從實(shí)施例32A的化合物(80mg，84μmol)和實(shí)施例176A的化合物(60mg，109μmol，1.3當(dāng)量)獲得產(chǎn)率為48mg(50％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.99分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.70分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1036.6(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C48H81N11O14計(jì)算值1036.6038，實(shí)測(cè)值1036.6027[M+H]+. 實(shí)施例184A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-[N5-(亞氨基-{[(2，2，5，7，8-五甲基-3，4-二氫-2H-色烯-6-基)磺酰基]氨基}甲基)-D-鳥(niǎo)氨酰]}-L-異亮氨酰-[O3-(叔丁基)-L-絲氨酰]-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸芐酯
根據(jù)實(shí)施例178A的化合物的制備方法并在通過(guò)色譜法進(jìn)行另外的純化后(Kromasil RP-185μm，

250 x 20mm；洗脫劑A水+0.05％TFA，洗脫劑B乙腈+0.05％ TFA流速10ml/分鐘；60％ A，40％ B等度)，從實(shí)施例148A的化合物(87mg，84μmol)和實(shí)施例36A的化合物(50mg，101μmol，1.2當(dāng)量)獲得產(chǎn)率為62mg(49％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝4.40分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝2.97分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1403.7(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C66H107N12O19S計(jì)算值1403.7491，實(shí)測(cè)值1403.7517[M+H]+. 實(shí)施例185A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
根據(jù)對(duì)于實(shí)施例178A的化合物的制備方法，從實(shí)施例32A的化合物(100mg，118μmol)和實(shí)施例177A的化合物(62mg，130μmol，1.1當(dāng)量)獲得產(chǎn)率為48mg(31％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝3.66分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝1.66分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝490.3(100)[M-Boc+2H]2+，1079.6(80)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C49H83N12O15計(jì)算值1079.6096，實(shí)測(cè)值1079.6090[M+H]+. 實(shí)施例186A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-絲氨酰-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
在存在5mg的10％披鈀碳的情況下，在室溫在大氣壓下將實(shí)施例178A的化合物(21mg，18μmol)在750μl的乙酸中進(jìn)行氫化2小時(shí)。過(guò)濾所述混合物以去除催化劑并在油泵真空下將其干燥到恒重。獲得定量產(chǎn)率(20mg)的標(biāo)題化合物并且不經(jīng)過(guò)純化進(jìn)行進(jìn)一步反應(yīng)。
HPLC(方法5)Rt＝3.56分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.72分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝963.0(90)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C41H76N11O15計(jì)算值962.5517，實(shí)測(cè)值962.5537[M+H]+. 實(shí)施例187A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[3-(3-吡啶基)-L-丙氨酰]-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例186A的化合物的制備方法，將實(shí)施例179A的化合物(55mg，45μmol)進(jìn)行氫化。在濃縮粗制產(chǎn)物后，將其根據(jù)操作方法2直接進(jìn)行Boc去除并再次濃縮。獲得41mg(88％理論值)的標(biāo)題化合物并在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況進(jìn)一步反應(yīng)。
HPLC(方法5)Rt＝3.56分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.19分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝462(40)[M+H]+；(ESIneg)m/z(％)＝[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C41H71N12O12計(jì)算值923.5309，實(shí)測(cè)值923.5321[M+H]+. 實(shí)施例188A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-苯基丙氨酰-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
將實(shí)施例180A的化合物(39mg，32μmol)，根據(jù)制備實(shí)施例186A的化合物的制備方法進(jìn)行氫化。獲得36mg(定量)的標(biāo)題化合物并在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況進(jìn)一步反應(yīng)。
HPLC(方法6)Rt＝3.55分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.75分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝462(100)[M-Boc+2H]2+，1022.1(10)[M+H]+；(ESIneg)m/z(％)＝1020.8[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C47H80N11O14計(jì)算值1022.5881，實(shí)測(cè)值1022.5876[M+H]+. 實(shí)施例189A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-蘇氨酰-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
將實(shí)施例181A的化合物(21mg，18μmol)，根據(jù)實(shí)施例186A的化合物的制備方法進(jìn)行氫化。獲得18mg(98％理論值)的標(biāo)題化合物，其為無(wú)色的固體。
HPLC(方法5)Rt＝3.58分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.58分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝976.6(80)[M+H]+. 實(shí)施例190A [(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-別蘇氨酰-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
將實(shí)施例197A的化合物(44mg，37μmol)溶解于甲醇(5.0ml)，加入10％ Pd/C(20mg)并將所述混合物在室溫在大氣壓下氫化2小時(shí)。過(guò)濾所述混合物以除去催化劑并將所述濾液進(jìn)行濃縮。獲得42mg(定量)的粗制標(biāo)題化合物并進(jìn)行進(jìn)一步的反應(yīng)，而不經(jīng)過(guò)純化。
HPLC(方法5)Rt＝3.00分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.32分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝439(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg)m/z(％)＝875(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C37H69N11O13計(jì)算值876.5150，實(shí)測(cè)值876.5146[M+H]+. 實(shí)施例191A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-丙氨酰-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
將實(shí)施例183A的化合物(47mg，41μmol)，根據(jù)實(shí)施例186A的化合物的制備方法進(jìn)行氫化。獲得43mg(99％理論值)的標(biāo)題化合物，其為固體。
HPLC(方法5)Rt＝3.62分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.58分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝946.5(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C41H76N11O14計(jì)算值946.5568，實(shí)測(cè)值946.5569[M+H]+. 實(shí)施例192A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-[N5-(亞氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基-3，4-二氫-2H-色烯-6-基)磺酰基]氨基}甲基)-D-鳥(niǎo)氨酰]}-L-異亮氨酰-[O3-(叔丁基)-L-絲氨酰]-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸
將實(shí)施例184A的化合物(62mg，41μmol)，根據(jù)實(shí)施例186A的化合物的制備方法進(jìn)行氫化。獲得56mg(96％理論值)的標(biāo)題化合物，其為固體。
HPLC(方法5)Rt＝4.57分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝3.06分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1313.7(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C59H101N12O19S計(jì)算值1313.7022，實(shí)測(cè)值1313.7020[M+H]+. 實(shí)施例193A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
將實(shí)施例185A的化合物(48mg，40μmol)，根據(jù)實(shí)施例186A的化合物的制備方法進(jìn)行氫化。獲得42mg(99％理論值)的標(biāo)題化合物，其為無(wú)色的固體。
HPLC(方法5)Rt＝3.40分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.57分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝445.3(100)[M+2H]2+，9989.6(70)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C42H77N12O15計(jì)算值989.5626，實(shí)測(cè)值989.5619[M+H]+. 實(shí)施例194A [(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-絲氨酰-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
將實(shí)施例186A的化合物(20mg，18μmol)，根據(jù)操作方法2反應(yīng)。獲得20mg(99％理論值)的標(biāo)題化合物，其為固體。
HPLC(方法5)Rt＝2.96分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.25分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝432(100)[M+2H]2+，862.6(1)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C36H68N11O13計(jì)算值862.4993，實(shí)測(cè)值862.5027[M+H]+. 實(shí)施例195A [(3R)3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-苯基丙氨酰-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
將實(shí)施例188A的化合物(36mg，32μmol)，根據(jù)操作方法2反應(yīng)。獲得36mg(99％理論值)的標(biāo)題化合物，其為固體。
HPLC(方法6)Rt＝2.98分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.11分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝461.8(100)[M+2H]2+，922.5(10)[M+H]+；MS(ESIpos)m/z(％)＝920.5(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C42H72N11O12計(jì)算值922.5357，實(shí)測(cè)值922.5357[M+H]+. 實(shí)施例196A [(3-R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-蘇氨酰-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
將實(shí)施例189A的化合物(18mg，17μmol)，根據(jù)操作方法2反應(yīng)。獲得18mg(94％理論值)的標(biāo)題化合物，其為固體。
HPLC(方法5)Rt＝2.99分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.47分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝439(100)[M+2H]2+. HR-TOF-MS(方法24)C37H70N11O13計(jì)算值876.5150，實(shí)測(cè)值876.5161[M+H]+. 實(shí)施例197A [(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-別蘇氨酰-L-絲氨酸芐酯雙三氟乙酸鹽
將實(shí)施例182A的化合物(57mg，48μmol)，根據(jù)操作方法2反應(yīng)。在根據(jù)改進(jìn)的方法44(梯度0-5分鐘5％B，斜度，30-35分鐘60％B，35.01-40分鐘60％B)，通過(guò)色譜法進(jìn)行純化后，獲得45mg(78％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.40分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.12分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝483.9(100)[M+2H]2+，966.6(10)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C44H75N11O13計(jì)算值966.5619，實(shí)測(cè)值966.5643[M+H]+. 實(shí)施例198A [(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-丙氨酰-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
將實(shí)施例191A的化合物(43mg，38μmol)在2ml的試劑溶液中根據(jù)操作方法2反應(yīng)。獲得45mg的粗制標(biāo)題化合物，其為固體。
HPLC(方法5)Rt＝2.99分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.32分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝424(100)[M+2H]2+. HR-TOF-MS(方法24)C36H67N11O12計(jì)算值846.5044，實(shí)測(cè)值846.5029[M+H]+. 實(shí)施例199A [(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-絲氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸酯雙三氟乙酸鹽
將實(shí)施例192A的化合物(56mg，39μmol)，11μl的水和11μl的三異丙基硅烷置入4.0ml的TFA中。在2小時(shí)后，將所述混合物濃縮并通過(guò)色譜法純化(方法45)。獲得40mg的標(biāo)題化合物(90％理論值)，其為固體。
HPLC(方法5)Rt＝2.96分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.30分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝446(100)[M+2H]2+. 實(shí)施例200A [(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
將實(shí)施例193A的化合物(42mg，38μmol)在2ml的試劑溶液中根據(jù)操作方法2反應(yīng)。獲得42mg(99％理論值)的粗制標(biāo)題化合物，其為固體。
HPLC(方法5)Rt＝2.77分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.16分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝446(100)[M+2H]2+，890(20)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝888(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C37H69N12O13計(jì)算值889.5102，實(shí)測(cè)值889.5095[M+H]+. 實(shí)施例201A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-{(叔丁氧羰基)氨基}-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-絲氨酰-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
在0℃，將實(shí)施例194A的化合物(19mg，17μmol)和實(shí)施例17A的化合物(12mg，19μmol，1.1當(dāng)量)溶解于DMF(530μl)，并加入DIEA(15μl，87μmol，5當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物進(jìn)一步攪拌過(guò)夜，在此過(guò)程中將其緩慢升溫到室溫。將所述混合物置入乙腈中并通過(guò)色譜法純化(方法44)。產(chǎn)率14mg，(10μmol 59％理論值)的標(biāo)題化合物，其為固體。
HPLC(方法5)Rt＝3.94分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.93分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1259.1(50)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C58H92N13O18計(jì)算值1258.6678，實(shí)測(cè)值1258.6675[M+H]+. 實(shí)施例202A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-{(叔丁氧羰基)氨基}-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[3-(3-吡啶基)-L-丙氨酰]-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例201A的化合物的制備方法，將實(shí)施例187A的化合物(41mg，36μmol)與實(shí)施例17A的化合物(23mg，39μmol，1.1當(dāng)量)進(jìn)行反應(yīng)。獲得37mg(73％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.87分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.72分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝660.5(100)[M+2H]2+，1319.7(5)[M+H]+；(ESIneg)m/z(％)＝1317.5(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C63H95N14O17計(jì)算值1319.6995，實(shí)測(cè)值1319.6978[M+H]+. 實(shí)施例203A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-{(叔丁氧羰基)氨基}-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-苯基丙氨酰-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例201A的化合物的制備方法，將實(shí)施例195A的化合物(36mg，31μmol)與實(shí)施例17A的化合物(22mg，39μmol，1.2當(dāng)量)進(jìn)行反應(yīng)。獲得34mg(70％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝3.93分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝2.01分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝610.1(100)[M-Boc+2H]2+，1318.8(20)[M+H]+；(ESIneg)m/z(％)＝1316.7(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C64H96N13O17計(jì)算值1318.7042，實(shí)測(cè)值1318.7036[M+H]+. 實(shí)施例204A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-{(叔丁氧羰基)氨基}-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-蘇氨酰-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例201A的化合物的制備方法，將實(shí)施例196A的化合物(18mg，17μmol)與實(shí)施例17A的化合物(12mg，21μmol，1.1當(dāng)量)進(jìn)行反應(yīng)。在根據(jù)方法45純化后，分離17mg(76％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.96分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.97分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1272.8(40)[M+H]+ HR-TOF-MS(方法24)C59H94N13O18計(jì)算值1272.6835，實(shí)測(cè)值1272.6853[M+H]+. 實(shí)施例205A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-{(叔丁氧羰基)氨基}-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-別蘇氨酰-L-絲氨酸酯三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例201A的化合物的制備方法，使實(shí)施例190A的化合物(44mg，40μmol)與實(shí)施例17A的化合物(25mg，44μmol，1.1當(dāng)量)進(jìn)行反應(yīng)。在根據(jù)方法45純化后，分離50mg(90％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.80分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.98分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1272.7(20)[M+H]+ HR-TOF-MS(方法24)C59H94N13O18計(jì)算值1272.6835，實(shí)測(cè)值1272.6846[M+H]+. 實(shí)施例206A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-{(叔丁氧羰基)氨基}-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-丙氨酰-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例201A的化合物的制備方法，使實(shí)施例198A的化合物(45mg，42μmol)與實(shí)施例17A的化合物(32mg，54μmol，1.3當(dāng)量)進(jìn)行反應(yīng)。在根據(jù)方法45純化后，分離38mg(67％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.99分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝2.12分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝571.9(90)[M-Boc+2H]2+；1242.7(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C58H92N13O17計(jì)算值1242.6729，實(shí)測(cè)值1242.6691[M+H]+. 實(shí)施例207A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-{(叔丁氧羰基)氨基}-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-絲氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸酯三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例201A的化合物的制備方法，使實(shí)施例199A的化合物(39mg，35μmol)與實(shí)施例17A的化合物(24mg，42μmol，1.2當(dāng)量)進(jìn)行反應(yīng)。在根據(jù)方法45純化后，分離42mg(80％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.93分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.93分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝594.4(100)[M-Boc+2H]2+；1287.7(30)[M+H]+. 實(shí)施例208A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-{(叔丁氧羰基)氨基}-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例201A的化合物的制備方法，使實(shí)施例200A的化合物(42mg，38μmol)與實(shí)施例17A的化合物(26mg，45μmol，1.2當(dāng)量)進(jìn)行反應(yīng)。在根據(jù)方法45純化后，分離46mg(81％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.78分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.91分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1285.7(40)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C59H93N14O18計(jì)算值1285.6787，實(shí)測(cè)值1285.6777[M+H]+. 實(shí)施例209A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基}-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-絲氨酰-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法2，使實(shí)施例201A的化合物(14mg，10μmol)與0.5ml的試劑溶液反應(yīng)。在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下，獲得13mg(9.3μmol，95％理論值)的標(biāo)題化合物，其為固體。
HPLC(方法5)Rt＝3.44分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.19分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝580(100)[M+2H]2+，1158.6(5)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C53H84N13O16計(jì)算值1158.6154，實(shí)測(cè)值1158.6183[M+H]+. 實(shí)施例210A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基}-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[3-(3-吡啶基)-L-丙氨酰]-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法2使實(shí)施例202A的化合物(37mg，26μmol)與0.5ml的試劑溶液反應(yīng)。在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下，獲得46mg的粗制標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.39分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.67分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝610(20)[M+2H]2+；(ESInegm/z(％)＝1218(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C58H87N14O15計(jì)算值1219.6470，實(shí)測(cè)值1219.6472[M+H]+. 實(shí)施例211A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基}-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-苯基丙氨酰-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法2，使實(shí)施例203A的化合物(34mg，22μmol)與2.0ml的試劑溶液反應(yīng)。在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下，獲得34mg(定量)的粗制標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.34分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.37分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝610.1(100)[M+2H]2+，1218.8(5)[M+H]+；(ESInegm/z(％)＝1216.8(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C59H88N13O15計(jì)算值1218.6518，實(shí)測(cè)值1218.6539[M+H]+. 實(shí)施例212A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基}-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-蘇氨酰-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法2，使實(shí)施例204A的化合物(17mg，12μmol)與1.0ml的試劑溶液反應(yīng)。在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下，獲得17mg(定量)的粗制標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.48分鐘。
LC-MS(方法21)Rt＝1.49分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝587.2(100)[M+2H]2+，1172.7(5)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C54H86N13O16計(jì)算值1172.6310，實(shí)測(cè)值1172.6328[M+H]+. 實(shí)施例213A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基}-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-別蘇氨酰-L-絲氨酸酯雙三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法2，使實(shí)施例205A的化合物(50mg，36μmol)與4.8ml的試劑溶液反應(yīng)。在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下，獲得56mg(定量)的粗制標(biāo)題化合物并進(jìn)行反應(yīng)，而不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的純化。
HPLC(方法6)Rt＝3.22分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.32分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝586.9(100)[M+2H]2+. HR-TOF-MS(方法24)C54H86N13O16計(jì)算值1172.6310，實(shí)測(cè)值1172.6323[M+H]+. 實(shí)施例214A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-丙氨酰-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法2，使實(shí)施例206A的化合物(49mg，36μmol)與1.0ml的試劑溶液反應(yīng)1小時(shí)。在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下，獲得49mg(定量)的粗制標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.46分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.49分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝572.0(100)[M+2H]2+，1142.6(5)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C53H84N13O15計(jì)算值1142.6205，實(shí)測(cè)值1142.6221[M+H]+. 實(shí)施例215A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-絲氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸酯雙三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法2，使實(shí)施例207A的化合物(42mg，28μmol)與1.0ml的試劑溶液反應(yīng)1小時(shí)。在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下，獲得43mg(定量)的粗制標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.43分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.34分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝594.5(100)[M+2H]2+，1187.6(5)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C53H83N14O17計(jì)算值1187.6056，實(shí)測(cè)值1187.6074[M+H]+. 實(shí)施例216A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
根據(jù)操作方法2，使實(shí)施例208A的化合物(46mg，30μmol)與1.0ml的試劑溶液反應(yīng)30分鐘。在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下，獲得46mg(定量)的粗制標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.21分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.31分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝593.5(100)[M+2H]2+，1185.5(5)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C54H85N14O16計(jì)算值1185.6263，實(shí)測(cè)值1185.6241[M+H]+. 實(shí)施例217A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-絲氨酰-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
將實(shí)施例209A的化合物(13mg，9.3μmol)溶解于DMF(480μL)，并將所述溶液冷卻到0℃。加入4-甲基嗎啉(6μL，56μmol，6當(dāng)量)和HATU(11mg，28μmol，3當(dāng)量)并將所述混合物0℃攪拌2小時(shí)。接著，將完全的混合物置于HPLC柱并根據(jù)方法44通過(guò)色譜法純化。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并進(jìn)行冷凍干燥。獲得5mg(4.0μmol，43％理論值)的標(biāo)題化合物，其為固體。
HPLC(方法5)Rt＝3.70分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.49分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝570.9(80)[M+2H]2+，1140.6(90)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C53H82N13O15計(jì)算值1140.6048，實(shí)測(cè)值1140.6066[M+H]+. 實(shí)施例218A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[3-(3-吡啶基)-L-丙氨酰]-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例217A的化合物的制備方法，從實(shí)施例210A的化合物(37mg，26μmol)獲得標(biāo)題化合物，其產(chǎn)率為17mg(51％理論值)。
HPLC(方法5)Rt＝3.60分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.45分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝601.5(100)[M+2H]2+，1201.6(20)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C58H85N14O14計(jì)算值1204.6365，實(shí)測(cè)值1201.6338[M+H]+. 實(shí)施例219A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-苯基丙氨酰]-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例217A的化合物的制備方法，從實(shí)施例211A(34mg，22μmol)的化合物獲得產(chǎn)率為28mg(96％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝3.78分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.75分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝601.0(50)[M+2H]2+，1200.8(100)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝1198.8(100)[M-H]-. 實(shí)施例220A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-蘇氨酰-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例217A的化合物的制備方法，從實(shí)施例212A(17mg，12μmol)的化合物獲得產(chǎn)率為10mg(65％理論值)獲得標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.75分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.59分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1154.7(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C54H84N13O15計(jì)算值1154.6205，實(shí)測(cè)值1154.6194[M+H]+. 實(shí)施例221A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-別蘇氨酰-L-絲氨酸酯C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例217A的化合物的制備方法，環(huán)化實(shí)施例213A的化合物(50mg，36μmol)。接著將方法45用于色譜法。獲得產(chǎn)率為52mg(75％純度，86％理論值)的粗制標(biāo)題化合物并且不進(jìn)一步純化。
HPLC(方法6)Rt＝3.55分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.60分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1154.7(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C54H84N13O15計(jì)算值1154.6205，實(shí)測(cè)值1154.6171[M+H]+. 實(shí)施例222A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-丙氨酰-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例217A的化合物的制備方法，其中根據(jù)方法45進(jìn)行純化，從實(shí)施例214A的化合物(49mg，36μmol)獲得產(chǎn)率為34mg(77％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.78分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.61分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1124.6(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C53H82N13O14計(jì)算值1154.6099，實(shí)測(cè)值1124.6073[M+H]+. 實(shí)施例223A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例217A的化合物的制備方法，其中純化根據(jù)方法45進(jìn)行，從實(shí)施例215A的化合物(42mg，27μmol)獲得產(chǎn)率為28mg(73％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.68分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.57分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1169.6(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C53H81N14O16計(jì)算值1169.5950，實(shí)測(cè)值1169.5939[M+H]+. 實(shí)施例224A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
根據(jù)實(shí)施例217A的化合物的制備方法，其中純化根據(jù)方法45進(jìn)行，從實(shí)施例216A的化合物(45mg，30μmol)獲得產(chǎn)率為29mg(75％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.52分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.56分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1167.5(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C54H83N14O15計(jì)算值1167.6157，實(shí)測(cè)值1167.6152[M+H]+. 實(shí)施例225A [(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-絲氨酰-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺雙鹽酸鹽
在存在1M鹽酸(24μL，6當(dāng)量)的情況下，將實(shí)施例217A的化合物溶解于甲醇(750μL)并在存在3mg的10％披鈀碳的情況下，在大氣壓下在室溫進(jìn)行氫化1.5小時(shí)。過(guò)濾所述溶液以去除催化劑并濃縮。獲得產(chǎn)率為4.3mg(定量)的標(biāo)題化合物，其為固體。
HPLC(方法5)Rt＝3.21分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝0.90分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝503.9(100)[M+2H]2+，1006.6(3)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C45H76N13O13計(jì)算值1006.5681，實(shí)測(cè)值1006.5670[M+H]+. 實(shí)施例226A [(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[3-(3-吡啶基)-L-丙氨酰]-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺雙鹽酸鹽
根據(jù)實(shí)施例225A的化合物的制備方法，從實(shí)施例218A的化合物(17mg，13μmol)獲得產(chǎn)率為17mg(定量)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.17分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.34分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝534(20)[M+2H]2+；(ESIneg)m/z(％)＝1065(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C50H79N14O12計(jì)算值1067.5997，實(shí)測(cè)值1067.6006[M+H]+. 實(shí)施例227A [(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-苯基丙氨酰-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺雙鹽酸鹽
根據(jù)實(shí)施例225A的化合物的制備方法，從實(shí)施例219A的化合物(28mg，21μmol)獲得產(chǎn)率為24mg(99％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.17分鐘。
LC-MS(方法21)Rt＝1.15分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝534(100)[M+2H]2+；(ESIneg)m/z(％)＝1064.8(50)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C51H80N13O12計(jì)算值1066.6044，實(shí)測(cè)值1066.6013[M+H]+. 實(shí)施例228A [(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-蘇氨酰-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺雙鹽酸鹽
根據(jù)實(shí)施例225A的化合物的制備方法，從實(shí)施例220A的化合物(10mg，8μmol)獲得產(chǎn)率為8.5mg(99％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.25分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.49分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝511(100)[M+2H]2+. HR-TOF-MS(方法24)C46H78N13O13計(jì)算值1020.5837，實(shí)測(cè)值1020.5831[M+H]+. 實(shí)施例229A [(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-別蘇氨酰-L-絲氨酸酯C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺雙鹽酸鹽
根據(jù)實(shí)施例225A的化合物的制備方法，從實(shí)施例221A的化合物(52mg，41μmol)獲得產(chǎn)率為40mg(86％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝2.93分鐘。
實(shí)施例230A [(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-丙氨酰-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺雙鹽酸鹽
根據(jù)實(shí)施例225A的化合物的制備方法，從實(shí)施例222A的化合物(34mg，27μmol)獲得產(chǎn)率為29mg(99％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.24分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.48分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝496(100)[M+2H]2+. HR-TOF-MS(方法24)C45H76N13O12計(jì)算值990.5731，實(shí)測(cè)值990.5726[M+H]+. 實(shí)施例231A [(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺雙鹽酸鹽
根據(jù)實(shí)施例225A的化合物的制備方法，從實(shí)施例223A的化合物(28mg，20μmol)獲得產(chǎn)率為21mg(95％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.16分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.43分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝519(100)[M+2H]2+. HR-TOF-MS(方法24)C45H75N14O14計(jì)算值1035.5582，實(shí)測(cè)值1035.5585[M+H]+. 實(shí)施例232A [(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺雙鹽酸鹽
根據(jù)實(shí)施例225A的化合物的制備方法，從實(shí)施例224A的化合物(29mg，23μmol)獲得產(chǎn)率為24mg(96％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝2.90分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.32分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝517(100)[M+2H]2+，1033(5)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C46H76N14O13計(jì)算值1033.5790，實(shí)測(cè)值1033.5773[M+H]+. 實(shí)施例233A [N2-(芐氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-絲氨酰-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺鹽酸鹽
將實(shí)施例225A的化合物(4.3mg，4μmol)和實(shí)施例10A的化合物(2.5mg，6μmol，1.5當(dāng)量)溶解于DMF(300μl)并將所述溶液冷卻到0℃。加入4-甲基嗎啉(20μl，16μmol，4當(dāng)量)和HATU(2.4mg，6μmol，1.6當(dāng)量)并將所述混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。接著用3ml的甲醇終止反應(yīng)并根據(jù)方法45通過(guò)色譜法純化。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并濃縮。獲得4mg(2.8μmol，70％理論值)的標(biāo)題化合物，其為固體。
HPLC(方法5)Rt＝4.45分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝2.08分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝698.6(100)[M+2H]2+，1395.4(30)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C67H109N15O17計(jì)算值1394.8043，實(shí)測(cè)值1394.8070[M+H]+. 實(shí)施例234A [N2-(芐氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[3-(3-吡啶基)-L-丙氨酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺鹽酸鹽
根據(jù)制備示例性化合物233A的制備方法，從示例性化合物226A(17mg，13μmol)獲得產(chǎn)率為12mg(54％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝4.25分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝3.61分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝729(100)[M+2H]2+；(ESIneg)m/z(％)＝1454(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C72H111N16O16計(jì)算值1455.8359，實(shí)測(cè)值1455.8347[M+H]+. 實(shí)施例235A [N2-(叔丁氧羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-苯基丙氨酰-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺鹽酸鹽
根據(jù)實(shí)施例233A的化合物的制備方法，從實(shí)施例227A(24mg，21μmol)的化合物和實(shí)施例8A的二肽(10mg，27μmol，1.3當(dāng)量)獲得產(chǎn)率為19mg(62％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝4.57分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝2.291分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝661.2(100)[M-Boc+2H]2+，1421.0(30)[M+H]+；(ESIneg)m/z(％)＝1419.1(20)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C70H113N15O16計(jì)算值1420.8563，實(shí)測(cè)值1420.8558[M+H]+. 實(shí)施例236A [N2-(叔丁氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[L-蘇氨酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺鹽酸鹽
根據(jù)實(shí)施例233A的制備方法，從實(shí)施例228A的化合物(8.5mg，8μmol)和實(shí)施例8A的二肽(4mg，10μmol，1.3當(dāng)量)獲得產(chǎn)率為10mg(91％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝4.65分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝2.09分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1374.8(30)[M+H]+ HR-TOF-MS(方法24)C65H112N15O17計(jì)算值1374.8356，實(shí)測(cè)值1374.8376[M+H]+. 實(shí)施例237A [N2-(叔丁氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-別蘇氨酰-L-絲氨酸酯C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺鹽酸鹽
根據(jù)實(shí)施例233A的化合物的制備方法，從實(shí)施例229A的化合物(40mg，35μmol)和實(shí)施例8A的二肽(17mg，46μmol，1.5當(dāng)量)，獲得產(chǎn)率為47mg(純度77％，69％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝4.31分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝2.08分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1374.8(50)[M+H]+ HR-TOF-MS(方法24)C65H112N15O17計(jì)算值1374.8356，實(shí)測(cè)值1374.8362[M+H]+. 實(shí)施例238A [N2-(叔丁氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-丙氨酰-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺鹽酸鹽
根據(jù)實(shí)施例233A的化合物的制備方法，從實(shí)施例230A的化合物(29mg，27μmol)和實(shí)施例8A的二肽(13mg，35μmol，1.3當(dāng)量)獲得產(chǎn)率為37mg(98％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝4.60分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝2.10分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝623.0(100)[M-Boc+2H]2+；1344.9(90)[M+H]+ HR-TOF-MS(方法24)C64H109N15O16計(jì)算值1344.8250，實(shí)測(cè)值1344.8241[M+H]+. 實(shí)施例239A [N2-(叔丁氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺鹽酸鹽
根據(jù)實(shí)施例233A的化合物的制備方法，從實(shí)施例231A(21mg，19μmol)的化合物和實(shí)施例8A的二肽(9mg，25μmol，1.3當(dāng)量)獲得產(chǎn)率為24mg(89％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝4.42分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝2.03分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝645.5(100)[M-Boc+2H]2+；1389.9(40)[M+H]+ HR-TOF-MS(方法24)C64H108N16O18計(jì)算值1389.8101，實(shí)測(cè)值1389.8105[M+H]+. 實(shí)施例240A [N2-(叔丁氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺鹽酸鹽
根據(jù)實(shí)施例233A的化合物的制備方法，從實(shí)施例232A的化合物(24mg，22μmol)和實(shí)施例8A的二肽(11mg，28μmol，1.3當(dāng)量)獲得產(chǎn)率為30mg(97％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝4.26分鐘。
LC-MS(方法21)Rt＝2.19分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝644.7(100)[M-Boc+2H]2+. HR-TOF-MS(方法24)C65H111N16O17計(jì)算值1387.8308，實(shí)測(cè)值1387.8304[M+H]+. 實(shí)施例241A N2-(叔丁氧羰基)-L-丙氨酸芐酯
將N2-(叔丁氧羰基)-L-丙氨酸(1.13g，5.83mmol)溶解于無(wú)水DCM(6ml)中，加入一些

分子篩，接著將所述混合物冷卻到0℃。加入芐基醇(1.81ml，17.48mmol，3當(dāng)量)，EDCI(2.23g，11.65mmol，2當(dāng)量)，和DMAP(71mg，0.58mmol，0.1當(dāng)量)。將所述混合物攪拌150分鐘，在此過(guò)程中，容許其緩慢升溫到室溫。接著將所述混合物濃縮到干燥并將所述殘余物通過(guò)色譜法(Biotage，環(huán)已烷-乙酸乙酯 9:1)進(jìn)行后處理。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并濃縮。獲得產(chǎn)率為1.03g(63％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝4.70分鐘。
LC-MS(方法21)Rt＝2.44分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝280.3(30)[M+H]+. 實(shí)施例242A L-丙氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例241A的化合物(200mg，716μmol)與2.0ml的試劑溶液根據(jù)操作方法2反應(yīng)60分鐘。在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下，獲得200mg(95％理論值)的粗制標(biāo)題化合物。
LC-MS(方法22)Rt＝2.30分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝180(100)[M+H]+. 實(shí)施例243A [N2-(叔丁氧羰基)-甘氨酰]-[(3S)-3-羥基-O4-甲基-L-天冬氨酰]-L-丙氨酸芐酯
將實(shí)施例33A的化合物(441mg，895μmol)和實(shí)施例242A的化合物(315mg，1.07mmol，1.2當(dāng)量)溶解于DMF(4.8ml)并冷卻到-20℃。接著加入4-甲基嗎啉(492μl，4.48mmol，5當(dāng)量)和HATU(510mg，1.34mmol，1.5當(dāng)量)，將所述混合物緩慢升溫到室溫并攪拌約16小時(shí)。接著，通過(guò)色譜法在兩步中純化所述混合物(方法45，接著方法34)。獲得產(chǎn)率為277mg(64％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝4.06分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝2.13分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝482.1(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C22H32N3O9計(jì)算值482.2134，實(shí)測(cè)值482.2120[M+H]+. 實(shí)施例244A [N2-(叔丁氧羰基)-甘氨酰]-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-丙氨酸芐酯
將實(shí)施例243A的化合物(139mg，288μmol)提供在5.1ml的乙腈中并冷卻到0℃；加入3.1ml的濃氨水溶液，并在0℃持續(xù)攪拌。在20分鐘后，用冰醋酸(2.6ml)終止反應(yīng)，用水稀釋，并用乙酸乙酯提取。將所述有機(jī)提取物用濃鹽水洗滌，通過(guò)硫酸鈉干燥并濃縮。產(chǎn)率122mg(75％理論值)的粗制標(biāo)題化合物，將其進(jìn)行反應(yīng)不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的純化。
HPLC(方法6)Rt＝3.78分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.69分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝467.1(100)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝465.2(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C21H31N4O8計(jì)算值467.2137，實(shí)測(cè)值467.2137[M+H]+. 實(shí)施例245A 甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-丙氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例241A的化合物(122mg，217μmol)與2.0ml的試劑溶液根據(jù)操作方法2反應(yīng)60分鐘。在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下，獲得100mg(96％理論值)的粗制標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝3.05分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.23分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝367(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C16H23N4O6計(jì)算值367.1613，實(shí)測(cè)值367.1622[M+H]+. 實(shí)施例246A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-丙氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例32A的化合物(133mg，139μmol)和實(shí)施例245A的化合物(100mg，208μmol，1.5當(dāng)量)溶解于DMF(950μl)，并將所述溶液冷卻到-20℃。加入4-甲基嗎啉(46μl，416μmol，3當(dāng)量)和HATU(84mg，222μmol，1.6當(dāng)量)并將所述混合物室溫?cái)嚢?6小時(shí)。接著將完全的混合物根據(jù)方法45通過(guò)色譜法進(jìn)行純化。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并進(jìn)行冷凍干燥。獲得157mg(95％理論值)的標(biāo)題化合物，其為固體。
HPLC(方法6)Rt＝3.66分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.71分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1079.1(80)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C49H83N12O15計(jì)算值1079.6096，實(shí)測(cè)值1079.6094[M+H]+. 實(shí)施例247A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-丙氨酸三氟乙酸鹽
將實(shí)施例246A的化合物(190mg，159μmol)，根據(jù)制備實(shí)施例186A的化合物的方法進(jìn)行氫化。獲得172mg(98％理論值)的標(biāo)題化合物，其為固體。
HPLC(方法6)Rt＝3.39分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.55分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝445.3(100)[M+2H]2+，989.5(60)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝987.5(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C42H77N12O15計(jì)算值989.5626，實(shí)測(cè)值989.5651[M+H]+. 實(shí)施例248A [(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-丙氨酸雙三氟乙酸鹽
將實(shí)施例247A的化合物(172mg，156μmol)與2.0ml的試劑溶液根據(jù)操作方法2反應(yīng)30分鐘。在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下，獲得174mg(定量)的粗制標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝2.78分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.17分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝889(80)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝887(100)，[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C37H69N12O13計(jì)算值889.5102，實(shí)測(cè)值889.5096[M+H]+. 實(shí)施例249A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-{(叔丁氧羰基)氨基}-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-丙氨酸三氟乙酸鹽
根據(jù)制備實(shí)施例201A的化合物的方法，使實(shí)施例248A的化合物(174mg，156μmol)與實(shí)施例17A的化合物(99mg，171μmol，1.1當(dāng)量)進(jìn)行反應(yīng)。在通過(guò)色譜法純化后(方法36的變體，取代梯度，分離用洗脫劑A洗脫劑B＝32等度進(jìn)行，分離81mg(34％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝3.76分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.89分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝593.4(100)[M-Boc+2H]2+，1285.7(30)[M+H]+；(ESIneg)m/z(％)＝1283.5(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C59H93N14O18計(jì)算值1285.6787，實(shí)測(cè)值1285.6781[M+H]+. 實(shí)施例250A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-丙氨酸雙三氟乙酸鹽
將實(shí)施例249A的化合物(81mg，54μmol)與2.0ml的試劑溶液根據(jù)操作方法2反應(yīng)60分鐘。在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下，獲得81mg(99％理論值)的粗制標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝3.20分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.29分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝593.7(100)[M+2H]2+，1185.6(5)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝1183.7(100)，[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C54H85N14O16計(jì)算值1185.6263，實(shí)測(cè)值1185.6249[M+H]+. 實(shí)施例251A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-丙氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
根據(jù)制備實(shí)施例217A的化合物的方法，其中純化根據(jù)方法45進(jìn)行，從實(shí)施例250A的化合物(81mg，53μmol)獲得產(chǎn)率為69mg(93％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝3.56分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.67分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1167.6(100)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝1165.6(100)，[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C54H83N14O15計(jì)算值1167.6157，實(shí)測(cè)值1167.6154[M+H]+. 實(shí)施例252A [(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-丙氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺雙鹽酸鹽
根據(jù)制備實(shí)施例225A的化合物的方法，從實(shí)施例251A的化合物(69mg，49μmol)獲得產(chǎn)率為53mg(97％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝2.98分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝0.96分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝517.5(100)[M+2H]2+，1033.7(10)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝1031.7(60)[M-H]-，1077.7(100)[M+HCOOH-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C46H77N14O13計(jì)算值1033.5790，實(shí)測(cè)值1033.5782[M+H]+. 實(shí)施例253A [N2-(叔丁氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-丙氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺鹽酸鹽
根據(jù)制備實(shí)施例233A的化合物的方法，從實(shí)施例252A的化合物(53mg，48μmol)和實(shí)施例8A的二肽(23mg，62μmol，1.3當(dāng)量)獲得產(chǎn)率為58mg(85％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝4.35分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝2.08分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1387.9(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C65H111N16O17計(jì)算值1387.8308，實(shí)測(cè)值1387.8314[M+H]+. 實(shí)施例254A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酸五氟苯酯三氟乙酸鹽
在0℃，在氬氣下，將實(shí)施例32A的化合物(60mg，71μmol)，五氟苯酚(65mg，355μmol，5當(dāng)量)和EDCI(20mg，107μmol，1.5當(dāng)量)溶解于二氯甲烷(0.9ml)并在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將所述溶劑去除并將所述殘余物進(jìn)行色譜分離(方法34)。分離產(chǎn)率為32mg(45％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝4.12分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.93分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝897.4(100)[M+H]+. 實(shí)施例255A N2-(叔丁氧羰基)-D-丙氨五氟苯酸
以類似于制備實(shí)施例254A的化合物的方式，從N2-(叔丁氧羰基)-D-丙氨酸(390mg，2.06mmol)分離產(chǎn)率為471mg(64％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝5.00分鐘。
LC-MS(方法21)Rt＝2.74分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝356(5)[M+H]+. 實(shí)施例256A [N2-(叔丁氧羰基)-D-丙氨酰]-(3S)-O4-甲基-3-羥基-L-天冬氨酸
在0℃，將實(shí)施例255A的化合物(470mg，1.32mmol)和(2S，3S)-2-氨基-3-羥基-4-甲氧基-4-氧代丁酸鹽酸鹽(見(jiàn)用于制備的實(shí)施例33A，407mg，2.04mmol，1.6當(dāng)量)溶解于DMF(20ml)，并加入DIPEA(1.78ml，10.20mmol，7.7當(dāng)量)。將所述混合物在室溫?cái)嚢杓s16小時(shí)，接著根據(jù)方法45進(jìn)行色譜法并通過(guò)方法32進(jìn)行精制。產(chǎn)率200mg(29％理論值)。
HPLC(方法5)Rt＝3.26分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.48分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝335.2(90)[M+H]+. 實(shí)施例257A [N2-(叔丁氧羰基)-D-丙氨酰]-[(3S)-O4-甲基-3-羥基-L-天冬氨酰]-L-絲氨酸芐酯
將實(shí)施例256A的化合物(195mg，0.58mmol)和實(shí)施例149A的化合物(190mg，0.61mmol，1.1當(dāng)量)溶解于DMF(5.0ml)并將所述溶液冷卻到0℃。加入4-甲基嗎啉(203μl，1.84mmol，3當(dāng)量)和TCTU(326mg，0.92mmol，1.5當(dāng)量)并將所述混合物在室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。接著，將完全的混合物進(jìn)行色譜分離(方法45)并通過(guò)方法32進(jìn)行精制。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并進(jìn)行冷凍干燥。獲得146mg(47％理論值)的標(biāo)題化合物，其為固體。
HPLC(方法5)Rt＝3.89分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.94分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝511.1(100)[M+H]+. [α]20Na＝+15.9(c＝0.5，MeOH)。
實(shí)施例258A [N2-(叔丁氧羰基)-D-丙氨酰]-[(3S)-O4-甲基-3-羥基-L-天冬氨酰]-L-絲氨酸
將實(shí)施例257A的化合物(135mg，264μmol)在30mg的10％披鈀碳存在的情況下，在甲醇中(8.0ml)在室溫氫化2小時(shí)。過(guò)濾所述混合物以去除催化劑并濃縮，并將所述粗制產(chǎn)物進(jìn)行色譜分離(方法32)。產(chǎn)率117mg(定量)。
HPLC(方法5)Rt＝3.11分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.40分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝422.1(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C16H28N3O10計(jì)算值422.1770，實(shí)測(cè)值422.1776[M+H]+. 實(shí)施例259A [N2-(叔丁氧羰基)-D-丙氨酰]-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸
將實(shí)施例258A的化合物(116mg，275μmol)提供在5.0ml的乙腈中并冷卻到0℃；加入3.0ml的濃氨水溶液，并在0℃持續(xù)攪拌。用冰醋酸(1.2ml)終止反應(yīng)，濃縮并進(jìn)行色譜分離(方法32)。產(chǎn)率64mg(57％理論值) HPLC(方法6)Rt＝2.82分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.12分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝407.0(90)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝405.0(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C15H27N4O9計(jì)算值407.1773，實(shí)測(cè)值407.1781[M+H]+. 實(shí)施例260A [D-丙氨酰]-[(3S)-3-羥基-L-天冬氨酰-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
將實(shí)施例259A的化合物(63mg，155μmol)與2.0ml的試劑溶液根據(jù)操作方法2反應(yīng)30分鐘。在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下，獲得67mg(定量)的粗制標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝0.72分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝0.52分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝307(100)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C10H19N4O7計(jì)算值307.1249，實(shí)測(cè)值307.1245[M+H]+. 實(shí)施例261A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-D-丙氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸酯三氟乙酸鹽
在0℃，將實(shí)施例254A的化合物(32mg，32μmol)和實(shí)施例260A的化合物，13mg，32μmol，1當(dāng)量)溶解于DMF(1.5ml)并加入DIPEA(28μl，158μmol，5當(dāng)量)。將所述混合物在室溫?cái)嚢杓s16小時(shí)，接著根據(jù)方法45進(jìn)行色譜法。產(chǎn)率30mg(84％理論值)。
HPLC(方法6)Rt＝3.40分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.60分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝460.3(100)[M-Boc+2H]2+，1019.6(60)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C43H79N12O16計(jì)算值1019.5732，實(shí)測(cè)值1019.5716[M+H]+. 實(shí)施例262A [(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-D-丙氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸酯雙三氟乙酸鹽
將實(shí)施例261A的化合物(59mg，52μmol)與2.0ml的試劑溶液根據(jù)操作方法2反應(yīng)30分鐘。不經(jīng)過(guò)純化，獲得64mg(定量)的粗制標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝2.91分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.20分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝461(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg)m/z(％)＝918(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C38H71N12O14計(jì)算值919.5208，實(shí)測(cè)值919.5212[M+H]+. 實(shí)施例263A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-{(叔丁氧羰基)氨基}-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-D-丙氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸三氟乙酸鹽
根據(jù)制備實(shí)施例201A的化合物的方法，使實(shí)施例262A的化合物(92mg，80μmol)與實(shí)施例17A的化合物(51mg，88μmol，1.1當(dāng)量)進(jìn)行反應(yīng)。在通過(guò)色譜法純化后(方法44)，分離35mg(31％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝3.76分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.94分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝608.4(100)[M-Boc+2H]2+，1315.6(30)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝1313.7(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C60H95N14O19計(jì)算值1315.6893，實(shí)測(cè)值1315.6873[M+H]+. 實(shí)施例264A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-D-丙氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸雙三氟乙酸鹽
實(shí)施例262A的化合物(35mg，24μmol)與2.0ml的試劑溶液根據(jù)操作方法2反應(yīng)30分鐘。在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下，獲得37mg(定量)的粗制標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝3.20分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.36分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝608.3(100)[M+2H]2+，1215.7(5)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝1213.7(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C55H87N14O17計(jì)算值1215.6369，實(shí)測(cè)值1215.6340[M+H]+. 實(shí)施例265A [(3R)-N2-(芐氧基羰基)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-D-丙氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
根據(jù)制備實(shí)施例217A的化合物的方法，其中純化根據(jù)方法45進(jìn)行，從實(shí)施例264A的化合物(36mg，25μmol)獲得產(chǎn)率為46mg(48％理論值(約34％純度))的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝3.55分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.61分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝599.3(100)[M+2H]2+；1197.6(30)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝1195.6(100)，[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C55H85N14O16計(jì)算值1197.6263，實(shí)測(cè)值1197.6290[M+H]+. 實(shí)施例266A [(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-D-丙氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.9-N3.1-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
使實(shí)施例265A的化合物(46mg，純度約34％，約12μmol)在存在一刮勺尖10％披鈀碳的情況下，在甲醇中，在大氣壓下在室溫氫化1小時(shí)。過(guò)濾所述混合物以去除催化劑并濃縮。粗制產(chǎn)物(42g)進(jìn)行進(jìn)一步反應(yīng)，不經(jīng)過(guò)純化。
HPLC(方法6)Rt＝2.98分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.33分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝533(100)[M+2H]2+，1064(10)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝1062(100)[M]-. HR-TOF-MS(方法24)C47H79N14O14計(jì)算值1063.5895，實(shí)測(cè)值1063.5869[M+H]+. 實(shí)施例267A [N2-(叔丁氧基羰基)-3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-D-丙氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三氟乙酸鹽
根據(jù)制備實(shí)施例233A的化合物的方法，從實(shí)施例266A的化合物(34mg的粗制產(chǎn)物，約12μmol)和實(shí)施例8A的二肽(13mg，35μmol，約2.4當(dāng)量)獲得粗制產(chǎn)率為28mg的標(biāo)題化合物。在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況下，將所述產(chǎn)物用在下一個(gè)合成步驟中。
HPLC(方法6)Rt＝4.27分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝2.12分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝659.6(100)[M-Boc+2H]2+1417.8(50)[M+H]+. 實(shí)施例268A 外消旋N-(叔丁氧羰基)-3-(三甲基甲硅烷基)丙氨酸 合成根據(jù)Merget，K.Günther，M.Bernd，E.Günther，R.Tacke，J.Organomet.Chem.2001 628，183-194進(jìn)行。通過(guò)在手性相上的制備HPLC分離對(duì)映異構(gòu)體 Gilson Abimed HPLC，UV檢測(cè)器212nm，柱Daicel Chiralpak AD-H5μm；250 x 20mm；流速15ml/分鐘；洗脫劑A異已烷，洗脫劑B0.2％乙酸/1％水/2-丙醇；等度。
實(shí)施例269A (2S化合物或N-(叔丁氧羰基)-D-3-三甲基甲硅烷基丙氨酸)
制備HPLCRt＝4.16分鐘 [α]D20＝+1.1(c＝0.83，甲醇) 實(shí)施例270A (2R或N-(叔丁氧羰基)-L-3-三甲基甲硅烷基丙氨酸)
制備HPLCRt＝9.27分鐘 [α]D20＝-1.6(c＝0.66，甲醇) 實(shí)施例271A N-(叔丁氧羰基)-3-吡啶-3-基-L-丙氨酸甲酯
類似于B.Neises，W.Steglich，Org.Synth.1985，63，183-187. 在氬氣下，將(2S)-N-(叔丁氧羰基)-3-(3-吡啶基)丙氨酸(25.00g，93.88mmol)溶解于300ml的二氯甲烷。加入甲醇(11.4ml，9.02g，281mmol，3當(dāng)量)并加入DMAP的顆粒。接著，將所述混合物冷卻到0℃。加入EDC(19.80g，103mmol，1.1當(dāng)量)。在5分鐘后，去除冰浴，并將所述混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。接著，將所述混合物在真空中濃縮并將所述殘余物與乙酸乙酯混合，并用濃碳酸氫鈉提取。將水相用乙酸乙酯反萃取1次，并接著將合并的有機(jī)相用0.5M檸檬酸洗滌，隨后再次用濃碳酸氫鈉洗滌1次。將有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并在真空中濃縮。余下的澄清的油，在油泵真空下干燥后結(jié)晶。產(chǎn)率23.60g(84.2mmol，90％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝3.28分鐘。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ1.30(s，9H)，2.86(m，1H)，3.04(m，1H)，3.63(s，3H)，4.22(m，1H)，7.28-7.39(m，2H)，7.69(d，1H)，8.43(m，2H)。
LC-MS(方法18)Rt 1.21分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝281(100)[M+H]+. 實(shí)施例272A 3-[(2S)-2-氨基(ammonio)-3-甲氧基-3-氧代丙基]吡啶鎓雙(三氟乙酸鹽)
將化合物271A(11.8g，42.09mmol)溶解于在二氯甲烷中的30％TFA(160ml)并在室溫?cái)嚢?0分鐘。接著，將所述混合物在真空中濃縮。將所述殘余物置入少量的水中并進(jìn)行冷凍干燥。接著，將凍干物與甲苯混合并在真空中濃縮。最終，在油泵真空下將所述產(chǎn)物干燥到恒重。產(chǎn)率17.15g(定量)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝0.88分鐘。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ 2.79(dd，1H)，2.92(dd，1H)，3.60(s，3H)，3.63(m，1H)，7.30(m，1H)，7.62(d，1H)，8.41(m，2H)。
LC-MS(方法18)Rt0.46分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝181(100)[M+H]+. 實(shí)施例273A N-(叔丁氧羰基)-3-(三甲基甲硅烷基)-D-丙氨酰-3-吡啶-3-基-L-丙氨酸甲酯
在0℃，將化合物269A(10.31g，39.4mmol)和化合物272A(16.10g，39.4mmol，1當(dāng)量)溶解于DMF(186mL)。接著加入NMM(17.34ml，16.00g，4當(dāng)量)和HATU(22.49g，59.16mmol，1.5當(dāng)量)。將所述混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入叔丁基甲基醚，并將所述混合物用濃碳酸鈉洗滌。將所述水相用叔丁基甲基醚反萃取1次，并接著用1M檸檬酸水溶液洗滌合并的有機(jī)相，并再次用濃碳酸鈉洗滌，通過(guò)Na2SO4干燥，過(guò)濾并在真空中濃縮。通過(guò)硅膠(環(huán)已烷/乙酸乙酯2+1)進(jìn)行過(guò)濾。產(chǎn)率14.1g(84％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝3.91分鐘。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ-0.09(s，9H)，0.56-0.75(m，2H)，1.47(s，9H)，2.90(dd，1H)，3.09(dd，1H)，3.62(s，3H)，3.98(m，1H)，4.49(m，1H)，3.68(d，1H)，7.26(dd，1H)，7.61(m，1H)，8.20(d，1H)，8.40(m，2H)。
LC-MS(方法18)Rt1.90分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝424(50)[M+H]+. 實(shí)施例274A N-(叔丁氧羰基)-3-(三甲基甲硅烷基)-D-丙氨酰-3-吡啶-3-基-L-丙氨酸
將化合物273A(7.4g，17.56mmol)置入THF/水(6+4)中，冷卻到0℃，并加入一水合氫氧化鋰(1.47g，35.13mmol，2當(dāng)量)。將所述混合物0℃攪拌。在1小時(shí)后，加入另一當(dāng)量(0.74g)的一水合氫氧化鋰，并持續(xù)攪拌1小時(shí)。在真空中去除大部分的THF，并接著將pH通過(guò)加入檸檬酸調(diào)節(jié)到4。固體沉淀。將所述混合物用三份乙酸乙酯提取，在此過(guò)程中，固體溶解。將合并的有機(jī)相通過(guò)硫酸鈉干燥，過(guò)濾并濃縮。將所述粗制產(chǎn)物在Sephadex LH 20上通過(guò)色譜法(方法45)純化。產(chǎn)率6.67g(93％理論值)。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝3.73分鐘。
1H NMR(300MHz，d6-DMSO)δ-0.09(s，9H)，0.56-0.75(m，2H)，1.35(s，9H)，2.90(dd，1H)，3.09(dd，1H)，3.98(m，1H)，4.41(m，1H)，6.70(d，1H)，7.26(dd，1H)，7.60(m，1H)，8.00(d，1H)，8.37(m，2H)。
LC-MS(方法18)Rt 1.71分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝410(100)[M+H]+. 實(shí)施例275A (3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-L-苯丙氨酸
將示例性化合物16A(3.00g，7.24mmol)溶解于甲醇(60ml)，加入10％披鈀活性碳(50mg)，并將所述混合物在室溫在氫氣氛下和在大氣壓下攪拌6小時(shí)。接著，將所述混合物過(guò)濾以去除催化劑并濃縮。將粗制反應(yīng)產(chǎn)物(2.20g，再定量)用在下一個(gè)步驟中，不經(jīng)過(guò)純化。
HPLC(方法6)Rt＝3.21分鐘。
LC-MS(方法51)Rt＝1.55分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝281.3(30)[M+H]+，MS(ESIneg)m/z(％)＝279.1(100)[M-H]-. [α]20Na＝-23.4(c＝1.0，MeOH)。
1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝1.34(s，9H)，3.52(d，J＝4.6Hz，1H)，4.88(dd，J＝4.6，J＝8.4Hz，1H)，7.29(m，5H)，8.02(d，J＝8.6Hz，1H)。
HR-TOF-MSC14H21N2O4計(jì)算值281.1496，實(shí)測(cè)值281.1503[M+H]+. 實(shí)施例276A (βR)-β-[(叔丁氧羰基)氨基]-N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-苯丙氨酸
將示例性化合物275A(2.2g的粗制產(chǎn)物，7.24mmol)和(9H-芴-9-基甲氧基)羰基琥珀酰亞胺(2.90g，8.58mmol，1.2當(dāng)量)，以及碳酸鈉(1.18g，11.70mmol，1.5當(dāng)量)溶解于1，4-二噁烷-水(7+3)并在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。接著，將所述反應(yīng)物通過(guò)加入5％檸檬酸水溶液終止并用兩份乙酸乙酯提取。通過(guò)硫酸鈉干燥合并的有機(jī)提取物并濃縮，將所述殘余物用水和乙腈研磨。接著，根據(jù)方法34通過(guò)色譜法純化結(jié)晶的粗制產(chǎn)物。產(chǎn)率2.58g(66％理論值)，其為無(wú)色的固體。
HPLC(方法6)Rt＝4.86分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝2.51分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝503.2(70)[M+H]+，MS(ESIneg)m/z(％)＝501.3(100)[M-H]-. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝1.38(s，9H)，4.75(dd，J＝3.9，J＝9.8Hz，1H)，5.29(dd，J＝3.9，J＝10.0Hz1H)，7.21-7.60(m，13H)，7.87(d，J＝7.4Hz，1H)。
HR-TOF-MSC29H31N2O6計(jì)算值503.2177，實(shí)測(cè)值503.2158[M+H]+. 實(shí)施例277A (3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-苯丙氨酸五氟苯酯
將示例性化合物276A(2.58g，5.14mmol)和五氟苯酚(4.72g，25.68mmol，5當(dāng)量)溶解于二氯甲烷(350ml)，并冷卻到0℃。加入EDCI(1.48g，7.70mmol，1.5當(dāng)量)，并將所述混合物攪拌6小時(shí)，同時(shí)緩慢升溫到室溫。接著，將所述溶劑蒸餾除去并將所述殘余物根據(jù)方法34通過(guò)色譜法以數(shù)份進(jìn)行純化。產(chǎn)率2.80g(81％理論值)的標(biāo)題化合物，其為無(wú)色的固體。
HPLC(方法54)Rt＝5.09分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝3.34分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝6693.0(20)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝1.39(s，9H)，4.11-4.26(m，3H)，5.16(dd，J＝4.4，J＝9.5Hz，1H)，5.52(dd，J＝4.4，J＝10.0Hz，1H)，7.27-7.57(m，9H)，7.56(t，J＝6.6Hz，2H)，7.73(d，J＝10.3Hz，1H)，7.87(d，J＝7.4Hz，2H)，7.93(d，J＝9.6Hz，1H)。
HR-TOF-MSC35H30N2O6計(jì)算值669.2019，實(shí)測(cè)值669.1996[M+H]+. 實(shí)施例278A (3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-N2-(二苯基亞甲基)-L-亮氨酸乙酯
Mannich反應(yīng)是基于將烯醇化銅加到磺?；鶃啺飞系姆椒↙.Bernardi，A.Gothelf，R.G.Hazell，K.A.

J.Org.Chem.(有機(jī)化學(xué)雜志)2003，68，2583-2591進(jìn)行。[(1E)-苯基亞甲基]氨基甲酸叔丁酯可以根據(jù)文獻(xiàn)進(jìn)行制備A.Klepacz，A.Zwierzak，Tetrahedron Lett.(四面體通訊)200243；1079-1080。
將新鮮活化的

分子篩，四(乙腈)六氟磷酸銅(I)(293mg，0.79mmol，0.035當(dāng)量)和(R)-(+)-2-(2-(二苯基膦基)苯基)-4-異丙基-2-噁唑啉(335mg，0.90mmol，0.04當(dāng)量)在氬氣下提供并加入無(wú)水THF(228ml)。接著，將三乙胺(109μl，80mg，0.79mmol，0.035當(dāng)量)移入。將所述混合物冷卻到-20℃并只要達(dá)到該溫度，加入N-(二苯基亞甲基)甘氨酸乙酯(6.00g，22.44mmol)和[(1E)-苯基亞甲基]氨基甲酸叔丁酯(6.92g，40.4mmol，1.8當(dāng)量)。將所述混合物攪拌16小時(shí)，在此過(guò)程中使其緩慢達(dá)到室溫。接著加入硅膠(約15g)并將所述溶劑在真空中蒸餾除去。將所述殘余物上樣到用硅膠包裝的玻璃柱上，并用環(huán)已烷-乙酸乙酯9+1洗脫。標(biāo)題化合物(Rf＝0.22，CyHex-EtOAc 9+1)包含具有D-蘇型構(gòu)型的對(duì)映異構(gòu)體和更少量的(約36％)的具有赤型構(gòu)型的兩種對(duì)映異構(gòu)體，其在后面的階段被去除。所述產(chǎn)物對(duì)酸非常敏感，通過(guò)HPLC(方法6)和LC-MS(方法19)的研究一直顯示在色譜法條件下去除的二苯甲酮的比例。產(chǎn)率2.66g(27％理論值)。
LC-MS(方法19)Rt＝3.23分鐘(21％，赤型)，MS(ESIpos)m/z(％)＝439.4(100)[M+H]+和3.23分鐘(48％，蘇型)，MS(ESIpos)m/z(％)＝439.3(100)[M+H]+. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝0.62(d，J＝6.6Hz，3H)，0.83(d，J＝6.6Hz，3H)，1.13(t，J＝7.1Hz，3H)，1.38(s，9H)，1.61(m，1H)，3.74(ddd，J1＝2.7，J2＝J3＝9.6Hz，1H)，3.96(d，J＝2.7Hz，1H)，3.99-4.06(m，2H)，6.51(d，J＝10.0Hz，1H)，7.07(m，2H)，7.38-7.52(m，6H)，7.67-7.77(m，2H)。
HR-TOF-MSC26H35N2O4計(jì)算值439.2592，實(shí)測(cè)值439.2606[M+H]+. 實(shí)施例279A (3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-L-亮氨酸乙酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例278A的標(biāo)題化合物(4.44g，10.12mmol)溶解于二氯甲烷(87ml)，加入857μl的TFA(11.13mmol，1.1當(dāng)量)和水(273μl，15.18μmol，1.5當(dāng)量)，并將所述混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。將反應(yīng)混合物的所有的揮發(fā)性成分在真空中蒸餾除去，并將所述殘余物(5.97g)用在下一個(gè)階段中，而不經(jīng)過(guò)純化。
HPLC(方法6)Rt＝3.41分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.31分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝275.2(50)[M+H]+. 實(shí)施例280A (3R)-N2-(芐氧基)羰基-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-L-亮氨酸乙酯
將示例性化合物279A(5.97g的粗制產(chǎn)物，約10.11mmol)和芐氧基羰基琥珀酰亞胺(3.02g，12.13mmol，1.2當(dāng)量)溶解于二氯甲烷-水(4+1)，并將所述混合物冷卻到0℃。在劇烈攪拌的同時(shí)，加入碳酸氫鈉(2.55g，30.33mmol，3當(dāng)量)和碘化四丁基銨(373mg，1.01mmol，0.1當(dāng)量)，并將所述混合物在室溫劇烈攪拌16小時(shí)。將有機(jī)相分離除去，用濃NaCl洗滌，通過(guò)硫酸鈉干燥并濃縮。根據(jù)方法34以數(shù)份分離粗制產(chǎn)物，去除二苯甲酮和部分的赤型非對(duì)映異構(gòu)體。共獲得1.65g的標(biāo)題化合物(4.03mmol，40％的理論值) Rf＝0.076(CyHex-EtOAc 9+1)。
HPLC(方法54)Rt＝4.33分鐘(赤型非對(duì)映異構(gòu)體)和4.52分鐘(蘇型非對(duì)映異構(gòu)體)。
LC-MS(方法19)Rt＝2.71分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝409.3(30)[M+H]+，赤型異構(gòu)體和Rt＝2.75分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝409.0(70)[M+H]+蘇型異構(gòu)體)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝0.71-0.86(m，6H)，1.16(t，J＝7.1Hz，3H)，1.34(s，9H)，1.59(m，1H)，3.70(ddd，J＝3.4，J1＝J2＝10.3Hz，1H)，3.99-4.08(m，2H)，4.32(dd，J＝3.4，J＝9.5Hz，1H)，5.03(d，J＝12.4Hz，1H)，5.10(d，J＝12.4Hz，1H)，6.62(d，J＝10.5Hz，1H)，7.31-7.40(m，5H)，7.44(d，J＝9.3Hz，1H)。
HR-TOF-MSC21H33N2O6計(jì)算值409.2334，實(shí)測(cè)值409.2329[M+H]+. 實(shí)施例281A (3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-N2-(芐氧基)羰基-L-亮氨酸
在0℃，將實(shí)施例280A的標(biāo)題化合物(2.78g，6.82mmol)溶解于THF-水混合物(1+1，40ml)，加入一水合氫氧化鋰(629mg，15.0mmol，2.2當(dāng)量)并將所述混合物0℃攪拌3小時(shí)。接著將THF蒸餾除去，并將水性殘余物用1M檸檬酸酸化并用兩份的乙酸乙酯提取。將合并的有機(jī)提取物通過(guò)硫酸鈉干燥并濃縮。根據(jù)方法55，在手性相上通過(guò)色譜法分離粗制殘余物(2.42g，93％理論值)。在該情形中，分別單獨(dú)獲得蘇型非對(duì)映異構(gòu)體的對(duì)映異構(gòu)體和較少的赤型非對(duì)映異構(gòu)體的那些。在手性色譜法后的主要異構(gòu)體(標(biāo)題化合物)的e.e.根據(jù)方法56確定并且是100％。標(biāo)題化合物的產(chǎn)率是780mg(30％理論值，基于起始化合物280A)。
HPLC(方法6)Rt＝4.51分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝2.44分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝381.1(30)[M+H]+，MS(ESIneg)m/z(％)＝379.2(100)[M-H]-. 1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝0.82(d，J＝9.3Hz，3H)，0.85(d，J＝6.6Hz，3H)，1.35(s，9H)，3.72(ddd，J1＝3.2，J2＝J3＝10.0Hz，1H)，4.26(dd，J＝3.2，J＝9.6Hz，1H)，5.03(d，J＝12.7Hz，1H)，5.08(d，J＝12.4Hz，1H)，6.63(d，J＝10.5Hz，1H)，7.31-7.40(m，6H)，12.62(br s，1H)。
HR-TOF-MSC19H28N2O6Na計(jì)算值403.1845，實(shí)測(cè)值403.1832[M+Na]+. 手性HPLC(方法56)Rt＝8.97分鐘。
實(shí)施例282A (3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-N2-(芐氧基)羰基氨基-L-亮氨酸五氟苯酯
將示例性化合物281A(100mg，263μmol)和五氟苯酚(242mg，1.31mmol，5當(dāng)量)在室溫溶解于二氯甲烷(20ml)，并接著加入EDCI(76mg，394μmol，1.5當(dāng)量)，將所述混合物置于冰箱中約12小時(shí)。將所述溶劑隨后在真空中蒸餾除去，并將所述殘余物通過(guò)色譜法進(jìn)行純化(方法32)。獲得產(chǎn)率為132mg(92％理論值)的標(biāo)題化合物，其為無(wú)色的固體。
HPLC(方法54)Rt＝4.89分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝3.19分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝547.2(40)[M+H]+. 實(shí)施例283A N2-(叔丁氧羰基)-3-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}-L-丙氨酰-L-絲氨酸芐酯
將實(shí)施例149A的化合物(2.08g，6.73mmol)和N-(叔丁氧羰基)-3-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}-L-丙氨酸(22.73g，6.39mmol，0.95當(dāng)量)溶解于DMF(32mL)并冷卻到0℃。加入HATU(3.84g，10.09mmol，1.5當(dāng)量)和4-甲基嗎啉(2.22mL，20.18mmol，3當(dāng)量)。接著將所述混合物在室溫?cái)嚢?.5小時(shí)。將完全的混合物隨后上樣到Sephadex LH20柱并根據(jù)方法45進(jìn)行色譜法。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并根據(jù)方法34純化。產(chǎn)率2.41g(59％理論值)，其為無(wú)色的固體。
HPLC(方法6)Rt＝4.81分鐘。
LC-MS(方法51)Rt＝3.94分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝504.4(100)[M-BOC+H+]+，604.4(40)[M+H]+. [α]20Na＝+1.5(c＝0.5，MeOH)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝1.36(s，9H)，3.18(m，1H)，3.66(m，1H)，3.75(m，1H)，4.15-4.28(m，4H)，4.42(m，1H)，5.90(t，J＝5.6Hz，1H)，5.20(s，2H)，6.82(d，J＝8.04Hz，1H)，7.21(m，1H)，7.31-7.43(m，10H)，7.67(d，J＝7.8Hz，1H)，7.89(d，J＝7.6Hz，1H)，8.14(d，J＝7.6Hz，1H)。
HR-TOF-MSC33H38N3O8計(jì)算值604.2654，實(shí)測(cè)值604.2646[M+H]+. 實(shí)施例284A 3-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}-L-丙氨酰-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將示例性化合物283A(2.39g，3.96mmol)，根據(jù)操作方法2反應(yīng)。獲得2.96g(定量)的粗制標(biāo)題化合物并在不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步純化的情況進(jìn)一步反應(yīng)。
HPLC(方法6)Rt＝3.84分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝3.14分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝504.0(100)[M+H]+. [α]20Na＝-0.5(c＝1.0，MeOH)。
HR-TOF-MSC28H30N3O6計(jì)算值504.2130，實(shí)測(cè)值504.2140[M+H]+. 實(shí)施例285A [N-(叔丁氧羰基)甘氨酰]-[3-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}-L-丙氨酰]-L-絲氨酸芐酯
將示例性化合物284A(2.90g，～83％純度，3.89mmol)和N-叔丁氧羰基甘氨酸(751mg，4.29mmol，1當(dāng)量)溶解于DMF(20ml)并冷卻到0℃。加入HATU(2.22g，5.85mmol，1.5當(dāng)量)和4-甲基嗎啉(2.14ml，19.49mmol，5當(dāng)量)。將反應(yīng)混合物在0℃攪拌2.5小時(shí)，并接著通過(guò)加入5％檸檬酸水溶液終止反應(yīng)并用5份MTBE提取。干燥合并的有機(jī)提取物(硫酸鈉)并濃縮。將所述粗制產(chǎn)物通過(guò)色譜法純化(方法34)。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并進(jìn)行冷凍干燥。產(chǎn)率1.54g(60％理論值)，其為無(wú)色的固體。
HPLC(方法3)Rt＝4.64分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝2.65分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝661.2(100)[M+H]+. [α]20Na＝-8.7(c＝0.5，MeOH)。
HR-TOF-MSC35H41N4O9計(jì)算值661.2869，實(shí)測(cè)值661.2864[M+H]+. 實(shí)施例286A 甘氨酰]-[3-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}-L-丙氨酰]-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將實(shí)施例285A的標(biāo)題化合物(88mg，0.20mmol)，根據(jù)操作方法2反應(yīng)。將粗制產(chǎn)物進(jìn)行進(jìn)一步的反應(yīng)，而無(wú)需進(jìn)一步純化。產(chǎn)率1.84g(定量) HPLC(方法3)Rt＝3.78分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.74分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝561.2(100)[M+H]+. [α]20Na＝0.0(c＝1.0，MeOH)。
HR-TOF-MSC30H33N4O7計(jì)算值561.2344，實(shí)測(cè)值561.2343[M+H]+. 實(shí)施例287A [(3R)-N2-(叔丁氧羰基)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[3-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}-L-丙氨酰]-L-絲氨酸芐酯三氟乙酸鹽
將示例性化合物32A(701mg，830μmol)和286A(700mg，830μmol，1當(dāng)量)溶解于DMF(11.2ml)，并將所述溶液冷卻到0℃。加入4-甲基嗎啉(274μl，2.49mmol，3當(dāng)量)和HATU(473mg，1.25mmol，1.5當(dāng)量)，并將所述混合物0℃攪拌3小時(shí)。接著將完全的混合物置于Sephadex LH-20柱并根據(jù)方法45進(jìn)行色譜法。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分，濃縮并根據(jù)方法34進(jìn)行純化。合并包含產(chǎn)物的級(jí)分并進(jìn)行冷凍干燥。獲得643mg(56％理論值)的標(biāo)題化合物，其為無(wú)色的固體。
HPLC(方法6)Rt＝4.27分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝2.13分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝1273.9(30)[M+H]+，MS(ESIneg)m/z(％)＝1317.9(100)[M+HCOO-]-. HR-TOF-MSC63H93N12O16計(jì)算值1273.6826，實(shí)測(cè)值1273.6851[M+H]+. 實(shí)施例288A [(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[3-{[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]氨基}-L-丙氨酰]-L-絲氨酸芐酯雙三氟乙酸鹽
將化合物287A(643mg，463μmol)，根據(jù)操作方法2反應(yīng)。獲得以約定量產(chǎn)率(783mg)的粗制標(biāo)題化合物并不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的純化而進(jìn)行反應(yīng)。
HPLC(方法5)Rt＝3.61分鐘。
LC-MS(方法51)Rt＝2.53分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝588.1(100)[M+2H]2+. HR-TOF-MSC58H85N12O14計(jì)算值1173.6306，實(shí)測(cè)值1173.6304[M+H]+. 聚合物結(jié)合的肽 實(shí)施例289A 聚合物結(jié)合的N-(叔丁氧基羰基)-O-叔丁基-L-蘇氨酰-L-亮氨酰-N5-(亞氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基-3，4-二氫-2H-色烯-6-基)磺?；鵠氨基}甲基)-D-鳥(niǎo)氨酰-L-異亮氨酰-O-叔丁基-L-別蘇氨酰-甘氨酰-O-叔丁基-L-絲氨酰-O-叔丁基-L-絲氨酸
將34.00g(50.66mmol)的2-氯三苯甲基-樹(shù)脂(Iris Biotech，CAS No42074-68-0，負(fù)載1.49mmol/g)提供在400ml的二氯甲烷中，并加入67.989g(177.31mmol)的O-叔丁基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-絲氨酸和65.476g(506.60mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。加入5ml的甲醇，并將所述混合物在室溫振蕩30分鐘。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌3次，每次分別用400ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將樹(shù)脂與400ml 20％的哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液混合，振蕩30分鐘并通過(guò)吸濾收集。
將以這種方式獲得的樹(shù)脂提供在400ml的二甲基甲酰胺中，并加入48.564g(126.65mmol)的O-叔丁基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-絲氨酸，40.665g(126.65mmol)的N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)-亞甲基]-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和24.553g(189.975mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌3次，每次分別用400ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將樹(shù)脂與400ml的20％的哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液混合，振蕩30分鐘并通過(guò)吸濾收集。
將以這種方式獲得的樹(shù)脂提供在400ml的二甲基甲酰胺，并加入37.665g(126.65mmol)的N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-甘氨酸，40.665g(126.65mmol)的N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和24.553g(189.975mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌3次，每次分別用400ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將樹(shù)脂與400ml的20％的哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液混合，振蕩30分鐘并通過(guò)吸濾收集。
將以這種方式獲得的樹(shù)脂提供在400ml的二甲基甲酰胺中，并加入50.340g(126.65mmol)的O-叔丁基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-別蘇氨酸，40.665g(126.65mmol)的N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和24.553g(189.975mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌3次，每次分別用400ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將樹(shù)脂與400ml的20％的哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液混合，振蕩30分鐘并通過(guò)吸濾收集。
將以這種方式獲得的32g(47.68mmol；設(shè)想的1.49mmol/g負(fù)載)的樹(shù)脂提供在400ml的二甲基甲酰胺中，并加入42.128g(119.20mmol)的N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-異亮氨酸，38.273g(119.20mmol)的N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和23.109g(178.80mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌3次，每次分別用400ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。因?yàn)榕悸?lián)不完全(根據(jù)HPLC)，再次加入400ml的二甲基甲酰胺，25.277g(71.52mmol)的N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-異亮氨酸，22.964g(71.52mmol)的N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和13.865g(107.28mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)，并將所述混合物振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌3次，每次分別用400ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將樹(shù)脂與400ml的20％的哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液，振蕩30分鐘，通過(guò)吸濾收集并在真空中干燥。
將以這種方式獲得的14g(20.86mmol；設(shè)想的1.49mmol/g負(fù)載)的樹(shù)脂提供在200ml的二甲基甲酰胺，并加入34.566g(52.15mmol)的N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N5-(亞氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基-3，4-二氫-2H-色烯-6-基)磺?；鵠氨基}甲基)-D-鳥(niǎo)氨酸，16.745g(52.15mmol)N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和13.48g(104.30mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌3次，每次分別用200ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將樹(shù)脂與200ml的在二甲基甲酰胺中的20％哌啶溶液混合，振蕩30分鐘，通過(guò)吸濾收集并在真空中干燥。
將以這種方式獲得的樹(shù)脂提供在200ml的二甲基甲酰胺中，并加入18.431g(52.15mmol)的N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-亮氨酸，16.745g(52.15mmol)的N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和13.480g(104.30mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌3次，每次分別用200ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將樹(shù)脂與200ml的哌啶在二甲基甲酰胺中的20％溶液混合，振蕩30分鐘，通過(guò)吸濾收集并在真空中干燥。
將以這種方式獲得的2.0g(2.98mmol；設(shè)想的1.49mmol/g負(fù)載)的樹(shù)脂提供在20ml的二甲基甲酰胺中，并加入2.462g(8.94mmol)的N-(叔丁氧羰基)-O-叔丁基-L-蘇氨酸，2.870g(8.94mmol)的N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和2.311g(17.88mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌3次，每次分別用20ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷，并通過(guò)吸濾收集。
實(shí)施例290A N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]甘氨酰-L-絲氨酸
將1g(0.62mmol)的Wang樹(shù)脂(默克生物科學(xué)(Merck Biosciences)；負(fù)載0.62mmol/g)用O-叔丁基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-絲氨酸預(yù)先負(fù)載，用哌啶如下連續(xù)處理兩次將所述樹(shù)脂與10ml的20％的哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液混合，振蕩30分鐘并通過(guò)吸濾收集。將以這種方式獲得的樹(shù)脂提供在10ml的二甲基甲酰胺中，并加入369mg(1.24mmol)的N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]甘氨酸，398mg(1.24mmol)的N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和240mg(1.86mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌三次，每次分別用10ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷，并通過(guò)吸濾收集。加入20ml的50％三氟乙酸在二氯甲烷中的溶液并留待作用60分鐘，通過(guò)在玻璃料上過(guò)濾去除樹(shù)脂并將所述樹(shù)脂用10ml的二氯甲烷洗滌三次。濃縮濾液并獲得目標(biāo)化合物作為粗制產(chǎn)物。
LC-MS(方法LC-MS(方法19)Rt＝2.10分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝)385.0[M+H]+. 實(shí)施例291A 聚合物結(jié)合的[N-叔丁氧基羰基-(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[N5-(亞氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基-3，4-二氫-2H-色烯-6-基)磺?；鵠氨基}-甲基)-D-鳥(niǎo)氨酰]-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[O3-叔丁基-L-絲氨酰]-O3-叔丁基-L-絲氨酸
將1g(0.62mmol)的Wang樹(shù)脂(默克生物科學(xué)(Merck Biosciences)；負(fù)載0.62mmol/g)用O-叔丁基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-絲氨酸預(yù)先負(fù)載，用哌啶如下連續(xù)處理兩次將所述樹(shù)脂與10ml的20％的哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液混合，振蕩30分鐘并通過(guò)吸濾收集。將以這種方式獲得的樹(shù)脂提供在10ml的二甲基甲酰胺中并加入477mg(1.24mmol)的示例性化合物290A，398mg(1.24mmol)的N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和320mg(2.48mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌三次，每次分別用10ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷，并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將所述樹(shù)脂與10ml的20％的哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液混合，振蕩30分鐘并通過(guò)吸濾收集。
將以這種方式獲得的樹(shù)脂提供在10ml的二甲基甲酰胺中，并加入423mg(1.24mmol)的N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-D-別蘇氨酸，399mg(1.24mmol)的N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和320mg(2.48mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌三次，每次分別用10ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將所述樹(shù)脂與10ml的20％哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液混合，振蕩30分鐘并通過(guò)吸濾收集。
將以這種方式獲得的樹(shù)脂提供在10ml的二甲基甲酰胺中，并加入438mg(1.24mmol)的N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-異亮氨酸，399mg(1.24mmol)的N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和240mg(1.86mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌三次，每次分別用10ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將所述樹(shù)脂與10ml的20％哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液混合，振蕩30分鐘并通過(guò)吸濾收集。
將以這種方式獲得的樹(shù)脂提供在10ml二甲基甲酰胺中，并加入821mg(1.24mmol)的N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N5-(亞氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基-3，4-二氫-2H-色烯-6-基)磺?；鵠氨基}甲基)-D-鳥(niǎo)氨酸，399mg(1.24mmol)的N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和240mg(1.86mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌三次，每次分別用10ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將所述樹(shù)脂與10ml的20％哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液混合，振蕩30分鐘并通過(guò)吸濾收集。
將以這種方式獲得的812mg(0.503mmol)的樹(shù)脂提供在10ml的二甲基甲酰胺中，并加入370mg(1.01mmol)的N-[(9H-芴-9-基甲氧基)-羰基]-4-甲基-L-亮氨酸，323mg(1.01mmol)的N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基)-(二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和195mg(1.51mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌三次，每次分別用10ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將所述樹(shù)脂與10ml的20％哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液混合，振蕩30分鐘并通過(guò)吸濾收集。
將以這種方式獲得的樹(shù)脂提供在10ml二甲基甲酰胺中，并加入157mg(0.633mmol)的N-(叔丁氧羰基)-(3R)-3-羥基-L-亮氨酸，203mg(0.633mmol)的N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和196mg(1.52mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌三次，每次分別用二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將所述樹(shù)脂與10ml的20％哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液混合，振蕩30分鐘并通過(guò)吸濾收集。
實(shí)施例292A 聚合物結(jié)合的[N-叔丁氧基羰基-(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-[3-三甲基甲硅烷基-L-丙氨酰]-[N5-(亞氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基-3，4-二氫-2H-色烯-6-基)磺?；鵠氨基}甲基)-D-鳥(niǎo)氨酰]-L-異亮氨酰-[O-叔丁基-L-別蘇氨酰]-甘氨酰-[O3-叔丁基-L-絲氨酰]-O3-叔丁基-L-絲氨酸
將1g的Wang樹(shù)脂(Rapp聚合物；負(fù)載1.28mmol/g)引入10ml的二甲基甲酰胺中。加入982mg(2.56mmol)的O-叔丁基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-絲氨酸，910mg(2.56mmol)的N-{[(6-氯-1H-苯并三唑-1-基)氧基](二甲基氨基)亞甲基}-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TCTU)和496mg(3.84mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌三次，每次分別用10ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將所述樹(shù)脂與10ml的20％哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液混合，振蕩30分鐘，并通過(guò)吸濾收集。
使用相同比率量并在所述條件下(直接見(jiàn)上)，進(jìn)行與O-叔丁基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-絲氨酸的另外的偶聯(lián)。
將以這種方式獲得的樹(shù)脂提供在10ml二甲基甲酰胺中，并加入761mg(2.56mmol)的N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]甘氨酸，910mg(2.56mmol)的N-{[(6-氯-1H-苯并三唑-1-基)氧基](二甲基氨基)亞甲基}-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TCTU)和496mg(3.84mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩5小時(shí)。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌三次，每次分別用二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將所述樹(shù)脂與10ml的20％哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液混合，振蕩30分鐘并通過(guò)吸濾收集。
將以這種方式獲得的樹(shù)脂提供在10ml二甲基甲酰胺中，并加入1.017g(2.56mmol)的O-叔丁基-N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-D-別蘇氨酸，910mg(2.56mmol)的N-{[(6-氯-1H-苯并三唑-1-基)氧基](二甲基氨基)亞甲基}-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TCTU)和496mg(3.84mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌三次，每次分別用二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將所述樹(shù)脂與10ml的20％哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液混合，振蕩30分鐘并通過(guò)吸濾收集。
將以這種方式獲得的樹(shù)脂提供在10ml二甲基甲酰胺中，并加入904mg(2.56mmol)的N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-L-異亮氨酸，822mg(2.56mmol)的N-{[(1H-苯并三唑-1-基)氧基](二甲基氨基)亞甲基}-N-甲基-甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和496mg(3.84mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌三次，每次分別用二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷，并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將所述樹(shù)脂與10ml的20％哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液混合，振蕩30分鐘并通過(guò)吸濾收集。
將以這種方式獲得的樹(shù)脂提供在10ml二甲基甲酰胺中，并加入1.697g(2.56mmol)的N2-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-N5-(亞氨基{[(2，2，5，7，8-五甲基-3，4-二氫-2H-色烯-6-基)磺?；鵠氨基}甲基)-D-鳥(niǎo)氨酸，822mg(2.56mmol)的N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和662mg(5.12mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌三次，每次分別用10ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將所述樹(shù)脂與10ml的20％哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液混合，振蕩30分鐘并通過(guò)吸濾收集。
將以這種方式獲得的樹(shù)脂提供在10ml二甲基甲酰胺中，并加入982mg(2.56mmol)的N-[(9H-芴-9-基甲氧基)羰基]-3-(三甲基甲硅烷基)-L-丙氨酸(allanine)，822mg(2.56mmol)的N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基(二甲基氨基)-亞甲基]-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和662mg(5.12mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌三次，每次分別用10ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。隨后將所述固體用哌啶如下連續(xù)處理兩次將所述樹(shù)脂與10ml的20％哌啶在二甲基甲酰胺中的溶液混合，振蕩30分鐘并通過(guò)吸濾收集。
將以這種方式獲得的樹(shù)脂提供在10ml二甲基甲酰胺中，并加入261mg(0.705mmol)的蘇型N-(叔丁氧羰基)-(3R)-3-羥基-L-亮氨酸，339mg(1.057mmol)的N-[(1H-苯并三唑-1-基氧基)(二甲基氨基)亞甲基]-N-甲基甲銨四氟硼酸鹽(TBTU)和273mg(2.114mmol)的N-乙基-N-異丙基丙烷-2-胺(DIEA)。將所述混合物在室溫振蕩過(guò)夜。通過(guò)吸濾收集所述固體，洗滌三次，每次用10ml的二甲基甲酰胺，甲醇和二氯甲烷并通過(guò)吸濾收集。
在下表中描述的化合物293A-458A根據(jù)指定的方法從指定的原材料制備。











去保護(hù)的八肽











保護(hù)的九肽














部分去保護(hù)的九肽














環(huán)化















環(huán)化產(chǎn)物的去保護(hù)















N-端二肽片段的連接



















實(shí)施例459A [(苯基磺?；?(吡啶-3-基)甲基]氨基甲酸叔丁酯
將吡啶-3-甲醛(5.36g，50mmol)，氨基甲酸叔丁酯(11.7g，100mmol，2當(dāng)量)，苯亞磺酸鈉(20.36g，124mmol，2.48當(dāng)量)，甲酸(1.89ml，2.30g，1當(dāng)量)，甲醇(55ml)和水(111ml)混合并在室溫劇烈攪拌3天。沉淀無(wú)色晶體形式的產(chǎn)物，其通過(guò)過(guò)濾收集，用水和少量MTBE洗滌并在真空中干燥。產(chǎn)率4.10g(24％理論值)。
LC-MS(方法51)Rt＝2.51分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝349.3(100)[M+H]+. 實(shí)施例460A [(吡啶-3-基)亞甲基]氨基甲酸叔丁酯
將碳酸鉀(4.78g，34mmol，6當(dāng)量)在真空中加熱干燥并用THF層(70mL)覆蓋。將所述混合物加熱到回流16小時(shí)，接著使其冷卻并通過(guò)硅藻土層過(guò)濾。濃縮濾液并將油性殘余物(1.33g的粗制產(chǎn)物，定量)進(jìn)行反應(yīng)不經(jīng)過(guò)進(jìn)一步的純化。
實(shí)施例461A 外消旋-蘇型-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-N2-(二苯基亞甲基)-3-吡啶-3-基-丙氨酸乙酯
所述反應(yīng)基于將烯醇化銅加入磺酰亞胺的方法進(jìn)行L.Bernardi，A.Gothelf，R.G.Hazell，K.A.

J.Org.Chem.(有機(jī)化學(xué)雜志)2003，68，2583-2591。[(1E)-苯基亞甲基]氨基甲酸叔丁酯可以根據(jù)文獻(xiàn)進(jìn)行制備A.Klepacz，A.Zwierzak，Tetrahedron Lett.(四面體通訊)200243；1079-1080。
將新鮮活化的3

分子篩，四(乙腈)六氟磷酸銅(I)(179mg，0.48mmol，0.1當(dāng)量)和(R)-(+)-2-(2-(二苯基膦基)苯基)-4-苯基-2-噁唑啉(329mg，0.53mmol，0.11當(dāng)量)在氬氣下提供并加入無(wú)水THF(41ml)。接著，將三乙胺(67μl，49mg，0.48mmol，0.1當(dāng)量)移入。將所述混合物冷卻到-20℃并只要達(dá)到該溫度，加入N-(二苯基亞甲基)甘氨酸乙酯(1.29g，4.81mmol)和示例性化合物459A(1.19g，5.77mmol，1.2當(dāng)量)。將所述混合物攪拌16小時(shí)，在此過(guò)程中使其緩慢達(dá)到室溫。接著加入硅膠(約15g)并將所述溶劑在真空中蒸餾除去。將所述殘余物用環(huán)已烷-乙酸乙酯9+1進(jìn)行色譜分離(具有ZIF-SIM35的Biotage 40M)。獲得產(chǎn)率1.85g的標(biāo)題化合物(95％純，77％理論值)。
LC-MS(方法51)Rt＝3.55分鐘MS(ESIpos)m/z(％)＝474.3(100)[M+H]+. 實(shí)施例462A 外消旋-蘇型-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-3-吡啶-3-基-丙氨酸乙酯三氟乙酸鹽
將來(lái)自實(shí)施例461A的標(biāo)題化合物(350mg，0.74mmol)溶解于乙腈(9.33ml)并且加入187μl的TFA(2.42mmol，3.3當(dāng)量)和水(187μl，10.4μmol，14當(dāng)量)，將所述混合物在4℃靜置16小時(shí)。將反應(yīng)混合物的所有的揮發(fā)性成分在真空中蒸餾除去，并通過(guò)色譜法純化所述殘余物(方法34)。產(chǎn)率366mg(92％理論值)。
HPLC(方法6)Rt＝3.03分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.32分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝310.0(80)[M+H]+. HR-TOF-MSC15H24N3O4計(jì)算值310.1762，實(shí)測(cè)值310.1767[M+H]+. 實(shí)施例463A 外消旋-蘇型-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-N2-(芐氧基)羰基氨基-3-吡啶-3-基-丙氨酸乙酯
將示例性化合物462A(366mg，0.68mmol)和芐氧基羰基琥珀酰亞胺(209mg，0.82mmol，1.2當(dāng)量)溶解于5ml的二氯甲烷-水(4+1)，并將所述混合物冷卻到0℃。在劇烈攪拌的同時(shí)，加入碳酸氫鈉(86mg，1.03mmol，1.5當(dāng)量)和四丁基溴化銨(11mg，34μmol，0.05當(dāng)量)，并將所述混合物在室溫劇烈攪拌16小時(shí)。分離除去有機(jī)相，用濃NaCl洗滌，通過(guò)硫酸鈉干燥并濃縮。將所述粗制產(chǎn)物進(jìn)行色譜分離(方法34)。產(chǎn)率314mg(84％純度，0.60mmol，88％理論值)的標(biāo)題化合物。
Rf＝0.076(CyHex-EtOAc9+1)。
HPLC(方法54)Rt＝4.33分鐘(赤型非對(duì)映異構(gòu)體)和4.52分鐘(蘇型非對(duì)映異構(gòu)體)。
LC-MS(方法19)Rt＝2.71分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝409.3(30)[M+H]+，赤型異構(gòu)體和Rt＝2.75分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝409.0(70)[M+H]+蘇型異構(gòu)體)。
1H NMR(400MHz，d6-DMSO)δ(ppm)＝0.71-0.86(m，6H)，1.16(t，J＝7.1Hz，3H)，1.34(s，9H)，1.59(m，1H)，3.70(ddd，J＝3.4，J1＝J2＝10.3Hz，1H)，3.99-4.08(m，2H)，4.32(dd，J＝3.4，J＝9.5Hz，1H)，5.03(d，J＝12.4Hz，1H)，5.10(d，J＝12.4Hz，1H)，6.62(d，J＝10.5Hz，1H)，7.31-7.40(m，5H)，7.44(d，J＝9.3Hz，1H)。
HR-TOF-MSC21H33N2O6計(jì)算值409.2334，實(shí)測(cè)值409.2329[M+H]+. 實(shí)施例464A (3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-N2-(芐氧基)羰基氨基-3-吡啶-3-基-L-丙氨酸
在0℃，將來(lái)自實(shí)施例463A的標(biāo)題化合物(314mg，0.56mmol)溶解于THF-水混合物(2+1，17ml)，加入一水合氫氧化鋰(25mg，0.59mmol，1.1當(dāng)量)并將所述混合物0℃攪拌3小時(shí)。接著將THF蒸餾除去，并冷凍干燥水性殘余物，接著通過(guò)色譜法(方法44)進(jìn)行純化。根據(jù)方法58，通過(guò)在手性相上的色譜法分離所述產(chǎn)物。由此分別單獨(dú)獲得蘇型非對(duì)映異構(gòu)體的對(duì)映異構(gòu)體和少量赤型非對(duì)映異構(gòu)體的那些。在手性色譜法后，通過(guò)方法59確定主要異構(gòu)體(標(biāo)題化合物)的e.e.，其是100％。標(biāo)題化合物的產(chǎn)率是113mg(38％理論值基于起始化合物463A。
HPLC(方法6)Rt＝3.53分鐘。
手性HPLC(方法59)Rt＝4.71分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.85分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝416.2(100)[M+H]+，MS(ESIneg)m/z(％)＝414.1.2(100)[M-H]-. HR-TOF-MSC21H26N3O6計(jì)算值416.1817，實(shí)測(cè)值416.1808[M+H]+. 實(shí)施例465A (3R)-3-[(叔丁氧羰基)氨基]-N2-(芐氧基)羰基氨基-3-吡啶-3-基-L-丙氨酸五氟苯酯
將示例性化合物464A(63mg，119μmol)和五氟苯酚(24mg，131μmol，1.1當(dāng)量)在室溫溶解于二氯甲烷(0.8ml)并接著加入EDCI(25mg，131μmol，1.1當(dāng)量)，將所述混合物在冰箱中靜置約12小時(shí)。將所述溶劑隨后在真空中蒸餾除去，并將所述殘余物通過(guò)色譜法進(jìn)行純化(方法44)。獲得產(chǎn)率為47mg(51％理論值)的標(biāo)題化合物，其為無(wú)色的固體。
HPLC(方法54)Rt＝4.49分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝2.74分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝582.2(40)[M+H]+. HR-TOF-MSC27H25N3O6F5計(jì)算值582.1659，實(shí)測(cè)值582.1647[M+H]+. 在下列表中列出的化合物466A-470A通過(guò)指定的方法從指定的原材料進(jìn)行制備。




示例性實(shí)施方案 實(shí)施例1 [3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
在1小時(shí)后，根據(jù)操作方法4通過(guò)氫解作用，在二噁烷和0.1％TFA水溶液(1ml，10當(dāng)量)中，將保護(hù)基從芐氧基羰基-保護(hù)的肽(實(shí)施例53A，1.5mg，0.89μmol)去除。在通過(guò)制備HPLC精制后(方法26)獲得1.3mg(96.6％理論值)的產(chǎn)物。
備選地，使用0.1N鹽酸(508μl，1.9mg，50.79μmol，6當(dāng)量)，在甲醇中(5ml)，在酯的氫解裂解(操作方法4)后，胺(實(shí)施例1)從實(shí)施例58A(13.0mg，8.47μmol)的化合物中釋放出來(lái)。在色譜法(方法26)后，分離12.0mg(93.5％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法9)Rt＝14.73分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.71分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1288(3)[M+H]+，644(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1286(50)[M-H]-，642(38)[M-2H]2-，1332(100)。
HR-TOF-MS(方法24)C60H103N16O15[M+H]+實(shí)測(cè)值1287.7810，計(jì)算值1287.7784. 實(shí)施例2 D-亮氨酰-L-亮氨酰-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
在甲醇(10ml)中和0.1N鹽酸水溶液(219μl，0.8mg，21.89μmol，1當(dāng)量)中，在氫化酯裂解(操作方法4)后，將標(biāo)題化合物制備自芐氧基羰基-保護(hù)的肽(實(shí)施例73A，33.0mg，21.89μmol)。通過(guò)制備HPLC(方法26)進(jìn)行精制并分離18.1mg(56.1％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法9)Rt＝14.15分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.52分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1259(5)[M+H]+，630(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1257(100)[M-H]-，628(28)[M-2H]2-. HR-TOF-MS(方法24)C58H100N16O15[M+H]+實(shí)測(cè)值1259.7454，計(jì)算值1259.7471. 實(shí)施例3 [3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-鳥(niǎo)氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
在甲醇(10ml)中和0.1N鹽酸水溶液(198μl，0.7mg，19.8μmol，1.5當(dāng)量)中，在氫化酯裂解(操作方法4)后，將標(biāo)題化合物制備自芐氧基羰基-保護(hù)的肽(實(shí)施例81A，20.0mg，13.21μmol)。通過(guò)制備HPLC(方法26)進(jìn)行精制并分離17.9mg(91.9％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法9)Rt＝15.51分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.57分鐘；MS(ESIpos)m/z(％)＝1245(13)[M+H]+，623(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1243(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C59H102N14O15[M+H]+實(shí)測(cè)值1245.7560，計(jì)算值1245.7566. 實(shí)施例4 [3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-O-甲基-L-酪氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
將實(shí)施例112A的化合物(23mg，14.5μmol)，根據(jù)操作方法5進(jìn)行反應(yīng)。在以制備HPLC的方式通過(guò)色譜法純化(方法43)后，通過(guò)冷凍干燥獲得17mg(75％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC/UV-Vis(方法5)Rt＝3.69分鐘。
HPLC/UV-Vis(方法4)Rt＝3.95分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.71分鐘；MS(ESIpos.)m/z(％)＝667(100)[M+2H]2+，1333(2)[M+H]+；MS(ESIneg.)m/z(％)＝1331(100)[M-H]-. 實(shí)施例5 [3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-4-(二甲基氨基苯基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三(三氟乙酸鹽)
將實(shí)施例128A的化合物(105mg，66％純度，41μmol)溶解于在二氯甲烷中的30％的TFA(4ml)并在室溫?cái)嚢?0分鐘。接著將所述混合物在真空中濃縮并將所述殘余物通過(guò)色譜法純化(方法44，具有改變的梯度0-2分鐘10％ B，斜度，38分鐘60％B)。獲得49mg(29μmol，70％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法7)Rt＝3.62分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.72分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝450.0(100)[M+3H]3+，674.4(40)[M+2H]2+. HR-TOF-MS(方法24)C62H108N17O16[M+H]+計(jì)算值1346.8155，實(shí)測(cè)值1346.8130. 實(shí)施例6 [3-三甲基甲硅烷基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-4-(二甲基氨基苯基)-L-丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三(三氟乙酸鹽)
將實(shí)施例133A的化合物(126mg，82μmol)溶解于在二氯甲烷中的30％的TFA(4ml)并在室溫?cái)嚢?0分鐘。接著將所述混合物在真空中濃縮并將所述殘余物通過(guò)色譜法純化(方法44，具有改變的梯度0-2分鐘10％B，斜度，38分鐘60％ B)。獲得78mg(46μmol，56％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法7)Rt＝3.69分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.66分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝682.3(100)[M+2H]2+，1364.1(2)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C61H108N17O16Si[M+H]+計(jì)算值1362.7924，實(shí)測(cè)值1362.7949. 實(shí)施例7 D-苯基丙氨酰-L-苯基丙氨酰-[(3R)-3-氨基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
如在操作方法1中所述，目標(biāo)化合物制備自實(shí)施例144A的化合物(0.3mg，0.20μmol)。在精制后通過(guò)凝膠色譜法(方法45，洗脫劑甲醇)，分離0.1mg(23.3％理論值)的產(chǎn)物。
HPLC(方法12)Rt＝5.74分鐘。
LC-MS(方法18)Rt＝1.57分鐘，MS(ESIpos.)m/z(％)＝1268(2)[M+H]+，634(100)[M+2H]2+；MS(ESIpos.)m/z(％)＝1266(50)[M-H]-，632(22)[M-2H]2-，1312(100)[M-H+HCO2H]-. MALDI-MS(方法25)C58H92N16O16[M+H]+計(jì)算值1267.68，實(shí)測(cè)值1267.65. 實(shí)施例8 [3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-絲氨酰-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
將實(shí)施例233A的化合物(4mg，3μmol)溶解于甲醇(1ml)。加入17μl的1M鹽酸和10％披鈀碳(2mg)，并在室溫將所述混合物在大氣壓下氫化2小時(shí)。過(guò)濾溶液以去除催化劑并濃縮。在通過(guò)色譜法純化后(方法44)獲得2.2mg(1.5μmol，53％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝4.45分鐘。
LC-MS(方法20)Rt＝1.45分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝631.1(100)[M+2H]2+，1260.9(3)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C59H102N15O15計(jì)算值1260.7675，實(shí)測(cè)值1260.7670[M+H]+. 實(shí)施例9 [3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[3-(3-吡啶基)-L-丙氨酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺三(三氟乙酸鹽)
根據(jù)制備實(shí)施例233A的化合物的方法，從實(shí)施例226A的化合物(12mg，13μmol)獲得產(chǎn)率為4mg(32％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.60分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.43分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝661.5(100)[M+2H]2+，1321.8(10)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C64H105N16O14計(jì)算值1321.7991，實(shí)測(cè)值1321.7955[M+H]+. 實(shí)施例10 [3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-苯基丙氨酰-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
根據(jù)通用方法2，實(shí)施例235A的化合物與1ml的試劑溶液進(jìn)行反應(yīng)1小時(shí)，并將所述產(chǎn)物根據(jù)改進(jìn)的方法44(梯度0分鐘25％ B，斜度，35-38分鐘35％ B)進(jìn)行純化。獲得產(chǎn)率為10mg(50％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.41分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.57分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝661.1(100)[M+2H]2+，1320.8(5)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝1318.6(90)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C65H106N15O14計(jì)算值1320.8039，實(shí)測(cè)值1320.8042[M+H]+. 實(shí)施例11 [3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[L-蘇氨酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
根據(jù)通用方法2，將實(shí)施例236A的化合物與1ml的試劑溶液進(jìn)行反應(yīng)30分鐘，并根據(jù)方法44純化所述產(chǎn)物。獲得產(chǎn)率為3mg(27％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.73分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.53分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝638.0(100)[M+2H]2+. HR-TOF-MS(方法24)C60H103N15O15計(jì)算值1274.7831，實(shí)測(cè)值1274.7827[M+H]+. 實(shí)施例12 [3-叔丁基-D-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-別蘇氨酰-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
將實(shí)施例237A的化合物(47mg，24μmol)，根據(jù)通用方法2與1ml的試劑溶液反應(yīng)30分鐘，并根據(jù)方法44純化所述產(chǎn)物。獲得產(chǎn)率為21mg(57％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝3.43分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.52分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝638.1(100)[M+2H]2+；MS(ESIneg)m/z(％)＝1273.6[M]-. HR-TOF-MS(方法24)C60H103N15O15計(jì)算值1274.7831，實(shí)測(cè)值1274.7800[M+H]+. 實(shí)施例13 [3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-丙氨酰-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
根據(jù)通用方法2，將實(shí)施例238A的化合物與1ml的試劑溶液反應(yīng)30分鐘，并根據(jù)方法44純化所述產(chǎn)物。接著進(jìn)行進(jìn)一步的精制柱WatersSymmetry-PrepTM C-18，7μm，300mm x 19mm；洗脫劑A水+0.05％TFA，洗脫劑B乙腈+0.05％ TFA流速10ml/分鐘；AB65/35等度.獲得產(chǎn)率為8mg(20％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.71分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.49分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝623.2(100)[M+2H]2+. HR-TOF-MS(方法24)C59H101N15O14計(jì)算值1244.7726，實(shí)測(cè)值1244.7748[M+H]+. 實(shí)施例14 [3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-絲氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
根據(jù)通用方法2，將實(shí)施例239A的化合物與1ml的試劑溶液反應(yīng)1小時(shí)，并根據(jù)方法44純化所述產(chǎn)物。接著進(jìn)行進(jìn)一步的精制柱WatersSymmetry-PrepTM C-18，7μm，300mm x 19mm；洗脫劑A水+0.05％TFA，洗脫劑B乙腈+0.05％ TFA流速10ml/分鐘；AB 65/35等度.獲得產(chǎn)率為9mg(6μmol，35％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.63分鐘。
LC-MS(方法19)Rt＝1.43分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝643.7(100)[M+2H]2+，1289.8(10)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C59H101N16O16計(jì)算值1289.7576，實(shí)測(cè)值1289.7578[M+H]+. 實(shí)施例15 [3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-L-天冬酰胺酰-L-絲氨酸-C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺-雙三氟乙酸鹽
根據(jù)通用方法2，將實(shí)施例240A的化合物與1ml的試劑溶液反應(yīng)1小時(shí)，并將所述產(chǎn)物根據(jù)方法44純化數(shù)次。獲得產(chǎn)率為1.1mg(6μmol，3.5％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法5)Rt＝3.41分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.90分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝645(100)[M+2H]2+，1288(10)[M+H]+. HR-TOF-MS(方法24)C60H103N16O15計(jì)算值1287.7784，實(shí)測(cè)值1287.7786[M+H]+. 實(shí)施例16 [3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-甘氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-丙氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
根據(jù)通用方法2，將實(shí)施例253A的化合物與2ml的試劑溶液反應(yīng)1小時(shí)，并根據(jù)方法44純化所述產(chǎn)物。根據(jù)改進(jìn)的方法34(使用洗脫劑A:洗脫劑B 3:2；等度而非梯度)精制產(chǎn)物。獲得產(chǎn)率為22mg(36％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝3.43分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.90分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝645(100)[M+2H]2+，1288(60)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝1286(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C60H103N16O15計(jì)算值1287.7784，實(shí)測(cè)值1287.7800[M+H]+. 實(shí)施例17 [3-叔丁基-D-丙氨酰]-[3-叔丁基-L-丙氨酰]-[(3R)-3-氨基-L-苯基丙氨酰]-[(3R)-3-羥基-L-亮氨酰]-L-亮氨酰-D-精氨酰-L-異亮氨酰-L-別蘇氨酰-D-丙氨酰-[(3S)-3-羥基-L-天冬酰胺酰]-L-絲氨酸C1.11-N3.3-內(nèi)酰胺雙三氟乙酸鹽
將實(shí)施例267A的化合物(34mg的粗制產(chǎn)物，約6μmol)，根據(jù)通用方法2與1ml的試劑溶液反應(yīng)30分鐘。根據(jù)方法33，通過(guò)色譜法2次，獲得純的產(chǎn)物。獲得產(chǎn)率為6mg(65％理論值)的標(biāo)題化合物。
HPLC(方法6)Rt＝3.42分鐘。
LC-MS(方法22)Rt＝2.90分鐘，MS(ESIpos)m/z(％)＝660(100)[M+2H]2+，1317.8(10)[M+H]+；MS(ESIneg)m/z(％)＝1315.8(100)[M-H]-. HR-TOF-MS(方法24)C61H105N16O16計(jì)算值1317.7889，實(shí)測(cè)值1317.7892[M+H]+. 在下面的表中顯示的化合物19-44根據(jù)指定的方法從指定的原材料進(jìn)行制備。


















B.生理活性的評(píng)價(jià) 可以在下列測(cè)定中顯示本發(fā)明化合物的體外活性 最低抑制濃度(MIC)的測(cè)定 根據(jù)NCCLS準(zhǔn)則在液體稀釋試驗(yàn)中測(cè)定MIC。將金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)133、屎腸球菌(Entercococcus.faecalis)27159、糞腸球菌(E.faecium)4147和肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)G9a的過(guò)夜培養(yǎng)物在1:2的稀釋系列中與所述的測(cè)試物質(zhì)溫育。用Isosensitest培養(yǎng)基(Difco，Irvine/USA)中每ml細(xì)胞數(shù)為105個(gè)微生物進(jìn)行MIC測(cè)定，除肺炎鏈球菌在含有10％牛血清的BHI肉湯(Difco，Irvine/USA)中以每ml細(xì)胞數(shù)為106微生物以外。將所述培養(yǎng)物在37℃溫育18-24小時(shí)，肺炎鏈球菌在10％ CO2的存在下。
將不再有可見(jiàn)的細(xì)菌生長(zhǎng)發(fā)生時(shí)每種物質(zhì)的最低物質(zhì)濃度定義為MIC。MIC的值以μg/ml報(bào)道。
在表A中顯示了本發(fā)明化合物的典型體外活性數(shù)據(jù) 表A 可以在下列動(dòng)物模型中顯示本發(fā)明化合物對(duì)于細(xì)菌感染治療的適合性 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)133的全身感染 將金黃色葡萄球菌(S.aureus)133的細(xì)胞在BHI肉湯(Oxoid，紐約/USA)中過(guò)夜培養(yǎng)。將過(guò)夜的培養(yǎng)物在新鮮BHI肉湯中1:100稀釋并溫育3小時(shí)。將當(dāng)時(shí)在對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期中的細(xì)胞離心出并用緩沖的生理鹽水洗滌兩次。然后將鹽水中的細(xì)胞懸浮液光度測(cè)定地調(diào)節(jié)到50個(gè)消光單位。在稀釋步驟(1:15)后，將所述懸浮液與10％粘蛋白溶液1:1混合。腹膜內(nèi)給藥0.25ml/20g小鼠的該感染溶液(相當(dāng)于1×106微生物/小鼠)。在感染后30分鐘在腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)進(jìn)行治療。將雌性CFW1小鼠用于感染實(shí)驗(yàn)。在6天的時(shí)期內(nèi)記錄所述動(dòng)物的存活率。
本發(fā)明化合物的腎耐受性的性質(zhì)可以在下列動(dòng)物模型中顯示 用于測(cè)定腎毒性作用的小鼠模型 通過(guò)組織學(xué)觀察在多次給藥具體劑量后的小鼠的腎來(lái)分析九酯肽的腎毒性副作用。為此，用溶解在水溶液或加入Solutol的物質(zhì)每日靜脈內(nèi)(i.v.)或腹膜內(nèi)(i.p.)處理5-6只動(dòng)物。通過(guò)光學(xué)顯微鏡評(píng)估腎臟的蘇木精和曙紅(H&E)染色石蠟切片來(lái)確定腎毒性作用。任選地進(jìn)行′高碘酸Schiff(PAS)反應(yīng)來(lái)更好地顯示糖蛋白。作為管型嗜堿粒細(xì)胞增多和變性/再生發(fā)生的嚴(yán)重程度(嚴(yán)重程度0＝無(wú)作用；1＝最小作用；2＝輕微作用；3＝中度作用；4＝嚴(yán)重?fù)p傷)，對(duì)于每只動(dòng)物半定量地確定腎毒性作用。每個(gè)動(dòng)物組或衍生系計(jì)算管型變性/再生的平均嚴(yán)重程度和發(fā)生率(涉及的動(dòng)物的數(shù)目)。超出此的腎臟變化，如管膨脹和壞死以及壞死物質(zhì)的累積也被列出。
確定腎毒性作用的大鼠模型 在多次給藥具體劑量后，通過(guò)大鼠中腎的組織病理學(xué)檢查分析九酯肽的腎毒性作用。為此目的，用溶解于鹽水或Ringer’s乳酸鹽溶液的物質(zhì)每日靜脈內(nèi)(i.v.)處理5只動(dòng)物。通過(guò)光學(xué)顯微鏡評(píng)估腎臟的蘇木精和曙紅(H&E)染色石蠟切片來(lái)確定腎毒性作用。任選地進(jìn)行′高碘酸Schiff(PAS)反應(yīng)來(lái)更好地顯示糖蛋白。作為管型嗜堿粒細(xì)胞增多和變性/再生發(fā)生的嚴(yán)重程度(嚴(yán)重程度0＝無(wú)作用；1＝最小作用；2＝輕微作用；3＝中度作用；4＝嚴(yán)重?fù)p傷)，對(duì)于每只動(dòng)物半定量地確定腎毒性作用。每個(gè)動(dòng)物組或衍生系計(jì)算管型變性/再生的平均嚴(yán)重程度和發(fā)生率(涉及的動(dòng)物的數(shù)目)。超出此的腎臟變化，如管膨脹和壞死以及壞死物質(zhì)的累積也被列出。
通過(guò)Transil確定游離級(jí)分的原理 本文所述的確定測(cè)試物質(zhì)的游離級(jí)分(fu)的方法被分為兩部分 a)通過(guò)將測(cè)試物質(zhì)在

-緩沖液(pH 7.4)分散體中溫育并隨后確定在分散體和緩沖液上清液中的濃度來(lái)確定

/緩沖液分布比率(MA緩沖液)。
b)通過(guò)將測(cè)試物質(zhì)在

-血漿分散體中溫育并隨后確定在分散體和血漿中的濃度來(lái)確定

血漿分布比率(MA血漿)。
兩個(gè)分布比率的商產(chǎn)生fu。
在高度蛋白質(zhì)結(jié)合物質(zhì)的情形中，通常將血漿用等度的磷酸鹽緩沖液(pH 7.4)稀釋并隨后用

懸浮。以類似于確定fu的方式進(jìn)行在該稀釋的蛋白溶液中的fu′(在稀釋的血漿中的游離級(jí)分)的確定。從fu′和稀釋因子計(jì)算在未稀釋的血漿中的游離級(jí)分。
關(guān)于該方法，還參考Schuhmacher，Joachim；Kohlsdorfer，Christian；Buehner，Klaus；Brandenburger，Tim；Kruk，Renate，“High-throughputdetermination of free fraction of drugs strongly bound to plasma proteins(與血漿蛋白強(qiáng)結(jié)合的藥物的游離級(jí)分的高通量的確定)?！盝ournal ofPharmaceutical Sciences(藥物科學(xué)雜志)2004，93，816-830。
在分布在

和緩沖液(MAbuffer)后確定測(cè)試物質(zhì)的膜親和性 在適合的玻璃容器，例如玻璃瓶，圓底(ground-socket)的試管中進(jìn)行所有的溫育?？傮w積通常是0.5-5ml，

體積是10-100μl。如果預(yù)期高膜親和性，可以將

分散體用磷酸鹽緩沖液，pH 7.4例如Dulbecco’s PBS稀釋到多達(dá)20倍。將pH 7.4的磷酸鹽緩沖液提供在溫育容器中并將

在徹底混合后吸移進(jìn)去。將測(cè)試物質(zhì)以例如200ng/ml的濃度吸移，n＝6。有機(jī)溶劑的比例應(yīng)該是≤2％。將所述混合物在室溫溫育30分鐘，例如在微型振蕩器上，以約45°的角度，在約400rpm上進(jìn)行。為了測(cè)定100％的值，去除例如，100μl的至少一等分試樣，并在約1800g將剩余的混合物離心約10分鐘。從每個(gè)樣品移去至少2個(gè)等分試樣(例如100μl)的上清液用于確定濃度。
在未稀釋或稀釋的血漿中測(cè)定MA血漿 總的溫育體積和加入的

的體積取決于預(yù)期的游離級(jí)分。總體積通常是0.5-1ml，

體積是10-100μl。如果游離級(jí)分非常低，用等度的緩沖液溶液pH 7.4稀釋待研究的物種的血漿，例如10-400倍，接著加入

如上所述進(jìn)行隨后的方法以測(cè)定MA緩沖液值。
通過(guò)超濾測(cè)定游離級(jí)分的原理 通過(guò)半透膜過(guò)濾待研究的物種的血漿。測(cè)量濾液中的物質(zhì)濃度并且從中計(jì)算游離級(jí)分fu。使用來(lái)自Millipore/Amicon的Centrifree微分區(qū)(micropartition)系統(tǒng)。超濾膜具有30000Da截?cái)嘀?。?ml的血漿摻入約1μg/ml濃度的物質(zhì)。溶劑比率應(yīng)該是<2％。在室溫溫育30分鐘后，將血漿移入超濾系統(tǒng)并在1800g離心10分鐘。測(cè)量在超濾液中的物質(zhì)濃度(Cu；未結(jié)合的物質(zhì)濃度)和在離心前在血漿中的物質(zhì)濃度(C；總物質(zhì)濃度)。根據(jù)公式fu(％)＝Cu/C*100計(jì)算游離級(jí)分。
在稍堿性的水溶液中確定化學(xué)穩(wěn)定性 將0.3mg的測(cè)試物質(zhì)溶解于0.25ml的乙腈，0.25ml的DMSO和0.5ml的pH 7.8的緩沖液(由111mg(1mmol)的氯化鈣，7.91g(100mmol)的碳酸氫銨，100ml的乙腈加到1000ml組成)的混合物并留待在室溫靜置。從溶液中一小時(shí)一次地取出5μl等分試樣并通過(guò)HPLC(方法57)分析。將通過(guò)UV吸光度(IE)顯示的0小時(shí)的測(cè)試化合物的濃度設(shè)定為100％，并隨時(shí)間觀察到減少。同時(shí)，在觀察到開(kāi)環(huán)降解產(chǎn)物的增加。
該測(cè)定提供在圖1-5中顯示的結(jié)果。從所述曲線顯而易見(jiàn)的是本發(fā)明的化合物在堿性水溶液中明顯地比溶桿菌素更穩(wěn)定。
C. 藥物組合物的例舉性實(shí)施方案 本發(fā)明的化合物可以以下列方式轉(zhuǎn)化成藥物制劑 片劑 組成 100mg實(shí)施例1的化合物，50mg乳糖(一水合物)，50mg玉米淀粉(天然的)，10mg聚乙烯吡咯烷酮(PVP25)(BASF，Ludwigshafen，德國(guó))和2mg硬脂酸鎂。
片劑重量212mg。直徑8mm，曲率半徑12mm。
制備 將活性化合物、乳糖和淀粉的混合物用水中的5％PVP溶液(m/m)造粒。將所述粒劑干燥然后與硬脂酸鎂混合5分鐘。將該混合物用常規(guī)壓片機(jī)擠壓(參見(jiàn)上面用于片劑的形式)。用于壓縮的壓縮力指標(biāo)是15kN。
可以口服給藥的混懸劑 組成 1000mg實(shí)施例1的化合物，1000mg乙醇(96％)，400mg的Rhodigel(來(lái)自FMC的黃原膠，賓夕法尼亞，USA)和99g水。
10ml的口服混懸劑對(duì)應(yīng)于100mg本發(fā)明化合物的單一劑量。
制備 將Rhodigel懸浮在乙醇中，并將所述活性化合物加入到所述混懸液。攪拌的同時(shí)加入水。將所述混合物攪拌約6小時(shí)直到Rhodigel的溶脹是完全的。
可以靜脈內(nèi)給藥的溶液劑 組成 100-200mg實(shí)施例1的化合物，15g聚乙二醇400和250g注射用水。
制備 在攪拌下將實(shí)施例1的化合物和聚乙二醇400一起溶解在水中。通過(guò)過(guò)濾(孔徑0.22μm)將所述溶液消毒并在無(wú)菌條件下分配到熱滅菌的輸液瓶中。將后者用輸注塞和卷曲帽封閉。
權(quán)利要求
1.下式的化合物
其中
R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基，芐基，2-吡啶基甲基，3-吡啶基甲基，2-噻吩基甲基，3-噻吩基甲基或1，3-噻唑-4-基甲基，
其中芐基，2-吡啶基甲基，3-吡啶基甲基，2-噻吩基甲基，3-噻吩基甲基和1，3-噻唑-4-基甲基可以被1或2個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，三氟甲基，甲基和甲氧基，
R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基，芐基，2-吡啶基甲基，3-吡啶基甲基，2-噻吩基甲基，3-噻吩基甲基或1，3-噻唑-4-基甲基，
其中芐基，2-吡啶基甲基，3-吡啶基甲基，2-噻吩基甲基，3-噻吩基甲基和1，3-噻唑-4-基甲基可以被1或2個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，三氟甲基，甲基和甲氧基，
R3表示氫，C1-C4-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基或5-或6-元雜芳基甲基，
其中環(huán)烷基，環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，雜芳基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基，C1-C4-烷基氨基羰基和通過(guò)氮結(jié)合的5-或6-元雜環(huán)基，
R4表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基，5-或6-元雜芳基甲基，三甲基甲硅烷基甲基或2-氨基-2-氧代乙基，
其中烷基可以被1-3個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基，
并且
其中環(huán)烷基，環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，雜芳基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基，
R5表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基，5-或6-元雜芳基甲基，三甲基甲硅烷基甲基或2-氨基-2-氧代乙基，
其中烷基可以被1-3個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基，
并且
其中環(huán)烷基，環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，雜芳基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基，
R6表示C1-C6-烷基，其中烷基被選自由下列組成的組的取代基取代氨基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基，[氨基-(亞氨基)甲基]氨基，2-吡啶基，3-吡啶基和4-吡啶基，
R7表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基，5-或6-元雜芳基甲基或三甲基甲硅烷基甲基，
其中烷基可以被1-3個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基，
并且
其中環(huán)烷基，環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，雜芳基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基，
R8表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基，5-或6-元雜芳基甲基，三甲基甲硅烷基甲基或2-氨基-2-氧代乙基，
其中烷基可以被1-3個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基，
并且
其中環(huán)烷基，環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，雜芳基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基，
R9表示氫，C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基，5-或6-元雜芳基甲基，三甲基甲硅烷基甲基或2-氨基-2-氧代乙基，
其中烷基可以被1-3個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基，
并且
其中環(huán)烷基，環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，雜芳基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基，
R10表示氫，C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基，5-或6-元雜芳基甲基，三甲基甲硅烷基甲基，2-氨基-2-氧代乙基，2-氨基-1-羥基-2-氧代乙基，(氨基磺?；?(羥基)甲基，2-(C1-C4-烷基氨基)-2-氧代乙基或2-(C1-C4-烷基氨基)-1-羥基-2-氧代乙基，
其中烷基可以被選自由下列組成的組的取代基取代鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基，
并且
其中環(huán)烷基，環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，雜芳基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基，
R11表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基，5-或6-元雜芳基甲基，三甲基甲硅烷基甲基，2-氨基-2-氧代乙基，2-氨基-1-羥基-2-氧代乙基，(氨基磺酰基)(羥基)甲基，2-(C1-C4-烷基氨基)-2-氧代乙基或2-(C1-C4-烷基氨基)-1-羥基-2-氧代乙基，
其中烷基可以被選自由下列組成的組的取代基取代鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基，
并且
其中環(huán)烷基，環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，雜芳基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基，
或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種，
不包括下式的化合物
其中
R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基，芐基，2-吡啶基甲基，3-吡啶基甲基，2-噻吩基甲基，3-噻吩基甲基或1，3-噻唑-4-基甲基，
其中芐基，2-吡啶基甲基，3-吡啶基甲基，2-噻吩基甲基，3-噻吩基甲基和1，3-噻唑-4-基甲基可以被1或2個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，三氟甲基，甲基和甲氧基，
R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基，芐基，2-吡啶基甲基，3-吡啶基甲基，2-噻吩基甲基，3-噻吩基甲基或1，3-噻唑-4-基甲基，
其中芐基，2-吡啶基甲基，3-吡啶基甲基，2-噻吩基甲基，3-噻吩基甲基和1，3-噻唑-4-基甲基可以被1或2個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，三氟甲基，甲基和甲氧基，
并且
R12表示氫或甲基，
或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其特征在于
R10表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基，5-或6-元雜芳基甲基，三甲基甲硅烷基甲基，2-氨基-2-氧代乙基，2-氨基-1-羥基-2-氧代乙基，(氨基磺?；?(羥基)甲基，2-(C1-C4-烷基氨基)-2-氧代乙基或2-(C1-C4-烷基氨基)-1-羥基-2-氧代乙基，
其中烷基可以被選自由下列組成的組的取代基取代鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基，
并且
其中環(huán)烷基，環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，雜芳基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基，
或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其特征在于
R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基，芐基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基，
其中芐基，2-吡啶基甲基和3-吡啶基甲基可以被1或2個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，三氟甲基和甲基，
R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基，芐基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基，
其中芐基，2-吡啶基甲基和3-吡啶基甲基可以被1或2個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，三氟甲基和甲基，
R3表示C1-C4-烷基，苯基，芐基，2-吡啶基，3-吡啶基或4-吡啶基，
其中苯基，芐基，2-吡啶基，3-吡啶基和4-吡啶基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-烷基氨基，
R4表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，芐基，5-或6-元雜芳基甲基或三甲基甲硅烷基甲基，
其中烷基可以被羥基取代基取代，
并且
其中環(huán)烷基甲基，芐基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基，
R5表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基甲基或三甲基甲硅烷基甲基，
其中烷基可以被選自由下列組成的組的取代基取代鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基，
并且
其中環(huán)烷基甲基，苯基，芐基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-烷基氨基，
R6表示C1-C6-烷基，
其中烷基被選自由下列組成的組的取代基取代氨基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基，[氨基-(亞氨基)甲基]氨基，2-吡啶基，3-吡啶基和4-吡啶基，
R7表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，苯基，芐基，5-或6-元雜芳基甲基或三甲基甲硅烷基甲基，
其中烷基可以被選自由下列組成的組的取代基取代鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基，
并且
其中環(huán)烷基甲基，苯基，芐基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-烷基氨基，
R8表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，芐基，5-或6-元雜芳基甲基或三甲基甲硅烷基甲基，
其中烷基可以被羥基取代基取代，
并且
其中環(huán)烷基甲基，芐基和雜芳基甲基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基，C1-C4-烷基氨基，羥基羰基，C1-C4-烷氧基羰基，氨基羰基和C1-C4-烷基氨基羰基，
R9表示氫，C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，苯基，三甲基甲硅烷基甲基或2-氨基-2-氧代乙基，
其中甲基可以被選自由下列組成的組的取代基取代羥基，氨基和巰基，
并且
其中環(huán)烷基和苯基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-烷基氨基，
R10表示氫，C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，苯基，三甲基甲硅烷基甲基，2-氨基-2-氧代乙基，2-氨基-1-羥基-2-氧代乙基，(氨基磺?；?(羥基)甲基，2-(C1-C4-烷基氨基)-2-氧代乙基或2-(C1-C4-烷基氨基)-1-羥基-2-氧代乙基，
其中烷基可以被選自由下列組成的組的取代基取代鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基，
并且
其中環(huán)烷基和苯基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-烷基氨基，
R11表示甲基或乙基，
其中甲基和乙基可以被選自由下列組成的組的取代基取代羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基，
或其鹽、其溶劑合物、或其鹽的溶劑合物中的一種，
不包括式(Ia)的化合物，其中
R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基，芐基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基，
其中芐基，2-吡啶基甲基和3-吡啶基甲基可以被1或2個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，三氟甲基和甲基，
R2表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基，芐基，2-吡啶基甲基或3-吡啶基甲基，
其中芐基，2-吡啶基甲基和3-吡啶基甲基可以被1或2個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，三氟甲基和甲基，
并且
R12表示氫或甲基，
或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3的化合物，其特征在于
R1表示2-甲基丙-1-基，2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基或芐基，
其中芐基可以被1或2個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，三氟甲基和甲基，
或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求3或4的化合物，其特征在于
R3表示苯基，芐基，2-吡啶基，3-吡啶基或4-吡啶基，
其中苯基，芐基，2-吡啶基，3-吡啶基和4-吡啶基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-烷基氨基，
或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
6.根據(jù)權(quán)利要求3-5中任一項(xiàng)的化合物，其特征在于
R10表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基，苯基，三甲基甲硅烷基甲基，2-氨基-2-氧代乙基，2-氨基-1-羥基-2-氧代乙基，(氨基磺?；?-(羥基)甲基，2-(C1-C4-烷基氨基)-2-氧代乙基或2-(C1-C4-烷基氨基)-1-羥基-2-氧代乙基，
其中烷基可以被選自由下列組成的組的取代基取代鹵素，羥基，氨基，巰基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基，
并且
其中環(huán)烷基和苯基可以被1-4個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，羥基，氨基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-烷基氨基，
或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)的化合物，其特征在于
R1表示2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基，
R2表示2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基，
R3表示C1-C4-烷基，3-吡啶基或苯基，
其中3-吡啶基或苯基可以被選自由下列組成的組的取代基取代鹵素，氰基，甲基，甲氧基，二甲基氨基和二乙基氨基，
R4表示-CH(OH)-C1-C5-烷基或-CH(OH)苯基，
其中-CH(OH)苯基可以被1-3個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-二烷基氨基，
R5表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，芐基或三甲基甲硅烷基甲基，
R6表示直鏈C2-C4-烷基，
其中烷基被選自由下列組成的組的取代基取代氨基，1，4，5，6-四氫嘧啶-2-基氨基和[氨基(亞氨基)甲基]氨基，
R7表示C1-C6-烷基，C3-C7-環(huán)烷基甲基，芐基或三甲基甲硅烷基甲基，
R8表示C1-C4-烷基，-CH2-OH，-CH(OH)-C1-C5-烷基或-CH(OH)-苯基，
其中-CH(OH)苯基可以被1-3個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-二烷基氨基，并且
R9表示氫，C1-C6-烷基，羥基甲基或2-氨基-2-氧代乙基，
R10表示氫，C1-C4-烷基，2-氨基-2-氧代乙基或2-氨基-1-羥基-2-氧代乙基，
其中C1-C4-烷基可以被選自由下列組成的組的取代基取代氨基和羥基，除了R10不是4-氨基丁-1-基以外，
R11表示甲基，
其中甲基被選自由下列組成的組的取代基取代羥基和氨基，
或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種，
不包括式(Ia)的化合物，其中
R1表示2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基，
R2表示2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基，三甲基甲硅烷基甲基或3-吡啶基甲基，
并且
R12表示氫或甲基，
或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的化合物，其特征在于
R1表示2，2-二甲基丙-1-基，2，2-二甲基丁-1-基或三甲基甲硅烷基甲基，
或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
9.根據(jù)權(quán)利要求7或8的化合物，其特征在于
R2表示2，2-二甲基丙-1-基或3-吡啶基甲基，
或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
10.根據(jù)權(quán)利要求7-9中任一項(xiàng)的化合物，其特征在于
R3表示苯基，
其中苯基可以被選自由下列組成的組的取代基取代鹵素，氰基，甲基，甲氧基，二甲基氨基和二乙基氨基，
或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
11.根據(jù)權(quán)利要求7-10中任一項(xiàng)的化合物，其特征在于
R8表示-CH(OH)-C1-C5-烷基或-CH(OH)苯基，
其中-CH(OH)苯基可以被1-3個(gè)取代基取代，所述取代基彼此獨(dú)立地選自由下列組成的組鹵素，氰基，三氟甲基，三氟甲氧基，C1-C4-烷基，C1-C4-烷氧基和C1-C4-二烷基氨基，和
或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
12.根據(jù)權(quán)利要求7-11中任一項(xiàng)的化合物，其特征在于
R10表示甲基，乙基，2-氨基-2-氧代乙基或2-氨基-1-羥基-2-氧代乙基，
其中甲基和乙基可以被羥基取代基取代，
或其鹽、其溶劑合物或其鹽的溶劑合物中的一種。
13.制備根據(jù)權(quán)利要求1的式(I)的化合物的方法，其特征在于
[A]使式(II)的化合物
其中
R3，R4，R5，R6，R7，R8，R9，R10和R11具有權(quán)利要求1中指定的含義，首先與式(III)的化合物反應(yīng)，
其中
R1和R2具有權(quán)利要求1中指定的含義，
Y1表示叔丁氧羰基或芐氧基羰基，并且
X1表示鹵素，優(yōu)選地溴、氯或氟，或羥基，
并且
隨后與酸反應(yīng)和/或通過(guò)氫解反應(yīng)，
或
[B]使下式的化合物，
其中
R4，R5，R6，R7，R8，R9，R10和R11具有權(quán)利要求1中指定的含義，首先與下式的化合物反應(yīng)，
其中
R1，R2和R3具有權(quán)利要求1中指定的含義，并且
Y1表示叔丁氧羰基或芐氧基羰基，
和隨后在4步合成中
a)與氟化物試劑如氟化四丁基銨反應(yīng)，
b)與酸反應(yīng)，
c)與脫水劑，在適合時(shí)在堿存在下反應(yīng)，
和
d)通過(guò)氫解反應(yīng)。
14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其特征在于式(II)的化合物如下制備
使下式的化合物，
其中
R4，R5，R6，R7，R8，R9，R10和R11具有權(quán)利要求1中指定的含義，首先與下式的化合物反應(yīng)，
其中
R3具有權(quán)利要求1中指定的含義，并且
R13表示氰基甲基，對(duì)硝基苯基，鄰硝基苯基，2，4-二硝基苯基，2，4，5-三氯苯基，五氯苯基，五氟苯基(Pfp)，N-羥基苯鄰二甲酰亞胺基，N-羥基琥珀酰亞胺基(O-Su)，1-羥基哌啶基或5-氯-8-羥基喹啉基，
和隨后在3步合成中
a)與酸反應(yīng)，
b)與脫水劑，在適合時(shí)在堿存在下反應(yīng)，
和
c)通過(guò)氫解反應(yīng)。
15.根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的化合物，其用于治療和/或預(yù)防疾病。
16.根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的化合物用于制備治療和/或預(yù)防疾病的藥物的應(yīng)用。
17.根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的化合物用于制備治療和/或預(yù)防細(xì)菌感染的藥物的應(yīng)用。
18.藥物，其包含根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的化合物和惰性、非毒性的藥用賦形劑。
19.根據(jù)權(quán)利要求18的藥物，其用于治療和/或預(yù)防細(xì)菌感染。
20.用于控制人和動(dòng)物中細(xì)菌感染的方法，所述方法通過(guò)施用抗菌有效量的至少一種根據(jù)權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)的化合物，根據(jù)權(quán)利要求18的藥物或根據(jù)權(quán)利要求16或17獲得的藥物而進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明涉及溶桿菌素酰胺和制備它們的方法，以及它們用于制備藥物的應(yīng)用，所述藥物用于治療和/或預(yù)防疾病、特別是細(xì)菌感染性疾病。
文檔編號(hào)C07K7/56GK101466729SQ200780021362
公開(kāi)日2009年6月24日 申請(qǐng)日期2007年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2006年4月13日
發(fā)明者弗朗茨·馮努斯鮑姆, 哈穆特·貝克, 尼娜·布呂納, 賴納·恩德曼, 約翰內(nèi)斯·克貝林, 雅克·拉戈, 約阿希姆·泰爾塞, 約阿希姆·舒馬赫爾, 索尼亞·安勞夫, 約蘭多·坎喬-格朗德, 蘇珊·格雷沙特, 漢斯-克里斯蒂安·米利齊澤, 吉多·席費(fèi)爾 申請(qǐng)人:艾庫(kù)里斯有限及兩合公司