專利名稱：7、4’-二(琥珀酸單酯)氧乙氧基-葛根黃豆苷元及其醫(yī)藥新用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及7、4’-二(琥珀酸單酯)氧乙氧基-葛根黃豆苷元(DZ5)及其醫(yī)藥新用途，具體涉及7、4’-二(琥珀酸單酯)氧乙氧基-葛根黃豆苷元在制備抗腦缺血、缺氧，抗心肌缺血、缺氧，拮抗記憶障礙，抗血小板聚集及抗血栓形成，保護缺氧所致大鼠皮層神經(jīng)元損傷的藥物中的應用。

背景技術(shù)：
心腦血管病是危害人類健康和生命的重大疾病，據(jù)世界衛(wèi)生組織的世界衛(wèi)生報告2000年資料顯示，世界心腦血管病死亡人數(shù)為1697萬，占總死亡人口的30.3％。在我國，心腦血管病的發(fā)病率和死亡率均居各種疾病之首。以1998年我國衛(wèi)生部的統(tǒng)計年報來看，是我國城市人口死亡率最高的病種之一。其中，心血管病每10萬人200人發(fā)病。
心血管疾病以冠心病為主，是由于供應心肌血液的冠狀動脈發(fā)生粥樣硬化，使動脈血管變窄，心肌供血不足造成的；由于冠狀動脈病變引起管腔狹窄或閉塞的臨床癥狀，在時間長短、程度輕重上不盡相同，因此可表現(xiàn)為隱性心臟病、心絞痛、心肌梗塞、心肌硬化和心源性猝死等多種形式。腦血管疾病則是指腦血管破裂出血或血栓形成，引起的以腦出血或缺血性損傷癥狀為主要臨床表現(xiàn)的一組疾病，俗稱為腦中風；該病常見于中年以上人群的急性發(fā)作，嚴重者可發(fā)生意識和肢體癱瘓，是目前造成人類死亡和殘疾的主要疾病。
目前，臨床上用于預防與治療心腦血管疾病的藥物主要有以下幾類(1)腎上腺素受體阻斷藥，(2)鈣拮抗劑，(3)硝酸酯類及亞硝酸酯類，(4)影響膽固醇和甘油三酯吸收的藥物，(5)HMG-CoA還原酶抑制劑，(6)作用于中樞系統(tǒng)的藥物，(7)神經(jīng)節(jié)阻斷藥，(8)影響腎上腺素能神經(jīng)遞質(zhì)藥，(9)血管擴張藥，(10)利尿藥(11)影響腎素-血管緊張素系統(tǒng)的藥物等。這些臨床常用的藥物治療效果顯著，但對其副作用也頻見報道，如胃腸道反應、肝臟轉(zhuǎn)氨酶的升高、體位性低血壓、心悸、暈厥、外周神經(jīng)炎、性功能障礙及全身性紅斑藍瘡樣綜合癥等毒副作用。針對此類疾病的藥物需長期服用，不可驟然停藥，以免引起停藥綜合癥。因此，尋找高效低毒的治療心血管疾病的藥物一直是藥物研究的一個重要領(lǐng)域。
在醫(yī)療模式由治療型向預防、保健相結(jié)合模式的興起的大背景下，人們對化學合成藥物毒副作用的認識逐漸增強，追求生命的原生態(tài)已成為目前研究的主題。植物藥能滿足人們的這種心理需求，是人類防病治病的主要天然藥物。葛根黃豆苷元是葛根的主要有效成分之一，是異黃酮的一種。目前，已開發(fā)的葛根產(chǎn)品有葛根粉、葛根豆絲、葛根粉豆等，均為初級產(chǎn)品，由于這些產(chǎn)品加工方法簡單、加工過程中產(chǎn)品的營養(yǎng)成品均存在流失現(xiàn)象，困此產(chǎn)品的市場附加值小。且這些產(chǎn)品攜帶不方便，食用需加熱，葛根的藥用(保健)價值得不到有效的利用。現(xiàn)在有將葛根異黃酮用于制備延緩女性衰老的制劑，見中國專利03128338.1，還有將葛根異黃酮用于制備降低并預防高血糖的飲料，見中國專利200410009037.7。但由于異黃酮的水溶性差，生物利用度低，限制了它的廣泛使用。因此尋求一種葛根黃豆苷元新衍生物，從而改善溶解度提高藥效是非常重要的。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種葛根黃豆苷元新衍生物DZ5，其藥理活性強，毒副作用小，可以用于制備一種新型預防和治療心腦血管系統(tǒng)疾病的藥物，用于治療隱性心臟病、心絞痛、心肌梗塞、心肌硬化、心源性猝死和腦中風等。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種含有DZ5和藥學可接受載體或賦形劑的藥物組合物。
所述的藥物組合物具有抗腦缺血、缺氧、抗心肌缺血、缺氧、拮抗記憶障礙、抗血小板聚集及抗血栓形成和保護缺氧所致大鼠皮層神經(jīng)元損傷作用。
DZ5可以直接藥用或者與藥學上可接受載體或賦形劑組合可以配制成藥物組合物，DZ5還可以作為保健品的有效成分，本發(fā)明組合物還可以配制成飲料等。
本發(fā)明藥物組合物可以通過藥學領(lǐng)域常規(guī)配制技術(shù)和載體，配制成藥物組合物。本發(fā)明組合物可以制備成片劑、膠囊、顆粒劑、滴丸、注射劑，口服液及外用藥等劑型。還可以加入到茶或飲料中，制成保健茶或飲料。
片劑的普通配方可以是DZ510-90％重量比，淀粉89-9％重量比，硬脂酸鎂1％重量比，50％乙醇適量。膠囊劑的普通配方可以是DZ510-100％重量比，淀粉90-0％重量比。顆粒劑的普通配方可以是DZ55-100％重量比，(蔗糖+糊精)95-0％重量比，蔗糖∶糊精＝2∶1。
本發(fā)明的原理是通過建立藥理篩選類型追蹤DZ5的藥效活性，找到其藥用用途。
本發(fā)明人經(jīng)過小鼠常壓耐缺氧實驗模型、小鼠急性腦缺血實驗模型、小鼠雙側(cè)頸總動脈及迷走神經(jīng)結(jié)扎實驗模型、小鼠KCN中毒實驗模型、小鼠NaNO2中毒實驗模型、學習記憶實驗模型、DZ5對缺氧所致大鼠皮層神經(jīng)元損傷的作用模型、對垂體后葉素所致大鼠心肌缺血的影響模型、體外抗血小板聚集實驗(比濁法)模型、體內(nèi)抗血小板聚集實驗(比濁法)模型、對家兔頸總動脈血栓形成的影響模型等對DZ5進行藥理活性研究。結(jié)果表明，DZ5能顯著延長斷頭小鼠喘氣時間及小鼠結(jié)扎頸總動脈的存活時間，使KCN和NaNO2中毒小鼠生存時間顯著延長，提示該藥具有抗急性腦缺血、降低腦耗氧耗能的作用。此外，該藥能拮抗東莨菪堿所致的小鼠記憶障礙，具有增強記憶的作用。DZ5還能顯著延長常壓耐缺氧條件下和異丙腎上腺素誘導急性心肌缺氧模型小鼠的存活時間，并能有效的對抗異丙腎上腺素引起心肌耗氧量增加而導致的心肌缺血缺氧，改善心功能。血小板聚集實驗結(jié)果表明DZ5可顯著抑制AA誘導的血小板聚集，從而抑制血小板的活化，起到抗血栓形成的作用。同時，還具有保護缺氧所致大鼠皮層神經(jīng)元損傷的作用。
本發(fā)明所應用的DZ5是以葛根黃豆苷元為母體，采用半合成的方法進行7，4’位取代而成的葛根黃豆苷元新衍生物。結(jié)構(gòu)式如下
在1000ml圓底燒瓶中，加入葛根黃豆苷元6.3克，無水碳酸鉀10.5克，碘化鉀12.50克，氯乙醇0.65克，無水二甲基甲酰胺300ml，100℃水浴反應24小時h；反應完畢加5倍量水，過濾，再用0.5％氫氧化鈉洗滌；水洗至中性，干燥，用55％二甲基甲酰胺重結(jié)晶得mp194-196℃無色片狀結(jié)晶6.0克(收率70％)。在1000ml圓底燒瓶中，加入上述化合物5克，琥珀酸酐7.5克，4-二甲氨基吡啶4克，無水二氯甲烷200ml，回流反應4小時h；回收溶劑后，加水析出白色粉末；過濾，干燥，用50％乙醇重結(jié)晶，得mp80-82℃的白色針狀結(jié)晶5克g(收率65％)。
本發(fā)明首次對DZ5進行藥理研究，發(fā)現(xiàn)DZ5具有抗腦缺血、缺氧，抗心肌缺血、缺氧，拮抗記憶障礙，抗血小板聚集及抗血栓形成，保護缺氧所致大鼠皮層神經(jīng)元損傷的作用。DZ5可與藥學可接受的載體或賦形劑混合制成藥物混合物。本發(fā)明通過動物藥理實驗，確定DZ5的使用劑量為30mg/kg-160mg/kg。且在有效預防、治療劑量范圍內(nèi)無毒副作用，可以長期服用。無胃損傷副作用且對肝臟有保護作用。

具體實施例方式 以下通過實施例對本發(fā)明做進一步說明 試驗動物昆明種小鼠，體重18-22克，雌雄兼用；大耳白家兔，2.0-2.5kg，雌雄兼用；SD雄性大鼠，180-220g，雌雄兼用，購于沈陽藥科大學動物中心，受試動物預處理在飼養(yǎng)室內(nèi)觀察一周，室溫21-23℃，相對濕度30-70％，食沈陽藥科大學實驗動物室提供機制料塊，飲自來水，自然光照。
實施例1DZ5對小鼠常壓耐缺氧的影響 小鼠90只，體重20±2g，雌雄各半，隨機分為9組。生理鹽水組，DZ540mg/kg，80mg/kg，160mg/kg組和尼莫地平注射液40μg/kg組。尾靜脈注射給藥10分鐘后，分別將小鼠移入底部盛有10g新鮮鈉石灰的150ml廣口瓶中，加蓋密封。觀察其存活時間，以呼吸停止為死亡指征。另取4組小鼠同上，分別給予生理鹽水和DZ540mg/kg，80mg/kg，160mg/kg。給藥10分鐘后，分別腹腔注射鹽酸異丙腎上腺素2mg/kg，并立即放入廣口瓶內(nèi)密封。觀察方法同前。并依下式計算存活時間延長率(％)
實驗結(jié)果表明，DZ580mg/kg和160mg/kg能顯著延長常壓耐缺氧小鼠的存活時間；同時DZ5160mg/kg劑量組也能明顯延長給予異丙腎上腺素小鼠常壓耐缺氧存活時間，提示DZ5具有降低異丙腎上腺素增加心肌耗氧量的作用，尼莫地平ND也能顯著延長小鼠存活時間。結(jié)果見Tab 1。
Tab 1 Effects of DZ5 on survival time on normobaric anoxia model andmyocarial anxia model induced by isoproterenol inmice.(Mean±SD，n＝10)
與NS比較*P＜0.05***P＜0.001；與NS+ipo比較△P＜0.05△△P＜0.01 實施例2DZ5對小鼠急性腦缺血的影響 小鼠(20±2g)50只，隨機分成5組，每組10只，雌雄各半，分別i v.生理鹽水，DZ540mg/kg，80mg/kg，160mg/kg以及尼莫地平注射液40μg/kg。10分鐘后迅速從小鼠雙耳后頸部斷頭，依雙盲法觀察小鼠喘氣時間。
并依下式計算存活時間延長率(％)
實驗結(jié)果表明，DZ580mg/kg和160mg/kg能顯著延長斷頭小鼠的喘氣時間，與生理鹽水對照組比較具有顯著性差異(分別為P＜0.05和P＜0.01)，尼莫地平也能顯著延長斷頭小鼠的喘氣時間(P＜0.01)。結(jié)果見Tab 2。
Tab 2 Effects of DZ5 on persistent time of gasping of isolated headsof mice by decapitgation.(Mean±SD，n＝10)
與NS比較*P＜0.05**P＜0.01 實施例3小鼠雙側(cè)頸總動脈及迷走神經(jīng)結(jié)扎 依實施例2的方法分組給藥，給藥后10分鐘用0號絲線結(jié)扎雙側(cè)頸總動脈和迷走神經(jīng)，觀察小鼠的存活時間，以呼吸停止為死亡指標。
實驗結(jié)果表明，DZ580mg/kg和160mg/kg能顯著延長雙側(cè)頸總動脈及迷走神經(jīng)結(jié)扎小鼠的存活時間，與生理鹽水對照組比較具有顯著性差異(分別為P＜0.05和P＜0.01)，尼莫地平也能顯著延長雙側(cè)頸總動脈及迷走神經(jīng)結(jié)扎小鼠的存活時間(P＜0.01)。結(jié)果見Tab 3。
Tab 3 Effects of DZ5 on survival time of mice subjected to bilateralcarotid artery ligation.(Mean±SD，n＝10)

與NS比較*P＜0.05 **P＜0.01 實施例4DZ5對小鼠KCN中毒的影響 依實施例2的方法分組給藥，給藥后10分鐘ip.KCN 10mg/kg，觀察小鼠的存活時間，以呼吸停止為死亡指標。
實驗結(jié)果表明，DZ580mg/kg和160mg/kg能顯著延長KCN中毒小鼠的存活時間，與生理鹽水對照組比較具有顯著性差異(分別為P＜0.05和P＜0.01)，尼莫地平也能顯著延長KCN中毒小鼠的存活時間(P＜0.01)。結(jié)果見Tab 4。
Tab 4 Effects of DZ5 on survival time in the intoxicant mice of KCN.(Mean±SD，n＝10)
與NS比較*P＜0.05 **P＜0.01 實施例5DZ5對小鼠NaNO2中毒的影響 依實施例2的方法分組給藥，給藥后10分鐘ip.NaNO2800mg/kg，觀察小鼠的存活時間，以呼吸停止為死亡指標。
實驗結(jié)果表明，DZ580mg/kg和160mg/kg能顯著延長NaNO2中毒小鼠的存活時間，與生理鹽水對照組比較具有顯著性差異(分別為P＜0.05和P＜0.01)，尼莫地平也能顯著延長NaNO2中毒小鼠的存活時間(P＜0.01)。結(jié)果見Tab 5。
Tab-5Effects of DZ5 on survival time in the intoxicant mice of NaNO2(Mean±SD，n＝10)
與NS比較*P＜0.05，**P＜0.01 實施例6DZ5對小鼠學習記憶的影響 將90只小鼠隨機分成6組，每組15只，均為雄性，分別為空白1、空白2、陽性對照組及給藥組?？诜o藥3d后開始訓練，每只每天訓練10次，連續(xù)訓練3d。最后一次給藥后30min，空白2、陽性對照組和給藥組分別腹腔注射東莨菪堿(1ml/kg)，再過30分鐘后開始測試，每只測5次，記錄小鼠錯誤次數(shù)。用t檢驗法進行組間差異比較?？瞻?對照組、陽性對照組(尼莫地平)和DZ5150mg/kg、75mg/kg、37.5mg/kg劑量組小鼠的跳臺錯誤次數(shù)均明顯減少。結(jié)果見Tab 6。
Tab 6 The effect of PIF on the impairment of memoryin mice performed cerebral ischemia-reperfusion in step-down test(Mean±SD)

與NS比較，**P＜0.01 實施例7DZ5對缺氧所致大鼠皮層神經(jīng)元損傷的影響 將懷孕17-19d的大鼠脫頸處死，無菌條件下取出胎鼠，超凈臺前取出胎鼠大腦，置于冰浴的DMEM培養(yǎng)液中，仔細剔除軟腦膜及血管，分離大腦皮層。將分離的大腦皮層剪碎，用0.25％胰酶在37℃水浴中消化5min，離心(1000r，5min)棄上清液，用IMDM培養(yǎng)液(含10％的胎牛血清)輕輕吹打分散成細胞懸液，細胞懸液過濾，調(diào)整細胞濃度為1×106cell·mL-1，將細胞接種于預先用0.01％多聚賴氨酸覆蓋過的96孔培養(yǎng)板，每孔100μL，置37℃，5％CO2培養(yǎng)箱中孵育。18-22h后換新鮮的加有1‰阿糖胞苷的IMDM培養(yǎng)液，再隔24h后換50％含血清IMDM培養(yǎng)液。以后每隔1d換1次新鮮的含血清IMDM培養(yǎng)液，細胞培養(yǎng)至5-6d。
實驗分為空白、模型組和DZ、DZ5不同濃度組。實驗時各組均換為無血清的IMDM培養(yǎng)液，給藥組加入不同濃度DZ或DZ5置于5％CO2培養(yǎng)箱孵育，24h后空白對照組換為含有葡萄糖的Earle’s液，缺氧模型組換為不含葡萄糖的Earle’s液，然后把培養(yǎng)板置于缺氧罐內(nèi)，通入95％N2和5％CO2混合氣體20min。24h后，每孔加入MTT溶液10μl，37℃5％CO2培養(yǎng)箱孵育4h，吸出原液，每孔再加入DMSO溶液100μl，微微振蕩10min，用酶標儀492nm波長測定光密度值。
實驗數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行分析，各組數(shù)據(jù)用均值±標準誤(X±SE)表示，采用One-Way ANOVA評價整體性差異，用LSD進行組間比較，P＜0.05為有顯著性差異。
對正常神經(jīng)元影響見Tab 7，對缺氧神經(jīng)元的影響見Tab 8。
Tab.7 Effects of DZ5 on the viability of primary cultured neurons(Mean±SD)

Tab 8 Effects of DZ5 on the injure of primary cultured neuronsinduced by hypoxia.(Mean±SD)

#P＜0.05，##P＜0.01，###P＜0.001，compared with the control group； *P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，compared with the model group 實施例8DZ5對垂體后葉素所致大鼠心肌缺血的影響 取體重為180～220g的健康SD大鼠40只，雌雄不限，隨機分為4組生理鹽水(NS)組，DZ5高、中、低劑量組(120、60、30mg/kg)。用25％的烏拉坦1g/kg ip.麻醉后，仰位固定于鼠臺上，以6號針頭刺于四肢皮下，并與心電圖機肢體導聯(lián)電極相連。心電圖機選擇標準電壓1mv＝10mm，紙速50mm/s。各組分別尾靜脈iv.相應濃度的受試藥物5ml/kg，給藥10分鐘后，舌下iv.垂體后葉素(Pit)0.8U/kg，5s內(nèi)注完。用心電圖機記錄注射Pit前及注射后15s、30s、45s、60s、90s和3min、5min、8min的ECG。觀察T波高度變化及心率變化。T波高度及心率均為每個時間點連續(xù)測5個波形，取其平均值。T波高度無論升高或降低，取變化的絕對值。實驗結(jié)果作組間t檢驗，判斷其顯著性。
8.1T波高度變化 NS對照組大鼠iv.Pit后，心電發(fā)生明顯改變，第一期(0～30s)出現(xiàn)明顯的S-T段抬高和T波高聳(P＜0.01)；第二期(30s以后)，呈現(xiàn)明顯的S-T段下移，T波低平或倒置(P＜0.05或P＜0.01)。本實驗結(jié)果與其它文獻報道相符。DZ5高劑量可在各時間點顯著對抗Pit引起的∑ST升高或降低。結(jié)果見Tab 9。
Tab 9 Effects of DZ5 on the aptitude of T wave of acute myocardialischemia induced by PIT in rats(Mean土SD，n＝10)

與pre-pit比較*P＜0.05**P＜0.01 8.2心率變化 NS組大鼠iv.Pit后，可使大鼠心率明顯減慢，至10分鐘仍未恢復。DZ5高劑量(120mg/kg)在各時間點均明顯緩解Pit所致的心率減慢。結(jié)果見Tab 10。
Tab10 Effects of DZ5 on the changes of heart rate of acute myocardialischemia induced by PIT in rats(Mean土SD，n＝10)
與pre-pit比較*P＜0.05**P＜0.01 實施例9DZ5對體外抗血小板聚集的影響 家兔隨機分5組，每組6只。耳緣靜脈采血4.5mL，以3.8％枸櫞酸鈉抗凝(血與抗凝劑體積比為9∶1)，室溫下離心(800kg，3min)，取上清液制備富血小板血漿(PRP)。分離出PRP后，再離心(2000kg，10min)取上清液制備貧血小板血漿(PPP)，用PPP調(diào)節(jié)透光率為100％。取PRP 200μL置于比濁管內(nèi)，分別加入不同濃度的DZ5(30，60，120mg/ml)或阿司匹林(ASP，100mg/ml)20μL，對照組加等容積NS。溫育5分鐘后，以花生四烯酸(AA)為誘導劑，描記10分鐘聚集曲線，測定最大聚集強度。
依下式計算血小板聚集抑制百分率
實驗結(jié)果表明，DZ5在體外對AA誘導的家兔血小板聚集有明顯抑制作用。隨著劑量增加，作用增強，呈現(xiàn)出量效相關(guān)性。給藥組與NS對照組比較，有顯著性差異(P＜0.001)。ASP組對AA誘導的體外家兔血小板聚集也有明顯的抑制作用(P＜0.01)。結(jié)果見Tab 11。
Tab11 Effects of DZ5 on the platelet aggregation induced by AAin rabits in vitro.(Mean土SD，n＝6)
與NS比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001 實施例10DZ5對體內(nèi)抗血小板聚集的影響 家兔分別從耳緣靜脈iv.DZ5 15，30，60mg/kg或ASP 80mg/kg，對照組iv.等容積NS。給藥后10min自另一耳緣靜脈放血，按體外試驗法分別進行PRP和PPP的制備，用AA作誘導劑，考察藥物對血小板聚集的影響。
實驗結(jié)果表明，DZ5(iv.)對AA誘導的家兔血小板聚集有明顯抑制作用。并隨著劑量增加作用增強，劑量與效應相關(guān)。給藥組與對照組比較，有顯著性差異(或P＜0.001)。ASP組對AA誘導的家兔血小板聚集也有明顯的抑制作用(P＜0.01)。結(jié)果見Tab 12。
Tab 12 Effects of DZ5 on the platelet aggregation induced by AAin rabits in vivo.(Mean土SD，n＝6)

與NS比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001 實施例11DZ5對家兔頸總動脈血栓形成的影響 家兔隨機分為5組，每組8只。用3％異戊巴比妥鈉按60mg/kg耳緣靜脈注射麻醉，背位固定，分離一側(cè)頸總動脈，在相距約4cm處將兩端用動脈夾夾住血管，取12號細縫衣針，連一根一端打結(jié)的細線，自近心端穿入頸總動脈，順血管走行3cm，從遠心端穿出，將另一端也打結(jié)后剪斷細線，然后緩慢松開動脈夾。分別從另一側(cè)耳緣靜脈iv.生理鹽水、DZ515mg/kg、30mg/kg和60mg/kg以及ASP 80mg/kg?；謴脱?h后將各組家兔的該段頸總動脈剪下，縱向切開，取出細線，置濾紙上，吸去余血，并迅速稱重，減去細線自身重量，即得血栓濕重。依下式計算血栓形成抑制率 實驗結(jié)果表明DZ5(iv.)對家兔頸總動脈血栓形成有明顯抑制作用，
并呈量效相關(guān)性。隨著劑量加大，血栓濕重減輕，與對照組比較有顯著性差異(P＜0.001)。ASP組對家兔頸總動脈血栓形成也有明顯的抑制作用(P＜0.01)。結(jié)果見Tab 13。
Tab 13 Effects of DZ5 on the wet weight of thrombosis formated incommon carotid artery in rabit.(Mean土SD，n＝8)

與NS比較，*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001 實施例12DZ5的急性毒性實驗 取小鼠60只，隨機分成6組，分別灌胃3g/kg(已達最大量)和尾靜脈注射1.8g/kg(濃度為12.5％、注射量為0.3ml以內(nèi)，已達最大濃度)。實驗后于20±1℃自由飲水和進食條件下飼養(yǎng)觀察7d，觀察小鼠存活情況及外觀表現(xiàn)。
口服給藥小鼠全部存活，存活者外觀、行動均無異常，未能測出LD50，求得最大耐受量為口服3g/kg，靜注給藥LD50＝3.78g/kg。
總之，本實驗表明DZ5具有良好的抗腦缺血、缺氧，抗心肌缺血、缺氧，拮抗記憶障礙，抗血小板聚集及抗血栓形成，保護神經(jīng)元的作用，且本發(fā)明的實質(zhì)性特點和顯著進步在于DZ5使用的安全性，在具有抗腦缺血、缺氧，抗心肌缺血、缺氧作用的同時具有拮抗記憶障礙，抗血小板聚集及抗血栓形成，保護神經(jīng)元的作用。此項研究對于藥效評價和臨床應用具有重要意義，DZ5的進一步開發(fā)提供了理論依據(jù)。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)DZ5可以用于制藥領(lǐng)域和保健品領(lǐng)域。
通過下面實施例詳細說明本發(fā)明。但是應該理解這些實施例只是說明本發(fā)明，而不是在任何方面限制本發(fā)明的范圍。
實施例13片劑 DZ5 30g 淀粉 29.5g 硬脂酸鎂 0.5g 50％乙醇 3ml 上述組分在混合機中混合后壓制成片。
實施例14膠囊劑 DZ5 80g 淀粉 80g 上述組分混合均勻后，裝入膠囊。
實施例15顆粒劑 DZ5 200g 淀粉200g 糊精100g 乙醇5ml 上述組分混合后，過篩，干燥，得到顆粒劑。
實施例16滴丸 DZ550g PEG600020g PEG400020g 將DZ5加入到加熱融化的聚乙二醇輔料中混勻；接著將熔融混合液移入滴丸機進行滴制；藥液滴至液體石蠟冷卻劑中冷卻；用吸布吸干冷卻劑，選丸，即得到DZ5滴丸。
實施例17注射劑 DZ5 10g 氯化鈉 0.9g 氫氧化鈉溶液適量 鹽酸溶液適量 注射用水至100ml 按處方量稱取各組分，加注射用水40ml，攪拌至完全溶解后，加入0.1％活性炭，60℃保溫攪拌30min，趁熱過濾，除去活性炭，補加注射用水至全量。用0.45μm濾膜粗濾，再用0.22μm的微孔濾膜過濾。灌封，100℃流通蒸氣中滅菌30min，即得DZ5注射液。
實施例18口服液 DZ510g 蒸餾水 15ml 單糖漿 加至100ml 取DZ5溶于蒸餾水中，加單糖漿至全量，即得。
實施例19外用制劑 DZ5 10g 卡波普940 3g 甘油20g 三乙醇胺適量 蒸餾水 至100ml 取卡波姆3g加適量水溶脹后，加入甘油，研磨使?jié)櫇瘢尤掖及费心コ赏该髂z基質(zhì)。另取DZ，用適量水溶解，攪勻。將上述藥液加入凝膠基質(zhì)中，邊加邊研磨，加蒸餾水至100ml，繼續(xù)攪拌均勻，得透明凝膠劑。
實施例20凍干制劑 DZ5 10g 氯化鈉 0.9g 氫氧化鈉溶液適量 鹽酸溶液適量 注射用水至100ml 按處方量稱取各組分，加注射用水40ml，攪拌至完全溶解后，加入0.1％活性炭，60℃保溫攪拌30min，趁熱過濾，除去活性炭，補加注射用水至全量。用0.45μm濾膜粗濾，再用0.22μm的微孔濾膜過濾，冷凍干燥，即得注射用DZ5。
權(quán)利要求
1、7，4’-二(琥珀酸單酯)氧乙氧基-葛根黃豆苷元，其特征在于它是以葛根黃豆苷元為母體，采用半合成的方法進行7，4’位取代而成的葛根黃豆苷元新衍生物。
2、7，4’-二(琥珀酸單酯)氧乙氧基-葛根黃豆苷元的制備方法，其特征在于在1000ml圓底燒瓶中，加入葛根黃豆苷元6.3克，無水碳酸鉀10.5，碘化鉀12.50，氯乙醇0.65克，無水二甲基甲酰胺300ml，100℃水浴反應24小時；反應完畢加5倍量水，過濾，再用0.5％氫氧化鈉洗滌；水洗至中性，干燥，用55％二甲基甲酰胺重結(jié)晶得mp194-196℃無色片狀結(jié)晶6.0克，收率70％；在1000ml圓底燒瓶中，加入上述化合物5克，琥珀酸酐7.5克，4-二甲氨基吡啶4克，無水二氯甲烷200ml，回流反應4小時h；回收溶劑后，加水析出白色粉末；過濾，干燥，用50％乙醇重結(jié)晶，得mp80-82℃的白色針狀結(jié)晶5克，收率65％。
3、7，4’-二(琥珀酸單酯)氧乙氧基-葛根黃豆苷元藥物組合物，其特征在于7，4’-二(琥珀酸單酯)氧乙氧基-葛根黃豆苷元可以和藥學上可接受的載體或賦形劑混合。
4、7，4’-二(琥珀酸單酯)氧乙氧基-葛根黃豆苷元和其藥物組合物在制備抗腦缺血、缺氧，抗心肌缺血、缺氧，抗記憶障礙，抗血小板聚集及抗血栓形成藥物及保健品中的應用。
5、7，4’-二(琥珀酸單酯)氧乙氧基-葛根黃豆苷元，其特征在于7，4’-二(琥珀酸單酯)氧乙氧基-葛根黃豆苷元和其藥物組合物可以和藥學上可接受的載體制備成臨床可用的片劑、膠囊、顆粒劑、滴丸、注射劑，口服液及外用藥劑型。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了7、4’-二(琥珀酸單酯)氧乙氧基-葛根黃豆苷元的醫(yī)藥新用途。通過小鼠常壓耐缺氧實驗模型、小鼠急性腦缺血實驗模型、小鼠雙側(cè)頸總動脈及迷走神經(jīng)結(jié)扎實驗模型、小鼠KCN中毒實驗模型、小鼠NaNO2中毒實驗模型學習記憶實驗模型、DZ5對缺氧所致大鼠皮層神經(jīng)元損傷的作用模型、對垂體后葉素所致大鼠心肌缺血的影響模型、體外抗血小板聚集實驗模型、體內(nèi)抗血小板聚集實驗模型、對家兔頸總動脈血栓形成的影響模型等對DZ5進行藥理活性研究。結(jié)果表明，DZ5具有抗腦缺血、缺氧，抗心肌缺血、缺氧，拮抗記憶障礙，抗血小板聚集及抗血栓形成，保護缺氧所致大鼠皮層神經(jīng)元損傷的作用。DZ5可與藥學可接受的載體或賦形劑混合制成藥物混合物。
文檔編號C07D311/36GK101255149SQ20081001091
公開日2008年9月3日 申請日期2008年4月3日 優(yōu)先權(quán)日2008年4月3日
發(fā)明者王淑君, 姚崇順 申請人:沈陽藥科大學