專利名稱：：一類具有細(xì)胞毒活性哌嗪類衍生物的制備方法和用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于有機(jī)化學(xué)、藥物化學(xué)和藥理學(xué)領(lǐng)域，具體而言，本發(fā)明涉及具有細(xì)胞毒活性的哌嗪類衍生物的制備方法和用途。經(jīng)藥理活性測試，該類化合物對三株腫瘤細(xì)胞如前列腺癌細(xì)胞(PC-3)，鼻咽癌細(xì)胞(CNE)，口腔上皮癌細(xì)胞株(KB)的生長具有較強(qiáng)的抑制活性，可以預(yù)期作為抗腫瘤藥物用途。技術(shù)背景目前，由于工業(yè)發(fā)展帶來的環(huán)境污染等問題，人類的生存環(huán)境質(zhì)量不斷下降，腫瘤疾病的發(fā)病率和致死率也不斷上升。然而目前臨床所用的細(xì)胞毒性抗腫瘤藥物的選擇性不高，導(dǎo)致對正常細(xì)胞的惡性殺傷，限制了該類藥物的普遍使用性。因此，尋找和發(fā)現(xiàn)新的選擇性高的細(xì)胞毒性抗腫瘤藥物是世界范圍內(nèi)的研究熱點(diǎn)。我們也致力于這類藥物的研究。哌嗪衍生物通常具有優(yōu)良的藥效學(xué)性質(zhì)，可作為抗腫瘤藥、止痛和鎮(zhèn)靜劑、強(qiáng)心劑等。本發(fā)明的目的在于對這類化合物進(jìn)行合成和結(jié)構(gòu)改造，以期尋找對腫瘤細(xì)胞株生長產(chǎn)生更強(qiáng)抑制作用的哌嗪衍生物。根據(jù)全世界尤其是中國的常發(fā)腫瘤疾病譜及腫瘤細(xì)胞的敏感性，我們選擇了人前列腺癌細(xì)胞(PC-3)，鼻咽癌細(xì)胞(CNE)，口腔上皮癌細(xì)胞(KB)作為體外細(xì)胞毒活性藥理評價(jià)的指標(biāo)。本發(fā)明制備得到的哌嗪類衍生物對上述腫瘤細(xì)胞的生長具有較強(qiáng)的抑制活性，可以預(yù)期作為抗腫瘤藥物用途。由此完成了本發(fā)明。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種具有細(xì)胞毒活性的雜環(huán)化合物。具體而言，本發(fā)明提供了一種具有式(I)所示的哌嗪類衍生物及其可藥用鹽:其中X選自氧或氫原子；Ri、R2、R3可以相同或不同，分別選自鹵素，氫原子，羥基，或含15個(gè)碳的烷氧基，RpR2、R3還可以形成偕二甲氧基；R4基團(tuán)選自氫原子，酯基，取代或未取代的芐基，取代或未取代的五元或六元脂環(huán)，或者取代或未取代的五元或六元芳香環(huán)；用來取代的取代基選自15個(gè)碳的烷氧基，鹵素，或者57元的芳環(huán)或脂環(huán)。本發(fā)明的另一目的是提供了制備式(I)化合物和其中間體的制備方法；本發(fā)明的再一目的是提供了式(I)化合物及其中間體用于制備防治腫瘤疾病藥物的用途；本發(fā)明的又一目的是提供了一種含有式(I)化合物及其中間體的用于防治腫瘤疾病的藥物組合物。本發(fā)明優(yōu)選的式(I)化合物選自W.[4-(3,4-亞甲二氧基苯氧基)苯基][4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-l-基]甲酮；1-2.[4-(3，4-亞甲二氧基苯氧基)苯基][4-(3，4-二氯芐基)哌嗪-l-萄甲酮;W.[4-(3,4-亞甲二氧基苯氧基)苯基][4-(4-氟苯基)哌嗪-l-蜀甲酮；K[4-(3，4-亞甲二氧基苯氧基)苯基](4-環(huán)己基哌嗪-l-基)甲酮；[4-(3,4-二氯芐基)哌嗪-l-基][4-(3-甲氧基苯氧基)苯萄甲酮；[4-(3,4-二氯芐基)哌嗪-l-萄[4-(4-甲氧基苯氧基)苯蜀甲酮；1-7.[4-(4-氟芐萄哌嗪-l-基][4-(3-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮；1-8.[4-(4-氟芐萄哌嗪-1-蜀[4-(4-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮；1-9.[4-(3，4-二甲氧基芐基)哌嗪-l-基][4-(3-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮；1-10.[4-(3,4-亞甲二氧基苯氧基)苯基][4-(4-氟芐基)哌嗪-l-基]甲酮；L11.[4-(3，4-亞甲二氧基苯氧基)苯甲?；哙夯鵠-1-甲酸乙酯；1-12.[4-二苯甲基哌嗪-l-基][4-(3,4-亞甲二氧基苯氧基)苯基]甲酮；1-13.[4-(3，4-二甲氧基芐基)哌嗪-l-基][4-(3，4-亞甲二氧基苯氧基)苯基]甲酮；1_14.[4-(3,4-二氯苯基)哌嗪-l-基][4-(3，4-亞甲二氧基苯氧基)苯基]甲酮；1-15.1-二苯甲基-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基]-哌嗪；1-16.1-(3，4-二氯芐基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基]-哌嗪;1-17.4-[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基]哌嗉基-1-甲酸乙酯；1-18.1-(2-甲氧基苯基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基]-哌嗪；1-19.1-(3，4-二氯苯基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基]-哌嗪;1-20.(2-呋喃基)[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基哌嗪-l-基]甲酮；1-21.l-(4-氟苯基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基]-哌嗪。1—91—10<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula><formula>formulaseeoriginaldocumentpage7</formula>式(I)所示的化合物，以及各中間體的具體制備過程如下所示:方法l:其中RhR2、R3可以相同或不同，分別選自鹵素，氫原子，羥基，或含15個(gè)碳的垸氧基，Ri、R2、R3還可以形成偕二甲氧基；R4基團(tuán)選自氫原子，酯基，取代或未取代的芐基，取代或未取代的五元或六元脂環(huán)，或者取代或未取代的五元或六元芳香環(huán)；用來取代的取代基選自15個(gè)碳的垸氧基，鹵素，或57元的芳環(huán)或脂環(huán)。式(I)化合物及其制備中間體具有重要的生物活性，體外試驗(yàn)表明此類具有哌嗪類衍生物結(jié)構(gòu)的化合物對人口腔上皮癌細(xì)胞(KB)、人前列腺癌細(xì)胞(PC-3)和人鼻咽癌細(xì)胞(CNE)顯示出顯著的細(xì)胞毒活性，表明該類雜環(huán)化合物有可能發(fā)展成為抗腫瘤藥物。本發(fā)明的式(I)化合物及其制備中間體或其可藥用鹽可以與藥學(xué)上常用的輔料或載體結(jié)合，制備得到具有抗腫瘤用途的藥物組合物。上述藥物組合物可以采用注射劑、片劑或膠囊等劑型藥物。具體實(shí)施方式下面通過制備例和實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明。實(shí)施例給出了代表性新化合物的合成及相關(guān)結(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)以及部分活性數(shù)據(jù)。其中Me代表甲基(CH3)，OEt代表乙氧基(OCH2CH3)，DCM代表二氯甲烷，DMF代表N，N-二甲基甲酰胺，THF代表四氫呋喃，DCC代表二環(huán)己基碳二亞胺，DMAP代表4-二甲氨基吡啶。度量單位毫克以"mg"表示，毫摩爾以"mmol"表示，毫升以"ml"表示。核磁共振譜中MHz表示兆赫茲，J為耦合常數(shù)(用赫茲Hz表示其數(shù)值)。必須說明，下述實(shí)施例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對本發(fā)明進(jìn)行的簡單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。制備例l:化合物II-1(4-(4-甲氧基苯氧基)苯甲酸甲酯)的制備'COOMe化合物n—i在50毫升三口燒瓶中，氮?dú)獗Ｗo(hù)下依次加入對碘苯甲酸甲酯(262mg，l.Ommol)，對甲氧基苯酚(248mg，2.0mmol)，碳酸銫(Cs2C03)(980mg,3.0mmol)，碘化銅(Cul)(19mg，0.1mmol)，l-苯基-l，3-二丁酮(33mg,0.2mmo1)和1，4-二氧六環(huán)(10ml)?；旌衔锷郎氐?00'C下攪拌12小時(shí)，冷卻至室溫，過濾，向?yàn)V液中加入水(50ml)和乙酸乙酯(50ml)，乙酸乙酯萃取(2x50ml)，合并有機(jī)相，水洗(2x50ml)。無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓蒸除乙酸乙酯后，硅膠柱層析(石油醚乙酸乙酯=5:1)得到白色固體220mg，分離收率Y=86%。熔點(diǎn)94.5-95.5°C;核磁共振氫譜。HNMR)(400MHz，氖代氯仿)S7.97(雙雙峰,2H,/=2.0,6.8Hz)，7.01(雙雙峰，2H,J=2.0，6.8Hz)，6.92(雙峰，4H，《/=8.4Hz),3.88(單峰，3H),3.82(單峰，3H)。制備例2:化合物II-2(4-(3-甲氧基苯氧基)苯甲酸甲酯)的制備'COOMe化合物n-2根據(jù)制備例1的方法制備化合物II-2，其中酚用3-甲氧基苯酚而不是對甲氧基苯酚。分離收率￥=78%;熔點(diǎn)53.5~55.5°C;核磁共振氫譜&NMR(400MHz，氖代氯仿)S8.00(雙峰，2H，/=8,8Hz),7.28(多重峰，1H),7.01(雙峰，2H，/=8.8Hz)，6.74(雙雙峰，1H，J=2.8，8,0Hz),6.63(多重峰，2H)，3.90(單峰，3H),3.79(單峰，3H)。制備例3:化合物II-3(4-(3，4-亞甲二氧基苯氧基)苯甲酸甲酯)的制備:根據(jù)制備例1的方法制備化合物II-3，其中酚用3，4-亞甲二氧基苯酚而不是對甲氧基苯酚。分離收率￥=83%;熔點(diǎn)70~71°C;核磁共振氫譜&NMR(400MHz,氘代氯仿)57.98(雙峰，2H，/=8.8Hz)，6.94(雙峰，2H，J=8.8Hz)，6.80(雙峰，1H，《/=8.4Hz)，6.60(雙峰，1H，《/=2.4Hz)，6.54(雙雙峰，1H，《/=2.4,8.4Hz)，6.00(單峰，2H),3.89(單峰，3H)。制備例4:化合物III-1(4-(4-甲氧基苯氧基)苯甲酸)的制備化合物II-l(220mg，0.85mmol)在10mlTHF和10mlIN氫氧化鋰(LiOH)溶液中在室溫下攪拌過夜，除去THF后，用3N鹽酸(HC1)溶液中和至pH值為3，乙酸乙酯提取(3x50ml)，干燥，減壓蒸除乙酸乙酯后得粗產(chǎn)品203mg。未進(jìn)一步純化直接用于下一步反應(yīng)。制備例5:化合物III-2(4-(3-甲氧基苯氧萄苯甲酸)的制備<formula>formulaseeoriginaldocumentpage10</formula>vCOOH化合物m-2以化合物II-2為原料制備得到。根據(jù)制備例4的方法制備例6:化合物III-3(4-(3，4-亞甲二氧基苯氧基)苯甲酸)的制備:根據(jù)制備例4的方法，以化合物n-3為原料制備得到。制備例7:化合物IV-2(4-(3-甲氧基苯氧基)苯甲醇)的制備:化合物II-2(258mg,1.0mmol)在10mlTHF中在0。C下分批加入LiAlH4G8mg，l.Ommol)，加完后逐漸升溫到室溫過夜，TLC檢測顯示原料已經(jīng)反應(yīng)完，反應(yīng)用10ml水和10mi乙酸乙酯淬滅，分層后，水層用乙酸乙酯提取(3x10ml)，合并有機(jī)層，干燥，減壓蒸除乙酸乙酯后得粗產(chǎn)品218mg。未進(jìn)一步純化直接用于下一步反應(yīng)。核磁共振氫譜&NMR(400MHz,気代氯仿)S7.33(雙峰，2H,J=8.8Hz)，7.24(多重峰，1H)，7.01(雙峰,2H，/=8.8Hz)，6,65(雙雙峰，1H,/=2.8，8.0Hz)，6.57(多重峰，2H)，4.66(單峰，2H),3.77(單峰，3H)。制備例8:化合物V-2(l-氯甲基-4-(3-甲氧基苯氧基)苯)的制備化合物IV-2(230mg，1.0mmol)在15mlDCM中在0。C下加入TEA(110mg，1.1mmol)，然后滴加甲基璜酰氯(125mg，1.1mmol)，滴加完后逐漸升溫到室溫過夜，薄層色譜檢測顯示原料已經(jīng)反應(yīng)完，反應(yīng)液用水(3x10ml)洗，分層后，有機(jī)層干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去DCM后，硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯=5:1)得到白色固體199mg，分離收率Y-80X;熔點(diǎn)6769。C;核磁共振氫譜^NMR(400MHz,氘代氯仿)S7.36(雙峰,J=8.8Hz,2H),7.23(多重峰，1H),7.00(雙峰,2H,J=8.8Hz),6.69(雙雙峰，1H，/=2.8，8.0Hz),6.61(多重峰，2H),4.59(單峰，2H):3.79(單峰，3H)。實(shí)施例l:化合物I-1([4-(3,4-亞甲二氧基苯氧基)苯基][4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-l-基]甲酮)的制備130mg化合物m-3溶于二氯甲烷(5ml)中，分別加入DCC(113mg，0.5mmol),DMAP(5mg，0.04mmol)和l-(2-甲氧基苯基)哌嗪(100mg，0.5mmo1)，在室溫下反應(yīng)過夜。過濾，用二氯甲烷洗濾餅，減壓蒸除溶劑后，硅膠色譜柱層析(DCM:甲醇二50:l)得白色固體114mg。分離收率丫=53%;熔點(diǎn)U0113。C;核磁共振氫譜&NMR(400MHz,気代氯仿)S3.04(寬單峰，4H)，3.71(寬單峰，4H)，3.84(單峰，3H),6.06(單峰，2H),6.57(雙雙峰，1H,J=8.0,2.0Hz)，6.68(雙峰,1H，J=2.4Hz),6.867.00(多重峰，7H),7.46(雙峰，2H，J=6.8,2.0Hz);電噴霧質(zhì)譜MS(ESI),m/e(相對豐度)433(M+1)(100)。根據(jù)與以上制備例l-6及實(shí)施例1的方法，制備得到以下式(I)中X為氧原子時(shí)的化合物，即表一所示之實(shí)施例2-14所示的化合物Ri0表一:式(I)<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>下面列出的是表一中各化合物的理化數(shù)據(jù)1-2.[4-(3,4-亞甲二氧基苯氧基)苯基][4-(3，4-二氯芐基)哌嗪-l-蜀甲酮無色粉末，熔點(diǎn)89~90°C;核磁共振氫譜&NMR(400MHz,氘代氯仿)S2.47(寬單峰，4H)，3.56(單峰，2H),3.58(寬單峰，4H),6.05(單峰，2H),6.56(雙雙峰，1H,J=8.0，2.0Hz),6.67(雙峰,1H,J=2.4Hz),6.86(雙峰，1H,J=8.4Hz),6,96(雙峰，2H，J=8.4Hz)，7.33(雙峰，1H,J=8.4Hz),7.41(雙峰，2H，J=8,4Hz),7.50~7.57(多重峰，2H)。1-3.[4-(3，4-亞甲二氧基苯氧基)苯基][4-(4-氟苯基)哌嗪-l-基]甲酮無色粉末，熔點(diǎn)111113°C;核磁共振氫譜iHNMR(400MHz，氘代氯仿)S3.15(寬單峰，4H),3.73(寬單峰，4H)，6.05(單峰，2H)，6.57(雙雙峰，1H,J=8.0，2.0Hz)，6.68(雙峰，1H，J=2.4Hz)，6.88(雙峰，1H,J=8.4Hz),6.98-7.03(多重峰，6H),7.47(雙峰，2H,J=8.8Hz)。M.[4-(3，4-亞甲二氧基苯氧基)苯基](4-環(huán)己基哌嗪-l-基)甲酮無色粉末，熔點(diǎn)75~77。C;核磁共振氫譜&NMR(400MHz,氘代氯仿)S1.10-1.30(多重峰，6H),1.76~1.78(多重峰，4H),2.30(多重峰，1H)，2.55(brs，4H)，3.52(寬單峰，4H),6.05(單峰，2H)，6.56(雙雙峰，1H，J=8.0,2.0Hz),6.67(雙峰，1H,J=2.4Hz)，6.87(雙峰，1H，J=8.4Hz),6.96(雙峰，2H，J=8.4Hz)，7.40(雙峰，2H，J=8.4Hz)。1-5.[4-(3，4-二氯芐基)哌嗪-l-基][4-(3-甲氧基苯氧基)苯蜀甲酮淺黃色粉末，熔點(diǎn)87~89°C;核磁共振氫譜iHNMR(400MHz，氘代氯仿)S2.48(寬單峰，4H),3.58(寬單峰，4H)，3.70(單峰，2H)，3.78(單峰，3H),6.58~6.61(多重峰，2H)，6.69(雙峰,1H,J=8.0Hz),6.84(單峰，1H),7.00(雙峰,2H,J=8.4Hz),7.17(雙峰，1H,J=8.0Hz),7.237.26(多重峰,1H，)，7.37-7.45(多重峰，3H)。M.[4-(3,4-二氯芐基)哌嗪-l-萄[4-(4-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮無色粉末，熔點(diǎn)9395°C;S2.46(寬單峰，4H)，3.51(寬單峰，4H),3.74(單峰，2H),3.81(單峰，3H)，6.88~6.93(多重峰，4H),6.69(雙峰,2H，J=8.0Hz)，7.17(雙峰，2H,J=8.4Hz),7.347.40(多重峰，3H,),7.44(單峰，1H)。1-7.[4-(4-氟芐基)哌嗪-l-基][4-(3-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮無色粉末,熔點(diǎn)101~103°C;核磁共振氫譜&NMR(400MHz，氘代氯仿)S2.45(寬單峰，4H),3.48(寬單峰，4H),3.70(單峰，2H),3.78(單峰，3H)，6.58~6.61(多重峰，2H)，6.69(3又峰，1H，J=8.0Hz),7.00~7.03(多重峰,4H)，7.23~7.26(多重峰，3H),7,38(雙峰，2H,J=8.0Hz)。1-8.[4-(4-氟芐基)哌嗪-l-基][4-(4-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮無色粉末,熔點(diǎn)92~94。C;核磁共振氫譜^NMR(400MHz,氘代氯仿)S3.15(寬單峰，4H),3.73(寬單峰，4H)，3.81(單峰，3H),6.95~7.07(多重峰，IOH)，7.46(雙峰，lH，V=8.4Hz)。1-9.[4-(3，4-二甲氧基芐基)哌嗪-l-基][4-(3-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮無色粉末，熔點(diǎn)101-103。C;核磁共振氫譜&NMR(400MHz,氘代氯仿)S2.45(寬單峰，4H),3.48(寬單峰，4H)，3.77(單峰，2H)，3.78(單峰,3H)，3.89(單峰，3H)，3.91(單峰，3H),6.58~6.61(多重峰，2H)，6.70(雙峰,1H,J=8.0Hz),6.81~6.88(多重峰，3H)，7.00(雙峰，1H，J=8.4Hz),7.237.26(多重峰，1H),7.38(雙峰，2H,J=8,4Hz)。1-10.[4-(3，4-亞甲二氧基苯氧基)苯基][4-(4-氟芐基)哌嗪-l-基]甲酮淺黃色粉末，熔點(diǎn)97~99。C;4亥磁共振氫譜HNMR(400MHz,氘代氯仿)S2.43(寬單峰，4H)，3,53(s,2H)，3.58(寬單峰，4H)，6.54(單峰，2H),6.55(雙雙峰，1H，J=8.0,2.4Hz),6.70(單峰，1H)，6.87(雙峰，1H,J=8.0Hz),6.96(雙峰，2H，J=8.0Hz)，7.06~7.10(多重峰，2H),7.377.42(多重峰，4H)。[4-(3,4-亞甲二氧基苯氧基)苯甲酰基哌嗪基]-l-甲酸乙酯無色油狀物；核磁共振氫譜iHNMR(400MHz，氘代氯仿CDC13):S1.25(三重峰,3H，J二7.2Hz)，1.66(寬單峰，2H),3.51(寬單峰，6H),4.46(四重峰，2H，J=7.2Hz),6.00(單峰，2H),6.53(雙雙峰，1H，/=2.4,8.0Hz)，6.60(單峰,1H)，6.78(雙峰，1H，/=8.4Hz),6.96(雙峰，2H，J=8.4Hz)，6.37(雙峰，2H,o^8.4Hz)。1-12.[4-二苯甲基哌嗪-l-基][4-(3，4-亞甲二氧基苯氧基)苯基]甲酮無色粉末，熔點(diǎn)127~130°C;核磁共振氫譜&NMR(400MHz,氘代氯仿)S2.40(寬雙峰，4H),3.48(寬單峰，2H),3.74(寬單峰，2H)，4.25(單峰，1H)，6.01(單峰，2H),6.49(雙雙峰，1H,J=8.0,2.4Hz),6.56(單峰，1H),6.76(雙峰,1H,J=8.0Hz),6.81(雙峰,2H,J=8.0Hz),7.17~7,42(多重峰，12H)。[4-(3，4-二甲氧基芐基)哌嗪-l-基][4-(3,4-亞甲二氧基苯氧基)苯基]甲酮白色固體，熔點(diǎn)85~86°C;核磁共振氫譜&NMR(400MHz，氘代氯仿)S2.45(寬雙峰，4H)，3.48(寬單峰，4H),3.73(單峰，2H),3.87(單峰，3H),3.89(單峰，3H),6.01(單峰，2H)，6.50(雙雙峰，1H,J=8.0，2.4Hz),6.58(單峰，1H)，6.77~6.84(多重峰，3H),6.88(單峰，1H)，6.94(雙峰，2H,J=8.8Hz)，7.36(雙峰，2H,J=8.8Hz)。W4.[4-(3,4-二氯苯基)哌嗪-l-基][4-(3，4-亞甲二氧基苯氧基)苯基]甲酮白色固體，熔點(diǎn)73~74°C;核磁共振氫譜&NMR(400MHz，氘代氯仿)S2.74(寬單峰，4H,H-3'，7')，3.12(寬單峰，4H)，3.74(寬單峰，4H),6.01(單峰，2H)，6.51(雙雙峰，1H，J=8.4,2.4Hz),6.59(單峰，1H),6.74~6.80(多重峰，2H)，6.97(多重峰，3H)，7.30(雙峰，1H，J=8,4Hz)，7.40(雙峰，2H，J=8.4Hz)。實(shí)施例15:化合物1-15(l-二苯甲基-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基]-哌嗪)的制備1-二苯甲基哌嗪(126mg，0.5mmol)溶于乙腈(CH3CN，5ml)中，分別加入碳酸鉀(K2C03)和化合物V-2(125mg，0.5mmo1)，在室溫下反應(yīng)過夜。過濾，用二氯甲垸洗濾餅，減壓蒸除溶劑后，硅膠柱層析(二氯甲烷甲醇=100:1)得無色固體14811^。分離收率￥=64%;熔點(diǎn)67~69。C;核磁共振氫譜iHNMR(400MHz,氘代氯仿)S1.64(brs，1H)，2.50(寬單峰，7H)，3.49(單峰，2H),3.77(單峰，3H),4.22(單峰，1H)，6.55(多重峰，2H)，6.63(雙峰，1H,J=4.0Hz),6.94(雙峰，2H,J=8.4Hz)，7.14-7.30(多重峰，9H),7.40(多重峰，4H);電噴霧質(zhì)譜MS(ESI),m/e(相對豐度)465(M+1)+(100)。實(shí)施例16:化合物1-16(1-(3，4-二氯芐基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基]-哌嗪)的制備OMe化合物I-16化合物1-5(117mg,0.25mmol)在10mlTHF中在0。C下分批加入氫化鋁鋰(LiAlH4)(10mg,0.25mmol)，加完后逐漸升溫到室溫過夜，薄層色譜檢測顯示原料已經(jīng)反應(yīng)完，反應(yīng)用10ml水和10ml二氯甲烷淬滅，分層后，水層用二氯甲垸提取(3x10ml)，合并有機(jī)層，干燥，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去二氯甲垸后，硅膠柱層析(二氯甲烷甲醇=100:l)得無色油狀物97mg;分離收率Y-85X;核磁共振氫譜^NMR(400MHz,気代氯仿)S1.63(寬單峰，4H),2.47(寬單峰，4H),3.45(單峰，2H),3.49(單峰，2H),3.78(單峰，3H),6.57(寬單峰，2H)，6.64(雙雙峰，1H,/=2.4,8.0Hz)，6.95-7.03(多重峰，2H),7.14~7.26(多重峰，4H)，7.287.36(多重峰，1H),7.43(單峰，IH)，.電噴霧質(zhì)譜MS(ESI),m/e(相對豐度》457(M+1)+(100)。根據(jù)與以上制備例7、8及實(shí)施例15、16的方法，制備得到式(I)中X為氫原子時(shí)的化合物，即表二所示之實(shí)施例17-21所示的化合物:表二<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>下面列出的是表二中各化合物的理化數(shù)據(jù)W7.4-[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基]哌嗪基-l-甲酸乙酯無色油狀物；核磁共振氫譜^NMR(400MHz，氘代氯仿)S1.25(三重峰，3H，/=7.2Hz),2.40(寬單峰，4H),3.48(寬單峰，6H),3.78(單峰，2H)，4.15(四重峰，2H，《7=7.2Hz),6,57~6.59(多重峰，2H),6.65(雙雙峰，1H,/=2.4，8.0Hz),6.96~7.02(多重峰，2H)，7.20~7.36(多重峰，3H)。1-18.l-(2-甲氧基苯基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基]-哌嗪無色油狀物；核磁共振氫譜^NMR(400MHz，氘代氯仿)S2.67(寬單峰，4H),3.17(寬單峰，4H),3.56(單峰，2H),3.86(單峰，3H)，3.88(單峰，3H)，6.57~6.59(多重峰，2H),6.65(雙雙峰，1H，J=2.4,8.0Hz),6.85~7.02(多重峰，6H)，7.20~7.35(多重峰，3H)。1-19.1-(3，4-二氯苯基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基]-哌嗪無色油狀物；核磁共振氫譜&NMR(400MHz,氘代氯仿)S2.60(寬單峰，4H),3.17(寬單峰，4H)，3.53(單峰，2H),3.78(單峰，3H),6.57~6.59(多重峰，2H),6.65(雙雙峰，1H,/=2.4,8.0Hz)，6.75(雙雙峰，1H,/=2.4,8.0Hz),6.94~7.02(多重峰，3H)，7.20~7.35(多重峰，4H)。1-20.(2-呋喃基)[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基哌嗉-l-基]甲酮無色油狀物；核磁共振氫譜&NMR(400MHz，氘代氯仿)S2.51(寬單峰，4H),3.51(單峰，2H)，3.78(寬單峰，7H)，6,47~6.48(多重峰，1H)，6.51(單峰，2H)，6.67(雙峰，1H,J=4.0Hz),6.97~7.03(多重峰，3H),7.207.36(多重峰,4H),7.47(單峰，1H)。1-21.1-(4-氟苯基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基]-哌嗪無色油狀物；核磁共振氫譜^NMR(400MHz,氘代氯仿)S1.69(寬單峰，1H),2.50(寬單峰，7H),3.47(單峰，2H),3.48(單峰，2H),3,77(單峰，3H),6.57(寬單峰，2H),6.64(雙雙峰，1H，2.4，8.0Hz),6.95~7.03(多重峰，4H),7.19~7.35(多重峰，5H)。為了更好地理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)，下面分別用本發(fā)明中的化合物對三種人腫瘤細(xì)胞株生長的抑制作用之藥理實(shí)驗(yàn)結(jié)果，說明其在抗腫瘤藥物研究領(lǐng)域中的新用途。藥理實(shí)施例給出了代表性化合物的部分活性數(shù)據(jù)。必須說明，本發(fā)明的藥理實(shí)施例是用于說明本發(fā)明而不是對本發(fā)明的限制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)質(zhì)對本發(fā)明進(jìn)行的簡單改進(jìn)都屬于本發(fā)明要求保護(hù)的范圍。藥理實(shí)施例1:化合物1-13、1-17、I-18對KB細(xì)胞的細(xì)胞毒活性KB(口腔上皮癌)細(xì)胞用RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含IO%的胎牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升的鏈霉素。細(xì)胞以每孔5X103的濃度加入到96孔板中，在37'C含5XC02潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。細(xì)胞存活率的測定用改良MTT(3-(4,5-dimethylthiagol-2-yl)-2,5-diphenyltetrogoliumbromide)法。細(xì)胞經(jīng)過24小時(shí)的孵育后，分別將新配的化合物1-13、1-17、I-18的二甲亞砜溶液以濃度梯度加入到各孔中，使孔中化合物最終濃度分別為100微克/毫升,33.3微克/毫升，11.1微克/毫升和3.7微克/毫升。72小時(shí)后，加入10微升MTT(5微克/亳升)的磷酸鹽緩沖液，再繼續(xù)在37'C培養(yǎng)4小時(shí)后，離心5分鐘除去未轉(zhuǎn)化的MTT,每孔中加入200微升二甲亞砜，以溶解還原的MTT晶體甲臜(formazan)，所形成的formazan用酶標(biāo)儀在570nm波長下比色，細(xì)胞存活率由樣品相對于對照品的比值計(jì)算。其中化合物1-13、1-17、1-18對KB細(xì)胞半抑制濃度IC5Q由劑量效應(yīng)曲線得到?；衔?-13的IQo為9.0微克/毫升；化合物I-17的IC5。為21.1微克/毫升；化合物I-18的IQ()為19.8微克/毫升；而陽性對照順鉑對KB細(xì)胞的IQo為0.7微克/毫升。實(shí)驗(yàn)結(jié)論KB細(xì)胞是測試化合物對腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞毒性的有效工具和評價(jià)指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)表明此類哌嗪類衍生物對KB細(xì)胞具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，有可能發(fā)展成為新的具有抗口腔上皮癌及相關(guān)腫瘤作用的藥物。藥理實(shí)施例2:化合物1-16、1-20對PC-3細(xì)胞的細(xì)胞毒活性PC-3(前列腺癌)細(xì)胞用F-12培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%的胎牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升的鏈霉素。細(xì)胞以每孔5X103的濃度加入到96孔板中，在37'C含5XC02潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。細(xì)胞存活率的測定用改良MTT法，具體方法如藥理實(shí)施例1。其中化合物1-16、I-20對PC-3細(xì)胞半抑制濃度(IC5o)由劑量效應(yīng)曲線得到?；衔颕-16的IC5。為23.2微克/毫升；化合物I-20的IC5Q為27.8微克/毫升；而陽性對照順鉑對PC-3細(xì)胞的IC5。為1.6微克/毫升。實(shí)驗(yàn)結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)表明此類哌嗪類衍生物對PC-3細(xì)胞具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，有可能發(fā)展成為新的具有抗前列腺癌及相關(guān)腫瘤作用的藥物。藥理實(shí)施例3:化合物1-17、I-20對CNE細(xì)胞的細(xì)胞毒活性CNE(鼻咽癌)細(xì)胞用RPMI1640培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中含10%的胎牛血清，100U/毫升青霉素和100U/毫升的鏈霉素。以每孔5X1()S細(xì)胞的濃度加入到96孔板中，在37°。含5XC02潮濕空氣的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)。細(xì)胞存活率的測定用改良MTT法，具體方法如藥理實(shí)施例l。其中化合物1-17、1-20對CNE細(xì)胞半抑制濃度(IC5())由劑量效應(yīng)曲線得到。化合物1-17的ICso為3.1微克/毫升；化合物1-20的K^為17.5微克/毫升；而陽性對照順鉑對CNE細(xì)胞的IC5Q為2.4微克/毫升。實(shí)驗(yàn)結(jié)論本實(shí)驗(yàn)表明此類哌嗪類衍生物對CNE細(xì)胞具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性，有可能發(fā)展成為新的具有抗鼻咽癌及相關(guān)腫瘤作用的藥物。本發(fā)明的這些化合物或其可藥用鹽及其溶劑化物可以與現(xiàn)已上市的抗腫瘤藥物如鉑類藥物順鉑(DDP)、喜樹堿類藥物伊立替康(Irinatecan，CPT-ll)、長春花堿類藥物失碳長春花堿(Vinorebine，NVB諾維本)、脫氧胞昔類藥物吉西他濱(Gemcitabine，Gemzar，健擇)、足葉乙甙(Etoposide)、紫杉醇(Paditaxd)等聯(lián)合使用，制備得到具有腫瘤生長抑制活性的細(xì)胞毒性組合物，可用于治療腫瘤疾病。權(quán)利要求1.本發(fā)明提供了一種具有式(I)所示結(jié)構(gòu)的哌嗪類衍生物及其可藥用鹽id="icf0001"file="S2008100609391C00011.gif"wi="68"he="23"top="56"left="68"img-content="drawing"img-format="tif"orientation="portrait"inline="no"/>式(I)其中X選自氧或氫原子；R1、R2、R3可以相同或不同，分別選自鹵素，氫原子，羥基，或含1～5個(gè)碳的烷氧基，R1、R2、R3還可以形成偕二甲氧基；R4基團(tuán)選自氫原子，酯基，取代或未取代的芐基，取代或未取代的五元或六元脂環(huán)，或者取代或未取代的五元或六元芳香環(huán)；用來取代的取代基選自1～5個(gè)碳的烷氧基，鹵素，或者5～7元的芳環(huán)或脂環(huán)。2.根據(jù)權(quán)利要求1的式(I)化合物及其可藥用鹽，其特征是所述化合物選自下列化合物H.[4-(3,4-亞甲二氧基苯氧基)苯基][4-(2-甲氧基苯基)哌嗪-l-基]甲酮；U.[4-(3,4-亞甲二氧基苯氧基)苯基][4-(3，4-二氯芐基)哌嗪-l-基]甲酮；W.[4-(3,4-亞甲二氧基苯氧基)苯基][4-(4-氟苯基)哌嗪-l-基]甲酮；M.[4-(3，4-亞甲二氧基苯氧基)苯基](4-環(huán)己基哌嗪-l-基)甲酮；1-5.[4-(3,4-二氯芐基)哌嗪-l-基][4-(3-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮；[4-(3,4-二氯芐基)哌嗪-l-基][4-(4-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮；1-7.[4-(4-氟芐基)哌嗪-l-蜀[4-(3-甲氧基苯氧基)苯蜀甲酮；1-8.[4-(4-氟芐基)哌嗪-l-萄[4-(4-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮；I-9.[4-(3,4-二甲氧基芐基)哌嗪-1-基][4-(3-甲氧基苯氧基)苯基]甲酮；[4-(3,4-亞甲二氧基苯氧基)苯基][4-(4-氟芐基)哌嗪-l-基]甲酮；I-ll.[4-(3，4-亞甲二氧基苯氧基)苯甲酰基哌嗪基]-l-甲酸乙酯；1-12.[4-二苯甲基哌嗪-l-基][4-(3,4-亞甲二氧基苯氧基)苯基]甲酮；W3.[4-(3，4-二甲氧基芐基)哌嗪-l-基][4-(3,4-亞甲二氧基苯氧基)苯基]甲酮；1-14.[4-(3，4-二氯苯基)哌嗪-l-基][4-(3，4-亞甲二氧基苯氧基)苯基]甲酮;1-15.1-二苯甲基-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基]-哌嗪；W6.i_(3，4-二氯芐基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基]-哌嗪；工一17.4-[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基]哌嗪基-l-甲酸乙酯；1-18.l-(2-甲氧基苯基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基]-哌嗪；H9.1-(3，4-二氯苯基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基]-哌嗪；1-20.(2-呋喃基)[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基哌嗪-l-基]甲酮；1-21.l-(4-氟苯基)-4-[4-(3-甲氧基苯氧基)芐基]-哌嗪。3.根據(jù)權(quán)利要求1-2之一的化合物或者它們的混合物用于制備防治腫瘤疾病藥物的用途。全文摘要本發(fā)明涉及醫(yī)藥
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體而言，本發(fā)明涉及一類具有人體腫瘤細(xì)胞毒活性的哌嗪類衍生物的制備方法和用途。經(jīng)藥理活性測試，該類化合物對三株腫瘤細(xì)胞如人前列腺癌細(xì)胞(PC-3)，人鼻咽癌細(xì)胞(CNE)，人口腔上皮癌細(xì)胞株(KB)的生長具有顯著的抑制活性，可以預(yù)期作為抗腫瘤藥物用途。文檔編號C07D319/00GK101255152SQ200810060939公開日2008年9月3日申請日期2008年4月8日優(yōu)先權(quán)日2008年4月8日發(fā)明者葉發(fā)青,巫秀美,李校堃,偉熊,佳瞿,董建勇,董盛誼,昱趙,陽應(yīng)華,黃可新申請人:溫州醫(yī)學(xué)院