專利名稱：一種去甲斑蝥素酯化衍生物及其制法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于去曱斑蝥素酯化衍生物的合成范疇，具體涉及到去曱斑蝥素酯化衍生物及其 制法。本發(fā)明還涉及所述的新型去曱斑蝥素酯化衍生物的薄層色譜(Thin-layer chromatography, 簡稱TLC )鑒別方法及其展開劑的配比。斑蝥素是從中藥斑蝥中提取的一種抗腫瘤活性成分，通過Diels-Alder反應(yīng)，呋喃和馬來 酸酐人工合成了去甲斑蝥素，70年代曽試用于原發(fā)性肝癌，，最新研究發(fā)現(xiàn)去曱斑蝥素對多 種腫瘤細(xì)胞均有一定的抑制作用但因?qū)γ谀蛳到y(tǒng)和消化系統(tǒng)刺激作用強烈，限制了其應(yīng)用。近年來，已陸續(xù)合成了 100多種斑蝥素的衍生物，如斑蝥酸鈉、羥基斑蝥胺及曱基斑蝥 胺等衍生物，雖然毒性有所降低，但是仍具有一定的副作用，尤其是需要大劑量長時間給藥 治療時，刺激作用更加明顯。未發(fā)現(xiàn)在文獻中有7-氧雜二環(huán)[2, 2, l]庚烷-2羧酸丁酯-3羧酸丁酯；7-氧雜二環(huán)[2, 2, 1] 庚烷-2， 3-二羧酸己酯；7-氧雜二環(huán)[2, 2, 1]庚烷-2, 3-二羧酸辛酯；7-氧雜二環(huán)[2, 2, 1] 庚烷-2, 3-二羧酸癸酯；7-氧雜二環(huán)[2,2， l]庚烷-2, 3-二羧酸十二酯的制備方法的記載和 在抗腫瘤活性方面的研究內(nèi)容。也沒有公開作為必然結(jié)果產(chǎn)生次產(chǎn)物的任何方法。我們經(jīng)MTT 法體外抗肺瘤活性研究證明7-氧雜二環(huán)[2, 2, 1]庚烷-2， 3-二羧酸丁酯；7-氧雜二環(huán)[2, 2, 1] 庚烷-2, 3-二羧酸辛酯的抗肺瘤活性明顯優(yōu)于去曱斑蝥素；在治療疾病方面具有開發(fā)價值。發(fā)明內(nèi)容本申請的發(fā)明目的是研究低毒性的去曱斑蝥素酯化衍生物及其制法。 本發(fā)明是通過如下技術(shù)方案實施的研究 一種去曱斑蝥素酯化衍生物，其特征是該衍生物具有如下結(jié)構(gòu)背景技術(shù)其中R'、 R21(CH2)3CH3、 (CH2)5CH3、 (CH2)7CH:(CH2)9CH3、或(CH2)uCH3所述的去甲斑蝥素酯化衍生物是7-氧雜二環(huán)[2, 2， 1]庚烷-2, 3-二羧酸丁酯； 所述的去曱斑蝥素酯化衍生物是7-氧雜二環(huán)[2, 2， l]庚烷-2， 3-二羧酸己酯； 所述的去曱斑蝥素酯化衍生物是7-氧雜二環(huán)[2, 2， l]庚烷-2, 3-二羧酸辛酯； 所述的去甲斑蝥素酯化衍生物是7-氧雜二環(huán)[2, 2， l]庚烷-2, 3-二羧酸癸酯； 所述的去曱斑蝥素酯化衍生物是7-氧雜二環(huán)[2, 2, 1]庚烷-2, 3-二羧酸十二酯。 2.按照權(quán)利要求1所迷的去曱斑蝥素酯化衍生物的制備方法，其特征是制備時的合成步 驟是反應(yīng)瓶中加入配量的相應(yīng)醇，配量的去曱斑蝥素和硫酸，混合后，撹拌加熱，45~100°C 回流60 300min,反應(yīng)終止得油狀液；產(chǎn)物用冷水洗滌，濾得白色蟲昔狀固體，加入預(yù)熱的正 己烷溶解，在4——18。C冷凍結(jié)晶l~24h，濾得結(jié)晶，即為相應(yīng)的去曱斑蝥素酯化^f汙生物。我們通過酯化合成方法，對去曱斑蝥素開環(huán)二羧酸進行修飾，提高其脂溶性，合成了五 種去曱斑蝥素酯化衍生物7-氧雜二環(huán)[2，2，1]庚烷-2、 3二羧酸丁酯(7-Oxa-bicyclo[2.2.1 ]heptane-2,3-dicarboxylic acid dibutyl ester)， 以下簡稱化合物I ;7-氧雜二環(huán)[2, 2,1]庚烷-2, 3-二羧酸己酯(7-Oxa-bicyclo[2.2.1]heptane-2,3-dicarboxylic acid dihexyl ester)，以下簡稱4匕合物II;O7-氧雜二環(huán)[2, 2, 1]庚烷-2， 3-二羧酸辛酯； (7-Oxa-bicyclo[2.2.1]heptane-2，3-dicarboxylic acid dioctyl ester),以下簡稱"f匕合物III;O7-氧雜二環(huán)[2， 2， l]庚烷-2, 3-二羧酸癸酯4(7-Oxa-bicyclo[2.2.1]heptane-2,3-dicarboxylic acid didecyl ester)以下簡稱4匕合物IV;<formula>formula see original document page 5</formula>7-氧雜二環(huán)[2， 2, 1]庚烷-2, 3-二羧酸十二酯(7-Oxa-bicyclo[2.2.1 ]heptane-2，3-dicarboxylic acid didodecyl ester)以下簡稱<匕合物V ;經(jīng)3-(4， 5-二甲基。塞唑-2)-2， 5-二苯基四氮唑溴鹽(3-(4，5-Dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide簡稱MTT比色法)法體外抗腫瘤試驗，計算50%抑制濃度(inhibitory concentration 50%,簡稱IC50), 7-氧雜二環(huán)[2, 2, 1]庚烷-2， 3二羧酸丁酯；7-氧雜二環(huán)[2, 2, l]庚烷-2, 3-二羧酸己酯；7-氧雜二環(huán)[2, 2, 1]庚烷-2, 3-二羧酸辛酯；7-氧雜二環(huán)[2, 2,1]庚烷-2, 3-二羧酸癸酯；7-氧雜二環(huán)[2, 2， l]庚烷-2, 3-二羧酸十二酯的抗 腫瘤活性比去曱斑蝥素(Norcantharidin簡稱，NCTD)提高了近35倍，且對正常細(xì)胞毒性也比 NCTD低，其作用機制還有待進一步研究，應(yīng)用酯化方法合成類似的系列去曱斑蝥素酯化衍 生物，具有十分重要的研究意義。迄今為止還沒有關(guān)于去甲斑蝥素酯化衍生物的合成方法及其抗腫瘤應(yīng)用的報道。本發(fā)明 通過酸酐開環(huán)與相應(yīng)的醇酯化成二元酯及其合成方法具有開發(fā)的價值。本發(fā)明的優(yōu)點是本發(fā)明反應(yīng)溫度控制在40~100°C,反應(yīng)時間控制在l~5h均能獲 得較純的化合物。TLC鑒別的應(yīng)用可快速準(zhǔn)確的鑒別終產(chǎn)物的含量，有效地控制反應(yīng)過程。


圖1是化合物I的結(jié)構(gòu)確證核磁波譜圖； 圖2是化合物I局部放大的結(jié)構(gòu)確證核磁波譜圖； 圖3是化合物I的分子量質(zhì)譜圖； 圖4是化合物II的結(jié)構(gòu)確證核磁波譜圖； 圖5是化合物II局部放大的結(jié)構(gòu)確證核磁波譜圖； 圖6是化合物II的分子量質(zhì)譜圖； 圖7是化合物m的結(jié)構(gòu)確證核磁波譜圖； 圖8是化合物III的分子量質(zhì)譜圖； 圖9是化合物IV的結(jié)構(gòu)確證核磁波譜圖； 圖10是化合物IV的分子量質(zhì)譜圖； 圖U是化合物V的結(jié)構(gòu)確證核磁波譜圖； 圖12是化合物V的分子量質(zhì)譜圖。
具體實施方式
以下結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明進一 步闡述。質(zhì)譜圖中，橫坐標(biāo)為質(zhì)荷比；縱坐標(biāo)為離子流強度；相對豐度最強峰的強度定為100% 。 圖1、圖2、圖3中顯示，7-氧雜二環(huán)[2, 2， 1]庚烷-2, 3-二羧酸丁酯<formula>formula see original document page 6</formula>C16H26O5 298.38白色針狀結(jié)晶,mp 58~59°C'H-NMR (DMSO-d6, ppm) S: 4.69 (m, 2H), 3.96 (m, 2H), 3.86 (m， 2H)， 3.07 (s， 2H), 1.55 (m, 8H), 1.30 (m, 4H), 0.88 (m, 6H, 2xMe).核磁波譜顯示組成化合物 氫元素數(shù)量與定向合成的目標(biāo)產(chǎn)物一致；MS (ESI): m/z 299.6 (M+l), 316.4(M+NH4), 321.4(M+Na).CI6H2605 (298.18).圖譜顯示分子質(zhì)量與目標(biāo)產(chǎn)物相一致，由以上數(shù)據(jù)可證明合 成的化合物為目標(biāo)化合物。圖4、圖5、圖6中顯示，7-氧雜二環(huán)[2， 2, 1]庚烷-2, 3-二羧酸己酯〇OC20H34O5 Exact Mass: 354.24 MoleWt: 354.48m/e: 354.24 ( 100%)， 355.24 (21.8%), 356.25 (2.4%), 356.24 ( 1.0o/o) C, 67.76; H, 9.67; O, 22.57白色蠟狀固體，m.p. 40-41 。C.)H-NMR (DMSO-d6, ppm) S: 4.68 (d, /=3.0Hz, 2H), 3.95-3.87 (m, 4H)， 3,07 (s, 2H), 1.57-1.49 (m, 8H)， 1.30-1.23 (s, 12H), 0.86 (m, 6H, 2><Me). 核磁波譜顯示組成化合物氫元素數(shù)量與定向合成的目標(biāo)產(chǎn)物一致；MS (ESI): m/z 355.6 (M+l), 372.4 (M+NH4), 377.6 (M+Na). C20H34O5 (354.24).圖語顯示分子質(zhì)量與目標(biāo)產(chǎn)物相一 致，由以上數(shù)據(jù)可證明合成的化合物為目標(biāo)化合物。圖7、圖8中顯示，7-氧雜二環(huán)[2， 2, l]庚烷-2, 3-二羧酸辛酯<formula>formula see original document page 7</formula>C24H4205 410.59白色蠟狀固體mp58~59°C'H-NMR (DMSO-d6, ppm) S: 4.88 (s, 2H), 3.92 (m, 2H), 3.87 (m, 2H), 3.06 (s， 2H), 1.55 (m, 8H), 1.25 (s, 20H), 0.86 (m, 6H, 2><Me). MS (ESI):核磁波譜顯示組成 化合物氫元素數(shù)量與定向合成的目標(biāo)產(chǎn)物一致；MS (ESI): m/z411.6 (M+l) ， 428.4 (M+NH4), 433.7 (M+Na). C24H4205 (41 0. 3).圖語顯示分子質(zhì)量與目標(biāo)產(chǎn)物相一致，由以上數(shù)據(jù)可證明合 成的化合物為目標(biāo)化合物。圖9、圖IO中顯示，7-氧雜二環(huán)[2, 2, 1]庚烷-2， 3-二羧酸癸酯<formula>formula see original document page 7</formula>
C28H50O5 Exact Mass: 466.37 MoleWt: 466.69 m/e: 466.37 ( 100%), 467,37 ( 31.0%), 468.37 (5.5%) C, 72.06; H， 10.80; O, 17.14 白色片狀固體，m.p. 57-58。C.H-麗R (DMSO-d6, ppm) S: 4.68 (s, 2H), 3.94-3.85 (m, 4H), 3.44 (s, 2H), 1.57-1.51 (m, 8H), 1.25 (m, 28H), 0.86-0.84 (m, 6H, 2xMe). MS (ESI):核磁波譜顯 示組成化合物氫元素數(shù)量與定向合成的目標(biāo)產(chǎn)物一致；m/z 467.7 (M+l), 484.8 (M+NH4), 489.7 (M+Na). C28H5()05(466.37).圖讒顯示分子質(zhì)量與目標(biāo)產(chǎn)物相一致，由以上數(shù)據(jù)可證明合 成的化合物為目標(biāo)化合物。圖11、圖12中顯示，7-氧雜二環(huán)[2, 2, 1]庚烷-2, 3-二羧酸十二酯<formula>formula see original document page 7</formula>
C32H58C)5 Exact Mass: 522.43MoleWt: 522.8m/e: 522.43 ( 100o/o), 523.43 (35,5%), 525.44 ( 1.0o/ ), 524.43 ( 1.0%) .C, 73.52; H， 11.18; O, 15.30白色片狀固體，m.p. 73-74。C」H-NMR (DMSO-d6， ppm) S: 4.78 (s, 2H), 3.94 (m, 2H)， 3.77 (m, 2H)， 2.98 (s, 2H), 1.54 (m, 8H), 1.23 (s， 36H)， 0.87 (m， 6H， 2xMe).核磁波i普顯示組成化合 物氫元素數(shù)量與定向合成的目標(biāo)產(chǎn)物一致；MS (ESI): m/z 523.6 (M+l)， 540.9 (M+NH4), 545.6 (M+Na). C32H5805 (522.43).圖語顯示分子質(zhì)量與目標(biāo)產(chǎn)物相一致，由以上數(shù)據(jù)可證明合成的 化合物為目標(biāo)化合物。實施例1制備7-氧雜二環(huán)[2, 2, 1]庚烷-2， 3-二羧酸丁酯將2g去曱斑蝥素加入反應(yīng)瓶中，然后加入6ml過量正丁醇，再加入H2S(h 0. lml混合。 將反應(yīng)瓶置于恒溫磁力攪拌器上攪拌加熱至80°C-IOO'C回流70min。反應(yīng)終止得油狀液，產(chǎn) 物用冷水洗滌3次x 20ml,抽濾得白色蠟狀固體，加入預(yù)熱45'C的正己烷溶解白色固體，放 入冰箱中結(jié)晶，次日抽濾得白色固體結(jié)晶7-氧雜二環(huán)[2，2,1]庚烷-2, 3-二羧酸丁酯，稱重 共計2. 24g 。TLC鑒別展開劑氯仿丙酮曱酸=97 :3:2TLC顯色方法械缸熏。經(jīng)試驗證實采用以上配比的展開劑，所有組分包括產(chǎn)物、副產(chǎn)物、原料和中間體的Rf= (0.3-0.8),均能較好的分離，且斑點圓整。*放入冰箱中結(jié)晶，系指待結(jié)晶液先放置在冷藏格(4 °C ± ),待結(jié)晶液降至4 °C ±后，再 移入冷凍格(-18°C± ),在這個溫度范圍有結(jié)晶析出。**本申請給出的所有百分?jǐn)?shù)除另有說明，均為重量百分?jǐn)?shù)。 實施例2制備7-氧雜二環(huán)[2,2，l]庚烷-2， 3-二羧酸己酯C16H2605 298.38C20H34O5 354.49合成步驟將反應(yīng)瓶中加入7.5ml (0.06mol)過量正己醇，加入3.36g(0.02mol)去甲斑蝥 素，再加入H2S04 0.12ml混合。將反應(yīng)瓶置于恒溫磁力攪拌器上攪拌加熱至80°C回流65min。 反應(yīng)終止得油狀液，產(chǎn)物用冷水洗滌3次x20ml，抽濾得白色蠟狀固體，加入預(yù)熱45'C的正 己烷溶解白色固體，放入冰箱中結(jié)晶，次日抽濾得白色固體結(jié)晶7-氧雜二環(huán)[2,2,1]庚烷-2, 3-二羧酸己酯，稱重共計3.56g純品。TLC鑒另J展開劑氯仿丙酮曱酸=97: 3: 2;其余同實施例l. 實施例3合成7-氧雜二環(huán)[2, 2, l]庚烷-2， 3-二羧酸辛酯 反應(yīng)式是o 9將反應(yīng)瓶中加入6ml過量正辛醇，加入2g去曱斑蝥素，再加入H2S04 0. 06ml混合。將 反應(yīng)瓶置于恒溫磁力攪拌器上攪拌加熱至45°C，回流5h反應(yīng)終止得油狀液，產(chǎn)物用冷水洗 滌3次x20ml，抽濾得白色蠟狀固體，加入預(yù)熱"。C的正己烷溶解白色固體，放入冰箱中結(jié) 晶，1-24 h后抽濾得7-氧雜二環(huán)[2, 2， 1]庚烷-2, 3-二羧酸辛酯，稱重得2. 27g純品。TLC鑒別展開劑氯仿丙酮曱酸=97 :3:2TLC顯色方法硤釭熏。經(jīng)試驗證實采用以上配比的展開劑，所有組分包括產(chǎn)物、副產(chǎn)物、原料和中間體的Rf= (0.3-0.8),均能較好的分離，且斑點圓整。實施例4合成7-氧雜二環(huán)[2， 2, l]庚烷-2, 3-二羧酸辛酯將反應(yīng)并瓦中加入40ml過量正辛醇，加入2g-26g去曱斑蝥素，再加入H2S04 1. 2ml混合。 將反應(yīng)瓶置于恒溫磁力攪拌器上攪拌加熱至80°C-IO(TC,回流65min。反應(yīng)終止得油狀液， 產(chǎn)物用冷水洗滌3次x 80ml,抽濾得白色蠟狀固體，加入預(yù)熱45匸的正己烷溶解白色固體， 放入水箱中結(jié)晶，lh-24后抽濾得外型-7-氧雜二環(huán)[2,2,1]庚烷-2, 3-二羧酸辛酯，稱重得 45g純品。實施例5制備7-氧雜二環(huán)[2，2,l]庚烷-2， 3-二羧酸癸酯 反應(yīng)式是C24H42O5 410.59C28H50O5 466.70合成步驟合成步驟將反應(yīng)瓶中加入7. 6ml癸醇，加入2. Og去甲斑蝥素，再加入H2S04 0. 18ml混合。將反應(yīng)瓶置于恒溫磁力攪拌器上攪拌加熱至80'C-IOO'C,回流65min。反應(yīng)終 止得油狀液，產(chǎn)物用冷水洗滌3次x (20ml-80ml)，抽濾得白色蠟狀固體，加入預(yù)熱45。C的 正己烷溶解白色固體，放入冰箱中結(jié)晶，lh-24后抽濾得外型-7-氧雜二環(huán)[2, 2, l]庚烷-2, 3-二羧酸癸酯，為棉絮狀結(jié)晶，稱重3. 52g純品。實施例6制備7-氧雜二環(huán)[2,2, l]庚烷-2， 3-二羧酸十二酯 反應(yīng)式是合成步驟將反應(yīng)瓶中加入9ml的1-十二醇，加入3. 36g去曱斑蝥素，再加入H2S(K 0.2ml 混合。將反應(yīng)瓶置于恒溫磁力攪拌器上攪拌加熱至80°C-100"C，回流65min。反應(yīng)終止得油 狀液，產(chǎn)物用冷水洗滌3次x (20ml-80ml)，抽濾得白色蠟狀固體，加入預(yù)熱45。C的正己烷溶解白色固體，放入冰箱中結(jié)晶，lh-24后抽濾得7-氧雜二環(huán)[2, 2, 1]庚烷-2, 3-二羧 酸十二酯，為棉絮狀結(jié)晶，稱重4. 25g純品。 實施例7制備7-氧雜二環(huán)[2， 2, 1]庚烷-2, 3-二羧酸十二酯合成步驟合成步驟將反應(yīng)瓶中加入2. 7ml的l-十二醇，加入2. 0g去曱斑蝥素，再 加入H2S0, 0. lral混合，以10ml氯仿為反應(yīng)溶液。將反應(yīng)并瓦置于恒溫磁力攪拌器上攪拌加熱 至45'C，回流70min。反應(yīng)終止得油狀液，產(chǎn)物用冷水洗滌3次x (20ml-80ml)，抽濾得白色 蠟狀固體，加入預(yù)熱45 'C的正己烷溶解白色固體，放入冰箱中結(jié)晶，lh-24后抽濾得7-氧雜 二環(huán)[2, 2， 1]庚烷-2, 3-二羧酸十二酯，針狀結(jié)晶稱重2. 22g純品。優(yōu)選基本純的形式提供7-氧雜二環(huán)[2, 2, 1]庚烷-2， 3-二羧酸丁酯；7-氧雜二環(huán)[2， 2， 1]庚烷-2, 3-二羧酸辛酯，適宜的提供7-氧雜二環(huán)[2,2，1]庚烷-2, 3-二羧酸丁酯；7-氧雜二環(huán)[2, 2， l]庚垸-2, 3-二^^酸辛酯化合物純度大于50%,優(yōu)選大于60%,更優(yōu)選大于70%,再優(yōu)選大于80%,還優(yōu)選大于90%，最優(yōu)選已基本上純的形式^:供大于95%。522.8權(quán)利要求
1.一種去甲斑蝥素酯化衍生物，其特征是該衍生物具有如下結(jié)構(gòu)其中R1、R2是(CH2)3CH3、(CH2)5CH3、(CH2)7CH3、(CH2)9CH3、或(CH2)11CH3；所述的去甲斑蝥素酯化衍生物是7-氧雜二環(huán)[2，2，1]庚烷-2，3-二羧酸丁酯；所述的去甲斑蝥素酯化衍生物是7-氧雜二環(huán)[2，2，1]庚烷-2，3-二羧酸己酯；所述的去甲斑蝥素酯化衍生物是7-氧雜二環(huán)[2，2，1]庚烷-2，3-二羧酸辛酯；所述的去甲斑蝥素酯化衍生物是7-氧雜二環(huán)[2，2，1]庚烷-2，3-二羧酸癸酯；所述的去甲斑蝥素酯化衍生物是7-氧雜二環(huán)[2，2，1]庚烷-2，3-二羧酸十二酯。
2.按照權(quán)利要求1所述的去曱斑蝥素酯化衍生物的制備方法，其特征是制備時的合成步 驟是反應(yīng)瓶中加入配量的相應(yīng)的醇，配量的去曱斑蝥素和硫酸，混合后，攪拌加熱，45~10(TC 回流60-300 min，反應(yīng)終止得油狀液；產(chǎn)物用冷水洗滌，濾得白色蠟狀固體，加入預(yù)熱的正 己烷溶解，在4——18。C冷凍結(jié)晶l~24h,濾得結(jié)晶，即為相應(yīng)的去曱斑蝥素酯化衍生物。
全文摘要
本發(fā)明是一種去甲斑蝥素酯化衍生物及其制法，去甲斑蝥素酯化衍生物是指7-氧雜二環(huán)[2，2，1]庚烷-2羧酸丁酯-3羧酸丁酯；7-氧雜二環(huán)[2，2，1]庚烷-2，3-二羧酸己酯；7-氧雜二環(huán)[2，2，1]庚烷-2，3-二羧酸辛酯；7-氧雜二環(huán)[2，2，1]庚烷-2，3-二羧酸癸酯；7-氧雜二環(huán)[2，2，1]庚烷-2，3-二羧酸十二酯。制備時加入配量的相應(yīng)醇，配量的去甲斑蝥素和硫酸，混合攪拌加熱，45～100℃回流60～300min，反應(yīng)終止得油狀液；產(chǎn)物用冷水洗滌，濾得白色蠟狀固體，加入預(yù)熱的正己烷溶解，在4～-18℃冷凍結(jié)晶1～24h，濾得結(jié)晶，即為相應(yīng)的去甲斑蝥素酯化衍生物。
文檔編號C07D493/00GK101575343SQ200910016210
公開日2009年11月11日 申請日期2009年6月16日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月16日
發(fā)明者杜成德, 邸春盛, 閻敬武 申請人:山東世博金都藥業(yè)有限公司