專利名稱:山楂酸衍生物及其制備和應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域:
本發(fā)明涉及山楂酸衍生物及其制備和應(yīng)用,應(yīng)用是指作為蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B抑制劑,簡(jiǎn)稱PTP1B抑制劑,屬于醫(yī)藥及其制備和應(yīng)用的技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù):
糖尿病(Diabetes Mellitus)是一組由遺傳和環(huán)境因素相互作用而引起的臨床綜合癥,因胰島素分泌絕對(duì)或相對(duì)不足以及靶組織細(xì)胞對(duì)胰島素敏感性降低,引起糖、蛋白、脂肪、水、電解質(zhì)等一系列代謝紊亂。臨床以高血糖為主要共同標(biāo)志,久病可導(dǎo)致失明、心腦血管疾病、腎功能衰竭等多種并發(fā)癥,病情嚴(yán)重和應(yīng)激時(shí)可發(fā)生急性代謝紊亂如酮癥酸中毒等。糖尿病及其并發(fā)癥已成為嚴(yán)重威脅人類健康的世界性公共衛(wèi)生問(wèn)題。
目前一般將糖尿病分為兩類,I型糖尿病(胰島素依賴型糖尿病,IDDM)與II型糖尿病(非胰島素依賴型糖尿病,NIDDM)。世界各地的糖尿病患者中90%屬II型糖尿病,II型糖尿病,過(guò)去稱為非胰島素依賴型糖尿病或成人發(fā)病,是人體無(wú)法有效利用胰島素的結(jié)果。世界衛(wèi)生組織(WHO)估計(jì),全世界目前約有1.8億人患有糖尿病,這一數(shù)字很可能到2030年將翻番一倍以上。
I型糖尿病病人由于第6對(duì)染色體短臂上的HLA-D基因決定了遺傳易感性,對(duì)環(huán)境因素反應(yīng)異常,直接或間接通過(guò)自身免疫反應(yīng),引起胰島β細(xì)胞破壞,以致胰島素絕對(duì)缺乏,臨床特點(diǎn)是起病急,多食、多飲、多尿、體重減輕、有發(fā)生酮癥酸中毒的傾向,患者必須依賴胰島素治療維持生命。
II型糖尿病的致病原因則是胰島素分泌的相對(duì)不足和胰島素抵抗,也有很強(qiáng)的遺傳性和環(huán)境因素,并呈顯著的異質(zhì)性,發(fā)病機(jī)制多樣而復(fù)雜,各病人間存在較大差異。
胰島素信號(hào)通路中一個(gè)重要的調(diào)控機(jī)制是對(duì)胰島素受體(insulinreceptor,IR)、胰島素受體底物(insulin receptor substrate,IRS)以及其它下游分子的蛋白質(zhì)酪氨酸磷酸化進(jìn)行可逆調(diào)節(jié)(White MF,KahnCR.J.Biol.Chem.1996,269(1),1)。蛋白酪氨酸磷酸化是一種重要的調(diào)節(jié)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的翻譯后修飾方式。在體內(nèi)酪氨酸的磷酸化是可逆的動(dòng)態(tài)過(guò)程,其磷酸化和去磷酸化分別由蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosinekinases,PTKs)和蛋白酪氨酸磷酸酯酶(protein tyrosine phosphatases,PTPs)來(lái)調(diào)節(jié)。II型糖尿病的特征是胰島素敏感組織如骨骼肌、肝、脂肪組織對(duì)胰島素作用的抵抗,胰島素信號(hào)在其傳導(dǎo)通路中減弱或阻斷是其直接因素。胰島素通過(guò)與其IR胞外α亞單位結(jié)合而激活受體胞內(nèi)β亞單位內(nèi)在的PTKs活性,導(dǎo)致調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域中關(guān)鍵的酪氨酸殘基自磷酸化,從而激活I(lǐng)Rβ亞基的PTKs活性,然后含有SH 2結(jié)構(gòu)域的接頭蛋白如IRS被招募到IR的SH2結(jié)合位點(diǎn),隨后PI3K被激活,接著下游糖代謝通路中的PKB、GLUT4進(jìn)一步被激活,體內(nèi)的糖脂代謝被啟動(dòng)。PTPs作用與該通路的多個(gè)環(huán)節(jié),如將自身磷酸化活化的IR去磷酸化,從而降低受體激酶的活性,或?qū)⒁葝u素受體底物IRS-1、IRS-2、Shc等中的蛋白酪氨酸殘基去磷酸化,從而負(fù)調(diào)控胰島素信號(hào)通路。特定PTPs和胰島素信號(hào)通路中PTKs間酶活性的不平衡可能是引起II型糖尿病胰島素抵抗的原因。因此,通過(guò)尋找選擇性作用于該通路中PTPs的抑制劑抑制其活性,加強(qiáng)和延長(zhǎng)胰島素信號(hào),成為越來(lái)越受重視的治療II型糖尿病的新途徑。
蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B(protein tyrosine phosphatase 1B,PTP1B)是最早被純化和確定生物學(xué)特性的蛋白酪氨酸磷酸酯酶,全長(zhǎng)約50kDa,在C術(shù)端有一段可被切割的35個(gè)氨基酸的疏水片段,該片段負(fù)責(zé)將PTP1B定位在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上,然后與受體型激酶IR、EGFR(epidermal growth factor receptor)和PDGFR(platelet-derived growthfactor receptor)相互作用,使其去磷酸化(Boute N,et al.Science 2002,295(5560),1708)。PTP1B在多種組織中均有表達(dá),特別是在胰島素的靶組織如肝臟、肌肉、脂肪等。最近人們發(fā)現(xiàn)PTP1B可以通過(guò)對(duì)IR、IRS的脫磷酸化作用而下調(diào)胰島素信號(hào)(Kenner KA,et al.J.Biol.Chem.1996,271,19810),通過(guò)抑制PTP1B的活性,有助于提高外周組織對(duì)胰島素的敏感性;此外,PTP1B還可使瘦素受體相關(guān)激酶JAK2去磷酸化失活,不能對(duì)瘦素產(chǎn)生應(yīng)答,從而引起瘦素抵抗(ZabolotnyJM,et al.Dev.Cell 2002,2,489),因此PTP1B抑制劑在糖尿病和肥胖癥的治療中有著廣闊的前景。
動(dòng)物試驗(yàn)表明,PTP1B缺失的老鼠由于增加或延長(zhǎng)了在肌肉與肝臟組織中IR的磷酸化水平,而使其對(duì)胰島素的敏感性增強(qiáng),明顯降低體內(nèi)甘油三酯的水平(Elchebly M,et al.Science 1999,283,1544;Klaman LD,et al.Mol.Cell.Biol.2000,20,5479);同時(shí)相關(guān)的研究表明PTP1B缺失的老鼠由于對(duì)瘦素敏感性的增強(qiáng),能量消耗增加,所以對(duì)高脂食物引起的肥胖有著良好的抵抗作用(Zabolotny LD,et al.Dev.Cell 2002,2,489;Cheng A,et al.Dev.Cell 2002,2,497)。隨著人類基因組計(jì)劃的進(jìn)展,在遺傳學(xué)方面越來(lái)越多的證據(jù)表明PTP1B和II型糖尿病及肥胖有關(guān)(Echwald SM,et al.Diabetes 2002,51(1),1;Di Paoia R,et al.Am.J.Hum.Genet.2002,70(3),806),因此PTP1B抑制劑是治療糖尿病和肥胖癥潛在的藥物。
PTP1B選擇性抑制劑的研究取得了一定的進(jìn)展,但大多局限于一些肽類或類肽化合物,例如基于PTP1B去磷酸化的底物序列設(shè)計(jì)的抑制劑EEDE(F2PMP)M(Ki=7.2nM)、Glu-F2PMP-F2PMP(IC50=40nM),雖然這些肽類抑制劑具有較強(qiáng)的抑制活性及較高的選擇性,但它們是肽類磷酸化合物的事實(shí)使其很難成為藥物候選化合物。最近,一系列非肽類非磷酸化合物類PTP1B抑制劑被報(bào)道,它們具有一定的選擇性,更重要的是,其中一些化合物對(duì)降低ob/ob小鼠血漿中葡萄糖和胰島素水平有顯著作用。這是第一例藥理學(xué)的直接證據(jù),證明PTP 1B抑制劑具有抗糖尿病活性(Malamas,MS,et al.J.Med.Chem.2000,43,1293)。這些無(wú)疑為我們尋找新的小分子非肽類有機(jī)化合物作為高效、高選擇性PTP1B抑制劑提供了機(jī)遇。
與人工合成的小分子化合物相比,天然產(chǎn)物在成藥性方面具有先天的優(yōu)越性,因此從天然產(chǎn)物、特別是從高安全性天然產(chǎn)物的有效成分入手,尋找新穎的母核結(jié)構(gòu)并進(jìn)行構(gòu)效關(guān)系研究,是發(fā)現(xiàn)成藥性好、安全性高的PTP1B抑制劑的重要途徑。山楂酸(maslinic acid,MA)是一種五環(huán)三萜酸,主要存在于油橄欖、蛇麻草、水楊梅、薄荷、丁香、紅棗、山楂、石榴和鼠尾草等天然植物中。近年來(lái)的研究表明山楂酸具有諸多藥理作用,如抗癌、抗氧化、抗艾滋病、抗菌、抗炎、抗I I型糖尿病等。中國(guó)藥科大學(xué)孫宏斌等報(bào)道了山楂酸對(duì)KK-Ay小鼠有明確的降血糖效果(Sun H,et al.Biol.Pharm.Bull.2007,30(11),2975)。
發(fā)明內(nèi)容
通過(guò)對(duì)PTP1B抑制活性篩選,發(fā)現(xiàn)五環(huán)三萜類化合物山楂酸具有較好的PTP1B抑制活性(IC50=4.28μM)。因此以山楂酸作為先導(dǎo)化合物,在其C2-、C3-位并入各種雜環(huán),可合成了一類具有顯著PTP1B抑制活性的山楂酸衍生物。
本發(fā)明的目的在于推出一類山楂酸衍生物,其特征在于,具有以下的結(jié)構(gòu)通式所示的結(jié)構(gòu)
式中,X是S、CH或CH=N,當(dāng)X是S時(shí),Y=C,R=NH2,當(dāng)X是CH時(shí),Y=N,
當(dāng)X是CH=N時(shí),Y=C,R=H、CH3、OH、SH、NH2、SCH3、NHCH3。
本發(fā)明的另一目的在于提供該類衍生物的制備方法。為了實(shí)現(xiàn)上述目的,本發(fā)明采用以下技術(shù)方案。以天然產(chǎn)物齊墩果酸為原料,先經(jīng)氧化得到相應(yīng)的3-羰基衍生物,再在C2-位鹵代或甲酰化或成烯胺,最后通過(guò)系列縮合反應(yīng)得到相應(yīng)的C2-,C3-位并雜環(huán)的山楂酸衍生物。
現(xiàn)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案,一種制備一類山楂酸衍生物的方法,其特征在于,具體操作步驟 第一步制備3-羰基衍生物 將8.3g的齊墩果酸溶于60mL二氯甲烷中,加入7.9g的PCC,室溫下攪拌12小時(shí),反應(yīng)液用硅藻土過(guò)濾,濾餅用二氯甲烷洗滌,母液濃縮后溶于100mL乙酸乙酯,飽和亞硫酸氫鈉水溶液洗滌,有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,得1.0g的3-羰基衍生物,產(chǎn)率90%,3-羰基衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
第二步確定目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)通式中X、Y和R的確切結(jié)構(gòu)確定目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)通式中X、Y和R的確切結(jié)構(gòu)時(shí),會(huì)遇到以下四種情況1)X=S,Y=C和R=NH2,2)X=CH,Y=N和
3)X=CH=N,Y=C和R=H、CH3、NH2、NHCH3,4)X=CH=N,Y=C和R=OH、SH、SCH3,如遇到情況1),進(jìn)入第二-1步,如遇到情況2),進(jìn)入第二-2步,如遇到情況3),進(jìn)入第二-3步,如遇到情況4),進(jìn)入第二-4步; 第二-1步 0.83g的3-羰基衍生物溶于10mL二氯甲烷和10mL冰醋酸混合溶劑中,冰浴下分批加入0.59g的三溴吡啶嗡鹽,2小時(shí)加完,冰浴下攪拌30分鐘,室溫下攪拌1小時(shí),加入50mL水,二氯甲烷萃取,分別用飽和碳酸氫鈉溶液,飽和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得2-溴代衍生物,產(chǎn)率82%,將0.30g的2-溴代衍生物和0.06g的硫脲溶于15mL無(wú)水乙醇中,回流反應(yīng)12小時(shí),反應(yīng)液濃縮,加入50mL水,乙酸乙酯萃取,飽和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,得WB-511粗產(chǎn)物,二氯甲烷萃取,得產(chǎn)物WB-511,產(chǎn)率63%,2-溴代衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
WB-511具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
進(jìn)入第三步; 第二-2步 1.0g的3-羰基衍生物溶解于30mL苯中,氮?dú)獗Wo(hù)下加入0.75mL甲酸乙酯、0.47g的甲醇鈉,室溫下反應(yīng)5小時(shí),反應(yīng)液濃縮,加入30mL水,乙酸乙酯萃取,食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮得2-甲?;苌铮a(chǎn)率94%,將0.2g的2-甲酰化衍生物、0.28g的鹽酸羥胺、0.38mL水溶解于10mL乙醇中,氮?dú)獗Wo(hù)下回流1小時(shí),加入50mL水,乙酸乙酯萃取,食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得C2-,C3-并吡唑衍生物,產(chǎn)率85%,將0.1g的C2-,C3-并吡唑衍生物、0.11g的煙酰氯或異煙酰氯、2mL吡啶、20mL DMF室溫下攪拌3小時(shí),濃縮,加50mL水,乙酸乙酯萃取,有機(jī)相用食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮得ZH-583-1或ZH-583-2,產(chǎn)率43%-77%,2-甲?;苌锞哂幸韵滤镜慕Y(jié)構(gòu)式
C2-,C3-并吡唑衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
ZH-583-1具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
ZH-583-2具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
進(jìn)入第三步; 第二-3步 在裝有分水器的三口瓶中加入1.5g的3-羰基衍生物(1)、4.25mL的DMFDMA、30mL甲苯、0.08mL三乙胺,緩慢升溫至120℃,從分水器蒸出15mL甲苯,補(bǔ)加15mL甲苯,重復(fù)上述操作3-4次,旋蒸除去溶劑,得2-烯胺衍生物(5),將0.15g的乙醇鈉、1.10-0.11g的醋酸甲脒或鹽酸乙脒或鹽酸胍溶于10mL乙醇中,氮?dú)獗Wo(hù)和室溫下攪拌30分鐘,將0.57g的2-烯胺衍生物(5)溶于5mL乙醇中,加入到上述反應(yīng)體系中,回流3小時(shí),反應(yīng)液濃縮,加入20ml水,乙酸乙酯萃取,有機(jī)相用食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得C2-,C3-并嘧啶衍生物或C2-,C3-并甲基嘧啶衍生物或C2-,C3-并氨基嘧啶衍生物,產(chǎn)率72%-74%, 將0.41-0.42g的C2-,C3-并嘧啶衍生物或C2-,C3-并甲基嘧啶衍生物或C2-,C3-并氨基嘧啶衍生物、2.15g的LiI溶于40mL DMF中,回流48小時(shí),降至室溫,加入150mL冰水,乙酸乙酯萃取,有機(jī)相用食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得白色固體WB-491-B或WB-505或WB-520,產(chǎn)率72%-80%, 將0.42g的C2-,C3-并氨基嘧啶衍生物、2.15g的LiI溶于40mLDMF中,加入0.21g正辛胺,回流48小時(shí),降至室溫,加入150mL冰水,乙酸乙酯萃取,有機(jī)相用食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得白色固體WB-506,產(chǎn)率78%, C2-,C3-并嘧啶衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
C2-,C3-并甲基嘧啶衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
C2-,C3-并氨基嘧啶衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
WB-491-B具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
WB-505具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
WB-520具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
WB-506具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
進(jìn)入第三步; 第二-4步 將20g的3-羰基衍生物、12g的K2CO3、3.33mL CH3I溶于200mLDMF中,室溫?cái)嚢?小時(shí)。加400mL水稀釋,乙酸乙酯萃取,合并有機(jī)相,分別用1M的稀鹽酸和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,過(guò)濾,濃縮,硅膠柱層析純化,得28-甲酯化衍生物,產(chǎn)率92%。
將4.0g的28-甲酯化衍生物溶于100mL苯中,氮?dú)獗Wo(hù)下加入2.9mL甲酸乙酯、1.84g的甲醇鈉,室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)液濃縮,加入30ml水,乙酸乙酯萃取,合并有機(jī)相,飽和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,得2-甲?;?28羧酸甲酯衍生物,產(chǎn)率98%。
將0.3g的2-甲?;?28羧酸甲酯衍生物、0.07-0.09g的脲或硫脲、0.3g的TsOH溶于10mL甲苯和10mL DMF混合溶劑中,回流反應(yīng)20小時(shí)。體系中加入50mL冰水,用乙酸乙酯萃取,合并有機(jī)相,飽和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得C2-,C3-并羥基取代嘧啶雜環(huán)衍生物或C2-,C3-并巰基取代嘧啶雜環(huán)衍生物,產(chǎn)率55%-72%。
將0.10g的C2-,C3-并巰基取代嘧啶雜環(huán)衍生物、0.5g無(wú)水LiI溶于10mL無(wú)水DMF中,回流48小時(shí)。加入50mL冰水,用乙酸乙酯萃取,合并有機(jī)相,飽和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得WB-537,產(chǎn)率68%。
將0.10g的C2-,C3-并羥基取代嘧啶雜環(huán)衍生物或C2-,C3-并巰基取代嘧啶雜環(huán)衍生物、0.5g無(wú)水LiI溶于10mL無(wú)水DMF中,加入0.05g正辛胺,回流48小時(shí)。加入50mL冰水,用乙酸乙酯萃取,合并有機(jī)相,飽和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得WB-507或WB-523,產(chǎn)率76%-78%, 28-甲酯化衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
2-甲?;?28羧酸甲酯衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
C2-,C3-并羥基取代嘧啶雜環(huán)衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
C2-,C3-并巰基取代嘧啶雜環(huán)衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
WB-537具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
WB-507具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
WB-523具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
第三步結(jié)束。
本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于通過(guò)在天然產(chǎn)物山楂酸的C2-、C3-位引入系列并雜環(huán),高效合成了系列新型的山楂酸衍生物,合成方法簡(jiǎn)便,且通過(guò)該部位的結(jié)構(gòu)改造,明顯增強(qiáng)了該類化合物的PTP1B抑制活性。
圖1是測(cè)試化合物ZH-583-1對(duì)CHO/IR細(xì)胞內(nèi)胰島素受體IR及其下游蛋白Akt中酪氨酸磷酸化水平的影響。
具體實(shí)施例方式 實(shí)施例一~十均按照發(fā)明內(nèi)容所述制備方法的步驟進(jìn)行操作,每個(gè)實(shí)施例僅羅列關(guān)鍵技術(shù)。
實(shí)施例一WB-511的制備
第二步中,目標(biāo)產(chǎn)物WB-511屬于情況1);第二-1步中,0.83g 3-羰基衍生物溶于10mL二氯甲烷和10mL冰醋酸混合溶劑中,冰浴冷卻下分批加入0.59g三溴吡啶嗡鹽,約2小時(shí)加完,冰浴下攪拌30分鐘,然后室溫?cái)嚢?小時(shí)。加入50mL水,用二氯甲烷萃取,分別用飽和碳酸氫鈉溶液,飽和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得2-溴代衍生物,產(chǎn)率82%。將0.30g 2-溴代衍生物、0.06g硫脲溶于15mL無(wú)水乙醇中,回流反應(yīng)12小時(shí)。反應(yīng)液濃縮,加入50mL水,用乙酸乙酯萃取,飽和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,得WB-511粗產(chǎn)物,經(jīng)二氯甲烷處理得產(chǎn)物WB-511,產(chǎn)率63%。WB-511的1H NMR(CD3OD-d4)δ12.02(1H,br s),7.84(2H,br s),5.20(1H,s),2.75(1H,m),1.16(3H,s),1.10(3H,s),1.06(3H,s),0.86(9H,s),0.76(3H,s). 實(shí)施例二ZH-583-1的制備
第二步中,目標(biāo)產(chǎn)物ZH583-1屬于情況2);第二-2步中,1.0g 3-羰基衍生物溶解于30mL苯中,氮?dú)獗Wo(hù)下加入0.75mL甲酸乙酯、0.47g甲醇鈉,室溫反應(yīng)5小時(shí),反應(yīng)液濃縮,加入30mL水,乙酸乙酯萃取,用食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮得2-甲?;苌?,產(chǎn)率94%。將0.2g 2-甲?;苌?、0.28g鹽酸羥胺、0.38mL水溶解于10mL乙醇中,氮?dú)獗Wo(hù)下回流1小時(shí)。加入50mL水,用乙酸乙酯萃取,用食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化得C2-,C3-并吡唑衍生物,產(chǎn)率85%。將0.1g C2-,C3-并吡唑衍生物、0.11g煙酰氯、2mL吡啶、20mL DMF室溫?cái)嚢?小時(shí)。濃縮,加50mL水,用乙酸乙酯萃取,有機(jī)相用食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮得ZH-583-1,產(chǎn)率77%。ZH-583-1的1H NMR(CDCl3-d)δ9.38(1H,s),8.78(1H,d),8.49(1H,d,),8.03(1H,s),7.45(1H,dd),5.35(1H,s),2.88(1H,m),2.72(1H,d),2.06(1H,d),1.31(3H,s),1.23(3H,s),1.18(3H,s),0.95(3H,s),0.92(3H,s),0.86(3H,s),0.84(3H,s). 實(shí)施例三ZH-583-2的制備 采用類似實(shí)施例二的方法,不同之處在于以異煙酰氯替代煙酰氯,得到化合物ZH-583-2。ZH-583-2的1H NMR(CDCl3-d)δ8.73(2H,d),7.93(3H,m),5.29(1H,s),2.83(1H,m),2.65(1H,d),1.21(3H,s),1.17(3H,s),0.94(3H,s),0.91(3H,s),0.87(3H,s),0.85(3H,s),0.84(3H,s). 實(shí)施例四WB-491-B的制備
第二步中,目標(biāo)產(chǎn)物WB-491-B屬于情況3);第二-3步中,在裝有分水器的三口瓶中加入1.5g 3-羰基衍生物、4.25mL的DMFDMA、30mL甲苯、0.08mL三乙胺,緩慢升溫至120℃,從分水器蒸出15mL甲苯,然后再補(bǔ)加15mL甲苯,重復(fù)上述操作3-4次。反應(yīng)結(jié)束后,旋蒸除去溶劑,得2-烯胺衍生物。將0.15g乙醇鈉、0.11g醋酸甲脒溶于10mL乙醇中,氮?dú)獗Wo(hù)下室溫?cái)嚢?0分鐘,將0.57g 2-烯胺衍生物溶于5mL乙醇中,加入到上述反應(yīng)體系中,回流3小時(shí)。反應(yīng)液濃縮,加入20ml水,乙酸乙酯萃取,有機(jī)相用食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得C2-,C3-并嘧啶衍生物,產(chǎn)率78%。
將0.41g C2-,C3-并嘧啶衍生物、2.15g LiI溶于40mL DMF中,回流48小時(shí)。降至室溫,加入150mL冰水,乙酸乙酯萃取,有機(jī)相用食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得白色固體WB-491-B,收率78%。WB-491-B的1H NMR(CDCl3-d)δ9.03(1H,s),8.33(1H,s),5.37(1H,s),2.88(1H,m),2.69(1H,d),2.31(1H,d),1.31(3H,s),1.25(3H,s),1.18(3H,s),0.94(3H,s),0.91(3H,s),0.85(6H,s). 實(shí)施例五WB-505的制備 采用類似于實(shí)施例四的方法,不同之處在于以鹽酸乙脒替代醋酸甲脒,得衍生物WB-505,收率80%。WB-505的1H NMR(CDCl3-d)δ8.21(1H,s),5.36(1H,s),2.88(1H,m),2.66(3H,s),2.64(1H,d),2.24(1H,d),1.28(3H,s),1.22(3H,s),1.17(3H,s),0.95(3H,s),0.91(3H,s),0.85(3H,s),0.83(3H,s). 實(shí)施例六WB-520的制備 采用類似于實(shí)施例四的方法,不同之處在于以鹽酸胍替代醋酸甲脒,得衍生物WB-520,收率72%。WB-520的1H NMR(CDCl3-d)δ7.89(1H,s),7.35(1H,s,NH),5.36(1H,s),3.64(3H,s),2.90(1H,m),2.53(1H,d),2.14(1H,d),1.19(3H,s),1.04(3H,s),1.01(3H,s),0.94(3H,s),0.91(3H,s),0.80(3H,s),0.65(3H,s). 實(shí)施例七WB-506的制備
采用實(shí)施例六的方法,不同之處在于最后C-28酯水解反應(yīng)中加入正辛胺,得白色固體WB-506,產(chǎn)率78%。WB-506的1H NMR(CDCl3-d)δ7.90(1H,s),5.35(1H,s),2.89(1H,m),2.54(1H,d),2.14(1H,d),1.25(3H,s),1.21(3H,s),1.17(3H,s),0.98(3H,s),0.95(3H,s),0.84(3H,s),0.82(3H,s). 實(shí)施例八WB-537的制備
第二步中,目標(biāo)產(chǎn)物WB-537屬于情況4);第二-4步中,將20g 3-羰基衍生物、12g K2CO3、3.33mL CH3I溶于200mL DMF中,室溫?cái)嚢?小時(shí)。加400mL水稀釋,乙酸乙酯萃取,合并有機(jī)相,分別用1M的稀鹽酸和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,過(guò)濾,濃縮,硅膠柱層析純化,得28-甲酯化衍生物,產(chǎn)率92%。
將4.0g 28-甲酯化衍生物溶于100mL苯中,氮?dú)獗Wo(hù)下加入2.9mL甲酸乙酯、1.84g甲醇鈉,室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)液濃縮,加入30ml水,乙酸乙酯萃取,合并有機(jī)相,飽和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,得2-甲?;?28羧酸甲酯衍生物,產(chǎn)率98%。
將0.3g 2-甲?;?28羧酸甲酯衍生物、0.09g硫脲、0.3g TsOH溶于10mL甲苯和10mL DMF混合溶劑中,回流反應(yīng)20小時(shí)。體系中加入50mL冰水,用乙酸乙酯萃取,合并有機(jī)相,飽和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得C2-,C3-并巰基取代嘧啶雜環(huán)衍生物,產(chǎn)率55%。
將0.10g C2-,C3-并巰基取代嘧啶雜環(huán)衍生物、0.5g LiI(3.85mmol)溶于10mL DMF中,回流48小時(shí)。加入50mL冰水,用乙酸乙酯萃取,合并有機(jī)相,飽和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得白色固體WB-537,產(chǎn)率68%。
實(shí)施例九WB-523的制備
采用實(shí)施例八的方法,不同之處在于最后C-28酯水解反應(yīng)中加入正辛胺,得衍生物WB-523,收率76%。
實(shí)施例十WB-507的制備 采用類似于用實(shí)施例八和九的方法,不同之處在于以脲替代硫脲,得衍生物WB-507,收率78%。WB-507的1H NMR(CDCl3-d)δ7.23(1H,d),6.10(1H s,OH),5.33(1H,s),2.86(1H,m),1.16(3H,s),1.10(3H,s),1.03(3H,s),0.97(3H,s),0.94(3H,s),0.84(3H,s),0.81(3H,s). 實(shí)施例十一五環(huán)三萜類衍生物的PTP1B抑制活性測(cè)試 1.測(cè)試原理利用分子生物學(xué)手段在大腸桿菌系統(tǒng)表達(dá)hPTP 1B催化結(jié)構(gòu)域,經(jīng)純化后的hPTP1B重組蛋白能水解底物pNPP的磷脂鍵,得到的產(chǎn)物在410nm處有很強(qiáng)的光吸收,因此可以通過(guò)直接檢測(cè)410nm處光吸收的變化以觀察酶的活性變化以及化合物對(duì)酶活性的抑制情況。標(biāo)準(zhǔn)的測(cè)活體系如下50mM Mops,PH 7.0,1mM EDTA,2mM DTT,2mM PNPP,2%DMSO,40nM hPTP1B。
2.觀察指標(biāo)動(dòng)態(tài)測(cè)定波長(zhǎng)為410nm處的光吸收,時(shí)間為3min,其動(dòng)力學(xué)曲線一級(jí)反應(yīng)的斜率作為酶的活性指標(biāo)。
3.樣品測(cè)試1、將1mg樣品溶于200μL DMSO中。取20μL加入到96孔聚丙烯板的A2-H11樣品孔中,然后加80μL DMSO,作為母板。2、用Biomek 2000自動(dòng)加樣系統(tǒng)取2μL樣品加入到96孔聚苯乙烯板的對(duì)應(yīng)樣品孔中,作為篩選用的子板。3、A1-D1、E12-H12中加入2μL DMSO作為百分之百酶活性對(duì)照。4、A12-D12、E1-H1中加入2μL不同濃度的陽(yáng)性對(duì)照物(由10μL/m L兩倍稀釋的四個(gè)濃度)。5、A1-H12分別加入88μL Assay mix。6、A1-H12分別加入10μL hPTP1B。7、在SpectraMAX 340上測(cè)量410nm處光吸收,時(shí)間為3min。8、將數(shù)據(jù)輸出為文本文件,然后以Excel方式打開(kāi),以A1-D1、E12-H12的Vmax值平均作為100%酶活力?;衔飳?duì)PTP1B的抑制率通過(guò)以下公式求得 抑制率(%)=(1-各篩選孔Vmax值/空白對(duì)照Vmax平均值)×100% 4.測(cè)試結(jié)果篩選結(jié)果是當(dāng)化合物的濃度為20μg/mL時(shí)對(duì)酶活性的百分抑制率,抑制活性高于50%時(shí),按常規(guī)篩選得出IC50,陽(yáng)性對(duì)照4-[4-(4-草?;?苯氧甲基)-苯甲氧基]-苯乙酮酸(4-[4-(4-oxalyl-phenoxymethyl)-benzyloxy]-phenyl-oxo-acetic acid)的IC50為5.4μM[Christopher T.Seto,et al.J.Med.Chem.2002,45,3946.]。
4-[4-(4-草?;?苯氧甲基)-苯甲氧基]-苯乙酮酸 各測(cè)試化合物抑制PTP1B的IC50值見(jiàn)下表 表一山楂酸衍生物抑制PTP1B的活性數(shù)據(jù)
實(shí)施例12化合物ZH-583-1對(duì)CHO/IR細(xì)胞內(nèi)IR磷酸化水平的影響試驗(yàn) 1.試驗(yàn)原理胰島素敏感細(xì)胞內(nèi)胰島素受體IR的磷酸化水平受到PTK和PTPase的嚴(yán)密調(diào)控,PTP1B在這個(gè)過(guò)程中起著負(fù)調(diào)控因子的作用。通過(guò)檢測(cè)CHO/IR細(xì)胞內(nèi)IR磷酸化水平變化,可以判斷PTP1B抑制劑是否進(jìn)入細(xì)胞以及在細(xì)胞內(nèi)的作用效果。
2.試驗(yàn)方法1、細(xì)胞接種生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞以3-4×105細(xì)胞/孔的密度接入6孔板,每孔2mL含10%FB S的F12培養(yǎng)基。2、饑餓培養(yǎng)24h后,2mL無(wú)血清F12培養(yǎng)基過(guò)夜培養(yǎng)12h。3、給藥去除舊培養(yǎng)基,加入含化合物的無(wú)血清F12培養(yǎng)基0.9mL,孵育2-4小時(shí)。其中分別以1mM的Na3VO4和0.1%的DMSO做陽(yáng)性和陰性對(duì)照。4、胰島素刺激每孔中加入100nM胰島素100μL,使得終濃度為10nM,作用10分鐘。5、收樣棄去培養(yǎng)基,每孔加150μL×1上樣緩沖液,裂解細(xì)胞,收樣。
3.試驗(yàn)結(jié)果本實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)ZH-583-1對(duì)CHO/IR細(xì)胞內(nèi)胰島素受體磷酸化水平影響,對(duì)于被檢驗(yàn)化合物ZH-583-1,設(shè)有終濃度為0.37、1.1、3.3、10μM四個(gè)濃度,溶劑DMSO作為陰性對(duì)照(以0代表),釩酸鈉作為陽(yáng)性化合物(以V代表)。如圖1所示IRβ是胰島素受體β亞基,代表胰島素受體的本底表達(dá)水平;β激動(dòng)蛋白作為內(nèi)參,代表總上樣量。使用抗磷酸酪氨酸單克隆抗體PY20檢測(cè)IR的磷酸化水平,Akt的Ser473可以被PDK 1磷酸化(Akt-p),Akt-p是IR下游蛋白,Akt磷酸化水平高,說(shuō)明IR磷酸化水平高,胰島素信號(hào)增強(qiáng),也表明PTP1B抑制劑在細(xì)胞水平是有效的。對(duì)化合物ZH-583-1的研究表明隨著抑制劑濃度的升高,IR及Akt的磷酸化水平呈現(xiàn)明顯的升高趨勢(shì)。由此可見(jiàn),ZH-583-1在細(xì)胞內(nèi)IR的去磷酸化過(guò)程中起抑制作用,可以增強(qiáng)細(xì)胞對(duì)胰島素的敏感性,預(yù)示著該類化合物具有增強(qiáng)胰島素的作用,能夠在一定程度上緩解胰島素抵抗。
結(jié)論山楂酸衍生物可以作為胰島素增敏劑,在預(yù)防、延緩或治療由PTP1B介導(dǎo)的疾病,特別是II型糖尿病和肥胖癥及由此引起的并發(fā)癥的藥物中的用途。
權(quán)利要求
1、一類山楂酸衍生物,其特征在于,具有以下的結(jié)構(gòu)通式所示的結(jié)構(gòu)
式中,X是S、CH或CH=N,當(dāng)X是S時(shí),Y=C,R=NH2,當(dāng)X是CH時(shí),Y=N,
當(dāng)X是CH=N時(shí),Y=C,R=H、CH3、OH、SH、NH2、SCH3、NHCH3。
2、權(quán)利要求1所述的山楂酸衍生物的制備方法,其特征在于,具體操作步驟
第一步制備3-羰基衍生物
將8.3g的齊墩果酸溶于60mL二氯甲烷中,加入7.9g的PCC,室溫下攪拌12小時(shí),反應(yīng)液用硅藻上過(guò)濾,濾餅用二氯甲烷洗滌,母液濃縮后溶于100mL乙酸乙酯,飽和亞硫酸氫鈉水溶液洗滌,有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,得1.0g的3-羰基衍生物,產(chǎn)率90%,3-羰基衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
第二步確定目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)通式中X、Y和R的確切結(jié)構(gòu)確定目標(biāo)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)通式中X、Y和R的確切結(jié)構(gòu)時(shí),會(huì)遇到以下四種情況1)X=S,Y=C和R=NH2,2)X=CH,Y=N和
3)X=CH=N,Y=C和R=H、CH3、NH2、NHCH3,4)X=CH=N,Y=C和R=OH、SH、SCH3,如遇到情況1),進(jìn)入第二-1步,如遇到情況2),進(jìn)入第二-2步,如遇到情況3),進(jìn)入第二-3步,如遇到情況4),進(jìn)入第二-4步;
第二-1步
0.83g的3-羰基衍生物溶于10mL二氯甲烷和10mL冰醋酸混合溶劑中,冰浴下分批加入0.59g的三溴吡啶嗡鹽,2小時(shí)加完,冰浴下攪拌30分鐘,室溫下攪拌1小時(shí),加入50mL水,二氯甲烷萃取,分別用飽和碳酸氫鈉溶液,飽和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得2-溴代衍生物,產(chǎn)率82%,將0.30g的2-溴代衍生物和0.06g的硫脲溶于15mL無(wú)水乙醇中,回流反應(yīng)12小時(shí),反應(yīng)液濃縮,加入50mL水,乙酸乙酯萃取,飽和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,得WB-511粗產(chǎn)物,二氯甲烷萃取,得產(chǎn)物WB-511,產(chǎn)率63%,2-溴代衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
WB-511具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
進(jìn)入第三步;
第二-2步
1.0g的3-羰基衍生物溶解于30mL苯中,氮?dú)獗Wo(hù)下加入0.75mL甲酸乙酯、0.47g的甲醇鈉,室溫下反應(yīng)5小時(shí),反應(yīng)液濃縮,加入30mL水,乙酸乙酯萃取,食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮得2-甲?;苌铮a(chǎn)率94%,將0.2g的2-甲?;苌?、0.28g的鹽酸羥胺、0.38mL水溶解于10mL乙醇中,氮?dú)獗Wo(hù)下回流1小時(shí),加入50mL水,乙酸乙酯萃取,食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得C2-,C3-并吡唑衍生物,產(chǎn)率85%,將0.1份重量的C2-,C3-并吡唑衍生物、0.11g的煙酰氯或異煙酰氯、2mL吡啶、20mL DMF室溫下攪拌3小時(shí),濃縮,加50mL水,乙酸乙酯萃取,有機(jī)相用食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮得ZH-583-1或ZH-583-2,產(chǎn)率43%-77%,2-甲酰化衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
C2-,C3-并吡唑衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
ZH-583-1具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
ZH-583-2具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
進(jìn)入第三步;
第二-3步
在裝有分水器的三口瓶中加入1.5g的3-羰基衍生物(1)、4.25mL的DMFDMA、30mL甲苯、0.08mL三乙胺,緩慢升溫至120℃,從分水器蒸出15mL甲苯,補(bǔ)加15m L甲苯,重復(fù)上述操作3-4次,旋蒸除去溶劑,得2-烯胺衍生物(5),將0.15g的乙醇鈉、1.10-0.11g的醋酸甲脒或鹽酸乙脒或鹽酸胍溶于10mL乙醇中,氮?dú)獗Wo(hù)和室溫下攪拌30分鐘,將0.57g的2-烯胺衍生物(5)溶于5mL乙醇中,加入到上述反應(yīng)體系中,回流3小時(shí),反應(yīng)液濃縮,加入20ml水,乙酸乙酯萃取,有機(jī)相用食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得C2-,C3-并嘧啶衍生物或C2-,C3-并甲基嘧啶衍生物或C2-,C3-并氨基嘧啶衍生物,產(chǎn)率72%-74%,
將0.41-0.42g的C2-,C3-并嘧啶衍生物或C2-,C3-并甲基嘧啶衍生物或C2-,C3-并氨基嘧啶衍生物、2.15g的LiI溶于40mL DMF中,回流48小時(shí),降至室溫,加入150mL冰水,乙酸乙酯萃取,有機(jī)相用食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得白色固體WB-491-B或WB-505或WB-520,產(chǎn)率72%-80%,
將0.42g的C2-,C3-并氨基嘧啶衍生物、2.15g的LiI溶于40mLDMF中,加入0.21g正辛胺,回流48小時(shí),降至室溫,加入150mL冰水,乙酸乙酯萃取,有機(jī)相用食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得白色固體WB-506,產(chǎn)率78%,
C2-,C3-并嘧啶衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
C2-,C3-并甲基嘧啶衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
C2-,C3-并氨基嘧啶衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
WB-491-B具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
WB-505具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
WB-520具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
WB-506具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
進(jìn)入第三步;
第二-4步
將20g的3-羰基衍生物、12g的K2CO3、3.33mL CH3I溶于200mLDMF中,室溫?cái)嚢?小時(shí)。加400mL水稀釋,乙酸乙酯萃取,合并有機(jī)相,分別用1M的稀鹽酸和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,過(guò)濾,濃縮,硅膠柱層析純化,得28-甲酯化衍生物,產(chǎn)率92%。
將4.0g的28-甲酯化衍生物溶于100mL苯中,氮?dú)獗Wo(hù)下加入2.9mL甲酸乙酯、1.84g的甲醇鈉,室溫?cái)嚢?小時(shí)。反應(yīng)液濃縮,加入30ml水,乙酸乙酯萃取,合并有機(jī)相,飽和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,得2-甲酰基-28羧酸甲酯衍生物,產(chǎn)率98%。
將0.3g的2-甲?;?28羧酸甲酯衍生物、0.07-0.09g的脲或硫脲、0.3g的TsOH溶于10mL甲苯和10mL DMF混合溶劑中,回流反應(yīng)20小時(shí)。體系中加入50mL冰水,用乙酸乙酯萃取,合并有機(jī)相,飽和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得C2-,C3-并羥基取代嘧啶雜環(huán)衍生物或C2-,C3-并巰基取代嘧啶雜環(huán)衍生物,產(chǎn)率55%-72%。
將0.10g的C2-,C3-并巰基取代嘧啶雜環(huán)衍生物、0.5g無(wú)水LiI溶于10mL無(wú)水DMF中,回流48小時(shí)。加入50mL冰水,用乙酸乙酯萃取,合并有機(jī)相,飽和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得WB-537,產(chǎn)率68%。
將0.10g的C2-,C3-并羥基取代嘧啶雜環(huán)衍生物或C2-,C3-并巰基取代嘧啶雜環(huán)衍生物、0.5g無(wú)水LiI溶于10mL無(wú)水DMF中,加入0.05g正辛胺,回流48小時(shí)。加入50mL冰水,用乙酸乙酯萃取,合并有機(jī)相,飽和食鹽水洗滌,無(wú)水硫酸鈉干燥,濃縮,硅膠柱層析純化,得WB-507或WB-523,產(chǎn)率76%-78%,
28-甲酯化衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
2-甲酰基-28羧酸甲酯衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
C2-,C3-并羥基取代嘧啶雜環(huán)衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
C2-,C3-并巰基取代嘧啶雜環(huán)衍生物具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
WB-537具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
WB-507具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
WB-523具有以下所示的結(jié)構(gòu)式
第三步結(jié)束。
3、權(quán)利要求1所述的山楂酸衍生物的用途,其特征在于,作為胰島素增敏劑。
全文摘要
山楂酸衍生物及其制備和應(yīng)用,屬于醫(yī)藥及其制備和應(yīng)用的技術(shù)領(lǐng)域。具有如右的結(jié)構(gòu)通式所示的結(jié)構(gòu)。式中,X是S、CH或CH=N,當(dāng)X是S時(shí),Y=C,R=NH2,當(dāng)X是CH時(shí),Y=N,R=見(jiàn)右下,當(dāng)X是CH=N時(shí),Y=C,R=H、CH3、OH、SH、NH2、SCH3、NHCH3。以天然產(chǎn)物齊墩果酸為原料,先經(jīng)氧化得到相應(yīng)的3-羰基衍生物,再在C2-位鹵代或甲?;虺上┌?,最后通過(guò)系列縮合反應(yīng)得到相應(yīng)的C2-,C3-位并雜環(huán)的山楂酸衍生物??勺鳛橐葝u素增敏劑。通過(guò)在天然產(chǎn)物山楂酸的C2-,C3-位引入系列并雜環(huán),高效合成了系列新型的山楂酸衍生物,合成方法簡(jiǎn)便,且通過(guò)該部位的結(jié)構(gòu)改造,明顯增強(qiáng)了該類化合物的PTP1B抑制活性。
文檔編號(hào)C07J71/00GK101619088SQ20091005585
公開(kāi)日2010年1月6日 申請(qǐng)日期2009年8月4日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月4日
發(fā)明者杰 湯, 佳 李, 博 王, 仇文衛(wèi), 強(qiáng) 沈, 帆 楊, 薇 張, 慧 鄒 申請(qǐng)人:上海樸頤生物科技有限公司, 中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所, 華東師范大學(xué)